SU1118674A1 - Способ стабилизации глюкоамилазы,продуцируемой @ @ в процессе хранени - Google Patents

Abstract

1. СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ, ПРОДЛЩРУЕМОЙ ASPERGILLUS AWAMORI В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕ1ШЯ, предусматривающий вьфащивание культуры на агаризованной питательной среде, содержащей крахмал и необходимые минеральные соли с последующим пересевом конидий на хранение в пробирки на питательную среду аналогичного состава, отличающийс   тем, что, с целью повышени  глюкоамилазной активности и стабильности ее в процессе хранени , перед посевом конидий на хранение осуществл ют активацию культуры путем повторного выращивани  ее на концентрированной агаризованной питатель§ ной среде, содержащей водные выт жки из солодовых ростков и отрубей в (Л соотношении 1:1. 2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что используют Q 5%-ную вод ную выт жку из солодовых с ростков и 10%-иую водную выт жку из ппшничных отрубей.

Description

1 Изобретение относитс  к микробиологической промьшшенности и может использоватьс  дл  хранени  микроорганизмов в музе х коллекционных культур и лаборатори х. В насто щее врем  дл  хранени  микроорганизмов - продуцентов испол зуетс  целый р д приемов, например периодические пересевы микробных культур на свежие питательные среды хранение микроорганизмов в сухих стерильных почвах, песке, каолине и солевых растворах l . Однако при этих методах хранени  падает ферментативна  активност микроорганизмов и необходимо проведение множества пассажей дл  получе ни  первоначальной активности. Известны также способы стабилизации активности микроорганизмов в процессе хранени , предусматривающи выращивание их, высушивание путем модификации и расфасовку 2j . Однако моддификади  имеет р д не достатков, св занных прежде всего с трудоемкостью процесса и использова нием дорогосто щего вакуумного оборудовани  и приемника дл  хранени  больших коллекций микробных культур в крупных лаборатори х, располагающих специальньм оборудованием. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту  вл етс  способ стабилизации ферментативно активности Aspergillus awamori в процессе их хранени , предусматривающий выращивание культуры на агаризованной питательной среде, содер жащей крахмал и необходимые минерал ные соли с последующим перес;евом ко нидий на хранение в пробирки на питательную среду аналогичного состава 3. Однако при этом способе наблюдаетс  потер  активности ферментов в процессе хранени  культуры. Цель изобретени  - повышение глю коам.илазной активности и стабильности ее в процессе хранени . Цель достигаетс  тем, что соглас но способу стабилизации глюкоа1 1Илазы , продуцируемой Aspergillus cTwamori, в процессе хранени , предусматривающему выращивание культуры на агаризованной питательной среде,содержащей крахмал и необходимые минеральные соли с последующи 42 Пересевом конидий в пробирки на питательную среду аналогичного состава , перед пересевом конидий на .хранение осуществл ют активацию культуры путем повторного выращивани  ее на концентрированной агаризованной питательной среде, содержащей водные выт жки из солодовых ростков . и отрубей в соотношении 1:1. Используют 5%-ную водную выт жку из солодовых ростков и 10%-ную выт жку из пшеничных отрубей. Сущность способа заключаетс  в ел едутрщем. Микроорганизмы вида Aspergillus awamori выращивают вначале на питательной среде, содержащей агар-агар, крахмал, хлористый калий (КС1), сернокислый магний MgSO;), однозамещенный фосфорнокислый калий (), азотнокислый натрий (NaNOo), сернокислое железо (FeSO) при 22-24 С в течение 12-14 сут. Затем осуществл ют активацию путем переноса конидий в чащки Петри на концентрированную питательную среду, содержащую водную выт жку и5 солодовых ростков и отрубей . в соотношении 1:1 в присутствии 2% агара в течение 12-14 сут до достижени  зрелости конидий с периодическим отбором колоний по активности. Дл  проверки активности культуру Aspergillus awamori вьфащивают глубинным методом на питательной среде следующего состава: солодовые ростки, крахмал, NaN04, КС1, MgSO, КН2Р04, FeSO. в течение 2-3 сут при 30-35°С. После вьфащивани  глубинным методом наиболее активный вариант пересевалс  дл  хранени  на питательную среду: агар-агар, крахмал, NaNO, MgS04 , KCl, KHjP04, FeS04. Пример 1. Выращивают в пробирках штамм A per0i11u aviamori 466 на агаризованной питательной среде, содержащей следующие компоненты,вес .%: Крахмал2 RC10,05 MgS040,05 КН 2Р04,0,1 Вьфащивание осуществл ют в течение 12 сут при и рН 4,7. Получают культуру с активностью ЯОоп./мл.

3Дл  активации штамма готов т среду .следующего состава: водна  выт жка из солодовых ростков с массовой концентрацией 5% - 50 мл; водна  выт жка из пшеничных отрубей с массовой концентрацией 10% - 50 мл; 2% агар-агара.

10%-на  водна  выт жка из пшеничных отрубей готовитс  следующим образом . Навеска отрубей заливаетс  определенным количеством воды (10 г отрубей на 100 мл воды), помещаетс  на кип щую водную баню и выдерживаетс  в течение 1 ч, после чего фильтруетс .

Таким же путем готовитс  водна  5%-на  выт жка из солодовых ростков (5 г солодовых ростков на 100 мл дистиллированной воды). Экстракции провод т при 30 в течение 1 ч. Полученные выт жки смешиваютс  1:1. Затем к смеси добавл ют агар-агар и стерилизуют 30 мин при 0,5 bffla, РН 4,7.

Приготовленную среду разливают по 15-20 мл в стерильные чашки Петри и на поверхность застывшей агаризованной среды пипеткой нанос т 1 мл конидиальной взвеси.

Приготовление суспензии конидий проводитс  следующим способом. Пробирки с 12-суточной культурой, выращенной на агаризованной среде с крахмалом, заливают 10 мл стерильной дистиллированной воды, при помощи петли снимают конидии с поверхности затем готов т разведение 10-

Приготовленную суспензию культуры нанос т на поверхность застывшей агаризованной концентрированной среды таким обоазом, чтобы после выращивани  в термостате при 22 С в течение 12 сут на поверхности выросло не более 3-7 колоний.

После 12 ч роста провер ют активность активированной культуры. Дл  этого 1/2 часть колонии пересевают на питательную среду следующего состава , вес.%:

Солодовые ростки3

Крахмал6

НаЫОз. 0,91

КС10,05

M};S04.0,05

KHgPO 0,1

FeS040,001

744

и выращивают в течение 3 сут при . Получают культуру с активноCTbto 117 ед/мл.

Затем активные колонии пересевали в пробирки на агаризованную питательную среду того же состава, что и-дл  выращивани , вес.%: Крахмал2

КС10,05

MgSOi 0,05

,1

,91

0,001

Агар2

и хранили в течение 3 мес, при этом активность сохран лась на уровне 117 ед/мл. В контрольной неактивированной культуре активность глюкоамилазы через 3 мес была 80 ед/мл. Пример 2. Хран т штамм

Asp. awamori Т-1. Выращивание, активацию и последующий пересев осуществл ют на среды, аналогичные в примере 1.

Перед активацией после 12-сутоточного роста культура имела активность 25 ед/мл, после активации 30 ед/мл и сохран ет свою активность в течение 3 мес. В контрольной культуре активность глюкоамилазы в процессе хранени  снизилась- до 20 ед/мл.

Результаты свидетельствуют, что при активации культуры на концентрированной агаризованной питательной среде активность увеличиваетс  и сохран етс  в течение 3 мес при ее хранении.

В табл. 1 приведена активность ферментов при хранении различными способами.

Таблица,.

Продуцент Asp. awamori

Альфа5 ,1 амилаза 5, 1

Глюкоамилаза ,

80 ед/мл 117

I1118674

Продолжение табл.1

Таблица 2.

Пример 3. Выращивание, активацию и пересев провод т аналогично примеру 1, но дл  активации в составе среды используют водиые выт жки из солодовых ростков и из пшеничных отрубей различных концентраций .

Результаты представлены в табл.2.

Во всех случа х активность глюкоамилазы сохран лась в процессе хранени  в течение 3 мес.

Таким образом, реализаци  изобретени  позвол ет повысить активность, гдюкоамипазы и стабилизировать эту активность в процессе хранени .

Claims (3)

1. СПОСОБ СТАБИЛИЗАЦИИ ’ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ, ПРОДУЦИРУЕМОЙ ASPER

GILLUS AWAMORI В ПРОЦЕССЕ ХРАНЕНИЯ, предусматривающий выращивание культуры на агаризованной питательной среде, содержащей крахмал и необходимые минеральные соли с последующим пересевом конидий на хранение в пробирки на питательную среду аналогичного состава, отличающийс 'я тем, что, с целью повышения глюкоамилазной активности и стабильности ее в процессе хранения, перед посевом конидий на хранение осуществляют активацию культуры путем повторного выращивания ее на концентрированной агаризованной питательной среде, содержащей водные вытяжки из солодовых ростков и отрубей в соотношении 1:1,

2. Способ поп. 1, отличающийся тем, что используют

5%-ную водяную вытяжку из солодовых 2 ростков и 10%-ную водную вытяжку из пшеничных отрубей.

1 118674