SK1172004A3 - Peptides having antiangiogenic activity - Google Patents

Description

Peptidy s antiangiogénnou aktivitou

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka nových zlúčenín s aktivitou vhodnou na liečbu chorobných stavov, ku ktorým dochádza v dôsledku angiogenézy alebo ktoré sú ňou zosilňované, farmaceutických kompozícií, ktoré tieto zlúčeniny obsahujú, spôsobov liečby s použitím týchto zlúčenín a spôsobov inhibicie angiogenézy.

Doterajší stav techniky

Angiogenéza je fundamentálny biologický proces, počas ktorého sa tvoria nové krvné cievy a ktorý má základnú dôležitosť pre rôzne normálne aktivity organizmu (ako je reprodukcia, vývoj organizmu a hojenie rán). Aj keď nie je tento proces úplne vysvetlený, usudzuje sa, že zahŕňa zložité interakcie molekúl, ktoré jednak stimulujú, jednak inhibujú rast endotelových buniek, čo sú primáme bunky cievnych kapilár. Zdá sa, že za normálnych podmienok tieto molekuly udržujú mikrovaskulatúru v pokojovom stave (to znamená, že kapilára nerastie) počas dlhých periód, ktoré môžu trvať niekoľko týždňov a v niektorých prípadoch i dekád. Na druhej strane však v prípade potreby, ako je napríklad hojenie rán môžu tie isté bunky vykázať rýchle množenie alebo premenu počas krátkej doby, napríklad piatich dní (Folkman, J. a Shing, Y.. J.Biol.Chem., sv. 267 (16), ss. 10931-10934; a Folkman, J. a Klagsbrun, M., Science, sv. 235, ss. 442-447 (1987).

Aj keď je angiogenéza za normálnych podmienok proces vysoko riadený, mnohé choroby označované ako angiogénne choroby” sú dôsledkom pretrvávajúcej neriadenej angiogenézy. Inak povedané, neriadená angiogenéza môže buď priamo spôsobiť určitú chorobu, alebo zhoršiť už existujúci patologický stav. Napríklad ako najčastejšia príčina slepoty sa prejavuje okuláma neovaskularizácia. Za určitých už existujúcich podmienok, ako je artritída, napadajú novo vzniknuté krvné kapiláry kĺby a ničia chrupavku. Pri cukrovke napadajú nové kapiláry vytvorené na sietnici sklovec. krvácajú a vedú k oslepnutiu. Na angiogenéze je závislý i rast a metastáza pevných tumorov (Folkman. J.. Cancer. Res., sv. 46, ss. 467-473 (1986): Folkman. J.. J. Natl. C'ancer Inst.. sv. 82. ss. 4-6 (1989). Preukázalo sa, že nádory, ktorých veľkosť prekročí 2 mm, musia mať vlastný prívod krvi a docieľujú toho vyvolaním rastu nových kapilárnych krvných ciev. Keď sa tieto krvné cievy- v nádoroch vytvoria, predstavujú cesty, ktorými sa nádorové bunky dostanú do krvného obehu a metastázujú na vzdialených miestach, ako je pečeň, pľúca a kosti (Weidner, N. a ďalší, N. Engl. J. Med., sv. 324 (I), ss. 1-8 (1991)).

V súčasnosti je vo vývoji na použitie pri liečbe angiogénnych chorôb niekoľko inhibítorov angiogenézy (Gasparini, G. a Hairis. A. L., J. Clin. Oncol., sv. 13 (3), ss. 765-782 (1995)). Mnohé z týchto zlúčenín majú početné nevýhody. Účinný inhibítor angiogenézy ako napríklad suramín môže ľudom v dávkach potrebných pre antitumorovú aktivitu spôsobiť systemickú otravu. Iné zlúčeniny, ako napríklad retinoidy, interferóny a antiestrogény, sú pri podaní ľuďom bezpečné, avšak majú len slabý antiangiogénny účinok.

Peptidy inhibujúce angiogenézu boli opísané v patentových prihláškach WO 01/38397, WO 01/38347 a WO 99/61476. Bolo by však žiaduce pripraviť angiogénne zlúčeniny s lepšími priebehmi aktivity.

Podstata vynálezu

Tento vynález sa týka novej triedy zlúčenín schopných inhibovať angiogenézu. Vynález poskytuje nonapeptidy a dekapeptidy so zlepšenými vlastnosťami pre inhibíciu angiogenézy. V základnom uskutočnení poskytuje tento vynález zlúčeninu všeobecného vzorca I

Ao-A i - A?-A3-A4-A₅-A₆-A₇-A₈-A₉-A1 o (Dalebo jej terapeuticky prijateľnú soľ, pričom

Aq buď chýba, alebo je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí N-acetyl, N-acetylazetidín-2-karbonyl. N-acetylazetidín-3-karbonyl. N-acetylnipekotyl. N-acetylpiperidín-4-acetyl a N-acetylprolyl;

Ai je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-alanyl, (1 R,3S)-l-aminocyklopentán-3-karbonyl, (lS^j-l-aminocyklopent-ž-én-í-karbonyl, 1 -amino- 1-cyklopropánkarbonyl, 3-(4-chlórfenyljalanyl, 4-hydroxyprolyl, N-metylnorvalyl, 3-(4-metylfenyl)alanyL N-metylprolyl, N-metyltreonyKbenzy!), norleucyl, propargyl glycyl, sarkozyl a (2,3,5,6-tetrahydro-l-tiopyrán-4-yljglycyl;

A₂ je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí [(lS^Äj-l-aminocyklopentán-S-karbonyl], [(17?,4S)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl], |(LS’,4Ä)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl], asparaginyl, 3-(3-kyanofenyl)alanyl, 3-(4-kyanofenyl)alanyl, 3-(3,4-dimetoxyfenyl)alanyl, 3-(4-fluórfenyl)alanyl, 3-(2-furyl)alanyl, glutaminyl, glycyl, 3-(4-metylfenyl)alanyl, norvalyl a 3-(tiazol-5-yl)alanyl;

A3 je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí asparaginyl, glutaminyl, izoleucyl a valyl;

A4 je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-aloizoleucyl, D-izoleucyl, D-leucyl a D-penicilaminyl(S-metyl);

A5 je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí alotreonyl, aspartyl, 4-hydroxyprolyl, seryl, treonyl a treonyl(O-acetyl);

Aô je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí alotreonyl, glutaminyl, 4-hydroxyprolyl, norvalyl, omityl(N-delta-acetyl), prolyl, seryl a tryptyl;

A7 je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí izoleucyl, D-izoleucyl a prolyl;

Ag je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí arginyl, glutaminyl a omityl;

A9 je prolyl a

Aioje zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-alanylamid, D-lyzyl(N-epsilon-acetyl)amid, etylamid a N-metyl-D-alanylamid;

a to za predpokladu, že keď Ao nie je prítomný, Aj je N-metylprolyl a za predpokladu, že keď A₍ je sarkozyl, Ao nie je acetyl; alebo A₂ nie je asparaginyl, glutaminyl alebo glycyl; alebo A4 nie je D-aloizoleucyl, D-izoleucyl alebo D-leucyl; alebo A5 nie je alotreonyl, seryl alebo treonyl; alebo A₆ nie je glutaminyl, norvalyl, seryl alebo tryptyl; alebo A_s nie je arginyl; alebo A10 nie je D-alanylamid alebo etylamid.

V inom uskutočnení tento vynález poskytuje farmaceutickú kompozíciu zahŕňajúcu zlúčeninu vzorca I alebo jej terapeuticky prijateľnú soľ v kombinácii s terapeuticky prijateľným nosičom.

V inom uskutočnení poskytuje tento vynález spôsob inhibície angiogénezy u cicavcov v prípade zistenej potreby takejto liečby spočívajúcej v podávaní cicavcovi terapeuticky prijateľného množstva zlúčeniny vzorca I alebo jej terapeuticky prijateľnej soli.

Tu používané jednotné číslo zahŕňa možnosť množného čísla, pokiaľ z kontextu jasne nevyplýva opak.

V tomto texte majú používané termíny nasledujúce významy:

Tu používaný termín karbonyl znamená -C(O)-.

Tu používaný termín etylamid znamená -NHCH2CH3 na uhlíkovom zakončení aminokyseliny.

Tu používaný termín nipekotyl predstavuje acylovú skupinu odvodenú od kyseliny nipekotovcj, to znamená kyseliny piperidín-3-karboxylovej.

Tu používaný termín farmaceutický prijateľná soľ znamená soli alebo formy zlúčenín podľa vynálezu s obojakými iónmi, rozpustné alebo dispergovateľné vo vode alebo v oleji, vhodné na liečbu chorôb bez neprípustnej jedovatosti, dráždenia alebo alergických reakcií, prijateľné z hľadiska primeraného pomeru liečebného účinku k riziku a ktoré sú účinné na zamýšľané použitie. Soli sa dajú pripraviť pri konečnej izolácii a purifikácii zlúčenín alebo samostatne reakciou aminoskupiny s vhodnou kyselinou. Typické adičné soli s kyselinami sú acetát, adipát, alginát, citrát, aspartát, benzoát. benzénsulfonát, hydrogensíran, butyrát. gáfrová soľ, gáforsulfonát, diglukonát, glycerofostát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, formiát, fumarát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyetánsulfonát (izetionát), laktát, maleát, mesitylénsulfonát, metánsulfonát, naftylénsulfonát, nikotinát, 2-naftalénsulfonát, oxalát, pamoát, pektinát, persíran, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, vínan, trichlóracetát, trifluóracetát, fosfát, glutamát. hydrogertuhličitan, paratoluénsulfonát a undekanoát. Aminoskupiny v týchto zlúčeninách sa dajú tiež kvartemizovať metyl-, etyl-, propyl- a butylchloridmi. -bromidmi a -jodidmi: dimetyl- dietyl-. dibutyl- a diamyisulfátmi: decyl-. lauryl-, myristyl- a stearylchloridmi. -bromidmi a jodidmi; a benzyl- a fenetylbromidmi. Príklady kyselín, ktoré sa dajú použiť na tvorbu terapeuticky prijateľných adičných solí, zahŕňajú anorganické kyseliny, ako sú kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová a fosforečná, a organické kyseliny, ako je kyselina šťavelová, maleínová, jantárová a citrónová.

Pokiaľ sa neuvádza inak použitím predpony ”D-’’, napríklad u D-Ala alebo N-Me-DIle, má stereochémia α-uhlíka aminokyselín a aminoacylových zvyškov v peptidoch opisovaných v týchto špecifikáciách a v pripojených nárokoch prirodzenú, to znamená L konfiguráciu. Označenia R a S podľa Cahn-Ingold-Prologa sa používajú na označenie stereochémie stredov chirality v určitých acylových substituentoch na N-koncoch peptidov podľa vynálezu. Označenie R,S udáva racemickú zmes dvoch enantiomémych foriem. Táto nomenklatúra zodpovedá nomenklatúre opísanej v článku R.S.Cahn a ďalší, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., sv. 5, ss. 385-415 (1966).

Všetky peptidové sekvencie sú písané podľa všeobecne prijímanej konvencie, podľa ktorej je zvyšok aminokyseliny na α-N zakončení na ľavej a zvyšok na α-C zakončení na pravej strane. Tu používaný termín α-N zakončenie sa týka voľnej a-aminoskupiny aminokyseliny v peptide a termín α-C zakončenie sa týka voľného α-karboxylového konca aminokyseliny v peptide.

Vo väčšine prípadov zodpovedajú tu použité názvy prirodzene sa vyskytujúcich i prirodzene sa nevyskytujúcich aminoacylových zvyškov názvoslovným konvenciám navrhnutým komisiou Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry IUPAC a komisiou Commission on Biochemical Nomenclature IUPAC-IUB, publikovaným v Nomenclature of α-Amino Acids (Recommendations, 1974), Biochemistry, sv. 14(2), (1975). Pokiaľ sa názvy a skratky aminokyselín a aminoacylových zvyškov použitých v tomto opise a v pripojených nárokoch líšia od názvov uvádzaných v týchto návrhoch, budú čitateľovi vysvetlené. V nasledujúcej tabuľke 1 sú uvádzané niektoré skratky používané pri opisovaní vynálezu.

Tabuľka 1

Skratka	Definícia
N-Ac-Sar	N-acetylsarkozyl
Ala	alanyl

AlaNH2	alanylamid
N-Me-D-AlaNH2	N-metyl-D-alanylamid
alolle	aloizoleucvl
aloThr	alotreonyl
aloThr(í-Bu)	alotreonyl(O-terc-butyl)
Arg	arginyl
Arg(Pmc)	Ng-2,2.5,7,8-pentametylchromán-6- sulfonyljarginyl
Asn	asparaginyl
Asn(Trt)	asparaginyl(trityl)
Asp	as party l
Asp(OtBu)	aspartyl(O-/erc-butyl)
Fmoc	9-fluorenylmetyloxykarbonyl
(2-furyl)Ala	3-(2-fiiryl)alanyl
Gin	glutaminyl
Gln(Trt)	Glutaminyl(trityl)
Gly	giycyl
Hyp	4-hydroxyprolyl
Hyp(OíBu)	4-hydroxyprolyl(O-fórc-butyl)
íle	izoleucyl
Leu	leucyl
Lys(Ac)NH2	lyzyl(N-epsilon-acetyl)amid
Nie	norleucyl
Nva	norvalyl
Om	omityi
Om(N-delta-Ac)	omityl(N-delta-acetyl)
Om(N-delta-Boc)	omityl(N-delta-terc-butoxykarbonyl)
Pen(SMe)	penicylaminyl(S-metyl)
(4-C’l)Phe	3-(4-chlórfenyl)alanvl
(3-CN)Phe	3-(3-kyanofenyl)alanyl
(4-CN)Phe	3 -(4-kyanofenyl)alanyl
(3.4-diMeO)Phe	3-(3.4-dimetoxyfenyl)alanyl
(4-F)Phe	3-(4-fluórŕenvl)alanyl

Ί

(4-Me)Phe	3-(4-metylfenyl)alanyl
Pro	prolyl
ProNHCH2CH3	prolyletylamid
N-MePro	N-metylprolyl
PropargylGiy	propargylglycyl
Sar	sarkozyl
Ser	seryl
Ser(OBzl)	seryl(O-benzyl)
Ser(O/Bu)	seryl(O-Zerc-butyl)
Taz	3-(tiazol-5-yl)alanyl
Thr	treonyl
Thr(OBzl)	treonyl(O-benzyi)
Thr(OíBu)	treonyl(O-/erc-butyl)
Thr(OAc)	treonyl(O-acetyl)
N-MeThr(OBzl)	N-metyltreonyl(O-benzyl)
Val	valyl

Nomenklatúrne názvy a značky, ktoré nie sú uvedené vyššie v tabuľke, sa dajú objasniť pomocou 1999 Catalog and Peplide Synthesis Handbook (Calbiochem-Novabiochem Corp.), alebo Tools for Peplide and Solid Phase Synthesis 1998-1999 Catalogue( ChemImpex Intemational, Inc.).

Zlúčeniny podľa vynálezu vrátane (okrem iného) takých, ktoré sú špecifikované v príkladoch, majú antiangiogénnu aktivitu. Ako inhibítory angiogénezy sú tieto zlúčeniny použiteľné pri liečbe primárnych i metastázovaných tumorov, vrátane karcinómov prsníka, čreva, konečníka, pľúc, orofarynxu, hypofarynxu, pažcráka, žalúdka, pankreasu, pečene, žlčníka a žlčovodov, tenkého čreva, močového traktu (vrátane obličiek, mechúra a urotelia), ženských genitálií (vrátane krčka maternice, maternice a vaječníkov a choriokarcinómu a tehotenskej trofoblastickej choroby), mužských genitálií (vrátane prostaty, semenných vačkov, semenníkov a tumorov zárodočných buniek), endokrinných žliaz (vrátane štítnej žľazy, nadobličiek a podmozgovej žľazy) a kože, rovnako ako hemangiómu, melanómu, sarkómu (vrátane sarkómu vznikajúceho v kostnom tkanive a v mäkkých tkanivách a Kaposiho sarkómu) a nádorov mozgu, nervov, očí a mäkkých plien mozkových (vrátane astrocytómu.

gliómu, glioblastómu, retinoblastómu, neurómu, neuroblastómu, Schwannómu (nádoru Schwannovej bunky) a meningiómu). Takéto zlúčeniny môžu byť tiež užitočné pri liečbe pevných tumorov vznikajúcich zhubným bujnením pri krvotvorbe, ako je leukémia (to znamená chlorómu, plastocytómu a plakov a tumorov pri chronickej retikulóze a lymfómu alebo leukémie kožných T-buniek, rovnako ako pri liečbe lymfómov (Hodgkinov alebo neHodgkinov lymfóm). Okrem toho môžu byť tieto zlúčeniny použiteľné pri prevencii metastáz tumorov opísaných vyššie, keď sa používají samostatne alebo v kombinácii s rádioterapiou alebo chemoterapeutickými činidlami.

Ďalšie použitie sa týka liečby a profylaxie autoimunitných chorôb, ako je reumatická, imunitná a degeneratívna artritída, rôzne očné choroby, ako diabetická retinopatia, retinopatia v dôsledku predčasnej dospelosti, odmietnutie korneálneho štepu, retrolentálna fibroplázia, neovaskulárny glaukóm, rubeóza dúhovky, neovaskularizácia sietnice v dôsledku niakulámej degenerácie, hypoxia, angiogéneza oka spojená s infekciou alebo chirurgickým zákrokom a iné abnormálne neovaskuláme stavy oka; kožné choroby, ako je lupienka; choroby krvných ciev, ako je hemangióm a proliferácia kapilár v aterosklerotických plátoch; Osler-Webberov syndróm; myokardiálna angiogéneza; neovaskularizácia plakov; telangiektázia; kĺbové problémy hemofilikov; angiofibróm a granulácia rán. Ďalšie použitie predstavuje liečba chorôb charakterizovaných nadmernou alebo abnormálnou stimuláciou endotelových buniek vrátane (okrem iného) intestinálnych zrastov, Crohnovej choroby, aterosklerózy, sklerodermie a hypertrofie jaziev, to jest keloidných jaziev. Iné použitie predstavujú prostriedky proti počatiu inhibiciou ovulácie a usadenia placenty. Zlúčeniny podľa vynálezu sú tiež použiteľné pri liečbe chorôb prejavujúcich sa angiogenézou ako patologickým následkom, ako je choroba z mačacieho poškriabania (Rochelle minútesalia cjuintosa) a vredy (Helicobacter pylori). Zlúčeniny podľa vynálezu sú tiež užitočné na obmedzenie krvácania pri podaní pred operáciou, zvlášť pri liečbe nádorov resekciou.

Zlúčeniny podľa vynálezu sa dajú použiť v kombinácii s ďalšími kompozíciami a procedúrami na liečbu ochorení. Napríklad je možné liečiť nádor štandardne chirurgicky, ožarovaním alebo chemoterapeuticky v spojení s peptidovou liečbou podľa tohto vynálezu a potom je možné peptid podľa tohto vynálezu následne podávať pacientovi s cieľom predlžit pokojové štádium mikrometastáz, stabilizovať a inhibovať rast reziduálneho primárneho nádoru. Naviac je možné kombinovať farmaceutický prijateľné vehikulá a prípadne matrice s pomalým uvoľňovaním, ako sú biologicky degradovateľné polyméry, za vzniku terapeutických zlúčenín.

Tu používaná matrica s pomalým uvoľňovaním je matrica z materiálov, obvykle polymérov, ktoré sú degradovateľné enzymatickou alebo acidobázickou hydrolýzou alebo pri rozpustení. Po vstupe do organizmu je táto matrica napadnutá enzýmami a telovými tekutinami. Je vhodné, aby sa matrica s pomalým uvoľňovaním zvolila z biokompatibilných materiálov, ako sú lipozómy, polylaktidy (kyselina polymliečna), polyglykolid (polymér glykolovej kyseliny), poly(laktid)ko-glykolid (kopolyméry kyseliny mliečnej a glykolovej), polyanhydridy, poly(orto)estery, polypeptidy, hyalurónová kyselina, kolagén, chondroitínsulfát, karboxylové kyseliny, mastné kyseliny, fosfolipidy, polysacharidy, nukleové kyseliny, polyaminokyseliny, aminokyseliny ako fenylalanín, tyrozín, izoleucin, polynukleotidy, polyvinylpropylén, polyvinylpyrolidón a silikón. Výhodná biologicky odbúrateľná matrica je buď polylaktid, polyglykolid, alebo poly(laktid)ko-glykolid (kopolyméry mliečnej kyseliny a glykolovej kyseliny).

Pri použití vo vyššie uvedených alebo iných liečbach sa terapeuticky účinné množstvo jednej zo zlúčenín podľa vynálezu môže použiť v čistej forme alebo, pokiaľ také formy existujú, vo forme farmaceutický prijateľnej soli. Výrazom terapeuticky prijateľné množstvo zlúčeniny podľa vynálezu sa mieni dostatočné množstvo zlúčeniny na liečbu angiogénnej choroby (napríklad na obmedzenie rastu nádoru alebo spomalenie alebo zablokovanie metastázy tumoru) pri rozumnom pomere liečebného prospechu k riziku, obvyklom pri akejkoľvek liečebnej procedúre. Rozumie sa však, že celková denná dávka zlúčenín a kompozícií podľa tohto vynálezu bude určovaná dozerajúcim lekárom v rámci zdravého lekárskeho úsudku. Špecifická terapeuticky účinná dávka pre každého jednotlivého pacienta závisí od rôznych faktorov vrátane povahy liečenej choroby a jej závažnosti, aktivity špecifickej použitej zlúčeniny, špecifickej použitej kompozície, veku, telesnej hmotnosti, celkového zdravia, pohlavia a stravy pacienta, času podávania, spôsobu podávania a rýchlosti exkrécie špecifickej použitej zlúčeniny, času liečby, liekov používaných v kombinácii alebo súčasne so špecifickým podávaným liekom, a od ďalších faktorov dobre známych lekárom. Napríklad patrí ku zvyklostiam odborníkov začínať s nižšími dávkami liekov, než sú dávky potrebné na dosiahnutie žiaduceho liečebného účinku a postupne zvyšovať dávkovanie až do dosiahnutia žiaduceho účinku.

Alternatívne sa zlúčenina podľa tohto vynálezu môže podávať ako farmaceutická kompozícia obsahujúca potrebnú zlúčeninu v kombinácii s jedným alebo viacerými ťarmaceuticky prijateľnými vehikulmi. Farmaceutický prijateľný nosič alebo vehikulum je netoxická pevná látka, polotuhé alebo kvapalné plnivo, riedidlo, opuzdrovací materiál alebo pomocná formulácia akéhokoľvek typu. Kompozícia sa môže podávať parenterálne. intracistemálne, intravaginálne, intraperitoneálne, topicky (ako prášky, masti, kvapky alebo transdermálne náplasti), rektálne alebo bukálne. Tu používaný termín parenterálne sa týka podania zahŕňajúceho vnútrožilové, intramuskuláme, intraperitoneálne, intrastemálne, subkutánne a vnútrokíbové injekcie a infúzie.

Farmaceutické kompozície na parenterálnu injekciu tvoria farmaceutický prijateľné vodné a nevodné roztoky, disperzie, suspenzie a emulzie rovnako ako sterilné prášky na prevedenie na sterilné injikovateľné roztoky alebo disperzie tesne pred použitím. Príklady vhodných vodných a nevodných nosičov, riedidiel, rozpúšťadiel alebo vehikúl zahŕňajú vodu, etanol, polyoly (ako glycerol, propylénglykol, polyetylénglykol a podobne), karboxymetylcelulózy a ich vhodné zmesi, rastlinné oleje (ako olivový olej) a injikovateľné organické estery, ako etyloleát. Správna tekutosť sa môže udržiavať napríklad použitím povlakových materiálov, ako je lecitín, zachovaním požadovanej veľkosti častíc v prípade disperzií a použitím tenzidov.

Tieto kompozície môžu tiež obsahovať pomocné látky, ako je konzervačný prostriedok, zmáčadlá. emulgátory a dispergačné činidlá. Ochrana pred pôsobením mikroorganizmov sa môže zaistiť vnesením rôznych antibakteriálnych a antifungálnych činidiel, napríklad parabénu, chlórbutanolu, fenolsorbovej kyseliny a podobne. Môže byť žiaduce vniesť izotonické činidlá, ako sú cukry, chlorid sodný a podobne. Pozdržanie absorpcie injikovateľnej ťarmaceutickej formy sa môže docieliť vnesením činidiel, ktoré spomaľujú absorpciu, ako je monostearát hlinitý a želatína.

Injikovateľné depotné formy sa pripravia vytvorením matrice lieku mikrozapuzdreného v biologicky odbúrateľných polyméroch, ako sú polylaktid-polyglykolid. poly(ortoestery), poly(anhydridv) a (poly)glykoly, ako je PEG. Rýchlosť uvolňovania lieku je možné regulovať pomerom množstva lieku k polyméru a povahou použitého polyméru. Depotné injikovateľné formulácie sa tiež pripravujú uzavretím lieku v lipozómoch alebo mikroemulziách kompatibilných s telesnými tkanivami.

Injikovateľné formulácie sa môžu sterilizovať napríklad filtráciou cez filter zadržujúci baktérie alebo vnesením sterilizačných činidiel vo forme sterilných pevných kompozícií, ktoré môžu byť rozpustené alebo dispergované v sterilnej vode alebo inom sterilnom injikovateľnom médiu tesne pred použitím.

Topické podanie zahŕňa podanie na pokožku alebo sliznicu vrátane povrchov pľúc alebo očí. Kompozície na topické podanie, vrátane kompozícií na inhaláciu, sa môžu pripraviť ako suchý prášok, ktorý môže a nemusí byť pod tlakom. V nenatlakovaných práškových kompozíciách sa môže použiť aktívna zložka v jemnej práškovej forme spolu s farmaceutický prijateľným inertným nosičom s väčšou zrnitosťou s veľkosťou častíc napríklad 100 mikrometrov v priemere. Vhodnými inertnými nosičmi sú cukry, ako laktóza. Je žiaduce, aby najmenej 95 % hmôt, častíc aktívnej prísady malo účinnú veľkosť častice v rozmedzí 0,01 až 10 mikrometrov

Alternatívne môže kompozícia byť pod tlakom a obsahovať stlačený hnací plyn, ako je dusík, alebo kvapalný hnací plyn. Je výhodné, keď je skvapalnené hnacie médium a celá kompozícia takého druhu, aby sa aktívna zložka v médiu v podstatnejšej miere nerozpúšťala. Natlakovaná kompozícia môže tiež obsahovať tenzid, ako je kvapalný alebo pevný neionogénny tenzid alebo pevný aniónaktívny tenzid. Prednosť sa dáva použitiu pevného aniónaktívneho tenzidu vo forme sodnej soli.

Ďalšou možnosťou topického použitia je oblasť oka. Zlúčenina podľa vynálezu sa podáva vo farmaceutický prijateľnom oftalmickom vehikule tak, aby sa zlúčenina udržala v kontakte s očným povrchom dostatočne dlhý čas nutný na to, aby zlúčenina mohla preniknúť oblasťou rohovky a vnútorných orgánov oka, ako je napríklad predná komora, zadná očná komora, sklovec, komorový mok. rohovka, dúhovka s riasinkami, šošovka, cievovka a sietnica a očné bielko. Farmaceutický prijateľným oftalmickým vehikulom môže byť napríklad masť, rastlinný olej alebo opuzdrovací materiál. Alternatívne sa môžu zlúčeniny podľa vynálezu vstrekovať priamo do sklovca a komorového moku.

Kompozície na rektálnu a vaginálnu aplikáciu sú prednostne čapíky, ktoré sa dajú pripraviť zmiešaním zlúčenín podľa vynálezu s vhodnými nedráždivými vehikulmi alebo nosičmi, ako je kakaové maslo, polyetylénglykol alebo vosk pre čapíky, ktoré sú pevné pri izbovej teplote a kvapalné pri teplote tela, a preto sa topia v priestore konečníka alebo pošvy' a uvolňujú aktívnu zlúčeninu.

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu je možné podať aj v podobe lipozómov. Ako je v odbore známe, lipozómy sa všeobecne odvodzujú od fosfolipidov alebo iných kvapalných látok. Lipozómy tvoria mono- alebo multilameláme hydratované kvapalné kryštály dispergované vo vodnom médiu. Dajú sa použiť akékoľvek netoxické a fyziologicky prijateľné a metabolizovateľné lipidy schopné vytvárať iipozómy. Tielo kompozície prítomné v lipozóme môžu okrem zlúčeniny podľa vynálezu obsahovať stabilizátory, konzervačné prostriedky, vehikulá a podobne. Výhodnými lipidmi sú fosfolipidy a fosfatidylcholíny (lecitíny), a to prírodné i syntetické. Spôsobov prípravy lipozómov je v odbore známych niekoľko. Viď napríklad Prescott, Ed., Methods in Celí Biology. sv. XIV. Academia Press, New York, N.Y.(1976), s. 33 a ďalší.

Aj keď je možné zlúčeniny podľa vynálezu podávať ako jediné farmaceutický aktívne činidlo, je možné ich použiť aj v kombinácii s jedným alebo viacerými činidlami bežne podávanými chorým pri liečbe angiogénnych chorôb. Zlúčeniny podľa vynálezu sú napríklad krátkodobo schopné urobiť nádory vnímavejšími voči tradičným cytotoxickým terapiám, ako je chemoterapia alebo ožarovanie. Zlúčeniny podľa vynálezu tiež zvyšujú účinnosť protirakovinových terapií s využitím existujúcich pomocných látok. Zlúčeniny podľa vynálezu sa dajú tiež kombinovať s inými antiangiogénnymi činidlami na zlepšenie ich účinnosti alebo ich po kombinácii s inými antiangiogénnymi činidlami podávať spoločne s inými cytotoxickými činidlami. Menovite je možné zlúčeniny podľa vynálezu pri liečbe pevných nádorov podávať s IL-12, retinoidmi, interferónmi, angiostatínom, endostatínom, talidomidom, trombospondínom-1, trombospondínom-2, kaptoprylom, angioinhibínmi, TNP-470, pentosanpolysulfátom, trombocytovým faktorom-4. LM-609, SU-5416. CM-101, Tekogalanom, plazminogénom-K-5, vazostatínom, vitaxínom, vaskulostatínom, squalamínom, marimastatom alebo inými inhibítormí MMP, anti-neoplastickými činidlami ako je alfa-interferón, COMP (cyklofosfamid, vinkristín, metotrexát a prednizón), etopozid, mBACOD (metotrexát. bleomycín, doxorubicín, cyklofosfamid, vinkristín a dexametazon), PRO-MACE/MOPP (prednizón, metotrexát (w/leucovin rescue). doxorubicín. cyklofosfamid, cisplatina, taxol. etopozid/mechlóretamín. vinkristín, prednizón a prokarbazín), vinkristín, vinblastín apod.. rovnako ako súbežne s ožarovaním.

Celková denná dávka kompozície podľa vynálezu podávaná ľudskému alebo cicavčiemu hostiteľovi jednotlivo alebo v rozdelených dávkach môže byť v množstve napríklad 0,0001 až 300 mg/kg telesnej hmotnosti denne a ešte obvyklejšie 1 až 300 mg/kg telesnej hmotnosti.

Je samozrejmé, že činidlá, ktoré sa môžu kombinovať so zlúčeninami podľa tohto vynálezu na inhibíciu, liečbu a profylaxiu angiogénnych chorôb, sa neobmedzujú na vyššie uvedené, a v zásade ide o akékoľvek činidlá použiteľné na liečbu alebo profylaxiu angiogénnych chorôb.

Stanovenie biologickej aktivity

Test antiangiogénnej aktivity in vitro

Test migrácie ľudského mikrovaskulámeho endotelu (HMVEC) sa uskutočnil spôsobom, ktorý navrhol Tolsma, S.S., Volpert O.V., Good D.J., Frazier W.F., Polverini P.J. a Bouck N., J.Cell Biol., sv. 122, ss. 497-511 (1993).

Migračný test HMVEC sa uskutočnil s použitím ľudských mikrovaskulámych endotelových kožných buniek od jediného darcu a ľudských mikrovaskulámych endotelových buniek z novorodenca. Bunky BCE alebo HMVEC boli cez noc vyhladovené v DME obsahujúcom 0,01 % albumínu z bovinného séra (BSA). Potom sa bunky izolovali trypsínom a resuspendovali v DME s 0,01 % BSA pri koncentrácii 1.5 x 10” buniek/ml. Bunky sa vložili na dno modifikovanej Boydenovej komory so 48 jamkami (od Nucleopore Corp., Cabin John, MD). Komora sa zmontovala a obrátila a bunky sa ponechali 2 hodiny pri 37 °C viazať chemotaxiou na polykarbonátové membrány s veľkosťou pórov 5 pm, ktoré sa nechali počas predchádzajúcej noci nasiaknuť roztokom 0,01 % želatíny a usušili. Potom sa komora opäť obrátila a do jamiek hornej komory sa pridali testované látky v celkovom objeme 50 μΐ vrátane aktivátorov bFGF/VEGF v množstve 15 ng/ml. Prístroj sa 4 hodiny inkuboval pri 37 °C. Membrány sa izolovali, fixovali a zafarbili (Diff Quick, Fisher Scientific) a spočítalo sa množstvo buniek, ktoré migrovali do hornej komory pri intenzite poľa 3. Odpočítala sa migrácia do DME + 0,1 BSA a výsledné hodnoty sa prezentovali ako počet buniek migrovaných pri intenzite poľa 10 (400 X), alebo po spojení výsledkov z mnohých experimentov ako percentuálny podiel inhibície migrácie v porovnaní s rozsahom migrácie pri pozitívnej kontrole.

Reprezentatívne zlúčeniny opísané v príkladoch 1 až 64 inhibovali migráciu ľudských endotelových buniek vo vyššie uvedených testoch najmenej z 50 % pri koncentrácii 100 nM. Výhodné zlúčeniny inhibovali migráciu ľuských endotelových buniek pri koncentrácii 100 nM z 63 % až 74 %. Výhodnejšie zlúčeniny inhibovali migráciu ľudských endotelových buniek pri koncentrácii 1 nM z 61 až 97 % a najvýhodnejšie zlúčeniny inhibovali migráciu ľudských endotelových buniek z 80 až 86 % pri koncentrácii 0,1 nM. Z týchto výsledkov vyplýva, že zlúčeniny podľa tohto vynálezu vy kazujú zvýšenú účinnosť.

Syntéza peptidov

Zámerom tohto vynálezu je zahrnúť zlúčeniny vzorca (I), pokiaľ sa pripravujú synteticky alebo metabolickými procesmi. Príprava zlúčenín podľa vynálezu metabolickými procesmi zahŕňa procesy, ku ktorým dochádza v ľudskom alebo zvieracom organizmu (in vivo) alebo procesy prebiehajúce in vitro.

Polypeptidy podľa tohto vynálezu sa môžu syntetizovať mnohými technikami známymi odborníkom. Pre syntézu peptidu v pevnej fáze sa dá nájsť súhrn mnohých techník v prameni Stewart, J.,M·, a Young, J., D., Solid Phase Peptide Synthesis, W.H.Freeman Co. (San Francisco), 1963, a Meienhofer, J., Hormonal Proteins and Peptides, sv. 2, s. 46, Academic Press (New York), 1973. Pre klasickú roztokovú syntézu viď Schroder, G. and Lupke, K., The Peptides, sv. 1, Academic Press (New York). 1965.

Reagencie, živice a deriváty aminokyselín sú komerčne dostupné a dajú sa získať od Chem-Impex Intemational. Inc. (Wood Dale, II., USA) alebo Calbiochem-Novabiochem Corp. (San Diego, CA, USA), pokiaľ nie je uvedené inak.

Všeobecne platí, že tieto spôsoby zahŕňajú postupné pridávanie jednej alebo viacerých aminokyselín k rastúcemu peptidovému reťazcu. Normálne sa chráni vhodnou ochrannou skupinou buď aminoskupina alebo karboxyskupina prvej aminokyseliny. Chránená alebo derivatizovaná aminokyselina sa potom môže buď viazať na inertný pevný podklad alebo použiť v roztoku pridaním ďalšej aminokyseliny v poradí, ktorá má vhodne chránenú zodpovedajúcu skupinu (amino- alebo karboxyskupinu), a to v podmienkach vhodných pre vznik amidovej väzby. Ochranná skupina sa potom z. tohto novo pripojeného zvyšku aminokyseliny odstráni a pridá sa ďalšia vhodne chránená aminoskupina a tak ďalej. Keď sa pripoja v správnom poradí všetky potrebné aminokyseliny, odstránia sa postupne alebo súčasne všetky zostávajúce ochranné skupiny (a všetky pevné podklady) a získa sa finálny polypeptid. Jednoduchou úpravou tejto základnej procedúry je možné pridávať k rastúcemu reťazcu postupne viac než jednu aminokyselinu, napríklad kondenzáciou (za vhodných podmienok, za ktorých nedochádza k racemizácii centier chirality) chráneného tripeptidu so správne chráneným dipeptidom za vzniku pentapeptidu po odstránení ochranných skupín.

Zvlášť výhodným spôsobom prípravy zlúčenín podľa tohto vynálezu je syntéza peptidu v pevnej fáze. V tomto zvlášť výhodnom spôsobe je α-aminoskupina chránená skupinou citlivou voči kyseline alebo báze. Tieto ochranné skupiny majú byť stabilné v podmienkach reťazení a peptidu a pritom má být ľahké ich odstrániť bez porušenia rastúceho peptidového reťazca alebo pri racemizácii ktoréhokoľvek z tu obsiahnutých centier chirality. Vhodné ochranné skupiny sú 9-fluorenylmetyloxykarbonyl (Fmoc), ŕerc-butoxykarbonyl (Boe), benzyloxykarbonyl (Cbz), bifenylizopropyloxykarbonyl, ferc-amyloxykarbonyl, izobomyloxykarbonyl, (a,a)-dimetyl-3,5-dimetoxybenzyloxykarbonyl, O-nitrofenylsulfenyl, 2-kyano-tercbutyloxykarbonyl a podobne. Prednosť sa dáva ochrannej skupine 9-fluorenylmetydoxykarbonyl (Fmoc).

Zvlášť výhodnými ochrannými skupinami bočného reťazca sú: pre arginín: acetyl (Ac), adamantyloxykarbonyl, benzyloxykarbonyl (Cbz), ŕerc-butyloxykarbonyl (Boe), 4-metoxybenzénsulfonyl, N^G-4-metoxy-2,3,6-trimetylbenzénsulfonyl (Mtr), nitro, 2,2,5,7,8-pentametylchromán-6-sulfonyl (Pmc) a p-toluénsulfonyl; pre asparagín: (Trt); pre aspartyl: /erc-butyl (/Bu); pre glutaminyl: trityl (Trt); pre omitín: ŕerc-butoxykarbonyl (Boe); pre penicilamín: metyl; pre serín: (e/v-butyl (/Bu), benzyl (Bzl) a tetrahydropyranyl; a pre treonín: acetyl (Ac), benzyl a Zerc-butyl (zBu).

Pri syntéze peptidov v pevnej fáze je aminokyselina s C-zakončením naviazaná na vhodný pevný podklad alebo živicu. Vhodnými pevnými podkladmi pre vyššie uvedenú syntézu sú materiály, ktoré sú inertné voči reagenciám a reakčným podmienkam postupnej kondenzácie a snímania ochrannej skupiny, pričom sú nerozpustné v použitom médiu. Vhodným pevným podkladom pre syntézu karboxypeptidov s C-zakončením je 4-hydroxymetylfenoxymetyl-kopoly(styrén-l% divinylbenzénu). Výhodným pevným podkladom pre amidové peptidy s C-zakončením je 4-(2'.4'-dimetoxyfenyl-Fmoc-aminometyl)fenoxyacetamido-etylová živica od firmy Applied Biosystems.

Aminokyselina s C-zakončením sa so živicou spája kondenzačnou väzbou sprostredkovanou zlúčeninou zo skupiny N.N'-dicyklohexylkarbodiimid (DCC). N.N'-diizopropylkarbodiimid (DIC), [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluróniumhexafIuorofosfát] (HATU), alebo 0-benzotriazol-l-yl-N.N,N',N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (HBTU) spolu s 4-dimetylaminopyridínom (DMAP) alebo bez neho, 1-hydroxybenzotriazol (HOBT), N-metylmorfolín (NMM). benzotriazol-1 -yloxy-tris(dimetylaminofosfóniumhexafluoro fosfát (BOP), alebo bis(2-o.xo-3-oxazolÍdinyl)fosfinchlorid (BOPCl), a to počas asi 1 až 24 hodín pri teplote medzi 10 °C a 50 °C v rozpúšťadle, akým môže byť napríklad dichlórmetán alebo DMF.

Keď je pevným podkladom 4-(2',4'-dimetoxyfenyl-Fmoc-aminometyI)-fenoxyacetamidoetylová živica, odštepuje sa Fmoc pred spojením s aminokyselinou s C-zakončením pomocou sekundárneho amínu, výhodne piperidínu, ako sa opisuje vyššie. Výhodné reagencie používané pre kondenzáciu s 4-(2',4'-dimetoxyfenyl-Fmoc-aminometyl)-fenoxyacetamidoetylovou živicou, z ktorej bola odstránená ochranná skupina sú O-benzotriazol-l-yl-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (1 ekvivalent HBTU) a 1-hydroxybenzotriazol (1 ekvivalent HOBT), alebo [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluróniumhexafluorofosfát] (1 ekvivalent HATU) v DMF.

Kondenzačné pripájanie po sebe nasledujúcich chránených aminokyselín sa môže uskutočňovať v automatickom polvpeptidovom syntetizátore dobre známom v odbore. Vo výhodnom uskutočnení sú α-aminoskupiny v aminokyselinách rastúceho peptidového reťazca chránené Fmoc. Odstránenie ochrannej skupiny Fmoc z N-zakončenia rastúceho peptidu sa uskutočňuje reakciou so sekundárnym amínom, výhodne piperidínom. Všetky chránené aminoskupiny sa potom uvedú do trojnásobného molámeho nadbytku a kondenzačné pripojenie sa uskutoční v DMF. Kondenzačné činidlo je obvykle O-benzotriazol-l-yl-Ν,Ν.Ν',Ν'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát (1 ekvivalent HBTU) a 1-hydroxybenzotriazol (1 ekvivalent ΗΌΒΤ), alebo [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-1.1.3.3-tetrametyluróniumhexafluorofosfát] (1 ekvivalent HATU) v DMF.

Na konci syntézy v pevnej fáze sa polypeptid odstráni zo živice a ochranné skupiny sa odstránia, či už naraz alebo postupne. Odstránenie polypeptidu a odstránenie ochrannej skupiny sa môže uskutočniť v jedinej operácii pôsobením štiepiaceho činidla na polypeptid viazaný na živici, napríklad trifluóroctovej kyseliny obsahujúcej tianizol, vodu alebo etánditiol.

V prípadoch, keď C-zakončenie polypeptidu tvorí alkylamid, sa živica štiepi aminolýzou pomocou alkylamínu. Alternatívne sa peptid môže odstrániť transesterifikáciou napríklad metanolom, po ktorej nasleduje aminolýza, alebo priamou transamidáciou. Chránený peptid sa v tomto okamžiku môže prečistiť alebo priamo preniesť do ďalšieho stupňa. Odstránenie skupín chrániacich bočný reťazec sa uskutočňuje pomocou štiepiacej reagencie uvedenej vyššie.

Peptid úplne zbavený oclu’anuých skupín sa prečistí sériou chromatografických stupňov, ktoré používajú ktorýkoľvek z nasledujúcich spôsobov alebo všetky zo skupiny spôsobov, ktorú tvorí: ionomeničová chromatografia na slabo bázickej živici v acetátovej forme; adsorpčná hydrofóbna chromatografia na chemicky nemodifikovanom polystyréndivinylbenzéne (napríklad AMBERLITE® XAD); adsorpčná chromatografia na silikagéle; ionomeničová chromatografia na karboxymetylcelulóze; rozdeľovacia chromatografia napríklad na SEPHADEX® G-25, LH-20 alebo s protiprúdovou distribúciou; vysokoúčinná kvapalná chromatografia (HPLC), zvlášť HPLC s obrátenými fázami na náplni kolóny s oktylalebo oktadecylsilylovou fázou na oxide kremičitom.

Uvedené skutočnosti sú lepšie zrozumiteľné vo svetle príkladov, ktoré opisujú zlúčeniny a procesy uskutočňované v súlade s vynálezom a nie sú v žiadnom prípade mienené ako obmedzenie rozsahu vynálezu.

V nasledujúcich príkladoch sa používajú tieto skratky: DMF pre N,Ndimetylformamid; HBTU pre O-benzotriazol-l-yl-N,N,N',N'-tetrametyluróniumhexafluorofosfát; NMM pre N-metylmorfolín; TFA pre trifluóroctovú kyselinu; NMP pre N-metylpyrolidinón a HATU pre [O-(7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametyluróniumhexafluorofosfát].

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

N-(N-acetyInipekotyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Do reakčnej nádoby peptidového syntetizátora Rainin sa vložila Fmoc-Proetylamidová živica podľa Siebera (0,25 g, 0,4 mmol/g náplne). Solvatovala sa pomocou DMF a postupne sa napojili aminokyseliny podľa nasledujúcej schémy syntézy:

1) Živica sa solvatovala DMF asi 5 minút;

2) Živica sa 3 x premyla DMF, zakaždým 1,5 minúty;

3) Skupina Fmoc sa odstránila použitím 20% piperidínového roztoku v DMF počas asi 15 minút, živica sa premyla a táto sekvencia sa opakovala;

4) Živica sa 6x premývala v DMF zakaždým 3 minúty:

5) Pridala sa aminokyselina;

6) Aminokyselina sa aktivovala 0.4 M roztokom HBTU/NMM a vytvorila kondenzačnú väzbu;

7) Živica sa trikrát premyla DMF. zakaždým 1.5 minúty.

Chránené aminokyseliny sa na živicu napojili v nasledujúcom poradí:

Aminokyselina	Čas tvorby kondenzačnej väzby
1. Fmoc-Arg (Pmc)	30 minút
2. Fmoc-Ile	30 minút
3. Fmoc-Nva	30 minút
4. Fmoc-Thr (OíBu)	30 minút
5. Fmoc-D-Ile	30 minút
6. Fmoc-Val	30 minút
7. Fmoc-Gly	30 minút

8. Fmoc-Sar	30 minút
9. N-acetylnipekotová kyselina	30 minút

Po dokončení syntézy sa peptid od živice odštiepil pomocou zmesi TFA/anizol/voda (v pomere 95:2,5:2,5) počas 3 hodín. Peptidový roztok sa zahustil in vacuo, vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-(N~acetylmpekotyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,36 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1105 (M+H)+: analýza aminokyselín: 0,92 Sar, 1,02 Gly; 1,00 Val; 2,10 íle; 0,47 Thr; 0,93 Nva; 1,10 Arg; 1,06 Pro.

Príklad 2

N-(N-acetylpiperidín-4-acetyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil rovnako ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou N-acetylpiperidín-4-octovou. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-(N-acetylpiperidín-4-acetyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,32 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1119 (M+H)⁺: analýza aminokyselín: 1,03 Sar, 0.97 Gly; 0,98 Val; 2,04 íle; 0,51 Thr; 0.89 Nva: 1,06 Arg; 1,03 Pro.

Príklad 3

N-Ac-Pro-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Aľg-PiONHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil rovnako ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny N-acetylprolínom. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradiént vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-ProSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHj ako trifluóracetát. R_t ~ 3,34 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1091 (M+H)⁺: analýza aminokyselín: 0,90 Sar. 0.96 Gly; 0,99 Val; 2,07 íle; 0,48 Thr; 1.01 Nva; 1.08 Arg: 2,12 Pro.

Príklad 4

N-Ac-Sar-(4-CN)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil rovnako ako v príklade 1. ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou, použitím Fmoc(4-CN)Phe namiesto Fmoc-Gly a Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradiént vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar(4-CN)Phe-Val-D-alolle-Thr-Nva-lie-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 4,74 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0.01 % TFA.) MS (ESI) mA 1109 (M+H)*: analýza aminokyselín: 0.94 Sar, 1,02 Val; 2.13 íle; 0.39 Thr; 0,94 Nva; 1.33 Arg; 1,04 Pro.

Príklad 5

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-lle-Asp-Nva-Ile-Arg-ProNHClfyCHj

Tento produkt sa pripravil rovnako ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kvseiiny kyselinou octovou a použitím Ftnoc-Asp(OzBu) namiesto FmocThr(OíBu). Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-AspNva-Ile-Arg-ProNHCHiCHa ako trifluóracetát. R_t = 2,80 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESl) m/e 1008 (M+H)⁺: analýza aminokyselín: 1,01 Sar, 1,02 Gly, 0,93 Val; 2,07 íle; 0,88 Asp; 1,03 Nva; 1,37 Arg; 1,05 Pro.

Príklad 6

N-Ac-Sar-Taz-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Taz namiesto Fmoc-Gly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový' peptid. Surový' peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-Taz-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-ArgProNHCH2CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 3,933 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0.01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1091 (M)Č

Príklad 7

N-Ac-Sar-(3,4-diMeO)Phe-VaI-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNf ICH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc(3,4-diMeO)Phe namiesto FmocGly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyoíílizovalí a poskytli N-Ac-Sar-(3,4-diMeO)Phe-ValD-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH^CHa ako trifluóracetát. R_t = 4,27 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1144 (M)’.

Príklad 8

N-Ac-Sar-(2-furyl)Ala-Val-D-Ile-Thr-Nva-IIe-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-3-(2-furyl)Ala namiesto Fmoc-Gly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-(2-furyl)Ala-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-ArgProNHCIhCHj ato trifluóracetát. R_t = 4,50 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1074 (M) .

Príklad 9

N-Ac-Sar-[(15,3Ä)-l-aminocyklopentán-3-karbonyl]-Val-D-lle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím (l5,37f)-N-Frnoc-l-arninocyklopentán-3-karboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Gly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-[(lS,37?)-l-aminocyklopentán-3-karbonyl]-Val-D41e-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 3,916 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1048 (M)'.

Príklad 10

N-Ac-Sar-[( 1 R.4S)-1 -aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-Iie-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím (lJ?,45)-N-Fmoc-l-aminocyklopent-2-én-4-karboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Gly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový’ peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-[(1/?, 45)-1 -aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-[le-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 3,918 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1046 (M)⁺.

Príklad 11

N-Ac-Sar-[( 15', 47?)-1 -aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím (lS,4/?)-N-Fmoc-l-aminocyklopent-2-én-4-karboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Gly. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadiovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-[(l5,4/?)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNFICH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,892 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlo vého systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1046 (M)⁺.

Príklad 12

N-Ac-Sar-(3-CN)Phe-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-(3-CN)Phe namiesto Fmoc-Gly a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lvofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-(3-CN)Phe-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Aľg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 4.636 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0.01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1109(M)⁺.

Príklad 13

N-Ac-Sar-(4-F)Phe-Val-D-aloIIe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-(4-F)Phe namiesto Fmoc-Gly a Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradienl vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-(4-F)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 4,778 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1102 (M)⁺.

Príklad 14

N-Ac-Sar-(4-Me)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím F'moc-(4-Me)Phe namiesto Fmoc-Glv a Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-(4-Me)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH?CH3 ako trifluóracetát. R_t = 4,978 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1098 (M)⁺.

Príklad 15

N-[( 1S.4Ä!)- l-acetylaminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím (lS,4Ä)-N-Fmoc-l-N-acetylaminocyklopent-2-én-4-karboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N[(LS'.4/?)-l-acetylaminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-IIe-Arg-ProNHCÍLCH^ ako trifluóracetát. R_t = 3,823 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1031 (M)⁺.

Príklad 16

N-[(17?,3,S)-l-N-acetylaminocyklopentán-3-karbonyl]-Gly-Val-D-Lcu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHtCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím (lR,3S)-N-Fmoc-I-aminocyklopentán-3-karboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Sar a D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-[(l/?,35)-1 -N-acetylaminocyklopentán-3-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCTbCH; ako trifluóracetát. R_t = 3,804 minút (pri použití kolóny C27 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1033 (M)⁺.

Príklad 17

N-Ac-(4-Me)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-lIe-Arg-PľoNHCH2CHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-(4-Me)Phe namiesto Fmoc-Sar a D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-(4-Me)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHjCHj ako trifluóracetát. R_t = 3,888 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1084 (M)⁺.

Príklad 19

N-(N-acetyl-1 -amino-1 -cyklopropánkarbonyl)-Gly-V al-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHzCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-1-amino-1-cyklopropylkarboxylovej kyseliny namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový- peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofílizovali a poskytli N-(N-acetyl-l -amino-1 -cyklopropylkarbonyl)-Gly-Val-D-Leu-Thr*> Q zl O

-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,888 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1005 (Mf.

Príklad 20

N-Ac-(2,3,5,6-tetrahydro-l-tiopyrán-4-yl)gly-Gly-Vai-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-(2,3.5,6-tetrahydro- l-tiopyrán-4-yl)gly namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-(2,3,5,6-tetrahydro-l-thiopyran-4-yl)gly-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 4,464 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1079 (M)⁺.

Príklad 21

N-Ac-Hyp-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Hyp(OtBu) namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Hyp29

-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHíCHs ako trifluóracetát. R_t = 4,148 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1035 (K

Príklad 22

N-Ac-Nle-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnípekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Nle namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa Iyofilizovali a poskytli N-Ac-Nle-Gly-Val-DLeu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHj ako trifluóracetát. Rt = 4,671 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1036 (M)⁺.

Príklad 23

N-Ac-(4-Cl)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-(4-Cl)Phe namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Iie. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový' peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa Iyofilizovali a poskytli N-Ac-(4-Cl)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 4,918 minút (pri použití kolóny C-l 8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1103 (M)⁺.

Príklad 24

N-Ac-piOpargyigly-GÍy-VaÍ-D-Leu-Thr-Nva-ile-Arg-ProNHCHiCHa

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Propargylgly namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou FIPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-propargylgly-GLy-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCFLCHj ako trifluóracetát. R_t = 4,02 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 1017 (M)’.

Príklad 25

N-Ac-D-Ala-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCFb

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-Ala namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l 8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-D-Ala-Glv-Val-D-I.eu-ľhr-Nva-Ile-Arg-ProNHCILCII3 ako trifluóracetát. P._t ~ 3.765 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 993 (M)⁺.

Príklad 26

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Pro-Ile-Arg-ProNHCHiCHa

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením Nacetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-aloThr(OtBu) namiesto FmocThr(OíBu) a Fmoc-Pro namiesto Fmoc-blva. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofílizovali a poskytli N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Pro-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,551 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 % TFA.) MS (ESI) m/e 992 (M)⁺.

Príklad 27

N-Ac-Sar-Nva-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-PľoNHCHjCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Nva namiesto Fmoc-Gly. Po odštiepení peptidu od živica a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Nva-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,57 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho); MS (ESI) m/e 1036 (M+H)⁺. Analýza aminokyselín: 0.98 Sar; 2,02 Nva; 1,02 Val; 2,07 íle; 0,51 Thr; 1,44 Arg; 1,04 Pro.

Príklad 28

N-Ac-Sar-Asn-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCFLCHs

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Asn(Trt) namiesto Fmoc-Gly. Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Asn-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHa ako trifluóracetát. R_t = 3,01 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho); MS (ESI) m/e 1051 (M+H)⁺. Analýza aminokyselín: 0.96 Sar; 1,01 Asn; 1,03 Val: 1,01 Nva; 1,03 Val; 2,12 íle; 0.48 Thr; 1,32 Arg; 1,07 Pro.

Príklad 29

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Hyp-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile a Fmoc-Hyp(OíBu) namiesto Fmoc-Thr(OzBu). Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Hyp-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃ ako trifluóracetát. R. = 3.08 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho); MS (ESI) m/e 1051 (M+Hý.

Príklad 30

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Hyp-Ile-Arg-ProNHCHjCPh

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-alolle namiesto Fmoc-D-Ile a Fmoc-Hyp(OzBu) namiesto Fmoc-Nva. Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Val-rj-aloIle-Thr-Hyp-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t - 2,71 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)⁺.

Príklad 31

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-Pen(SMe) namiesto Fmoc-D-Ile. Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-AC'Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-íle-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 24,0 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlo vého systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 1026 (M+H)⁺.

Príklad 32

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-Pen(SMe) namiesto Fmoc-D-Ile a Fmoc-Ser-(O/Bu) namiesto Fmoc-Thr-(OtBu). Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Ser-NvaIle-Arg-ProNHCIUCHj ako trifluóracetát. R_t = 20.5 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 1012 (M+H).

Príklad 33

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade l, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-D-Pen(SMe) namiesto Fmoc-D-Ile a Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Nva. Po odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t == 21,5 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0.01 TFA); MS (ESI) m/e 1055 ( M+H) .

Príklad 34

N-Ac-Sar-Gly-Gln-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Val a Fmoc-D-Pen(SMe) namiesto Fmoc-D-lle. Po odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Gln-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 19,5 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0.01 TFA); MS (ESI) m/e 1055 (M+H)⁺.

Príklad 35

N-Ac-Sar-Gly-Asn-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetvlnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc--Asn(Trt) namiesto Fmoc-Val a Fmoc-D-Pen(SMe) namiesto Fmoc-D-Ile. Po odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Asn-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát; R_t = 21,0 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 1041 (M+H)⁺.

Príklad 36

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-IIe-Thr-Nva-Ile-Om-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Om(N-delta-Boc) namiesto FmocArg(Pmc). Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfiltroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-VaI-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Om-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát; R_t = 3,113 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 952 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 0,94 Sar; 1,09 Gly; 1,10 Val; 1,86 íle; 0,65 Thr; 0,95 Nva; 0,98 Om; 1,03 Pro.

Príklad 37

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-lle-Thr-Nva-lle-Gln-ProNFICH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Gln namiesto Fmoc-Arg(Pmc). Po odštiepení peptidu od živice a odstránení ochranných skupín sa produkt vyzrážal dietyléterom a sfdtroval. Produkt sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC a poskytol N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Gln-ProNHCHiCHí ako trifluóracetát; R_t = 3,113 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 966 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 0,94 Sar; 0,99 Gly; 1,02 Val; 1,87 íle; 0,65 Thr; 0,97 Nva; 0,97 Glu; 1,12 Pro.

Príklad 38

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr(OAc)-Om(N-delta-Ac)-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Roztok N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Om-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 (70 mg, pripravené nahradením N-acetylnipekotovej kyseliny kyselinou octovou a použitím Fmoc-Om(N-delta-Boc) namiesto Fmoc-Nva v príklade 1) reagoval 24 hodín s acetanhydridom/pyridínom/DMF v pomere 1:1:8 (3 ml). Rozpúšťadlo a nadbytočné reagens sa vákuovo odstránilo a zvyšok sa vyzrážal dietyléterom. Zrazenina sa sfiltrovala a získal sa N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr(OAc)-Om(N-delta-Ac)-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát; R_t = 3,05 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 33 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 40 % a s prímesou 0,01 TFA); MS (ESI) m/e 1093 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 0,71 Sar; 0,96 Gly; 0,99 Val; 2,06 lle; 0,62 Thr; 1,09 Om; 1,00 Arg; 1,13 Pro.

Príklad 39

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHa

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a s vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % mM TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCPLCHj ako trifluóracetát. MS (ESI) m/e 992 (M+H)⁺.

Príklad 40

N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile a vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfíltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Me-Pro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t 2,977 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho). MS (ESI) m/e 992 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,00 Pro; 0,97 Arg; 2,07 íle; 1,00 Nva; 0,54 Thr; 0,99 Val; 0,97 Gly.

Príklad 41

N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile a vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfíltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,15 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 10 mM octanu amónneho). MS (ESI) m/e 992 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1.04 Pro; 1.01 Arg; 1,93 íle; 1.03 Nva; 0,54 Thr; 1,02 Val:. 0.98 Gly.

Príklad 42

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCHzCHa

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Nva a vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-lle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCHaCHj ako trifluóracetát. R_t = 2,718 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1021 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,05 Pro; 1,07 Arg; 1,96 íle; 0,92 Val; 0,94 Glu; 0,36 Thr; 1,05 Gly.

Príklad 43

N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-IIe-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Val a vynechaním kondenzačného pripojení N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHj ako trifluóracetát. R_t = 2,083 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1021 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,00 Pro; 1,03 Arg; 2,07 íle; 1.01 Nva; 0,93 Glu; 0,43 Thr; 0,95 Gly.

Príklad 44

N-MePro-Gly-Val-D-lle-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCELCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar a Fmoc-D-Ile namiesto Fmoc-Ile a vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovani sa získal surový- peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-lle-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 3,06 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 992 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,04 Pro; 1,05 Arg; 2,01 íle; 1.01 Nva; 0,95 Val; 0,45 Thr; 0,95 Gly.

Príklad 45

N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCHzCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s použitím N-MePro namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Val, Fmoc-D-Ile namiesto Fmoc-Ile a vynechaním kondenzačného pripojenia N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 2,331 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1021 (M+H)~. Rozbor aminokyselín: 1.02 Pro; 1,03 Arg; 2,10 íle; 1.00 Nva; 0,92 Glu; 0,47 Thr; 0,93 Gly.

Príklad 46

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCHiCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 39, ale s použitím FmocaloThr(OtBu) namiesto Fmoc-Thr(O/Bu). Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový- peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 2,809 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0.01 TFA). MS (ESI) m/e 992 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,03 Pro; 1,07 Arg; 2,00 íle; 1.01 Nva; 0,96 Val; 0.50 Thr; 0,94 Gly.

Príklad 47

N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH?

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale s nasledujúcimi zmenami: N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar. Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Val a Fmoc-D-Ala41

-amidová živica podľa Siebera nahradila Fmoc-Pro-etylamidovú živicu podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradiént vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Gln-D-I!e-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-DAlaNH₂ ato trifluóracetát. R_t - 1,75 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA.) MS (ESI) m/e 1064 (M+FI)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,05 Ala; 1,04 Pro; 0,99 Arg; 2,07 íle; 1.01 Nva; 0,87 Glu; 0,42 Thr; 0,96 Gly.

Príklad 48

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-ne-Arg-Pro-D-AlaNH₂

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, a Fmoc-D-Ala-amidová živica podľa Siebera nahradila Fmoc-Pro-etylamidovú živicu podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradiént vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH₂ ako trifluóracetát. R_t = 2,695 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1035 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,09 Ala: 1,08 Pro; 0,96 Arg; 2.01 Íle; 1.02 Nva; 0.91 Val; 0.40 Thr; 0,94 Gly.

í 2

Príklad 49

N-MePro-Gly-Gln-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNFL

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Val, Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile a Fmoc-D-Ala-amidová živica podľa Siebera nahradila Fmoc-Pro-etylamidovú živicu podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením r moc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Gln-D-aloIleThr-Nva-lle-Arg-Pro-D-AlaNH2 ako trifluóracetát. R_t = 1.708 minút (pri použití kolóny C-1S a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1064 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,00 Ala; 1,00 Pro; 0,96 Arg; 2,20 íle; 1.00 Nva; 0.90 Glu; 0,44 Thr; 0,94 Gly.

Príklad 50

N-MePro-Gly-Ile-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Ile namiesto Fmoc-Val a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0.01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Ile-D-IIe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 3.092 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1006 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 0,99 Pro; 1,06 Arg; 3,02 íle; 1.02 Nva; 0.41 Thr; 0,96 Gly.

Príklad 51

N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCIUCHa

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-D-aloIle namiesto Fmoc-D-Ile, Fmoc-Ser(OfBu) namiesto Fmoc-Thr(OzBu) i namiesto Fmoc-Nva a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa Iyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-SerSer-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 ako trifluóracetát. R_t = 2,474 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 966 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,04 Pro; 1,03 Arg; 1,03 alolle; 0,98 íle, 1,03 Nva; 0,42 Ser, 0,95 Gly.

Príklad 52

N-MePro-Gly-Asn-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCHiCHs

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Asn(Trt) namiesto Fmoc-Val a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový· peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa Iyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Asn-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 1.975 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1007 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,01 Pro; 1,04 Arg; 2,07 íle; 0,99 Nva; 0,40 Thr. 0,96 Asp. 0.92 Gly.

Príklad 53

N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCHjCHj

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Gly a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofílizovali a poskytli N-MeProGln-Val-D-lle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHC'H^CHa ako trifluóracetát. R_t - 2,73 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1063 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,04 Pro: 1,04 Arg; 2,00 íle; 1,02 Nva; 0,50 Thr, 0,98 Asp, 0,92 Gly.

Príklad 54

N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNFT

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Gly. Fmoc-D-Ala-amidová živica podľa Siebera namiesto Fmoc-Pro-etylamidovcj živice podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNHi ako trifluóracetát. R_t = 2,619 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1106 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,08 Ala; 1,12 Pro, 1,06 Arg; 2,06 íle; 1,02 Nva; 0,44 Thr, 0,90 Val, 0.77 Glu.

Príklad 55

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-aloThr(OzBu) namiesto Fmoc-Thr(O/Bu). Fmoc-Gln(Trt) namiesto Fmoc-Nva a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový· peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Gln-Ile-Arg-ProNHCIBCHj ako trifluóracetát. R_t = 2.37 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1021 (M+H)⁺.

Príklad 56

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNFB

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-aloThr(O/Bu) namiesto Fmoc-Thr(OfBu) a Fmoc-D-Ala-amidová živica podľa Siebera namiesto Fmoc-Pro-etyiamidovej živice podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekolovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-Pro-DAlaNHi ako trifluóracetát. R_t = 2,49 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1035 (M+H)⁺.

Príklad 57

N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-D-Leu namiesto Fmoc-D-Ile, Fmoc-Ser(O/Bu) namiesto Fmoc-Thr(OzBu) a Fmoc-D-Ala-amidová živica podľa Siebera namiesto Fmoc-Pro-etylamidovej živice podľa Siebera. Navyše sa vynechalo kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny a pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc) sa uskutočnilo kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-l8 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Leu-SerNva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNFF ako trifluóracetát. R_t = 2,802 minút (pri použití kolóny C-l8 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1021 (M+H)⁺.

Príklad 58

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Ser-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-McPro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-aloThr(/Bu) namiesto Fmoc-aloThr(tBu), Fmoc-Ser(OfBu) namiesto FmocNva a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnípekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Ser-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 2,452 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA.) MS (ESI) m/e 980 (M+H)⁺.

Príklad 59

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-aloThr-He-Aľg-ProbíHCH2CH₃

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro sa použilo namiesto Fmoc-Sar, Fmoc-aloThýOíBu) namiesto Fmoc-Nva a vynechalo sa kondenzačné pripojenie N-acetylnipekotovej kyseliny. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový' peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-aloThr-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃ ako trifluóracetát. R_t = 2,452 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 994 (M+H)⁺.

Príklad 60

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-NMe-D-AlaNFI?

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1. ale kyselina octová nahradila kyselinu N-acetylnipekotovú a Fmoc-N-Me-D-Ala-amidová živica podľa Siebera živicu Fmoc-Pro-etylamidovú podľa Siebera. Navyše sa kondenzačné pripojenie Fmoc-Pro uskutočnilo pred kondenzačným pripojením Fmoc-Arg(Pmc). Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový' peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou F1PLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofílizovali a poskytli N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-NMe-D-AlaNIÍ2 ako trifluóracetát. R_t = 2,53 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 10 % acetonitrilu vo vode na 95 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1051.8 (M+H)⁺.

Príklad 61

N-[(N-acetylazetidín-2-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-IIe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CFl3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale Fmoc-azetidín-2-karboxylová kyselina nahradila N-acetylnipekotovú kyselinu a po kondenzačnom spojení s Fmoc-azetidín2-karboxylovou kyselinou sa pridala kondenzačná reakcia s octovou kyselinou. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou FIPLC pomocou kolóny C-18 a rozpušťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofílizovali a poskytli N-[(N-acetylazetidín-2-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 2,87 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1077 (M+H)^T. Rozbor aminokyselín: 1,02 Sar; 1,03 Gly: 0,97 Val; 2,11 íle; 0,55 Thr: 1,01 Nva; 1,05 Arg; 1,01 Pro.

Príklad 62

N-[(N-acetylazetidín-3-karbonyl)]-Sar-Gly-VaI-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale Fmoc-azetidín-2-karboxylová kyselina nahradila N-acetylnipekotovú kyselinu a po kondenzačnom spojení s Fmoc-azetidín2-karboxylovou kyselinou sa pridala kondenzácia s octovou kyselinou. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-[(N-acetylazetidín-3-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-HeThr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R_t = 2.87 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 TFA.) MS (ESI) m/e 1077 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 1,00 Sar; 1,02 Gly; 1,02 Val; 2,04 íle; 0,49 Thr; 0,98 Nva; 1,10 Arg; 1,03 Pro.

Príklad 63

N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-Lys(Ac)NH2

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale Fmoc-D-Lys(Ac) amidová kyselina podľa Siebera nahradila Fmoc-Pro-etylamidovú kyselinu podľa Siebera a octová kyselina kyselinu N-acetylnipekotovú. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid. Surový peptid sa prečistil preparatívnou chromatografiou HPLC pomocou kolóny C-18 a rozpúšťadlovým systémom, ktorého koncentračný gradient vzrástol počas 50 minút z 5% roztoku acetonitrilu vo vode na 100 % s prísadou 0,01 % TFA. Čisté frakcie sa lyofilizovali a poskytli N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH2CH3 ako trifluóracetát. R, = 2,84 minút (pri použití kolóny C-18 a rozpúšťadlového systému s koncentračným gradientom rastúcim počas 10 minút z 20 % acetonitrilu vo vode na 80 % a s prímesou 0,01 TFA). MS (ESI) m/e 1136,8 (M+H)⁺. Rozbor aminokyselín: 0,97 Sar; 1.01 Gly; 1,03 Val; 2,05 íle; 0,55 Thr; 1,01 Nva; 0,99 Arg; 0,98 Pro.

Príklad 64

N-iMePiO-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Pro-Aig-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro nahradil Fmoc-Sar, Fmoc-aloThr(O/Bu)je namiesto Fmoc-Thr(OľBu), Fmoc-Pro namiesto Fmoc-Ile a vynechalo sa kondenzačné pripojenie kyseliny N-acetylnipekotovej. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid.

Príklad 65

N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Trp-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro nahradil Fmoc-Sar, Fmoc-alolle je namiesto Finoc-D-Ile, Fmoc-Trp(Boc) namiesto Fmoc-Nva a vynechalo sa kondenzačné pripojenie kyseliny N-acetylnipekotovej. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid.

Príklad 66

N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 1, ale N-MePro nahradil Fmoc-Sar, Fmoc-Gln(Trt) je namiesto Fmoc-Nva, Fmoc-D-Ile namiesto Fmoc-Lle a vynechalo sa kondenzačné pripojenie kyseliny N-acetylnipekotovej. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid.

Príklad 67

N-Ac-N-MeNva-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CH₃

Do reakčnej nádoby peptidového syntetizátora Applied Biosystems 433 A sa vložila Fmoc-Pro-etylamidová živica podľa Siebera (0,1 mM). Postupne sa vkladali patróny s aminokyselinami v množstve 1 mM. S použitím Fastmoc 0,1 a sledovania predchádzajúceho piku bol postup nasledujúci:

1) Živica sa asi 5 minút solvatovala NMP;

2) Živica sa asi 5 minút premývala NMP;

3) Skupina Fmoc sa odstránila použitím 50% piperidínového roztoku v NMP počas asi 5 minút, živica sa premyla a sekvencia sa opakovala 3x-4x;

4) Chránená aminokyselina sa aktivovala roztokom 0,5 M HATU v množstve 1 mM v DMF;

5) Do reakčnej nádoby sa pridala aktivovaná a chránená aminokyselina a potom 1 mM roztok 2M diizopropylamínu v NMP;

6) Nasledovala kondenzační reakce po dobu 20 minút;

7) Živica sa premyla a ochranná skupina sa odstránila 50 % roztokom piperidínu v NMP;

Chránené aminokyseliny sa na živicu napojili v nasledujúcom poradí;

Aminokyselina	Trvanie kondenzačnej reakcie
1. Fmoc-Arg (Pmc)	20 minút
2. Fmoc-Ile	20 minút
3. Fmoc-Nva	20 minút
4. Fmoc-THr (O/Bu)	20 minút
5. Fmoc-D-Ile	20 minút
6. Fmoc-Val	20 minút
7. Fmoc-Gly	20 minút
8. Fmoc-N-MeNva	20 minút

9. Octová kyselina

20 minút

Po dokončení syntézy sa peptid viazaný na živicu môže premývať metanolom, vákuovo sušiť a na 18 hodín vystaviť pôsobeniu zmesi TFA a vody v pomere 95:5 a v množstve 3 ml, Živica sa sfíltruje a a premyje metanolom. Filtráty a metanol z premývania sa spoja a zahustia. Zvyšok sa vyzráža dietyléterom a zrazenina sa sfíltruje a získa sa surový peptid. Môže sa prečistú preparatívnou HPLC a lyofilizáciou sa získa N-Ac-N-MeNva-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCTLCHs ako trifluóracetát.

Príklad 68

N-Ac-N-MeThr(Bzl)-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCFl2CH3

Tento produkt sa pripravil podobne ako v príklade 67, ale Fmoc-N-MeThr(OBzl) nahradil Fmoc-N-MeNva. Po dokončení syntézy, odštiepení peptidu od živice, odstránení ochranných skupín, vyzrážaní dietyléterom a sfiltrovaní sa získal surový peptid.

Pre odborníka je zrejmé, že sa tento vynález neobmedzuje na vyššie uvedené ilustratívne príklady, ale že sa môže uskutočniť aj v iných špecifických formách, bez toho, aby sa ustupovalo od zásadných znakov vynálezu. Prelo je žiaduce, aby sa tieto príklady považovali vo všetkých ohľadoch len za ilustratívne a nie za limitujúce, pričom sa odkazuje na pripojené nároky skôr než na vyššie uvedené príklady, a všetky zmeny, ktoré sú čo do významu a ekvivalencie v medziach nárokov, je preto nutné do rozsahu tohto riešenia zahrnúť.

Claims (33)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Zlúčenina všeobecného vzorca I

   A0-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-A10 (I), alebo jej terapeuticky prijateľná soľ, pričom

   Ao buď chýba, alebo je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí N-acetyl, N-acetylazetidín-2karbonyl, N-acetylazetidín-3-karbonyl, N-acetylnipekotyl, N-acetylpiperidín-4-acetyl a N-acetylprolyl;

   A_t je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-alanyl, (17?,3S)-l-aminocyklopentán-3-karbonyl, (lS,47?)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl, 1-amino-1-cyklopropánkarbonyl, 3-(4-chlórfenyljalanyl, 4-hydroxyprolyl, N-metylnorvalyl, 3-(4-metylfenyl)alanyl, N-metylprolyl, N-metyltreonyl(benzyl), norleucyl, propargylglycyl, sarkozyl a (2,3,5,6-tetrahydro-l-tiopyrán-4-yl)glycyl;

   A₂ je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí [(lSý/čj-l-aminocyklopentán-S-karbonyl], [(1 RAS)-1 -aminocyklopent-2-én-4-karbony 1], [(1 S, 4 R)-1 -aminocyklopent-2-én-4-karbonyl], asparaginyl, 3-(3-kyanofenyl)alanyl, 3-(4-kyanofenyl)alanyl, 3-(3,4-dimetoxyfenyl)alanyl, 3-(4-fluórfenyl)alanyl, 3-(2-furyl)alanyl, glutaminyl, glycyl, 3-(4-metylfenyl)alanyl, norvalyl a 3-(tiazol-5-yľ)alanyl;

   A₃ je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí asparaginyl, glutaminyl, izoleucyl a valyl;

   A4 je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-aloizoleucyl, D-izoleucyl, D-leucyl a D-penicilaminyl(S-metyl);

   A₅ je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí alotreonyl, aspartyl, 4-hydroxyprolyl, seryl, treonyl a treonyl(O-acetyl);

   A₆ je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí alotreonyl, glutaminyl, 4-hydroxyprolyl, norvalyl, omityl(N-delta-acetyI). prolyl, seryl atryptyl;

   Αγ jc zvolený zo skupiny, ktorú tvorí izoleueyl, D-izoleucyl a prolyl;

   Ag je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí arginyl, glutaminyl a omityl;

   Aoje prolyl a

   A₁₀je zvolený zo skupiny, ktorú tvorí D-alanylamid. D-lyzyl(N-epsilon-acetyl)amid, etylamid a N-metyl-D-alanylamid;

   za predpokladu, že keď Ao nie je prítomný, Ai je N-metylprolyl a za predpokladu, že keď A] je sarkozyl, A_o nie je acetyl; alebo A₂ nie je asparaginyl, glutaminyl alebo glycyl; alebo A₄ nie je D-aloizolcucyl, D-izoleucyl alebo D-leucyl; alebo A s nie je alotreonyl, seryl alebo treonyl; alebo A_f) nie je glutaminyl. norvalyl, seryl alebo tryptyl, alebo Ag nie je arginyl; alebo Aio nie je D-alanylamid alebo etylamid.
2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1. kde Ao chýba.
3. 3. Zlúčenina podľa nároku 2, kde A_j je D-aloizoleucyl.
4. 4. Zlúčenina podľa nároku 3. vybraná zo skupiny, ktorú tvorí

   N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

   N-MePro-Gly-Gln-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH₂,

   N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCHiCHs a

   N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Trp-Ile-Arg-ProNHCHiCHj.
5. 5. Zlúčenina podľa nároku 2. kde A₄ je D-leucyl.
6. 6. Zlúčenina podľa nároku 5, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí N-MePiO-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3 a N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNHi.
7. 7. Zlúčenina podľa nároku 2, kde A₄ je D-izoleucyL
8. 8. Zlúčenina podľa nároku 7, kde Aj je alotreonyl.
9. 9. Zlúčenina podľa nároku 8, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3, N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH₂,

   N-MePro-Gly-Val-D41e-aloThr-Ser-[le-Arg-ProNHCH₂CH₃a

   N-MePro-Gly-Vai-D-Ile-aloTiir-Nva-Pro-Arg-ProNHCH₂CH3
10. 10. Zlúčenina podľa nároku 7, kde Aj je treonyl.
11. 11. Zlúčenina podľa nároku 10, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CHj, N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-ne-Arg-ProNHCHjCHj, N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-MePro-Gly-Val-D-ne-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCHzCHj.

    N-MePro-Gly-GIn-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH?.

    N-MePro-Gly-Ile-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3.

    N-MePro-Gly-Asn-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.

    N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH^CHs,

    N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH?,

    Nr-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-aloThr-Ile-Arg-ProNHCH?CH3 a

    N-MePro-GIy-Val-D-Ile-Thr-Gln-D-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3.
12. 12. Zlúčenina podľa nároku 1, kde A_o je N-acetylnipekotyl.
13. 13. Zlúčenina podľa nároku 12, ktorou je N-(N-acetylnipekotyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
14. 14. Zlúčenina podľa nároku 1. kde Ao je N-acetylpiperidín-4-acetyI.
15. 15. Zlúčenina podľa nároku 14. ktorou je N-[2-(N-acetylpiperidín-4-acetyl)]-Sar-Gly-Val-

    -D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
16. 16. Zlúčenina podľa nároku 1. kde Ao je N-acetvlprolyl.
17. 17. Zlúčenina podľa nároku 16, ktorou je N-Ac-Pro-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
18. 18. Zlúčenina podľa nároku 1, kde A_o je N-acetylazetidín-2-karbonyl.
19. 19. Zlúčenina podľa nároku 18, ktorou je N-[(N-acetylazetidín-2-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
20. 20. Zlúčenina podľa nároku 1, kde Ao je N-acetylazetidín-3-karbonyl.
21. 21. Zlúčenina podľa nároku 20, ktorou je N-[(N-acetylazetidín-3-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
22. 22. Zlúčenina podľa nároku 1, kde A_o je acetyl.
23. 23. Zlúčenina podľa nároku 22, kde A₄ je D-penicilaminyl(S-metyl).
24. 24. Zlúčenina podľa nároku 23, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Tlⁱir-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-Ľ>-Pen(SMe)-Ser-Nva-ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-Ac-Sar-Gly-Gln-D-PeníSMej-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHúCHj a

    N-Ac-Sar-Gly-Asn-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
25. 25. Zlúčenina podľa nároku 22. kde A₄ je D-aloizoleucyl.
26. 26. Zlúčenina podľa nároku 25. vybraná zo skupiny, ktorú tvorí

    N-Ac-Sar-(4-CN)Phe-Val-D-alo[le-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH2CH3.;

    N-Ac-Sar-(4-F)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-PiONHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-(4-Me)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Hyp-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCH} a

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Hyp-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
27. 27. Zlúčenina podľa nároku 22, kde A₄ je D-leucyl.
28. 28. Zlúčenina podľa nároku 27. vybraná zo skupiny, ktorú tvorí N-Ac-Sar-(3-CN)Phe-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-[( 1S.47?)-l-N-acetylaminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-[(lÄ,3S)-l-N-acetylaminocyklopentán-3-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-'ľhr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-Ac-(4-Me)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-IIe-Arg-ProNHCH2CH₃.

    N-(l-N-acetylamino-l-cyklopropánkarbonyl)-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-I!e-Arg-ProN’HCH₂CH₃,

    N-Ac-(2,3,5,6-tetrahydro-l-tiopyrán-4-yl)gly-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Hyp-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-NIe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-Ac-(4-Cl)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-propargylgly-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ a

    N-Ac-D-Ala-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.
29. 29. Zlúčenina podľa nároku 22, kde A.i je D-izoleucyl.
30. 30. Zlúčenina podľa nároku 29, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Asp-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃,

    N-Ac-Sar-Taz-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-(3,4-diMeO)Phe-Val-D-lle-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-(2-furyl)Ala-Val-D-lle-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-[( IS,3R.)~ 1 -aminocyklopentán-3-karbonyl]-Val-D-Iie-Thr-Nva-Ile- Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-[(l/?,4S)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-[(LS',47?)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-IIe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-GIy-Val-D-Ilc-aloThr-Pro-Ile-Arg-ProNHCH₂CFI₃,

    N-Ac-Sar-Nva-Val-D-Ilc-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH?CH3,

    N-Ac-Sar-Asn-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ilc-Arg-ProNHCHiCHa,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Om-ProNHCHiCHi.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Gln-ProNHCH₂CH₃.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr(OAc)-Om(N-delta-Ac)-Ile-Arg-ProNIICH₂CH₃,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-NMe-D-AlaNH₂.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-Lys(Ac)NH₂,

    N-Ac-N-MeNva-Gly-VaI-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃ a

    N-Ac-N-MeThr(Bzl)-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃.
31. 31. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým. že zahŕňa zlúčeninu vzorca I alebo jej terapeuticky prijateľnú soľ v kombinácii s terapeuticky prijateľným nosičom.
32. 32. Spôsob inhibície angiogénezy u cicavca pri zistenej nevyhnutnosti takejto liečby, vyznačujúci sa tým, že sa cicavcovi podáva terapeuticky prijateľné množstvo zlúčeniny vzorca I alebo jej terapeuticky prijateľnej soli.
33. 33. Zlúčenina, vybraná zo skupiny, ktorú tvorí

    N-(N-acetylnipekotyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃.

    N-[N-acetylpiperidín-4-acetyľ|-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CFI₃.

    N-Ac-Pro-Sar-Glv-Val-D-Ile-'ľhr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH^CHj

    N-Ac-Sar-(4-CN)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH₃,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Asp-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCHj,

    N-Ac-Sar-Taz-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-Ac-Sar-(3,4-diMeO)Phe-Val-D-[Ie-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-(2-furyl)Ala-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-[(15,3#)-l-aminocyklopentán-3-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-ne-Arg-ProNHCHzCHj,

    N-Ac-Sar-[(l#,4S)-I-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-[(15,4#)-l-aminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Val-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-P1ONHCH2CH3,

    N-Ac-Sar-(3-CN)Phe-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-(4-F)Phe-Val-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-(4-Me)Phe-V al-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHC H₂C H3,

    N-[(lS,4#)-l-N-acetylaminocyklopent-2-én-4-karbonyl]-Gly-VaI-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-[( l #,35)-l-N-acetylaminocyklopentán-3-karbonyl]-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-(4-Me)Phe-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-(N-acetyl-l-amino-l-cyklopropánkarbonyl)-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-(2,3,5.6-tetrahydro-l-tiopyrán-4-y!)Gly-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-Ac-Hyp-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Nle-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3N-Ac-(4-Cl)Phe-Gly-VaI-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3, N-Ac-propargylGly-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCŕLCHi.

    N-Ac-D-Ala-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-lle-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Pro-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3.

    N-Ac-Sar-Nva-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCIECHí,

    N-Ac-Sar-Asn-Val-D-Ile-Thr-Nva-ne-Arg-ProNHCII₂CIl3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aloIle-Hyp-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-aIoHe-Thr-Hyp-IIe-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-zAc-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Tiir-Nva-íle-Arg-ProNHCH₂CH3.

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(SMe)-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Gln-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Asn-D-Pen(SMe)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-GIy-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Om-ProNHCHiCHs,

    N-Ac-Sar-Gly-VaI-D-Ile-Thr-Nva-He-Gln-ProNHCH₂CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr(OAc)-Om(N-delta-Ac)-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-MePro-Gly-VaI-D-lIe-Thr-Nva-í!e-Arg-ProNHCH₂CH3.

    N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Thr-Nva-!le-Arg-ProNIICI bCIfy

    N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH₂CH3.

    N-MePro-GIy-Gln-D-IIe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-MePro-Gly-Val'D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-MePro-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-lle-Arg-Pro-D-AlaNHz,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2,

    N-MePro-Gly-Gln-D-aloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH₂,

    N-MePro-Gly-Ile-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-MePro-Gly-Val-D-aloIle-Ser-Ser-IIe-Arg-ProNHCH₂CH₃,

    N-MePro-Gly-Asn-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCHiCÍ-B,

    N-MePro-Gln-Val-D-ne-Thr-Nva-ne-Arg-ProNHCH2CH₃,

    N-MePro-Gln-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNHs,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aÍoThi-G]ii-Ile-Aľg-ProNHCH₂CH3,

    N-MePro-Gly-V al-D-Ile-aloThr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2,

    N-MePro-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-aloThr-Ser-Ile-Arg-ProNHCHzCHj,

    N-MePro-Gly-Val-D-Ile-Thr-aloThr-Ile-Arg-ProNHCH2CH3,

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-NMe-D-AlaNH?,

    N-[(N-acetylazetidín-2-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-IIe-Thr-Nva-ne-ArgProNHCH₂CH₃,

    N-[(N-acetylazeúdín-3-karbonyl)]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-ArgProNHCHíCHj a

    6 4

    N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ilc-Arg-Pro-D-Lys(Ac)NH₂.