SU1451162A1 - Способ определени оптимального состава среды дл культивировани подвижных микроводорослей - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологической промьшшенности и может быть использовано при выборе сред дл  культивировани  подвижных микр о- водорослей и бактерий. Целью изобретени   вл етс  повышение точности, упрощение и снижение трудоемкости оценки степени оптимальности сред по токсической реакции микроорганизмов . Способ заключаетс  в создании контакта между исходной суспензией клеток и испытываемыми средами на микроповерхности в системе из соединенных между собой в нижней части стекл нных сосудов и учете количества переместившихс  в разные среды клеток после нескольких часов экспо-; зиции. 3 табл. с W

Description

СП

1

Изобретение относитс  к микробиологической промьшшенности и может быть использовано при выборе сред дл  культивировани  подвижных микроводорослей .

Цель изобретени  - повьппение точности и упрощение способа оценки степени оптимальности состава сред по токсической реакции подвижных мик- роводорослей.

Способ позвол ет осуществл ть пр мой подсчет числа клеток и определить вес их сухой биомассы в единице объема исследуемой среды и конт- ролировать физико-химический состав этой среды не только по окончании опыта, но и в динамике, т.е. неоднократно по ходу эксперимента. Способ возможно осзтцествить двум  вариантам

При первом варианте осуществлени  способа подвижные микроводоросли выращивают до достаточной плотности (10-20-10 кл/мл) на исходной среде в культуральной камере емкостью 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с COj. После этого в суспензию водорослей через отверстие в крышке камеры вставл ютс  стекл нные

трубки типа пипеток с отт нутым кон-

чиком (площадь отберсти  кончика 0,15-0,90 мм, емкость трубки 2- 3 мл), целиком заполненные исследу- eMOJi средой и загерметизированные сверху короткой стекл нной палочкой, вставленной в отрезок резиновой трубки , надетой сверху на пипетку. Среды в трубках и в культуральной камере при этом практически не смешиваютс , если только удельный вес сред в труб ках не превьппает значительно удельного веса среды в культуральной камере . Подвижные микроводоросли из камеры переход т в .трубки с исследуемыми средами в количествах, пропор- циональных степени оптимальности данной среды дл  их жизнеде тельности . Через 1-2 сут стекл нные трубки вынимают из камеры с культурой и со держимое их анализируют обычными методами (плотность суспензии по числу клеток определ ют подсчетом в камере Гор ева, обща  концентраци  солей в среде высушиванием 1 мл и взвешиванием сухого остатка, содержание отдельных элементов в среде методом плазменной фотометрии и ТоП,). При втором варианте осуществлени  способа .подвижные микроводоросли вы1622

ращивают в любом культуральном сосуде до той же примерно плотности, что и при первом варианте осуществлени  способа.

После этого 50 мл суспензии микро водорослей заливают в одно из колен закрепленной на штативе U-образной системы, состо щее из двух загнутых снизу под пр мым углом трубок диаметром 20 мл, соединенных в нижней своей суженной части прозрачной эластичной трубкой пережатой посередине зажимом. Во второе колено системы заливают исследуемую среду любого состава и любого удельного.веса Остатки воздуха из горизонтального участка системы удал ют пальпированием эластичной трубки. После этого зажим в горизонтальной части системы осторожно удал ют и обе среды соедин ютс  одна с другой таким образом, что между ними образуетс  поверхность раздела фаз достаточно большой площади (10-12 ммМ. Систему можно усложнить, составив ее из трех (Ш-образна  система) и более сообщающихс  сосудов (через стекл нные трои НИКИ в нижней части). Через поверхность раздела фаз микроводоросли из исходной среды свободно переход т в . колена с исследуемыми средствами в соответствии со степенью оптимальности каждой исследуемой среды дл  их жизнеде тельности. В вертикальные .части трубок системы можно вставл ть сверху тонкие стекл нные капилл ры или пластиковые трубочки, через которые культура продуваетс  смесью воздуха с С02. Через определенные промежутки времени (обычно раз в сутки ) из трубок отбирают пробы дл  определени  плотности культуры по числу клеток и по весу сухой биомассы клеток в единице объема суспензии и дл  одновременного контрол  за тем, насколько сохран етс  посто нство каждой из сред в трубках по ее физико-химическим показател м.

Пример 1. Штамм подвижных микроводорослей Dunaliella primolec- ta Butch. № 63, полученный из коллекции Института Ботаники АН УССР, выращивают в культуральной камере емкостью 500 мл, продуваемой снизу смесью воздуха с 0,5% СО до плотности 20«10 кл/мл на среде следующего состава , г/л: NaCl 29,0; KNOj 5,0; KHiP04 0,5; .3НгО 0,75;

г onU

0,38; MgSQ,.7HjO 0,24; раствор микроэлементов А4 1 мл, раствор FeS04 7 в смеси с ЭДТА ( З мг/л и ЭДТА 37 мг/л) 1 мл. Содержание Na в этой среде равно 11,41 г/л, К 2,33 г/л, так как значение рН среды до 7,0 доводили при помощи КОН

После этого в суспензию водорос-.

лей через отверсти  в крьппке камеры вставл ют стекл нные трубки типа пи- петок с отт нутым кончиком, запол- нейрые исследуемыми средствами и загерметизированные сверху короткой стекл нной палочкой, вставленной в надетый на пипетку отрезок резиновой трубки.

в табл.1 показан характер иссле- |цуемьк сред и содержание в них основных ионов.

Продолжение табл.1

Характер исследуемой среды

Содержание ионов г/л

Ка

,1 ,398 0,698

ю Основна  среда, разбавленна  в 8 раз 15

0

В табл.2 приведено среднее число клеток, обнаруженных через 2 сут. в трубках-пипетках с исследуемыми средами.

Таблица 2

Таблиц

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 4 раза

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 1,5 раза

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 4 раза

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 1,5 раза

Основна  среда, разбавленна  в В раз

При этом исходные параметры исследуемых сред в трубках, как это

1

Вариант средд,

I Число кле- I ток, 10 кл/мл

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 4 раза

0,030

30

Основна  среда без NaCl, разбавленна  в 1,5 раза

Основна  среда, разбавленна  в 8 раз

Таблица 3

2,08 7,72

3,26 7,75 3,88 7,75

видно из табл.3, сохран ютс  практически без изменений.

Таким образом, отсутствие ЦаС1 в среде  вл етс  фактором, неблагопри тным дл  жизнеде тельности Du- naliella primolecta. В случае отсутстви  NaCl в среде водоросли отдают предпочтение менее разбавленной по сравнению с исходной среде, т.е. предпочитают среду с более высоким осмотическим давлением.

Пример 2. Штамм водорослей Dunaliella salina Teed. № 10, полученный из коллекции культур института Ботаники АН УССР, выращивают на

14511626

можности свободно перемещатьс  из средней трубки в боковые.

Установлено, что через А8 ч культивировани  микроводоросли из средней трубки переместились в левую трубку, тогда как среда в правой трубке осталась совершенно прозрачной .

10 Таким образом, исходна , культураль- на  среда, разбавленна  в 4 раза, становитс  неблагопри тной дл  жизнеде тельности Dunaliella salina и они из плотной исходной суспензии.в по д. 1 СЛ-ЧХ1 Л И А.- -I л. у х.-.j(. j . -

среде того же состава, что и Dunalie- 15 исках более благопри тных по осве11а primolecta Butch, штамм 63, но содержащей NaCl в количестве не 29,0, а 87,0 г/л. В остальном водоросли выращивают в тех же услови х,

щенности условий перемещаютс  только в среду, содержащуюс  в левой трубке, т.е. их осмотаксис положителен только по отношению к исходной среде, разФормула

изобретени 

что и Dunaliella primolecta до плот- 20 бавленной не более чем в 2 раза. ности 10-10 кл/мл.

Монтируют на штативе Ш-образную систему, состо щую из трех вертикально расположенных трубок, соеди-.

ненных снизу через стекл нный тройник 25 состава среды дл  культивировани  прозрачным шлангом из силиконовой подвижных микроводорослей, включающий вьфащивание микроводорослей в соСпособ определени  оптимального

резины, пережатым межд,у трубками при помощи съемных зажимов, затем в среднюю трубку заливают 50 мл полученной суспензии водорослей, в левую трубку такое же количество чистой осходной среды разбавленной в 2 раза, а в правую - ту же среду, но разбавленную в 4 раза (также 50:мл). После этого, не снима  зажимов пальпированием шлангов, удал ют оставшиес  в системе пузырьки воздуха, а затем осторожно снимают зажимы. Межд,у исходной суспензией водорослей и исследуемыми средами в результате этого образуютс  поверхности непосредственного соприкосновени  (раздела фаз), обеспечивающие микроводоросл м возсуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной куль30 туры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакдии микроводорослей по отношению к исследуемой среде, отличающий- с   тем, что, с целью повьшени 

35 точности и упрощени  способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществл ют путем создани  поверхности раздела фаз с исследуемой средой, наход щей40 с  по крайней мере в одном сообщающемс  сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией . культуры водорослей.

Составитель Е.Золотухина Редактор М.Недолуженко Техред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи

Заказ 7036/20

Тираж 500

ВНШПИ Государственного комитета по изобретени м и открыти м при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушска  наб., д. 4/5

исках более благопри тных по освещенности условий перемещаютс  только в среду, содержащуюс  в левой трубке, т.е. их осмотаксис положителен только по отношению к исходной среде, разФормула

изобретени 

бавленной не более чем в 2 раза.

.

.

Способ определени  оптимального

25 состава среды дл  культивировани  подвижных микроводорослей, включающий вьфащивание микроводорослей в сосуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной куль30 туры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакдии микроводорослей по отношению к исследуемой среде, отличающий- с   тем, что, с целью повьшени 

35 точности и упрощени  способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществл ют путем создани  поверхности раздела фаз с исследуемой средой, наход щей40 с  по крайней мере в одном сообщающемс  сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией . культуры водорослей.

Подписное

Claims (1)

1. Формула изобретения

   Способ определения оптимального 25 состава среды для культивирования подвижных микроводорослей, включающий выращивание микроводорослей в сосуде с контрольной средой с последующим контактированием полученной куль30 туры водорослей с исследуемой средой и определением токсической реакции микроводорослей по отношению к исследуемой среде, отличающийс я тем, что, с целью повышения 35 точности и упрощения способа, контактирование культуры водорослей с исследуемой средой осуществляют путем создания поверхности раздела фаз с исследуемой средой, находящейся по крайней мере в одном сообщающемся сосуде с сосудом с контрольной средой, с последующей инкубацией . культуры водорослей.

   5 14511

   Таким образом, отсутствие tiaCl в среде является фактором, неблагоприятным для жизнедеятельности Dunaliella primolecta. В случае отсутствия NaCl в среде водоросли отдают предпочтение менее разбавленной по сравнению с исходной среде, т.е. предпочитают среду с более высоким осмотическим давлением. ю

   Пример 2. Штамм водорослей Dunaliella salina Teod. № 10, полученный из коллекции культур института Ботаники АН УССР, выращивают на среде того же состава, что и Dunaliella primolecta Butch, штамм 63, но содержащей NaCl в количестве не 29,0, а 87,0 г/л. В остальном водоросли выращивают в тех же условиях, что и Dunaliella primolecta до плотности 10-10⁵ кл/мл.

   Монтируют на штативе Ш-образную систему, состоящую из трех вертикально расположенных трубок, соединенных снизу через стеклянный тройник прозрачным шлангом из силиконовой резины, пережатым между трубками при помощи съемных зажимов, затем в среднюю трубку заливают 50 мл полученной суспензии водорослей, в левую трубку такое же количество чистой осходной среды разбавленной в 2 раза, а в правую - ту же среду, но разбавленную в 4 раза (также 50мл). После этого, не снимая зажимов пальпированием шлангов, удаляют оставшиеся в системе пузырьки воздуха, а затем осторожно снимают зажимы. Между исходной суспензией водорослей и исследуемыми средами в результате этого образуются поверхности непосредственного соприкосновения (раздела фаз), обеспечивающие микроводорослям воз-