Изобретение ОТНОСИТСЯ к получению высокомолекул рных соединений обладающих ферментативной активностью, наход щих применение в химической, биохимической промышленности, а такж в медицине и дл научных целей. Известны способы иммобилизации протеолитичеСких ферментов через NH -группы на носител х с альдегидны ми группировками . Недостатки этих способов - снижение ферментативной активности после иммобилизации, необходимость использовани синтетических носителей или предварительно активированных дл получени альдегидных групп- - природных носителей. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту вл етс способ получени водорастворимого иммобилизованного протеолитического комплекса, включающий растворение содержащего альдегидные группы носител в буферном растворе и последующее присоединение фермента zj. .Согласно прототипу носителем служат производные декстранов с мол. массой 20-110 тыс ч, окисленные до степени окислени f , а в качестве фермента использован Про .теолитический фермент террилитин. Взаимодействие декстрана с террилити ном осуществл ют в водном буферном растворе при f)H 7,5-10,0, температуре 15-25с в течение 15-180 мин при соотношении реагентов в реакционной смеси (декстран и фермент) от .9. . , Биокатализатор (стабилизированный декстраном террилитин) получают в двух последовательных стади х активаци декстранов а реакции перио датного окислени (степень окислени матрицы Y 6-k8%}) св зывание фермента & окисленным декстраном. Этот процесс провод т следующим образом. 1б5 мг декстрана, окисленного до степени окислени 2, с мол. массой 20 тыс ч и растворенного в 3,6 мл воды (концентраци полимера 50 мг/мл) смешивают с 4,9 мл раствора фермента в 0,1 М боратном буфере рН 8,5. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при 21t1°C и рН 8,5. Затем добавл ют 1 мл 0,1.М раствора боратного буфера, содержащего. tO мг боргидри7 да натри и перемешивают при 21tlC в течение 40 мин. Полученный препарат, св занный с ферментом декстран, диализуют на холоде (4i2°C) против дистиллированной воды в течение 48 ч. После этого при помощи гельфильтрации отдел ют избыток несв занного фермента . Полученный препарат высушивают лиофильно известным способом. Выход продукта 235 мг сухого препарата. Удельна активность 7,4 ПЕ/мг. Обща активность препарата 1740 ПЁ. Выход продукта от введенной энзимат активности 1.001. Недостатки известного способа дефицитный и дорогосто щий носительдекстран , сравнительно низка удельна и обща активность в процессе стабилизировани не увеличиваетс первоначальна активность энзима) , сложность процесса (длительный процесс активизировани -матрицы, значительные затраты времени, энергетических ресурсов и сырь ), неоднородность матрицы (мол. масса колеблетс в пределах 20-220 тыс ч) . Цель изобретени - повышение активности иммобилизованного протеолитического комплекса и упрощение способа . Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени водораствори| 1ого иммобилизованного протеолитич.еского комплекса, включающему растворение содержащего альдегидные группы носител в буферном растворе и последующее присоед нение протеолитического фермента, в качестве носител используют ксилоур .онид, растворенный в 0,1 М трис-оксиметиламинометановом буфере рН 8,05, а присоединение фермента осуществл ют при соотношении носитель: фермент 1:1-3. . В предлагаемом способе в качестве матри.цы используют качественно новый носитель-ксилоуронид, изолированный из лигнифицированного растительного материала, например древесины, отходов сельскохоз йственной и деревообрабатывающей промышленности. Ксилоуронид образуетс в больших количествах в процессе сульфатной варки целлюлозы из лингифицированного раститеьного материала как побочный продукт, а также может быть получен и пр мой экстракцией холоцеллюлозы, разбавленной щелочью. Положительным фактором вл етс однородность ксилоуронида, мол. масса последнего колеблетс в пределах 16-13тыс ч. Матрица характеризуетс следующими показател ми: . Степень полинеризации ( СП)110-130 Мол. масса, Дальтон 16000-18000 Количество активных альдегидных групп, мгЕ23-30 г препарата - .5 Таким образом, в качестве носител используют дешевый и доступный ксилоуронид. Процесс присоединени фермента к носителю происходит при взаимодействии- карбонильных групп полимера (матрицы и аминогрупп остатков лизи на фермента. Схематически реакцию иммобилизации можно изобразить в сле дующем виде: - Лi i5 -c:;„ где К - ксилоуронид; Ф - фермент. Реакцию провод т в м гких услови х при 18-20€ и в 0,1 М трис-оксиметиламинометановом буферном раство рН 8,, так как оптимум действи ферментного комплекса располож.ен при указанном значении рН. Согласно способу получени водорастворимого стабилизированного препарата протеолитиче.ского ферментного комплекса осуществл ют ковалентное св зывание полимера с ферментом при соотношении носит ель-: фермент 1:1-3. При этом количество .вз того энзима превосходит количество матрицы. Множество активных альдегидных. групп носител при низких концентраци х фермента может реагировать не только с реакционно способными группами на поверхности ферментного комплекса но и с таковыми в активным центрах фермента. Когда же фермента много, альдегидные группы матрицы преимущественно реагируют с аминными групп ми на поверхности ферментного комплекса , не затрагива активных центрое фермента, благодар этому обеспечиваетс высока активность препарата . Учитыва , что процесс иммобилизации (стабилизации) фермента осуществл етс при рН 8,05, а дальнейшее использование стабилизированного фермента происходит при , азоме тинова св зь как при хранении биокатализатора , так и при работе. Способ осуществл ют следующим образом. Ксилоуронид раствор ют в 0,1 М трис-оксиметиламино метановом буферном растворе, рН 8,05 в течение 1015 мин при перемешивании при 18-20 С. Растворимый комплекс полимеро-фермёнт , например протеолитическйй ферментный комплекс, получают добавлением фермента к раствору ксилоуронида при соотношении носитель:фермент 1:1-3 с последующим перемешиванием в течение мин и выдержкой смесипри 18-20°Св течение 24ч.Полученный предложенным способом водорастворимый комплекс фермента-полимера через 2k ч обладает активностью . , ,0 от исходной активности , а через :30 сут остаточна активность 107,,6% от исходной ак- . тивности. . в таблице показано стабилизирующее действие ксилоуронида. Пример. 0,05 г ксилоурони-, да раствор ют в 12 мл 0,1 И трис-оксиметиламинометановом буферном растворе рН 8,05.Раствор ют на магнит- ной мешалке 15 мин при .K раствору ксилоуронида добавл ют 0,05 г протеолитического ферментного комплекса,,,. полученного изAspergi11 us aruzal КС. (соотношение носител и фермента 1:1) смесь перемешивают в течение 10 мин и вьщерживают сутки при 20 С. Стзбилизированный препарат хран т при Q-k С.. Активность через 24 ч мкНоль тирозина. ii,o,5%oT г оелка мин . мкМоль тирози исходной, через .S- g , т.е. 107,U от исходной. Активность иммобилизованного прот олитического ферментного комплекса бпредел етс по модифицированному методу Ансона. За единицу протеолитической актив ности иммобилизованного протеолитимеского комплекса прин то количество св занного препарата, которое за минуту при температуре и рН 8,0 катализирует превращение субртрата (казеина) в неосаждаемое с ТХУ (три-хлоруксусной кислотой) состо ние, содержащее один микр6-(. моль тирозина. П р и м е р 2. 0,05 г ксилоуронида раствор ют в 12 мл 0,1 М трис -оксиметиламинометаирвом буферном растворе рН 8,05. Раствор ют Аа магнитной мешалке 10 мин при 18 С. К ра твору ксилоуронида добавл ют 0,125 г r ppтeoлиJичecкoгo ферментногЬ компле са, полученного из Asperglllus aryzal КС (соотношение носител и фермента 1:2,5). Выдерживают 2k ч при . Хран т стабилизированный препарат при +4 С. Активность через часа 19538,0 мкМоль тирозина if па, , т.е. чбО% исхорюи г белкадмин . .через 30 суг 14763,9 тирозина,, г белка«мин т.е. 347,6 от исходной. П р и м е р 3. 0,05 г ксилоуронида раствор ют в 12 мл 0,1 М трис-оксиметиламиновом буферном растворе, рН 8,05. Раствор ют на магнитной мешалке 12 мин при комнатной темпера .туре. К раствору добавл ют 0,15 г протеолитического ферментного комплекса, полученного из Aspergi1lus aryzal КС (соотношени носител и фермента 1:3) Выдерживают 24 ч при . Хран т стабилизированный препарат при +4 С. Активность через 24 ч 13689,4 мкНоль тирозина ,- ,0/ „ - - - . . . т.е. jf.f.fjb от г белка-мин исходной через 30 сут 14343,4 мкМоль тирозина .т.е. 337,7 от исг белка -мин ходной. Использование изобретени обеспечнвает увеличение активности биокатализатора в 2-4 раза по сравнению с прототипом и сохранение ее без существенных изменений в течение 30 сут (см. таблицу), упрощение процесса - исключаетс стади активации матрицы. Кроме того, сокращаетс врем иммобилизации и достигаетс экономи электроэнергии и материалов.