SU1544800A1

SU1544800A1 - Способ получени сыворотки крови животных дл культивировани клеток

Info

Publication number: SU1544800A1
Application number: SU884409705A
Authority: SU
Inventors: Саубан Хаертдинович Хаертынов; Камил Саубанович Хаертынов; Лев Петрович Дьяконов
Original assignee: Научно-исследовательский ветеринарный институт, г.Казань
Priority date: 1988-02-22
Filing date: 1988-02-22
Publication date: 1990-02-23

Abstract

Изобретение относитс к области ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-исследовательских и производственных лаборатори х при культивировании клеток животных и вирусов. Цель изобретени - снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности клеток к вирусам. Сущность изобретени заключаетс в удалении взвешенных форменных элементов крови путем первичного расслоени препарата крови животного при 6-8°С с последующей фильтрацией через пластины с размерами пор 0,85-0,95 мкм и вторичного расслоени полученной сыворотки посредством замораживани ее при минус 30-40°С и размораживани при 40-45°С. Отдел ют верхний слой сыворотки и стерилизуют пропусканием его через фильтр с размерами пор 0,22 мк при комнатной температуре. Применение данной сыворотки повышает эффективность культивировани клеток и их чувствительность к вирусам, т.к. она содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов. 2 табл.

Description

Изобретение относитс к ветеринарной микробиологии и может быть использовано в научно-мсс тедовательс- ких и производственных лаборатори х при культивировании клеток животных.

Цель изобретени - снижение токсичности целевого продукта и повышение чувствительности культивируемых клеток к вирусам.

Сущность способа сводитс к тому , что отделение сыворотки от форменных элементов крови производ т при 6-8° Чатем холодную сыворотку

без предварительного подогрева дл удалени взвешенных форменных элементов и выпавших криоглобулинов подвергают Фильтрации через пластины с раз- дерами пор 0,85-0,95 мкм. В пойледую- щем,1 с целью расслоени на фракции, полученную сыворотку в прозрачном цилиндрической формы сосуде замораживают при минус 30-40°С с последующим размораживанием при 40-45 С. Объем сосуда зависит от потребности в качественной сыворотке,

В результате замораживани и оттаивани сыворотка расслаиваетс . При

СП

Сь

оо

этом гемоглобин и другие пигменты, а также белковые фракции с высокой молекул рной массой, т кио как гамма-гло- бу шны, располагаютс в нижнем, прилегающем ко дну сосуда, слое, что позвол ет отделить их от верхних слоев . Отделение нижнего сло производ т путем сливани в случае использовани дл замораживани сыворотки сосуда Типа делительной воронки. Отделенный нижний слой, составл ющий от общей массы сыворотки 5-10%, после определенной обработки может быть применен при культивировании клеток не дл вирусологических исследований или испол зован в качестве концентрированного препарата гамма-глобулинов. Оставшиес верхние слои перемешивают и после стерилизующей фильтрации используют по назначению,

П р и м Р р., Кровь берут при помогай игпы нпи полого ножа из вены или сердца, использу закрытую систему,

Образующийс при ттом нижний темный слой, содержании различные пигменты и гамма-глобулины, удал ют. Выше-нежащие слои после перемешивани подвергают стерилизующей фильтрации с использованием пластин с размером пор 0/22 мкм.

Полученна сыворотка отличаетс от известной по фитико-химическим показател м , меньшей токсичностью дл клеток и лучшей чувствительностью к вирусам клеток, культивированных в среде с данной сывороткой.

Сравнительные данные по ростовым качествам сывороток, крови приведены в т бл.1.

Использование способа позвол ет без применени химических препаратрв получать сыворотку крови животных ;п культивировани клеток с улучшенными качествами, близкой по свойства к дефицитной и дорогосто щей эмбриональной сыворотке. Применение данной

исключающую контакт с внешним инфици-. 25 сыворотки повышает эффективность вирурованным воздухом. Объем сосуда дл вз ти крови и ее количество определ ютс потребностью в сыворотке. Отделение сыворотки методом отсто производ т при 7°С. Отсто вшуюс сыворот- ку собирают по закрытой системе в сосуд-сборник под отрицательным давлением (0,2 атм). Сбор сыворотки производ т специальной стекл нной трубкой диаметром 10 мм, изогнутой на конце под углом 90° , открыты конец прикрыт стекл нной решетчатой пластиной с размером отверстий 0,5-1,0 мм. Благодар зтому засос сыворотки в трубку происходит сверху, а не снизу со стороны сгустка. Такое расположение засасывающего отверсти предотвращает поступление мелких сгустков и осевших

Способ получени сыворотки крови. животных дл культивировани клеток, включающий вз тие крови, отделение сыворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, отличающийс тем, что, с целью снижени токсичности целевого продукта и повы11

JO ,-.

на поверхности сгустка форменных

элементов в трубку дл отсоса сыворот- шени чувствительности клеток к вируки ,сам, отделение сыворотки провод т при

Собранную сыворотку без подогрева, с целью очистки от взвешенных форменных элементов, фильтруют через пластины с размером нор 0,85-0,95 мкм. После т тог о сыворотку подвергают расслоению путем замораживани при -35°С с последующим оттаиванием при 4/ °(.

50

6-80(s затем пропускают ее через фильтры с р-азмером пор 0,85-0,95 мкм, расслаивают посредством замораживани при минус и оттаивани при 40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийс после расслоени верхний слон сыворотки

5

0

Claims

солпгических исследований, н том числе чувствительность клеток к вирусам и ускачет их количественное накопление и клетках за счет того, что сыворотка, полученна по предложенному способу, содержит меньше общего белка, альбуминов, гамма-глобулинов. Чувствительность клеток к вирусам представлена в табл.
2. Формула изобретени

Способ получени сыворотки крови. животных дл культивировани клеток, включающий вз тие крови, отделение сыворотки и стерилизацию при комнатной температуре через фильтры с размером пор 0,22 мкм, отличающийс тем, что, с целью снижени токсичности целевого продукта и повы11

JO ,-.

сам, отделение сыворотки провод т при

6-80(s затем пропускают ее через фильтры с р-азмером пор 0,85-0,95 мкм, расслаивают посредством замораживани при минус и оттаивани при 40-45 С и стерилизации подвергают образовавшийс после расслоени верхний слон сыворотки

5448006

Таблица 1

Индекс пролиферации изучаемых сывороток

Т Конт- И вест- Предло- Нижний

роль- нал женна слой на

2 1,5 2 Нет роста 4 2,5 3,75 1,5

-

чание, контрольна сыноротка - .

сьгноротка хорошего качества;

опытна сыворотка - сыворотка , обладающа токсичностью .

Таблица2

Чувствительность клеКлеткиток к вирусам в лг

ТЦДгр/мл сыворотки

Известный Предложен- способный способ

ита роота ПЭК5,,2 6,46+0,1 111ПС6,0+0,15 7,2±0,2

ечание: в опытах дл культивировани клеток использовалс 0,5%-ный раствор ГЛА с сывороткой 10%-ной концентрации