SU1671309A1 - Способ идентификации бактерий BRUceLLa SUIS 4 биовара - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологии, в частности к внутривидовой дифференциации бактерий рода BRUCELLA. Цель изобретени  - упрощение идентификации бактерий. Поставленна  цель достигаетс  тем, что 1, 2, 5 биовары BR. SUIS дифференцируют от 4 биовара по отсутствию у него ферментативной активности в отношении аденина. При этом перед определением ферментативной активности реакционную смесь обрабатывают реактивом Несслера.

Description

Изобретение относитс  к микробиологии , в частности к внутривидовой дифференциации бактерий рода ВгисеПа.

Цель изобретени  - упрощение идентификации ,

Сущность изобретени  заключаетс  в том, что 1,2 и 5 биовар бактерий роды Вг. suls дифференцируют от 4 биовара по отсутствию у него ферментативной активности в отношении аденина.

П р и м е р 1. Готов т взвесь двухсуточной агаровой культуры испытуемого штамма Br. suis 1330 в 4 мл фосфатного буфера. рН 7,0 до концентрации З Ю микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мутности дл  бруцелл ГИСК им. Л.А.Тарасеви- ча. Взвесь инкубируют в течение 1 ч при 37°С. после чего ее дел т на две равные части. В опытную часть пробы добавл ют 1 мл 0,1%-ного раствора аденина, в контрольную 1 мл дистиллированной воды. После икубировани  проб при 37°С в течение

24 ч в каждую из них внос т по 0,2 мл реак шва Несслера и учитывают результаты по изменению окраски содержимого пробирок При этом  рко-оранжевое окрашивание опытной пробы свидетельствует о наличии адениндезаминазной активности у штамма Br. suis 1330 и принадлежности его к 1 био- аару Br. suls. Контрольна  проба окрашиваетс  о желтовато-зеленый цвет.

П р и м е р 2. Взвесь двухсуточной агаровой культуры штамма Br. suis Fhomsen с концентрацией 3-10 м к./мл в 4 мл фосфатного буфера, рН 7,0 выдерживают при 37°С в течение 1 ч. После инкубации сзаесь дел т на две равные части - опытную и контрольную. В опытную часть пробы добавл ют 1 мл 0,1%-ного раствора аденина в контрольную 1 мл дистиллированной воды И помещают при 37°С на 24 ч. Учет провод т после добавлени  в каждую из проб по 0,2 мл реактива Несслера. Контрольна  проба приобретает желтовато-зеленый цвет, что свидетельствует об отсутствии аденин (Л

С

о V4

GJ О Ю

дезаминазы. Опытна  проба окрашиваетс  в оранжевый цвет, что  вл етс  признаком наличи  ферментативной активности в отношении  денина и позвол ет отнести культуру Вг. suls Thomsen к 2 биовару вида Br. suls.

П р и м е р 3. Готов т взвесь штамма Вг. suls 513 с концентрацией 3-109 м.к./мл в 4 мл фосфатного буфера, рН 7,0. После инкубации взвеси при 37°С в течение 1 ч ее дел т на две равные части. В опытную часть добавл ют 1 мл 0,1-ного раствора аденина. в контрольную 1 мл реактива Несслера и выдерживают при 37°С в течение 24 ч, после чего в обе пробы внос т по 0,2 мл реактива Несслера и провод т учет результатов. Из- менение цвета контрольной пробы не наблюдаетс . Опытна  проба окрашиваетс  в интенсивно оранжевый цвет, что говорит о принадлежности штамма к биовару 5.

П р и м е р 4. Двухсуточную агаровую культуру штамма Br. suis 40 суспендируют е 4 мл фосфатного буфера, рН 7,0 до концентрации З Ю9 м.к./мл и инкубируют 1 ч при 37°С. Затем взвесь дел т на две равные части - опытную и контрольную. В первую из них добавл ют 1 мл 0,1-ного раствора аденина, во вторую 1 мл дистиллированной воды. После выдерживани  проб при 37°С в течение 24 ч в каждую из них внос т по 0,2 мл реактива Несслера и наблюдают изменение окраски содержимого пробирок. Как контрольна , так и опытна  пробы остаютс  бесцветными. Это свидетельствует об

отсутствии у штамма Br. suls 40 аденинде- заминазной активности и принадлежности его к биовару 4.

Таким образом, предлагаемый способ

дифференциации биоваров бруцелл вида Br. suis прост в исполнении, не требует специальных приборов, содержит минималь- . ное количество реактивов. Способ основан на качественном определении наличи  аммиака ,. образующегос  при дезаминирова- нии бруцеллами аденина,  вл етс  высокочувствительным и позвол ет получить надежные и четкие результаты, регистрируемые визуально (цветна  реакци ).

Способ не требует значительного времени дл  исследовани  и позвол ет изучить одновременно несколько культур.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ идентификации бактерий Brucella suls 4 биовара, включающий получение суспензии исследуемого штамма, внесение субстрата, определение ферментативной активности с последующей оценкой результатов, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  идентификации, в качестве субстрата используют раствор аденина , а перед определением ферментативной активности реакционную смесь обрабатывают реактивом Несслера, а о принадлежности исследуемого штамма к 4 биовару суд т по отсутствию окрашивани .