SU1718955A1 - Способ включени водорастворимого препарата в тени эритроцитов - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицине и может быть использовано дл  направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболевани х печени и желчных путей. Цель изобретени  - повышение эффективности включени  лекарственных и диагностических препаратов в эритроцитарные тениносители и устойчивости к десорбции препарата в кровеносном русле. Цель достигаетс  тем, что провод т гипоос- мотический гемолиз в дистиллированной воде при температуре 0° при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием , надосэдочную жидкость сливают , к .осадку добавл ют препарат, растворенный в охлажденной до 0°С дистиллированной воде из расчета 1:6-1:7 и инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С. Способ позвол ет повысить в 2,5-3 раза концентрацию препарата в конечном продукте , упростить процедуру включени  препаратов в эритроцитарные тени, сохранить устойчивость теней к десорбции в кровеносном русле и создать длительные концентрации препарата в печени и желчных пут х. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к области медицины и может быть использовано дл  направленного транспорта лекарств и диагностических препаратов при заболевани х печени и желчных путей.

Цель изобретени  - упрощение способа , а также увеличение содержани  препарата в тен х и их устойчивости.

Цель достигаетс  тем, что гипоосмоти- ческий гемолиз осуществл ют в дистиллированной воде при 0°С при соотношении клетки и лизирующего раствора 1:7, затем осаждают эритроцитарные тени центрифугированием , недостаточную жидкость сливают , к осадку добавл ют препарат, растворенный в охлажденной до 0°С дистиллированной воде из расчёта 1:6-1:7, и инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С.

Способ осуществл ют следующим образом .

Периферическую венозную кровь в ко- личестве.б мл помещают в пробирку с гепарином (25 ЕД/мл). После удалени  плазмы крови эритроциты дважды отмывают физиологическим раствором хлористого натри  путем центрифугировани  при 3000 об/мин в течение 5 мин при 4°С. К осадку эритроцитов добавл ют семикратный объем охлажденной до 0°С дистиллированной воды и центрифугируют при 8000 об/мин в течение 25 мин при 4°С. Насадочную жидкость, в которой содержитс  гемоглобин, отсасывают , к полученным тен м эритроцитов прилисл

па ют семикратный объем антибиотика или другого препарата, растворенного в охлажденной до 0°С дистиллированной воде. Взвесь инкубируют в течение 15-20 мин при 4°С. Затем добавл ют 1/9 объема 9%-ного хлористого натри  дл  восстановлени  целостности мембраны эритроцитов и инкубируют в течение 30 мин при 37°С.

Врем  центрифугировани  при 8000 об/мин 25 мин  вл етс  оптимальным , так как именно через этот промежуток времени тени хорошо выпадают в осадок. Об этом судили по светлой окраске надоса- дочной-жидкости.

В способе осуществл ют раздельное получение .эритроцитарных теней и разведение препарата в дистиллированной воде. Затем (после удалени  надосздочной жидкости ) выполн ют инкубацию эритроцитарных теней в растворе препарата. Это предупреждает св зывание перпэрата гемоглобином и повышает выход конечного продукта.

Разработанные дл  способа режимы инкубации и объемные соотношени  позвол ют также повысить выход конечного продукта , устойчивость эритроцитарных теней к десорбции препарата в кровеносном русле . Так, соотношение клетки и лизирующего раствора 1:6 и более, а также температура раствора ниже 0°С способствует значительному разрушению эритроцитарных мембран и потери ими транспортных свойств. Однако уменьшение соотношени  клетки и лизирующего раствора приводит к большой задержке гемоглобина в тен х, что не желательно , так как гемоглобин.св зывает препарат . Выбранное соотношение 1:7  вл етс  оптимальным и, как показывают результаты, исследований, допустимым, не приводит к значительному разрушению эритроцитарных теней. Они сохран ют транспортные свойства и устойчивость к десорбции препарата в кровеносном русле. Сопоставление эффективности различных режимов инкубации позволило установить, что его длительность не вли ет существенно на выход конечного продукта. Так, при инкубации в течение 5 мин содержание антибиотика в тен х составило 11,2 ± 0,5 мкг/мл, в течение 15 мин - 12,4 ± 0,3 мкг/мл, 30 мин - 12,4 ±0,4 мкг/мл.

При добавлении препарата в лизирую- щий раствор (согласно известному способу) выход конечного продукта был минимальным . Так, процент включени  канамицина при растворении его в лизирующем растворе составил 4,7 ±0,6, а при включении по предлагаемой методике- 12,4 ±0,3 мкг/мл, т.е. почти в 3 раза-больше. При включении

билигноста по известному способу в эритро- цитарныетени и введении последних в вену контрастировани  желчных путей не происходило . Включение билигноста (50%) в тени

по предлагаемой методике позвол ет хорошо контрастировать желчные пути. Причем метод позвол ет в 3-4 раза снизить расход дозы билигноста. Так, при традиционном внутривенном способе введени  билигноста дл  контрастировани  тени желчного пу- зыр  требуетс  ввести 20-30 мл 50%-ного билигноста, а при использовании предлагаемого способа достаточно в эритроцитар- ные тени включить 6-7 мл билигноста.

Таким образом, обнаружен эффект - контрастирование желчных путей при внутривенном введении 6-7 мл 50%-ного раствора билигноста, предварительного включенного в эритроцитарные тени. Традиционное

внутривенное введение 6-7 мл билигноста не вызывает контрастировани  желчных путей и дл  этого требуетс  не менее 20 мл 50%-ного раствора билигноста.

Дл  изучени  устойчивости эритроцитарных теней-носителей, полученных по предлагаемой методике, на возможную, десорбцию и выделение антибиотика из теней в кровеносном русле, проводили специальные исследовани  с гентамицином. Эритроцитарные тени доноров с включенным гентамицином,дважды отмывалигфизиологическим раствором хлористого натри  и затем инкубировали в аутологичной плазме при 37°С в течение 25 мин. Содержание

гентамицина в надосадочной жидкости после первого отмывани  эритроцитарных теней составило 0,4 ± 0,03%, после второго отмывани  физиологическим раствором - 0,04 ± 0,007%. В плазме крови после инкубации в ней эритроцитариых теней, содержание гентамицина равн лось 0,2 ±0,008%, т.е. было минимальным, Количество гентамицина в самих эритроцитарных тен х после их двухкратного отмывани  и инкубации

в аутологичной плазме крови составило 26,3 ± ±0,1% против 3,1 ±0,3% в зритроцитарных тен х доноров контрольной группы, где содержание препарата определ лось тотчас после одюкратного отмывани  эритроцитарных теней. Изложенное свидетельствует о достаточной устойчивости эритроцитариых теней на десорбцию и выделение гентамицина из теней в кровеносном русле.

Устойчивость эритроцитарных теней и

возможность доставки препарата в печень была изучена в эксперименте на беспородных собаках, у которых оперативным путем моделировали острый холецистит. Животных разделили на две группы: основную и

контрольную. В контрольной группе собакам вводили канамицин (30 мг/кг) традиционным внутривенным способом один раз в день. В основной группе канамицин вводили в аналогичной дозе (30 мг/кг), но предва- рительно включенный в аутологичные эритроцитарныетени, которые затем вводили внутривенно также один раз в день. Через 24, 48 и через 72 ч после последнего введени  антибиотика животных выводили из опыта, выполн ли релапаротомию, визу альный осмотр внутренних органов, а также фармакокинетические исследовани  концентрации канамицина в ткани печени и сыворотке крови общеизвестным методом диффузии в агар, в качестве тест-микроба использовали Baccillus subtilis ATCC 6633.

Фармакокинетические исследовани  вы вили значительные различи  в концентрации канамици-на в ткани печени в зависи- мости от способа введени  препарата (таблица ).

Из таблицы видно, что при направленном транспорте канамицина в эритроцитар- ныхтен х в печень вткани печени создаетс  длительна  терапевтическа  Концентраци  препарата в сравнении с традиционным внутривенным способом введени . Это указывает на эффективность предлагаемого способа, а также на возможность использо- вани  и устойчивость эритроцит рных теней . При традиционном внутривенном

способе введени  препарата он не определ етс  в ткани печени.

Claims (1)

1. Способ позвол ет повысить в 2,5-3 раза концентрацию препарата в конечном продукте (12,4 ± 0,3 против 4,7 ± 0,6 в прототипе ), упростить включение препаратов в эритроцитарные тени .(применение на всех этапах способа дистиллированной воды, вместо требующих специальных реактивов и времени дл  приготовлени , а также малодоступных дл  широкой клинической практики растворов триса и фосфатного буфера), а также сохранить устойчивость эритроци- тарных тканей в кровеносном русле и. создать длительные концентрации препарата в печени. Это доказано специальными фар- макокинетическими исследовани ми. Формула изобретени  Способ включени  водорастворимого препарата в тени эритроцитов путем гипо- осмотического шока нативных эритроцитов и инкубации их в растворе препарата, о т л ичающийс   тем, что, с целью упрощени  способа, а также увеличени  содержани  препарата в тен х и их устойчивости, гипо- осматический шок осуществл ют охлажденной до 0°С дистиллированной водой при соотношении 1:7, а дл  инкубации используют отмытые тени эритроцитов и охлажденный до 0°С водный раствор препарата, причем инкубацию провод т при 4°С не менее 15 мин.