SU1119647A1

SU1119647A1 - Method of obtaining inductor of potato protective reactions to diseases

Info

Publication number: SU1119647A1
Application number: SU823399561A
Authority: SU
Inventors: Лев Вульфович Метлицкий; Ольга Леонидовна Озерецковская; Людмила Ивановна Чалова; Галина Игоревна Чаленко; Людмила Александровна Юрганова; Тамара Эммануиловна Карапетян
Original assignee: Ордена Ленина Институт Биохимии Им.А.Н.Баха
Priority date: 1982-01-15
Filing date: 1982-01-15
Publication date: 1984-10-23

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНДУКТОРА ЗАЩИТНЫХ РЕАКЦИЙ КАРТОФЕЛЯ К БОЛЕЗНЯМ, включающий экстрак цию мицели возбудител фитофтороза картофел , концентрирование экстракта и отделение индуктора из экстракта от антииндукторов , отличающийс тем, что, с целью его ускорени и упрощени , выделение индуктора из экстракта провод т путем двухкратного препаративного центрифугировани . О)THE METHOD OF OBTAINING THE INDUCTOR OF PROTECTIVE REACTIONS OF POTATOES TO DISEASES, including extraction of the mycelium of potato late blight pathogens, concentrating the extract and separating the inducer from the extract from the anti-inductors, in order to speed up and simplify, isolating the inducer from the extract, an extract from the anti-inductors, in the same way, an extract of the inducer from the extract is anti-inductors. ABOUT)

Description

СО О5 4:: Изобретение относитс к сельскому хоз йству , в частности, к защите картофел от болезней. Известен способ получени липидных фракций из мицели возбудител фитофтороза Ph ytophjthora infestans (Mont.) d By, индуцирующих в картофеле образование антибиотических веществ - фитоалексинов (ФА) 1. Недостатком этого способа вл етс необходимость механического разрушени мицели и ультразвуковой обработки до экстракции органическими растворител ми. Известен способ получени активного индуктора защитных реакций картофел из фитофторы - липогликопротеинового комплекса (ЛГП-комплекса) по следующей схеме: экстракци неразрущенного мицели гриба ТО /о-ным этиловым спиртом при нагревании на кип щей вод ной бане в течение 20 мин (2 раза); концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40°С до удалени спирта; диализ полученного водного экстракта через целлофан против дистиллированной воды в течение 18 ч; хроматографи недиализуемой части экстракта на колонках с сефадексом G-50 2. К недостаткам известного способа относитс то, что он основан на использовании дорогосто щих импортных реактивов (сефадекс G-50). Кроме того, многократное разделение на колонках дл получени достаточного количества индуктора вл етс трудоемким и малопроизводительным процессом. Следовательно, известный способ выделени индуктора не может быть использОван дл получени индуктора в количествах , достаточных дл индуцировани защитных реакций с целью предупреждени развити болезней картофел в услови х современного сельскохоз йственного производства . Целью изобретени вл етс ускорение, упрощение и удещевление процесса получени активного индуктора защитных реакций картофел к болезн м (ЛГП-комплекса ) из мицели возбудител фитофтороза. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу дл получени целевого продукта ЛГП-комплекса водный экстракт мицели после удалени спирта подвергаетс двухкратному препаративному центрифугированию . Существенным отличием предлагаемого способа вл етс замена двух стадий получени 18-часового диализа и разделени на колонках с сефадексом на двухкратное центрифугирование, что позвол ет ускорить и удещевить процесс получени целевого продукта. Пример 1. ЛГП-комплекс получают по следующей схеме: двухкратна экстракци мицели фитофторы УО /о-ным этиловым спиртом при нагревании на кип щей вод ной бане в течение 20 мин; концентрирование объединенного водно-спиртового экстракта в вакуумном испарителе при 40°С до удалени спирта; центрифугирование водного экстракта при 15000 д в течение 30 мин; перераспределение получивщегос осадка в дистиллированной воде и повторное центрифугирование; лиофильное высущивание осадка, представл ющего собой ЛГП-комплекс . Пример 2. Данные, характеризующие количественный выход индуктора и его биологическую активность в зависимости от метода выделени из мицели фитофторы, приведены в таблице.CO O5 4 :: The invention relates to agriculture, in particular, to the protection of potatoes against diseases. A method of obtaining lipid fractions from the mycelium of the late blight pathogen Ph ytophjthora infestans (Mont.) D By, inducing in potato the formation of antibiotic substances - phytoalexins (FA) 1. The disadvantage of this method is the need for mechanical destruction of the mycelium and ultrasonic treatment before extraction with organic solvents. A method is known for producing an active inducer of defense reactions of potatoes from phytophthora — lipoglycoprotein complex (LGP complex) according to the following scheme: extraction of an intact mycelium of the fungus TO / on ethyl alcohol when heated in a boiling water bath for 20 minutes (2 times); concentrating the combined aqueous-alcoholic extract in a vacuum evaporator at 40 ° C until the alcohol is removed; dialysis of the obtained aqueous extract through cellophane against distilled water for 18 h; chromatography of the non-dializable part of the extract on columns with Sephadex G-50 2. The disadvantages of this method are that it is based on the use of expensive imported reagents (Sephadex G-50). In addition, multiple column separation to obtain a sufficient amount of inductor is a time consuming and inefficient process. Therefore, the known method of isolating an inducer cannot be used to obtain an inducer in quantities sufficient to induce defensive reactions in order to prevent the development of potato diseases in the conditions of modern agricultural production. The aim of the invention is to accelerate, simplify and reduce the process of obtaining an active inducer of potato defense reactions to diseases (LGP-complex) from the mycelium of late blight. This goal is achieved by the fact that according to the method for obtaining the desired product of the LGP-complex, the aqueous extract of the mycelium, after removing the alcohol, is subjected to two-fold preparative centrifugation. The essential difference of the proposed method is the replacement of two stages of obtaining 18-hour dialysis and separation on columns with Sephadex for twofold centrifugation, which allows to speed up and reduce the process of obtaining the desired product. Example 1. An LGP-complex is obtained according to the following scheme: twofold extraction of the mycelium of phytophthora by PP / ethyl ethanol when heated in a boiling water bath for 20 minutes; concentrating the combined aqueous-alcoholic extract in a vacuum evaporator at 40 ° C until the alcohol is removed; centrifuging the aqueous extract at 15,000 d for 30 min; redistributing the resulting precipitate in distilled water and re-centrifuging; freeze drying of the precipitate, which is an LGP complex. Example 2. Data characterizing the quantitative yield of the inducer and its biological activity, depending on the method of isolation of phytophthora from the mycelium, are given in the table.

Известный (гель-фильтраци через сефадекс )Known (gel filtration through Sephadex)

Предлагаемьш (центрифугирование )Offers (centrifugation)

48,248.2

9797

46,546.5

9595

О биологической активности выделенкого индуктора суд т по образованию в картофеле антибиотических веществ - фито Злексинов и снижению развити фитофтороза на клубн х по сравнению с контролем (обработка водой). Оказалось, что при использовании центрифугировани экстракта выход ЛГП-комплекса был такой же, как и при гель-фильтрации. При этом способность вызывать защитные реакции в картофеле оставалась неизменной.The biological activity of the secreted inducer is judged by the formation of antibiotic substances in the potato, phyto-Zlexins, and reduction of late blight in tubers compared to control (treatment with water). It turned out that when using the centrifugation of the extract, the yield of the LHP complex was the same as with gel filtration. At the same time, the ability to cause defensive reactions in potatoes remained unchanged.

При центрифугировании происходит не только концентрирование ЛГП-комплекса , но и отделение его от сопутствующих веществ - супрессоров. Эти вещества, представл ющие водорастворимые глюканы, преп тствуют про влению индуцирующей способности ЛГП-комплекса.During centrifugation, not only is the LHP-complex concentrated, but it is also separated from the associated substances — suppressors. These substances, which are water-soluble glucans, prevent the inducing ability of the LHP-complex.

Пример 3. Дл выделени индуктора из 10 г мицели фитофторы необходимо провести двухкратное центрифугирование в течение 2 ч или 18-часовой диализ и 16 разделений на колонке с сефадексом размером 40x2,5 см, что занимает 34 ч. Таким образом , процесс выделени ускор етс в 17 раз.Example 3. To isolate an inducer from 10 g of phytophoric mycelium, it is necessary to perform two-fold centrifugation for 2 hours or an 18-hour dialysis and 16 separations on a Sephadex column measuring 40x2.5 cm, which takes 34 hours. Thus, the release process is accelerated 17 times.

Упрощение и ускорение способа выделени индуктора защитных реакций у картофел делает его доступным дл применени в сельском хоз йстве с целью борьбы с болезн ми картофел .The simplification and acceleration of the method of isolating the inducer of defense reactions in potatoes makes it available for use in agriculture to combat potato diseases.

Claims

. METHOD FOR PRODUCING A POTATO OF PROTECTIVE REACTIONS OF POTATOES TO DISEASES, including extraction of the mycelium of the pathogen of late blight of potato, concentration of the extract and separation of the inducer from the extract from anti-inductors, characterized in that, in order to accelerate and simplify it, the inductor is extracted from the extract using a centrifuge.