SU440404A1

SU440404A1 - The method of obtaining diosgenin

Info

Publication number: SU440404A1
Application number: SU1865021A
Authority: SU
Inventors: Раиса Георгиевна Бутенко; Светлана Исааковна Демченко; Светлана Лаврентьевна Каранова; Иосиф Абрамович Рапопорт; Злата Борисовна Шамина
Original assignee: Институт Химической Физики Ан Ссср
Priority date: 1973-01-02
Filing date: 1973-01-02
Publication date: 1974-08-25

Description

1one

Изобретение относитс к области химикофармацевтической промышленности.This invention relates to the chemical and pharmaceutical industry.

Известен способ полз чени диосгепина, заключаюпдийс в культивировании клеток, культуры ТКани Dioscorea deltoidea Wall in vitro с последующим выделением целевого продукта .There is a known creeping method for diosgepine, cultivating cells, cultivating TKani Dioscorea deltoidea Wall in vitro, and then isolating the target product.

Целью изобретени вл етс интенсификаци процесса.The aim of the invention is to intensify the process.

Поставленна цель достигаетс тем, что ткань предварительно обрабатывают N-нитрозометилмочевиной в концентрации 0,25- 30 мМ.The goal is achieved by pretreating the tissue with N-nitrosomethylurea at a concentration of 0.25-30 mM.

При обработке мутагеном в концентраци х 0,25-2 мМ используют всю обработанную ткань, обладающую равномерным ускоренным ростом, вследствие индуцированной мутагеном стимул ции, а при обработке мутагеном в концентраци х 2 мМ и выще отбирают мутаптные штаммы с ускоренным темпом роста и увеличенным накоплением биомассы.When treated with a mutagen at concentrations of 0.25-2 mM, all treated tissue with uniform accelerated growth due to mutagen-induced stimulation is used, and when treated with mutagen at concentrations of 2 mM and more, mutapous strains with an accelerated growth rate and increased biomass are selected .

Пример. 2, 5 г ткани Dioscorea deltoidea Wall суспендируют в 50 мл жидкой среды Мурасиге-Скуга и стерильно добавл ют раствор N-нитрозометилмочевины, чтобы конечна концентраци составл ла 0,5 мМ.Example. 2, 5 g of Dioscorea deltoidea Wall tissue is suspended in 50 ml of Murashige-Skoog liquid medium and a solution of N-nitrosomethylurea is added sterilely so that the final concentration is 0.5 mM.

Среду Мурасиге-Скуга готов т следующим образом.The Murashige-Skoog environment is prepared as follows.

На 1 л среды берут 9 г агар-агара, 30 г сахарозы , 40 мг 2,4-дихлорфенилуксусной кислоты и добавл ют растворы солей и витаминов, так, чтобы в 1 л среды содержалось (в мг):9 g of agar-agar, 30 g of sucrose, 40 mg of 2,4-dichlorophenyl acetic acid are taken per 1 l of medium and solutions of salts and vitamins are added so that 1 l of medium contains (in mg):

1650 1650

NH4NO3 1900 NH4NO3 1900

KNOgKnog

CaCl2-2H2O 440 370 MgSO4-7H2O 170 CaCl2-2H2O 440 370 MgSO4-7H2O 170

КН2Р04 6,2 KN2P04 6.2

НзВОз 22,3 NZOZ 22.3

MnS04-4H2O 8,6MnS04-4H2O 8.6

ZnS04-7H2OZnS04-7H2O

0,83 МГ0.83 MG

KIKI

0,250.25

Na2MoO4-2H20Na2MoO4-2H20

0,0250.025

CuSO4-5H2OCuSO4-5H2O

0,0250.025

CoCl2-6H2OCoCl2-6H2O

FeSO4-7H2O FeSO4-7H2O

27,8 iNa ЭДТА27.8 iNa EDTA

37,337.3

(натриева соль этилендиамиптетрауксуспой(sodium salt of ethylenediamiptetrauxusp

кислоты)acids)

Фолиева а ислота0,5Foliev and islota0,5

Рибофлавин (BS)0,5Riboflavin (BS) 0.5

00

Биотин1,0Biotin1,0

Са. пантотенат1,0Ca. pantothenate1.0

Пиридоксин (Вб)1,0Pyridoxine (WB) 1.0

Тиамин (Bi)1,0 Амид никотиновойThiamine (Bi) 1.0 Amide Nicotine

кислоты2acids2

В120,00015B120,00015

После 1-часовой экспозиции воздействи му30 тагена ткань отмывают на матерчатом фильтре 5-кратной сменой свежего питательного раствора, высаживают по 250 мг в пробирки на агаризованную среду Мурасиге-Скуга, выращивают 8 недель в термостате при 25°С, 70% влажности и определ ют сырой вес ткани . Он составл ет 140% по отношению к контролю , при этом наблюдают равномерный рост ткани и ее большую диссоциированность по сравнению с контролем. При пассировании эффект стимул ции сохран етс и усиливаетс . Так к IV пассажу сырой вес ткани превышает вес исходного контрол в 1,5-5 раз. При этом максимального прироста ткань достигает за более Короткий срок. Кроме того, увеличение биомассы ткани не сопровождаетс снижением концентрации действующего продукта в ней. Усилени оводненности ткани в вариантахAfter a 1-hour exposure to the effect of Mu30, the tissue is washed on a cloth filter with a 5-fold change of fresh nutrient solution, planted at 250 mg in tubes on Murashige-Skoog agar medium, grown for 8 weeks in a thermostat at 25 ° C, 70% humidity and determined raw tissue weight. It is 140% relative to the control, while an even growth of the tissue and its greater dissociation compared with the control are observed. When passaged, the stimulation effect is maintained and enhanced. So, for IV passage, the raw weight of the tissue exceeds the weight of the original control by 1.5-5 times. In this case, the maximum growth of the fabric reaches in a shorter period. In addition, an increase in tissue biomass is not accompanied by a decrease in the concentration of the active product in it. Strengthening the water content of the fabric in variants

опыта не наблюдают, т. е. увеличенный вдвое 1выход сырой ткани с одной пробирки сопровождаетс также удвоением «урожа воздущно-cjxoro сырь . Следовательно, если в 100 г воздушно-сухого сырь содержитс 340 г диосгенина, то соответственно 200 г воздушно-сухого сырь содержит 680 мг диосгенина.no experience is observed, i.e., the doubled output of raw tissue from one tube is also accompanied by a doubling of the yield of air-cjxoro raw materials. Therefore, if 340 g of diosgenin is contained in 100 g of air-dry raw material, then 200 g of air-dry raw material, respectively, contains 680 mg of diosgenin.

Предмет изобретени Subject invention

Способ получени диосгенина путем культивировани изолированной ткани Dioscorea deltoidea Wall и последующего выделени целевого продукта, отличающийс тем, что, с целью интенсификации процесса, ткань предварительно обрабатывают N-нитрозометилмочевиной в концентрации 0,25-30 мМ.A method for producing diosgenin by cultivating an isolated tissue of Dioscorea deltoidea Wall and then isolating the target product, characterized in that, in order to intensify the process, the tissue is pretreated with N-nitrosomethylurea at a concentration of 0.25-30 mM.