SK792019A3

SK792019A3 - Biologický prípravok na ochranu rastlín, spôsob jeho prípravy a spôsob jeho použitia

Info

Publication number: SK792019A3
Application number: SK792019A
Authority: SK
Inventors: Ing. Kunca Andrej, PhD.; Ing. Lalík Michal; Ing. Galko Juraj, PhD.
Original assignee: Národné Lesnícke Centrum
Priority date: 2019-07-12
Filing date: 2019-07-12
Publication date: 2021-01-13
Also published as: WO2021010905A1; EP3836789A1

Abstract

Biologický prípravok na ochranu rastlín na použitie v biologickej ochrane rastlín proti škodcom zahŕňa nosič biologicky aktívneho organizmu a biologicky aktívny organizmus. Nosič biologicky aktívneho organizmu obsahuje zmes suchej zložky a vajec, pričom suchá zložka je zmes šrotu a múky alebo len šrot, alebo len múka a množstvo vajec vztiahnuté na množstvo suchej zložky je od 72 % hmotnostných do 84 % hmotnostných, a biologicky aktívny organizmus sú entomopatogénne huby, ktorých mycélium sa nachádza na povrchu a vnútri nosiča a je spôsobilé produkovať spóry, ktoré sú schopné usmrtiť cieľový druh hmyzieho škodcu.

Description

S K 79-2019 Α3

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka biologického prípravku na ochranu rastlín, spôsobu jeho prípravy a spôsobu jeho použitia a patrí do oblasti životného prostredia, poľnohospodárstva, lesníctva a lesného hospodárstva. Vynález patrí konkrétnejšie do oblasti ochrany rastlín proti škodcom

Doterajší stav techniky

Na ochranu rastlín pred škodcami sa najčastejšie využívajú chemické látky, tzv. pesticídy. Ich používanie z hľadiska ochrany životného prostredia a bezpečnosti práce je problematické. Navyše, škodcovia sa stávajú proti týmto chemickým látkam stále odolnejšími a tým sa znižuje, prípadne až stráca ich účinno sť proti týmto škodcom Pri aplikácii pesticídov sa zvyčajne postupuje tak, že koncentrát sa rozriedi vodou a aplikuje sa na povrch rastlín postrekom, čím sa na povrchu vytvorí tenký film, ktoiý zabezpečí aj niekoľkotýždňovú ochranu rastlín.

Do popredia sa čoraz viac dostáva biologická ochrana rastlín, ktorá je ekologickejšia a je možné ju použiť aj v prostredí, kde nie je možné využiť chemické prípravky napr. z hygienických alebo ekologických dôvodov, nakoľko biologické prípravky na ochranu rastlín sú účinné pre cieľové organizmy a pre necieľové organizmy vrátane človeka sú neškodné.

Jedným zo spôsobov biologickej ochrany rastlín proti škodcomje využitie spór entomopatogénny ch húb, ktoré infikujú škodcov a spôsobia ich úhy n.

Slovenský patentový spis č. 288591 opisuje kmeň entomopatogénnej huby Beauveria bassiana,má vysokú virulenciu proti imágam lykožrúta smrekového a konídie huby vo vodnej suspenzä sa aplikujú na povrch kôry napadnutých stromov alebo lapákov.

Pri aplikácii suspenzie spór spôsobom, ktorým sa aplikujú pesticídy, teda rozriedením suspenzie vo vode a jej nanesením na povrch rastlín, sú entomopatogénne huby vystavené nepriaznivým podmienkam, najmä UV žiareniu a suchu. My célium entomopatogénnej huby v takýchto nepriaznivých podmienkach je inaktivované av dôsledku toho je účinnosť ochrany rastlín proti škodcom obmedzená najviac na 1 týždeň.

V lesníctve sa biologická ochrana využíva najčastejšie proti hmyzím škodcom aplikáciou roztoku spór baktérie Bacillus thuringiensis proti premnoženým húseniciam motýľov na listoch listnatých stromov alebo aplikáciou entomopatogénnej huby Beauveria bassiana formou prášku alebo suspenzie. Vprípade chrobákov (napr. tvrdoň smrekový, lykožrút smrekový), ktorých larvy žijú pod kôrou a chrobáky žijú rozptýlené v poraste, je aplikácia biologického prípravku rovnakým spôsobom ako na larvy listožravého hmyzu málo účinná. Postrekom povrchu dreva sa spóry huby pod kôru vôbec nedostanú a cez závrtové otvory by takéto prerastenie trvalo niekoľko týždňov.

Riešením uvedených problémov je hľadanie alternatívnych spôsobov aplikácie spór. V patentových prihláškach sauvádzajú rôzne kvapalné alebo tuhé nosiče s cieľom predĺžiť čas pôsobeniaentomopatogénov.

V medzinárodnej patentovej prihláške PCT/NZ2009/000217 je opísané použitie kmeňa entomopatogénnej huby Beauveria bassiana ako činidla na biologickú kontrolu patogénneho hmyzu, pričombiologická kontrola sa uskutočňuje aj za použitia poľnohospodársky prijateľného kvapalného alebo tuhého nosiča.

Český patentový spis č. 300 701 opisuje využitie kmeňa entomopatogénnej huby Isaria fumosorosea na likvidáciu škodcov a roztočov. Spôsob likvidácie spočíva v tom, že spóry entomopatogénnej huby sú v kvapaline alebo v pevnom inertnom nosiči. Vynález nerieši problém času životnosti a tým ani účinnosti prípravku v prírodných podmienkach pôsobením UV žiarenia a sucha. Pri aplikácii suspenzie spór spôsobom, ktorým sa aplikujú pesticídy je účinnosť ochrany rastlín proti škodcomobmedzený nakrátky čas.

Ruský patent č. 2 308 191 opisuje kompozíciu na biologickú ochranu rastlín, ktorá obsahuje tvrdý nosič zahŕňajúci pšeničné zrná a mikrobiologický zdroj lyzínu a kompozícia ďalej obsahuje kyselinu jantárovú azmes kultúry entomopatogénnych húb. Nosičomsú v podstate pšeničné zrná. Vynález nerieš i problém času životnosti a tým aj účinnosti prípravku v prírodných podmienkach pôsobením UV žiarenia a sucha. Pri aplikácii spór entomopatogénnych húb na pšeničných zrnách je čas pôsobenia a teda účinnosti prípravku veľmi krátky.

Americká patentová prihláška US 2006/011066 opisuje spôsob selektívnej aplikácie entomopatogénnych húb s použitím zariadenia na prilákanie kontaminantov, v ktorom sú spóry húb pripevnené na adsorpčný materiál, kde môže byť aplikované gélové činidlo a ďalšie aditíva na udržanie vhodnej úrovne vlhkosti na prežitie spór.

Nakoľko biologická ochrana rastlín predstavuje ekologické riešenie ochrany proti škodcom a záujem o jej využitie neustále stúpa, je vhodné hľadať nové progresívne riešenia, ako zabezpečiť čo najdlhší čas ochrany s čo najvyššou účinnosťou ochrany rastlín proti škodcompričo najnižších nákladoch a tiež zabezpečiť biologickú ochranu pred škodcami, na ktoré klasický spôsob aplikácie nie je účinný.

S K 79-2019 Α3

Podstata vynálezu

Uvedené problémy rieši biologicky prípravok na ochranu rastlín proti škodcom obsahujúci nosič biologicky aktívneho organizmu a biologicky aktívny organizmus, ktorého podstata spočíva v tom, že nosič obsahuje vymiešanú homogénnu zmes suchej zložky a vajec. Suchá zložka je zmes šrotu a múky výhodne v pomere od 2 : 1 do 1 : 2, alebo len šrot, alebo len múka. Množstvo vajec vztiahnuté na množstvo suchej zložky je od 60 % hmotnostných do 84 % hmotnostných. Biologicky aktívnym organizmom sú entomopatogénne huby, ktorých my célium je prerastené na povrchu a vnútri nosiča. Mycélium tejto huby na povrchu nosiča produkuje spóry. Šrot, múka a vajcia sú bežne dostupné suroviny, ktoré sú ekologické a tiež cenovo dostupné.

Biologický prípravok na ochranu rastlín je navrhnutý tak, aby chránil mycéhum entomopatogénnej huby pred nepriaznivými podmienkami, ako je vystavenie UV žiareniu alebo podmienkam sucha.

Riešenie podľa predloženého vynálezu predstavuje nosič výhodne guľovitého tvaru, na povrchu ktorého, a najmä vnútri ktorého sa nachádza my célium entomopatogénnej huby. Nosič môže mať aj tvar iného priestorového tvaru ako guľovitého. Napr. môže byť valcovitého tvaru, prípadne v tvare kocky, hranola a pod. Vprípade nepriaznivých podmienok pre entomopatogénnu hubu napr. sucho alebo pô s obenímUV žiarenia je mycélium entomopatogénnej huby na povrchu nosiča inaktivované. Riešenie podľa tohto vynálezu zabezpečuje udržanie vhodných podmienok pre entomopatogénnu hubu vnútri nosiča. Následne, ak sa znovu vytvoria vonkajšie priaznivé podmienky pre entomopatogénnu hubu, napr. po znížení UV žiarenia (zmena ročného obdobia, presun do tieňa, príchod vlhkejšieho obdobia, skončenie obdobia sucha a pod.), entomopatogénna huba opäť prerastie zvnútra nosiča na jeho povrch a opätovne uvoľňuje spóry do okolia, ktoré spôsobujú usmrtenie škodcov selektívne podľa kmeňa a druhu entomopatogénnej huby.

Vhodné podmienky pre mycélium entomopatogénnej huby žijúce v nosiči sú zabezpečené tým, že nosič je vyrobený z energeticky výživných zložiek a zároveň dokáže absorbovať vlhkosť z pôdy a/alebo z okolia. Týmto spôsobom môže entomopatogénna huba žiť a sporulovať (produkovať spóry) aj počas letných mesiacov. Nosič môže výhodne získavať vlhkosť z okolia (vrátane pôdy) tesne pri povrchu pôdy. Týmto spôsobom je možné udržať biologicky aktívnu entomopatogénnu hubu v prírodnom prostredí takmer po celý vegetačný čas (obdobie cca 6 mesiacov), čo predstavuje výrazné predĺženie účinnosti riešenia podľa tohto vynálezu v porovnaní s povrchovým postrekomvodnýmroztokom so spórami entomopatogénných húb alebo v porovnaní s tvrdým nosičom zahŕňajúcim iba pšeničné zrná.

Šrot a múka sú prirodzeným materiálom, na ktorom rastú huby. Na prípravu nosiča môže byť použitý iba čistý šrot alebo iba čistá múka. Šrot je vhodné použiť z dôvodu, že je lacnejší ako múka. Múku je vhodné použiť z dôvodu, že je zomletá na jemnejšiu frakciu ako šrot. Najvýhodnejšie uskutočnenie z ekonomického, technologického a výrobného dôvodu je použitie zmesi šrotu a múky.

Pri výrobe nosiča môže byť použitý obilný šrot, kukuričný šrot, strukovinový šrot alebo ich zmesi a použitá múka môže byť obilná múka, kukuričná múka alebo ich zmesi.

Z obilných šrotov je možné použiť jačmenný šrot, pšeničný šrot, kukuričný šrot, ovsený šrot alebo ražný šrot. Múka môže byť použitá hladká, ale môže byť aj polo hrubá alebo hrubá.

V prípade, keď je zmes suchej zložky a vajec príliš suchá, je možné pridať do zmesi vodu a to v takom množstve, aby vymiešaná zmes bola homogénna.

Je výhodné, ak má nosič guľovitý tvar alebo valcovitý tvar s priemerom aspoň 0,5 cm Takýto tvar vytvára pre entomopatogénnu hubu vhodné podmienky vnútri nosiča. Platí, že čím je priemer nosiča väčší, tým obsahuje viac vhodného materiálu a vhodnejšie prostredie (vlhkosť) na prežívanie a rast mycélia entomopatogénnychhúb.

Nosič môže výhodne obsahovať aj podporné látky na dlhšie udržanie životnosti entomopatogénných húb a podpornými látkami sú rastové média, ktoiých obsah v nosiči môže byť do 5 % hmotnostných. Takýmito rastovými médiami môžu byťSabouraudDextrose Agar, Fetal Bovine Sérum, Gracc's Insect Médium, ap.

Súčasťou nosiča môžu byť výhodne aj feromóny alebo atraktanty, ktoré lákajú škodcov a zvyšujú tak účinnosť prípravku na ochranu rastlín proti škodcom podľa tohto vynálezu.

Spôsob prípravy prípravku na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu zahŕňa nasledovné kroky:

- šrot a/alebo múka sa sterilizujú pri teplote od 110 °C do 130 °C, tlaku 210 kPa po dobu od 10 minút do 30 minút,

- po vychladnutí sa k šrotu a/alebo k múke pridajú vajcia a zmes sa mieša dovtedy, 1ým nie je zmes homogénna,

- z vymiešanej zmesi satvaruje nosič, výhodne do tvaru gule alebo valca alebo kocky alebo hranolu,

- vytvarovaný nosič sausušív sušičke po dobu od 2 hod. do 4 hod. pri teplote 40 až 60 °C,

- usušený nosič sa sterilizuje pri teplote od 110 °C do 130 °C, tlaku 210 kPa po dobu od 10 minút do 30 minút,

- nosič sa nechá vy chladnúť na izbovú teplotu,

- vychladnutý nosič sa zaleje suspenziou entomopatogénnych húb, koncentrácia spór v 1 ml je od 10^-5

S K 79-2019 Α3 do ΙΟ¹⁰, ideálne 10^-8, pričom suspenzia sapripraví zmiešaním vody a spórentomopatogénnychhúb, - po zaliatí nosiča suspenziou entomopatogénnych húb sa nechajú huby kultivovať pri teplote od 15 °C do 25 °C (ideálne 22 °C ±2 °C) po dobu od 10 dní do 20 dní v sterilnej miestnosti, pri vlhkosti prostredia minimálne 50 %,

- huby sakultivujú 6-7 dnív úplnej tme, kedy satvorí mycélim huby,

- keď je mycélium huby prerastené po celom povrchu nosiča, zapne sa svetlo, ktoré sa nechá svietiť 6-7 dní a mycélium pri osvetlení začne produkovať spóry.

Je výhodné, ak jednotlivé kroky až po krok zaliatia nosiča suspenziou entomopatogénnych húb sa uskutočňujú v sterilnom prostredí, napr. podUVC lampou, ktorá zabezpečí sterilitu okolitého prostredia.

Prípravok na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu sa aplikuje v teréne voľným rozhodením po holine a/alebo sa umiestni v prirodzenom atraktante (v lapacej kôre) alebo v tesnej blízkosti prirodzeného atraktantu a/alebo sa umiestni do jamky v pôde spolu s feromónom alebo atraktantoma/alebo sa umiestni do technického zariadenia, kde bude cieľový škodca lákaný feromónom alebo atraktantom a zároveň bude prípravok na ochranu rastlín chránený pred priamym slnečný m žiarením.

Nosič entomopatogénnej huby podľa tohto vynálezu na použitie proti hmyzím škodcom sa výhodne používa v prípade, ak týmto škodcom sú chrobáky (napr. tvrdoň smrekový, lykožrút smrekový), ktoiých larvy žijú skryto pod kôrou alebo ak chrobáky žijú rozptýlené v poraste.

Do nosiča podľa tohto vynálezu je možné umiestniť mnohé entomopatogénne huby napr. z rodov Beauveria alebo Metarhizium alebo Isaria.

Výhodou biologického prípravku na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu je dlhé prežívanie huby v nosiči, jednoduchá aplikácia v terénne a dostupná cena finálneho produktu. Nosič sa môže voľne rozhodiť po holine, umiestniť do lapacej kôry, do špeciálneho lapača (technického zariadenia) alebo k sadeniciam, ktoré napr. tvrdoň smrekový (Hylobius abietis) aktívne vyhľadáva a vykonáva zrelostný alebo úživný žer. Nosič sa výhodne umiestni napr. do lapacej kôry s rozmermi cca 20 x 40 cm, ktorá je vyrobená z čerstvej smrekovej kôry a ktorá veľmi dobre láka tvrdoňa smrekového. Navrhovaný nosič je prikrytý takouto kôrou, huba na nosiči produkuje spóry, ktoré sa prichytia na irnágo tvrdoňa, ktorý bol prilákaný vôňou (primárnymi atraktantmi) kôry, čím dôjde k jeho infekcii. Takto infikované irnágo tvrdoňa smrekového dokáže usmrtiť entomopatogénna huba do jedného týždňa, prípadne môže pri párení alebo pri kontakte s iným tvrdo ňom infekciu preniesť. Tým je zabezpečená cielená a selektívna forma biologického boja proti tomuto škodcovi.

Nosič podľa tohto vynálezu je možné použiť ako substrát aj iných entomopatogénnych húb napr. Metarhizium, Isaria, atď. proti lesným, poprípade poľnohospodárskym škodcom Selekcia a lákanie cieľových organizmov (škodcov) sa zabezpečuje buďferomónmi alebo atraktantmi.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obr. 1 Priebeh priemerného stupňa mortality a prerastania imág tvrdoňa smrekového mycéliom entomopatogénnej huby Beauveria bassiana počas jednotlivých kontrol.

Obr. 2 Celkový priemerný stupeň mortality a prerastania imág tvrdoňa smrekového mycéliom entomopatogénnej huby Beauveria bassiana za všetky kontroly.

Obr. 3 Celkový počet mŕtvych imág tvrdoňa smrekového po ukončení pokusu.

Obr. 4 Celkové percentuálne vyjadrenie prežívania imág tvrdoňa smrekového po ukončení pokusu.

Obr. 5 Štatisticky významný rozdiel v prežívaní imág tvrdoňa smrekového medzi „kontrolou“ a „nosičom“.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Vynález je bližšie vysvetlený pomocou nasledujúcich neobmedzujúcich príkladov uskutočnenia:

Príklad 1

Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu obsahuje nosič entomopatogénnej huby, ktorý je celý prerastený mycéliom entomopatogénnej huby, t. j. na povrchu a aj vnútri a mycélium produkuje spóry. V tomto príklade uskutočnenia je použitá entomopatogénna huba Beauveria bassiana, ktorá selektívne pôsobí na usmrtenie tvrdoňa smrekového. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa tohto príkladu je cielene určený na ochranu rastlín pred tvrdoňom smrekovým.

Nosič je zmes obsahujúca 150 g jačmenného šrotu, 75 g pšeničnej múky, t. j. množstvo šrotu a množstvo múky je v pomere 2:1a ďalej obsahuje 3 ks vajec veľkosti M (hmotnosť jedného vajca je 54 - 63 g), t. j. 162 g až 189 g vajec. Množstvo vajec vztiahnuté na množstvo šrotu a múky je od 72 % hmotnostných do 84 % hmotnostných. Použitá múka je hladká.

S K 79-2019 Α3

Nosič má guľovitý tvar s priemerom 2,4 cm

Spôsob výroby biologického prípravku na ochranu rastlín podľa tohto príkladu uskutočnenia je nasledovný:

Najskôr sterilizujeme múku a šrot v autokláve pri 121 °C a tlaku 210 kPa počas 20 minút. Následne necháme suroviny vychladnúť. Vychladnutú múku a šrot nasypeme do kuchynského robota a pridáme vajcia. Miešame dovtedy, pokým nie je zmes homogénna (cca 1 minúta), keď je zmesi viac, trvá to dlhšie. Výmiešanú zmes následne vložíme do výtlačnej pištole na cesto, kde je výstupný otvor 24 mm. Touto pištoľou vytlačíme šúľok zmesi, ktorý následne umiestnime do rollballu velkosti 24 mm, kde sa nosiče vytvarujú do guľovitého tvaru. Rollbaly aj vytlačníky majú rôznu veľkosť (priemer), takže je možné spraviť menšie ale aj väčšie nosiče. Takto vyrobené nosiče následne vložíme na 3 hodiny do sušičky ovocia pri teplote 50 °C. Po vybratí zo sušičky uložíme nosiče do Petriho misiek (priemer misky 20 cm, výška 3 cm), prípadne do inej nádoby vhodnej na použitie do autoklávu. Do jednej Petriho misky rozmeru 20 x 3 cm sa zmestí od 30 do 40 nosičov. Takto nosiče sterilizujeme v autokláve pri 121 °C a tlaku 210 kPa počas 20 minút. Nosiče následne necháme vychladnúť na izbovú teplotu. Všetky hore spomenuté úkony robíme pod UVC lampou, ktorá zabezpečuje sterilitu okohtého prostredia. Pripravíme si suspenziu entomopatogénnych húb. Koncentrácia spór v 1 ml je 10^-8. Počet spór sa zisťuje pod mikroskopom Výchladnuté nosiče následne zalejeme suspenziou entomopatogénnych húb. Na jeden nosič pripadá cca 4 ml suspenzie entomopatogénnych húb, čiže keď je v jednej miske 30 nosičov, nalejeme k nim cca 120 ml suspenzie entomopatogénnych húb. Takto pripravené nosiče následne umiestnime do sterilnej miestnosti, kde je teplota 22 °C (±2 °C). Kultivácia pri 22 °C trvá 14 dní. Pri vlhkosti prostredia min. 50 % prebieha kultivácia húb. Nosiče zaliate suspenziou entomopatogénnych húb sú 6 - 7 dní v úplnej tme, kedy sa tvorí mycélium huby. Keď je mycélium huby prerastené po celompovrchu nosiča zapne sa svetlo, ktoré sa nechá svietiť 6-7 dní. Mycéhum huby až pri osvetlení začne produkovať spóry. Tento moment je veľmi dôležitý. Nosič je ideálne prerastený vtedy, keď sa dotkneme mycélia a ostane nám na prstoch povlak spór. Po týchto 2 týždňoch získame biologický prípravok na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu obsahujúci nosič, ktorý je celý prerastený mycéliomentomopatogénnej huby spôsobilý produkovať spóry huby. Prípravok je pripravený na aplikáciu do terénnu.

Experiment v laboratórnych podmienkach

Experiment bol vykonaný v laboratóriách Národného lesníckeho centra, Strediska lesníckej ochranárskej služby v Banskej Štiavnici s 360 imágami tvrdoňa smrekového a po dvoch týždňoch experimentu bolo mŕtvy ch viac ako 90 % imág, ktoré prišli do kontaktu s entomopatogénnou hubou.

300 imág bolo vložených do Petriho misiek spolu s biologickým prípravkom na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu a to v piatich rôznych variantoch po 60 imág a 60 imág bolo použitých ako kontrola bez prítomnosti biologického prípravku na ochranu rastlín.

300 imág bolo rozdelených do piatich blokov po 60 imág. Každý blok predstavoval 10 Petriho misiek a v každej bolo 6 imág tvrdoňa smrekového. Do každého bloku so 60 imágami boh umiestnené biologické prípravky na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu a to nasledovne:

• Blok A: čerstvo vyrobené biologické prípravky - nevystavené žiadnymnegatívnymvplyvom • Blok B: biologické prípravky vložené na 120 hodín pod UVC lampu, čím sme simulovali slnečné žiarenie, ktoré zabíja entomopatogénnu hubu Beauveria bassiana.

• Blok C: biologické prípravky vložené do mrazničky pri teplote -18 “Cna 120 hodín, čím sme simulovali mráz.

• Blok D: biologické prípravky umiestnené k imágam na 24 hodín a následne boh umiestnené do sterilnej Petriho misky (bez spór Beauveria bassiana), čím sa sledovalo, či postačuje krátky kontakt imág s biologickým prípravkom • Blok E: biologické prípravky, ktoré boh nainfikované entomopatogénnu hubou Beauveria bassiana dva mesiace pred experimentom a umiestnené v chladničke pri teplote 4 °C.

• Blok K: kontrolné imága bez prítomnosti biologického prípravku.

Stupeň mortality a prerastania imág tvrdoňa smrekového mycéliom entomopatogénnej huby Beauveria bassiana bol hodnotený pri každej kontrole nasledovne:

- živý jedinec

- mŕtvy bez prerastenia

- mŕtvy prerastený do 1/3

- mŕtvy prerastený do 2/3

- mŕtvy prerastený nad 2/3.

Výsledky sú znázornené na obr. 1 a obr. 2.

Experiment v externých insektáriách

Metodika

Experiment bol vykonaný v externých insektáriách Národného lesníckeho centra, Strediska lesníckej

S K 79-2019 Α3 ochranárskej služby v Banskej Štiavnici v poloprírodných podmienkach (prirodzené striedanie teplotných, svetlostných a vlhkostných pomerov, závlaha pridávaná umelo).

chovných klietok bolo použitých na experiment. Do každej chovnej klietky bol vložený črepník so substrátomvhodnýmna výsadbu ihličnatých drevín, kde boh vysadené 4 sadenice smreka obyčajného (Pi cea abies) v rozstupe 25 x 25 cm Spolu bolo v experimente vysadených 80 sadeníc (20 x 4). Do stredu medzi sadenice bola vložená lapacia kôra vyrobená z čerstvej smrekovej kôiy s rozmermi 10 x 20 cm, ktorá sa prehla na polovicu (10 x 10 cm, lykom do vnútra). Kôra bola položená a zľahka pritlačená na substrát. Do polovice klietok (10 ks) bol do stredu kôiy vložený biologický prípravok na ochranu rastlín podľa tohto príkladu uskutočnenia, ktoiý produkoval spóry entomopatogénnej huby Beauveria bassiana. Týmto sme simulovali použitie tohto prípravku v lapacích kôrach, ktoré sa používajú na monitoring tvrdoňa v terénnych podmienkach. Druhá polovica klietok bola bez biologického prípravku na ochranu rastlín v lapacích kôrach a slúžila ako kontrola. Sadenice a substrát sazalievali vodouv pravidelných intervaloch.

Na začiatku experimentu boh do každej klietky vložené 4 imága tvrdoňa smrekového. Pri každom meraní (každých 14 dní) boh vložené ďalšie 4 imága tvrdoňa smrekového. Spolu bolo vložených za celý experiment 400 irnág do všetkých klietok (20 imág do každej klietky). Na konci experimentu sme hľadali všetky imága, ktoré boh vložené do klietok a hodnotilo sa, či sú živé alebo prerastené entomopatogénnou hubou. Substrát z každého črepníka osobitne bol opatrne preskúmaný, kde sme hľadali uhynuté imága.

Všetky uhynuté imága v klietkach s prítomnosťou biologického prípravku aj prerástli entomopatogénnou hubou B. bassiana. Uhynuté imága v kontrolných klietkach neboli prerastené uvedenou hubou a uhynuh z iných príčin.

Výsledky sú znázornené na obr. 3, obr. 4 a obr. 5.

Príklad 2

Príklad uskutočnenia 2 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým, rozdielom, že biologický prípravok je v tvare valca a priemer valca je od 0,5 cm

Príklad 3

Príklad uskutočnenia 3 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým rozdielom, že k zmesi šrotu, múky a vajec bola pridaná voda, nakoľko vymiešaná zmes nebola dostatočne homogénna. Vody sa pridáva toľko, aby bola zmes po vymiešaní homogénna.

Príklad 4

Príklad uskutočnenia 4 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým rozdielom, že je použitý kukuričný šrot.

Príklad 5

Príklad uskutočnenia 5 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým, rozdielom, že je použitý pšeničný šrot bez múky.

Príklad 6

Príklad uskutočnenia 6 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým, rozdielom, že je použitá ovsená múka hrubá, bez použitia šrotu.

Príklad 7

Príklad uskutočnenia 7 je zhodný s príkladom uskutočnenia 1 s tým, rozdielom, že nosič obsahuje aj podporné látky na dlhšie udržanie životnosti entomopatogénnych húb a týmito podpornými látkami sú rastové média, pričom obsah rastových médií je 3 %hmotnostné.

Príklad 8

Príklad uskutočnenia 8 je zhodný s príkladom 1 s tým rozdielom, že namiesto lapacej kôiy je použitý špecifický feromón na lákanie cieľového druhu škodcu.

Príklad 9

Príklad uskutočnenia 9 je zhodný s príkladom 1 s tým rozdielom, že namiesto lapacej kôiy je použitý umelý alebo prirodzený atraktant na lákanie cieľového druhu škodcu.

Príklad 10

Príklad uskutočnenia 10 je zhodný s príkladom 1 s tým rozdielom, že namiesto lapacej kôiy je použitý špecifický ľeromón alebo umelý alebo prirodzený atraktant, ktorý je súčasťou biologického prípravku na ochranu rastlín.

S K 79-2019 Α3

Príklad 11

Príklad uskutočnenia 11 je zhodný s príkladom 1 s tým rozdielom, že do lapacej kôry je okrem prípravku na ochranu rastlín pridaný pre zvýšenie atraktivity aj špecifický feromón a/alebo umelý alebo prirodzený atraktant.

Claims

S K 79-2019 Α3

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Biologický prípravok na ochranu rastlín na použitie v biologickej ochrane rastlín proti škodcom zahŕňajúci nosič biologicky aktívneho organizmu a biologicky aktívny organizmus, vyznačujúci sa tým, že nosič biologicky aktívneho organizmu obsahuje zmes suchej zložky a vajec, pričom suchá zložka je zmes šrotu a múky alebo len šrot alebo len múka a množstvo vajec vztiahnuté na množstvo suchej zložky je od 60 % hmotnostných do 84 % hmotnostných a biologicky aktívny organizmus sú entomopatogénne huby, ktoiých mycélium sa nachádza na povrchu a vnútri nosiča a je spôsobilé produkovať spóiy.
2. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že šrot je zo skupiny: obilný šrot, kukuričný šrot, strukovinový šrot alebo ich zmesi a múka je zo skupiny: obilná múka, kukuričná múka alebo ich zmes.
3. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov la 2, vyzna čujúci sa tým, že ďalej obsahujevoduakzmes nie je dosť homogénna.
4. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov 1 až 3, vyznačujúci sa tým, že nosič je v tvare priestorového útvaru.
5. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že priestorový útvar je guľa, valec, kocka, kváder.
6. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov 4a 5, vyznačujúci sa tým, že priemer priestorového útvaru je aspoň 0,5 cm
7. Biologický prípravok na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov 1 až 6, vyzna- čujúci sa tým, že nosič ďalej obsahuje podporné látky na dlhšie udržanie životnosti entomopato génnych húb a týmito podpornými látkami sú rastové média, pričom obsah rastových médií v nosiči je do 5 % hmotnostných.
8. Biologicky prípravok na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov 1 až 7, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje ľeromóny alebo atraktanty.
9. Spôsob prípravy biologického prípravku na ochranu rastlín podľa tohto vynálezu zahŕňa nasledovné kroky: šrot a/alebo múka sa sterilizujú pri teplote od 110 °C do 130 °C, tlaku 210 kPa po dobu od 10 minút do 30 minút; po vychladnutí sa k šrotu a/alebo k múke pridajú vajcia a zmes sa mieša dovtedy, kým nie je zmes homogénna; z vymiešanej zmesi sa tvaruje nosič do tvaru priestorového útvaru; vytvarovaný nosič sa usuší v sušičke po dobu od 2 hod. do 4 hod. pri teplote 40 °Caž60 °C; usušený nosič sa sterilizuje pri teplote od 110 °C do 130 °C, tlaku 210 kPa po dobu od 10 minút do 30 minút; nosič sa nechá vychladnúť na izbovú teplotu; vychladnutý nosič sa zaleje suspenziou entomopatogénnych húb, koncentrácia spórv 1 ml je od 10^-5do 10¹⁰, ideálne 10^-8, pričom suspenzia entomopatogénnych húb sa pripraví zmiešaním vody a spór entomopatogénnych húb; po zaliatí nosiča suspenziou entomopatogénnych húb sa nechajú huby kultivovať pri teplo te od 15 °C do 25 °C po dobu od 10 dní do 20 dní v sterilnej miestnosti, pri vlhkosti prostredia minimálne 50%; kultivácia prebieha 6-7 dní v úplnej tme, kedy sa tvorí mycélimhuby; keď je mycélium huby prerastené po celom povrchu nosiča, zapne sa svetlo, ktoré sa nechá svietiť 6-7 dní a mycéliumpri osvetlení zač ne produkovať spóry.
10. Spôsob prípravy biologického prípravku na ochranu rastlín podľa nároku 9, vyznačujúci sa tým, že jednotlivé kroky až po krok zaliatia nosiča suspenziou entomopatogénnych húb sa uskutočňuje v sterilnom prostredí.
11. Spôsob použitia biologického prípravku na ochranu rastlín podľa ktoréhokoľvek nároku z nárokov 1 až 8, vyznačujúci sa tým, že sa aplikuje v teréne voľným rozhodením po holine a/alebo sa umiestni v prirodzenom atraktante (v lapacej kôre) alebo v tesnej blízkosti prirodzeného atraktantu a/alebo sa umiestni do jamky v pôde spolu s ľeromónom alebo atraktantom a/alebo sa umiestni do technického zariadenia, kde bude cieľový škodca lákaný ľeromónom alebo atraktantom a zároveň bude prípravok na ochranu rastlín chránený pred priamym slnečným žiarením

3 výkresy