SU1162876A1

SU1162876A1 - Способ выращивани уксусно-кислых бактерий @ @

Info

Publication number: SU1162876A1
Application number: SU833593054A
Authority: SU
Inventors: Флера Гарифовна Куприянова; Павел Васильевич Вострецов; Виктор Георгиевич Винтер; Клавдия Степановна Павлова; Людмила Федоровна Петрова; Марина Николаевна Ситникова
Priority date: 1983-05-20
Filing date: 1983-05-20
Publication date: 1985-06-23

Abstract

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ УКСУСНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ GLUCONOBACTER OXYDANS , предусматривающий приготовление инокул та клеток бактерий с последующим внесением его в питательную среду , содержащую сорбит в качестве источника углерода и дрожжевой автолизат в качестве стимул тора роста, отличающийс тем, что, с целью повьпиени скорости размножени бактерий и степени окислени сорбита в сорбозу, внесение инокул та в питательную среду осуществл ют совместно с панкреатической дезоксирибонуклеазой , вз той в концентрации Ы( 2-10 мг/мл. (Л

Description

а ю

СХ)

05 Изобретение относитс к промыш- ленной микробиологии, в частности к способам выращивани уксуснокислых бактерий, преимущественно используемых в производстве аскорбиновой кислоты. Цель изобретени - повьпление скорости размножени бактерий и степени окислени сорбита в сорбозу, П р и м е р 1. Выращивание Gluconobacter oxydans в лабораторных услови х в питательной среде, содержащей панкреатическую ДНКазу. При изу чении вли ни панкреатической ДНКазы на скорость размножени уксуснокислы бактерий и на жизнеде тельность микроорганизмов , при вл ющуюс в способ ности их окислить сорбент в сорбоэу. Gluconobacter oxydans культивируют в питательной среде следзтощего состава мл: сорбит 400 (23-28%-ный раствор ), дрожжевой-автолизат 60 (б% сухих веществ ), вода 540. Содержание сухих веществ в питательной среде должно быть не менее 10-12%, .рН 5,0-5,6. Дп подготовки посевного материала двухсуточную культуру с поверхности агаризованной среды указанного состава перенос т в пробирки с жидкой средой того же состава, инкубируют в термостате при 32°С в течение 48 ч, после чего суспензию разбавл ют в 10 раз свежей средой и разливают по 50 мл в колбы емкостью 500 мл. Одновременно в колбы внос т панкреатическую дезоксирибонуклиазу (ДНКазу )и культуру выращивают при 32С 48 ч. Через 3,12,24,36,48 ч после посева отбирают пробы дл регистрации скорости размножени клето определ емой по приросту биомассы на спектрофотометре, при длине волны 640 нм. В этих же пробах контролируют глубину окислени сорбина в сорбо зу. С этой целью отбирают 50 мл испытуемого раствора в мерную колбу емкостью 100 мл, куда добавл ют 1 мл 50%-ного раствора азотнокислого свин ца и 1 мл 5%-ного раствора, NaOH. Содержимое колбы довод т до метки во дой, энергично встр хивают и фильтру ют. Затем с помощью пол риметра определ ют угол вращени в прозрачном испытуемом растворе. Содержание сорбозы в исследуемой пробе (г/л )определ ют по формуле X 0,396 (К-Р )2, где 0,396 - коэффициент соответстви между 1 шкалы пол риметра и содержанием сорбозы в г/100 мл; Р - показани пол риметра; К - величина угла вращени кварцевой трубки; 2 - коэффициент пересчета на нормальную навеску. Глубину окислени сорбита в сорбозу % вычисл ют по формуле V С 100 X , ,где С - содержание сорбозы в г/ЮО мл окисленного раствора . В - содержание сухих веществ в г/100 мл окисленного раствора , определенных по рефлектометру . В качестве контрол используют те же услови выращивани уксуснокислых бактерий, но ДНКазу добавл ют в питательную среду, и гактивированнзш путем нагревани при 100°С 10 мин. Дл подбора дозы ДНКазы, стимулирующей ра множение бактерий, используют несколько концентраций фермента 1-10 мл/г, 1-10 мг/мл, 1-10 мг/мп. При соблюдении всех описанных условий проведени опыта не обнаружено стимулирующего вли ни ДНКазы в концентрации 1-10 мг/мп на размно- , жение уксуснокислых бактерий и глубину окислени сорбита в сорбозу. Не обнаружено также стимулирующего действи ДНКазы в концентрации 1-10 мл/мл на размножение уксуснокислых бактерий и глубину окислени сорбита в сорбозу. Панкреатическа ДНКаза в концентрации IlO мг/мп способствует ускорению размножени уксуснокислых бактерий . Данные о вли нии панкреатической ДНКазы на размножение уксус- нокисльгх бактерий и глубину окислени сорбита в сорбозу при выращивании G1.oxydans в лабораторных услови х представлены в табл.1 и выражены в процентах стимул ции по от-, ношению к контролю, прин тому за 100%. Как видно из табл.1,-уже чпрез 3ч. культивировани в среде с ферментом происходит ускорение размножени клеток на 28,9%. Однако в этот период увеличение глубины окислени сорбита в опыте по сравнению с

3

контролем не наблюдаетс . Наиболее высокого значени величина стимул ции размножени клеток и окислени сорбита в сорбозу (.29 и 25% сЬответственно . достигает через 12 ч роста культуры в присутствии панкре тической ДНКазы. На прот жении последующих 12 ч роста культуры стимулирующий эффект сохран етс , а к концу периода исследовани уменьшаетс в два раза.

Таким образом, панкреатическа ДНКаза, добавленна в питательную среду вконечной концентрации 110 мг/мл стимулирует размножение клеток в лабораторных услови х культивировани .Gl.uconobacter охуdans . Стимулирующее действие ДНКазы сопр жено с усилием процесса окислени сорбита в сорбозУ. -- П р и м е р 2. Выращивание уксуснокислых бактерий в производственных услови х в прединокул торе при добавлении в питательную среду панкреатической ДНКазы в конечной концентрации I -10 - мг/мл ( 1 2- среды J.

С целью накоплени биомассы в производственных услови х уксуснокислые бактерии выpauц вaют поэтапно , начина с меньшей емкости прединокул тора (100 м ), и заверша процесс ферментации в емкост х 10000-13000 л.

В прединокул торе культуру выращивают в течение 12 часов, Основным тестом, определ ющим жизнеде тельность бактерий и позвол ющим перейти к следующему этапу выращивани клеток в больших емкост х, вл етс глубина окислени сорбита

1628764

в сорбозу этими бактери ми, котора через 12 ч дочжна быть не менее 25-30%.

При выращивании культуры в прединокул торе емкость заливают 60 л питательной среды, засевают 48-часовой клеточной суспензией, выращенной в лабораторных услови х, из расчета 10% на объем среды. Одновременно с инокул том ввод т панкреатическую ДНКазу.

Через каждые 3 ч роста культуры из прединокул торов отбирают пробы дл определени вли ни панкреатической ДНКазы на глубину окислени сорбита в сорбозу. Результаты исследований представлены в табл.2.

Из табл.2 видно, что выращивание клеток в прединокул торе в присутствии ДНКазы в течение 9 ч приводит к стимул ции .окислени сорбита в сорбозу на 40-60%. Через 12 ч роста культуры стимулирующий эффект уменьшаетс , однако сохран етс на уровне 14-28%. Полученные результаты позвол ют заключить, что ДНКаза, добавленна в среду культивировани , положительно вли ет на жизнеспособность уксуснокислых бактерий. Глубина окислени сорбита в сорбозу через

,9 ч выращивани бактерий в среде с ДНКазой достигает 25-30%, что

-позвол ет перевести культуру из прединокул тора в следующую емкость (инокул тор ) и, следовательно, сократить продолжительность выращивани клеток в прединокул торе на 3ч.

Таблица 1

28,9 29,0 17,6 10,3 10,5

О

25,0 20,0 18,2 12,8

Примечани е:Процент стимул ции выражен по отношению

к контролю, прин тому .за 1СО%. Контроль - глубина окислени в соответствующих прединокул торах без ДНКазы,

Таблица 2

Claims

СПОСОБ ВЫРАЩИВАНИЯ УКСУСНОКИСЛЫХ БАКТЕРИЙ GLUCONOBACTER OXYDANS, предусматривающий приготовление инокулята клеток бактерий с последующим внесением его в питательную среду, содержащую сорбит в качестве источника углерода и дрожжевой автолиэат в качестве стимулятора роста, отличающийся тем, что, с целью повышения скорости размножения бактерий и степени окисления сорбита в сорбозу, внесение инокулята в питательную среду осуществляют совместно с панкреатической дезоксирибонуклеазой, взятой в концентрации л 1Ί(ί^έ- 2-10⁷мг/мл. £