SU337684A1

SU337684A1 - DEVICE FOR ELECTROPHORESIS OF BIOLOGICAL MATERIAL IN POLYACRYLAMIDE GEL

Info

Publication number: SU337684A1
Application number: SU1427690A
Authority: SU
Inventors: В. Л. Яровенко Г. А. Ермолин Б. А. Устинников

Description

Изобретение относитс к области исследований методом фракционировани биологического материала.The invention relates to the field of research by the method of fractionation of biological material.

Известен ирибор, содержащий концентрично размещенные цилиндрические стекл нные сосуды с расиоложенным между ними полиакриламидныМ гелем, две кюветы с буфер|ным раствором и сикгему охла щдени .The well-known device contains concentric cylindrical glass vessels with polyacrylamide gel located between them, two cells with a buffer solution and sycgem cooling.

Детали этого прибора св заны с помощью резьбового соединени . Однако такое соединение на стекл нных детал х ненадежно, сложно в изготовлении и неудобно при частой разборке и сборке.Details of this device are connected by a threaded joint. However, such a connection on glass parts is unreliable, difficult to manufacture, and inconvenient with frequent disassembly and assembly.

Цель изобретени -ускорение сборки и разборки прибора, а также упрощение его конструкции .The purpose of the invention is to accelerate the assembly and disassembly of the device, as well as simplifying its design.

Это достигаетс тем, что прибор снабжен двум фасонными крыщками и ст гивающимис болтами. Крыщки имеют отверсти дл прохождени буферного раствора в гель и канавки дл циркул ции охлаждающей жидкости. Кюветы расположены таким образом, что одна из них непосредственно укреплена на верхней крышке, а друга , заполненна буферным расствором , сообщена с нижней.This is achieved by the fact that the device is equipped with two shaped caps and tensioning bolts. The caps have openings for the passage of the buffer solution into the gel and grooves for the circulation of coolant. The cuvettes are arranged in such a way that one of them is directly fixed on the top cover, and the other, filled with buffer solution, communicates with the bottom one.

Концентрические стекл нные цилиндры 1, 2 и 3 прибора расположены между двум фасонными крыщкамй 4 и 5, которые ст гиваютс болтами 6. Диаметры внутреннего цилиндраThe concentric glass cylinders 1, 2, and 3 of the instrument are located between the two shaped caps 4 and 5, which are bolted 6. The diameters of the inner cylinder

/ и цилиндра 2 подбирают таким образом, чтобы толщина -кольцевого пространства 7 между ними была не более 8 мм. Это пространство заполн ют полиакриламидным гелем, который и вл етс рабочим слоем, где производитс электрофорез и фракционирование белков как по электрофоретической подвижности , так и по величине молекул./ and cylinder 2 is selected so that the thickness of the annular space 7 between them is not more than 8 mm. This space is filled with a polyacrylamide gel, which is the working layer where electrophoresis and protein fractionation are performed both by electrophoretic mobility and by the size of the molecules.

Гель во врем работы охлаждаетс водой, поступающей в цилиндр У по каналу 8 и уход щей по каналу 9, которые расположены в крышках 4 и 5. Омыва внутреннюю поверхность цилиндра Л вода охлаждает кольцо гел с внутренней стороны. Дл охлаждени гел с наружной стороны воду подают в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 5 по каналу 10, а отвод т по каналу 11 в крышках 4 и 5. В последних имеютс сквозные отверсти 12, через которые гель контактирует с верхним и нижним буферным раствором.During operation, the gel is cooled with water entering the cylinder U through channel 8 and leaving through channel 9, which are located in caps 4 and 5. After washing the inner surface of the cylinder L, water cools the gel ring from the inside. To cool the gel, water is supplied from the outside into the annular space between cylinders 2 and 5 through channel 10, and diverted through channel 11 in caps 4 and 5. In the latter, there are through holes 12 through which the gel contacts the upper and lower buffer solution.

Буферные растворы наход тс в верхней 13 и нижней 14 кюветах, выполненных из оргстекла . Прозрачность всего прибора необходима дл того, чтобы можно было наблюдать движение свидетел -маркера сквозь слой гел сверхуThe buffer solutions are in the upper 13 and lower 14 cuvettes made of plexiglass. The transparency of the entire instrument is necessary in order to observe the movement of the witness marker through the gel layer on top

Кювета 13 прикреплена к крышке 4 прибора болтами 15, а кювета 14 стоит на столе и ее горизонтальное положение регулируют установочными винтами. Кювета 13 имеет крышку 16, к которой прикреплена стойка 17. На стойке закреплен электрод из платиновой проволоки . В кювете 14 имеетс также платиновый электрод, укрепленный на подставке 18 из оргстекла . В кюветы при работе прибора заливаетс буферный раствор. Уровень буферного раствора в нижней кювете таков, что прибор погружен в него на i/aТак как металлические части не должны соприкасатьс с буферным раствором, то нижн часть болтов 6 окружена специальными втулками 19 из оргстекла, которые приклеены к крышке 5. Уплотнение между крышками и цилиндрами создаетс прокладками из пористой резины, вставленными в пазы. Дл охлаждени буферного раствора во врем работы установлен змеевик 20 из стекла, аналогичный змеевик расположен и в нижней кювете.The cuvette 13 is attached to the lid 4 of the device with bolts 15, and the cuvette 14 is on the table and its horizontal position is adjusted with set screws. The cuvette 13 has a cover 16, to which a rack 17 is attached. A platinum wire electrode is fixed on the rack. In the cuvette 14 there is also a platinum electrode mounted on a plexiglas support 18. When the device is in operation, a buffer solution is poured into the cuvet. The level of the buffer solution in the lower cuvette is such that the device is immersed in it on i / a. Since the metal parts do not come into contact with the buffer solution, the lower part of the bolts 6 is surrounded by special plexiglass sleeves 19 that are glued to the cover 5. Seal between the lids and cylinders created by foam rubber pads inserted into the grooves. To cool the buffer solution during operation, a glass coil 20 is installed, a similar coil is also located in the bottom cuvette.

Прибор ратотает следуюш,им образом.The device works in the following way.

Сначала заливают рабочие растворы гел , рабочие растворы с катализаторами по методи се , аналогичной аналитическому дисковому электрофорезу, «о только в больш1их объемах . Так, при наружном диаметре внутреинепо цилиндра 100 мм, высоте ра бочего сло гел 100 мм и толшине его 8 мм, объем гел составл ет около 280 смз.At first, working solutions of the gel are poured, working solutions with catalysts according to the method analogous to analytical disk electrophoresis, “o only in large volumes. So, with an outer diameter of 100 mm inside the cylinder, a height of the working gel layer of 100 mm and a thickness of 8 mm, the volume of the gel is about 280 cm3.

После полимеризации растворов на крышке 4 закрепл ют кювету 13 и заливают буферные растворы в верхнюю и нижнюю кюветы. Через отверсти 12 с помоодью шприцев нанос т испытуемый раствор и подают воду дл охлаждени в цилиндр 1, в кольцевое пространство между цилиндрами 2 и 5 и в змеевики верхней и нижней кювет. После этого подаютAfter the solutions are polymerized, the lid 4 is fixed to the cuvette 13 and the buffer solutions are poured into the upper and lower cuvettes. A test solution is applied through the holes 12 with syringes of syringes and water is supplied for cooling into cylinder 1, into the annular space between cylinders 2 and 5, and into the coils of the upper and lower cuvettes. Then served

напр жение на электроды соответствуюших кювет и провод т электрофорез по методике, аналогичной аналитич-еоко1му дисковому электрофорезу .the voltage on the electrodes of the respective cuvette and is carried out by electrophoresis according to a technique similar to analytic disc electrophoresis.

После проведени опыта прибор разбирают и из него извлекают весь кольцевой пласт полиакриламидного гел , который разрезают. Можно вырезать один или несколько столбиков и окрасить их на белок. Полученные зоныAfter the experiment, the device is disassembled and the entire annular layer of polyacrylamide gel is removed, which is cut. You can cut one or more columns and paint them on protein. Received Zones

вырезают, элюируют и затем подвергают исследованию .cut out, elute and then subjected to the study.

С помош,ью такого прибора можно в течение одного опыта разделить около 1 г белка НВ фракции, различаюшиес как по электрофоретической подвижности, так и по величине молекул.With the aid of such a device, in the course of one experiment, about 1 g of HB protein fraction can be divided, differing in both electrophoretic mobility and the size of molecules.

Предмет изобретени Subject invention

Claims

1. A device for electrophoresis of a biological material in a polyacrylamide gel containing concentrically stirred cylindrical vessels with a polyacrylamide gel located between them, two cuvettes with a buffer solution and a cooling system, characterized in that, in order to speed up the assembly and disassembly of the device, Also, simplify its construction; it is equipped with two shaped caps, which are reinforced

bolts and openings for the passage of the buffer solution into the gel, as well as channels for the circulation of the cooling fluid, while the cuvettes are arranged so that one of the bottom is strengthened

on the top one to ryshsk, and the other is filled with buffer solution, OO | bs. with a smaller one.

2. The appliance according to claim 1, characterized in that the cooling system is coils mounted on covers.

/ 7 75