SU1630830A1 - Способ получени иммуностимул тора - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к медицинской и микробиологической промышленности и касаетс  способа получени  иммуностимул тора пролонгированного действи  на основе пептидгликана, выдел емого из клеточных стенок бактерий. Цель изобретени  - повышение удельной активности и увеличение продолжительности действи . Дл  этого выдел ют пептидгликан Lactobacillus bulgaricus , подвергают его ультрафильтрации на мембранах с минимально удерживаемой мол. м. 5000-10000 и отработке водным раствором сополимера М-винилпирролидона с акролеином при массовом соотношении пептидгликан - полимер 1:(1-3) с последующим сублимированием. Ј

Description

Изобретение относитс  к медицинской и микробиологической промышленности и касаетс  способа получени  иммуностимул тора пролонгированного действи  на основе пептидгликана, выдел емого из клеточных стенок бактерий.

Целью изобретени   вл етс  повышение удельной активности и увеличение продолжительности действи .

Пример 1. Получение модифицированного иммуностимул тора.

В качестве исходного сополимера используют совиаль - сополимер винилпирроли- дона с диэтилацеталем акролеина, который превращают в сополимер со свободными альдегидными группами следующим образом . Раствор 1,8 г совиал  в 80 мл 0.01М сол ной кислоты в течение 2 ч нагревают на кип щей вод ной бане. Полученный раствор охлаждают и нейтрализуют 4 М едким

натром до рН 7,5-8,5, после чего к нему добавл ют 0,1 М боратный буфер с рН 8,5- 9,5 до объема 180 мл. К 7 мл полученного раствора (что соответствует 70 мл исходного сополимера) добавл ют 40 мг лиофильно высушенного препарата пептидгликана. Раствор выдерживают в течение 2-4 ч при комнатной температуре, после чего добавл ют 10 мг боргидрида натри  и через 1 час концентрируют раствор до объема 3 мм, промывают двукратно 10 мл воды. Раствор лиофильно высушивают и определ ют содержание пептидгликана в сухом препарате по аминокислотному анализу.

Примеры 2-4. Следующие образцы модифицированного иммуностимул тора получают аналогично примеру 1 при измененных соотношени х исходных реагентов и различных способах нейтрализации альдегидных групп, как это показано в табл. 1.

оэ со

о оо со

Пример 5. Получение модифицированного стимул тора с пониженным содержанием белка.

Препарат пептидгликана раствор ют в воде до концентрации 2,3 мг/мл (оптическа  плотность при 280 нм 1,2) и фильтруют раствор через мембрану РМ-10 с минимально удерживаемой мол. мае. 10000. Оптическа  плотность фильтрата, содержащего пептид- гликан, 0,05, т. е. практически весь белок остаетс  в концентрате над мембраной.

К 20 мл полученного фильтрата добавл ют 30 мл раствора гидролизованного сополимера (концентраци  3 мг/мл) и выдерживают 2 ч при комнатной температуре. Затем добавл ют 20 мг сол нокислого гид- роксиламина и через 1 ч концентрируют раствор с использованием мембраны РМ-10, концентрат подвергают лиофилизации.

Пример 6. Определение иммуностимулирующей активности образцов.

Определение провод т на мышах-гибридах Fi (CBAxC57/BL). Образцы препаратов ввод т однократно внутривенно в дозах 5,0 и 0,5 мг на 1 кг веса животного в 0,5 мл стерильного физраствора. Животным контрольных групп ввод т эквивалентное количество растворител . Число антителообразующих клеток селезенки (АОК) оценивают методом локального гемолиза на п тые сутки после иммунизации мышей эритроцитами барана в дозе 10 клеток на мышь. Достоверность различий оценивают по критерию / Фишера- ( i ыодента.

Результаты исследовани  приведены в iao.1. 2.

Из данных, представленных в табл. 2, видно, что при использовании иммуностимул тора , полученного по предлагаемому способу, дл  достижени  эффекта, получаемого при использовании известного способа, требуютс  меньшие дозы (в 10 раз).

Пример 7. Оценка иммуностимулирующей активности по индукции интерлейкина-2.

0

0

5

0

Адъювантное действие известных иммуностимул торов св зано с их способностью вызывать индукцию образовани  интерлей- кина-1 клетками моноцитарного р да и ин. терлейкина-2 (ИЛ-2) Т-клетками. Поэтому в качестве тест-системы дл  сравнительного изучени  иммуностимулирующей активности препарата, полученного по предлагаемому способу, используют также анализ уровней ИЛ-2 после введени  препарата животным. Препараты ввод т животным внутрибрю- шинно в дозе 5 мг/кг. Через 1, 3, 5 и 10 сут клетки селезенок мышей эксплантируют «ин витро и исследуют продукцию ИЛ-2 в ответ на конканавалин А (КонА) (1 мкг/мл).

Результаты исследований приведены в табл. 3.

Из данных, приведенных в табл. 3, видно, что введение препарата вызывает гиперпро- дукцир ИЛ-2 селезеночными клетками мыши . При этом ИЛ-2 - индуцирующее действие пептидгликана по известному способу про вл етс  через 5 сут, но практически прекращаетс  через 10 сут, в то врем  как введение препарата, полученного по предлагаемому способу, приводит к сохранению эффекта в течение 10 сут, т. е. к пролонгированному действию.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  иммуностимул тора, включающий выделение пептидгликана Lac- tobacillus bulgaricus LB-51 с последующим сублимированием, отличающийс  тем, что, с целью повышени  удельной активности и увеличени  продолжительности действи , перед сублимированием пептидгликан подвергают ультрафильтрации на мембранах с минимально удерживаемой мол. м. 5000- 10000 j и обработке водным раствором сополимера N-винилпирролидона с акролеином при массовом соотношении пептидгликан - полимер 1:1-3.

   Таблица 1

   Таблица 2

   Таблица 3