SK34099A3 - Ptx sensitive g proteins, the production and use thereof - Google Patents

Ptx sensitive g proteins, the production and use thereof Download PDF

Info

Publication number
SK34099A3
SK34099A3 SK340-99A SK34099A SK34099A3 SK 34099 A3 SK34099 A3 SK 34099A3 SK 34099 A SK34099 A SK 34099A SK 34099 A3 SK34099 A3 SK 34099A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
protein
nucleic acid
acid sequence
disease
ser
Prior art date
Application number
SK340-99A
Other languages
English (en)
Inventor
Winfried Siffert
Original Assignee
Winfried Siffert
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Winfried Siffert filed Critical Winfried Siffert
Publication of SK34099A3 publication Critical patent/SK34099A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
    • C07K14/4722—G-proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)

Description

G proteíny s PTX citlivosťou, ich príprava a použitie
Oblasť techniky
Vynález sa týka nových ľudských G proteínov, najmä β3 podjednotiek G proteínov,· spôsobu ich prípravy a ich použitia v diagnostike a liečbe.
Doterajší stav techniky
Heterotrimérne guanidinové proteíny viažuce nukleotidy (G proteíny) majú zvláštny význam vo vnútrobunkovej transdukcii signálov. Sprostredkovávajú preklad mimobunkových signálov po stimulácii hormónových receptorov a ostatných receptorov, ktoré prechádzajú konformačnou zmenou po receptorovej aktivácii. To vedie k aktivácii G proteínov, ktoré môžu následne aktivovať alebo inhibovať vnútrobunkové efektory (napr. iónové kanály, enzýmy). Heterotrimérne G proteiny pozostávajú z troch podjednotiek, ά, β. a γ, podjednotiek. Dodnes sa biochemickými metódami a metódami molekulovej biológie podarilo detegovať niekoľko rôznych a podjednotiek, 5 β podjednotiek a okolo 12 γ podjednotiek (Birnbaumer, L. a Birnbaumer, M. Signaltransdukcion by G proteins /Transdukcia signálov G proťsínmi/: 1994 vyd. J. Recept. Res. 15: 213 - 252, 1995; Offermanns, S. and Schultz, G. Complex Information processing by the transmembrane signaling systém involving G proteins /Informačný komplex spracovaný transmembránovým signalizačným systémom zahŕňajúci G proteíny/. Naunyn Schmiedebergs Árch. Pharmacol. 350: 329 - 338, 1994; Nllrnberg, B., Gudermann, T., a Schultz,G. Receptore and G proteins as primary components transmembrane signál transduction. Part 2. G proteins: structure and function /Receptory a G proteíny ako primárne zložky transmembránovej signálnej transdukcie. Časť 2. G proteíny: štruktúra a funkcia/. J. Mol. Med. 73: 123 - 132, 1995; Neer, E. J. Heterotrimeric G proteins: Organizers of Trnnsmembrane Signals /Heterotrimérne G proteíny: Organizátory transmembránových signálov/. Celí 80: 249 - 257, 1995; RensDomiano, S. a Hamm, H.E. Structural and functional relationships of heterotrimeric G-proteins /Štruktúrne a funkčné vzťahy heterotrimérnych G proteínov/. FASEB J. 9: 1059 - 1056, 1995).
Receptorovo sprostredkovaná aktivácia určitých a podjednotiek môže byť inhibovaná predbežným spracovaním s pertúznym .toxínom (PTX) . Tieto zahŕňajú najmä a izoformy ail, ai2 a ai3, a rôzne ao podjednotky. G proteiny týchto typov sa tiež označujú ako G proteiny s PTX citlivosťou.
βγ Podjednotky vykonávajú základné funkcie v aktivácii G proteínu a v modulácii vnútrobunkových reakcií. Všetky β podjednotky G proteínu, ktoré boli doteraz objavené, majú vysoké stupne homológie na úrovni nukleotidovej sekvencie a na úrovni aminokyselinovej sekvencie. Okrem toho tieto podobnosti sa zistili nielen v ludských β podjednotkách (βΐ, β2, β3), ale tiež v porovnaní s β podjednotkami iných druhov, napríklad u ovocných múch a kvasiniek.
Rôntgenové štruktúrne analýzy boli schopné stanoviť tie aminokyseliny να, β a γ podjednotkách, .ktoré sú v kontakte jedna s druhou a sú potrebné na zabezpečenie tvorby heterotriméru.
Všetky β podjednotky G proteínu, ktoré boli doteraz objavené, patria k WD opakujúcim sa proteínom. N koniec β podjednotky interaguje prednostne s γ podjednotkami a C koniec je zahrnutý v interakcii s receptormi.
• β podjednotky tvoria tzv. vrtulové štruktúry, β Vrtule podjednotiek Θβ pozostávajú zo 7 β vrtulových listov, každý vrtulový list pozostáva zo 4 aminokyselinových oblastí v antiparalelnom usporiadaní. Sedmo záhybová symetria β vrtúľ sa môže detegovať na úrovni aminokyselinovej sekvencie, ktorá obsahuje 7 WD opakovaní. WD opakujúci sa motív obsahuje okolo aminokyselín a má množstvo zachovaných aminokyselín, ktoré zahŕňajú Trp-Asp dipeptidové sekvencie. Tento WD motív často končí WD opakovanie (obr. 1).
TWSTM WMIezj,.
Teraz sa s prekvapením zistilo, že β3 podjednotky G proteínu, ktoré pozostávajú z iba 6 namiesto 7 WD opakujúcich sa motívov, sa vyskytuje napr. pri hypertenzii. Schopnosť bunkovej aktivácie G proteínov s PTX citlivosťou vzrastá pri týchto hypertenziách v porovnaní s normotenziami.
Molekulové analýzy odhalili novú aminokyselinovú sekvenciu β3 podjednotky pri týchto hypertenziách, ktorá bola skrátená o 41 aminokyselín ako známa sekvencia. Sekvencia sa označila SEKV. ID. ČÍS. 2. Formálne jé odvodená od' známej '· ludskej β3 podjednotky deléciou aminkyselin 167 až 207.
Korešpondujúca DNK sekvencia, ktorá ich kóduje, je opísaná v SEKV. ID. ČÍS. 1.
Dôvod prečo prebieha skracovanie Θβ3 podjednotky pri hypertenzii je podía predpokladu altrnatívne spájanie relevantného génu. Na úrovni DNK je intrón priamo vpredu putativneho spojovacieho miesta. Intrón začína za nukleotidom 497 v otvorenom čítacom mieste (očíslovanom ak SEKV. ID. ČÍS. D ·
Bolo tiež možné detegovať pomocou PCR na genómovej DNK intrón so začiatkom na okolo 620 nukleotide. Skrátená forma zjavne nastáúa okolo počas delécie komletného exónu. Vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy skrátených foriem ľudských Θβ3 podjednotiek, ako je uvedené vyššie, expresiou sekvencie nukleovej kyseliny, ktorá ich kóduje v hostitelovom organizme.
Rekombinantná expresia sa prednostne vykonáva pri príprave génového konštruktu, ktorý okrem kódujúcej sekvencie nukleovej kyseliny tiež obsahuje ďalší signál a regulačné sekvencie také ako promótory, terminátory, miesta viažuce ribozómy, polyadenylačné miesta a pod. Všeobecný spôsob rekombinačnej expresie génu je známy skúsenému odborníkovi.
Vynález sa ďalej týka použitia sekvencií nukleových kyselín podía vynálezu na výrobu liečiv na génovú terapiu. Zavedenie týchto sekvencií nukleových kyselín v priamej forme alebo po príprave vhodného génového vektora do buniek pacienta je v ňom schopné dosiahnuť zvýšenú schopnosť aktivácie G proteínov.
Toto je želateľné pri množstve chorôb, kde je dysregulácia spojená s G proteínom.
Ochorenia spojené s G proteínovou dysreguláciou predstavujú choroby, pri ktorých je G proteín zahrnutý v transdukcii signálu a nevykonáva svoju funkciu fyziologickým spôsobom.
Tieto choroby zahŕňajú kardiovaskulárne choroby, metabolické poruchy a imunologické choroby.
Kardiovaskulárne choroby, ktoré sa môžu uviesť, sú:
hypertenzia, tehotenská hypertenzia (gestóza, hypertenzia v tehotenstve), koronárna srdcová choroba, lokalizovaná a/alebo všeobecná artérioskleróza, stenóza krvných ciev, restnózy po revaskularizačných zákrokoch na cievach (napr. PTCA s alebo bez napínacích implantátov), náklonnosť k ranám, trombofilia a vzrastajúca plateletová agregácia.
Metabolické poruchy, ktoré sa môžu uviesť, sú:
metabolický syndróm, inzulínový odpor a hyperinzulinémia, diabetes melitus typu II, diabetické komplikácie (napr. nefropatia, neuropatia, retinopatia atď.) porucha metabolizmu lipidov, porucha centrálnej chemorecepcie (C02 tolerancia;
I acidózová tolerancia, náhla smrť dojčiat (SIDS)).
Imunologické ochorenia, ktoré sa môžu uviesť, sú:
zhoršená intenzita imunitnej odpovede tela (tvorba imunoglobulinov, agresivita T buniek a NK buniek), zhoršená všeobecná tendencia k proliferácii, zahŕňajúca kapacitu hojenia rán, tendencia rozvoja tumorov a proliferácia zahŕňajúca metastatický potenciál malígne transformovaných buniek, trvanie latentnej periódy po HIV infekcii pokiaľ nie je choroba klinicky zjavná, Kaposhiho sarkóm, tendencia k cirhóze pečene, transplantačná tolerancia a transplantačné odmietnutie.
Vynález sa ďalej vzťahuje k použitiu sekvencií nukleovej kyseliny podľa vynálezu na diagnózu chorôb, najmä zahŕňajúcu stanovenie rizika trpenia chorobami, ktoré sú spojené s G proteínovou dysreguláciou.
Okrem stanovenia rizika určitých chorôb, je tiež možné vypracovať všeobecné fyziologické dáta a závery pri použití podľa vynálezu, napríklad ne centrálnu chemorecepciu, C02 toleranciu, acidózovú toleranciu, riziko náhleho úmrtia dojčiat (SIDS), fitnes pre určité druhy športov.
Vynález sa ďalej vzťahuje k použitiu sekvencii nukleovej kyseliny podlá vynálezu, ktoré sú komplementárne k sekvenciám nukleovej kyseliny kódujúce skrátenú formu σβ3 podjednotky. Sekvencie tohto typu sa môžu použiť ako antisensie konštrukty na liečenie alebo prevenciu chorôb spojených s G proteínovou dysreguláciou.
Vynález ďalej sa ďalej týka spôsobu stanovenia relatívneho rizika trpenia na ochorenia, ktoré sú spojené s G proteínovou dysreguláciou pre subjekt porovnaním génovej sekvencie ludskej G proteínovej β3 podjednotky subjektu s génovou sekvenciou S EKV. ID. ČÍS. 1 a v prípade, že sa zhoduje so SEKV. ID. ČÍS. 1, poukazuje na zvýšené riziko pre subjekt.
V spôsobe podlá vynálezu na stanovenie relatívneho rizika sa odoberá subjektu telový meteriál, ktorý obsahuje informáciu subjektu. Toto sa dosiahne spravidla izoláciou nukleovej kyseliny zo vzorky krvi. ŕ
Štruktúra génu pre G proteínovú β3 pocljednotku ' je stanovená zo subjektu izolovaním nukleovej kyseliny a porovnaním so sekvenciou označenou ako SEKV. ID. ČÍS. 1.
Štruktúra génu sa môže stanoviť sekvencovaním nukleovej kyseliny. Toto sa uskutočňuje priamo z genómovej DNK alebo po amplifikácii nukleovej kyseliny, napríklad PCR technikou.
Štruktúra génu môže byť vykonaná na mRNK alebo cDNK úrovni.
Stanovenie je výhodne sekvencovaním po PCR amplifikácii cDNK. Priméry vhodné na PCR reakciu [sic] sa ľahko odvodzujú skúseným odborníkom zo sekvencii označených ako SEKV. ID. ČÍS. 1. Spôsob pre toto je výhodne taký, že sa v každom prípade vyberie primér, ktorý viaže vetvu a komplementárnu vetvu pred a za miestom delécie.
Avšak porovnanie génov sa môže tiež uskutočniť inými spôsobmi, napríklad selektívnou hybridizáciou alebo vhodným mapovaním s použitím reštrikčných enzýmov.
Diagnostické metódy opísané vyššie sa môžu tiež uskutočniť na proteínovej úrovni. Napríklad sa proteíny podľa vynálezu môžu použiť na tvorbu špecifických protilátok na zistenie skrátenej formy Gp3 podjednotky. Protilátky tohto typu sa môžu potom použiť na uskutočnenie, ak je to vhodné, pomocou ELISA metód proteínového .chemického vyšetrovania navyše k alebo alternatívne ku genetickému vyšetrovaniu.
Vynález sa ďalej týka produkcie transgénnyh živočíchov, ktoré obsahujú genetickú modifikáciu opísanú vyššie (skrátenie ΰβ3 podjednotky). Transgénne živočíchy tohto typu majú veľký význam najmä ako živočíšne modely na vyšetrovanie a liečenie chorôb opísaných vyššie. Spôsob produkcie transgénnych živočíchov je všeobecne známy skúsenému odborníkovi.
Nasledujúce príklady slúžia na ďalšiu ilustráciu vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
1. Funkčné výsledky aktivácie G proteínu pri základnej hypertenzii , . ·
Uskutočnila sa detailná charakterizácia aktivácie G proteínov z buniek normotenzných subjektov a u pacientov s hypertenziou. Kvôli tomuto dôvodu sa sa kvantifikovalo stimulované zavedenie označeného [35S]GTPyS metódou opísanou Wielandom a kol. (Wieland, T., Liedel, K., Kaldenberg-Stasch,
S., Meyer zu Heringdorf, D., Schmidt, M. a Jakobs, K. H. Analysys of receptor-G protein interactions in permeabilized cells /Analýza interakcii receptor - G protein v permeabilizovaných bunkách/. Naunyn-Schmiederberg's Árch. Pharmacol. 351: 329 - 336, 1995). G proteíny sa aktivovali pôvodne stimuláciou buniek, ktoré boli permeabilizované s digitonínom s použitím peptidu mastoparán 7. Tento peptid stimuluje konfiguráciu aktivovaného G proteínu - spriahnutého receptora tak, že sa môže použiť na indukovanie priamej G proteínovej aktivácie nezávislej na receptoroch (Ross, E. M. a Higc.shi j ima, T. Regulation of G protein activation by mastoparan and other cationic peptides /Regulácia aktivácie G proteínu mastoparánom a inými katiónovými peptidmi/. Methods
Enzymol. 237: 27 - 38, 1994). Viazanie GTPyS indukované MAS-7 je úplne citlivé na PTX tak, že sa môže použiť na kvantifikáciu aktx/ácie heterotrimérnych G proteínov Gi typu. Obr. 2 ukazuje koncentračnú závislosť aktivácie G proteinu indukovanú mastoparánom 7 (MAS-7) v normotenznom (NT) a hypertenznom (HT) stave. MAS-7 indukuje silné viazanie [35S]GTPyS na HT bunky s EC50 okolo 5 μΜ (obr. 2) . Maximálne viazanie sa zistilo pri okolo 25 až 50 μΜ MAS-7. Oproti tomu koncentrácia vyžadovaná pre to isté viazanie [35S] GTPyS na NT bunky je [sic] 10 krát vyššia (obr. 2). Tieto údaje demonštrujú, že aktivácia G proteinov citlivých na PTX v HT bunkách vyžaduje zreteľne menej aktivovaný receptor ako v NT bunkách.
Obr. 3 ukazuje časový priebeh viazania, stimulovaného mastoparánom 7, buniek [35S] GTPyS k bunkovým líniám z normotenzných (NT) hypertenzných (HT) subjektov.
Viazanie [35S] GTPyS k hypertenzným bunkám je zreteľne urýchľované (rýchlostná konštanta 0,005 s-1 v normotenznom stave oproti 0,01 s1 v hypertenznom stave) .
I ' .
Obr. 4 ukazuje GDP závislosť viazania, stimulovaného mastoparánom 7, izolovaných bunkových membrán k [35S] GTPyS z normotenzných a hypertenzných subjektov. Je zrejmé, že maximum stimulovaného viazania [35S]GTPyS k membránam z hypertenzných subjektov prebieha pri nižšej koncentrácii GDP (okolo 0,2 μπιοί/ΐ), pričom pri normotenzých subjektoch sa vyžaduje koncentrácia na ten istý efekt 1 μιηοΐ/ΐ GDP.
Podobným spôsobom maximum viazania, stimulované mastoparánom 7, [35S] GTPyS k membránam pripraveným z hypertenzných buniek vyžaduje nízku koncentráciu volného Mg2* (okolo 0,'01 mmol/1), zatiaľ čo koncentrácia voľného Mg2* potrebná na dosiahnutie maxima viazania [35S] GTPyS k membránam pripraveným z normotenzných buniek je 0,1 mmol/1 (obr.5).
Pokusy sa nasledovne uskutočnili na rekonštitúciu zvýšenej schopnosti aktivácie G proteínov z hypertenzných buniek. Na tento účel sa čistil fotoreceptor rodopsín a a podjednotka G proteinu transducínu (at) od bovínového oka (Philips, W. J, Wong , S. C. a Cerione, R. A.Rhodopsin/transducin interactions.
II. Influence of the transducine-βγ subunit complex on the coupling of the transducin-a subunit to rhodopsin /Interakcie rodopsín/transducín. II. podjednotka na viazanie
Vplyv komplexu transducín-βγ transducinu - a podjednotky k rodopsínu/. J. Biol. Chem. 267: 17040 - 17 046, 1992). Navyše sa G proteíny extrahovali z membrán z normotenzných a hypertenzných buniek dodaním cholátu (Mitchell, J., Northup, J.
K. a Schimmer, B. P. Defective guanyl nucleotide binding protein βγ subunits in a forskolin-resistant mutant of the Y1 adrenocortical celí line /Defektné podjednotky proteínu viažuceho guanyl nukleotid βγ v mutante rezistentnom na forskolín v adrenokortikálenj bunkovej línii Yl/. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89 (19): 8933 - 8937, 1992). Špecifické viazanie, indukované rodopsínom (= receptor), [35S]GTPyS k atransducinu (at) sa meralo a sledoval sa účinok cholátových extraktov z membrán normotenzných a hypertenzných buniek na toto viazanie. Koncentrácia proteinu v cholátových extraktoch bola tá istá vo všetkých pokusoch.
Obr. 6 ukazuje účinok cholátových extraktov z '1 normotenzných buniek a hypertenzných buniek na viazanie [35S]GTPyS k at, stimulované rodopsínom.
V tomto prípade je jasné , že cholátové extrakty z hypertenzných buniek aktivujú rodopsínom katalyzované viazanie [35S]GTPyS k at zreteľne viac ako sprostredkovanie viazania cholátovými extraktami z normotenzných buniek.
Pokusy, ktoré sú ukázané, umožňujú urobiť nasledujúce závery k obrázkom:
Existuje zvýšená schopnosť aktivácie G proteínov v hypertenzných bunkách. Toto je účinnejšie v porovnaní s aktiváciou G proteínu v normotenzných bunkách, pretože hypertenzné bunky vyžadujú zreteľne menej aktivovaný receptor a navyše kinetika aktivácie G proteínu je zreteľne urýchlená (obr. 2 a 3,.
Okrem toho maximum aktivácie G proteínu vyžaduje zreteľne nižšie koncentrácie voľného GDP a voľných Mg2* v prípade hypertenzných buniek ako v normotenzných bunkách. To vedie k záveru, že proteínové interakcie α, β a γ podjednotiek sú účinnejšie v hypertenzných bunkách ako v normotenzných bunkách (obr. 4 a 5).
Rodopsínom katalyzované viazanie [35S]GTPyS k at je zosilnené zreteľne viac cholátovými extraktami z hypertenzných buniek ako cholátovými extraktami z normotenzných buniek. To dokazuje, že zosilnená aktivácia G proteínu v prípade hypertenzných buniek sa môže rekonštituovať v in vitro systéme (obr. 6) . Okrem toho je možné jednoznačne konštatovať z týchto sledovaní, že zmena v hypertenzných bunkách sa zistila v βγ podjednotkách heterotrimérnych G proteínov. V tomto rekoštituoavanom systéme nie je žiadna aktivácia a podjednotiek, ktoré sú ešte prítomné v cholátových extraktoch v prítomnosti at. Okrem toho dodaný fotoreceptor rodopsín špecificky aktivuje iba dodaný at ale nie a podjednotky, ktoré endogénne zostali v cholátových extraktoch.
Nové proteíny pozostávajú z 299 aminokyselín. V porovnaní s ľudskou podjednotkou Gp3, ktorá bola predtým opísaná, je tam
I de’.écia (v oblasti štvrtého WD opakovania. Avšak kvôli pravidelnosti sekvencie určitých aminokyselín sa môže predpovedať, že nový krátky GP3 proteín bude taktiež tvoriť čistú vrtuľovú štruktúru, ale táto nová vrtuľa by mala pozostávať zo 6 vrtuľových listov (obr. 9), nie viac ako zo 7 (obr. 1) .
Pretože obidva konce N a C nových krátkych ΰβ3 podjednotiek sú nezmenené vzhľadom na predtým známu Θβ3 podjednotku, je možné predpovedať nepoškodené interakcie s a a γ podjednotkami heterotrimérnych G proteínov a s viazanými receptormi. Je zrejmé, v spojení s funkčnými výsledkami opísanými vyššie, že nová krátka σβ3 podjednotka funkčne sprostredkováva zvýšenú aktiváciu heterotrimérnych G proteínov pozorovaných pri hypertenzii.
Predpokladaný dôvod na skrátenie Gbata3 podjednotiek pri hypertenzii je spočíva v alternatívnom spájaní génu, ktorý kóduje ľudský σβ3. Skutočne na DNK hladine je intrón presne vpredu putatívneho spájacieho miesta (obr. 10)
Intrón začína za bázou 497 v otvorenom čítacom rámci, kde A ATG štartujúceho kodónu je definované ako +1.
Hranice intrónu a vetvené miesta sú znázornené kurzívou a podčiarknuté.
GGA CAC CAC GTG grtgaggctgaacattgctggtgctggggcttgggagtggg cccggcctttctcfcaacagtctccctccattttggcag TGC CTT GTC GGA
Pretože intrón sa môže tiež detegovať na začiatku na okolo 620 báze v otvorenom čítacom rámci metódou PCR na genómovej DNK, skrátená forma ľudského Θβ3 tu opísaného je zrejme výsledkom alternatívneho spájania pôvodného σβ3, ktoré je výsledkom delécie kompletného exónu.
- 11 ZOZNAM SEKVENCIÍ (1) VŠEOBECNÉ INFORMÁCIE (i) PRIHLASOVAEĽ:
(A) MENO: BASF Aktiengesellschaft
I (B,· ULICA: Carl-Bosch-Strasse 38 (C) MESTO: Ludwigshafen (D) ŠTÁT: Nemecká spolková republika (E) PSČ: D-67056 (G) TELEFÓN: 0621/6048526 (H) TELEFAX: 0621/6043123 (I) TELEX: 1762175170 (ii) NÁZOV VYNÁLEZU: G proteíny s PTX citlivosťou, príprava a použitie (iii) POČET SEKVENCÍ: 2 . (iv) SPÔSOB ČITATEĽNOSTI NA POČÍTAČI:
I (A) TYP MÉDIA: Disketa (B) POČÍTAČ : Kompatibilný IBM PC (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE : Patentln Release # 1.0, verzia č. 1.25 (EPA) (2) INFORMÁCIA O SEKVENCIÍ SEKV. ID. ČÍS. 1:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:
(A) DĹŽKA: 1394 párov báz (B) TYP: nukleová kyselina (C) REŤAZEC: dvojitý (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) TYP MOLEKULY: cDNK k mRNK (iii) HYPOTETICKÁ: NIE ich (iii) [sicl ANTISENZIA: NIE (vi) PÔVODNÝ ZDROJ:
(A) ORGANIZMUS: Homo sapiens (ix) ČRTY:
(A) MENO/KĽÚČ: CDS . (B) UMIESTNENIE: 1..900, (xi) OPIS SEKVENCIE: SEKV. ID ČÍS. 1:
ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu Lys Lys
1 5 10 15
CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT GCT GAC GTT ACT CTG GCA GAG 96
Gin íle Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu
20 25 30
CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG 144
Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC 192
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys íle Tyr Ala Met His Trp Ala
50 • 1 55 60 » 1
ACT GAT TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC 1 240
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu íle
65 70 75 80
GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC 288
Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala íle Pro Leu Arg
85 90 95
TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336
Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 105 110
GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 384
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser íle Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 432
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 480
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn íle Val Thr Ser
145 150 155 160
TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC 528
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr
165 170 175
TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT 576
Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly His Glu Ser Asp íle Asn Ala íle Cys
180 185 190
TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC 624
Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala íle Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
195 200 205
TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG GCA GAC CAG GAG CTG ATC TGC TTC TCC 672
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu*Leu íle Cys Phe Ser
' 210 215 ’ 220
CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT 720
His Glu Ser íle íle Cys Gly íle Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser
225 230 235 240
GGC CGC CTA CTA TTC GCT GC-C TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG 768
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT GTG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC 816
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg Val Gly íle Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA 864
Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr
275 280 285
GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC AAA ATC TGG AAC TGAGGAGGCT GGAGAAAGGG 917
Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys íle Trp Asn
290 295 , ' 300 1
AAGTGGAAGG CAGTGAACAC ACTCAGCAGC CCCCTGCCCG ACCCCATCTC ATTCAGGTGT ' 977
TCTCTTCTAT ATTCCGGGTG CCATTCCCAC TAAGCTTTCT CCTTTGAGGG CAGTGGGGAG 1037
CATGGGACTG TGCCTTTGGG AGGCAGCATC AGGGACACAG GGGCAAAGAA CTGCCCCATC 1097
TCCTCCCATG GCCTTCCCTC CCCACAGTCC TCACAGCCTC TCCCTTAATG AGCAAGGACA 1157
ACCTGCCCCT CCCCAGCCCT TTGCAGGCCC AGCAGACTTG AGTCTGAGGC CCCAGGCCCT 1217
AGGATTCCTC CCCCAGAGCC ACTACCTTTG TCCAGGCCTG GGTGGTATAG GGCGTTTGGC 1277
CCTGTGACTA TGGCTCTGGC ACCACTAGGG TCCTGGCCCT CTTCTTATTC ATGCTTTCTC 1337
CTTTTTCTAC CTTTTTTTCT CTCCTAAGAC ACCTGCAATA AAGTGTAGCA CCCTGGT 1394
(2) INFORMÁCIA O SEKVENCII SEKV. ID. ČÍS. 2:
(i) CHARAKTERISTIKA SEKVENCIE:
(A) DĹŽKA: 299 aminokyselín (B) TYP: aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (n) TYP MOLEKULY: · protein (xi) OPIS SEKVENCIE: SEKV. ID ČÍS. 2:
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu Lys 15 Lys
1 5 10
Gin íle Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu
20 25 30
Leu Val Ser Gly Leu Glu val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys íle Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 60
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu íle
65 70 75 80
Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala íle Pro Leu Arg
85 90 95
Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 105 110
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser íle Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn íle Val Thr Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr
165 170 175
CysArg Gin Thr Phe Thr Gly His Glu Ser*Asp íle Asn Ala íle Cys
180 185 190
Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala íle Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser
195 200 205
Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg Ala Asp Gin Glu Leu íle Cys Phe Ser
210 215 220
His Glu Ser íle íle Cys Gly íle Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser
225 230 235 240
Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp
245 250 255
Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg val Gly íle Leu Ser Gly His Asp Asn
260 265 270
Arg Val Ser Cys Leu Gly Val Thr Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr
275 280 285
Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu Lys íle Trp Asn
290 295

Claims (22)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. β-3 podjednotka ľudského G proteínu, ktorá pozostáva z nie viac ako 6 WD opakujúcich sa motívov. *
  2. 2. Proteín podľa nároku 1, ktorý má aminokyselinovú sekvenciu označenú ako SEKV. ID. ČÍS. 2.
  3. 3. Sekvencia nukleovej kyseliny kódujúca proteín podľa nároku 1 alebo 2.
  4. 4. Sekvencia nukleovej kyseliny podľa nároku 3, ktorá má sekvenciu opísanú ako SEKV. ID. ČÍS. 1.
  5. 5. Spôsob prípravy proteínu podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, ktorý zahŕňa sekvenciu nukleovej kyseliny podľa niekorého z predchádzajúcich nárokov, kde s vhodným regulačným signálom a expresiou pôsobia v hostiteľskom organizme.
  6. 6. Spôsob podľa nároku 5, kde sa expresia realizuje, v imunitných bunkách imunodeficitných óSôb.
  7. 7. Spôsob podľa nároku 6, kde osoby sú HlV-pozitívne.
  8. 8. Spôsob podľa nároku 5, kde sa expresia realizuje v ľudských telových bunkách.
  9. 9. Použitie sekvencie nukleovej kyseliny podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov na prípravu liečiva na liečenie chorôb spojených s G proteínovou dysreguláciou.
  10. 10. Použitie genetickej modifikácie v géne pre ľudskú G proteínovú β3 podjednotku na diagnózu ochorení.
  11. 11. Použitie genetickej modifikácie v géne pre ľudskú G proteínovú β3 podjednotku na stanovenie rizika trpenia na ochorenie spojené G proteínovou dysreguláciou.
  12. 12. Použitie podľa nároku 10 alebo 11, kde genetická modifikácia zahŕňa sekvenciu nukleovej kyseliny označenú ako SEKV. ID. ČÍS. 1.
  13. 13. Použitie podlá nárokov 10 až 12, kardiovaskulárna choroba, metabolická imunologická choroba.
  14. 14. Použitie podlá nárokov 10 až 12, hypertenzia.
  15. 15. Použitie sekvencie nukleovej kyseliny kde ochorením je porucha alebo kde ochorením je podlá niektorého z predchádzajúcich nárokov na vytvorenie transgénneho živočícha.
  16. 16. Použitie sekvencie nukleovej kyseliny, ktorá je komplementárna k sekvencii nukleovej kyseliny podlá nároku 3 alebo 4 na výrobu antisensie liečiva na liečenie alebo prevenciu ochorení.
  17. 17. Použitie podlá nároku 16, kde ochorením je hypertenzia, tehotenská hypertenzia, koronárne ochorenie srdca, restenóza po angioplastických procedúrach alebo ranách.
  18. 18. Použitie podlá nároku 16, kde ochorením [sic] je následok diabetu ako je nepropatia [sic], polyneuropatia alebo retiŕiopatia [sic] .
    . · * I ' i , ·
  19. 19. Použitie podlá nároku 16, kde ochorením je metastatický tumor.
  20. 20. Spôsob stanovenia relatívneho rizika trpenia na ochorenia spojené s G proteínovou dysreguláciou pre subjekt porovnaním génovej sekvencie ludskej G proteínovej β3 podjednotky subjektu s génovou sekvenciou SEKV. ID. ČÍS. 1 a prípade, že súhlasí so SEKV. ID. ČÍS. 1, stanovenie zvýšeného rizika pre subjekt.
  21. 21. Spôsob podlá nároku 20, kde sa génové porovnanie uskutoční sekvencovaním, reštrikčnou analýzou alebo selektívnou hybridi záciou.
  22. 22. Použitie proteinu podlá nároku 1 alebo 2 na prípravu protilátok smerovaných špecificky proti tomuto proteinu.
SK340-99A 1996-09-13 1997-08-29 Ptx sensitive g proteins, the production and use thereof SK34099A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19637518A DE19637518A1 (de) 1996-09-13 1996-09-13 PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
PCT/EP1997/004709 WO1998011212A1 (de) 1996-09-13 1997-08-29 Ptx-sensitive g-proteine, ihre herstellung und verwendung

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK34099A3 true SK34099A3 (en) 2000-05-16

Family

ID=7805651

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK340-99A SK34099A3 (en) 1996-09-13 1997-08-29 Ptx sensitive g proteins, the production and use thereof

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6251853B1 (sk)
EP (1) EP0931145A1 (sk)
JP (1) JP2001501811A (sk)
KR (1) KR20000036058A (sk)
CN (1) CN1230222A (sk)
AU (1) AU4619297A (sk)
BG (1) BG103238A (sk)
BR (1) BR9711475A (sk)
CA (1) CA2265467A1 (sk)
CZ (1) CZ73499A3 (sk)
DE (1) DE19637518A1 (sk)
EA (1) EA199900253A1 (sk)
EE (1) EE9900092A (sk)
HU (1) HUP9904110A3 (sk)
IL (1) IL128746A0 (sk)
IS (1) IS4987A (sk)
NO (1) NO991227L (sk)
PL (1) PL332417A1 (sk)
SK (1) SK34099A3 (sk)
TR (1) TR199900500T2 (sk)
WO (1) WO1998011212A1 (sk)
ZA (1) ZA978220B (sk)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen
AU3975799A (en) * 1998-05-11 1999-11-29 Axys Pharmaceuticals, Inc. (rhoh) genes and their uses
WO2000015785A2 (de) * 1998-09-10 2000-03-23 Winfried Siffert GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE Gβ3-UNTEREINHEIT DES HUMANEN G-PROTEINS
FR2803525B1 (fr) * 2000-01-06 2002-05-03 Sod Conseils Rech Applic Inhibiteur de la transduction des signaux des proteines g heterotrimeriques associe a un agent anti-hypertenseur dans le traitement de l'hypertension arterielle
CA2399141A1 (en) * 2000-02-03 2001-08-09 Snip Biotech Gmbh & Co. Kg Use of a mutation in the gene for the .beta.3-subunit of human g-protein

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5587561A (en) 1995-07-28 1996-12-24 Budayr; Mahdi Stethoscope shield
DE19619362A1 (de) * 1996-05-14 1997-11-20 Basf Ag Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen

Also Published As

Publication number Publication date
IL128746A0 (en) 2000-01-31
EA199900253A1 (ru) 1999-10-28
EE9900092A (et) 1999-10-15
AU4619297A (en) 1998-04-02
PL332417A1 (en) 1999-09-13
BG103238A (bg) 2000-06-30
IS4987A (is) 1999-02-26
BR9711475A (pt) 1999-08-24
HUP9904110A3 (en) 2001-09-28
WO1998011212A1 (de) 1998-03-19
US6251853B1 (en) 2001-06-26
ZA978220B (en) 1999-03-12
EP0931145A1 (de) 1999-07-28
JP2001501811A (ja) 2001-02-13
DE19637518A1 (de) 1998-04-09
CA2265467A1 (en) 1998-03-19
HUP9904110A2 (en) 2000-07-28
KR20000036058A (ko) 2000-06-26
NO991227D0 (no) 1999-03-12
CN1230222A (zh) 1999-09-29
TR199900500T2 (xx) 1999-06-21
NO991227L (no) 1999-03-12
CZ73499A3 (cs) 1999-07-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6803448B1 (en) GBS toxin receptor
Ulbrecht et al. The HLA-E gene encodes two differentially regulated transcripts and a cell surface protein.
Mery et al. Alternative splice variants of hTrp4 differentially interact with the C-terminal portion of the inositol 1, 4, 5-trisphosphate receptors
JP2000505301A (ja) Ｃ−ｃ ｃｋｒ−５，ｃｃ−ケモカインレセプタ、その誘導体及びこれらの利用
US6482609B1 (en) Isolated human EDG-4 receptor and polynucletide encoding said receptor
WO2006137469A1 (ja) 代謝型グルタミン酸受容体活性化剤
US20030175260A1 (en) Novel DNA and a process for its use
SK34099A3 (en) Ptx sensitive g proteins, the production and use thereof
CA2482810C (en) Teneurin c-terminal associated peptides (tcap) and methods and uses thereof
JPH10150993A (ja) 新規ｇ−蛋白結合受容体ｈｌｔｅｘ１１
US20030175741A1 (en) Schizophrenia related gene
JP2005229804A (ja) 新規なメラニンコンセントレーティングホルモン受容体
US6552177B2 (en) EH domain containing genes and proteins
Zogopoulos et al. The baboon: a model for the study of primate growth hormone receptor gene expression during development
JPH10337189A (ja) 新規化合物
US5985547A (en) Detection of a mutation in the HLA-DMβ gene in an immunocompromised patient
US20040241757A1 (en) Novel screening method using prokineticin receptor
CN100447157C (zh) 雄激素受体复合物相关蛋白
JP2002300892A (ja) 神経細胞付着スプライシング変種
US7056667B2 (en) Spatial learning and memory
US20030166541A1 (en) 83 human secreted proteins
US20030073162A1 (en) Signal peptide-containing proteins
JP2004041175A (ja) ヒトｌｉｇ−１相同体（ｈｌｉｇ−１）
US20030017536A1 (en) Novel polypeptide
JPWO2002088355A1 (ja) 新規なグアノシン三リン酸結合タンパク質共役型の受容体ｐｌａｃｅ６００２３１２およびその遺伝子、並びにそれらの製造および用途