SU1684661A1 - Способ количественного определени витамина А - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к пищевой, фармацевтической, химической и сельскохоз йственной промышленности и может быть испогьзовано дл  определени  витамина Д в различных пищевых продуктах , биологьческом материале, в масл ных концентратах, витаминных премиксах и т.д. Цель - повышение точности определени . 1з отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем , осуществл ют взаимодействие витамина с комплексообразователем, в качестве которого используют эфират трифторида бора, с конечной концентрацией 16-20%. Количество витамина А определ ют по изменению интенсивности окраски при 61 Q нм образующегос  цвег- s ного комплекса. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл. SS а

Description

Изобретение относитс  к пищевой, фармацевтической, химической и сельскохоз йственной промышленности и может быть использовано дл  определени  витамина А в различных пищевых продуктах, биологическом материале, в масл ных концентратах, витаминных премиксах и т.д., а также при контроле производства витамина А.

Целью изобретени   вл етс  повышение точности определени .

Дл  осуществлени  данного способа из отобранной пробы анализируемого материала извлекают витамин А экстракцией органическим растворителем, провод т цаетную реакцию витамина А с эфиратом трифторида бора при конечной концентрации последнего 16-20%, а количество витамина А рассчитывают по величине изменени  интенсивности окраски цветного комплекса при 61U нм. При извлечении витамина А из материалов , содержащих липиды, перед экстракцией органическим растворителем про- род т щелочное омыление.

Дл  повышени  селективности метода в качестве комплексоооразовател  используют эфират трифторида бора, который образует окрашенный комплекс только с витамином А. При этом этот ком- пле.сообразователь взаимодействует со всеми формами витамина А в отличие от других комплексооЬразователей, например , трихлорида сурьмы, который дает окраску только лишь при взаимодействии со спиртовой формой витамина А. Эфират

О

ос

Ј

о: с:

трифторида бора менее токсичен, чем трихлорид сурьмы. Окрашенный комплекс витамина А и эфирата трифторида бора образуетс  во всех непол рных органи- ческих растворител х (гексан, бензол, хлороформ, дихлорэтан и т.д.). Скорость распара комплекса дл  разных растворителей не одинакова, например, в гексане данна  реакци  протекает очень быстро, что затрудн ет анализ. Наилучшие результаты получены при использовании хлороформа.

Дл  уменьшени  ошибки измерени  пр однократном измерении оптической плот ности, св занной с распадом окрашенного комплекса, количественно определение витамина А производ т в данном гпособе по изменению интенсивности окраски цветного комплекса при 610 нм.

Способ иллюстрируетс  чертежом.

На чертеже графически отражена ки- гетика реакции распада цветнсг о комплекса после добавлени  к раствору, содержащего витамин А, эфирата трифто ч да бора в количестве 1 мл. Пока за- а цасть спектра этого комплекса в - fт ареале 630 нм- Цифра 1 соответствует величине оптической плотное- ти раствора через 30 с после добавлени  эфирата трифторида бора. Все последующие измерени  (цифры 2-9) проводились через каждые 60 с. Образовавща с  си ч,3   окраска цветного комплек- са витамина А и эфирата трифторида бора со временем постепенно ослабевает и тер ет свою интенсивность. Наибольша  скорость изменени  окраски наблюдаетс  в первую минуту течени  реакции (интервал между цифрами 2 и 1 - наибольший). В дальнейшем скорость распада комплекса постепенно замедл етс , что отражено в уменьшении интерзала между всеми последующи- ми цифрами.

Из этого следует, что проводить регистрацию изменени  скорости распада цветного комплекса следует в первую минуту, так как в этот момент измерени  будут более точными и чувствительными .

На необходимость проведени  измере |ний в первую минуту течени  реакции .указывает также и то, что по мере ее хода начинает по вл тьс  и регистрироватьс  дополнительный пик (пик Б), вызванный образованием посторонних продуктов распада комплекса, мешающих определению витамина А. По мере течени  реакции основной пик, .- где согласно предлагаемому способу необходимо проводить измерени , постепенно уменьшаетс , уменьшаетс  соответственно и разность между двум  измерени ми. Одновременно растет дополнительный пик, что вызывает завышение полученных результатов и снижение точности анализа.

Измерени  скорости распада цветного комплекса провод т в начальный момент хода реакции: согласно данному способу это делаетс  через 30 с после смешени  реагентов.

Пример 1. Определение витамина А в печени кур (вариант с омылением ) .

Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) заливают 50 мл этанола , добавл ют 1 г гранулированной гидроокиси натри , 100 мг пирогаллола и нагревают в течение 30 мин при 90°С нл вод ной бане. Затем гидролизат охлаждают , перенос т в делительную воронку , витамин А экстрагируют трижды по ЗУ мл гексана. Объединенный гекса- новый экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе, сухой остаток раствор ют в 13 мл хлороформа.

Дл  анализа берут 5 мл хлороформного раствора,добавл ют 1 мл эфирата трифторидэ бора по стенкам пробирки, смешивают и включают секундомер. Через 30 с после смешани  делают первое измерение оптической плотности раствора на длине волны 6lU нм. Затем через 1 мин после первого измерени  провод т второе измерение. По разнице между вторым и первым измерени ми рассчитывают изменение оптической плотности раствора и по величине этого изменени , использу  калибровочный график, рассчитывают содержание вита- i-ина А в анализируемом образце,

Согласно данному примеру в печени гроводитс  измерение витамина А в ви- Ј,е его спиртовой формы - ретинола.

П р и м е р 2. Определение витамина А в печени кур (вариант без омылени ) .

Навеску гомогенизированной куриной печени (200 мг) внос т в фарфоровую ступку, насыпают туда 5 г безводного сульфата натри  и тщательно перетирают до получени  однородной массы. При этом происходит измельчение пече5165466i

ни и одновременное ее обеjпоживание,

Ю

/что необходимо дл  следующего этапа - экстракции витамина А. Затем в ступку наливают 10 мл хлороформа, хорошо перемешивают пестиком и содержимое фильтруют в пробирку через бумажный фильтр. Потом дважды по мл ополаскивают ступку хлороформом, перенос т его на тот же фильтр и содержимое пробирки довод т до 1 i мл хлороформом. Все дальнейшие процедуры выполн ют также как описано в примере 1,

Таким образом, в данном варианте определени  витамина Л исключаютс  такие длительные процедуры как омыление , отмывка экстракта и его выпаривание . Это значительно сокращает зрем  анализа и повышает его точность счет сокращени  р да операций.

Согласно данному примеру в печени определ етс  витамин А в нативной форме , в которой он присутствует в ткан х , а именно в виде ретинилпальмита- та, т.е.

рат трифторида бора позвол ет определ ть все формы витамина А.

П р и м е р 3. Определение витамина А в масл ном концентрате,

Все производимые масл ные препара-1 30 ты как дл  витаминизации продуктов питани  человека, так и дл  обогащени  комбикормов животных представл ют собой эфирные формы витамина А в масле - например, ретинилпальмитат или рети- нилацетат.

1 мл масл ного препарата витамина А (активностью например, 100 тыс. интернациональных единиц в мл) раствор ют в 10 мл гексана или хлороформа в 40 мерной колбе. Затем 1 мл полученного раствора перенос т в другую мерную колбу на 100 мл с хлороформом и хорошо перемешивают. Таким образом, первоначальный масл ный препарат разбавили в 10000 раз. 1 мл разбавленного таким способом раствора витамина А внос т в химическую пробирку,доливают h мл хлороформа и перемешивают. Затем в пробирку приливают 1 мл эфира трифторида бора и все измерени  провод т также как описано в примере 1.

При м е р 4. Определение оптимальных количеств эфирата трифтррида бора дл  проведени  реакции с витамином Д.

В таЬл. 1 представлены данные по определению витамина А при добавлении к анализируемому образцу различных ч ,мчеств зфир-ттл трсфторид-ч bo- pa. Дл  испытаний был вз т стандартный раствор аитамина А с известной концентрацией и в каждый образец вносили по „ мкг ретинола. И, данных таблицы следует, что при добавлении к хлороформеиному раствору 0,1-0,7 мл реагента анализ искомого компонента е представл етс  возможным, гак как з этих соотношени х получаетс  мутный раствор, который невозможно фс- тометрировать. Раствор становитс  прозрачным только при добавлении

 . .5 лее J,8 мп эОирата трифторида бора (например, J,o мл цвегореагента и k ,2 мл хлороформ. ,того раствора витамина А; 1,0 л цветорезгенто и Ч мл раствора и так далее).

20

Увеличение концентрации эфирата грифторида бора более 1&-21К (мто соответс гвуо г доЬлплению 0,8-1,0 tsi реагента к хлороформенному растэору

эфирной форме, поскольку зфи-25 общим объемом j мл) нсцелесоооразно,

так ка, при этом точность анализа не повышаетс . Поэтому с целью экономии цветореагента был оь бран интервал 0,8-1,0 мл, т.е. 16-20%.

При мер 5. U табл. 2 и 3 представлены результаты сравнительных испытаний данного способа, Который проводилс  так как описано в примере 3 и прототипа. Из таблицы видно, что 35 предлагаемый способ определени  витамина А превосходит известный как по точности определений, так и по селективности определений. Кроме того, способ значительно упрощаетс , так как нет необходимости проводить щелочное опыление масл ного препарата витамина А, тогда как в известном способе эта процедура об зательна.

45 Использование в качестве цветореагента эфирата трифторида бора позвол ет определ ть витамин А в любой его форме (спиртовой, эфирной и т.д.), значительно сокращает врем  анализа

50 материалов, не содержащих липиды,, так как позвол ет обойтись без целого р да таких операций как омыление, отмывка экстракта и выпаривание растворител . Данный способ позвол ет прово55 дить опредение витамина А во многокомпонентных смес х, содержащих самые различные вещества, так как эмират трифторида бора  вл етс  специфичес- ким реактивом по отношению к ретинолу.

ных ч ,мчеств зфир-ттл трсфторид-ч bo- pa. Дл  испытаний был вз т стандартный раствор аитамина А с известной концентрацией и в каждый образец вносили по „ мкг ретинола. И, данных таблицы следует, что при добавлении к хлороформеиному раствору 0,1-0,7 мл реагента анализ искомого компонента е представл етс  возможным, гак как з этих соотношени х получаетс  мутный раствор, который невозможно фс- тометрировать. Раствор становитс  прозрачным только при добавлении

 . .лее J,8 мп эОирата трифторида бора (например, J,o мл цвегореагента и k ,2 мл хлороформ. ,того раствора витамина А; 1,0 л цветорезгенто и Ч мл раствора и так далее).

Использование менее токсичного ком- плексообразовател  улучшает услови  работы аналитиков.

Claims (3)

1. Способ количественного определени  витамина А, включающий отбор-пробы анализируемого материала, извлечение из него витамина А, взаимодействие последнего с комплексообразовате- лем и измерение значени  оптической плотности образующегос  окрашенного

соединени , соответствующее количест- ,ву витамина А, отличающий- с   тем, что, с целью повышени  точ

ности, .извлечение витамина А осуществл ют путем экстракции органическим растворителем, в качестве комплексо- образовател  используют раствор эфира- та трифторида бора с конической концентрацией 16-20%, а измерение значени  оптической плотности осуществл ют путем фиксации изменени  интенсивности окраски при 610 им.

2. Способ по п„ 1, отличающийс  тем, что при извлечении витамина А из материалов, содержащих ли- пиды, перед экстракцией органическим растворителем провод т щелочное опыление .

Таблица 1

Раствор мутный

Определение витамина А согласно известному способу в данном случае дает завышенный результат, так как треххлориста  сурьма не  вл етс  специфичным реактивом дл  витамина А и дает окрашивание с другими веществами, присутствующими в растноре.

4,92 4,95 4,95 4,9 ,94

98,4 99,1 99,1 98,9 99,2

Таблица 2

Табл1ица3

Редактор

3. Труо ченко

Составитель И. Пинуев

Техред Л.Сердюкова Корректор А. Обручар

Заказ 3502

Тираж

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35,1 Раушска  наб., д. V5

- - --- - - - - - - - - --------- - - - -. - -. - --. - --..«-.-. - -- - , -eeee. - - .в - - .-, - в - -,,

Производственно-издательский комбинат Патент, г.Ужгород, ул. Гагарина,101

Подписное