SU1760438A1 - Способ количественного определени новокаинамида - Google Patents

Abstract

Сущность изобретени : анализируемую пробу обрабатывают спиртовым раствором п-диметиламинокоричного альдегида в количестве 4,5 .5 10 М в присутствии сульфонола с -.-2 концентрацией 4,0 ,0 М при рН 2,0-5,0 с последующим фотометрированием полученного раствора. 11 табл. сл с

Description

Изобретение относитс  к области аналитической химии, а именно к способам количественного определени  новокаинамида . Новокаинамид относитс  к противо- аритмическим средствам (ПАС). Кроме того в эту группу вход т хинидин, аймолин, этмо- зин. Предлагаемый способ позвол ет определ ть повокаинамид в присутствии других ПАС на серийной отечественной аппаратуре .

Известен способ определени  новокаинамида путем взаимодействи  его с бром- феноловым синим с последующим

фотометрированием полученного окрашенного соединени  1.

Недостатком способа  вл етс  его невысока  чувствительность (2 мг/мл).

Известен способ определени  новокаинамида с использованием в качестве реагента лактата этакридина 2.

Недостатком способа  вл етс  его сложность, св занна  с необходимостью экстракции , а также недостаточно высока  чувствительность - 27 мг/мл.

Наиболее близким к изобретению  вл етс  способ определени  новокаинамида.

ч О О 4 СО 00

основанный на обработке реагентом тропе- олином 00 3.

Недостатком способа  вл етс  необходимость экстракции, что приводит к сложности епособа, а также его невысока  чувствительность (11 мг/мл).

Цель изобретени  - упрощение способа , повышение чувствительности и селективности определени .

Цель достигаетс  тем, что определение новокаинамида провод т путем обработки пробы спиртовым раствором п-диметила- минокоричного альдегида (п-ДМАКА) в присутствии сульфонола с концентрацией в реакционной смеси 4,0 ,0 М при рН 2,0-5,0 с последующим фотометри- рованием полученного раствора.

Эксперимент показал, что растворы, содержащие новокаинамид и органический реагент п-ДМАКА, окрашены в желтый цвет. Спектры поглощени  двойных систем в среде цитратных буферных растворов с рН 1,25-6,0 представлены двум  полосами поглощени  С Ямакс 265-280 НМ И Амакс 400

нм. Введение третьего компонента - раствора сульфонола приводит к возникновению  рко-малиновой окраски раствора системы.

Спектры поглощени  тройных систем новокаинамид-п-ДМАКА-сульфонол пред- ставлены при всех значени х рН трем  полосами поглощени  Амакс 280нм , Лмакс 370-400 нм, Лмакс 570нм,АА составл ет 170 нм.

Установлены оптимальные услови  определени  новокаинамида с п-ДМАКА и сульфонолом.

Изучение зависимости светопоглоще- ни  систем новокаинамид-п-ДМАКА-сульфонол от рН среды показало, что оптимальной средой  вл ютс  нитратные буферные растворы с рН 2,0-5,0; 2,,0.

Исследовано вли ние СДМАКА на правильность получаемых результатов определени  новокаинамида.

Как следует из данных, представленных в табл.1, наименьшие ошибки определени  новокаинамида наблюдаютс  в интервале концентраций 0,1-1,0 мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА (4,5 М СП-ДМАКА 4,5 10 М).

Установлена оптимальна  концентраци  сульфонола в реакционной системе. Дл  этого исследовано п систем, содержащих посто нную концентрацию п-ДМАКА (0,1 мл 0,2%-ного раствора), рН растворов была посто нной, равной 4,0.

Установлено, что концентраци  сульфонола в различной смеси должна составл ть 4,0- 2,0- М, что достигаетс  при добавлении сульфонола в количестве

1-5 мл М.

Все дальнейшие исследовани  проводили с растворами следующих концентраций: 0,1 мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА; 3 мл М сульфонола, У0бщ 25 мл.

0 Изучена подчинимость системы новокэ- инамид-п-ДМАКА-сульфоиол закону Бугера- Ламберта-Бера, размах варьировани  концентраций составл л 1-100 мкг/25 мл. Установлено, что по предлагаемому способу

5 определени  новокаинамида можно находить как большие, так и маленькие концентрации противоаритмического средства. Установлено два определ емых диапазона концентраций новокаинамида.

0 I (большие количества) 5-100мкг/25мл, или 0,2-4,0мкг/мл,

II (маленькие количества) 1- 10мкг/25мл, или 0,04-0,4мкг/мл, 5см Доказательство существовани  диапа5 зона определ емых содержаний новокаинамида приведено в табл.3.

Анализ данных, представленных в табл.З, показал, что ошибки определени  соответствуют фотометрическому методу и

0 не прееышают 10% в интервале 5,0- 100,0мкг/25мл при I 1 см, 1.0- 10,0мкг/25мл при I 5 см.

Нижн   граница диапазона определ емых содержаний новокаинамида - 1

5 мкг/15мл, или 0,04мкг/мл - следовательно, это и может быть прин то за предел обнаружени .

В литературе 1 указано, что предел обнаружени  по методу-прототипу составл ет

0 11мкг/мл, следовательно по предлагаемому способу удалось снизить предел обнаружени  в 250 раз.

Изучена зависимость предела обнаружени  новокаинамида от рН среды и кон5 центрации реагента, з также третьего компонента (табл.4-6).

Анализ данных, представленных в табл.4-6, показал, что ошибка определени  предела обнаружени  новокаинамида ми0 нимальна при концентрации п-ДМАКА 4.56Х х 105-4,56 . концентрации сульфонола 4 .0 . рН2-4.

Исследован широкий круг лекарственных препаратов, которые могут быть назна5 чены больным совместно с новокаинамидом.

Соотношение новокаинамида к мешающему компоненту было выбрано 1:1 согласно прописываемой рецептуре в медучреждени х. Как видно из данных.

представленных в табл.7, препараты из груг.п антиаритмические средства (№№ 27- 29), противотуберкулезные средства (№ 12,19-23); антибиотики (№ 25 и 26) и другие препараты широкого спектра деист- ви  не оказывают мешающего действи  на результаты определени  новокаинамида предлагаемым способом. Чрезвычайно важно , что возможно определение новокаинамида в присутствии других антиаритмических средств.

Изобретение иллюстрируетс  примерами конкретного выполнени .

П р и м е р 1. Построение градуировоч- ной характеристики дл  количественного фотометрического определени  больших количеств новокаинамида.

Точную навеску субстанции сухого препарата новокаинамида (0,0250 г) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и рас- твор ют в дистиллированной воде. Стандартный раствор содержит 1 мг/мл новокаинамида, рабочий раствор содержит 100мкг/мл новокаинамида. Дл  построени  градуировочной характеристики в мерные колбы вместимостью 25 мл помещают по 10-15 мл буферного раствора рН 4,0, затем 0,1 мл (Юмкг), 0,3мл (ЗОмкг), 0,5мл (50мкг), 0,7мл (70мкг), 1,0мл (100мкг) рабочего раствора новокаинамида с С 100мкг/мл, при- бавл ют в каждую колбу 0,1мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА и 3 мл М раствора сульфонола и довод т до метки буферным раствором рН 4,0.

Оптические плотности указанных рас- творов измер ли на КФК-2-УХЛ 4,2 в кюветах с толщиной поглощающего сло  I 1 см при А 540 им относительно холостого раствора , в состав которого вход т цитратный буферный раствор рН 4,0, 0,1 мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА (4,56-10 5 М) и 3 мл М раствора сульфонола (1.2 М), У0бщ 25 мл.

По полученным значени м оптической плотностью стро т зависимость А f(C). За- кон Бугера-Ламбертз-Бера выполн етс  при концентрации новокаинамида 5-100 мкг/25 мл. или 0,2-4,0 мкг/мл при I 1 см.

П р и м е р 2. Построение градиуропоч- ной характеристики дл  количественного фотометрического определени  малых количеств новокаинамида.

Точную навеску субстанции сухого препарата новокаинамида (0,0250 г) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и рас- твор ют в дистиллированной воде. Стандартный раствор содержит 1 мг/мл новокаинамида, рабочий раствор содержит 10 мкг/мл новокаинамида.

Дл  построени  градуировочной характеристики дл  малых количеств новокаинамида в колбы на 25 мл внос т по 7-10 мл буферного цитратного раствора рН 4,0, затем 0,1 мл (2 мкг), 0,3 мл(3 мкг), 0.5 мл (5 мкг), 0,7 мл (7 мкг), 1,0мл (10 мкг) раствора новокаинамида с концентрацией 10 мкг/мл. Добавл ют по 0,1 мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА и по 3 мл М раствора сульфонола и довод т объем в каждой колбе до метки цитратным буферным раствором рН 4,0. Оптические плотности полученных растворов измер ют на КФК-2-УХЛ4,2 в кюветах с толщиной поглощающего сло  I 5 см при Я 540 нм. Раствор сравнени  готов т как в примере 1. По полученным данным оптических плотностей стро т зависимость А f(C). Градуировочна  характеристика пр молинейна в интервале концентраций 1-10мкг/25мл, или 0,04-0,4 мкг/мл новока- инамидз. Предел обнаружени  - 0,04 мкг/мл новокаинамида.

П р и м е р 3. Определение содержани  новокаинамида в таблетках.

Анализируемые таблетки лекарственных форм тщательно растирают в фарфоровой ступке. Точные навески 0,5000 г количественно перенос т в мерные колбы и раствор ют в дистиллированной воде. Алик- воты полученных растворов перенос т в колбы на 25 мл и далее провод т определение новокаинамида, как в примере 1. Полученные результаты приведены в табл.8,

Анализ данных, представленных в табл.8, позвол ет заключить, что предлагаемый способ определени  новокаинамида отличаетс  хорошей воспроизводимостью и правильностью.

П р и м е р 4. Определение содержани  новокзинамида в донорской крови.

При подготовке крови к анализу белки крови осаждают трихлоруксусной кислотой,

В пробирки внос т по 2 мл крови доноров , добавл ют 30 мкг новокаинамида, тщательно перемешивают. Врем  контакта препарата с кровью варьировали от 1 мин до20ч. После фиксированного времени контакта осаждают белки 2 мл 30%-ной трихлоруксусной кислоты. Смесь перемешивают стекл нной палочкой и центрифугируют 5- 10 мин на центрифуге при скорости 3000 об/мин. Фильтрат сливают в мерные колбы на 25 мл, добавл ют к фильтрату 8-10 мл буферного раствора рН 4,0, 0,1 мл 2%-ного раствора п-ДМАКА, 3 мл 10 М раствора сульфонола и довод т до метки буферным раствором. Полученные смеси фотометри- руют по примеру 1. Содержание новокаинамида определ ют по градуировочной характеристике. Результаты определени 

новокаинамида в донорской крови приведены в табл.9.

Анализ результатов определени  новокаинамида в донорской крови позвол ет сделать следующие выводы:

Вне зависимости от групповой принадлежности крови и ее резус-фактора возможно определение новокаинамида предлагаемым способом.

Врем  контакта новокаинамида может быть достаточно длительным, это не вли ет на результаты анализа.

По методу введено-найдено показано, что результаты отличаютс  правильностью и хорошей воспроизводимостью.

П р и м е р 5. Определение содержани  новокаинамида в слюне.

При подготовке слюны к анализу белки, вход щие в ее состав, осаждают 96%-ным спиртом-ректификатором.

В мерные пробирки собирают слюну испытуемого , центрифугируют в течение 15 мин при скорости 4000 об/мин (дл  осаждб- ни  твердых остатков слюны). Затем добавл ют 2 мл осадителл и центрифугируют еще 7-10 мин. Фильтрат перенос т количественно в мерные колбы на 25 мл и добавл ют к каждому фильтрату по 10-12 мл буферного раствора рН 4,0 по 0,1 мл 0,2%-ного раствора п-ДМАКА и по 3 мл 10J2 М растворах сульфонола. Смеси довод т до метки буфер ным раствором и фотометрируют как указано в примере 1. Результаты определени  новокаинамида у случайно выбранных сотрудников приведены в табл. 10. Как следует из представленных данных, ошибка определени  новокаинамида не превышает 10%. Определение новокаинамида в слюне  вл етс  очень перспективным, так как позвол ет легко произвести забор анализируемой биологической жидкости, особенно по сравнению с кровью.

Существенным отличием нового способа определени  новокаинаммда  вл етс  проведение реакции новокаинамид-п-ДМА- КА в присутствии сульфонола в среде цит- ратного буферного раствора рН 2-5. Эти два серьезных изменени  привели к тому, что удалось, во-первых, снизить значительно предел обнаружени : в 250 раз по сравнению с прототипом; во-вторых, изменить селективность реакции. Новый способ позвол ет определ ть новокаинамид в присутствии других антиаритмических

средств, что особенно важно, а также в присутствии противотуберкулезных препаратов и антибиотиков широкого спектра действи . В-третьих, расширен диапазон определ емых содержаний новокаинамида

(0,04-0,4 мкг/мл; I 5 см; 0,2-4,0 мкг/мл. I 1 см). Предлагаемый способ впервые позвол ет определ ть малые количества новокаинамида (0,04-4 мкг/мл). Кроме того впервые показана возможность определени  новокаинамида в крови и слюне, что чрезвычайно важно дл  определени  наилучшего терапевтического эффекта с учетом индивидуальной чувствительности больного и своевременного поддержани  эффективной

лечебной концентрации препарата в организме . Данным способом можно определ ть и большие количества новокаинамида, что может быть использовано в фармацевтическом контроле. Предлагаемый способ

анализа новокаинамида экспрессен, прост, выполн етс  на серийной отечественной аппаратуре с использованием выпускаемых в СССР органических реагентов и может быть доступен дл  выполнени  в клинических и биохимических лаборатори х лечебных учреждений.

В табл.11 приведено сравнение предлагаемого способа с прототипом и базовым объектом.

Claims (2)

1. Формула изобретени  Способ количественного определени  новокаинамида путем обработки анализируемой пробы органическим реагентом в

   кислой среде с последующим фотометриро- ванием раствора, отличающийс  тем. что, с целью упрощени  способа, повышени  чувствительности и селективности определени , в качестве реагента используют

   спиртовой раствор п-диметиламиноко- ричного альдегида о количестве 4,5 -4,5 М и обработку ведут в присутствии сульфонола с концентрацией в реакционной

   1-3

   смеси 4,0 -10-4,0-10 М при рН 2,0-5,0.

   Таблица 1

   Определение содержани  новокаинамида при различной

   концентрации п-ДМАКА (Ссульф 3,0 мл М, У0бщ 25мл, КФК -2. , нм )

   Определение содержани  новокаинамида при различной

   концентрации сульфонола (рН 4,0; Сп-дМАКА 0,1 мл 0.2 % -го. Уобщ 25мл, КФК-2, I 1 см)

   Установление границ определ емых содержаний новокаинамида

   ( С П-ДМАКА 0,1 мл 0,2 % -го раствора, Ссульф 3,0 мл -10 М. рН 4,0, У0бщ 25мл)

   Таблица 2

   Таблица 3

   Зависимость значени  предела обнаружени  от концентрации п-ДМАКА ( рН 4,0, ССульф 3 мл -10 М, У0бщ 25мл, I 5 см)

   Зависимость значени  предела обнаружени  новокаинамида от концентрации сульфонола

   ( СП-ДМАКА 4,56 М ( 0,1 мл 0,2 %-ный раствор). V06in 25 мл. 1 5 см)

   Таблица 6

   Зависимость значени  предела обнаружени  новокаинамида

   от рН среды (СП-ДМАКА 0,1 мл 0,2%-го раствора), ССульф 3 мл -ЮМ, /общ 25мл, 5см)

   Таблица 4

   Таблица 5

   дминивии Knwiui iv )- орфали/к1ропмлк п) фенотиазина гилрохпоОпределение содержани  новокаинэмидз в таблетках (рН 4,0; С -ДМАКА 0,1 мл 0,2 % -ного раствора, Ссульф 3 мл

   - 2-1УХЛ4,
2. 2. I 1 см, Я 540 нм )

   1

   Таблица 8

   Новокаинамид

   Vo6m 25 мл, КФК

   М.

   Таблица 9

   Результаты определени  новокаинамида в слюне (всем участникам эксперимента введено по 30,0 мкг препарата)

   Таблица 10

   жени 

   дел емых

   реагент

   Фотометрический

   0,04 мкг/мл, 1 - 5 см

   0,,4 мкг/мл, см 0,2-4,0 мкг/мл, см

   Цитратный буфер,- рН 2,0-5,0

   Не мешают определению другие антиаритмические средства (см. табл. 7)

   0,1 мл 0,2%-ного раствора п-диметиламиноко ричного альдегида - 4,5- , сульфонол - 4,0- Ю 2,

   Титриметрический

   0,1-0,3 г/80 мл Разбавленна  UC1

   Тропеолии 00 с метиленовым синим