SU1464090A1 - Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови - Google Patents

Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови Download PDF

Info

Publication number
SU1464090A1
SU1464090A1 SU874194462A SU4194462A SU1464090A1 SU 1464090 A1 SU1464090 A1 SU 1464090A1 SU 874194462 A SU874194462 A SU 874194462A SU 4194462 A SU4194462 A SU 4194462A SU 1464090 A1 SU1464090 A1 SU 1464090A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
activity
plasma
iii
thrombin
positive negative
Prior art date
Application number
SU874194462A
Other languages
English (en)
Inventor
Сергей Иванович Белых
Original Assignee
Алтайский государственный медицинский институт им.Ленинского комсомола
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Алтайский государственный медицинский институт им.Ленинского комсомола filed Critical Алтайский государственный медицинский институт им.Ленинского комсомола
Priority to SU874194462A priority Critical patent/SU1464090A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU1464090A1 publication Critical patent/SU1464090A1/ru

Links

Landscapes

  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

Изобретение относитс  к лабораторной диагностике. Цель изобретени  - повышение точности способа в услови х гепаринотерапии. Рабочий раствор тромбина прогревают и добавл ют к нему исследуемую дефибриниро- ванную адсорбированную плазму, которую предварительно обрабатывают сульфатом бари . После инкубации смесь перенос т в пробирку с раствором фибриногена и регистрируют врем  сверты- ван-л . По калибровочной кривой наход т процентное содержание антитромбина III. 5 табл. (Л

Description

1
Изобретение относитс  к медицине, а именно к лабораторной диагностике нарушений свертываемости крови.
Цель изобретени  - повышение точ- ности способа в услови х гепарино- терагога.
Цель достигаетс  тем, что в способе определени  активности антитромбина (AT) III в плазме крови, вклю- . чающем св зывание AT III дефибрини- рованной плазмы экзогенного тромбина, где об активности AT III суд т по активности остаточного тромбина, удаление гепарина из плазмы осуществл етс  путем адсорбции сульфатом бари ,
Способ осуществл ют следующим образом .
Реактивы: 3,8%-ный раствор цитрата натри , буфер Михаэлиса, рН 7,4, рабочий раствор тромбина (Каунасское предпри тие бакпрепаратов) в буфере i
Михаэлиса, рабочий раствор фибриногена (Каунасское предпри тие бакпрепаратов ) в буфере Михаэлиса, сульфат бари .
Приготовление исследуемой плазмы. Из вены обследуемого силиконирован- ной иглой берут кровь и смешивают ее в силиконированной пробирке с 3,8%-ным раствором цитрата натри  в соотношении 9:1, затем центрифугируют 6 мин при 300 об/мин. Снимают бо- |Гатую тромбоцитами плазму и вновь центрифугируют ее в силиконированной пробирке при 1200 об/мин в течение 20 мин. В полученную бедную тромбоцитами плазму добавл ют суль- .фат бари  из расчета 900 мг/мп, затем в течение 5 мин тщательно перемешивают их стекл нной палочкой.
После этого центрифугируют при 300 об/мин 6 мин. Плазму снимают.
4аь
Ф О СО
роверки качества aAcop6LaiH прово тс  с помощью определени  протром- бинового времени по Квику, которое в хорошо адсорбированной плазме должно ,. превышать 3 мин при активности добавл емого тромбопластина (провер етс  на контрольной нормальной плазме ) 15-20 с. Адсорбированную бедную тромбоцитами плазму прогревают на10
вод ной бане при 56 С в 5 мин. Пссле тепловой дефибринации осаждают фибриноген центрифугированием (10 мин при 1200 об/мин), Надо- садочный слой снимают дл  проведени  15 исследовани .
Приготовление рабочего раствора тромбина. Развод т тромбин в небольшом количестве буфера Михаэлиса (маточный раствор). Часть маточного ра- 20 створа постепенно развод т буфером Михаэлиса, провер   его коагул цион- ную активность добавлением 0,2 мп раствора тромбина к 0,3 мп раствора фи бриногена. Свертьшание должно про- 25 исходить за 15-16 с. При избыточном разведении дл  повышени  коагул ци- онной активности добавл ют маточный раствор тромбина. Рабочий раствор тромбина готов т непосредственно пе- 30 ред исследованрЕем, так как он быстро тер ет свою активность.
Приготовление рабочего раствора фибриногена. Навеску сухого фибрино- гена раствор ют в буфере: Михаэлиса gg до концентрации 0,6% Затем по мето ду Рутберг определ ют содержание коагулирующего белка (с добавлением 15-секундного тромбина) и вновь до- бавл ют буфер.Михаэлиса, довод  кон- 40 центрацию коагулирующего белка до .0,4%,
Ход определени . В силиконирован- ную пробирку набирают 0,8 мл рабочего раствора тромбина, прогревают его 45 на вод ной бане при в течение 2 мин и добавл ют к 0,2 мл исследуемой дефибринированной адсорбированной плазмы и немедленно включа™ ют секундомер. Ровно через 3 мин н н- 50 кубации этой смеси на вод ной бане при 0,2 мл ее перенос т в пробирку с 0,3 мл рабочего раствора фибриногена, предварительно также прогретого в течение 1 мин при 37 С, 55 Немедленно включают второй секувдомер и регистрируют врем  свертьшани . По калибровочной кривой наход т процентное содержание AT-III,
Построение калибровочной кривой. Цитратнлпо плазму, полученную у 10 здоро вых людей, адсорбируют и дефиб- ринируют по указанной методике, после чего все образцы смешивают в равных объемах в одной пробирке. Эту смесь развод т буфером Михаэлиса в 2,4,8 и 16 раз, чем достигаетс  снижение концентрации AT III соответственно до 50-, 25, 12,5 и 6,25%.
По указанной методике опредаа ют активность AT III каждого разведени  в секундах (измерени  провод тс  трижды и при совпадении результатов беретс  их среднее арифметическое). На кривой разведени  по оси ординат откладываетс  дес тичный логарифм времени свертывани  в секундах, а по оси a6c jjicc - активность AT III в- процентах в соответствии с приготовленными разведени ми.
Выработка режимов адсорбции. Проводитс  исследование вли ни  концентрации сорбента на степень удалени  факторов свертывани  (по протромби- новому времени) и активность AT III (по кривой, построенной на адсорбированной плазме).
Данные приведены в табл. 1
УстаноБлено, что активность AT II стабилизируетс  при 5-I ин yтнoй адсорбции с сульфатом бари  в концентрации 400 мг/мл. Дальнейшее увапичение концентрации сорбента не вли ет на определ емую активность AT 111
Дл  исключени  возможного вли ни  факторов свертывани , удал емых сульфатом бариЯр на степень адсорбции гепарина используетс  адсорбированна  плазма, в которой: определ етс  тромбиновое , а затем после г паринизации проводитс  адсорбци .
В табл. 2 представхсена зависимост между степенью гепаринизации плазмы и концентрацией сорбента, достаточно дл  полного удалени  гепарина (при 5-минут:-1ой адсорбции),
Дл  определени  взаимодействи  гепарина и факторов свертывани  удал емых сульфатом бари S определ етс  активность AT III (по кривой, построенной на адсорбированной плазме) при разлнчшзгх степен х адсорбции в плазме с гепарином и без него (табл, 3).
Установлено (табл, 3), что концентраци  сульфата бари ,, рекомендуема  дл  адсорбции,  вл етс  достаточной
дл  удалени  факторов свертывани  и гепарина в концентрации 3 ед/мл плазмы и составл ет 900 мг/мл плазмы.
Пример 1. Больна  А., 32 года .Диагноз: сепсис, дйусторонн   септическа  пневмош  , ДВС-синдром.
В качестве базисной терапии ДВС- синдрома больной подкожно вводили гепарин в суточной дозе 20 тыс.ед.
Результаты лабораторного исследовани  системы гемостаза приведены в табл. 4.
Известным способом вы вилась ложно высока  активность AT III, что объ сн етс  вли нием гепарина.
Вьгавленное предлагаемым способом с.нижение активности AT III  вилось
показанием дл  проведени  коррекцией но-заместительной терапии свежезамо- роженной плазмой в дозе 600 мл.
Пример 2. Больна  С., 37 лет Диагноз: сепсис, ДВС-синдром.
В качестве базисной терапии ДВС- синдрома больной подкожно вводили ге парин в суточной дозе 25 тыс.-ед.
Результаты лабораторного исследовани  системы гемостаза приведены в табл. 5.
услови х гепариноте- обработку плазьты в количестве 900 мг
Таблица 1
ьна 
2275
5995
180, нет свер-100
тывани 
180, нет свер-100
тьшани 
1670
Таблица2
Концентраци  гепарина , ед/мл
Концентраци  сорбента , мг/мп
Таким образом, несмотр  на сниженне активности AT III, определ емое известным способом, данные цифры  вл ютс  завышенными, а действительное снижение активности AT III, определ емое предлагаемым способом,  вл етс  гораздо более глубоким.
Таким образом, при гепаринотера- пии известный способ дает завышение результатов, тогда как результаты, полученные с помощью предлагаемого способа, не завис т от присутстви  в плазме гепарина.

Claims (1)

  1. Формула изобретени 
    Способ определени  активности антитромбина III в плазме крови, включающий обработку дефибринированной плазмы экзогенным тромбином с последующей оценкой активности анти- ;тромбина III по активности остаточ- ного тромбина, отличающий- с   тем, что, с целью повышени  точТа блицаЗ
    Таблица4
    Тест I Нольна Контроль
    Активированное парциальное тромбопластиновое
    врем , с4048
    ЭтаноловыйПоложительныйОтрицательный
    ПротаминсульфатныйПоложительныйОтрицательный
    Количество тромбоцитов151 10 /л Активность AT III, %,по
    способу известному 140100
    предлагаемому5,5100
    Таблица5
    ТестВольна Контроль
    Активированное парциальное
    тромбопластиновое врем ,, с4955
    Этаноловый .ПоложительньйОтрицательный
    ПротаминсульфатныйПоложительныйОтрицательный Количество тромбоцитов . д .10 /
    Активность AT III, % по
    способу известному60100
    предлагаемому25100
SU874194462A 1987-02-13 1987-02-13 Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови SU1464090A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874194462A SU1464090A1 (ru) 1987-02-13 1987-02-13 Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU874194462A SU1464090A1 (ru) 1987-02-13 1987-02-13 Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU1464090A1 true SU1464090A1 (ru) 1989-03-07

Family

ID=21285524

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU874194462A SU1464090A1 (ru) 1987-02-13 1987-02-13 Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU1464090A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5320945A (en) * 1989-07-14 1994-06-14 Boehringer Mannheim Gmbh Method and reagent for the determination of antithrombin III
RU2772195C1 (ru) * 2021-10-27 2022-05-18 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр терапии и профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТПМ" Минздрава России) Способ определения функциональной активности антитромбина iii в плазме крови

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Балуда Б.П., Биркаган З.С., Гольдберг Е.Д. и др. Лабораторные- методы исследовани системы гемостаза./ Под ред. Е.Д.Гольдберга. - Томск; Томский мединститут 1980, с. 199. *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5320945A (en) * 1989-07-14 1994-06-14 Boehringer Mannheim Gmbh Method and reagent for the determination of antithrombin III
RU2772195C1 (ru) * 2021-10-27 2022-05-18 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр терапии и профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ТПМ" Минздрава России) Способ определения функциональной активности антитромбина iii в плазме крови

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Horowitz et al. Further studies on the platelet-inhibitory effect of guanidinosuccinic acid and its role in uremic bleeding
US5091304A (en) Whole blood activated partial thromboplastin time test and associated apparatus
Green Jr et al. Effect of acid and pepsin on blood coagulation and platelet aggregation: a possible contributor to prolonged gastroduodenal mucosal hemorrhage
Akizawa et al. Nafamostat mesilate: a regional anticoagulant for hemodialysis in patients at high risk for bleeding
JP2542780B2 (ja) ヘパリンの酵素による中和
US3179567A (en) Reagent and method for determining the coagulability of blood
Becker et al. Induction of acute cholecystitis by activation of factor XII.
US4871677A (en) Method of collecting and analyzing a sample of blood when monitoring heparin therapy
US4782026A (en) Collection medium for whole blood
US4067777A (en) Determination of heparin in the blood
Entes et al. Fletcher factor deficiency, source of variations of the activated partial thromboplastin time test
Peden Jr et al. Use of the plasma thrombin time to assess the adequacy of in vivo neutralization of heparin: comparative studies following operations employing extracorporeal circulation
US4795703A (en) Heparin assay
Handley et al. A circulating anticoagulant specific for factor V
SU1464090A1 (ru) Способ определени активности антитромбина Ш в плазме крови
Smith et al. The prolonged bleeding time in hemophilia A: comparison of two measuring technics and clinical associations
Hedlund et al. The effect of prophylaxis with low dose heparin on blood coagulation parameters
Ekert et al. Fibrinolysis during extracorporeal circulation: comparison of the effects of disc and membrane oxygenators
Crisnic et al. Disseminated intravascular coagulation and acute renal failure
Garvey et al. Hypobaric erythraemia: Pathology and coagulation studies
JP2954239B2 (ja) 全血用簡易血液凝固能検査用具
Sjølin The thrombin generation test in the diagnosis of classical hemophilia and Christmas disease
SU1508169A1 (ru) Способ определени активности антитромбина- @ в плазме крови
RU1777089C (ru) Способ исследовани свертывани крови
SU1193587A1 (ru) Способ определени активности антитромбина- @ в плазме крови при гепаринотерапии