SI23309A - Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv - Google Patents

Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv Download PDF

Info

Publication number
SI23309A
SI23309A SI201000099A SI201000099A SI23309A SI 23309 A SI23309 A SI 23309A SI 201000099 A SI201000099 A SI 201000099A SI 201000099 A SI201000099 A SI 201000099A SI 23309 A SI23309 A SI 23309A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
combination
fungi
antifungal
proton
growth
Prior art date
Application number
SI201000099A
Other languages
English (en)
Inventor
Mojca BENÄŚINA
Tanja Bagar
Nataša MEDVED
Original Assignee
Kemijski inštitut
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kemijski inštitut filed Critical Kemijski inštitut
Priority to SI201000099A priority Critical patent/SI23309A/sl
Priority to PCT/SI2010/000050 priority patent/WO2011119119A2/en
Publication of SI23309A publication Critical patent/SI23309A/sl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/06—Unsaturated carboxylic acids or thio analogues thereof; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
    • A01N43/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

Predstavljen izum se nanaša na kombinacijo protiglivne substance in motilca protonske homeostaze za izboljšano fungicidno ali fungistatično delovanje protiglivne substance za zdravljenje ali preprečevanje glivnih okužb. Izum se nanaša na zdravilo ali fitofarmacevtski preparat, ki vsebuje kombinacijo in na metodo preprečevanje glivnih okužb in vitro za dezinfekcijo površin implantatov.

Description

Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv
Področje izuma
Predmet iuma je kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv. Izum se uvršča na področje protiglivnih substanc, na področje metod uničevanja gliv ali inhibicije rasti in replikacije gliv in na področje zdravil in fitofarmacevtskih preparatov za zdravljenje in preprečevanje glivnih okužb in vivo in in vitro.
Stanje tehnike
Glive vključno s patogeni so razširjene po celem svetu. So pomembni škodljivci v kmetijstvu in pri pridelavi hrane. V zdravstvu predstavljajo težavo zaradi povečanega števila težkih in težko ozdravljivih okužb, ki so posledica pomanjkanja novih protiglivnih substanc, povečane odpornosti gliv na starejše antimikotike in naraščajočega števila imunsko komprimitiranih pacientov, ki so dovzetnejši za glivne okužbe. Glive pri človeku povzročijo tri vrste kliničnih stanj: infekcije, alergijska stanja ter toksikoze. Imunosupresija ob transplantaciji organov in obolelih z AIDS, opekline in kemoterapija ter diabetična ketoacidoza so glavni predispozicijski faktor za razvoj okužb. Vsa klinična stanja glivnih okužb se lahko pojavijo v lokalni ali sistemski obliki. Od vseh filamentoznih gliv je Aspergillus drugi najpogostejši povzročitelj oportunistične mikoze, najpogosteje pa jo povzroča Candida. Iz rodu Aspergillus je v Evropi najpogostejši povzročitelj aspergiloz gliva A. fumigatus, sledi pa mu A. flavus. Znanih antimikotikov, ki učinkujejo proti glivam, je malo. Njihovo uporabo omejujejo predvsem zelo pogosti stranski učinki, slabo prehajanje zdravila v različna tkiva, ozek antimikotični spekter in neobčutljivost nekaterih gliv za določene antimikotike (Groll in Kolve, 2004; Klich, 2007).
Trenutno so v klinični uporabi štirje razredi protiglivnih substanc: polienski antimikotiki, derivati azolov, alilamini ter tiokarbamati in fluoropirimidini. Ciljno mesto prvih treh razredov je ergosterol. Azoli inhibirajo lanosterol-demetilazo, starejši azoli (imidazoli) zavirajo še številne druge, na membrano vezane encime, ter biosintezo membranskih lipidov. (Sheehan in sod., 1999). Skupino polienskih antimikotikov sestavlja okrog 200 naravnih makrolidnih antibiotikov, od katerih so le amfotericin B in nistatin razvili za sistemsko zdravljenje glivičnih okužb. Polieni so amfipatične molekule in se vgrajujejo v membrano celic in tvorijo kanale,
• · · ·
-2preko katerih pride do spremenjene prepustnosti, izgube vitalnih citoplazemskih komponent in posledično smrti mikroorganizma (Georgopapadakou in Walsh, 1996). Klinično se uporabljata dve alilaminski protiglivni substanci naftifin in terbinafin, ter tolnaftat, ki je tiokarbamat. Vsi trije so reverzibilni, nekompetitivni inhibitorji skvalen-2,3-epoksidaze. Sintetično izdelani morfolini so kmetijski fungicidi, izjema je le amorolfin, ki se uporablja kot topično zdravilo za zdravljenje nohtnih infekcij. Ehinokandini so nov razred protiglivnih lipopeptidov. Inhibirajo sintezo 1,3-P-D-glukana, ki je polisaharid v celični steni mnogih patogenih plesni in gliv, v celični steni sesalcev pa ni prisoten (Groll in sod., 2004).
Ključna slabost antimikotikov je odpornost gliv na protiglivno substanco. O pridobljeni odpornosti na flukonazol med sevi C. albicans so poročali zlasti pri bolnikih, okuženih s HIV. Pridobljena odpornost na amfotericin je zabeležena pri glivah Cryptococcus neoformans in Ccmdida spp., med drugim C. lusitaniae, C. glabrata in C. krusei. Poznamo pa filamentozne glive (Peudalesheria boydii, Scopulariopsis, Fusarium), pa tudi nekatere kvasovke (Trichosporon beigelii, C. lusitanii, C. guiliermondii), ki imajo prirojeno odpornost na amfotericin B (Richter in sod., 2005).
Zdravljenje z antimikotiki pogosto spremljajo neželeni stranski učinki. Ketokonazol, ki je zelo lipofilen, se akumulira v maščobnih tkivih. Klinična uporaba amfotericina B je povezana s problemi toksičnosti, kot so: nefrotoksičnost, azotemija, zmanjšana glomerulna filtracija, zmanjšana sposobnost koncentriranja urina, ledvična izguba natrija in kalija, ledvična tubulama acidoza, hipokaliemija, hipomagnezemija, nizek krvni tlak, glavobol, depresija kostnega mozga, leukopenija, hepatitis, hiperlipidemija in hiponatremija, vročina, mrzlica, bolečine v mišicah, anemija in trombocitopenija.
Iz zgoraj opisanega se jasno kaže potreba po novih produktih, ki imajo protiglivno delovanje oziroma po produktih, ki izboljšajo delovanje protiglivne substance in s tem zmanjšajo potrebno terapevtsko učinkovito količino protiglivne substance. Delovanje novega produkta naj bi vplivalo na širok spekter gliv. Produkti naj bi bili uporabni v kombinaciji z drugimi protiglivnimi substancami predvsem, če se aktivnost spremljajoče protiglivne substance izboljša, ker se s tem izboljša učinek terapije in zmanjša potencialna toksičnost protiglivne substance.
Problem pridobljene odpornosti na antimikotike rešuje uporaba kombinacije več različnih antimikotikov. Odpornosti gliv na določen antimikotik se rešuje tudi s kombiniranjem z
-3drugimi substancami, ki same nimajo ali imajo šibko protiglivno delovanje, kot npr kurkumin ali FK506.
Vzdrževanje pH v fiziološkem območju je zelo pomembno za stabilnost proteinov, encimov in aktivnost ionskih kanalov ter za mnoge druge procese, ki so odgovorni za rast, razvoj in preživetje celice. Izumitelji smo prišli do odkritja, da motilci protonske homeostaze učinkovito izboljšajo delovanje protiglivnih substanc na način, da znižajo znotraj celično vrednost pH za daljše časovno obdobje in s tem omogočijo učinkovitejše delovanje antimikotikov.
Reference:
Bagar T., Altenbach K., Read N.D., Benčina M. 2009. Live-cell imaging and measurement of intracellular pH in filamentous fungi using a genetically encoded ratiometric probe. Eukaryotic celi, 8, 703-712.
Georgopapadakou N.H., Walsh T.J. 1996. Minireview, Antifungal agents: Chemoterapeutic targets and immunologic strategies. Antimicrobial agents and chemoterapy, 40,279-291.
Groll A.H., Kolve H. 2004. Antifungal agents: In vitro susceptibility testing, pharmacodynamics, and prospects for combination therapy. European joumal of clinical microbiology & infectious diseases, 23, 256-270.
Klich M.A. 2007. Aspergillus flavus: the major producer of aflatoxin. Molecular Plant Pathology, 8(6), 713-722.
Richter S.S., Galask R.P., Messer S.A., Hollis R.J., Diekema D.J., Pfaller M.A. 2005 Antifungal susceptibilities of Candida species causing vulvovaginitis and epidemiology of recurrent cases. J Ciin Microbiol 43, 2155-2162.
Sheehan D.J., Hitchcock C.A., Sibley C.M. 1999. Current and emerging azole antifungal agents. Clinical Microbiology Reviews, 12, 40-79.
Povzetek izuma
Izum predstavlja kombinacijo, ki vsebuje protiglivno substanco in motilec protonske homeostaze in se kombinacija po izumu uporablja za uničevanje gliv ali inhibicijo rasti in replikacijo gliv, prednostno patogenih in oportunistično patogenih gliv. Kombinacija po izumu je namenjena pripravi zdravila za in vivo in in vitro preprečevanje in zdravljenje glivnih okužb pri živalih in človeku in zdravilo vsebuje terapevtsko učinkovitih količino kombinacije. V nadaljevanju je kombinacija namenjena pripravi fitofarmacevtskega preparata za in vivo in in • · • · · · · · · ··· ·· · · ·
-4vitro preprečevanje in zdravljenje glivnih okužb pri rastlinah in pripravek vsebuje fungicidno ali fungistatično učinkovitih količino kombinacije.
Odkritje temelji na spoznanju, da je kombinacija protiglivne substance in motilca protonske homeostaze fungicidno ali fungistatično učinkovitejša v boju proti glivnim okužbam kot sama protiglivna substanca. S kombinacijo po izumu, katere komponente delujejo sinergistično, dosežemo zmanjšano porabo protiglivne substance, boljše terapevtsko učinkovitejše delovanje protiglivne substance, skrajšamo čas zdravljenja, znižamo stroške zdravljenja in v marsikaterem primeru dosežemo fungicidno delovanje kombinacije, kar ne bi bilo mogoče doseči z individualnima komponentama.
Predstavljen izum temelji na odkritju, da se sinergistično delovanje motilca protonske homeostaze in protiglivne substance lahko uporablja za pripravo zdravila za zdravljenje subjekta, ki je okužen z glivami in zagotavlja način za zdravljenje takih infekcij. Prednost izuma je sposobnost zdravljenja glivnih obolenj, ki se jih pojmuje za težko ozdravljive. Dodatna prednost izuma je zdravljenje okužb z glivami, ki so pridobile odpornost na poznane protiglivne substance. V nadaljevanju je prednost zdravljenja s kombinacijo po izumu, da se zmanjša količina protiglivne substance, ki ima neželene stranske učinke. Prednost zdravljenja s kombinacijo po izumu je pridobitev na kvaliteti življenja, saj se skrajša trajanje terapije.
V nadaljevanju izum vključuje pripravo (i) zdravila ali (ii) fitofarmacevtskega preparata, ki vsebuje kombinacijo, za preprečevanje in zdravljenje glivnih okužb pri rastlinah, pri živalih in človeku. Kombinacija po izumu se lahko v obliki zdravila uporablja za zdravljenje glivnih okužb ali za dekontaminacijo površin, sterilizacijo medicinske opreme in implantatov. Zdravilo po izumu, ki vsebuje kombinacijo, je pripravljeno v ustrezni farmacevtski obliki in vsebuje vse potrebne farmacevtske dodatke in po potrebi še dodatne protiglivne substance. Izum predstavlja zdravilo s terapevtsko učinkovito količino kombinacije za terapevtsko ali preventivno zdravljenje pacientov okuženih z glivami. Po izumu je zdravilo, ki vsebuje kombinacijo, v ustrezni farmacevtski obliki primerni za topično, intravenozno, oralno, intramuskulatomo, podkožno, intraperitonalno, intraokulamo, transpulmulamo, transdermalno, aerosolno uporabo in sta aktivni substanci v zdravilu v obliki zmesi ali kot ločeni posamezni komponenti, vendar se uporabljata na način, da se doseže sinergistični učinek zmesi in sta aktivni komponenti ločeni zato, da se izboljša lastnost posameznih komponent.
• · • ·
-5Izum se nanaša na kombinacijo v obliki fitofarmacevtskega preparata z ustreznimi, sprejemljivimi dodatki, s terapevtsko učinkovito količino kombinacije, ki se uporablja za zdravljenje ali preprečevanje glivnih okužb pri rastlinah.
Dodatno izum predstavlja metodo za uničenje ali inhibicijo rasti gliv, katera vsebuje neposreden kontakt zdravila ali fitofarmacevtskega preparata, ki vsebuje kombinacijo, z glivami. Metodo se uporablja in vitro za dekontaminacijo površin in sterilizacijo medicinske opreme in implantatov, in situ sterilizacijo katetrov in intravenoznih vsadkov. Metoda po izumu vključuje (i) sočasno aplikacijo aktivnih komponent kombinacije ali (ii) aplikacijo aktivnih komponent kombinacije zaporedno, vendar na način, daje učinek enak ali boljši kot ob sočasni aplikaciji in je ločena aplikacija potrebna zaradi izboljšanih lastnosti posameznih komponent.
Kazalo slik
Slika 1. Metabolna aktivnost glive A. niger v prisotnosti kombinacije bafilomicina in antimikotika amfotericina B, flukonazola, ketokonazola ali klotrimazola. V testu smo uporabili kombinacijo bafilomicina (končne koncentracije 0, 0.5, 2 in 10 nM) in amfotericin (končne koncentracije 0, 0.25, 0.5 mg/1) (A), flukonazol (končne koncentracije 0, 0.5, 1.5 g/1) (B), ketokonazol (končne koncentracije 0, 5, 10 mg/1) (C) in klotrimazol (končne koncentracije 0, 0.4,1 mg/1) (D).
Slika 2. Metabolna aktivnost glive A. niger v prisotnosti kombinacije sorbične kisline in antimikotika amfotericina B, flukonazola, ketokonazola ali klotrimazola. V testu smo uporabili kombinacijo sorbične kisline (končne koncentracije 0, 3, 10 mM) in amfotericin (končne koncentracije 0, 0.25, 0.5 mg/1) (A), flukonazol (končne koncentracije 0, 1, 1.5 g/1), (B), ketokonazol (končne koncentracije 0, 10, 15 mg/1) (C) in klotrimazol (končne koncentracije 0, 0.4,1 mg/1) (D).
Slika 3. Inhibicija rasti kvasovke S. cerevisiae. Prirast biomase v prisotnosti kombinacije sorbične kisline (0, 2.5, 5 mM) in antimikotika amfotericina B (0, 0.1, 0.2 mg/1) [A].
Slika 4. Mikroskopske slike glive A. niger v prisotnosti protiglivne substance in motilca protonske homeostaze. Razrast glive v gojišču brez dodatka farmacevtske kombinacije [A]; z dodatkom 0.125 mg/1 amfotericina in 5 mM sorbične kisline [E].
Podroben opis izuma
Če ni definirano drugače, imajo vsi tukaj uporabljeni tehnični in znanstveni izrazi enak pomen, kot je splošno sprejeto med strokovnjaki. Terminologija, ki je uporabljena v opisu
-6izuma, je namenjena opisovanju določenega dela izuma in ne omejevanju izuma. V opisu izuma in v zahtevkih je opis v ednini, vendar izum vključuje tudi množino, ki pa ni poudarjena zaradi lažjega razumevanja.
Predstavljen izum se nanaša na odkritje, da motilec protonske homeostaze pri glivah izboljša delovanje protiglivne substance in se lahko kot kombinacija protiglivne substance in motilca protonske homeostaze uporabljajo za pripravo (i) zdravila ali (ii) fitofarmacevtskega pripravka za zdravljenje subjekta: človeka, živali ali rastline, ki je okužen z glivami in zagotavlja način zdravljenje takih infekcij. Po izumu je sinergistična kombinacija protiglivne substance in motilca protonske homeostaze uporabna za pripravo zdravila za in vivo preprečevanje in zdravljenje okužb z glivami, prednostno patogenimi in oportunistično patogenimi glivami in in vitro za dekontaminacijo površin in sterilizacijo medicinske opreme in implantatov. V nadaljevanju po izumu je sinergistična kombinacija protiglivne substance in motilca protonske homeostaze uporabna za pripravo fitofarmacevtskega preparata za in vivo preprečevanje in zdravljenje okužb z glivami pri rastlinah.
Izraz protiglivna substanca se nanaša na antimikotik ali fungicid in predstavlja protiglivno substanco, ki se jo uporablja za preprečevanje in zdravljenje okužb z glivami. Izraz antimikotik se nanaša na substanco, ki zavira rast in replikacijo gliv ali povzroči uničenje glivne celice in je substanca izbrana iz skupine (i) polienskih antimikotikiov, kot so: natamicin, rimocidin, filipin, nistatin, amfotericin B, kandicin; (ii) azolnih antimikotikov, kot so: mikonazol, ketokonazol, klotrimazol, ekonazol, bifonazol, butokonazol, fentikonazol, izokonazol, oksikonazol, sertaconazol, sulkonazol, tiokonazol, pramikonazol; (iii) triazolnih antimikotikov, kot so: flukonazol, itrakonazol, izavukonazol, ravukonazol, posakonazol, vorikonazol, terkonazol; (iv) alilaminskih antimikotikov, kot so: terbinafin, amorolfin, naftidin, butenafin; ali (v) ehinokandinov, kot so: anidulafungin, kaspofungin, mikafungin; in drugi, kot so: amiodarone, terbinafine, ciklopiroks, pimaricin, flucitosin, allylamin-tiokarbamati, grizeofulvin, haloprogin. Izraz protiglivna substanca se nanaša tudi na proteine, ki inhibirajo rast gliv, kot so: PAF, AFP, rastlinski defenzini in drugi protiglivni peptidi in proteini. Izraz fungicid se nanaša na kemična sredstva, ki se uporabljajo za zatiranje gliv v fitofarmacevtiki in so lahko kontaktni, polsistemični in sistemični.
Izraz motilec protonske homeostaze se nanaša na (i) spojine, ki inhibirajo encime, ki vzdržujejo v ravnovesju znotraj celični pH in (ii) spojine, ki neposredno vplivajo na znižanje • ·
-7znotrajceličnega pH. Izraz homeostaza se nanaša na fiziološke procese oziroma fiziološke mehanizme, ki omogočajo, da se fiziološki procesi in telesna zgradba organizma, kljub večjim spremembam v okolici, bistveno ne spreminjajo, (i) Med motilce znotraj celične protonske homeostaze se uvrščajo substance, ki s svojo prisotnostjo povzročajo znižanje znotraj celične pH vrednosti, ki je dolgotrajno, vendar je glede na količino dodanega motilca prehodno ali neprehodno. Prehodno znižanje znotraj celičnega pH mora biti daljše od 30 minut, da vpliva na celične procese na način, da se izboljša tudi delovanje protiglivne substance. Fiziološki mehanizmi protonske homeostaze uravnavajo znotraj celično vrednost pH in vključuje encime: ATPaze, ionske kanale, ionske izmenjevalce, celične pufre. Motilci protonske homeostaze so inhibitorji protonske homeostaze in so bafilomicin, konkavalin, konkanamicin, ouabin, oligomicin, FR177995, peptidi-C5-amiloida, acil-gvanidini s kondenziranim triacilnim obročem, CCCP, FCCP, DCCD, arhazolid in apikularen, azidi, cianidi, antimicin, rotenon in TTFA, ionofori, soli in derivati spojin, (ii) Poseben razred motilcev protonske homeostaze so šibke karboksilne in hidroksi karboksilne kisline: sorbična, benzojska, propionska, citronska, askorbinska, in druge. Šibke kisline znižujejo znotraj celično vrednost pH ob vstopu v celico, ko disociacijo na anion in proton.
Izraz ustrezne soli, derivati se nanaša na soli ali derivate spojin, ki bistveno ne spremenijo funkcije spojine, ji pa npr. povečajo topnost, dostopnost v tkivo, izboljšajo ali spremenijo presnovo, razgradnjo ali izločanje iz telesa in drugo.
Predstavljeni izum se nanaša na odkritje, da motilec protonske homeostaze, ki je izbran med spojinami, ki inhibirajo protonske ATPaze, protonske izmenjevalce ali oksidativno fosforilacijo, prednostno so to spojine: bafilomicin, konkavalin, konkanamicin, ouabin, oligomicin, FR177995, peptidi-C5-amiloida, acil-gvanidini s kondenziranim triacilnim obročem, CCCP, FCCP, DCCD, arhazolid in apikularen, cianidi, azidi, antimicin, rotenon in TTFA, ionofori, soli in derivati spojin; skupaj s protiglivno spojino, ki je ali antimikotik ali fungicid v kombinaciji izuma deluje sinergistično.
Predstavljeni izum se nanaša na odkritje, da motilec protonske homeostaze, ki je izbran med šibkimi karboksilnimi in hidroksikarboksilnimi kislinami; skupaj s protiglivno spojino, ki je ali antimikotik ali fungicid v kombinaciji izuma deluje sinergistično.
Predstavljeni izum kombinacij vsebuje terapevtsko učinkovito količino protiglivne substance, ki je v prisotnosti motilca protonske homeostaze nižja v primerjavi s potrebno • · • · · ·
-8terapevtsko učinkovito količino protiglivne substance uporabljene brez prisotnosti motilca protonske homeostaze.
Izraz sinergističen predstavlja izboljšavo fungicidne ali fungistatične terapevtske učinkovitosti protiglivne substance v prisotnosti motilca protonske homeostaze. Izraz terapevtska učinkovitost se nanaša na uspešen klinični rezultat in ni nujno, da zahteva, da farmacevtska kombinacija uniči 100% organizmov vključenih v infekcijo. Uspešnost je odvisna od intenzivnosti glivne okužbe na mestu infekcije in se nanaša na izboljšanje stanja okužbe. Terapevtska učinkovitost je odvisna tudi od stanja osebka in je pri zdravem osebku potrebna manjša količina kombinacije kot pri osebku, ki ima oslabljen imunski odziv. Po izumu je terapevtsko učinkovita količina protiglivne substance v prisotnosti motilca protonske homeostaze v kombinaciji po izumu nižja kot v primeru zdravljenja samo s protiglivno substanco.
Izum se nanaša na kombinacijo za pripravo zdravila ali fitofarmacevtskega preparata za preprečevanje ali zdravljenje okužb, ki jih povzročajo patogene in oportunistično patogene kvasovke in filamentozne glive.
Izraz glivne okužbe se nanaša na okužbe s filamentoznimi glivami in kvasovkami pri rastlinah, živalih in človeku in tudi na materialih, tekočinah in površinah. Izraz gliva se nanaša na mikroorganizme iz kraljestva gliv, prednostno na kvasovke in filamentozne glive, ki so rastlinski ali živalski patogeni in oportunistični patogeni. V skupino patogenih in oportunistično patogenih gliv se uvrščajo glive iz rodov: Candida, prednostno C. albicans, C. glabrata, C. krusei, C. laurentii, C. parapsilosis, C. tropicalis, C. lusitaniae, C. kefyr, C. guilliermondii, C. dubliniensis·, Cryptococcus, prednostno C. neoformans, C. albidus, C. gattii; Aspergillus, prednostno A. flavus, A. fumigatus, A. clavatus, A. niger, A. nidulans, A. terreus, A. sydowi, A. glaucus, A. oryzae, A. ustus, A. versicolor; Histoplasma, prednostno Histoplasma capsulatunr, Paracoccidioides, prednostno P. brasiliensis; Sporothrix, prednostno Sporothrix schenckii; Blastomyces, prednostno B. dermatitidis·, Paecilomyces prednostno P. lilacinus, P. variotii; Pneumocystis, prednostno P. jirovecii; Stachybotrys, prednostno S. chartarunr, Malassezia, prednostno M. furfur; Pityrisporum, prednostno P. ovalae; Coccidioides, Fonsecaea, Cladosporium, Basidiobolus, Conidiobolus, Rhizopus, Rhizomucor, Mucor, Absidia, Mortierella, Cunninghamella, Saksenaea, Trychophyton, prednostno T. rubrum, T. tonsurans T. mentagrophytes, T. soudanense, T. verrucosum, T. ajelloi, T. concentricum, T. equinum, T. erinacei, T. flavescens, T. gloriae, T. interdigitale, T. megnini, T. phaseoliforme, T.
-9schoenleini, T. simii, T. terrestre, T. tonsurans, T. vanbreuseghemii, T. violaceum, T. yaoundei·, Microsporum, prednostno M. canis, M. gypseum, M. audouini, M. gallinae, M. ferrugineum, M. distortum, M. nanum, M. cookie, M. vanbreuseghemii·, Epidermophyton, prednostno E. floccosum, E. stockdaleae·, Trichosporon, Fusarium, prednostno F. oxysporum, F. šolani, F. semitectum, Scytalidium, prednostno S. dimidiatum, S. hyalinum, S. infestans, S. japonicum, S. lignicola·, Penicillium, Actinomyceees, Cochliobolus; Scopulariopsis, prednostno S. brevicaulis, S. candida, S. koningii, S. acremonium, S. flava, S. cinerea, S. trigonospora, S. brumptii, S. chartarum, S. fusca, S. asperula·, Alternaria, prednostno A. alternate, A. chartarum, A. dianthicola, A. geophilia, A. infectoria, A. stemphyloides, A. teunissima·, Curvularia, prednostno C. brachyspora, C. clavata, C. geniculata, C. lunata, C. pallescens, C. senegalensis, C. verruculosa; Chaetomium prednostno C. atrobrunneum, C. funicola, C. globosum, C. strumarium in druge. Izraz glive se nanaša na kvasovke in filamentozne glive, ki pri zdravem preiskovancu ne povzročajo obolenja, pri imunokompromitiranih preiskovancu pa te glive lahko povzročijo obolenja. Izraz glive se nanaša tudi na glive, ki so rastlinski patogeni in so Fusarium spp., Thielaviopsis spp., Verticillium spp., Rhizoctonia spp., Chochliobulus spp.Phakospora pachyrhizi Sydow, Puccinia spp., Magnaporthe spp. e.g. Magnaporthe grisea, Ustilago spp. e.g. Ustilago mydis, Uncinula necator, Plasmopara viticola, Pseudopezicula tracheiphila, Botrytis spp. e.g. Botrytis cinerea, Phomopsis viticola in druge.
Izraz obolenje se nanaša na bolezensko stanje, ki ga povzročajo okužbe s kvasovkami in filamentoznimi glivami. Izraz obolenje se nanaša na površinska obolenja, ki so omejena na okužbo kože, nohtov in las; podkožna obolenja, kot so dermatitisi, ki so okužbe podkožnih tkiv in bližnje strukture; sistemska obolenja, ki so okužbe notranjih organov: pljuč, jeter, srca, centralnega živčnega sistema, gastrointestinalnega trakta in oportunistična obolenja, okužbe imunokomprimitiranih pacientov tudi z nepatogenimi glivami. Obolenja se izražajo v obliki mikoz, kandidoz, sistemskih mikoz, histoplazmoze, blastomikoze, kokidiomikoze in parakokidiomikoze, vnetij, rdečic, prhljaja, atletskega stopala, kandidoze ust in vagine, dermatitisa, ekcema, onikomikoza, aspergilloze, histoplazmoze, pljučnice, poškodbe dihal in glavobola, astme. Izraz obolenje se nanaša na obolenje, ki ga povzročajo glive pri živalih, in človeku, prednostno pri čebelah in vretenčarjih; predvsem ptičih, perutnini, sesalcih; predvsem kopitarji, zajci, zveri, mačke, primati, človek.
-10Izraz zdravljenje povzema preventivno in terapevtsko zdravljenje. In vitro metoda zdravljenja se nanaša na uničenje in inhibicijo rasti in replikacije gliv preko prenosa kombinacije po izumu na z glivo okuženo mesto, ki je lahko površina materialov.
Izum predstavlja zdravilo, ki vsebuje kombinacijo po izumu za zdravljenje glivnih okužb in zdravilo vsebuje kombinacijo v učinkovitih količinah, da inhibirajo ali uničijo glivne celice.
Določitev terapevtsko učinkovite količine kombinacije protiglivne substance in motilca protonske homeostaze je poznana strokovnjaku s področja. Učinkovitejše delovanje protiglivne substance v kombinaciji se vidi z zmanjšano terapevtsko učinkovito količino protiglivne substance, ki je potrebna za popolno odstranitev ali inhibicijo replikacije in rasti gliv. Uporaba nekaterih protiglivnih substanc je omejena zaradi njihove sistemske toksičnosti ali visokih stroškov zdravljena s tako protiglivno substanco. Zniževanje koncentracije protiglivnih substanc z motilcem protonske homeostaze je potrebno zaradi zniževanja stranskih učinkov in stroškov, kar omogoča širšo uporabo kombinacije. Zdravilo po izumu je pripravljeno na način, da zagotavlja hitrejše ali učinkovitejše fungistatične ali fungicidne učinke, kot bi jih dosegli ob uporabi same protiglivne substance. Zdravilo, ki vsebuje kombinacijo po izumu lahko izniči odpornost gliv na protiglivno substanco, oziroma spremeni fungistatično delovanje protiglivne substance v fungicidno. Pri tem je v kombinaciji učinkovita količina protiglivne substance zmanjšana zaradi sinergističnega delovanja komponent kombinacije.
Zdravilo lahko vsebuje aktivni substanci: protiglivno substanco in motilca protonske homeostaze v kombinaciji po izumu, v obliki zmesi ali posamezni aktivni komponenti ločeno, pod pogojem, da sta substanci zdravila uporabljeni na način, ki zagotavlja, da ločeni substanci dosežeta učinke na mestu glivne okužbe, ki so enaki sinergističnim učinkom zmesi. Aktivni komponenti v zdravilu sta ločeni zaradi izboljšane stabilnosti ločenih komponent in lažje uporabe predvsem po ločenih poteh. Posamezni komponenti kombinacije po izumu, to sta protiglivna substanca in motilec protonske homeostaze, lahko poteka v različnih farmacevtskih oblikah. Kombinacija, ki zagotavlja sočasno administracijo protiglivne substance in motilca protonske homeostaze je pričakovano učinkovitejša, z močnejšim fungistatičnim ali fungicidnim učinkom in vivo v primerjavi z administracijo posamične substance kombinacije po izumu. Izraz jungistatični učinek opisuje inhibirano rast in razmnoževanje gliv, izraz fungicidni učinek pa se nanaša na uničenje gliv.
Izum, kombinacija, omogoča uničenje ali inhibicijo rasti gliv na način neposrednega kontakta kombinacije z glivo. Ta metoda se lahko uporablja in vitro, kot na primer v • · • · ·
-11fitofarmacevtiki, dekontaminaciji tekočin in površin ali za sterilizacijo kirurških in drugih medicinskih orodij in implantatov, vključno s protetiko, in situ sterilizacijo katetrov, intravenoznih vsadkov.
Izum v nadaljevanju obsega pripravo zdravila, ki vsebuje kombinacijo za zdravljenje infekcije z glivami. Zdravilo je v poljubni farmacevtski obliki in vsebuje potrebne farmacevtske dodatke.
Farmacevtska oblika je oblika, v katero vgradimo učinkovino, kombinacijo po izumu in se nanaša na prašek, suspenzija, emulzija, raztopina, pasta, krema, mazilo, gel, losjon, liniment, farmacevtske oblike za injiciranje, infuzijske farmacevtske oblike, tableta, kapsula, svečka, transdermalni obliž, terapevtski sistem, tinktura, perkolat, izvleček. Izraz farmacevtska dopolnila se nanaša na dodatke v farmacevtski formulaciji oziroma zdravilu, ki olajšajo, izboljšajo vnos aktivnih substanc, farmacevtske kombinacije po izumu na mesto okužbe in so del farmacevtske oblike. Farmacevtska dopolnila vključujejo ustrezna redčila, adjuvanse, nosilce. Administracija aktivne učinkovine je lahko topična, intravenozna, oralna ali intramuskulatoma, preko aerosola, podkožna, intraperitonalna, intraokulama, transpulmulama, transdermalna.
Kombinacija po izumu je lahko administriran skupaj z drugimi zdravili. Kombinacija lahko vsebuje eno ali več protiglivnih substanc z motilcem protonske homeostaze.
Izum se nanaša tudi na fitofarmacevtski preparat v ustrezni obliki in z ustreznimi dodatki in je namenjen za preprečevanje ali zdravljenje glivnih okužb pri rastlinah. Izum se nanaša na metodo uporabe kombinacije v obliki zdravila ali fitofarmacevtskega pripravka za uničevanje gliv ali inhibicijo rasti in reprodukcije gliv in se uporablja v fitofarmacevtiki in dekontaminaciji tekočin in površin ali za sterilizacijo kirurških in drugih medicinskih orodij in implantatov, vključno s protetiko, in situ sterilizacijo katetrov, intravenoznih vsadkov.
Spodaj so navedeni primeri postopkov, načrtovani z namenom ilustracije inovacije. Opisi primerov nimajo namena omejevanja inovacije in naj se razumejo v smislu demonstracije inovacije.
• ·
-12Primeri izvedbe
Primer 1. Test inhibicije rasti
Učinek kombinacije smo testirali na glivah iz vrste Aspergillus v tekočem gojišču. Spore smo gojili preko noči (od 16 do 24 h) v sintetičnem tekočem gojišču po Voglu pri 30 °C. Gojišče po Voglu je vsebovalo različne kombinacije antimikotika in motilca protonske homeostaze, aktivni komponenti kombinacije. Za pozitivno kontrolo smo uporabili glivo, ki je rastla v gojišču brez dodatkov kombinacije. Metoda ΧΤΤ, ki se uporablja za določanje metabolne aktivnosti glivnih celic in njihovo preživetje, je opisana spodaj.
Priprava suspenzije spor in gojišč
Suspenzije spor smo pripravili v 0.1% (m/v) raztopini Tween 80. Suspenzijo spor končnih koncentracije 105 spor/ml smo uporabili za inokulacijo tekočega gojišča po Voglu. Gojišče po Voglu vsebuje: 8.5 mM of sodium citrate dihydrate (Na3(C6H5O7)), 36.8 mM KH2PO4, 25.0 mM NH4NO3, 0.7 mM CaCl2.2H2O, 0.8 mM MgSO4.7H2O, pH 6.0, 0.2 ml kovine v sledovih (34.3 mM EDTA, 15.3 mM ZnSO4.7H2O, 8 mM MnCl2.4H20, 1.6 mM CoC12.6H2O, 1.3 mM CuSO4.5H2O, 0.2 mM (NH4)6Mo7O24.4H20, 10 mM CaCl2.2H2O, 3.6 mM FeSO4.7H2O; pH 6.5), 20 μΜ D-biotin in 2% (w/v) glukoze. Protiglivne substance (amiodaron 2 mM v DMSO, amfotericin 0,04 g/1 DMSO, klotrimazol 1 g/1 DMSO, flukonazol 40 g/1 DMSO, ketokonazol 5 g/1 metanola) in motilce protonske homeostaze (bafilomicin 0.16 μΜ v DMSO) smo raztopili v pripadajočih topilih v ustreznih koncentracijah. 0.2 ml spor v gojišču smo odpipetirali v luknjice mikrotitrske plošče (uporabljali smo plošče s 96 luknjicami). K raztopini spor smo dodali farmacevtsko kombinacijo. Gojišče s sporami brez farmacevtske kombinacije smo uporabili kot kontrolo rasti (100% rast). Sledila je 24 uma inkubacija pri 37° C.
Z ΧΤΤ metodo smo določali prisotnost živih celic. ΧΤΤ reagent prehaja celično membrano in se v aktivnih mitohondrijih pretvori v obarvano spojino. Pripravili smo raztopini ΧΤΤ in menadiona. ΧΤΤ smo raztopili v vroči vodi s končno koncentracijo 1 g/1. Menadion smo raztopili v acetonu v koncentraciji 10 mM, ter ga nato redčili v razmerju 1:10 s fiziološko raztopino. Končna ΧΤΤ raztopina vsebuje ΧΤΤ reagent (koncentracija 0.6 g/1; končna koncentracija v luknjici 0.2 g/1) in menadion (koncentracija 75 μΜ, končna koncentracija v luknjici 25 μΜ).
V vsako luknjico smo dodali 100 μΐ ΧΤΤ raztopine. Nato smo ploščo inkubirali pri 30° C, tokrat 4 ure. Po inkubaciji smo iz vsake luknjice odpipetirali 100 μΐ raztopine v novo prozorno • ·
-13mikrotitrsko ploščo, v kateri smo potem na mikročitalcu Bio-Tek® PowerWave XS izmerili absorbanco raztopine pri valovni dolžini 450 nm.
V vseh poskusih, ki so predstavljeni na Sliki 1, smo uporabili končne koncentracije bafilomicina do 10 nM. Iz rezultatov razberemo, da bafilomicin in antimikotiki v farmacevtski kombinaciji delujejo sinergistično in izboljšajo inhibicijo rasti glive. Ko smo uporabili 10 nM koncentracijo bafilomicina in flukonazol s koncentracijo 1 smo dosegli 100% inhibicijo rasti, fungicidni učinek. Kombinacije bafilomicina in ketokonazola je prav tako uspešna in s kombinacijo 2 nM bafilomicina in ketokonazola, s koncentracijo 15 pg/ml, dosežemo 99% inhibicijo rasti. Prav tako izrazito inhibicijo opazimo tudi pri vseh kombinacijah 10 nM bafilomicina s klotrimazolom.
Sorbično kislino v končni koncentraciji do 10 mM smo kombinirali z več antimikotiki. Na Sliki 2 je predstavljena kombinacija sorbične kisline in amfotericina B, ki nam pokaže, da je inhibicija rasti pri uporabljeni 3 mM sorbični kislini in 0.5 mg/1 amfotericina že 85 %. Pri kombinaciji sorbične kisline in flukonazola, lahko vidimo, da skoraj 100% inhibcija rasti dosežemo s kombiniranjem 3 mM sorbične kisline in flukonazola, s koncentracijo 1,5 g/1. Tudi kombinacija sorbične kisline in ketokonazola zelo učinkovito inhibira rast glive. S sočasno uporabo 3 mM sorbične kisline in ketokonazola, s koncentracijo 10 mg/1 dosežemo 99% inhibicijo rasti. Podobne rezultate dobimo tudi s kombinacijo klotrimazola in sorbične kisline. Tabela 1. Inhibicija rasti gliv A. terreus s kombinacijo sorbične kisline in flukonazaola. Za
primerjavo smo uporabili farmacevtske kombinacije. gojišče brez komponent in s posameznimi komponentami
Sorbična kislina - 10 mM - 10 mM
Flukonazol - - 0.5 g/1 0.5 g/1
Rast A. terreus (%) 100 ±7 6±1 92 ±1 lil
Primer 2. Konfokalna mikroskopija
S pomočjo mikroskopije smo ovrednotili vpliv farmacevtske kombinacije na rast testirane glive. Celice smo barvali z barvilom SynaptoRed in SYTOX. Prvo barvilo barva celične membrane, medtem ko SYTOX slabo prehaja nepoškodovano celično steno in fluorescira samo po vezavi na DNA. Detekcija SYTOX barvila znotraj celice je pokazatelj, da je poškodovana celična membrana.
• · • · · ·
-14Preskusili smo kombinacijo klotrimazola in acetilsalicilne kisline. Kot kontrolo smo uporabili glivo A. niger brez dodatka kombinacije. Rezultati so prikazani na sliki 4. Povečave slik so enake povečavi kontrolnega preparata. Primerjava rasti in barvanje s SYTOX jasno kažejo, da je v prisotnosti kombinacije motena rast gliv. Opazi se, da je rast kontrolnega preparata intenzivnejša in se znotraj celična vsebina ne barva s SYTOX barvilom. Popolnoma zavrto rastje mogoče opaziti pri kombinaciji amfotericina in sorbične kisline. Natančna izvedba posameznih korakov eksperimenta je opisana spodaj.
Pri delu smo uporabljali konfokalni mikroskop Leica TCS SP5. To je laserski mikroskop postavljen na ogrodje Leica DMI 6000 CS invertnega mikroskopa (Leica Microsystems, Germany). Uporabljali smo imerzijski objektiv s HCX plan apo 63x oil (NA 1.4). Za barvanje smo uporabili barvilo SynaptoRed 2 (Biotium), ki se vzbuja pri 514 nm z argonskim laserjem, emisijo pa smo zbirali med 650 in 700 nm in SYTOX Green, ki se vzbuja pri 488 nm in emitira pri 520 do 540 nm.
Pripravili smo suspenzijo spor s koncentracijo 105 spor/ml v gojišču po Voglu, ki je vsebovalo protiglivno substanco in motilec protonske homeostaze. 0.2 ml omenjene suspenzije smo nacepili na krovno steklo. Preparat smo inkubirali 14 ur na 30° C v vlažni komori. Preparate smo barvali s Synapto Red (barvila celične membrane) in 10 μΐ 0.5 mM barvila Sytox Green, 15 minut pri 30°C.
Primer 3. Določanje motilcev protonske homeostaze z metodo merjenja znotrajcelične vrednosti pH
Z metodo uporabe kodiranega senzorja za merjenje znotrajcelične vrednosti pH smo pokazali znižanje znotrajcelične pH vrednosti za motilce protonske homeostaze. Izvedli smo meritve na način opisan v članku Bagar in sod., (2009). V tabeli 2 je prikazan padec znotrajcelične pH vrednosti glive ob dodatku bafilomicina ali sorbične kisline. Pri obeh regentih je padec znotrajcelične vrednosti pH koncentracijsko odvisen.
Tabela 2. Znotraj celična vrednost pH po dodatku motilca protonske homeostaze. Učinek dodatka bafilomicina ali sorbične kisline.
Cas (min) 0 3 5 10 15
Bafilomicin
50 nM 7.5 7.7 7.7 7.5 7.0
100 nM 7.5 7.0 6.7 6.5 6.0
Sorbična kislina
5 mM 7.5 7.0 6.9 6.9 6.9
10 mM 7.5 5.9 6.1 5.9 5.9
Primer 4. Inhibicija rasti kvasovk
Kombinacije smo testirali na kvasovkah Saccharomyces cerevisiae v tekočem gojišču. Kvasovko smo gojili preko noči (od 16 do 24 h) v sintetičnem tekočem gojišču pri 28 °C. Gojišče je vsebovalo različne kombinacije. Kontrolne celice kvasovk smo gojili v gojišču brez kombinacije. Celice kvasovk smo razredčili do optične gostote pri 600 nm 0.04 (OD600). Rast smo spremljali spektrofotometrično. Predstavljeni so rezultati izmerjeni po 8 h inkubacije na 28 °C. Kvasovkam smo dodali kombinacije in spremljali njihovo rast. Rezultati so predstavljeni na sliki 3.
Najhitrejša je bila rast kvasovk, ki smo jih gojili brez prisotnosti dodatkov. Vsi nadaljnji rezultati so preračuni kot odstotek rasti glede na pozitivno kontrolo. Iz rezultatov je razvidno (Slika 3), da farmacevtska kombinacija motilca protonske homeostaze inhibira rast S. cerevisiae in da je inhibicija rasti veliko boljša od inhibicije rasti v prisotnosti posameznih komponent.

Claims (12)

  1. Zahtevki
    1. Kombinacija, ki vključuje protiglivno substanco in motilec protonske homeostaze za uničevanje gliv ali zaviranje rasti in replikacije gliv.
  2. 2. Kombinacija po zahtevku 1, označena s tem, da je motilec protonske homeostaze izbran med spojinami, ki inhibirajo protonske ATPaze, protonske izmenjevalce ali oksidativno fosforilacijo, prednostno so to spojine: bafilomicin, konkavalin, konkanamicin, ouabin, oligomicin, FR177995, peptidi-C5-amiloida, acil-gvanidini s kondenziranim triacilnim obročem, CCCP, FCCP, DCCD, arhazolid in apikularen, azidi, cianidi, antimicin, rotenon in TTFA, ionofori, soli in derivati spojin.
  3. 3. Kombinacija po zahtevku 1, označena s tem, da je motilec protonske homeostaze izbran med šibkimi karboksilnimi in hidroksikarboksilnimi kislinami.
  4. 4. Kombinacija po katerem koli zahtevku od 1 do 3, označena s tem, da je protiglivna substanca izbrana iz skupine antimikotikov ali fungicidov.
  5. 5. Kombinacij po katerem koli zahtevku od 1 do 4, označena s tem, da je fungicidna ali fungistatična terapevtska učinkovitost protiglivne substance v kombinaciji v prisotnosti motilca protonske homeostaze boljša v primerjavi s terapevtsko učinkovitostjo same protiglivne substance.
  6. 6. Kombinacij po katerem koli zahtevku od 1 do 5 za pripravo zdravila ali fitofarmacevtskega preparata za in vivo in in vitro preprečevanje ali zdravljenje okužb, ki jih povzročajo glive, prednostno patogene in oportunistično patogene kvasovke in filamentozne glive.
  7. 7. Zdravilo, ki vsebuje kombinacijo po katerem koli zahtevku 1, 2, od 4,do 6 namenjeno preprečevanju ali zdravljenju glivnih okužb, ki povzročajo obolenja pri živalih ali človeku in so okužbe pri živalih ali človeku (a) površinske, omejene na kožo, nohte in lase; (b) podkožne, okužbe podkožnih tkiv in bližnje strukture; (c) sistemske, to so okužbe notranjih organov.
  8. 8. Zdravilo po zahtevku 7 označeno s tem, da vsebuje terapevtsko učinkovito količino kombinacije po katerem koli zahtevku 1, 2, od 4,do 6 v ustrezni farmacevtski obliki z ustreznimi farmacevtskimi dodatki.
    -179. Zdravilo po katerem koli zahtevku od 7 do 8 označeno s tem, da je zdravilo v farmacevtski obliki primemo za topično, intravenozno, oralno, intramuskulatomo, podkožno, intraperitonalno, intraokulamo, transpulmulamo, transdermalno, aerosolno uporabo.
  9. 10. Zdravilo po katerem koli zahtevku od 7 do 9 označeno s tem, da vsebuje kombinacijo v obliki, ki ločeno vsebuje protiglivno substanco in ločeno motilec protonske homeostaze, ki pa se uporabljata na način, da se doseže sinergistični učinek značilen za kombinacijo in sta ločeni zaradi izboljšane stabilnosti posameznih komponent kombinacije ali ločene poti administracije le-teh.
  10. 11. Fitofarmacevtski preparat, ki vsebuje kombinacijo po katerem koli zahtevku od 1 do 6 v ustrezni farmacevtski obliki z ustreznimi dodatki in je namenjeno za preprečevanje ali zdravljenje glivnih okužb pri rastlinah.
  11. 12. Metoda uničevanja gliv ali inhibicije rasti in replikacije gliv, prednostno patogenih in oportunistično patogenih gliv preko prenosa kombinacije po katerem koli zahtevku od 1 do 6 v obliki zdravila po katerem koli zahtevku od 7 do 10 ali fitofarmacevtskega preparata po zahtevku 11 na z glivo okuženo mesto in se uporablja v fitofarmacevtiki, dekontaminaciji tekočin in površin ali za sterilizacijo kirurških in drugih medicinskih orodij in implantatov, vključno s protetiko, in situ sterilizacijo katetrov, intravenoznih vsadkov.
  12. 13. Metoda po zahtevku 12 označena s tem, da se aktivni substanci kombinacije po katerem koli zahtevku od 1 do 6 uporabljata ločeno, zaporedno, vendar še vedno na način, da je dosežen sinergistični učinek značilen za sočasno uporabo.
SI201000099A 2010-03-22 2010-03-22 Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv SI23309A (sl)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI201000099A SI23309A (sl) 2010-03-22 2010-03-22 Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv
PCT/SI2010/000050 WO2011119119A2 (en) 2010-03-22 2010-09-07 The combination of antifungal compound and modifier of proton homeostasis for destroying or growth inhibition and reproduction of fungi

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI201000099A SI23309A (sl) 2010-03-22 2010-03-22 Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI23309A true SI23309A (sl) 2011-09-30

Family

ID=44624880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI201000099A SI23309A (sl) 2010-03-22 2010-03-22 Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv

Country Status (2)

Country Link
SI (1) SI23309A (sl)
WO (1) WO2011119119A2 (sl)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3310533A1 (de) * 1983-03-23 1984-09-27 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Organisch-chemische verbindungen und verfahren zu ihrer herstellung
BRPI0803568B8 (pt) * 2008-08-14 2021-05-25 Biolab San Us Farm Ltda composição mucoaderente

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011119119A3 (en) 2012-04-05
WO2011119119A2 (en) 2011-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20190142800A1 (en) Synergistic antifungal compositions and methods thereof
AU2012224952C1 (en) Aqueous pharmaceutical formulation of tapentadol for oral administration
KR19990022286A (ko) 항진균제
US20160289224A1 (en) Antifungal Treatment
CA2722445A1 (en) Nanoemulsions for treating fungal, yeast and mold infections
SI23311A (sl) Farmacevtska kombinacija acetilsalicilne kisline in protiglivne substance za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv
ES2580480T3 (es) Agente antifúngico
US20020193369A1 (en) Antifungal compounds and uses therefor
US20150366845A1 (en) Pharmaceutical composition for diseases caused by pathogenic microorganisms such as aspergillus
SI23309A (sl) Kombinacija protiglivne substance in motilca znotrajcelične protonske homeostaze za uničevanje ali inhibicijo rasti in replikacije gliv
Shahid et al. Ketoconazole-loaded cationic nanoemulsion: in vitro–ex vivo–in vivo evaluations to control cutaneous fungal infections
RU2448960C1 (ru) Фунгицидное средство
Moraes Recent developments on the anti-Candida effect of amphotericin B combined with a second drug-a mini-review
RU2337689C1 (ru) Средство для лечения поверхностных микозов
US11246857B2 (en) Anti-fungal inhibitors
Kaur et al. An updated review of what, when and how of sertaconazole: A potent antifungal agent
US20230310388A1 (en) Methods and Compositions for Treating Fungal Infections
ES2960745T3 (es) Composiciones contra infecciones por cándida
Souza et al. Synergistic action of synthetic peptides and amphotericin B causes disruption of the plasma membrane and cell wall in Candida albicans
US20120095093A1 (en) Antifungal compounds
PL237102B1 (pl) Sposób wzmacniania skuteczności działania przeciwgrzybicznego flukonazolu i kompozycja farmaceutyczna o działaniu przeciwgrzybicznym
CN107106691A (zh) 制剂
WO2023135144A1 (en) A composition comprising lipid nanoparticles and an antifungal polyene
PL241697B1 (pl) Kompozycja pierwotniakobójcza do leczenia i/lub zapobiegania chorób wywoływanych przez pierwotniaki u ludzi zawierająca olejek cedrowy oraz sposób jej wytwarzania
PL244203B1 (pl) Ciekła proliposomowa kompozycja środków ochrony roślin oraz sposób wytwarzania kompozycji

Legal Events

Date Code Title Description
OO00 Grant of patent

Effective date: 20111011

KO00 Lapse of patent

Effective date: 20131227