SU1721091A1 - Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone - Google Patents
Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone Download PDFInfo
- Publication number
- SU1721091A1 SU1721091A1 SU904793878A SU4793878A SU1721091A1 SU 1721091 A1 SU1721091 A1 SU 1721091A1 SU 904793878 A SU904793878 A SU 904793878A SU 4793878 A SU4793878 A SU 4793878A SU 1721091 A1 SU1721091 A1 SU 1721091A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- hcg
- cells
- monat
- human
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к медицине и биотехнологии. Использование продуцируемых штаммов № ВСКК (П) 397Д монокло- нальных антител (МонАт) позвол ет разрабатывать иммунологические способы определени уровн хорионического гона- дотропина человека (ХГЧ) в биологических жидкост х организма дл диагностики беременности у женщин на ранних сроках, диаг- ностики хорионэпителиомы и других трофобластических опухолей, пика овул ции у женщин. Штамм получен путем гибридизации клеток мышиной миеломной линии X 63 Ад 8.653 с клетками селезенки мыши линии BALB/C, иммунизированной офици- нальным препаратом хорионического гона- дотропина человека (ХГЧ). |3 качестве сливающего агента использован ПЭГ 1500. Селекци клеток проведена на; среде HAT, осуществлены 2 клонировани методом предельных разведений, получено 100% позитивных клонов. Услови выращивани штамма: среда.ЯРМ -1640с 10% фетальной сыворотки крови крупного рогатого скота, температура 37°С, газова фаза - воздух с 5% С.О2.-Способ культивировани в пластиковых флаконах на 50-250 мл, посевна доза 500000 клеток/мл, кратность рассева 1:2, врем субкультивировани 3-4 дн . Через 10-20 дней после инокул ции клеток штамма в брюшную полость мыши BALB/C, обработанной пристанем, получают асцитическую жидкость. С помощью высаливани сернокислым аммонием и последующей ионообменной хроматографии на колонке с ДЕАЕ-52 целлюлозой из 1 мл ас- цитической жидкости выдел ют около 7 мг иммуноглобулинов с содержанием. МонАт. продуцируемых штаммом, до 90%. МонАт реагируют , ХГЧ и ЛГЧ в разведении 1 мкг/мл в иммуноферментном и РИА тестах . Штамм депонирован в ВСКК (П) под № 397Д. ъ Ё 4 N3 О ОThe invention relates to medicine and biotechnology. The use of the produced strains VSKK (P) 397D of monoclonal antibodies (MonAt) allows the development of immunological methods for determining the level of human chorionic gonadropin (hCG) in biological fluids of the body for the diagnosis of pregnancy in women in the early stages, diagnostics of chorioepithelioma and other trophoblastic tumors, the peak of ovulation in women. The strain was obtained by hybridization of cells of the murine myeloma X 63 Ad 8.653 line with the spleen cells of a BALB / C mouse strain immunized with an official human chorionic gonadotropin (HCG) preparation. | 3 PEG 1500 was used as a discharging agent. Cell selection was performed on; HAT medium, 2 limiting dilutions cloning were performed, 100% positive clones were obtained. Growing conditions for the strain: medium. NMR-1640c with 10% fetal bovine serum, temperature 37 ° C, gas phase — air with 5% C.O2. -Cultivation method in plastic bottles of 50-250 ml, sowing dose 500000 cells / ml, 1: 2 seeding rate, subculturing time 3-4 days. 10–20 days after the inoculation of strain cells into the abdominal cavity of a BALB / C mouse treated with a pier, an ascites fluid is obtained. Using salting out with ammonium sulfate and subsequent ion-exchange chromatography on a column of DEAE-52 cellulose, about 7 mg of immunoglobulins containing content was extracted from 1 ml of ascitic liquid. Monat produced by the strain, up to 90%. MonAt react, hCG and LSH at a dilution of 1 µg / ml in the ELISA and RIA tests. The strain deposited in VSKK (P) under number 397D. ъ Ё 4 N3 О О
Description
Изобретение относитс к гибридомной технологии и может быть использовано дл разработки на основе продуцируемых штаммом моноклональных антител (МкАт) иммунологических способов определени цельной молекулы хорионического гонадот- ропина человека (ХГЧ) или его изолированной fl -субъединицы(Й-ХГЧ) в биологическихThis invention relates to hybridoma technology and can be used to develop, on the basis of monoclonal antibodies (McAt) produced by a strain, of immunological methods for determining a whole human chorionic gonadotropin (hCG) molecule or its isolated fl subunit (H-hCG) in biological
жидкост х организма (кровь, моча, амниоти- ческа жидкость и др.) с целью диагностики раннего срока беременности у женщин, диагностики трофобластических опухолей и наблюдени за ходом беременности у женщин из групп риска (невынашивание беременности , эктопическа беременность, гестозы и др.), а также дл определени body fluids (blood, urine, amniotic fluid, etc.) to diagnose early pregnancy in women, diagnose trophoblastic tumors and monitor pregnancy in women from risk groups (miscarriage, ectopic pregnancy, gestosis, etc.) and also to determine
уровн ЛГ в крови в ИФА и РИА-тесте с целью диагностики пика ЛГ у женщин.Level of LH in the blood in the ELISA and RIA-test to diagnose the peak of LH in women.
Цель изобретени - получение штамма гибридных культивируемых клеток мыши, продуцирующего МонАт. специфичные к / -ХГЧ и ft -ЛГЧ.The purpose of the invention is to obtain a hybrid strain of cultured mouse cells producing MonAt. specific to l-hCG and ft-lgc.
Штамм получают следующим образом.Strain was prepared as follows.
В качестве антигена используют офици- нальный препарат ХГЧ. Мышей линии BALB/C иммунизируют внутрибрюшинно по следующей схеме: в 1-й день - 500 ед, препарата в смеси с полным адьювантом Фрейнда (ПАФ), на 14-й и 28-й дни ввод т по 250 ед. препарата с ПАФ, реиммунизиру- ют мышь на 56-й день - ввод т 2500 ед. ХГЧ в забуференном физиологическом растворе, хлорида натри .The official preparation of hCG is used as the antigen. Mice of the BALB / C line are immunized intraperitoneally according to the following scheme: on the 1st day - 500 units, the preparation mixed with Freund's adjuvant (PAF), on the 14th and 28th days, 250 units are administered. drug with PAF, reimmunize the mouse on the 56th day - 2500 units are administered. HCG in buffered saline, sodium chloride.
Через 72-96 ч реиммунизации у мыши стерильно удал ют селезенку и готов т суспензию клеток (спленоцитов). Клетки селезенки мыши BALB/C иммунизированной препаратом ХГЧ, сливают (гибридизуют) с клетками мышиной миеломы X 63 Ад 8.653. Сливающий агент- ПЭГ 1500(50%-ный раствор ). Селекцию гибридных клеток провод т на среде HAT, два клонировани методом лимитирующего разведени (1 клетка на 3 лунки), 100% позитивных клонов ..After 72-96 h of reimmunization, the spleen is sterilely removed from the mouse and a suspension of cells (splenocytes) is prepared. The spleen cells of a BALB / C mouse immunized with the hCG preparation are fused (hybridized) with the cells of the mouse myeloma X63 Hell 8.653. The draining agent is PEG 1500 (50% solution). Selection of hybrid cells was carried out on HAT medium, two cloning by the method of limiting dilution (1 cell per 3 wells), 100% positive clones ..
Стандартные услови выращивани : среда RPM11640 с 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (FCS). газова фаза - воздух с 5% С02. Способ культивировани в пластиковых флаконах на 50-250 мл, посевна доза 500000 клеток в 1 мл. кратность рассева 1:2, врем культивировани 3-4 дн . В организме животного - мышь BALB/C, обработанна пристанем (0,5 мл в/брюшинно за 5-10 дней до инокул ции), доза инокул ции-3-8 млн клеток, врем образовани асцита 10-20 дней.Standard growing conditions: RPM11640 medium with 10% fetal bovine serum (FCS). gas phase - air with 5% C02. The method of cultivation in plastic bottles of 50-250 ml, sowing dose of 500,000 cells in 1 ml. the multiplicity of sieving 1: 2, the cultivation time of 3-4 days. In the animal's body, a BALB / C mouse treated with a pier (0.5 ml ip / peritoneally 5–10 days before inoculation), a dose of inoculation 3–8 million cells, the time of ascites formation is 10–20 days.
Полученный штамм гибридных клеток мыши обозначен Ф 14. Штамм хранитс в Специализированной коллекции перевиваемых соматических клеток Всесоюзной коллекции клеточных культур под № ВСКК (П) 397 Д и характеризуетс следующими признаками .The resulting strain of hybrid mouse cells is designated F 14. The strain is stored in the Specialized Collection of Transplanted Somatic Cells of the All-Union Collection of Cell Cultures under the number of BCCC (P) 397 D and is characterized by the following features.
Данные видовой принадлежности: мышиные клетки линии BALB/C. Гибридома секретирует МкАт против /3-ХГЧ и/З-ЛГЧ, определ емые иммуноблотгингом, иммуно- ферментными, иммунофлуоресцентными и радиоимунными методами.Species data: mouse cells of the BALB / C line. Hybridomas secrete MCAT against / 3-hCG and / 3-hC, determined by immunoblotting, immuno-enzyme, immunofluorescent and radioimmuno methods.
Контаминации .бактери ми и грибами нет. микоплазмы не обнаружены. Штамм гибридных клеток продуцирует монокло- нальные антитела lgG1 класса, направленные против ft -ХГЧ и/З-ЛГЧ, специфичностьContamination of bacteria and fungi is absent. mycoplasmas are not detected. The hybrid cell strain produces monoclonal IgG1 class antibodies directed against ft-hCG and / C-lHC, specificity
оцениваетс иммуноблоттингом. иммуно- ферментными, иммунофлуоресцентными и радиоимунными методами. Концентраци полезного продукта МонАт против/3-ХГЧ вevaluated by immunoblotting. immune-enzyme, immunofluorescent and radioimmunoassays. The concentration of the useful product MonAt against / 3-hCG in
культуральной среде около 10 мкг/мл, в асцитической жидкости около 7 мг/мл, титры данных антител при определении с помощью иммуноферментного метода 1:3000 в культуральной среде и 2:(105-10 ) в асцитической жидкости, при нанесении на плей- ты антигена в концентрации 30 ед./мл препарата ХГЧ; Продукци МкАт стабильна по крайней мере в течение 30 пассажей ин витро и 15 пассажей на животных, если гибридома перевиваетс на мьциах BALB/C.about 10 μg / ml in culture medium, about 7 mg / ml in ascitic fluid, the titers of these antibodies, when determined using the ELISA method 1: 3000 in culture medium and 2: (105-10) in ascitic fluid, when applied to tablets antigen at a concentration of 30 units / ml of the hCG preparation; Production of MCAT is stable for at least 30 in vitro passages and 15 passages in animals if the hybridoma is transplanted on BALB / C muscles.
Способ криоконсервации: 4x106 клеток в RPMI 1640 + 10% FCS + 10% ДМСО, замораживание в пенопластовой коробке при - 70°С. Жизнеспособность послеMethod of cryopreservation: 4x106 cells in RPMI 1640 + 10% FCS + 10% DMSO, freezing in a foam box at - 70 ° C. Viability after
размораживани 70-90% (оценка жизнеспособности по исключению трипанового синего после 24 ч культивировани ).thawing 70-90% (viability assessment for trypan blue exclusion after 24 h of cultivation).
Штамм депонирован под № ВСКК (П) 397 Д.The strain deposited under number VSKK (P) 397 D.
При использовании гибридомы получены специфические и /2-ЛГЧ Монат путем выделени их из асцитической жидкости мыши BALB/C с помощью высаливани сульфатом аммони и последующей ионообменной хроматографии на колонках с ДЕ АЕ- 52 целлюлозой. Из 1 мл асцитической жидкости выделено 6,9 мг МкАтанти-/ -ХГЧ. Контроль на специфичность МонАт проведен в системе твердофазного иммуноферментного анализа. МонАт реагируют с /J-ХГЧ, цельной молекулой ХГЧ и ЛГЧ в разведении 1 мкг/мл. МкАт не реагируют с ФСГЧ, ТТТЧ, а также с ЛГ и ФСГ свиньи, коровы, лошади и ХГ лошади.Using hybridoma, specific and / 2-PHC Monat were obtained by isolating them from the ascitic fluid of a BALB / C mouse by salting out with ammonium sulfate and subsequent ion-exchange chromatography on DE AE-52 cellulose columns. From 1 ml of ascitic fluid, 6.9 mg of McAtanti- / -HCG was isolated. MonAt specificity control was carried out in the system of enzyme-linked immunosorbent assay. MonAt reacts with (J-hCG), a whole hCG molecule and an HCG at a dilution of 1 μg / ml. The MCA does not react with FSHP, TTTPH, as well as with LH and FSH pigs, cows, horses and CG horses.
П р и м е р 1. Продуцируемые штаммом МонАт к/З-ХГЧ использованы дл разработки системы твердофазного иммунофёрмен- тного анализа, в которой МонАт анти- ХГЧ фиксировались (сорбировались) на пластинках дл иммунологических исследований отечественного производства.PRI me R 1. Produced by the MonAt K / Z-hCG strain were used to develop a solid phase immunoassay analysis system in which the MonAt anti-hCG was fixed (sorbed) on plates for immunological studies of domestic production.
В качестве коньюгата МонАт с перокси- дазой использованы МонАт к другому эпи- Torfy/ ХГЧ. Чувствительность 2-эпитопнойMonAt to another epi- Torfy / hCG was used as a MonAt peroxidase conjugate. 2-epitope sensitivity
иммуноферментной системы на основе двух МонАт к /J-ХГЧ 40-50 ME/л. Эта тест-система позвол ет вы вл ть ХГЧ в моче женщин, начина с 8-10 дн после оплодотворени , т.е. обеспечивает раннюю диагностику беременности .enzyme immunoassay system based on two MonAt to / J-hCG 40-50 ME / l. This test system allows hCG to be detected in the urine of women, starting from 8-10 days after fertilization, i.e. provides early diagnosis of pregnancy.
П р и м е р 2. Продуцируемое штаммом МонАт использовали также дл разработки тест-системы твердофазного иммуноферментного анализа, в которой МонАт № 397PRI mme R 2. Produced by the strain Monat also used for the development of a test system of enzyme-linked immunosorbent assay, in which Monat No. 397
Д против л(3 -ЛГЧ сорбировалось на пластинках дл иммунологических исследований , а в .качестве конъюгата монокло- нальных антител с пероксидазой использованы антитела против -субьедини- цыЛГЧ.D vs l (3 -LHC was sorbed on immunoassay plates, and anti-subunit LHC antibodies were used as a conjugate of monoclonal antibodies with peroxidase.
Чувствительность 2-эпитопной иммунофер- ментной системы 1ед/л ЛГЧ. Эта тест-система позвол ет диагностировать путем определени пика ЛГ период овул ции у женщин.The sensitivity of the 2-epitope immunoassay system is 1 unit / l of LSM. This test system makes it possible to diagnose, by determining the peak of LH, the ovulation period in women.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904793878A SU1721091A1 (en) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU904793878A SU1721091A1 (en) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU1721091A1 true SU1721091A1 (en) | 1992-03-23 |
Family
ID=21497488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU904793878A SU1721091A1 (en) | 1990-02-20 | 1990-02-20 | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU1721091A1 (en) |
-
1990
- 1990-02-20 SU SU904793878A patent/SU1721091A1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ЕР № 0132488, кл. А 61 К 39/395,1985. DE №3507848, кл. С 12 N 5/00, 1986. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2758394B2 (en) | Monoclonal antibodies against human tumor necrosis factor | |
| SU1721091A1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunitъ of human chorionic gonadotropic hormone and human luteinizing hormone | |
| SU1721090A1 (en) | Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibody, interacting with @@@-subunit of chgh, lhh, tthh and equine lh and chh | |
| CN1118568C (en) | Anti P185/c-erbB-2 monoclonal anti-body hybridoma, prepn. method therefor, use as tumor detection | |
| Morrow et al. | Techniques for the production of monoclonal and polyclonal antibodies | |
| SU1555361A1 (en) | Strain of mus musculus hybrid cultivated animal cells as chorion producer of monoclonal antibodies specific to beta-chronic gonadotropin of man and beta-luteal hormmone of man swine and cow | |
| SU1555360A1 (en) | Strain of mus musculus hybrid cultivated animal cells used to obtain monoclonal antibodies to alpha-subunit of gonadotropic hormones of man | |
| US4873189A (en) | Monoclonal antibodies to bluetongue virus antigen | |
| JPH0789998A (en) | Antimicrocystin monoclonal antibody and hybridoma producing the antibody | |
| SU1742324A1 (en) | Strain of hybridous cultured cells mus musculus l., used for preparation of high-specific monoclonal antibodies to human thyreotropin | |
| US4678746A (en) | Monoclonal antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus antigen | |
| SU1604849A1 (en) | Strain of hybride cultivable mus musculus l. cells producing monoclonal antibodies to bacteria of brucella variety | |
| JPH0543358B2 (en) | ||
| RU2265051C1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus musculus l, pkkk(p) 679d - producer of monoclonal antibody with specificity to protein-polysaccharide antigen from yersinia enterocolitica o3 and o9 serovars | |
| RU2059720C1 (en) | Strain of hybrid cultured murine cells mus musculus l used for preparing monoclonal antibodies to the human thyrotropic hormone | |
| RU2360966C1 (en) | STRAIN OF HYBRID CULTIVATED ANIMAL'S CELLS Mus musculus L - PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST ALPHA2-MICROGLOBULIN OF FERTILITY (AMGF)/GLYKODELINE REACTING TO VARIOUS PROTEIN GLYCOFORMS | |
| RU2003682C1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian cells mus muscullus l - a producer of monoclonal antibodies to lambda-light chains of human immunoglobulins | |
| US7034120B2 (en) | Method and apparatus for detecting conception in animals | |
| SU1652339A1 (en) | Hybrid animal culture cell strain musculus l producing monoclonal antibodies to membrane antigen mycoplasma anginini | |
| SU1721089A1 (en) | Strain of hybrid cultured mammalian mus musculus l - a producer of monoclonal antibody to glutamate receptors of human brain | |
| RU2059721C1 (en) | Strain of hybrid cultured murine cells mus musculus l used for preparing monoclonal antibodies to the human thyrotropic hormone | |
| RU2355762C2 (en) | STRAIN OF HYBRIDE CULTURED ANIMAL CELLS Mus musculus L-PRODUCER OF MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST DIFFERENT ISOFORMS OF ALPHA 2-FERTILITY MICROGLOBULIN/GLYCODELIN | |
| WO2013099376A1 (en) | Mature ovum marker for use in in vitro fertilization, and use thereof | |
| SU1514768A1 (en) | Strain of hybrid cultivable mus musculus cells as producer of monoclonal antibody to recombinant necrosis factor of human beta-tumours | |
| SU1742326A1 (en) | Strain of hybridous cultured mammalian cells mus musculus l - a producer of monoclonal antibodies to mycobacterium bovis |