SU150808A1

SU150808A1 - Способ определени активности цитолитических ферментов

Info

Publication number: SU150808A1
Application number: SU755319A
Authority: SU
Inventors: Л.С. Салманова
Original assignee: Л.С. Салманова
Priority date: 1961-12-12
Filing date: 1961-12-12
Publication date: 1962-11-30

Description

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ЦИТОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

За влено 12 декабр 1961 г. за № 755319/28-13

в Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР Опубликовано в «Бюллетене изобретений № 20 за 1962 г.

Известно, что цитолитические ферменты содержатс в прорастающих зернах, в значительных количествах продуцируютс различными грибными культурами и представл ют собой комплекс ферментов. Определение активности цитолитических ферментов затрудн етс отсутствием субстрата, по разрушению которого можно было бы судить об iiKTHBHOCTH основного компонента комплекса ферментов - цитазы.

Предлагаетс способ, позвол ющий объективно определ ть активность цитолитических ферментов, что дает возможность уточнить приемы технологии при производстве спирта, особенно при переработке несоложенного сырь .

Особенность способа состоит в том, что за единицу активности цитазы принимают количество грибной культуры или ферментного препарата , или солода, которое в течение 2 час при температуре 40° образует из соответствующего количества субстрата 10 мг ксилозы или глюкозы. За единицу активности гемицеллюлозы принимают количество -грибной культурь или ферментного препарата, или солода, которое в течение 2 час при температуре 40° образует из пентозанов соответствующего количества субстрата 10 мг ксилозы или глюкозы.

Способ может быт осуществлен следующим путем.

Обща активность цитазы. В 10 жг субстрата ( чмен ) внос т 2 мл грибной выт жки (1:2) 7Q мл дистиллированной воды. Дл контрол на такое же количество субстрата внос т 2 л инактивированной выт жки . Определение провод т в стаканах заторного аппарата при работе мещалок в течение 2 час при температуре 40°. По окончании цитолиза содержимое стаканов довод т до 200 г, отфильтровывают и

№ 150808

в фильтрах определ ют редуцирующие вещества по Бертрану. Разница в содержании редуцирующих веществ между опытом и контролем соответствует количеству редуцирующих веществ, которое образуетс из клеточных стенок чмен под действием цитолитических ферментов,

Активность гемицеллюлозы. В коническую колбу емкостью 100 мл. внос т 0,7 г субстрата ( чмен ), 10 мл фосфатно-цитратпого буфера рН 4,6 и 10 жл дистиллированной воды. Смесь выдерживают на вод ной бане при температуре 45° в течение 15 мин. Затем в смесь внос т выт жку из грибпой культуры, полученную настаиванием ее с 2 ч. дистиллированной воды в течение 5 час при температуре 20°, довод т объем реакционной смеси до 25 мл, колбу закрывают резиновой пробкой и выдерживают в течение 2 час при температуре 40°. По окончании цитолиза действие фермента прекращают 20-минутным кип чением на вод ной бане. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр и в фильтрате определ ют количество редуцирующих веществ по Бертра пу.

Так как сам субстрат не содержит редуцирующих веществ, а гемицеллюлозы с растворами Фелинга при определении редуцирующих веществ по Бертрану дают гели, затрудн ющие этоопределение, то контроль с инактивированной грибной выт жкой не ставитс , а из общего количества редуцирующих веществ, определенных в опыте, вычитаютс редуцирующие вещества, содержащиес в грибпой выт жке.

Активность цитолитических ферментов выражаетс в единицах. За единицу цитазы гемицеллюлозы принимают то количество грибной культуры или ферментного препарата, или солода, которое в течение 2 час при температуре 40° образует в первом случае (активность цитазы ) из субстрата, а во втором случае (активность гемицеллюлозы) из пентозанов субстрата 10 мг ксилозы (или глюкозы).

Пример расчета активности гемицеллюлозы. В 0,7 г субстрата внесено 0,25 мл грибной выт жки, 10 мл буфера и 14,75 мл дистиллированной воды.

При определении редуцирующих веществ в реакционной смеси после цитолиза на 10 мл ее фильтрата затрачено 4,3 мл КМпО4 (Т 10,14), что соответствует 55,62 мг ксилозы во всей реакционной массе.

Определив, что в 0,25 жл грибной выт жки, вз той дл анализа,, содержитс 2,0 мг ксилозы, наход т фактическое количество редуцирующих веществ, образующихс из субстрата под действием гемицеллюлозы: 55,62-2,0 53,62 мл ксилозы.

Так как 0,25 мл грибной выт жки (1:2) соответствует 0,125 г грибной культуры, то наход т, что под действием 1 г культуры из субстрата образуетс :

0,125 грибпой культуры - 53,62 мг ксилозы

1 г грибной культуры - X

X 428,9 мг ксилозы, что в пересчете от пентозанов гемицеллюлознога субстрата составл ет 1082,5 мг ксилозы, а активность гемицеллюлозы данной грибной культуры равна 108,25 единицам.

Предмет изобретени

Claims

1. Способ определени активности цитолитических ферментов, отличающийс тем, что, с целью объективного определени активности цитолитических ферментов, за единицу активности цитазы прини-мают количество грибной культуры или ферментного препарата, или солода, которое в течение 2 час при температуре 40° образует из соответствующего количества субстрата 10 мг ксилозы или глюкозы.

2. Способ по п. 1, отличающийс тем, что за единицу активности гемицеллюлозы принимают количество грибной культуры или ферментного препарата, или солода, которое в течение 2 час при температуре 40° образует из пентозанов соответствующего количества субстратов 10 мг ксилозы или глюкозы.

№ 15080S