SU1122695A1

SU1122695A1 - Способ получени ингибитора полимеризации фибрина

Info

Publication number: SU1122695A1
Application number: SU823534869A
Authority: SU
Inventors: Евгений Александрович Чирятьев; Майкеш Каиржановна Умутбаева
Original assignee: Тюменский медицинский институт
Priority date: 1982-11-11
Filing date: 1982-11-11
Publication date: 1984-11-07

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПОШ1МЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА из сыворотки крови, вкпючакиций отделение фибриногена, диализ сыворотки через целлофан, вьтаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекул рных соединений, отличающи и с тем, что, с целью повышени чистоты целевого продукта и ускорени процесса, диализ провод т через целлофан с порами диаметром 1,66-1,82 X, а отделение ингибитора -от низкомолекул рных примесей провод т гель-ф€льтрацией на сефадексе -15 в присутствии 0,040 ,05 М аммонийно-ацетатного буфера с рН 7,4-7,6. (Л

Description

д

9) СО

сл

Изобретение относитс к медицине , а именно к способам выделени факторов, тормоз пшх процесс полимеризации (самосборки) биополимеров, и может быть использовано дл получени ингибитора полимеризации в цел х уточнени представлений о его свойствах, структуре и механизме участи в процессе полимеризации фибрина;

Известен способ получени ингибитора полимеризации фибрина из крови, включающий вьщеление фибриногена шсаливанием, гидролиз фибриногена трипсином, диализ, хроматографию на КМ-цеш;юлозе и лио4 1лизаци1о {VJ .

Недостатки способа - сложность, длительность процесса (350 ч) и получение целевого продукта, содержащего в качестве примеси низкомолекул рные соединени .

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту вл етс способ получени Ингибитора полимеризации брина из сыворотки крови , включанавий отделение фибриногена , диализ сыворотки через целлофан типа купрофан со средним днаметром пор 2,04 А, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекул рных соединений с помощью хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе А 25 2 .

Недостатками известного способа вл ютс длительность (80,5 ч) и прИ сутствие примесей (аминокислот) в целевом продукте.

Цель изобретени - повьвпение чистоты целевого продукта и ускорение процесса.

Поставленна цель достигаетс тем что при способе получени ингибитора полимеризации фибрина из сыворотки крови, включающем отделение фибриногена , диализ сыворотки через целлофан, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекул рных соединений, диализ провод т через целлофан с порами диаметром 1,66-1,82 X, а отделение ингибитора от низкомолекул рных примесей провод т гель-фильтрацией на сефадексе g-15 в присутствии 0,04 - 0,05 М аммонийно-ацетатного буфера с рН 7,47 .6,

Сущность способа заключаетс в том, что замена целлофана Купрофан со средним диаметром пор 2,05 А на целлоАан диаметром пор 1,661 ,82 А обеспечивает более эф4)ективНое отделение высокомолекул рных соединений от низкомолекул рных, что исключает необходимость дополнительной очистки на ДЭАЭ-сефадексе А 25, а гель-фильтраци на сефадексе позвол ет получить чистый целевой продукт .

Пример 1. 10 МП стабилизированной цитратом натри (3,8%, 9:1) плазмы крови нагревают на вод ной бане (5бс) в течение 10 мин, затем полученную сыворотку освобождают от вьтавшего фибриногена центрифугированием (1 250 g, 15 мин). Освобожденную от фибриногена жидкость (сыворотку ) диализируют через ц§ллофан Т-100 (диаметр пор 1,66-1,82 А) против дистиллированной воды (1:50), смен воду через каждые 4 ч (всего 4 раза).

Диализ через целлофан Т-100 приводит к получению препарата, свобод-. ного от белковых высокомолекул рных примесей, тогда как при диализе через Купрофан не происходит полного отделени белков.

Порции диализата концентрируют выпариванием на кип щей вод ной бане по мере их получени .

Полученный концентрированный диалзат (2-3 мл) внос т в колонку с сефадексом Q -15, уравновешенную 0,04 М аммонийно-ацетатным буфером при рН 7,4. Элюируют зтим же буфером , собира фракции по 2 мл и в каждой из них определ ют наличие ингибитора полимеризации. Порции злюата, содержащие ингибитор полимеризации , объедин ют и удал ют летучий буфер выпариванием на выпарительных чашках (кип ща вод на бан ) до полного удалени буферного раствора . Сухой остаток на чашках раствор ют в необходимом количестве дистиллированной воды - целевой продукт . Выход продукта 99%.

Пример 2. Провод т по примеру 1, но при гель- вшьтрации используют буферы с другими параметраtm: 0,05 М срН 7,6 (выход 99,0%), 0,05 М с рН 7,4 (выход 97,4%) и 0,04 М с рН 7,6 (выход 97,0%).

311226954

Длительность процесса прлученй рафии на бумаге в системе бутанол ингибитора и его чистота не измен ют-лед на уксусна кислота - вода

с при варьировании параметров бу-в соотношении 4:1:5 (двукратное

фера в указанных пределах.пропускание) и 4:1:1 (двукратное

Врем , необходимое дл получени sпропускание) не содержит примесей

ингибитора, составл ет 25,5 ч.аминокислот.

При многократном применении спосо- Таким образом, предложенньй

ба выход ингибитора 97-100% от егоспособ позвол ет получатьингибитор

содержани в исходном материале.полимеризации фибрина, свободный

Получаемый предлагаемым способом Юот примесей, а также в раза усЦ1елевой: продукт по .данным хррматог-корить процесс.

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА из сыворотки крови, включающий отделение фибриногена, диализ сыворотки через целлофан, выпаривание диализата и отделение ингибитора от низкомолекулярных соединений, о т л и ч а ю· щ и й с я тем, что, с целью повы шения чистоты целевого продукта и ускорения процесса, диализ проводят через целлофан с порами диаметром 1,66-1,82 X, а отделение ингибито ра ют низкомолекулярных примесей проводят гель-фильтрацией на сефадексе -15 в присутствии 0,040,05 М аммонийно-ацетатного буфера с pH 7,4-7,6.

№ сл