SK2802001A3

SK2802001A3 - Crystalline forms of eto2c-ch2-(r)cgl-aze-pab-oh

Info

Publication number: SK2802001A3
Application number: SK280-2001A
Authority: SK
Inventors: Daniel Edvardsson; Lena Hedstrom; Anita Lundblad; Ursula Pettersson
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1998-09-03
Filing date: 1999-09-02
Publication date: 2001-09-11
Also published as: US20010023244A1; CN1325406A; EA200100194A1; SA99200682B1; US6440939B2; KR100629825B1; NZ524486A; US20060287249A1; IS1942B; YU17301A; AR029312A1; US6888007B2; US20050054579A9; HRP20010132A2; AU763421B2; HK1034721A1; AU6014799A; AP1520A; EA003264B1; PL346544A1

Description

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka nových pevných foriem liečiv, farmaceutických kompozícií, ktoré ich obsahujú a spôsobov ich získania.

Doterajší stav techniky

V prípravkoch kompozícií liečiv je pri liečivej látke dôležité, aby bola vo forme, v ktorej sa s ňou dá pohodlne manipulovať a spracovávať. Toto je dôležité nielen z hľadiska dosiahnutia komerčne realizovateľného procesu; ale tiež z hľadiska následnej výroby farmaceutických prípravkov (napríklad orálnych dávkových foriem, ako sú tablety) obsahujúcich účinnú zlúčeninu.

Okrem toho je pri výrobe orálnych kompozícií liečiv dôležité, aby sa po podaní pacientovi dosiahol vierohodný, reprodukovateľný a konštantný profil koncentrácie liečiva v plazme. Toto je predovšetkým významné pri výrobe kompozícií obsahujúcich antitrombotické činidlá.

Chemická stabilita, stabilita v pevnom stave a doba skladovania účinných zložiek sú taktiež veľmi významnými faktormi. Liečivá látka a kompozície, ktoré ju obsahujú, by mali byť schopné byť účinne skladovateľné počas značného časového obdobia, bez toho aby vykazovali signifikantnú zmenu fyzikálnochemických účinných zložiek charakteristík (napríklad svojho chemického zloženia, špecifickej hmotnosti, hygroskopických vlastností a rozpustnosti).

Okrem toho je taktiež dôležité aby boli schopné poskytnúť liečivo vo forme, ktorá je čo možno chemicky najčistejšia.

Amorfné materiály môžu z tohto hľadiska predstavovať významné problémy. Napríklad, s takýmito materiálmi sa typicky ťažko manipuluje a ťažko sa upravujú, vykazujú neistú rozpustnosť a často sa zistí, že sú nestabilné a chemicky nie čisté.

Odborník skúsený v odbore si bude vedomý toho, že ak by sa liek dal získať v stabilnej kryštalickej forme, mohli by sa tým vyriešiť vyššie uvedené problémy.

	• • · • •	• · • · • · • · ·	···· • ··· •	• · • · • · • · ·	• ·
• ·	• · ·	• ·	···	• ·	• ·

Teda, pri výrobe komerčne dostupných a farmaceutický prijateľných kompozícií liečiv je dôležité, či je možné poskytnúť liečivo v materiálovo kryštalickej a stabilnej forme.

Je potrebné však poznamenať, že tento cieľ sa nedá vždy dosiahnuť. Samozrejme, typicky zo samotnej molekulovej štruktúry nie je možné predpokladať, aké bude kryštalické správanie zlúčeniny, či už samotnej alebo vo forme soli. Toto sa dá stanoviť len empiricky.

Medzinárodná patentová prihláška WO 97123499 opisuje viaceré zlúčeniny, o ktorých sa zistilo, že sú využiteľné ako prekurzory inhibítorov trombínu, pričom inhibítory trombínu zodpovedajú všeobecnému vzorcu:

R^a0₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-H pričom R^a predstavuje H, benzyl alebo Ci-e-alkyl, Cgl predstavuje cyklohexylglycín, Aze predstavuje S-azetidín-2-karboxylovú kyselinu a Pab-H predstavuje 4aminometyl-amidinobenzén. Účinné inhibítory trombínu sú opísané v skoršej medzinárodnej patentovej prihláške WO 94/29336.

Dokument WO 97/23499 obsahuje tiež špecifický opis zlúčeniny

EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH kde Pab-OH predstavuje 4-aminometylbenzénamidoxím. Spôsob syntézy tejto zlúčeniny je opísaný v príklade 17 dokumentu WO 97/23499, kde sa čistí pomocou preparatívnej RPLC a izoluje sa v amorfnej forme.

Či je možné získať EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH v kryštalickej forme, nie je v dokumente WO 97/23499 opísané. Okrem toho nie sú tiež poskytnuté žiadne informácie v súvislosti stým, ako by sa táto zlúčenina mohla získať v takejto forme.

Podstata vynálezu

Prekvapujúce sme zistili, že EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH sa môže získať v jednej alebo viacerých formách, ktoré majú v podstate kryštalickú povahu.

-3• · ·· ···· ·· ·· ·· · · · · · · • · · · ··· · ·

Vynález sa teda týka poskytnutia EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli, v podstate v kryštalickej forme (v ďalšom uvádzané ako zlúčeniny podľa vynálezu).

Hoci sme zistili, že je možné pripraviť EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH a jeho soli vo formách, ktoré sú z viac ako z 80 % kryštalické, pod výraz v podstate kryštalické zahrňujeme viac ako 10 % (napríklad viac ako 20 %), výhodne viac ako 30 % a predovšetkým výhodne viac ako 40 % kryštalické. Stupeň (%) kryštalinity môže odborník skúsený v odbore stanoviť s pomocou rontgenovej práškovej difrakcie (X-ray powder diffraction, XRPD). Môžu sa tiež použiť ďalšie metodiky, ako je NMR v pevnom stave, FT-IR, Ramanova spektroskopia, diferenciálna skanovacia kalorimetria (DSC) a mikrokalorimetria.

Vhodné farmaceutický prijateľné soli, ktoré sa môžu uviesť, zahrňujú anorganické a organické, kyslé a zásadité adičné soli, ako sú halogenidové soli (napríklad soli HBr), soli karboxylových kyselín, soli nižších alkánsulfonátov (napríklad lineárnych alebo rozvetvených C^-alkánsulfonátov, výhodne C1.3alkánsulfonátov a špecificky soli etán- a metánsulfonátov) a amónne soli a soli amínov. Soli toluénsulfonátov sa môžu taktiež uviesť. Pre úplný zoznam solí, ktoré sa môžu uviesť, pozri Berge a kol., J. Pharm. Sci., 66, 1 (1977). Avšak uprednostňujeme, aby zlúčeniny podľa vynálezu neboli vo forme soli.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť vo forme solvátu (pod ktorý zahrňujeme hydrát) alebo ďalšie.

Prekvapujúco sme zistili, že zlúčeniny podľa vynálezu vykazujú zlepšenú stabilitu v porovnaní s EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH, pripravenom ako je opísané v dokumente WO 97/23499.

Vynález sa ďalej týka stabilnej formy EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

Termín „stabilita ako je tu uvedený, zahrňuje chemickú stabilitu a stabilitu v pevnom stave.

	• ·· • •	• · • · • · • · ·	···· • ··· • ·	• · • · • · • ·	··
• ·	···	··	···	··	··

Pod pojem chemická stabilita zahrňujeme to, že zlúčenina, alebo soľ, sa môže skladovať v izolovanej forme alebo vo forme prípravku, v ktorom sa poskytuje v zmesi s farmaceutický prijateľnými nosičmi, riedidlami alebo pomocnými látkami (napríklad v orálnej dávkovej forme, ako sú tablety, kapsule a podobne), pri normálnych podmienkach skladovania, s nesignifikantným stupňom chemickej degradácie alebo rozkladu.

Pod pojem stabilita v pevnom stave zahrňujeme to, že zlúčenina, alebo soľ, sa môže skladovať v izolovanej forme alebo vo forme pevného prípravku, v ktorom sa poskytuje v zmesi s farmaceutický prijateľnými nosičmi, riedidlami alebo pomocnými látkami (napríklad v orálnej dávkovej forme, ako sú tablety, kapsule a podobne), pri normálnych podmienkach skladovania, s nesignifikantným stupňom transformácie v pevnom stave (napríklad kryštalizácie, rekryštalizácie, fázového prechodu pevného stavu, hydratácie, dehydratácie, solvatizácie alebo desolvatizácie).

Príklady normálne podmienky skladovania zahrňujú teploty medzi mínus 80 a plus 50 °C (výhodne medzi 0 a 40 °C a predovšetkým výhodne laboratórne teploty, ako je od 15 do 30 °C), tlaky medzi 0,1 a 2 bar (výhodne pri atmosférickom tlaku), relatívne vlhkosti medzi 5 a 95 % (výhodne od 10 do 75 %), a/alebo vystavenie intenzite osvetlenia 460 Ix UV/viditeľné svetlo, počas predĺženého obdobia (t.j. viac ako alebo počas šesť mesiacov). Pri týchto podmienkach sa môže zistiť, že zlúčeniny podľa vynálezu vykazujú menej ako 15 %, výhodne menej ako 10 %, a predovšetkým výhodne menej ako 5 %, chemickej degradácie/rozkladu, alebo prípadne transformácie pevného stavu. Odborník skúsený v odbore si bude vedomý toho, že vyššie uvedené horné a dolné limity pre teplotu, tlak a relatívnu vlhkosť predstavujú extrémy z normálnych podmienok skladovania a že určité kombinácie týchto extrémov sa v priebehu normálneho skladovania nevyskytnú (napríklad teplota 50 °C a tlak 0,1 bar).

Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu výhodne získať kryštalizáciou EtO₂CCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo soli EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

-5• · ·· ······ · ·· ·· · · · · ··· • t · · ··· · ·· • · · · · ····· • · ······ ··· ··· ·· ··· ·· ···

Ešte ďalej sa vynález týka spôsobu prípravy zlúčeniny podľa vynálezu, ktorý zahrňuje kryštalizáciu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

Je možné kryštalizovať EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH a jej farmaceutický prijateľné soli v prítomnosti alebo bez prítomnosti rozpúšťadlového systému (napríklad kryštalizácia sa môže uskutočňovať z taveniny, pri superkritických podmienkach, alebo sa môžu dosiahnuť pomocou sublimácie). Avšak uprednostňujeme to, aby sa kryštalizácia uskutočňovala z vhodného rozpúšťadlového systému.

Zistili sme, že je možné výhodne kryštalizovať EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-PabOH a jeho farmaceutický prijateľné soli pomocou kryštalizácie s následným rozpustením príslušnej zlúčeniny alebo soli, alebo výhodnejšie z roztokov, ktoré sa extrahovali z reakčných roztokov, v ktorých sa vytvorila príslušná zlúčenina alebo soľ, alebo predovšetkým výhodne z reakčných roztokov v ktorých sa vytvorila príslušná zlúčenina alebo soľ.

Rozpúšťadlový systém môže byť heterogénny alebo homogénny a môže teda obsahovať jedno alebo viac organických rozpúšťadiel, ako sú alkylacetáty (napríklad lineárne alebo rozvetvené C^-alkylacetáty, ako je etylacetát, /žopropylacetát a butylacetát), nižšie (napríklad lineárne alebo rozvetvené Ci^alkylalkoholy (napríklad etanol, /zopropanol), alifatické (napríklad C₆-i₂-, ako sú C₇. ₁₂-alifatické) uhľovodíky (napríklad ízooktán a n-heptán) a aromatické uhľovodíky (napríklad toluén), dialkylketóny (napríklad acetón, metyl-/zobutylketón), acetonitril a dialkylétery (napríklad di-ížopropyléter), a/alebo vodné rozpúšťadlá, ako je voda. Môžu sa tiež použiť zmesi vyššie uvedených rozpúšťadiel.

Rozličné kryštalické formy môžu vykazovať rozličné rozpustnosti v rozličných organických rozpúšťadlách pri ktorejkoľvek uvedenej teplote. Z tohto hľadiska sa vyššie uvedené rozpúšťadlá môžu použiť ako anti-rozpúšťadlá (t.j. rozpúšťadlo, v ktorom sú zlúčeniny podľa vynálezu slabo rozpustné), a môžu teda napomáhať procesu kryštalizácie.

-6• · ·· ···· ·· ·· ·· · · · · · · • · · · ··· · · • · ·· ···· ··· ··· ·· ··· ·· ···

Ak sa kryštalizácia uskutočňuje z reakčného rozpúšťadla, v ktorom sa vytvoril EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jeho soľ, alebo z rozpúšťadla v dôsledku extrakcie, potom vhodné rozpúšťadlá zahrňujú alkylacetáty (ako je etylacetát), toluén, metyl-zzobutylketón, nižšie alkylalkoholy (ako je etanol) a podobne.

Kryštalizácia zlúčenín podľa predloženého vynálezu z vhodného rozpúšťadlového systému sa môže dosiahnuť pomocou super-nasýtenia rozpúšťadlového systému, ktorý obsahuje EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jeho soľ (napríklad ochladením, odparením rozpúšťadla a/alebo pomocou pridania anti-rozpúšťadla (t.j. rozpúšťadla, v ktorom sú zlúčeniny podľa vynálezu slabo rozpustné (napríklad /žooktánu, n-heptánu, di-/zopropyléteru, toluénu, acetónu)) alebo znížením rozpustnosti látky pridaním soli (ako je NaCl alebo trietylamín-HCI).

Kryštalizačné teploty a doby kryštalizácie závisia od koncentrácie zlúčeniny v roztoku a od rozpúšťadlového systému, ktorý sa použije.

Kryštalizácia sa môže tiež iniciovať a/alebo uskutočniť s naočkovaním alebo bez naočkovania s kryštálmi vhodnej kryštalickej zlúčeniny podľa vynálezu, a/alebo pomocou nastavenia hodnoty pH.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu pripraviť vo forme solvátu (do ktorého zahrňujeme formu hydrátu, ako je monohydrát) alebo ďalšie (napríklad vo forme anhydrátu). (Termín anhydrát, ako sa používa v tomto kontexte, zahrňuje tiež ansolváty.)

Aby sa zabezpečilo, že sa vytvorí anhydrát, rozpúšťadlo, z ktorého sa kryštalizácia uskutočňuje, by sa malo výhodne vysušiť, buď pred alebo počas procesu kryštalizácie, aby sa znížil obsah vody pod kritickú hodnotu, ktorá by sa výhodne nemala v priebehu kryštalizácie prekročiť. Rozpúšťadlo sa môže sušiť počas procesu kryštalizácie, napríklad znížením obsahu vody zmesi zlúčeniny, ktorá sa má kryštalizovať a vhodným rozpúšťadlovým systémom organické rozpúšťadlo/vodné rozpúšťadlo (napríklad zvýšením množstva organického rozpúšťadla, ktoré je prítomné a/alebo odstránením vody vytvorením azeotropickej zmesi s následnými destiláciami). Jednako však pre určité zlúčeniny podľa

	• e	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	• ·
• ·	···	··	···	··	··

vynálezu sme zistili, že sú anhydrátmi, pričom takéto sušenie rozpúšťadla nie je nevyhnutné na zabezpečenie ich vzniku.

Aby sa zabezpečilo, že sa vytvorí monohydrát, v rozpúšťadle, z ktorého sa kryštalizácia uskutočňuje, musí byť prítomná voda. Obsah vody by sa mal počas kryštalizácie výhodne udržiavať nad kritickou hodnotou uvedenou vyššie.

„Kritická hodnota“ vody závisí od faktorov, ako je teplota, koncentrácia zlúčeniny, ktorá sa má kryštalizovať, v roztoku profil nečistôt a rozpúšťadlový systém, ktorý sa použije, avšak môže sa stanoviť neinventívne.

Predložený vynález sa teda ďalej týka zlúčeniny podľa vynálezu, ktorá je vo forme anhydrátu a zlúčeniny podľa vynálezu, ktorá je vo forme monohydrátu.

Kryštalický anhydrát sa môže pripraviť kryštalizáciou EtO₂C-CH₂-(R)CglAze-Pab-OH z jedného alebo viacerých organických rozpúšťadiel (ako je etylacetát, butylacetát, acetón, etanol, /zopropanol, /zooktán, di-ízopropyléter), vody alebo ich zmesí, ktoré sa môžu vopred vysušiť, a/alebo sa môžu sušiť počas procesu kryštalizácie, tak aby obsah vody bol vyššie uvedenou kritickou hladinou. Teda^- anhydrát sa môže pripraviť pomocou kryštalizácie z rozpúšťadlového systému, ktorý je v podstate bez obsahu vody.

Pod pojem v podstate bez obsahu vody, zahrňujeme to, že obsah vody v rozpúšťadlovom systéme je nižší ako obsah vody, ktorý by mal za následok vytvorenie, nanajvýš 10 % monohydrátu, pre každý príslušný rozpúšťadlový systém a nastavenie kryštalizačných podmienok.

Na rozdiel od toho, kryštalický monohydrát sa môže pripraviť kryštalizáciou EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH z rozpúšťadlového systému obsahujúceho vodu alebo kombináciu vody a jedného alebo viacerých organických rozpúšťadiel, vrátane organických rozpúšťadiel, ktoré sú schopné miešať sa s vodou (napríklad etylacetát, etanol, /zopropanol).

Kryštalický monohydrát sa môže získať tiež rozpúšťaním látky vo vodnom roztoku (napríklad vo vode alebo v zmesiach vody a alkoholu, ako je etanol alebo /zopropanol) s nízkou hodnotou pH s následným pridaním slabej zásady, až pokým

	• • · •	··	···· • ···	• · • · • ·	• ·
• •	• •
	•	•	•	•	• ·
• ·	···		··	···	··	··

hodnota pH nepresiahne (a je výhodne práve nad) hodnotou približne 5 až 6 (pri laboratórnej teplote).

Kryštalický monohydrát sa tiež môže pripraviť cez iné kryštalické formy (ako je bezvodá forma). Toto sa dosiahne vtedy, ak kritický sa obsah vody, ktorý je uvedený vyššie, počas kryštalizácie prekročí. Podobne, kryštalický anhydrát sa môže pripraviť z kryštalického monohydrátu znížením obsahu vody pod vyššie uvedený kritický obsah vody počas procesu kryštalizácie.

Či anhydrát alebo monohydrát kryštalizuje je spojené s kinetikou a podmienkami rovnováhy príslušných foriem pri špecifických podmienkach. Teda, ako si bude vedomý odborník skúsený v odbore, kryštalická forma, ktorá sa získa, závisí ako od kinetiky tak aj od termodynamiky kryštalizačného procesu. Pri určitých termodynamických podmienkach (rozpúšťadlový systém, teplota, tlak a koncentrácia zlúčeniny podľa vynálezu), jedna kryštalická forma môže byť stabilnejšia ako iná (alebo v skutočnosti ktorákoľvek iná). Avšak, kryštalické formy, ktoré majú relatívne nízku termodynamickú stabilitu môžu byť kinetický priaznivé. Teda okrem iného, kinetické faktory, ako je čas, profil nečistôt, miešanie, prítomnosť alebo neprítomnosť zárodkov kryštálov, a podobne, môžu taktiež ovplyvňovať to, aká forma sa pripraví. Teda tu diskutované postupy môže odborník skúsený v odbore prijať ako vhodné na to, aby sa získali rozličné kryštalické formy.

Kryštalický monohydrát sa môže tiež vytvoriť elutriáciou iných kryštalických foriem (napríklad bezvodej formy) vo vode alebo v zmesi vody a jedného alebo viacerých organických rozpúšťadiel (ako je etanol alebo /zopropanol). Suspenzia, ktorá sa vytvorí, by sa mala výhodne naočkovať kryštálmi kryštalického monohydrátu, aby sa zabezpečilo, že sa uskutoční vhodná transformácia. .Tak ako bolo uvedené vyššie, obsah vody je kritický, pričom tento obsah závisí od rozpúšťadlového systému, ktorý sa použije, a od teploty.

Zistili sme teda, že zlúčeniny podľa predloženého vynálezu v jednej kryštalickej forme sa môžu interkonvertovať pomocou rekryštalizácie na iné kryštalické formy.

• · ·	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
		• ·	•	• ·
• ·	···	··	···	··	··

Ešte ďalej sa predložený vynález týka spôsobu konverzie jednej kryštalickej formy zlúčeniny podľa vynálezu na inú, pričom zahrňuje rekryštalizáciu zlúčeniny podľa vynálezu z vhodného rozpúšťadlového systému.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu, ktoré sú anhydrátmi, obsahujú nie viac ako 3 %, výhodne 2 % a predovšetkým výhodne 1 % a najvýhodnejšie 0,5 % (h m o t./h m o t.) vody, pričom táto voda je viazaná (kryštalická voda alebo viazaná iným spôsobom) alebo nie je viazaná. Hydráty obsahujú nie menej ako 0,5 mol vody na mól EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH.

Výhodnými zlúčeninami podľa predloženého vynálezu sú také zlúčeniny, ktoré sú vo forme anhydrátu. Predložený vynález sa ďalej týka zlúčeniny podľa vynálezu, ktorá obsahuje nie viac ako 3 % (hmot./hmot.), výhodne nie viac ako 2 % (hmot/hmot), vody, pričom táto voda je viazaná (kryštalická voda alebo viazaná iným spôsobom) alebo nie je viazaná.

Ak sa má zlúčenina podľa vynálezu pripraviť vo forme kyslej alebo zásaditej adičnej soli, môže sa vhodné množstvo vhodnej kyseliny alebo zásady pridať ku kryštalizačnej zmesi pred tým, ako sa uskutoční kryštalizácia. Alternatívne, po pridaní soli sa môžu všetky rozpúšťadlá odpariť a výsledná kryštalická a/alebo amorfná forma soli sa môže opätovne rozpustiť vo vhodnom rozpúšťadlovom systéme, ako je etylformiát alebo alkylalkohol, ako je n-heptanol alebo n-oktanol, s následným miešaním výsledného roztoku s cieľom vyvolania kryštalizácie.

Výhodné adičné soli zahrňujú kyslé adičné soli, ako sú hydrobromidové a metánsulfonátové soli.

Príprava a charakterizácia foriem zlúčenín podľa predloženého vynálezu, okrem iného tiež anhydrátovej a monohydrátovej formy, je opísaná v ďalšom. Rozličné kryštalické formy zlúčenín podľa vynálezu (napríklad anhydrátu a monohydrátu) sa môžu jednoducho charakterizovať s použitím metód rôntgenovej práškovej difrakcie (XRPD), napríklad ako je opísané v ďalšom.

Aby sa zabezpečilo, že kryštalické formy, ako sú tu opísané, sa pripravia bez prítomnosti ďalších tu opísaných kryštalických foriem, kryštalizácia sa výhodne

• · • · · • ·	·«	···· • ···	• · • · • ·	··
• •	• •
	•	•	•	•	• ·
• ·	···	··		···	• e	··

uskutočňuje naočkovaním s jadrami a/alebo zárodkami kryštálov požadovanej kryštalickej formy bez úplnej neprítomnosti jadier a/alebo zárodkov kryštálov iných kryštalických foriem, ktoré sú tu opísané. Toto sa uplatňuje predovšetkým pri každej zo špecifických kryštalických foriem, príprava ktorých je opísaná ďalej v príkladoch.

Zlúčeniny podľa predloženého vynálezu sa môžu izolovať s použitím metodík, ktoré sú pre odborníkov skúsených v odbore dobre známe, napríklad dekantáciou, filtrovaním alebo centrifúgovaním.

Zlúčeniny sa môžu sušiť s použitím štandardných metód. Odborník skúsený v odbore si bude vedomý toho, že teplota sušenia a doba sušenia môžu ovplyvniť vlastnosti zlúčenín v pevnom stave (alebo solí) ktoré sú vo forme solvátov, ako sú hydráty (napríklad dehydratácia sa môže uskutočňovať pri zvýšených teplotách a/alebo zníženom tlaku). Napríklad po vytvorení kryštalického monohydrátu, jestvuje kritická vlhkosť, pod ktorú by sa sušenie nemalo uskutočňovať, pretože môže prísť ku strate kryštálovej vody a môže nastať transformácia pevného stavu , t.j. kryštálová voda sa stratí, ak sa kryštály budú sušiť pri vysokých teplotách alebo pri veľmi nízkych tlakoch počas dlhšieho obdobia:

Zistili sme, že použitím kryštalizačného procesu, ako je tu opísaný, je možné pripraviť zlúčeniny podľa vynálezu s chemickou čistotou, ktorá je vyššia ako chemická čistota EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH, alebo soľ, ktorú je potrebné izolovať v prvom stupni.

Ďalšie prečistenie zlúčenín podľa vynálezu sa môže uskutočniť s použitím metód, ktoré sú pre odborníkov v odbore dobre známe. Napríklad, nečistoty sa môžu odstrániť pomocou rekryštalizácie z vhodného rozpúšťadlového systému (ako je napríklad etylacetát, /žopropanol, ížooktán, etanol, voda alebo kombinácia týchto rozpúšťadiel). Vhodné teploty a časy pre rekryštalizáciu závisia od koncentrácie zlúčeniny alebo soli v roztoku a od rozpúšťadlového systému, ktorý sa použije.

-11 • · ·· <··· ··· ·· ·· · · · · ··· • · · · ··· · ·· • ···· ····· • · · ····· ··· ··· ·· ··· ·· ···

Ak sa zlúčeniny podľa vynálezu kryštalizujú alebo rekryštalizujú, ako je tu opísané, výsledná zlúčenina alebo soľ je vo forme, ktorá má zlepšenú chemickú stabilitu a stabilitu v pevnom stave, ako je uvedené vyššie.

Farmaceutické prípravky a lekárske použitie

V súlade s predloženým vynálezom sa zlúčeniny podľa vynálezu môžu podávať orálne, intravenózne, subkutánne, bukálne, rektálne, dermálne, nasálne, tracheálne, bronchiálne, akoukoľvek inou parenterálnou cestou alebo prostredníctvom inhalácie, vo forme farmaceutického prípravku obsahujúceho zlúčeninu podľa vynálezu vo farmaceutický prijateľnej dávkovej forme. Avšak uprednostňujeme, aby zlúčenina podľa vynálezu bola vo forme, ktorá je vhodná na orálne podávanie.

V závislosti od ochorenia a od pacienta, ktorý sa má liečiť, ako aj od spôsobu podávania, sa zlúčeniny môžu podávať v rozličných dávkach (pozri nižšie).

Zlúčeniny podľa vynálezu sa môžu ďalej spracovať pred formulovaním do vhodného farmaceutického prípravku. Napríklad, kryštalická forma sa môže rozdrviť alebo zomlieť na menšie častice.

Predložený vynález sa ďalej týka farmaceutického prípravku, ktorý obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu v zmesi spolu s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.

Množstvo zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré sa používa v takýchto prípravkoch bude závisieť od stavu a pacienta, ktorý sa má liečiť, ako aj od zlúčeniny (zlúčenín), ktorá sa používa/ktoré sa používajú, avšak môžu sa stanoviť neinventívne.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa využiteľné, pretože sa metabolizujú po podaní v tele za vzniku zlúčenín, ktoré vykazujú farmakologickú účinnosť. Preto sa označujú ako farmaceutiká a predovšetkým ako prekurzory farmakologicky účinných zlúčenín.

• · • ·· • ·	• ·	···· • ···	• · • •	• •	• ·
• •	• •
	•	•	•	•	•	•
• ·	···	··		···	··		··

Predovšetkým sa zlúčeniny podľa vynálezu, hoci samotné sú inaktívne voči trombínu, metabolizujú v tele, pričom tvoria účinné inhibítory trombínu, ako je napríklad demonštrované v testoch opísaných v dokumente WO 97/23499. Predpokladá sa, že zlúčeniny podľa vynálezu budú využiteľné pri liečbe stavov, pri ktorých sa požaduje alebo je vhodná inhibícia trombínu, vrátane takých stavov, ako sú opísané v dokumente WO 97/23499, pričom týmto je tento dokument začlenený formou odkazu.

Vhodné dávky zlúčeniny podľa vynálezu pri terapeutickej a/alebo profylaktickej liečbe cicavcov, predovšetkým človeka, sú v rozsahu od 2 do 200 mg na deň pri perorálnom podávaní a 1 až 100 my na deň pri parenterálnom podávaní a/alebo 0,001 až 20 mg/kg, výhodne 0,01 až 5 mg/kg, telesnej hmotnosti na deň pri perorálnom podávaní a 0,0005 až 10 mg/kg, výhodne 0,005 až 2,5 mg/kg, telesnej hmotnosti pri parenterálnom podávaní.

Predložený vynález sa ešte ďalej týka spôsobu liečby stavov, pri ktorých sa požaduje alebo je vhodná inhibícia trombínu, pričom tento spôsob zahrňuje podávanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa vynálezu pacientov, ktorý potrebuje takéto liečenie.

Na vylúčenie pochybností, pod pojem liečenie zahrňujeme terapeutické liečenie ako aj profýlaxiu stavu.

Zlúčeniny podľa vynálezu sú výhodné v tom, že sú vo forme, ktorá poskytuje zlepšenú jednoduchú manipuláciu. Okrem toho, zlúčeniny podľa vynálezu sú výhodné v tom, že sa môžu vyrábať vo formách, ktoré majú zlepšenú chemickú stabilitu a stabilitu v pevnom stave (vrátane nižšej hygroskopicity). Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť teda stabilné pri stabilné pri skladovaní počas predĺžených časových období.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť tiež výhodné v tom, že môžu kryštalizovať v dobrých výťažkoch, vo vyššej čistote, v kratšom čase, vyhovujúcejšie a pri nižších nákladoch než formy EtO2C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH, ktoré boli pripravené predtým.

• · ·· ···· ··e ·· ·· ······· · · · ··· · «· • · · · · ···· · « · · ····· ··· ··· ·· ··· ·· ···

Vynález je ďalej ilustrovaný, avšak nie je obmedzený, nasledujúcimi príkladmi, s odkazom na pripojené obrázky, na ktorých:

Obrázok 1 znázorňuje difraktogram získaný pomocou rontgenovej práškovej difrakcie pre kryštalickú formu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získanú spôsobom podľa príkladu 1.

Obrázok 2 difraktogram získaný pomocou rontgenovej práškovej difrakcie pre kryštalickú formu monohydrátu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získanú spôsobom podľa príkladu 6.

Obrázok 3 difraktogram získaný pomocou rontgenovej práškovej difrakcie pre kryštalickú formu hydrobromidu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získanú spôsobom podľa príkladu 9.

Obrázok 4 difraktogram získaný pomocou rontgenovej práškovej difrakcie pre kryštalickú formu metánsulfonátu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získanú spôsobom podľa príkladu 12.

Obrázok 5 difraktogram získaný pomocou rôntgenovej práškovej difrakcie pre kryštalickú formu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získanú spôsobom podľa príkladu 14.

Všeobecné postupy

Rontgenová prášková difrakčná analýza (XRPD) sa uskutočňovala na vzorkách pripravených s použitím štandardných metód, ako sú napríklad metódy, ktoré opísali Giacovazzo, C. a kol. (1995), Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. a Snyder, R. L. (1996), Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; Bunn, C. W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; alebo Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York. Rôntgenové práškové analýzy sa uskutočnili s použitím difraktometra Siemens D5000 a/alebo difraktometra Philips X'Pert MPD.

Diferenciálna skanovacia kalorimetria (differential scanning calorimetry,

DSC) sa uskutočnila s použitím zariadenia Mettler DSC820, v súlade so

	•	··	····	··
	··	• ·	•	• ·	··
	•	•	•	···	• ·
	•	• ·	•	•	• · ·
	•	•	•	•	• ·
··	• ··	··	···	··	··

štandardnými metódami, ako sú napríklad metódy, ktoré opísali Hóhne, G. W. H. a kol. (1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlín.

Termogravimetrická analýza (TGA) sa uskutočnila s použitím zariadenia Mettler Toledo TGA850.

Formy pripravené podľa nižšie uvedených príkladov ukazujú v podstate rovnaké XRPD difrakčné charakteristiky a/alebo DSC a/alebo TGA termogramy ako ďalšie nižšie opísané príklady, ak je zjavné z relevantných charakteristík/termogramov (s povolenou experimentálnou chybou), že sa vytvorila rovnaká kryštalická forma. Teda, DSC počiatočné teploty môžu varírovať v rozsahu ±5 °C (napríklad ±2 °C), a XRPD dištančné hodnoty môžu varírovať v rozsahu ±2 na poslednom desatinnom mieste.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Kryštalizácia EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

200 mg EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (amorfný; získaného sušením produktu, ktorý sa pripravil podľa spôsobu opísaného v príklade 17 medzinárodnej patentovej prihlášky WO 97/23499, vymrazením) sa rozpustilo v zmesi di/zopropyléter:/zopropanol (14 ml; 1:1). Najskôr sa vytvoril homogénny roztok, ktorý sa nechal stáť počas 24 hodín pri laboratórnej teplote. Filtrácia a vysušenie (teplota prostredia) poskytli 160 mg kryštalického produktu.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a výsledky sú uvedené nižšie v tabuľkách (Tabuľka 1, v ktorej RI predstavuje relatívnu intenzitu) a znázornené na obrázku 1.

Tabuľka 1

d-hodnota/Ĺ	RI	d-hodnota/Ĺ	RI
12,0	veľmi silný	4,22	slabý
10,0	stredný	4,11	stredný
8,2	silný	4,06	stredný
7,2	stredný	3,99	stredný
6,0	stredný	3,78	slabý

	• • · •	·· ···· • · · • · ···	·· · • · · · • · ·
• ·	• · ·	·· ···	·· ··

5,5	stredný	3,72	stredný
5,0	stredný	3,62	stredný
4,92	silný	3,34	slabý
4,85	silný	3,11	slabý
4,80	stredný	3,10	slabý
4,42	stredný	3,03	slabý

Jednotková bunka sa stanovila z rontgenových údajov jednoduchého kryštálu. Bola trojklonná, s P1 symetriou, Z=1, a s nasledujúcimi rozmermi: a = 5,149(1) Ĺ, b = 10,466(1) Ĺ, c = 12,317(1) Ĺ, a = 80,32(1)°, β = 79,78(1)°, γ = 75,57(1)° a V = 627,2(2) Ĺ³.

DSC vykazovala endotermu s extrapoláciou nábehu teploty približne 150 °C (približne 113 J/g). TGA vykazovala pokles hmotnosti približne 0,.6 % (hmot./hmot.) pri teplote okolo 150 °C.

Príklad 2

Príprava kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH z extrahovaného roztoku ml etylacetátu sa predložilo do 140,3 g extrahovaného roztoku EtO₂CCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (pripraveného podľa syntézy analogickej s postupom opísaným v medzinárodnej patentovej prihláške WO 97/23499, s použitím etanolu ako rozpúšťadla, rýchlym ochladením s acetónom, zahustením výsledného roztoku a extrahovaním s etylacetátom). Takto pripravený roztok sa obsahoval etylacetát, etanol a vodu (8,7% hmot./hmot.). Roztok sa zahustil a vysušil postupnými destiláciami, ktoré sa uskutočnili pri tlaku 250 mbar a teplote kúpeľa 60 °C. 70 ml etylacetátu sa pridalo do počiatočného roztoku, ktorý sa zahustil, až pokým sa nezostalo 46 g roztoku. Potom sa do roztoku pridalo 103 ml etylacetátu, ktorý sa znova zahustil, až pokým nezostalo 70,5 g roztoku. Pridali sa zárodky kryštálov získané analogicky ako v postupe opísanom v príklade 3 a výsledná suspenzia sa miešala počas 3 hodín pri teplote 40 °C, ochladila sa na teplotu 20 °C po dobu 5 hodín, potom na teplotu 5 °C po dobu 2,5 hodiny a napokon na teplotu - 5 °C po dobu 1 hodiny. Suspenzia sa potom miešala pri tejto konečnej teplote cez noc a kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s etylacetátom a vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc.

	•	• ·	»·· ·	·· ·
	• ·	• · ·	• · · ·
	•	•	• ···	• · ·
• ·	···	··	·· ·	·· ··

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a zníženie hmotnosti, ako vykazovala forma, ktorá sa získala podľa postupu z príkladu 1, ktorý je uvedený vyššie.

Rekryštalizácia EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Príklad 3

3,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa spôsobu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustil v 49,5 m /zopropanolu a 4,5 ml prečistenej vody pri teplote 60 °C. Roztok sa zahustil a vysušil sa pri následných destiláciách, uskutočnených pri tlaku 100 mbar a teplote kúpeľa 60 °C. Roztok sa najskôr zahustil, až pokým nezostalo 17,5 g. Potom sa do výsledného roztoku pridalo 30 ml /zopropanolu a roztok sa znova zahustil, až pokým nezostalo 20 g. Do roztoku sa potom pridalo 1,8 g /zopropanolu a zárodky kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získané pomocou spôsobu, ktorý bol analogický s postupom opísaným v príklade 5 uvedenom nižšie). Suspenzia sa miešala počas 3 hodín pri teplote 40 °C a potom sa ochladila na teplotu 20 °C po dobu 5 hodín, na teplotu 5 °C po dobu 2,5 hodiny a na teplotu -5 °C po dobu jednu hodiny. Suspenzia sa potom miešala pri tejto konečnej teplote cez noc. Kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s /zopropanolom a vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a pokles hmotnosti, ako kryštály, ktoré sa získali podľa postupu vyššie uvedeného príkladu 1.

Príklad 4

4,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustil v 2 ml prečistenej vody, 16 ml etanolu a 45 ml etylacetátu pri teplote 55 °C. Roztok sa zahustil a vysušil pomocou následných destilácií uskutočnených pri tlaku 250 mbar a teplote kúpeľa 55 °C. Roztok sa najskôr zahustil, až pokým nezostalo 30 g zvyšku. Potom sa ku zvyšku pridalo 32 ml etylacetátu a roztok sa znova zahustil, až pokým nezostalo 28

	•	• ·	• · · ·	• · ·
	• ·	•	• ·	• · ··
	•	•	• ···	• · ·
• ·	···	··	···	·· ··

g. Pridalo sa ďalších 16 m etylacetátu a roztok sa zahustil, až pokým nezostalo 33 g zvyšku. Ku roztoku sa pridalo zárodky kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-PabOH (získané v príklade 3, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 3 hodín pri teplote 40 °C a potom sa ochladila na teplotu 20 °C po dobu 5 hodín, na teplotu 5 °C po dobu 2,5 hodiny a na teplotu -5 °C po dobu 1 hodiny. Suspenzia sa potom miešala pri tejto konečnej teplote cez noc. Kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s etylacetátom a vysušili sa pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a pokles hmotnosti, ako vykazovala forma, ktorá sa získala podľa príkladu 1, uvedeného vyššie.

Príklad 5

3,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustil v 4,5 ml prečistenej vody a

49,5 ml /zopropanolu pri teplote 55 až 60 °C. Roztok sa zahustil a vysušil pomocou následných destilácií uskutočnených pri tlaku 100 mbar a teplote kúpeľa 60 °C. Roztok sa najskôr zahustil, až pokým nezostalo 16 g zvyšku. Roztok sa miešal pri teplote 40 °C, potom sa ku zvyšku pridalo 18 ml /žooktánu a ku roztoku sa pridali zárodky kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získané v príklade 3, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 3 hodín pri teplote 40 °C a potom sa ochladila na teplotu 15 °C po dobu 6 hodín. Suspenzia sa potom miešala pri tejto konečnej teplote cez noc. Kryštály sa odfiltrovali, premyli sa so zmesou /zopropanol: /zooktán (1 :1) a vysušili sa pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc.

Kryštalizácia monohydrátu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH

Príklad 6

3,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustil v 1,5 ml prečistenej vody,

-Ιβ-

	• • · •	·· • · • ·	·.··· • ···	·· · • · · · • · ·
• ·	···	··	···	·· ··

10,5 ml etanolu a 36 ml etylacetátu pri teplote 55 °C. Roztok sa zahustil destiláciou pri tlaku 250 mbar a teplote kúpeľa 55 °C, až pokým nezostalo 18 g zvyšku. Potom sa k roztoku pridalo 30 ml etylacetátu, a roztok sa následne zahustil, až pokým nezostalo 21 g zvyšku. Ku roztoku sa pridalo 3,7 g etylacetátu, 0,9 g prečistenej vody a zárodky kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získané v príklade 3, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 3 hodín pri teplote 40 °C a potom sa ochladila na teplotu 20 °C po dobu 5 hodín, na teplotu 5 °C po dobu 2,.5 hodín a na teplotu -5 °C po dobu 1 hodiny. Suspenzia sa potom miešala pri tejto konečnej teplote ďalší deň. Kryštály sa odfiltrovali, premyli sa etylacetátom a vysušili sa pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku (150 mbar) cez noc.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a výsledky sú zosumarizované nižšie (Tabuľka 2, v ktorej Rl predstavuje relatívnu intenzitu) a sú zobrazené na obrázku 2.

DSC vykazovala endotermu s extrapoláciou nábehu teploty približne 94 °C (približne 171 J/g). Kryštály sa analyzovali pomocou Karl-Fischerovej titrácie a pomocou TGA. TGA vykazovala pokles hmotnosti približne 3,5 % (hmot./hmot.) pri teplote okolo 85 °C, zodpovedajúco k monohydrátu, a dekompozícia sa naštartovala pri teplote okolo 210°C.

Tabuľka 2

d-hodnota/Ĺ	Rl	d-hodnota/Ĺ	Rl
16,4	silný	4,21	slabý
13,7	silný	4,11	stredný
9,4	veľmi silný	4,04	stredný
8,2	slabý	3,93	slabý
7,1	stredný	3,89	stredný
6,2	stredný	3,83	stredný
5,5	slabý	3,68	stredný
5,1	stredný	3,52	slabý
4,98	slabý	3,47	slabý
4,75	silný	3,34	stredný
4,68	silný	3,26	slabý
4,57	stredný	3,02	slabý
4,48	stredný	2,61	slabý
4,27	silný	2,42	slabý

• · ··	····	• · ·
• ·· · ·	•	• · ··
• · · ·	···	• · ·
• · · · ·	•	• · · ·
• · · ·	•	• · ·
·· ··· ··	···	·· ··

Príklad 7

5,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustil v 45 ml /zopropanolu a 30 ml prečistenej vody pri teplote 40 °C. Roztok sa filtroval až pokým nebol číry a zahustil sa destiláciou pri zníženom tlaku pri teplote 40 °C, až pokým sa nezískalo 45 g zvyšku. Roztok sa potom ochladil rýchlosťou 10°C/hodinu zo 40 °C na -10 °C. Suspenzia sa potom miešala počas jedného dňa pri tejto konečnej teplote a kryštály sa odfiltrovali a premyli sa s /zopropanolom a vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku (150 mbar) cez noc.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a pokles hmotnosti ako vykazovali kryštály formy získanej podľa príkladu 6, uvedeného vyššie.

Príklad 8

2,7 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustilo pri teplote 70 °C v 20 ml etanolu a 30 ml prečistenej vody. Roztok sa miešal a naočkoval kryštálmi EtO₂CCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získanými podľa postupu opísaného v príklade 6, uvedenom vyššie). Etanol sa pomaly odparil v priebehu dvoch dní. Kryštály sa odfiltrovali a vysušili pri teplote 40 °C (tlak 200 mbar) cez víkend.

Príprava kryštalického EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH . HBr

Príklad 9

7,08 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustilo v 200 ml /zopropanolu a 2,52 g 47 % HBr pri teplote 40 °C. Roztok sa odparil do sucha pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku. Do výsledného zvyšku sa pridalo ďalších 120 ml /zopropanolu s cieľom zbavenia vody, a výsledný roztok sa odparil do sucha. Amorfná látka sa

-20• · ·· ···· ·· • · · · ··· ··· • · · · ··· · · potom rozpustila vheptanole pri teplote prostredia. Po následnom miešaní sa vytvorili kryštály. Suspenzia sa miešala cez noc, kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s heptanolom a vysušili pri teplote 80 °C pri zníženom tlaku cez noc.

Kryštály sa analyzovali titráciou s 0,1 M NaOH a titráciou s 0,1 M AgNO₃. Koncentrácia látok podľa titrácie s NaOH predstavovala 96,6 % (hmot./hmot.). Množstvo Br podľa titrácie sAgNO₃ predstavovalo 13,9 % (hmot./hmot.), čo naznačuje predpokladanú monohydrobromidovú soľ, v koncentrácii soli 96,4 % (hmot./hmot.). Zostávajúci zvyšok predstavovalo rozpúšťadlo.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a výsledky sú zosumarizované v nižšie uvedenej tabuľke (tabuľka 3, v ktorej RI predstavuje relatívnu intenzitu) a sú zobrazené na obrázku 3.

Tabuľka 3

d-hodnota/Ĺ	RI	d-hodnota/Ĺ	RI
12,0	veľmi silný	3,92	stredný
10,1	silný	3,82	stredný
9,5	stredný	3,72	slabý
6,0	stredný	3,69	stredný
5,7	silný	3,62	slabý
5,6	stredný	3,51	slabý
5,2	stredný	3,48	stredný
5,1	silný	3,38	stredný
4,95	silný	3,25	slabý
4,74	slabý	3,06	slabý
4,57	slabý	2,92	slabý
4,41	stredný	2,86	slabý
4,35	stredný	2,71	slabý
4,17	slabý	2,53	slabý
4,07	stredný	2,33	slabý
4,03	stredný

DSC vykazovala endotermu s extrapoláciou nábehu teploty približne 166 °C (približne 69 J/g).

Príklad 10 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustilo v 120 ml izopropanolu a 2,9 g 47 % HBr pri teplote 40 až 50 °C. Roztok sa odparil do sucha, pričom

	•	• ·	····	·· ·
	··	•	• ·	• · ··
	•	•	• ···	• · ·
• ·	···	··	·· ·	·· ··

poskytol amorfnú látku, ktorá sa rozpustila v 1-oktanole. Roztok sa miešal pri teplote prostredia a po chvíli nastala kryštalizácia. Suspenzia sa miešala cez noc, kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s 1-oktanolom a vysušili sa pri teplote 80 °C pri zníženom tlaku cez víkend.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a DSC a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a pokles hmotnosti ako vykazovali kryštály formy získanej podľa príkladu 9, uvedeného vyššie.

Príklad 11 g EtO2C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustilo v 22 ml /zopropanolu a 0,36 g 47 % HBr pri teplote 45 °C. Roztok sa filtroval, pokým nezostal číry zahustil sa destiláciou pri zníženom tlaku, až pokým sa nezískalo 3,85 g zvyšku : Roztok sa miešal pri teplote 40 ⁰ C a pomaly sa pridalo 6 ml toluénu. Roztok sa naočkoval s kryštálmi hydrobromidovej soli (získanými analogicky podľa spôsobu opísaného v príklade 9 uvedenom vyššie). Keď suspenzia zbelela, pridalo sa ďalších 9 ml toluénu. Suspenzia sa miešala a teplota poklesla na 20 ⁰ C. Suspenzia sa miešala cez noc, kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s toluénom a vysušili sa pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príprava kryštalického EtO2C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH . CH₃SO₃H

Príklad 12 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (surový; získaný podľa postupu opísaného v príklade 2, uvedenom vyššie) sa rozpustilo v 500 ml /zopropanolu a 2,03 g kyseliny metánsulfónovej (1 ekv.) pri teplote 50 °C. Roztok sa odparil do sucha pri teplote 50 °C pri zníženom tlaku, pričom sa vytvoril amorfný pevný materiál. 1,5 g tejto látky sa rozpustilo v 15 ml etylmravčanu a roztok sa miešal pri teplote prostredia cez noc. Vytvorené kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s etylmravčanom a vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc. Kryštály

	•	• ·	····	·· ·
	··	• · ·	• · ··
	•	•	• ···	• · ·
• ·	• · ·	··	···	·· ··

sa analyzovali titráciou s 0,1 M NaOH, dvojfázovou titráciou. Koncentrácia (99,9 % ) sa vypočítala na základe predpokladu tvorby mono-mezylátu.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a výsledky sú zosumarizované v nižšie uvedenej tabuľke (tabuľka 4, v ktorej Rl predstavuje relatívnu intenzitu) a sú zobrazené na obrázku 4.

DSC vykazovala endotermu s extrapoláciou nábehu teploty okolo 134 °C (približne 93 J/g).

Tabuľka 4

d-hodnota/Ĺ	Rl	d-hodnota/Ĺ	Rl
12,0	silný	3,84	silný
11,7	veľmi silný	3,74	stredný
10,4	silný	3,65	silný
10,2	silný	3,56	silný
8,3	slabý	3,47	stredný
7,8	silný	3,39	stredný
6,0	stredný	3,22	stredný
5,6	silný	3,12	stredný
5,5	silný	2,95	slabý
5,2	silný	2,88	stredný
5,1	stredný	2,76	stredný
5,0	silný	2,74	stredný
4,98	silný	2,69	slabý
4,90	silný	2,65	stredný
4,75	stredný	2,54	slabý
4,63	stredný	2,52	slabý
4,54	stredný	2,49	slabý
4,46	silný	2,27	slabý
4,15	silný	2,21	slabý
4,06	silný	2,04	slabý
3,92	silný	2,02	slabý

Príklad 13

3,0 g amorfnej látky z prvej časti príkladu 12 sa rozpustilo v 15 ml oktanolu. Roztok sa miešal pri laboratórnej teplote cez noc. Vytvorené kryštály sa odfiltrovali, premyli sa s oktanolom a vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku cez noc.

	• ·· •	·· • •	• •	···· • ···	··	··
• •	• •
	•	•	•	•	•	•
··	···	··		···	··		··

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD a DSC a vykazovali v podstate rovnaké difrakčné charakteristiky, nábeh teploty a pokles hmotnosti ako vykazovali kryštály formy získanej podľa príkladu 12, uvedeného vyššie.

Príprava ďalšej kryštalickej formy EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH z EtO₂C-CH₂(R)Cgl-Aze-NH-CH₂-C₆H₄-CN

Príklad 14

0,0029 g EDTA sa rozpustilo v 16,4 g vodného hydroxylamínu (50 % (hmot./hmot.)) a 110 ml etanol a potom sa pridalo do oplášťovaného skleneného reaktora, ktorý sa udržiaval pri teplote 32 °C. Do reaktora sa pridalo 118,5 g roztoku glycin, N-[1 -cyklohexyl-2-[2-[[[[4-[kyano]fenyl]metyl]amino]karbonyl]-1 azetidinyl]-2-oxoetyl]-, etylesteru, (S-(R*, S*)) (EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-NH-CH₂C₆H₄-CN) v butylacetáte (približná koncentrácia 36 % (hmot./hmot.)). Po 18 hodinách miešania sa roztok/suspenzia zakalil. Odobrala sa vzorka na stanovenie konverzie pomocou HPLC. Reakčná zmes sa rýchle ochladila pridaním 14,4 ml acetónu, s následným pridaním 307 ml butylacetátu. Teplota plášťa sa nastavila na 70 °C a suspenzia sa miešala počas jednej hodiny pri teplote 70 °C na rozpustenie zrazeniny. Teplota termostatického kúpeľa sa potom nastavila na 40 °C a roztok sa miešal počas ďalších 78 hodín. Častice boli ešte stále prítomné. Zrazenina sa odfiltrovala. Filtrát sa vložil do oplášťovaného skleneného reaktora a miešal sa pri teplote 40 °C. Spustil sa extrakčný program. Všetky extrakcie sa uskutočnili pri teplote 40 °C. Do reaktora sa pridalo 110 ml Na₂CO3/NaCI (10 %/10 % (hmot./hmot.)), roztok sa miešal počas 10 až 20 minút. Potom sa miešanie zastavilo a fázy sa nechali oddeliť. Vodná fáza sa odstránila. Pridalo sa 12,5 g etanolu a ďalších 110 ml vodného Na₂CO3/NaCI (10 %/10 % (hmot./hmot.)), roztok sa miešal počas niekoľkých minút a fázy sa potom nechali oddeliť. Vodná fáza sa odstránila a pridalo sa 12,5 g etanolu a 110 ml vodného roztoku Na₂CO3/NaCI (10 %/10 % (hmot./hmot.)). Výsledný roztok sa miešal počas niekoľkých minút a dve fázy sa potom nechali oddeliť. Vodná fáza sa odstránila. Ku organickej fáze sa za miešania pridali 4 g etanolu a 31 ml vody. Hodnota pH sa nastavila na 7 pridaním HCI (8 % (hmot./hmot.)). Roztok sa miešal, dve fázy sa nechali oddeliť a vodná fáza sa odstránila. 52,9 g extrakčného roztoku, ktorý obsahoval približne 4 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH sa pridalo do baničky s guľatým dnom. Do tej istej

	• ·· •	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
• ·	···	··	···	··	··

baničky sa pridali 4 ml zmesi butylacetátu a etanolu v pomere 35 :65 (obj./obj). Rozpúšťadlo sa odparilo s použitím rotačnej odparky pri tlaku 100 až 200 mbar a teplote kúpeľa 73 'C, až pokým nezostalo 53,1 g roztoku. Potom sa pridali ďalšie 4 ml vyššie uvedenej rozpúšťadlovej zmesi a viac rozpúšťadla sa odparilo, až pokým nezostalo 54,74 g roztoku. Tento postup sa opakoval niekoľkokrát: pridali sa 4 ml, roztok sa zahustil odparením, až pokým nezostalo 56,02 g roztoku, pridali sa 4 ml, roztok sa znova zahustil, až pokým nezostalo 56,04 g roztoku, pridali sa ďalšie 4 ml a roztok sa znova zahustil, až pokým nezostalo 33,43 g roztoku. Odobralo sa 2,2 g roztoku na analýzu zložiek rozpúšťadlovej kompozície pomocou plynovej chromatografie (GC) a na analýzu obsahu vody pomocou Karl-Fischerovou titráciou. Obsah vody predstavoval 1,0 % (hmot./hmot.). Do baničky, ktorá sa umiestnila do termostatického kúpeľa udržiavaného pri teplote 40 °C, sa pridalo 0,34 ml vody. Roztok sa miešal s použitím teflónového rýchlobežného miešadla počas 3 hodín a potom sa ochladil na teplotu 20 °C na 5 hodín, na teplotu 5 °C na

2,5 hodín a na teplotu -5 °C na jednu hodinu. Roztok sa potom miešal počas dvoch hodín pri teplote -5 °C. Roztok bol takmer číry. Roztok sa potom ochladil na teplotu -20 °C na 1,5 hodiny a miešal sa pri tejto teplote počas ďalších 20 hodín. Vytvorila sa veľmi viskózna biela suspenzia. Kryštály sa odfiltrovali pomocou vákuovej filtrácie a potom sa vysušili cez noc pri tlaku 150 mbar a teplote 40 °C.

Kryštály sa analyzovali pomocou GC, XRPD, TGA, DSC a Karl-Fischerovou titráciou. Výsledky získané analýzou s použitím XRPD sú zosumarizované v nižšie uvedenej tabuľke (tabuľka 5, v ktorej Rl predstavuje relatívnu intenzitu) a zobrazené na obrázku 5.

Tabuľka 5

d-hodnota/Ĺ	Rl	d-hodnota/Ĺ	Rl
12,0	silný	3,69	slabý
11,1	veľmi silný	3,66	slabý
8,8	stredný	3,59	stredný
7,2	stredný	3,55	slabý
6,8	veľmi slabý	3,41	slabý
6,6	stredný	3,37	slabý
6,5	veľmi slabý	3,34	slabý
6,4	veľmi slabý	3,29	veľmi slabý
6,0	slabý	3,25	slabý

•	• ··	····	·· ·
··	··	•	•	•	• ·	··
•	•	•	•	···	• ·
•	•	•	•	•	• ·
···	···	··		···	··	··

5,8	stredný	3,22	veľmi slabý
5,6	slabý	3,10	slabý
5,3	stredný	3,03	slabý
5,2	silný	3,00	veľmi slabý
4,75	stredný	2,91	slabý
4,52	slabý	2,78	slabý
4,39	stredný	2,73	slabý
4,31	slabý	2,62	veľmi slabý
4,29	stredný	2,51	veľmi slabý
4,25	stredný	2,46	slabý
4,06	slabý	2,40	slabý
4,00	veľmi slabý	2,38	slabý
3,82	slabý	2,34	veľmi slabý
3,73	slabý	2,29	veľmi slabý
3,71	stredný	2,26	veľmi slabý

DSC vykazovala endotermu s extrapolovaným nábehom teploty približne 169 °C (približne 142 J/g). TGA vykazovala pokles hmotnosti približne 0,7 % (hmot./hmot.) okolo 170 °C.

Jednotková bunka sa stanovila z rôntgenových údajov jednoduchého kryštálu. Bola kosoštvorcová, s P2,2j2i symetriou, Z=4, a s nasledujúcimi rozmermi: a = 7,753(1) Ĺ, b = 14,331(1) Ĺ, c = 22,276(1) Ĺ, a = p = y = 90°aV = 2471,6(4) Ĺ³.

Príklad 15

K roztoku približne 9 g EtO2C-CH2-(R)Cgl-Aze-NH-CH2-C₆H₄-CN v zmesi etylacetát/prečistená voda (koncentrácia rozpustenej látky okolo 23 % (hmotnostných na celkový objem), koncentrácia vody okolo 10 % (hmotnostných na celkovú hmotnosť) sa pridalo 50 ml etanolu. Teplota roztoku sa nastavila na 39 °C a do reaktora sa pridala zmes 0,61 mg EDTA a 3,62 g hydroxylamínu (vodný; 50 % (hmot./hmot.)). Po 1 hodine 50 minútach sa pridali zárodočné kryštály bezvodého Et0₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-0H (pripraveného analogicky podľa postupu opísaného v príklade 14, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 21 hodín . Potom sa do reaktora pridalo 3,18 g acetónu a suspenzia sa miešala počas ďalších 30 minút. Suspenzia sa potom zahrievala pri teplote 60 °C počas 3 hodín. Teplota sa udržiavala na 60 °C počas 6 hodín a potom sa zmes ochladila znížením teploty plášťa o 10 °C/hodinu, až pokým teplota nedosiahla -10 °C. Kryštály sa potom nechali ustáliť počas ďalších 2 hodín. Kryštály sa oddelili z matečného lúhu

•	•	··		····	··	•
··	• ·	•	•	•	•	•	··
•	•	•	•	···	*	•	•
• · ·	···	··		···	··	• · ·

filtráciou, premyli sa s 20 ml a následne s ďalšími 10 ml etanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA. Analýzy vykazovali v podstate rovnaké XRPD charakteristiky, DSC termogram a pokles hmotnosti ako vykazovala forma, ktorá sa získala podľa postupu z príkladu 14, ktorý je uvedený vyššie.

Príklad 16

K roztoku asi 4,5 g EtO2C-CH₂-(R)Cgl-Aze-NH-CH2-C₆H4-CN v zmesi etylacetát/prečistená voda (koncentrácia rozpustenej látky okolo 24 % (hmotnostných na celkový objem), koncentrácia vody okolo 10 % (hmotnostných na celkovú hmotnosť) sa pridalo 9 ml etylacetátu a 11,2 ml etanolu. Teplota roztoku sa nastavila na 41 °C a do baničky s guľatým dnom sa pridala zmes 0,3 mg EDTA a 1,78 g hydroxylamínu (vodný; 50 % (hmot./hmot.)). Po 1 hodine 40 minútach sa pridali zárodočné kryštály bezvodého EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (pripraveného analogicky podľa postupu opísaného v príklade 14, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 22 hodín . Potom sa do baničky s guľatým dnom pridalo 2,79 g acetónu a suspenzia sa miešala počas ďalších 19 hodín. Kryštály sa oddelili z matečného lúhu filtráciou, premyli sa s 2 x 10 ml etanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príklad 17

K roztoku asi 30 kg EtO₂C-CH2-(R)Cgl-Aze-NH-CH2-C₆H4-CN v 130 litroch zmesi etylacetát/prečistená voda sa nadávkovalo 151 kg etanolu. Teplota roztoku sa nastavila na 38 °C a do reaktora sa nadávkovala zmes 2,1 g EDTA a 12,0 kg hydroxylamínu (vodný; 51 % (hmot./hmot.)). Po asi 1,5 hodine až 2 hodinách sa pridali zárodočné kryštály bezvodého EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (pripraveného analogicky podľa postupu opísaného v príklade 14, uvedenom

	• ·· •	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	• ·
• ·	···	··	···	··	··

vyššie). Suspenzia sa miešala počas 23 hodín . Potom sa do reaktora pridalo 19 kg acetónu a suspenzia sa miešala počas ďalších 30 minút. Suspenzia sa potom zahrievala pri teplote 73 °C, až pokým sa všetky kryštály nerozpustili. Roztok sa ochladil znížením teploty plášťa o 10 °C/hodinu. Keď teplota dosiahla asi 61 °C, pridalo sa ďalších 172 g rovnakých zárodočných kryštálov a v ochladzovaní sa pokračovalo, pokým sa nedosiahla konečná teplota -10 °C. Kryštály sa potom nechali ustáliť počas ďalších 11 hodín. Kryštály sa oddelili z matečného lúhu centrifúgovaním, premyli sa s 90 kg izopropanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Kryštály sa analyzovali pomocou XRPD, DSC a TGA. Analýza vykazovala v podstate rovnaké XRPD charakteristiky, DSC termogram a pokles hmotnosti ako vykazovala forma, ktorá sa získala podľa postupu z príkladu 14, ktorý je uvedený vyššie.

Príklad 18

K roztoku približne 5 g EtO₂C-CH2-(R)Cgl-Aze-NH-CH2-C₆H₄-CN v zmesi etylacetát/prečistená voda (koncentrácia rozpustenej látky okolo 26 % (hmotnostných na celkový objem), koncentrácia vody okolo 10 % (hmotnostných na celkovú hmotnosť) sa pridalo 12,5 ml etanolu. Teplota roztoku sa nastavila na 41 °C a do baničky s guľatým dnom sa pridala zmes 0,3 mg EDTA a 7,49 g hydroxylamínu (vodný; 50 % (hmot./hmot.)). Po 1 hodine 40 minútach sa pridali zárodočné kryštály bezvodého EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (pripraveného analogicky podľa postupu opísaného v príklade 14, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 22 hodín . Potom sa do baničky s guľatým dnom pridalo 2,79 g acetónu a suspenzia sa miešala počas ďalších 19 hodín. Kryštály sa oddelili z matečného lúhu filtráciou, premyli sa s 2 x 10 ml etanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

• · • ·· • ·	·· • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	··
	•	• ·	•	• ·
• ·	···	··	···	··	• ·

Príklad 19

K roztoku približne 9 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-NH-CH₂-C6H₄-CN v zmesi etylacetát/prečistená voda (koncentrácia rozpustenej látky okolo 23 % (hmotnostných na celkový objem), koncentrácia vody okolo 10 % (hmotnostných na celkovú hmotnosť) sa pridalo 56 ml etanolu. Teplota roztoku sa nastavila na 50 °C a do baničky s guľatým dnom sa pridala zmes 0,6 mg EDTA a 3,49 g hydroxylamínu (vodný; 50 % (hmot./hmot.)). Po 1 hodine 40 minútach sa pridalo 50 mg zárodočných kryštálov bezvodého EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (pripraveného analogicky podľa postupu opísaného v príklade 14, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala počas 18 hodín . Potom sa do baničky s guľatým dnom pridalo 3,1 g acetónu a suspenzia sa miešala počas ďalších 30 minút. Suspenzia sa potom zahrievala pri teplote 75 °C počas 0,5 hodín. O 40 minút neskôr sa teplota kúpeľa znížila na 25 °C (t.j. suspenzia kryštálov sa ochladila prirodzeným chladením). O 21 hodín neskôr sa kryštály oddelili z matečného lúhu filtráciou a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Rekryštalizácia EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19

Príklad 20

2,0 g surového EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 13 ml /zopropanolu, 5 ml prečistenej vody a 0,65 etanolu pri teplote 70 °C. Roztok sa mieša a ochladil sa z teploty 70 °C na 55 °C v priebehu 1,5 hodín. Potom sa pridali 2 ml acetónu a v ochladzovaní sa pokračovalo z 55 °C na 30 °C v priebehu 5 hodín a z teploty 30 °C na 0 °C v priebehu 3 hodín. Suspenzia sa potom miešala počas 340 minút pri tejto konečnej teplote. Kryštály sa odfiltrovali a premyli sa so 4 ml /zopropanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

	··	e · • · • ·	···· • ···	·· • · • ·	• ·
• ·	···	··	···	··	• ·

Príklad 21

2,0 g surového EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 1,5 ml /zopropanolu, 4,8 ml prečistenej vody a 0,001 g hydroxidu sodného rozpusteného v 0,2 ml prečistenej vody pri teplote 70 °C. Roztok sa miešal počas 1,5 hodín pri teplote 70 °C a potom sa ochladil na 0 °C v priebehu 7 hodí. Suspenzia sa miešala počas 55 minút pri tejto konečnej teplote. Kryštály sa odfiltrovali a premyli sa s 5 ml /zopropanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príklad 22

1,5 g surového EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 10,13 ml /zopropanolu, 3,75 ml prečistenej vody a 1.13 ml etylaeetátu pri teplote 70 °C. Roztok sa ochladil na teplotu 55 °C a potom na teplotu 0 °C v priebehu 5,5 hodín. Suspenzia sa miešala počas 695 minút pri tejto konečnej teplote. Kryštály sa odfiltrovali a premyli sa s 3 ml /zopropanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príklad 23

	•	··	····	··
	··	• ·	•	• ·	··
	•	• ·	···	• ·
• ·	···	• ·	···	··	··

31,0 kg surového EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 158 kg /zopropanolu a 78 kg prečistenej vody pri teplote 71 °C. Pridalo sa ďalších 24 kg izopropanolu a následne sa roztok prečistil filtráciou. Roztok sa potom ochladil na teplotu 57 °C a kryštalizácia sa naštartovala pridaním 78 g zárodočných kryštálov (získaných analogicky postupom opísaným v príklade 14, uvedenom vyššie). Suspenzia sa miešala, pričom sa súčasne ochladzovala o 10 °C/hodinu na 0 °C. Suspenzia sa potom miešala počas 11 hodín pri tejto konečnej teplote. Po centrifúgovaní suspenzie sa kryštály premyli s 4 kg /zopropanolu a potom sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príklad 24

3,0 g surového EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 22,5 ml /zopropanolu, 7,5 ml prečistenej vody a 37,1 mg kyseliny chlorovodíkovej (32 % ) pri teplote 70 °C. Roztok sa miešal počas 3 hodín pri teplote 70 °C a potom sa ochladil na teplotu 55 °C v priebehu 0,5 hodiny, po čom sa naštartovala kryštalizácia bez naočkovania. Suspenzia sa potom ochladila na teplotu 0 °C v priebehu 5,5 hodín. Suspenzia sa miešala počas 740 minút pri tejto konečnej teplote. Kryštály sa odfiltrovali a premyli sa so 7,5 ml /zopropanolu a následne sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Príklad 25

•	•	··	····		··
··	··	• ·	•	•		•	··
•	•	• ·	···	•		•
•	•	• ·	•	•		•
·· ·	···	··	···		··		··

3,0 g EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH (získaného analogicky s postupmi z príkladov 14 až 19, uvedených vyššie) sa rozpustilo v zmesi 22,5 ml /žopropanolu a 7,5 ml prečistenej vody pri teplote 70 °C. Roztok sa miešal počas 3 hodín pri teplote 70 °C a potom sa ochladil na teplotu 55 °C v priebehu 0,5 hodiny, po čom sa naštartovala kryštalizácia bez naočkovania. Suspenzia sa potom ochladila na teplotu 0 °C v priebehu 5,5 hodín. Suspenzia sa miešala počas 760 minút pri tejto konečnej teplote. Kryštály sa odfiltrovali a premyli sa so 7,5 ml /žopropanolu a následne sa vysušili pri teplote 40 °C pri zníženom tlaku.

Claims

1. V podstate kryštalická forma EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

2. Stabilná forma EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

3. EtO2C-CH2-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľná soľ, vo forme, ktorá má vysokú stabilitu.

4. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, ktorá nie je vo forme soli a ktorá je vo forme anhydrátu.

5. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 4, ktorá obsahuje nie viac ako 2 % (hmot./hmot.) vody.

6. Zlúčenina podľa nároku 4 alebo 5, charakterizovaná krivkou diferenciálnej skanovacej kalorimetrie, pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min. v uzatvorenom tégliku s otvorom pod prúdom dusíka, vykazujúca endotermu s extrapolovaným nábehom teploty okolo 150 °C, maximálnou teplotou okolo 151°C, a pridruženým teplom približne 113 J/gram, s následnou exotermou v rozsahu 190 až 280 °C; a/alebo diagramom rontgenovej práškovej difrakcie charakterizovaná pikmi s d-hodnotami pri 12,0, 10,0, 8,2, 7,2, 6,0, 5,5, 5,0, 4,92, 4,85, 4,80, 4,42, 4,22, 4,11, 4,06, 3,99, 3,78, 3,72, 3,62, 3,34, 3,11, 3,10 a 3,03 A.

7. Zlúčenina podľa nároku 4 alebo 5, charakterizovaná krivkou diferenciálnej skanovacej kalorimetrie, pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min. v uzatvorenom tégliku s otvorom pod prúdom dusíka, vykazujúca endotermu s extrapolovaným nábehom teploty okolo 169 °C, maximálnou teplotou okolo 170°C, a pridruženým teplom približne 142 J/gram, s následnou exotermou v rozsahu 180 až 280 °C; a/alebo diagramom rontgenovej práškovej difrakcie charakterizovaná pikmi s d-hodnotami pri 12,0; 11,1, 8,8, 7,2, 6,8, 6,6, 6,5, 6,4, 6,0, 5,8, 5,6, 5,3, 5,2, 4,75, 4,52, 4,39, 4,31, 4,29, 4,25, 4,06, 4,00, 3,82, 3,73, 3,71, 3,69, 3,66, ···· ····· ·· ·

1,59, 3,55, 3,41, 3,37, 3,34, 3,29, 3,25, 3,22, 3,10, 3,03, 3,00, 2,91, 2,78, 2,73, :,62, 2,51, 2,46, 2,40, 2,38, 2,34, 2,29, 2,26 Ĺ

8. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3 , ktorá nie je vo forme soli, a ktorá je vo forme monohydrátu.

9. Zlúčenina podľa nároku 8, charakterizovaná krivkou diferenciálnej skanovacej kalorimetrie, pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min. v uzatvorenom tégliku s otvorom pod prúdom dusíka, vykazujúca endotermu s extrapolovaným nábehom teploty okolo 94 °C, maximálnou teplotou okolo 109 °C, a pridruženým teplom približne 171 J/gram, s následnou exotermou v rozsahu 170 až 290 °C; a/alebo diagramom rontgenovej práškovej difrakcie charakterizovaná pikmi s dhodnotami pri 16,4, 13,7, 9,4, 8,2, 7,1,6,2, 5,5, 5,1, 4,98, 4,75, 4,68, 4,57, 4,48, 4,27, 4,21, 4,11, 4,04, 3,93, 3,89, 3,83, 3,68, 3,52, 3,47, 3,34, 3,26, 3,02, 2,61 a 2,42 Ĺ.

10. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, ktorá je vo forme hydrobromidovej soli.

11. Zlúčenina podľa nároku 10, charakterizovaná krivkou diferenciálnej skanovacej kalorimetrie, pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min. v uzatvorenom tégliku s otvorom pod prúdom dusíka, vykazujúca endotermu s extrapolovaným nábehom teploty okolo 166 °C, maximálnou teplotou okolo 167°C, a pridruženým teplom približne 69 J/gram, s následnou exotermou v rozsahu 170 až 220 °C; a/alebo diagramom rontgenovej práškovej difrakcie charakterizovaná pikmi s d-hodnotami pri 12,0, 10,1, 9,5, 6,0, 5,7, 5,6, 5,2, 5,1, 4,95, 4,74, 4,57, 4,41, 4,35, 4,17, 4,07, 4,03, 3,92, 3,82, 3,72, 3,69, 3,62, 3,51, 3,48, 3,38, 3,25, 3,06, 2,92, 2,86, 2,71, 2,53 a 2,33 Ĺ.

12. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, ktorá je vo forme metánsulfónovej soli.

13. Zlúčenina podľa nároku 12, charakterizovaná krivkou diferenciálnej skanovacej kalorimetrie, pri rýchlosti zahrievania 5 °C/min. v uzatvorenom tégliku s otvorom pod prúdom dusíka, vykazujúca endotermu s extrapolovaným e · ·*···· · · ···· ··· ··· nábehom teploty okolo 134 °C, maximálnou teplotou okolo 137°C a pridruženým teplom približne 93 J/gram, s následnou exotermou v rozsahu 140 až 220 °C; a/alebo diagramom rôntgenovej práškovej difrakcie charakterizovaná pikmi s d-hodnotami pri 12,0, 11,7, 10,4, 10,2, 8,3, 7,8, 6,0, 5,6, 5,5, 5,2, 5,1, 5,0, 4,98, 4,90, 4,75, 4,63, 4,54, 4,46, 4,15, 4,06, 3,92, 3,84, 3,74, 3,65, 3,56, 3,47, 3,39, 3,22, 3,12, 2,95, 2,88, 2,76, 2,74, 2,69, 2,65, 2,54, 2,52, 2,49, 2,27, 2,21, 2,04 a 2,02 Ĺ.

14. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje kryštalizáciu EtO₂C-CH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

15. Spôsob podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje kryštalizáciu EtO₂CCH₂-(R)Cgl-Aze-Pab-OH alebo jej soli, z rozpúšťadla.

16. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlo je zvolené zo skupiny zahrňujúcej acetáty, nižšie alkylalkoholy, alifatické a aromatické uhľovodíky, dialkylétery, dialkylketóny, acetonitril, vodné rozpúšťadlá alebo ich zmesi.

17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlo je zvolené zo skupiny zahrňujúcej Ci^-alkylacetáty, lineárne alebo rozvetvené Ci^alkylalkoholy, C₆-i2-alifatické uhľovodíky, C₆-io-aromatické uhľovodíky, di-Ci-ealkylétery, di-C^-alkylketóny, acetonitril, vodu alebo ich zmesi.

18. Spôsob podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že rozpúšťadlo je zvolené zo skupiny zahrňujúcej etylacetát, butylacetát, etanol, /zopropanol, /zooktán, nheptán, toluén, di-/žopropyléter, acetón, metyl-zzobutylketón, acetonitril, vodu alebo ich zmesi.

19. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4 až 7, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 15 až 18, v ktorom rozpúšťadlo v podstate neobsahuje vodu.

• · ······ ·· ·· ·· ··· ··· • · · · ··· · ·

20. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4, 5 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 15 až 18, v ktorom rozpúšťadlo obsahuje vodu.

21. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa nároku 8 alebo 9, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 15 až 18, v ktorom rozpúšťadlo obsahuje vodu.

22. Spôsob konverzie jednej kryštalickej formy zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 3, na inú formu, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje rekryštalizáciu zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 3 z vhodného rozpúšťadlového systému.

23. Zlúčenina získateľná spôsobom podľa ktoréhokoľvek z nárokov 14 až 22.

24. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13 alebo 23 na použitie ako liečivo.

25. Zlúčenina podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13 alebo 23 na použitie ako prekurzor.

26. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje zlúčeninu definovanú v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 13 alebo 23 v zmesi s farmaceutický prijateľnou pomocnou látkou, riedidlom alebo nosičom.

27. Použitie zlúčeniny definovanej v ktoromkoľvek z nárokov 1 až 13 alebo 23 na prípravu lieku na liečenie stavov, pri ktorých sa požaduje alebo je vhodná inhibícia trombínu.

28. Spôsob liečenia stavov, pri ktorých sa požaduje alebo je vhodná inhibícia trombínu, vyznačujúci sa tým, že zahrňuje podávanie terapeuticky účinného množstva zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13 alebo 23 pacientovi, ktorý potrebuje takúto liečbu.