SU434985A1 - Device for preparative separation of biological macromolecular substances - Google Patents

Device for preparative separation of biological macromolecular substances

Info

Publication number
SU434985A1
SU434985A1 SU1796142A SU1796142A SU434985A1 SU 434985 A1 SU434985 A1 SU 434985A1 SU 1796142 A SU1796142 A SU 1796142A SU 1796142 A SU1796142 A SU 1796142A SU 434985 A1 SU434985 A1 SU 434985A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
column
device
chamber
filter
preparative separation
Prior art date
Application number
SU1796142A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Т. А. Горюхина И. Ф. Сейц С. Д. В. П. Калнновский
СуТПй гПи
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed filed Critical
Priority to SU1796142A priority Critical patent/SU434985A1/en
Application granted granted Critical
Publication of SU434985A1 publication Critical patent/SU434985A1/en

Links

Images

Description

1 one

Изобретение относитс к препаративному разделению высокомолекул рных биологических веществ, например нуклеиновых кислот, методом электрофореза в гел х. The invention relates to a preparative separation of high molecular weight biological substances such as nucleic acids, by electrophoresis in gels.

Известно устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ методом электрофореза в гел х, содержащее верхнюю и нижнюю электродные камеры, заполненные буферным раствором с размещенными в них электродами, сообщающиес с колонкой, в которой расположены столбик гел , опирающийс на поддерживающий фильтр, мембрана, проницаема дл ионов буферного раствора, и проточна камера дл буферного раствора, размещенна в полости между поддерживающим фильтром и мембраной. A device for preparative separation of high molecular weight biological substances by electrophoresis in gels, comprising an upper and a lower electrode chamber filled with a buffer solution disposed therein electrodes communicating with the column in which are arranged a column of gel, supported by a supporting filter membrane permeable ions of the buffer solution, and the flow chamber for buffer occupancy in the cavity between the support and the filter membrane.

Поддерживающий фильтр должен быть проницаемым дл молекул исследуемого вещества и может быть выполнен в виде пористой пластины из стекла или какого-либо синтетического материала. Supporting the filter must be permeable to molecules of the test substance and may be formed as a porous plate of glass or of a synthetic material.

С целью повышени разрещающей способности устройства и получени воспроизводимых результатов в предлагаемом устройстве поддерживающий фильтр выполнен из батиста . In order to increase the resolving power device and obtain reproducible results in the proposed supporting filter device made of muslin.

На чертеже представлена принципиальна схема предложенного устройства. The drawing is a schematic diagram of the proposed device.

Устройство содержит верхнюю 1 и нижнюю 2 части колонки, соединенные резьбовой соединительной втулкой 3. На торце верхней части колонки закрепл етс поддерживающий фильтр 4, выполненный из батиста . The apparatus 1 comprises an upper and a lower part 2 columns connected threaded connecting sleeve 3. On the upper end of the column is fixed filter 4 supports made of muslin. Дл креплени фильтра с помощью нити (резинового кольца) на наружной образующей верхней части колонки выполнена кольцева канавка (на чертеже не показана). For attaching the filter via the yarn (rubber ring) on ​​the outer top of the column forming an annular groove (not shown). При at

соединении верхней части колонки с соединительной втулкой 3 фильтр 4 зал имаетс между торцами верхней части колонки и упорным буртом втулки. top of the column connecting to the connector sleeve 3, a filter 4 imaets room between the ends of the upper part of the column and the thrust collar hub. Между торцом нилсней части колонки и Between the end of the column and nilsney

упорным буртом втулки 3 зажимаетс мембрана 5, выполненна из целлофана или другого материала, приницаемого дл ионов буферного раствора. thrust collar hub 3 is clamped membrane 5 made of cellophane or other material for prinitsaemogo buffer ions. Нижн часть колонки имеет в своем теле канал 6, один конец которого соединен отверстием 7 с подмембранным пространством нижней части колонки, а в другом его конце смонтирована гибка трубка 8, выполненна из фторопласта. The lower part of the column body has at its channel 6, one end of which is connected with the port 7 submembrane space the bottom of the column, and the other end thereof is mounted the flexible tube 8 is made of a fluoroplastic. Отверстие 7 расположено в The opening 7 is arranged in

непосредственной близости к мембране 5. close proximity to the membrane 5.

Фильтр 4 и мембрана 5 образуют во втулке колонки проточную камеру 9 дл буферного раствора. The filter 4 and membrane 5 is formed in the sleeve column flow chamber 9 for the buffer solution. В стенках втулки вмонтированы гибкие трубки 10 и 11, выполненные из фторопласта , сообщающиес с камерой 9. The walls of the sleeve mounted flexible tubes 10 and 11 made of a fluoroplastic, communicating with the chamber 9.

Верхн часть колонки герметично монтируетс в соединительном патрубке днища верхней электродной камеры 12, в которой закреплен отрицательный электрод 13. Ннжн часть колонки закрепл етс в нижней электродной камере 14 так, чтобы торец нижней части колонки раснолагалс от дна камеры 14 на рассто нии, равном /4-7з высоты (глубины) камеры. The upper part of the column sealingly mounted in a connection bottom of the upper electrode chamber 12 in which is mounted a negative electrode 13. Nnzhn column part is secured in the bottom of the electrode chamber 14 so that the lower end of the column rasnolagals from the bottom of the chamber 14 at a distance equal to / 4 -7z height (depth) of the chamber.

В камере 14 закреплен положительный электрод 15. Электроды 13 и 15 выполнены из платины. The camera 14 is fixed positive electrode 15. Electrodes 13 and 15 are made of platinum.

Устройство работает следующим образом. The apparatus operates as follows.

Известными способами приготавливаетс полиакриламидный гель, концентраци которого выбираетс в зависимости от исследуемого вещества. Is prepared by known methods polyacrylamide gel, the concentration of which is selected depending on the analyte.

Под фильтр 4 между верхней частью колонки и опорным буртом втулки 3 размещают тонкую резиновую пленку, после чего верхнюю часть колонки заполн ют гелем на высоту 20-30 мм. Under the filter 4 between the top of the column and the support shoulder of the sleeve 3 is placed a thin rubber film, after which the top of a column filled with gel to a height of 20-30 mm. После полимеризации гел верхнюю часть колонки разъедин ют с втулкой 3, резиновую пленку удал ют. After polymerization the gel top of the column was disconnected from the sleeve 3, the rubber film was removed. Затем верхнюю часть колонки вновь монтируют во втулке 3. Образовавшийс столбик гел удерживаетс фильтром. Then, the upper part of the column again is mounted in the sleeve 3. The resulting gel column is retained by the filter.

Верхнюю и нижнюю электродные камеры и камеру 9 заполн ют буферным раствором, нанример трисфосфатный буфер с рН 7,8, и известными способам.и осуществл ют предэлектрофорез дл удалени из гел веществ, поглощающих свет в ультрафиолетовой области . The upper and lower electrode chamber and the chamber 9 filled with a buffer solution nanrimer trisfosfatny buffer at pH 7.8, and known sposobam.i predelektroforez carried out to remove substances from the gel absorbing light in the ultraviolet region. После заверщени предэлектрофореза верхнюю и нижнюю электродные камеры заполн ют свежим буферным раствором. After zaverscheni predelektroforeza upper electrode and a lower chamber filled with fresh buffer solution. Па новерхность столбика гел , наход щуюс под слоем буферного раствора, известными способами нанос т исследуемое вещество. Pa noverhnost gel column, located beneath a layer of buffer solution, known methods applied test substance.

Одну из гибких трубок подсоедин ют к известному устройству, например к колбе Ма риотта, создающему посто нный гидравлический нанор буферного раствора в камере 9 при посто нном расходе раствора через эту камеру в заданных пределах. One of the flexible tubes are connected to a known device such as a flask Vi riotta, creates a constant hydraulic nanor buffer solution in the chamber 9 at a constant flow rate of the solution through the chamber within predetermined limits. Другую гибкую трубку соедин ют с известным автоматическим коллектором и регистратором фракций вещества, нанример типа Увикорд ЛКБ (Uvikord LKB). Another flexible tube is connected to a known automatic fractions collector and Registrar substance nanrimer type LKB UV-cord (Uvikord LKB).

В электродных камерах создают известными способами циркул цию буферного раствора дл сохранени его состава. The electrode chambers known methods create circulation of buffer solution to maintain its composition. При этом с целью предотвращени образовани воздущных включений и обеспечени посто нства буферного раствора по рП и ионной силе в подмемОранной полости нижней части колонки оуферный раствор из нижней электродной камеры ii отвод т через канал 6 и трубку 8. Thus in order to prevent formation of inclusions and provide vozduschnyh persistence RP buffer and ionic strength podmemOrannoy cavity in the bottom of column ouferny solution from the bottom of the electrode chamber ii withdrawn through channel 6 and a pipe 8.

iia электроды 13 и 15 подают посто нное напр жение, ооесаечивающее требуемую плотность тока электрофореза. iia electrodes 13 and 15 is fed a DC voltage, ooesaechivayuschee desired density electrophoresis current. При электрофоретическом движении молекул исследуемого вещества столбик полиакриламидного гел играет роль молекул рного сита, в св зи с чем When the electrophoretic motion of the substance molecules column polyacrylamide gel acts as a molecular sieve, in connection with which

разные молекулы вещества проникают в камеру 9 но истечении разных промежутков времени от начала процесса. different molecules penetrate into the substance chamber 9 but after different intervals of time from the beginning of the process.

Проход щий через камеру 9 буферный раствор выносит фракции молекул вещества Extending through the chamber 9 buffer solution makes fractions substance molecules

в автоматический коллектор, b пробирках коллектора собираютс отдельные фракции молекул, деление на которые дл конкретного вида исследуемого вещества зависит от времени сбора буферного раствора в каждую in automatic collector, b collector tubes are assembled individual fractions of molecules for which the division into the specific form of the substance depends on the time of collection of buffer solution in each

ирооирку, от времени прощедшего с начала процесса, а также от концентрации нолиакриламидного гел , размещенного в колонке устройства . irooirku from proschedshego time from the beginning of the process, as well as the concentration noliakrilamidnogo gel, placed in a column device. Предложенное устройство нри разделении The apparatus separation nr

таких веществ как нуклеиновые кислоты, в частности РНК, позвол ет вы вить и изолировать свыще двадцати отдельных фракций . Substances such as nucleic acids, particularly RNA allows you build and isolate svysche twenty individual fractions. Выход исследуемого вещества превыщает 90%. Yield analyte prevyschaet 90%.

Па одном и том же столбике гел при использовании холостого электрофореза в форсированном режиме с целью очистки гел от остатков вещества возможно многократное разделение последнего. Pa same gel column using idle electrophoresis forced mode to clean residues from the gel substance may potentiate the separation of the latter.

Предмет изобретени Subject of the invention

Устройство дл препаративного разделени высокомолекул рных биологических веществ, например нуклеиновых кислот, методом электрофореза в гел х, содержащее верхнюю и нижнюю электродные камеры, заполненные буферным раствором с расноложенными в них электродами и сообщающиес с колонкой, в которой расположены столбик гел , онирающийс на поддерживающий фильтр из материала , проницаемого дл молекул исследуемого вещества, мембрана, нроницаема дл ионов буферного раствора, и проточна камера дл буферного раствора, размещенна в An apparatus for preparative separation of high molecular weight biological substances such as nucleic acids, by electrophoresis in gels, comprising an upper and a lower electrode chamber filled with a buffer solution rasnolozhennymi therein electrodes and communicating with the column in which are arranged a column gel onirayuschiys for supporting filter material permeable for molecules of the analyte membrane nronitsaema ions for buffer and the flow chamber for buffer occupancy in

полости между поддерживающим фильтром и мембраной, отличающеес тем, что, с целью повыщени разрешающей способности устройства и получени воспроизводимых результатов , поддерживающий фильтр выполнен the cavity between the support and the filter membrane, characterized in that, with a view to the Enhance resolution device and obtain reproducible results, which supports the filter is arranged

из батиста. from lawn.

SU1796142A 1972-06-07 1972-06-07 Device for preparative separation of biological macromolecular substances SU434985A1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU1796142A SU434985A1 (en) 1972-06-07 1972-06-07 Device for preparative separation of biological macromolecular substances

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU1796142A SU434985A1 (en) 1972-06-07 1972-06-07 Device for preparative separation of biological macromolecular substances

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU434985A1 true SU434985A1 (en) 1974-07-05

Family

ID=20517688

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU1796142A SU434985A1 (en) 1972-06-07 1972-06-07 Device for preparative separation of biological macromolecular substances

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU434985A1 (en)

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4877510A (en) * 1988-10-25 1989-10-31 Bio-Rad Laboratories, Inc. Apparatus for preparative gel electrophoresis
US5284559A (en) * 1992-06-16 1994-02-08 Rhode Island Hospital Preparative electrophoresis device and method
US6319472B1 (en) 1993-11-01 2001-11-20 Nanogen, Inc. System including functionally separated regions in electrophoretic system
US6375899B1 (en) 1993-11-01 2002-04-23 Nanogen, Inc. Electrophoretic buss for transport of charged materials in a multi-chamber system
US6824740B1 (en) 1996-09-06 2004-11-30 Nanogen, Inc. Apparatus for active biological sample preparation
US6887362B2 (en) 2002-02-06 2005-05-03 Nanogen, Inc. Dielectrophoretic separation and immunoassay methods on active electronic matrix devices
US6989086B2 (en) 1996-09-06 2006-01-24 Nanogen, Inc. Channel-less separation of bioparticles on a bioelectronic chip by dielectrophoresis

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4877510A (en) * 1988-10-25 1989-10-31 Bio-Rad Laboratories, Inc. Apparatus for preparative gel electrophoresis
US5284559A (en) * 1992-06-16 1994-02-08 Rhode Island Hospital Preparative electrophoresis device and method
US6319472B1 (en) 1993-11-01 2001-11-20 Nanogen, Inc. System including functionally separated regions in electrophoretic system
US6375899B1 (en) 1993-11-01 2002-04-23 Nanogen, Inc. Electrophoretic buss for transport of charged materials in a multi-chamber system
US6824740B1 (en) 1996-09-06 2004-11-30 Nanogen, Inc. Apparatus for active biological sample preparation
US6989086B2 (en) 1996-09-06 2006-01-24 Nanogen, Inc. Channel-less separation of bioparticles on a bioelectronic chip by dielectrophoresis
US6887362B2 (en) 2002-02-06 2005-05-03 Nanogen, Inc. Dielectrophoretic separation and immunoassay methods on active electronic matrix devices

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ward Chiral media for capillary electrophoresis
Caldwell et al. Disc electrophoresis of human saliva in polyacrylamide gel
Orrick et al. Comparison of nucleolar proteins of normal rat liver and Novikoff hepatoma ascites cells by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis
DE69434542T2 (en) DNA sequencing low viscosity with a high resolution by means of a medium
Shepherd et al. High-resolution disc electrophoresis of histones: I. An improved method
US3989613A (en) Continuous balanced flow fixed boundary electrophoresis
US4055799A (en) Method of and device for measuring elastic and di-electric properties of the diaphragm of living cells
US4148703A (en) Method of electrophoretic purification of enzymes and peptides by means of an adjustable, specialized, geometrically located electrode system
US5360540A (en) Chromatography system
AU706048B2 (en) Apparatus and method for electrophoresis
Shen et al. High‐resolution capillary isoelectric focusing of proteins using highly hydrophilic‐substituted cellulose‐coated capillaries
US6136187A (en) Separation column containing porous matrix and method of packing column
Ward et al. Methods for fractionation and scintillation counting of radioisotope-labeled polyacrylamide gels
US5200068A (en) Controlled charge chromatography system
US4375401A (en) Electrophoresis system
Vesterberg [33] Isoelectric focusing of proteins
Gabriel [39] Analytical disc gel electrophoresis
Chen et al. Chemically L‐prolinamide‐modified monolithic silica column for enantiomeric separation of dansyl amino acids and hydroxy acids by capillary electrochromatography and μ‐high performance liquid chromatography
JP3467995B2 (en) Capillary electrophoresis apparatus
EP0666980B1 (en) Automated capillary electrophoresis apparatus
US5055517A (en) Electrophoretic media
US9719961B2 (en) Multichannel preparative electrophoresis system
US5169511A (en) Capillary electrophoresis technique
US5102518A (en) Electrophoresis apparatus and method for electroeluting desired molecules for further processing
US4305799A (en) Method and apparatus for performing uni- and bi-dimensional micro-gel electrophoresis