SU1395670A1 - Способ получени глутаматдегидрогеназы - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к области биотехнологии, в частности к техноло- гии получени  ферментных препаратов. Цель изобретени  - упрощение и ускорение процесса получени  глутаматде- гидрогеназы, а также более полное использование сырь . Способ заключаетс  в гомогенизации исходного растительного сьфь , в качестве которого предлагаетс  использовать отруби ницы, получении бесклеточного экстракта и вьщелении из него мембрйнно- св занной глутаматдегидрогеназы гель- хроматографией на сефарозе 2В. Полученный препарат глутаматдегидрогеназы может быть использован в св занном с мембранами состо нии или подвергнут последующему отделению с мембраны обработкой фосфолипазой в количестве 0,5-1 мкг на 1 мл ферментного препарата с получением свобод- ного фермента. Применение способа позвол ет значительно упростить и ускорить процесс выделени  двух типов препарата глутаматдегидрогеназы. 1 з.п. ф-лы. (Л

Description

00

;о сд

а:

о

Изобретение относитс  к биотехнологии , а конкретно к технологии получени  ферментных препаратов.

Цель изобретени  - упрощение и

ускорение процесса получени  глута- матдегидрогеназы, а также более полного использовани  сырь .

Способ заключаетс  в том, что в

;качестве исходного растительного сырь  используютс  отруби пшеницы,

|из бесклеточного экстракта которых с помощью гель-хроматографии на се- фарозе 2В выдел ют св занную с мембранами глутаматдегидрогенаэу. Глу- таматдегидрогеназа может быть использована в св занном с мембранами сос1ТОЯНИИ или подвергнута обработке фос фолилазой С дл  получени  гомогенного и свободного от фосфолипидов пре- парата фермента. Получение гомогенного по белку препарата глутаматде- гидрогеназы за одну стадию хромато- графической очистки приводит к упрощению и ускорению процесса, а выделе ние из одной порции исходного сырь  свободной и св занной с мембранами глутаматдегидрогеназы позвол ет комплексно использовать это сырье.

Способ иллюстрируетс  следующими примерами.

Пример. 100 г отрубей пгае- ницы тщательно гомогенизируют в фарфоровой ступке в 0,05 М трис-НС1 буфере рН 7,4, в соотношении навески отрубей к объему буфера 1:5, после чего гомогенат центрифугируют при 10000 X g в течение 10 мин. Надосадо ную жидкость подвергают гель-хроматографии на колонке с сефаразой 2В Бесклеточный экстракт раздел етс  на два пика. Высокомолекул рный пик содержит только мембранно-св занную глутаматдегидрогеназу в виде округлых субклеточных структур размером около 1 мкм. Взвешивание упаренного и освобожденного от буферных солей препарата показывает, что из 100 г отрубей получаетс - 47 мг мембранносв занной глутаматдегидрогеназы в

расчете на белок), а обща  масса мембрано-св занного фермента равна 980 мг.

Эффективном способом освобождени  глутаматдегидрогеназы от мембран  в- л етс  обработка фосфолипазой С в концентрации не меньшей чем на 1 мл раствора мембранно-св занной глутаматдегидрогеназы . Освобо сденна  от

0 5

0

5 0 5

0

мембран гомогенна  глутаматдегидр оге- наза  вл етс  термостабильным ферментом (температура инактивации 80 с), что делает ее перспективной биотехнологии . Молекул рна  масса глута- матдегидрогена ы, определенна  при электрофорезе в присутствии додецил- сульфата натри  - 55 кДа.

П р и м е р 2. Способ осуществл ют по примеру 1, но используют 0,5 мкм форсфолипазы С на 1 мл мемб- рано-св занной фракции. Получают препарат глутаматдегидрогеназы, свободной от фосфолипидов.

П р и м е р 3. Вьщеление провод т по примеру 1, но используют фосфоли- пазы Д или А. В обоих случа х не происходит отделени  глутаматдегидрогеназы от фосфолипидов.

П р и м е р 4. Вьщеление провод т по примеру 1, но используют сефадекс- Г-200. Мембранно-св занна  глутамат- дегидрогеназа загр зн етс  другими высокомолекул рньгми продуктами.

Таким образомj использование

Claims (2)

1.Способ получени  глутаматдегидрогеназы , включающий гомогенизацию растительного сырь  -в буферном растворе, отделение бесклеточного экстракта и выделение из экстракта целевого продукта хроматографичес- кими методами, отличающий- с   тем, что, с целью ускорени  и упрощени  процесса, в качестве растительного сырь  используют отруби пшеницы, а выделение глутаматдегидрогеназы из экстракта провод т гель- хроматографией на сефарозе 2В.

2.Способ по п., отличающийс  тем, что, с целью более полного использовани  сырь , провод т обработку полученной после гель- хроматографии св занной с мембранами глутаматдегидрсгеназы фосфолипазой С в количестве 0,5-1 мкг на 1 мл препарата с последующим получением свободной глутаматдегидрогеназы.