SU1578189A1

SU1578189A1 - Method of differentiation of lysogenic strains of cholera vibrios

Info

Publication number: SU1578189A1
Application number: SU884426571A
Authority: SU
Inventors: Татьяна Александровна Кудрякова; Людмила Дмитриевна Македонова; Людмила Романовна Черкасова
Original assignee: Ростовский-На-Дону Государственный Научно-Исследовательский Противочумный Институт
Priority date: 1988-05-18
Filing date: 1988-05-18
Publication date: 1990-07-15

Abstract

Изобретение относитс к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры. Цель изобретени - повышение точности способа. Лизогенные культуры холерных вибрионов выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20% в течение 12-48 ч, затем нанос т взвесь на газон индикаторного штамма V.ELTOR-75, засе нного в один из слоев плотной питательной среды. Учет ведут через 12-14 ч по наличию лизиса индикаторной культуры фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры определ ют лизогенный штамм холерного вибриона, продуцирующего устойчивый к мочевине фаг, а при отсутствии лизиса - лизогенный штамм, продуцирующий чувствительный к мочевине фаг.This invention relates to medical microbiology and can be used in the diagnosis of cholera. The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method. Lysogenic cultures of Vibrio cholerae are grown in a liquid nutrient medium containing urea at a concentration of 10-20% for 12-48 hours, then slurry is applied to the lawn of the indicator strain V.ELTOR-75, seeded in one of the layers of the dense nutrient medium. Accounting is carried out in 12-14 hours by the presence of lysis of the indicator culture by phage. In the presence of lysis of the indicator culture, a lysogenic strain of a cholera vibrio producing urea resistant phage is determined, and in the absence of lysis, a lysogenic strain producing urea sensitive phage is determined.

Description

Изобретение относитс к медицинской микробиологии и может быть использовано при диагностике холеры.This invention relates to medical microbiology and can be used in the diagnosis of cholera.

Цель изобретени - повышение точности способа.The purpose of the invention is to improve the accuracy of the method.

Способ осуществл етс следующим образом.The method is carried out as follows.

Лизогенные бактерии выращивают в жидкой питательной среде, содержащей мочевину в концентрации 10-20%, в течение 12-48 ч и затем нанос т взвесь на газон индикаторного штамма Vibrio eltor 75.Lysogenic bacteria are grown in a liquid nutrient medium containing urea at a concentration of 10-20% for 12-48 hours and then applied to the lawn of the indicator strain Vibrio eltor 75.

Учет ведут через -12-14 ч по наличию лизиса индикаторного штамма фагом. При наличии лизиса индикаторной культуры дифференцируют I тип лизогенных штаммов (продуцирующих фаг, устойчивый к мочевине). Отсутствие лизиса свидетельствует о принадлежности штаммов ко II типу (продуцирующих фаг, чувствительный к мочевине).Accounting is carried out through -12-14 hours by the presence of lysis of the indicator strain by phage. In the presence of lysis of the indicator culture differentiate type I lysogenic strains (producing phage, resistant to urea). The absence of lysis indicates that the strains belong to type II (producing phage sensitive to urea).

Способ иллюстрируетс следующими примерами.The method is illustrated by the following examples.

Пример 1. Дл приготовлени раствора мочевины берут навеску 10 г, внос т в 100 мл бульона Мартена (рН 7,6-7,8). Среду стерилизуют кип чением в течение 30 мин и разливают по 2 мл в пробирки. Бульон с мочевиной совершенно прозрачен.Example 1. To prepare a solution of urea, a weighed portion of 10 g is taken and added to 100 ml of Martin broth (pH 7.6-7.8). The medium is sterilized by boiling for 30 minutes and dispensed in 2 ml tubes. Urea broth is completely transparent.

Отсеивают в две пробирки с 2 мл бульона, содержащего 10% мочевины, по одной петле суточных агаровых культур лизогенных вибрионов эльтор 377 и 1540. Выращивают в течениеSift out in two tubes with 2 ml of broth containing 10% urea, one loop daily agar cultures of lysogenic vibrios Eltor 377 and 1540. Grown for

сл Jsl j

0000

оо соoo with

12 при 37 С. Готов т плотную питательную среду, содержащую индикаторную культуру вибрионов эльтор 75, дл чего 0,2-0,3 мл 4-5-часовой бульонной культуры внос т в 4 мл 0,7%-ного растопленного агара Мартена и высевают на поверхность агаровой пластинки в чашки Петри двухслойным методом. Йа подсушенный газон нанос т на рассто нии 5 см друг от друга по одной капле выросших бульонных культур и став т посевы в термостат при 37°С на 1 сут. Учитывают результаты. вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (I тип), штамм 1540 - не Дает лизиса индикаторной культуры (II тип).12 at 37 C. Prepare a dense nutrient medium containing the indicator culture of vibrio Eltor 75, for which 0.2-0.3 ml of a 4-5 hour broth culture is added to 4 ml of 0.7% melted marten agar and seeded on the surface of the agar plate in Petri dishes by the two-layer method. A dried lawn was applied at a distance of 5 cm from each other one drop of grown broth cultures and placed in a thermostat at 37 ° C for 1 day. Take into account the results. Vibrio Eltor 377 form a zone of phagolysis (type I), strain 1540 - does not give lysis of the indicator culture (type II).

Пример 2. Отсевают в пробир- /ку с 22 мл бульона, содержащего 15%- Ж Чевины, одну петлю суточной агаровой культуры классического холерного вибриона 5281. Посев и учет провод т так же, как в примере 1. Вре- м контакта с мочевиной 24 ч. Штамм вызывает лизис индикаторной культуры (I тип) .Example 2. Sown in a test tube with 22 ml of broth containing 15% Chevina's W, one loop of the daily agar culture of classical cholera vibrio 5281. Sowing and counting is carried out as in Example 1. The time of contact with urea 24 h. The strain causes lysis of the indicator culture (type I).

Пример 3. Отсевают в пробирку с 2 мл бульона, содержащего 20% мочевины, штамм V.eltor 377,, Врем контакта с мочевиной 48 ч. Посев и учет провод т, как в примере 1.Example 3. Screened into a test tube with 2 ml of broth containing 20% urea, strain V.eltor 377 ,, Contact time with urea 48 hours. Sowing and counting are carried out as in Example 1.

Штаммы вибрионов эльтор 377 образуют зону фаголизиса (I тип).Vibrio strains Eltor 377 form a zone of phagolysis (type I).

Использование способа позвол ет повысить точность дифференциации за счет вы влени различий внутри лизо- генных штаммов по свойствам продуцируемых фагов - чувствительных (II тип) и устойчивых (I тип) к мочевине.The use of the method allows to increase the accuracy of differentiation due to the identification of differences within the lysogenic strains on the properties of the phages produced - sensitive (type II) and resistant (type I) to urea.

Claims

Invention Formula

The method of differentiation of lysogenic strains of Vibrio cholerae by growing the studied culture in a liquid nutrient medium followed by replanting the grown culture on a dense two-layer nutrient medium, one layer of which is planted with indicator culture, incubating the crops and taking into account the results of the lysis of the indicator culture, characterized in that , in order to improve the accuracy of the method, growing in liquid nutrient medium is carried out for 12-48 h in the presence of tO-20% urea and in the presence of lysis of the indicator culture The tours of the studied culture are classified as lysogenic, producing urea-resistant phage, and in the absence of lysis, the culture refers to lysogenic, producing sensitive to urea phage,

Compiled by A.Zavadska Editor M.Nedoluzhenko Tehred M.Hodanich Corrector S.Cherni

Order 1891

Circulation 497

VNIIPI State Committee for Inventions and Discoveries at the State Committee on Science and Technology of the USSR 113035, Moscow, Zh-35, Raushsk nab. 4/5

Subscription