SU542502A1

SU542502A1 - Способ ферментной дезинтеграции биомассы дрожжей

Info

Publication number: SU542502A1
Application number: SU2139368A
Authority: SU
Inventors: Владимир Александрович Мосин; Гальвина Николаевна Максимова; Галина Ивановна Воробьева
Original assignee: Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Биосинтеза Белка
Priority date: 1975-05-29
Filing date: 1975-05-29
Publication date: 1977-01-15

Description

1

Изобретение относитс к микробиологической иромышлениостн н может оыть использовано дл дезиитеграцип, т. е. разрушени клеток микроорганизмов, например дрожжей, выращенных на средах с очищенными жидкими иарафинами.

Ранее были описаны двухстадийные способы дезинтеграции клеток (механический и химический), в которых на первой стадии биомассу обраоатывают ацетоно.м или спирто.м с целью ооезвоживани и облегчени последующего механического или химического разрушени клеток. Так, известен сиособ, предусматривающий промывку влажиого клеточного матернала сухим ацетоном дл полного удалени воды. Затем обезвоженный клеточный материал обрабатывают в кавитационной мельнице при в хлористом метилене 1. Согласно другому известному способу дрожжн, полученные культивированием на углеводороде , обрабатывают органическим растворителем , в частиости спиртом, содержащим 1-4 атома углерода, а затем обезвоженные дрожжи иодвергают щелочной обработке при 50-ЭО С 2.

Известен также одностадийный способ разрушени дрожжевых клеток, согласно которому дл расщеплени полисахаридов оболочек дрожжей используют ферментные препараты , выделенные из различных микроорганизмов , таких, как Trichoderma, Aspergillus, Penicillium 3j. Ири этом сырье или высушенные на воздухе дрожл и погружают либо в водный, в частности солевой экстракт - фильтрат иродуцируемого микроорганизма, либо в раствор ферментных ирепаратов, иредварительно выде.1енных из указанных экстратов осаждением сульфатом аммони , этиловым спиртом или ацетоном, и выдерживают дл дезинтеграции клеток в течение 20-72 ч. недостатком известного одностадийного способа вл етс незначительна эффективность действи ферментных препаратов на интактные , т. е. живые клетки, в св зи с чем требуетс значительное врем дл их дезинтеграции .

Цель изобретени заключаетс в интенсификации процесса ферментной дезинтеграции

бномассы дрожжей. Поставленна цель достигаетс тем, что разрушение клеток провод т в

присутствии ацетона в количестве 0,5-

10об.%.

Предлагаемый способ осуществл ют следующим образом.

дрожл%:евую суспензию с концентрацией дрожжей 20-400 г/л нагревают до 30-55°С, добавл ют 0,5-10 об.% ацетона при перемешивании среды и добавл ют ферментные пренараты , разрушающие стенки клеток микроорганизмов , иапример Пектаваморин И-10Х

Ферментативный гидролиз провод т в течение 2-6 ч при рН 4,0-7,0; расход ферментного препарата составл ет 5-15 мг на 1 г биомассы микроорганизмов. В процессе может быть использован также любой литический ферментный препарат гликаназного или комплексного действи , который про вл ет протеолитическую , амилолптическую или гликаназную активность.

Указанные препараты выдел ли пз культуральной жидкости или биомассы различных микроорганизмов, относ щихс , например, к родам Actinomycetes, Streptomyces, Aspergillus .

Предлагаемый способ обеспечивает ускорение разрушени клеток микроорганизмов в 2-6 раз.

Пример 1.К8л суспензии дрожжей Candida guilliermondii Н-542 с концентрацией 200 г/л прессованных дрожжей добавл ли последовательно при перемешивании 400 мл ацетона (5 об.%) и 250 мл 9%-ного раствора Пектаваморина П10Х. Смесь выдерживали при 37°С и рН 5,0 при перемешивании в течение 2 ч 45 мин. Затем отбирали пробу и но приросту углеводов в глюкозных эквивалентах по антрону определ ли степень разрушени оболочек клеток. Прирост углеводов составл л 1100 мкг/мл. Обн1,ее содержание углеводов в биомассе - 32 г, т. е. степень разрушени клетки составила 27,5%.

Пример 2 (контроль). К 8 л суснензии дрожжей Candida guilliermondii Н-542 с концентрацией 200 г/л прессованных дрожжей добавл ли при перемешивании 250 мл 9%-ного раствора Пектаваморина П-10Х. Смесь выдерживали при 37°С, рН 5,0 при перемешпвании в течение 2 ч 45 мин. Прирост углеводов составил 216 мкг/мл. Обш,ее содержание углеводов в биомассе - 32 г, т. е. степень разрушени клетки составила 5,4%.

Пример 3. К 19 мл суспензии дрожжей Candida guilliermondii ПП-4 с концентрацией 70 г/л прессованных дрожжей при перемешивании последовательно добавл ли i мл ацетона и 1 мл 0,03%-ного раствора очнш,енного ферментного препарата Пектаваморина П-10Х. Смесь выдерживали нри 37°С и рН 5,0 при перемешпвании в течение 2 ч. Затем отбирали пробу и по приросту углеводов в глюкозных эквивалентах по антрону определ ли степень разрушени оболочек клеток. Прирост углеводов составил 126 мкг/мл. Обш.ее содержание углеводов в исходиой биомассе - 32 мг, т. е. степень разрушени клеток составила 7,5%.

Пример 4. К 19 мл суспеизии дрожжей Candida guilliermondii ПП-4 с коицептрацией 70 г/л прессованных дрожжей при перемешивании добавл ли 1 мл 0,03%-ного раствора очигценного ферментного препарата Пектаваморпна П-ЮХ. Смесь выдерживали при 37°С, рП 5,0 ири перемешивании в течение 2 ч.

Прирост углеводов составил 60 мкг/мл. Обш .ее содержание углеводов в исходной биомассе - 32 мг, т. е. степень разрун1епп клеток составила 3,8%.

Claims

1.Авторское свидетельство № 246525, М. Кл.2 A23J 1/18, 1968.

2.Патент Франции № 2216928, М. Кл. А 23J 3/00, 1974.

3.Патент Франции № 1333739, М. Кл. С 12С, 1963.