SI20582A - Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba - Google Patents

Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba Download PDF

Info

Publication number
SI20582A
SI20582A SI200000111A SI200000111A SI20582A SI 20582 A SI20582 A SI 20582A SI 200000111 A SI200000111 A SI 200000111A SI 200000111 A SI200000111 A SI 200000111A SI 20582 A SI20582 A SI 20582A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
het
fragment
group
compound
amino
Prior art date
Application number
SI200000111A
Other languages
English (en)
Inventor
Danijel Kikelj
Lucija Peterlin
Petra Marinko
Matej Breznik
Mojca Stegnar
Alenka Trampu�-Bakija
Marjana Fortuna
Original Assignee
Univerza V Ljubljani
Lek, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov d.d.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerza V Ljubljani, Lek, tovarna farmacevtskih in kemi�nih izdelkov d.d. filed Critical Univerza V Ljubljani
Priority to SI200000111A priority Critical patent/SI20582A/sl
Priority to US10/275,215 priority patent/US7112590B2/en
Priority to EP01925739A priority patent/EP1287018B1/en
Priority to AT01925739T priority patent/ATE287416T1/de
Priority to DE60108495T priority patent/DE60108495T2/de
Priority to AU2001252419A priority patent/AU2001252419A1/en
Priority to ES01925739T priority patent/ES2239134T3/es
Priority to PCT/GB2001/001997 priority patent/WO2001085760A1/en
Publication of SI20582A publication Critical patent/SI20582A/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
    • C07D239/86—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in position 4
    • C07D239/94—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/70—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D239/72—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines
    • C07D239/95—Quinazolines; Hydrogenated quinazolines with hetero atoms directly attached in positions 2 and 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/60—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D277/62—Benzothiazoles
    • C07D277/68—Benzothiazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 2
    • C07D277/82—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06191—Dipeptides containing heteroatoms different from O, S, or N
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Izum se nanaša na spojine s formulo I ter njihove farmacevtsko sprejemljive soli, pri čemer imajo substituente v opisu navedene pomene. Spojine se uporabljajo kot inhibitorji trombina.ŕ

Description

NOVI INHIBITORJI TROMBINA, NJIHOVA PRIPRAVA IN UPORABA
Področje tehnike, na katerega se nanaša izum
Izum spada v področje farmacevtske industrije in se nanaša na nove heterociklične derivate dipeptidov in mimetikov dipeptidov v obliki zmesi diastereomerov in v obliki čistih diastereomerov, na postopke za njihovo pripravo in na farmacevtske izdelke, ki jih vsebujejo. Novi heterociklični derivati dipeptidov in mimetikov dipeptidov so inhibitorji trombina in drugih serinskih proteaz, ki sodelujejo pri koagulaciji krvi in imajo antikoagulantno delovanje pri sesalcih.
Tehnični problem
Za zaviranje koagulacije in vivo se danes uporabljajo predvsem heparini in kumarini, ki imajo vrsto neželjenih in nepredvidljivih učinkov. Heparin se uporablja parenteralno in deluje tako, da ojači inhibitorni efekt endogenega antitrombina III, ki je fiziološki inhibitor trombina. Ker je vsebnost antitrombina III v plazmi lahko zelo različna in ker vezan trombin ni mogoče inhibirati preko opisanega indirektnega mehanizma, je lahko zdravljenje s heparini neuspešno. Heparini imajo tudi slabo biološko uporabnost in majhno terapevtsko širino. Kumarini zavirajo sintezo trombina, tako da blokirajo γ-karboksilacijo glutamata v sintezi protrombina ter faktorjev VII, IX in X, zato se njihov učinek pojavi šele po nekaj dneh. Terapijo s kumarini je treba stalno spremljati s testi koagulacije. Zaradi pomankljivosti heparina in kumarinov pri antikoagulantni terapiji obstaja stalna potreba po novih učinkovinah s hitrim nastopom antikoagulantnega učinka, ki ne bi bil odvisen od antitrombina lil in bi bile učinkovite tudi pri peroralni aplikaciji. V zadnjem času so na tem področju vse pomembnejši nizkomolekularni inhibitorji trombina.
Stanje tehnike
Serinska proteaza trombin je ključni encim v procesih strjevanja krvi in s tem v razvoju tromboze. Njegovo primarno delovanje je pretvorba topnega fibrinogena v netopni fibrin, ki tvori mehansko ogrodje krvnega strdka. Poleg tega trombin mehansko ojača strdek z aktivacijo faktorja XIII, ki kovalentno poveže monomere fibrina in stimulira agregacijo trombocitov. S pozitivno povratno zvezo preko aktivacije faktorjev V in Vlil se koncentracija trombina na mestu poškodbe še poveča. Zaradi omenjene vloge v hemostazi je trombin tarčna molekula za razvoj novih antikoagulantov (Sanderson P.E.J., Naylor-Olsen A.M. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 289-304.; Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 457-468.; Breznik M., Pečar S. Farm. vestn. 1997, 48, 545-560; Sanderson P. E. J. Med. Res. Rev. 1999, 19, 179197).
Aktivno mesto trombina z značilno katalitično triado (Asp 189, His 57, Ser 195) lahko razdelimo na tri vezavna področja: žep S1, ki daje encimu specifičnost za bazičen del molekule inhibitorja P1, hidrofobno področje S2, ki omeji dostop inhibitorjev in substrata do aktivnega mesta ter večje hidrofobno področje S3 (Bode W., Mayr I., Baumann U. et al. The EMBO Journal 1998, 8, 3467-3475).
Na podlagi poznavanja kristalne strukture trombina so razvili številne nizkomolekularne inhibitorje z delovanjem na aktivno mesto trombina. Idealni inhibitor trombina naj bi imel dobro biološko uporabnost, dolgo razpolovno dobo in možnost peroralne aplikacije. Doseganje teh ciljev je omejeno s prisotnostjo bazične gvanidinske ali amidinske skupine, ki je prisotna pri številnih doslej znanih inhibitorjih trombina, ali s prisotnostjo reaktivne elektrofilne skupine, ki jo vsebujejo elektrofilni inhibitorji trombina npr. efegatran, PPACK. Pomemben kriterij pri načrtovanju inhibitorjev trombina predstavlja tudi selektivnost napram drugim serinskim proteazam kot so tripsin, faktor Xa, urokinaza, tkivni plazminogenski aktivator ter plazmin (Kimball S.D. Current Pharmaceutical Design 1995, 1, 441-468.; Das J., Kimball S.D. Bioorg. Med. Chem. 1995, 3, 999-1007).
Nizkomolekularni inhibitorji aktivnega mesta trombina posnemajo tripeptidno sekvenco DPhe-Pro-Arg naravnega substrata fibrinogena. Prvo stopnjo v razvoju predstavljajo ireverzibilni inhibitorji, ki kovalentno reagirajo s Ser 195 v aktivnem mestu. Prototip takšnega inhibitorja je PPACK. Kljub temu, da so inhibitorji tega tipa zelo učinkoviti, so zaradi velike reaktivnosti potencialno toksični in nizko selektivni, njihova uporabnost pa je vprašljiva. Argatroban je prvi visoko učinkovit in selektiven reverzibilni inhibitor, ki je na tržišču na Japonskem (Novastan® in Slonnon®), v Evropi in ZDA pa je v fazi kliničnih testiranj. Doslej so sintetizirali veliko število strukturno različnih, aktivnih reverzibilnih inhibitorjev s hidrofilnimi bazičnimi skupinami, ki imajo po peroralnem dajanju nizko biološko uporabnost (Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 457-468).
S številnimi spremembami dela P1 nhibitorjev trombina, predvsem z zamenjavo bazične gvanidinske ali amidinske skupine z nevtralnimi ali šibko bazičnimi skupinami, lahko povečamo njihovo biološko uporabnost. Večje skupine v tem delu molekule pa vodijo do večje selektivnosti inhibitorjev za trombin, saj ima trombin v primerjavi z večino ostalih serinskih proteaz relativno prostoren žep S1. Selektivnost inhibitorjev trombina navadno ocenjujejo glede na njihovo sposobnost inhibicije tripsina, ki je trombinu v družini serinskih proteaz najbolj soroden po obliki in velikosti aktivnega mesta in ima manjši S1 žep. Spremembe drugih delov molekule (P2 in P3), še posebej zamenjava estrskih in amidnih vezi pa lahko vodijo v dodatno povečanje stabilnosti inhibitorjev trombina v telesu. Takšni inhibitorji trombina so manj občutljivi na nespecifične proteaze in hidrolizo, s tem pa je podaljšana njihova razpolovna doba. (Menear K. Curr. Med. Chem. 1998, 5, 457-468.; TuckerT.J., Brady S.F., Lumma W.C. et al. J. Med. Chem. 1998, 41, 3210-3219).
Opis rešitve tehničnega problema z izvedbenimi primeri
Izum se nanaša na nove spojine s splošno formulo (I) D-CO-B-A-Het (I) v kateri pomenijo:
Het:
skupino (substituiran 6,7-dihidro-5/7-ciklopenta[d]pirimidin, ki je vezan na skupino A preko mesta 5, 6 ali 7 ali substituiran 5,6,7,8-tetrahidrokinazolin, ki je vezan na skupino A preko mesta 5,6,7 ali 8), (substituiran kinazolin, ki je vezan na skupino A preko mesta 6),
(substituiran kinazolin, ki je vezan na skupino A preko mesta 7), skupino
v kateri pomeni X: S, NH ali O
v kateri pomeni Y: N ali CH (substituiran
1.4.5.6- tetrahidrociklopentafcd-imidazol,
5.6- dihydro-4/-/-ciklopenta[d][1,3]-tiazol,
5.6- dihidro-4H-ciklopenta[c/][1,3]-oksazol, ki je vezan na skupino A preko mesta 4, 5 ali 6 ali substituiran
4.5.6.7- tetrah id ro-1,3-be nzot i azo I,
4.5.6.7- tetrahidro-1H-benzimidazol,
4.5.6.7- tetrahidro-1,3-benzoksazol, ki je vezan na skupino A preko mesta 4,5,6 ali 7), (substituiran 1,3-benzotiazol, ki je vezan na skupino A preko mesta 6), (substituiran
2.4.5.6- tetrahidrociklopenta[c]pirol,
2.4.5.6- tetrahidrociklopenta[c]pirazol, ki je vezan na skupino A preko mesta 4, 5 ali 6 ali substituiran
4.5.6.7- tetrahidro-2H-indazol
4.5.6.7- tetrahidro-2H-izoindol, ki je vezan na skupino A preko mesta 4,5,6 ali 7),
v kateri pomeni X: NH, O ali S skupino
v kateri pomeni Y: N ali CH skupino
(substituiran
5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-£/]pirimidin, ki je vezan na skupino A preko mesta 6), (substituiran
4.5.6.7- tetrahidro-1 H-imidazo[4,5-c]piridin,
4.5.6.7- tetrahidro[1,3]oksazolo[4,5-c]piridin,
4.5.6.7- tetrahidro[1,3]tiazolo[4,5-c]piridin, ki je vezan na skupino A preko mesta 5), (substituiran
4.5.6.7- tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin,
4.5.6.7- tetrahidro-2/7-pirolo[3,4-c]piridin, ki je vezan na skupino A na mestu 5).
(imidazofl ,2-a]piridin vezan na skupino A na preko mesta 6).
R1 je v vseh primerih H ali NH2 in R2 je v vseh primerih H ali NH2,
A: -skupino -CONH- ali - CH2NH-, ki je vezana na Het z NH fragmentom,
-skupino -CONHCH2- ali -CH2NHCH2-, ki je vezana na Het s CH2 fragmentom, -skupino -CH2NHCONH-, -CH2NHCH2CONH- ali -CH2NHCOCH2NH-, ki je vezana na Het z NH fragmentom,
-skupino -CH2NHCONHCH2-, -CH2NHCH2CONHCH2- ali -CH2NHCOCH2NHCH2-, ki je vezana na Het s CH2 fragmentom,
B je izbran izmed naslednjih struktur:
v katerih pomenijo:
Z: CH2, S ali CH-OH
R3: H, običajen ali razvejan CrC4 alkil, C3-C7 cikloalkil R4: H, običajen ali razvejan CrC4 alkil, C3-C7 cikloalkil
D ima splošno strukturo:
v kateri je Rd lahko H, CH2OH, CH2SH ali skupina
Ra
v kateri sta
Ra in Rb neodvisno izbrana izmed naslednjih skupin:
-H,
-Ci-C4 običajen ali razverjan alkil, ki je lahko substituiran s C3-C7 cikloalkilom ali z do 9 atomi halogena izbranega izmed F, Cl, Br, I,
-C3-C7 cikloalkil,
-C9-C10 bicikloalkil,
-stabilen nasičen ali nenasičen 5-7 členski monociklični heterociklični sistem, ali 8-10 členski biciklični heterociklični sistem, ki vsebuje poleg ogljikovih atomov do 3 heteroatome izbrane izmed N, O in S, v katerem je lahko N ali S tudi oksidiran ali N kvaterniran,
-aril (npr. fenil, naftil), kije lahko nesubstituiran ali substituiran na poljubnih mestih z enim ali dvema substituentoma izbranima izmed Cu alkil, Ci_4 alkoksi, halogen ali hidroksi,
Rcje izbran med skupinami: -NH2
-NH(CH2)nCH3,
-NH(CH2)mOH,
-NH(CH2)kCOOH,
-NH(CH2)nCOOR5,
-NH(CH2)kCONR6R7,
-NHO2S(CH2)n-W kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3, kjer je m lahko 2, 3 ali 4, kjer je k lahko 1, 2 ali 3, kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3 in R5 pomeni C1.4 običajni ali razvejani alkil, kjer je k lahko 1, 2 ali 3 in sta R6 in R7 lahko neodvisno H ali običajen ali razvejan CV4 alkil, ali pa sta R6 in R7 skupaj -(CH2)4.5-, -(CH2)2O(CH2)2- ali -(CH2)2NH(CH2)2-, kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3,
W pa pomeni fenil, naftil, nasičen ali nenasičen monociklični 5- ali 6- členski oz. nasičen ali nenasičen biciklični 8-10-členski heterocklični obroč z 1-3 heteroatomi poljubno izbranimi izmed N, O ali S v katerem je lahko N ali S tudi oksidiran ali N kvaterniran; vsak obroč je lahko poljubno substituiran z enim ali več substituenti izbranimi izmed C14 alkil, Cm alkoksi, amino, ciano, halogen ali hidroksi,
N[O2S(CH2)n-W][(CH2)kCOOHj kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3 in kjer je k lahko 1, 2 ali 3,
-NH(CH2)kNH2, kjer je k lahko 1, 2 ali 3,
-NHC(Ph)3
Izum se nanaša tudi na farmacevtsko sprejemljive soli spojin s formulo (I) z antikoagulantnim delovanjem in na farmacevtske izdelke, ki jih vsebujejo. Izum se nanaša tudi na postopke za pripravo spojin s splošno formulo (I).
Nove spojine so inhibitorji trombina in se uporabljajo peroralno in parenteralno. Uporabljajo se v kirurgiji pri posegih na srcu in žilju, za zdravljenje diseminirane intravaskularne koagulacije pri tromboembolijah, hemodializi, nestabilni angini pectoris, ishemični možganski bolezni in kot alternativa za heparin pri bolnikih s trombocitopenijo izzvano s heparinom. Pri svežem srčnem infarktu naj bi se uporabljali za dodatno zdravljenje v kombinaciji s trombolitično terapijo.
Farmacevtski izdelki, ki so predmet opisanega izuma, so lahko v obliki injekcij ali peroralnih pripravkov. Poleg učinkovine vsebujejo še različne standardne dodatke, odvisno od vrste uporabe. Farmacevtski izdelki so pripravljeni po standardnih postopkih. Odmerek, pogostost in način uporabe zavisijo od različnih dejavnikov, odvisni pa so tudi od posamezne učinkovine in njenih farmakokinetičnih lastnosti ter bolnikovega stanja.
Spojine opisane v izumu imajo enega ali več stereogenih centrov, na katerih je absolutna konfiguracija lahko R ali S in se lahko pojavljajo v obliki racematov, racemnih zmesi, čistih enantiomerov, zmesi diastereomerov ali v obliki čistih diastereomerov.
Izhodne heterociklične spojine za pripravo spojin, ki so predmet tega izuma, pripravimo tako, kot je prikazano v Shemah I in II ali po postopkih opisanih v literaturi.
SHEMA I
OH
OH
0C0CH,
OH
OH /H,O
NaOH/EtOH
NHCOCH, NHCOCH,
CrO3, H2SO4, H2O I
5-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol (6) pripravimo po postopku opisanem v literaturi (Bach N. J., Kornfeld E. C., Jones N. D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481). 2,6-Diamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolin (5) pripravimo s ciklokondenzacijo ustreznega enaminoketona (2) (Bach N. J., Kornfeld E. C., Jones N. D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481) z gvanidin hidrokloridom v prisotnosti natrijevega etoksida in sledečo alkalno hidrolizo. 2,4,6-Triamino5,6,7,8-tetrahidrokinazolin (3) pripravimo s ciklokondenzacijo cianogvanidina in N-(4oksocikloheksil)acetamida (1) po analogiji s postopkom opisanim v člankih: Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H. K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837) in Gangjee A., Zaveri N., Oueener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243) ter sledečo alkalno hidrolizo. 2,6Diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol (4) pripravimo iz /V-(4-oksocikloheksil)acetamida (1) po bromiranju in ciklizaciji s tiosečnino, ter hidrolizo v bromovodikovi kislini (Schneider C.S., Mierau J. J. Med. Chem. 1987, 30, 494-498.; Griss G., Schneider C., Hurnaus R. et al. DE 3447075). 2,7-Diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol pripravimo z redukcijo ustreznega oksima, ki ga pripravimo iz 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-7-ona po reakciji s hidroksilamin hidrokloridom tako kot je opisano npr. v: Becker D. P., Flynn D. L. Synthesis 1992, 1080-1082. 2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-7-on pripravimo iz
1,3-cikloheksandiona z bromiranjem in sledečo ciklizacijo s tiosečnino po postopku opisanem v patentu (Υοο H. Y., Chung K. J., Chai J. P. et al. VV097/03076). 2,4,5-Triamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolin, 2,5-diamino-5,6,7,8-tetrahidrokinazolin, 4-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/7indazol in 4-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol pripravimo iz 1,3-cikloheksandiona in ustreznega reagenta za ciklizacijo po analogiji s postopki opisanimi v člankih: Bach N. J., Kornfeld E. C., Jones N. D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481.; Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837.; Gangjee A., Zaveri N., Oueener S.F. et al. J. Heterocyclic Chem, 1995, 32, 243 ter sledečo pretvorbo keto skupine v amino skupino npr. z reduktivnim aminiranjem (Abdel-Magid A. F., Carson K. G., Harris B. D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849).
2,4-Diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol pripravimo iz 2-amino-4,5,6,7tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-ona z amoniakom v prisotnosti katalizatorja po analogiji s postopkom opisanim v patentu (Schonwald K., Meyer Th., Eishold K.W. DE 2845857). Priprava 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-ona iz 1-amino-cikloheksen-3-ona z rodanaminom je opisana v člankih: Schmitz E., Striegler H. J. Prakt. Chem. 1971, 1125-1130 in Schmitz E., Striegler H. J. Prakt. Chem. 1970, 359-365. Alternativno lahko izhajamo tudi iz 2-azidocikloheksanola, ki ga z redukcijo, acetiliranjem amino in hidroksi skupine, selektivno hidrolizo esterske skupine in oksidacijo, ki jo izvršimo npr. s CrO3 po analogiji s postopkom opisanem v: Curtin D. Y., Schmukler S. J. Am. Chem. Soc. 1955, 77, 1105 pretvorimo v 210 acetamidocikloheksanon, tega pa po bromiranju, ciklizaciji s tiosečnino in hidrolizi v 2,4diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol. Po ciklizaciji 2-acetamidocikloheksanona z ustreznimi reagenti dobimo po analogiji s postopki opisanimi v člankih: Bach N. J., Kornfeld E. C., Jones N. D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481.; Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H. K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837.; Gangjee A., Zaveri N., Oueener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem, 1995, 32, 243 in sledeči hidrolizi 2,4,8-triamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolin, 2,8-diamino-5,6,7,8-tetrahidrokinazolin, 7-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/7indazol in 7-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2H-izoindol.
2,6-Diamino-1,3-benzotiazol pripravimo z redukcijo 2-amino-6-nitro-1,3-benzotiazola po postopkih opisanih v: Hays S.J., Rice M.J., Ortvvine D.F. et al. J. Pharm. Sci. 1994, 83, 14251432 in Abdelaal S. M., Kong S.-B., Bauer L. J. Heterocycl. Chem. 1992, 29, 1069-1076.
2.5- Diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1/7-benzimidazol pripravimo iz /V-(4-oksocikloheksil)acetamida in /V-acetilgvanidina po postopku, ki je opisan za pripravo 2-aminoimidazolov (Little T. L, VVebber S. E. J. Org. Chem. 1994, 59, 7299-7305) in sledečo hidrolizo acetamidne skupine. Analogno iz /V-(2-oksocikloheksil)-acetamida pripravimo 2,4-diamino4,5,6,7-tetrahidro-1H-benzimidazol.
2.6- Diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzoksazol pripravimo iz /V-(4-oksocikloheksil)acetamida s ciklizacijo s sečnino po postopku, ki je opisan za sintezo 2-amino-4,5,6,7tetrahidro-1,3-benzoksazola (Nayer H., Giudicelli R., Menin J. Buli. Soc. chim. 1967, 20402043) in sledečo hidrolizo acetamidne skupine. Analogno lahko iz /V-(2-oksocikloheksil)acetamida pripravimo 2,4-diamino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzoksazol.
Izhajajoč iz ciklopentan-1,3-diona, ciklopentan-1,3-dion monoetilen acetala in Λ/-(3oksociklopentil)acetamida po analognih postopkih kot so opisani zgoraj pripravimo amino derivate 6,7-dihid ro-5/7-ciklopenta[d]pi rim idina, 1,4,5,6-tetrahidrociklopenta[d]-imidazola,
5.6- dihydro-4H-ciklopenta[d][1,3]-tiazola, 5,6-dihidro-4/-/-ciklopenta[d][1,3]-oksazola, 2,4,5,6tetrahidrociklopenta[c]pirola in 2,4,5,6-tetrahidrociklopenta[c]pirazola.
Kot je prikazano v Shemi II, pripravimo (1,4-dioksospiro[4.5]dekan-8-il)metanamin iz 1,4cikloheksandion monoetilen acetala (Becker D.P., Flynn D.L. Synthesis, 1992, 1080) in ga po acetiliranju z acetanhidridom, odstranitvi ketalne zaščite in nato z DMFDMA pretvorimo v enaminoketon (8). 6-(Aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-kinazolinamin (9) pripravimo s ciklokondenzacijo enaminoketona (8) z gvanidin hidrokloridom in sledečo alkalno hidrolizo. Iz ustreznega enaminoketona (8) lahko po analognih postopkih kot je opisano v članku Bach N. J., Kornfeld E. C., Jones N. D. et al. J. Med. Chem. 1980, 23, 481, pripravimo 4,5,6,7tetrahidro-2/-/-izoindol-5-ilmetanamin (10) in 4,5,6,7-tetrahidro-2/-/-indazol-5-ilmetanamin (11). 6-(Aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2,4-kinazolindiamin (13) pripravimo s ciklokondenzacijo cianogvanidina in A/-[(4-oksocikloheksil)metil]acetamida (7) po analogiji s predpisom v: Modest E.J., Chatterjee S., Protopapa H.K. J. Am. Chem. Soc. 1965, 87, 1837.; Gangjee A., Zaveri N., Oueener S.F. et al. J. Heterocycl. Chem. 1995, 32, 243, in sledečo alkalno hidrolizo.
SHEMA II
H, N—'
Z bromiranjem in ciklizacijo /V-[(4-oksocikloheksil)metil]acetamida (7) s tiosečnino pripravimo 6-(aminometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amin (12) 4-(Aminometil)-4,5,6,7tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amin pripravimo po analognem postopku kot je opisan v članku Maillard J., Delaunay P., Langlois M. et al. Eur. J. Med. Chem. 1984, 19, 457-460 iz etil 2oksocikloheksankarboksilata, ki ga najprej bromiramo in cikliziramo s tiosečnino. Nastali etil 2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-4-karboksilat reduciramo do ustreznega alkohola, ki ga nato toziliramo na hidroksilni skupini in po reakciji z amoniakom pripravimo 4(aminometil)-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2-amin. Z uporabo predhodno opisanih postopkov lahko iz etil 2-oksocikloheksankarboksilata pripravimo 4,5,6,7-tetrahidro-2/-/izoindol-7-ilmetanamin, 4,5,6,7-tetrahidro-2/-/-indazol-7-ilmetanamin, 8-(aminometil)-5,6,7,8tetrahidro-2,4-kinazolin-diamin ter 8-(aminometil)-5,6,7,8-tetrahidro-2-kinazolinamin.
Izhajajoč iz ciklopentan-1,3-diona, ciklopentan-1,3-dion monoetilen acetala in Λ/-(3oksociklopentil)acetamida po analognih postopkih kot so opisani zgoraj in prikazani v Shemi 2 pripravimo aminometilne derivate 6,7-dihidro-5/7-ciklopenta[d]pirimidina, 1,4,5,6tetrahidrociklopenta[d]-imidazola, 5,6-dihidro-4A7-ciklopenta[c/][1,3]-tiazola, 5,6-dihidro-4Hciklopenta[d][1,3]-oksazola, 2,4,5,6-tetrahidrociklopenta[c]pirola in 2,4,5,6-tetrahidrociklopenta[c]pirazola.
SHEMA lil
R1=NH2, R2=NH,
R1=NH2, R2=U
X = s
X = NH
X = O
Y = NH 20 Y = CH
Substituirane 5,6,7,8-tetrahidropirido[4,3-o(]pirimidine (14, R1= NH2, R2=NH2; 15, R1=NH2, R2=H), ki so vezani na skupino A preko mesta 6, substituiran 4,5,6,7tetrahidro[1,3]tiazolo[5,4-c]piridin (16, X=S, R1 = H ali NH2), substituiran 4,5,6,7-tetrahidro3/7-imidazo[4,5-c]piridin (17, X=NH R1 = H ali NH2), substituiran 4,5,6,713 tetrahidro[1,3]oksazolo[5,4-c]piridin (18, X=0, R1 = H ali NH2), 4,5,6,7-tetrahidro-2/7pirazolo[4,3-c]piridin (19, Y=NH) in 4,5,6,7-tetrahidro-2/7-pirolo[3,4-c]piridin (20, Y=CH) (Shema lil) pripravimo iz 1-benzil-4-piperidinona po postopkih ciklizacije, ki so prikazani na Shemi I, nakar sledi odstranitev benzilne skupine s katalitskim hidrogeniranjem.
SHEMA IV
21: R = H
22: R = NH2
4,6-Kinazolindiamin (21) in 2,4,6-kinazolintriamin (22) pripravimo na način opisan v literaturi (Victory P., Borrell J.I., Vidal-Ferran A., Montenegro E., Jimeno M.L. Heterocycles 1993, 36, 2273-2279.; Yan S.J., VVeinstock L.T., Cheng C.C. J. Heterocycl. Chem. 1979, 16, 541-544 (Shema IV). Na enak način pripravimo iz 2-amino-4-nitro-benzonitrila 4,7-kinazolindiamin in 2,4,7-kinazolintriamin [Houben-Weyl: Hetarenes IV : Vol. E 9b/part 2. 4th ed., Thieme, Stuttgart, New York (1998), str. 1-192]
6-(Aminometil)-4-kinazolinamin, 7-(aminometil)-4-kinazolinamin, 6-(aminometil)-2kinazolinamin, 7-(aminometil)-2-kinazolinamin, 6-(aminometil)-2,4-kinazolindiamin in 7(aminometil)-2,4-kinazolindiamin pripravimo iz 6-(bromometil)-4-klorokinazolina, 7(bromometil)-4-klorokinazolina, 6-(bromometil)-2-klorokinazolina, 7-(bromometil)-2klorokinazolina, 6-(bromometil)-2,4-diklorokinazolina ali 7-(bromometil)-2,4-diklorokinazolina in amoniaka v polarnih organskih topilih pri povišanem tlaku in povišani temperaturi. Omenjene 6-bromometil- in 7-bromometilklorokinazoline pripravimo z bromiranjem 6-metil-4klorokinazolina, 6-metil-2-klorokinazolina, 7-metil-4-klorokinazolina, 7-metil-2-klorokinazolina, 6-metil-2,4-diklorokinazolina in 7-metil-2,4-diklorokinazolina, tako kot je npr. opisano za pripravo 6-bromometil-4-klorokinazolina v patentni prijavi EP 566226.
Priprava imidazo[1,2-a]piridin-6-ilmetanamina je opisana v patentni prijavi VVO9961442.
Spojine s splošno formulo (I), pri katerih A pomeni skupino -CONH- vezano na Het z NH fragmentom ali skupino -CONHCH2- vezano na Het s CH2 fragmentom, pripravimo s kondenzacijo fragmenta B, ki ima na N-atom vezano zaščitno skupino P ali fragment D-CO in na dušiku sosednji ogljikov atom (ki je v večini primerov stereogeni center) vezano skupino COOH, s fragmentom Het-NH2 ali Het-CH2NH2 (Shema V, Shema VI). Kadar je na N-atom fragmenta B vezana zaščitna skupina P, le-to po kondenzaciji odstranimo in tako dobljeno spojino kondenziramo s fragmentom D-COOH (Shema VI). Za kondenzacijo lahko v obeh /
primerih uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetitaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDO), difenilfosforilazid, alkil kloroformate ipd. (glej npr. Bodanszky M., Bodanszky A. The Practice of Peptide Synthesis, Springer, Berlin, 1994). Za odstranitev zaščitnih skupin prav tako uporabimo splošno znane metode, ki so opisane npr. v knjigah: (Green T. W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P. J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994).
SHEMA V
D-CO-B(COOH) + H2N-(CH2)n-Het *- D-CO-B-CO-NH-(CH2)n-Het n=0,1
SHEMA VI
P-B(COOH) + H2N-(CH2)n-Het
P-B-CONH-(CH2)n-Het odstranitev zaščite
B-CONH-(CH2)n-Het
D-COOH
D-CO-B-CONH-(CH2)n-Het
Fragment B-A-Het, v katerem je A skupina -CH2NH- vezana na Het z NH fragmentom ali skupina -CH2NHCH2- vezana na Het s CH2 fragmentom, pripravimo z reduktivnim aminiranjem aldehidov B-CHO, v katerih je na N-atom vezana ustrezna zaščitna skupina (priprava tovrstnih spojin je opisana npr. v članku Avenell K. Y., Boyfield I., Hadley M. S. et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 1999, 9, 2715, ki jo uvedemo in po končani reakciji odstranimo na načine, ki so v stroki splošno znani (Green T. W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P. J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994), z amini Het-NH2 ali HetCH2NH2 Reduktivno aminiranje je povprečnemu strokovnjaku z izkušnjami v stroki dobro znana reakcija opisana npr. v člankih: Lane C. F., Synthesis 1975, 135.; Abdel-Magid A. F., Carson K. G., Harris B. D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849).
Fragment B-A-Het, v katerem je A skupina -CH2NHCONH- vezana na Het z -NHfragmentom pripravimo iz aldehida B-CHO, v katerem je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P, katero uvedemo in po končani reakciji odstranimo na v stroki splošno znane načine, ki ga reduktivno aminiramo z amonijevim acetatom kakor je predhodno opisano in nato s pretvorbo dobljenega amina z etil kloroformatom, ki jo izvedemo po analognem postopku kot je opisano v knjigi: Bodanszky M., Bodanszky A. The Practice of Peptide Synthesis, Springer, Berlin, 1994, 92-93. Dobimo spojino tipa P-B-CH2NHCOOEt, ki jo z običajnim postopkom pripnemo na Het-NH2. Fragment B-A-Het, v katerem je A skupina -CH2NHCH2CONH- pripeta na Het z -NH- fragmentom pripravimo po analognem postopku, le da uporabimo etil bromoacetat namesto etil kloroformata. Če pa je A skupina -CH2NHCOCH2NH- vezana na Het z -NH- fragmentom, reakcijo izvedemo tako, da najprej po običajnih postopkih izvedemo reakcijo med Het-NH2 in etil bromoacetatom, nato pa dobljeni ester Het-NH-CH2COOEt presnovimo s spojino B-CH2NH2, ki smo jo pridobili na prej opisan način v spojino B-CH2NHCOCH2NHHet . Fragmente B-A-Het, v katerih je A skupina -CH2NHCONHCH2-, -CH2NHCH2CONHCH2-, -CH2NHCOCH2NHCH2-, ki je vezana na Het s -CH2- fragmentom , pripravimo po analognih postopkih le da namesto Het-NH2 uporabimo Het-CH2NH2.
Spojine tipa NH(R3)CH(R4)COOR, ki služijo za uvedbo fragmenta B, pripravimo z reduktivnim aminiranjem aldehidov ali ketonov z estri aminokislin z uporabo natrijevega cianoborhidrida (Stanton J. L., Gruenfeld N., Babiarz J. E. et al. J. Med. Chem. 1983, 26, 1967) ali natrijevega triacetoksiborhidrida (Abdel-Magid A. F., Carson K. G., Harris B. D. et al. J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-3862). Kadar R v omenjenem tipu spojin predstavlja alkilno ali benzilno skupino, lahko z alkalno hidrolizo ali s katalitskih hidrogeniranjem dobimo ustrezne kisline.
Spojine tipa D-COOH, v katerih imajo Ra, Rb in Rd v formuli (I) definiran pomen, Rcpa pomeni skupino -NHO2S(CH2)n-W, pripravimo z reakcijo ustreznih primerno zaščitenih amino kislin s sulfonil kloridi W-(CH2)n-SO2CI tako kot je opisano npr. v članku Feng D. M., Gardell S. J., Levvis S. D. et. al. J. Med. Chem. 1997, 40, 372Q.
Spojine tipa D-COOH, v katerih imajo Ra, Rb in Rd v formuli (I) definiran pomen, Rcpa pomeni skupino N[O2S(CH2)n-W][(CH2)kCOOH], pripravimo z alkiliranjem v predhodnem odstavku opisanih sulfonamidov W-(CH2)n-SO2NHCH(Rd)COOH s halokislinami X-(CH2)n-COOH ali njihovimi estri (v primeru, da uporabimo estre, je potrebno po alkiliranju izvesti še alkalno hidrolizo).
Spojine tipa D-COOH, v katerih imajo Ra, Rb in Rd v formuli (I) definiran pomen, Rcpa pomeni eno izmed skupin
-NH(CH2)nCH3,
-NH(CH2)mOH,
-NH(CH2)kCOOH,
-NH(CH2)nCOOR5,
-NH(CH2)kCONR6R7,
-NH(CH2)kNH2,
-NHC(Ph)3, v katerih imajo k, m, n, R5, R6 in R7 zgoraj definiran pomen, pripravimo z alkiliranjem aminokislin z običajnimi alkil halidi, ustrezno zaščitenimi ω-hidroksialkil halidi, ustrezno zaščitenimi ω-aminoalkil halidi ali alkil halokarboksilati. Na ta način dobljenim produktom lahko po splošno znanih postopkih (Green T. W. Protective groups in organic synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1980; Kocienski P. J. Protecting groups, Thieme Verlag, Stuttgart, 1994) odstranimo zaščitne skupine, prav tako lahko po splošno znanih postopkih hidrolize estrov, tvorbe peptidne vezi ali aminolize estrov spojine, v katerih Rc pomeni NH(CH2)nCOOR5 pretvorimo v kisline [Rc = NH(CH2)kCOOH] in amide [Rc = NH(CH2)nCONR6R7].
Farmacevtsko sprejemljive soli spojin s formulo I pripravimo tako, da spojine I presnovimo s kislinami ali bazami v primernih organskih topilih kot je splošno znano v stroki.
BIOLOŠKI TESTI
Inhibitorska aktivnost merjena s koagulacijskimi preiskavami
1. Princip
S koagulacijskimi preiskavami (trombinskim časom, aktiviranim parcialnim tromboplastinskim časom in protrombinskim časom) merimo čas strjevanja normalne zmesne plazme v koagulacijskem aparatu po dodajanju različnih koncentracij inhibitorja. Rezultate izrazimo kot koncentracijo inhibitorja, ki čas strjevanja podaljša za dvakrat.
2. Trombinski čas
a) Princip
Določitev trombinskega časa se uporablja pri laboratorijski kontroli zdravljenja z nefrakcioniranim heparinom, pri kontroli trombolitičnega zdravljenja, pri ugotavljanju motenj nastajanja fibrina in za ugotavljanje težkih oblik pomanjkanja fibrinogena. Trombinski čas je podaljšan, kadar je koncentracija fibrinogena zmanjšana, kadar so prisotni razgradni produkti fibrinogena ali inhibitorji trombina. Postopek je tak, da plazmi dodamo trombin. Trombin pretvori fibrinogen v fibrin, ki ga ugotovimo kot nastanek strdka.
b) Reagenti
Thrombin (Thrombostat, Parke-Davies 20,000 enot/mL): goveji trombin, ki vsebuje kalcijev klorid, natrijev klorid in glicin. Trombin raztopimo v fiziološki raztopini do koncentracije 2 enoti/mL. Po 2 mL te raztopine razpipetiramo in shranimo pri -70°C. Normalna zmesna plazma: Vsaj 10 navidezno zdravim preiskovancem odvzamemo vensko kri v 0,11 mol/L raztopino natrijevega citrata (1 del natrijevega citrata in 9 delov krvi). Kri centrifugiramo takoj po odvzemu pri 2000 x g za 30 minut in 4°C . Odstranim plazmo, jo razpipetiramo po 2 mL ter hranimo pri - 70°C.
c) Potek dela • V kiveto koagulacijskega aparata (Fibrintimer, Dade/Behring), ogreto na 37°C odpipetiramo 90 μί plazme in 10 uL inhibitorja;
• Inkubiramo 5 min. pri 37°C.
• Dodamo 200 μΙ_ raztopine trombina, ogrete na 37°C.
• Po dodatku trombina vključimo merjenje časa, ki ga merimo do nastanka strdka.
d) Referenčne vrednosti
18-22 sek.
3. Aktivirani parcialni tromboplastinski čas (APTČ)
a) Princip
APTČ uporabljamo kot presejalno metodo za ugotavljanje motenj intrinzičnega dela koagulacijskega sistema. Metoda je občutljiva na pomanjkljivosti koagulacijskih faktorjev Vlil in IX in kontaktnih faktorjev. Ob pomanjkanju faktorjev ali ob prisotnosti inhibitorjev (npr. lupusnih antikoagulantov, heparina) izmerimo podaljšane APTČ. Postopamo tako, da inkubiramo plazmo z optimalno količino fosfolipidov in kontaktnega aktivatorja, da aktiviramo faktorje intrinzičnega koagulacijskega sistema. Dodajanje kalcija sproži koagualcijski proces. Merimo čas do nastanka fibrina.
b) Reagenti
Fosfolipidi z aktivatorjem (Pathromtin SL, Dade/Behring); delci silicijevega oksida, rastlinski fosfolipidi, natrijev klorid (2,4 g/L), HEPES (14,3 g/L), pH 7,6 in natrijev azid (< 1 g/L). Reagent raztopimo v količini destilirane vode, ki je označena na nalepki. Pred uporabo mora imeti sobno temperaturo in mora biti dobro premešan. Reagent se posede v nekaj dneh, zato ga je treba pred ponovno uporabo pretresti.
Kalcijev klorid'. 0,025 mol/L
Normalna zmesna plazma: Vsaj 10 navidezno zdravim preiskovancem odvzamemo vensko kri v 0,11 mol/L natrijev citrat (1 del natrijevega citrata in 9 delov krvi). Kri centrifugiramo takoj po odvzemu pri 2000 x g in 4°C 30 minut. Odstranim plazmo, jo razpipetiramo po 2 mL ter hranimo pri - 70°C.
c) Potek dela • V kiveto koagulacijskega aparata (Fibrintimer, Dade/Behring), ogreto na 37°C, odpipetiramo 90 μι. plazme in 10 uL inhibitorja;
• Inkubiramo 5 min. pri 37 °C;
• Dodamo 100 uL fosfolipidov z aktivatorjem;
• Inkubiramo 2 min. pri 37 °C;
• Dodamo 100 pL kalcijevega klorida pri 37°C;
• Po dodatku kalcijevega klorida, začnemo meriti čas do nastanka strdka.
d) Referenčne vrednosti
- 36 sekund
4. Protrombinski čas
a) Princip
Protrombinski čas je hitra in občutljiva presejalna metoda za ugotavljanje motenj v ekstrinzičnem delu koagulacijskega sistema (faktorji II, V, VII in X). Zaradi visoke občutljivosti na te koagulacijske faktorje je metoda posebno primerena za spremljanje oralnega antikoagulacijskega zdravljenja, za prepoznavanje dednih in pridobljenih motenj teh faktorjev in za preverjanje sintetične sposobnosti jeter. Protrombinski čas je podaljšan ob pomanjkanju koagulacijskih faktorjev ter ob prisotnosti inhibitorjev. Postopamo tako, da plazmi dodamo optimalno količino tromboplastina in kalcija ter merimo čas do nastanka strdka.
b) Reagenti
Tromboplastin (Thromborel S, Dade/Behring): človeški tromboplastin iz posteljice s kalcijevim kloridom in stabilizatorji. Tromboplastin raztopimo v količini destilirane vode, ki je označena na nalepki in ga pred uporabo ogrejemo na 37° C. Pred uporabo je treba reagent inkubirati pri tej temperaturi vsaj 30 minut. Reagent je stabilen v neodprtih stekleničkah pri 2-8°C do datuma, ki je označen na nalepki. Raztopljen reagent je stabilen 5 dni pri 2-8°C in 24 ur pri 37°C.
Normalna zmesna plazma'. Vsaj 10 navidezno zdravim preiskovancem odvzamemo vensko kri v 0,11 mol/L natrijev citrat (1 del natrijevega citrata in 9 delov krvi). Kri centrifugiramo takoj po odvzemu pri 2000 x g in 4°C 30 minut. Plazmo odstranimo, jo razpipetiramo po 2 mL ter hranimo pri - 70°C.
c) Potek dela • V kiveto koagulacijskega aparata (Fibrintimer, Dade/Behring), ogreto na 37°C odpipetiramo 90 μΙ_ plazme in 10 uL inhibitorja;
• Inkubiramo 5 min. pri 37°C;
• Dodamo 200 μΙ_ tromboplastina, ogretega na 37°C;
• Po dodatku tromboplastina začnemo meriti čas do nastanka strdka.
d) Referenčne vrednosti
10-13sek
OKRAJŠAVE
Ac2O acetanhidrid
Ala alanin
D-(Chx)-Ala D-cikloheksilalanin
D-3,3-(Ph)2-Ala D-3,3-difenilalanin
Boc terc-butiloksikarbonil
Chx cikloheksil
DME dimetoksietan
DMF /V,/V-dimetilformamid
DPPA difenilfosforilazid
EDC /V-(3-dimetilaminopropil)-/V-etil-karbodiimid hidroklorid
Et3N trietilamin
EtOH etanol
Gly glicin
HOBt /V-hidroksibenzotriazol hidrat
MeOH metanol
Pd-C paladij na ogljiku
Phe fenilalanin
D-3,4-CI2-Phe D-3,4-diklorofenilalanin
Pro prolin
Z-L-Pro N-benziloksikarbonil-L-prolin
THF tetrahidrofuran
TOSMIC tozilmetilizocianid
Izum pojasnjujejo, vendar nikakor ne omejujejo naslednji izvedbeni primeri:
PRIMER 1
Metil(2S)-2-({(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}amino)propanoat
Raztopini /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-OH (1.56 g, 5.0 mmol) in metilnega estra L-Ala hidroklorida (0.628 g, 4.5 mmol) v 11 mL DMF dodamo HOBt (0.770 g, 5.0 mmol). Z Nmetilmorfolinom uravnamo pH raztopine na 8 in dodamo EDC (0.978 g, 5.0 mmol). Reakcijsko zmes mešamo pri sobni temperaturi čez noč. Uparimo topilo, preostanek prelijemo z etilacetatom in nasičeno raztopino NaHCO3. Organsko fazo spiramo z nasičeno raztopino NaCI, sušimo z MgSO4, filtriramo ter topilo uparimo pod znižanim tlakom. Dobimo 1.73 g trdne spojine rumene barve (95%).
IR (KBr): v= 3281, 2952, 1736, 1648, 1543, 1456, 1317, 1221, 1151, 1125, 952, 790, 749, 698, 548 cm'1.
MS (ΕΙ): m/z (%) 405 (MH+, 47), 91 (100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.19 (d, 3H, J=7.16 Hz, AlaCH3), 2.80 (2.92) (ABXsistem, 2H, Jab=13.56, Jax=9-04, Jbx=6.03, PheCH2), 3.58 (s, 3H, COOCH3), 4.01 (ABsistem, 2H, JAB=13.56 Hz, CH2Ph), 4.15-4.36 (m, 2H, AlaCH, PheCH), 7.19-7.35 (m, 10H, 2 Ph), 7.67 (d, 1H, J= 9.04 Hz, NH), 8.61 (d, 1H, J= 7.16 Hz, NH).
PRIMER 2 (2S)-2-({(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}amino)propanojska kislina
/V-(Benzilsulfonil)-D-Phe-L-Ala-OMe (1.70 g, 4.21 mmol) raztopimo v 100 mL MeOH/H2O=1/1 in po kapljicah dodajamo 2.5 mL 2.2 M raztopine LiOH, da naravnamo pH na 12-13. Pustimo mešati čez noč. pH reakcijske mešanice nato z razredčeno raztopino KHSO4 naravnamo na
7. Uparimo metanol, preostalo vodno fazo nakisamo s KHSO4 do pH=2. Ekstrahiramo z etilacetatom, speremo z nasičeno raztopino NaCI, sušimo z Na2SO4, filtriramo, uparimo pod znižanim tlakom. Dobimo 0.950 g trdne spojine svetlo rumene barve (58%).
IR (KBr): v= 3321, 2930, 1734, 1654, 1541, 1497, 1456, 1321, 1152, 1031, 950, 783, 747, 699, 621, 543 cm'1.
MS (ΕΙ): m/z(%) 391 (M+, 100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.15-1.21 (m, 3H, AlaCH3), 2.80 (2.91) (ABXsistem, 2H, JAX=9.04, JBx=6.03, Jab=1 3.56, PheCH2), 4.03 (ABsistem, 2H, JAB=13.56 Hz, CH2Ph), 4.17-4.35 (m, 2H, AlaCH, PheCH), 7.20-7.33 (m,10H, 2 Ph), 7.65 (d, J= 9.04 Hz, 1H, NH), 8.50 (d, J= 7.53 Hz, 1H, NH), 12.62 (s, 1H, COOH).
PRIMER 3
Metil (2S)-1 -[2-(triti la m i no)aceti l]-2-pi rolid i n karboksi lat
N.
Raztopini /\/-(tritil)-Gly (3.11 g, 10 mmol) in L-Pro-OMe (1.16 g, 9.0 mmol) v 22.5 mL DMF dodamo HOBt (1.55 g, 10 mmol). Z /V-metilmorfolinom uravnamo pH raztopine na 8 in dodamo EDC (1.96 g, 10.0 mmol). Reakcijsko zmes mešamo pri sobni temperaturi čez noč. Uparimo topilo, preostanek prelijemo z etilacetatom in nasičeno raztopino NaHCO3. Organsko fazo spiramo z nasičeno raztopino NaCI, sušimo z MgSO4, filtriramo ter topilo uparimo pod znižanim tlakom. Dobimo 3.81 g trdne spojine bele barve (91%).
MS (ΕΙ): m/z (%) 428 (M+, 65), 243 (100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.70-2.15 (2*m, 4H, ProCH2p, ProCH2y), 2.90-3.40 (2*m, 4H, GlyCH2, ProCH26), 3.59 (s, 3H, CH3) 4.1-4.17 (m, 1H, ProCHct), 7.19-7.42 (m, 16H, 3x(tritil)Ph, GlyNH).
*zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina
PRIMER 4 (2S)-1-[2-(Tritilamino)acetil]tetrahidro-1H-2-pirolkarboksilna kislina
Metil /V-(tritil)-Gly-l_-Pro-OMe (3.0 g, 7.0 mmol) raztopimo v 200 mL MeOH, dodamo 10 ml vode in po kapljicah 4.1 mL 2.2 M raztopine LiOH da naravnamo pH na 12-13. Pustimo mešati čez noč; pH reakcijske mešanice nato z razredčeno raztopino KHSO4 naravnamo na 7. Metanol uparimo pod znižanim tlakom ter vodno fazo nakisamo s KHSO4 do pH=5. Ekstrahiramo z etilacetatom, speremo z nasičeno raztopino NaCI, sušimo z Na2SO4, filtriramo in uparimo pod znižanim tlakom. Dobimo 2.41 g kristalinične spojine bele barve (83%).
Tališče: 80-83°C.
IR (KBr): v= 3416, 3057, 1734, 1645, 1447, 1194, 1034, 751, 703 cm·1.
MS: m/z (%) 413 (MIT, 58), 243 (100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.90-2.15 (2*m, 4H, ProCH2p, ProCH2y), 2.8-3.4 (2*m, 4H, GlyCH2, ProCH25), 4.1-4.17 (m, 1H, ProCHa), 7.19-7.42 (m, 16H, 3x(tritil)Ph, GlyNH).
*zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina
PRIMER 5 (+)-2,6-Diamino-5,6,7,8-tetrahidrokinazolin
1. Sinteza (±)-N-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)acetamida
V raztopino natrijevega etoksida (437 mg, 19 mmmol) v 50 mL absolutnega etanola dodamo gvanidin hidroklorid (1.82 g, 19 mmol). Po 30 minutnem mešanju dodamo raztopino /V-[3[(dimetilamino)metiliden]-4-oksocikloheksil]acetamida (4.0 g, 19 mmol) v absolutnem etanolu in reakcijsko zmes refluktiramo v atmosferi argona 3 ure. Oborino odfiltriramo in dobimo 3.38 g (87%) bele trdne spojine.
Tališče: 256-258°C.
IR (KBr): v= 3398, 3319, 3212, 3050, 2944, 1647, 1625, 1596, 1558, 1477, 1456, 1375, 1287, 1192, 1099, 1047, 868, 793 cm1.
MS (FAB): m/z (%) 207 (MH+, 40), 147 (100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6); δ 1.60-1.73 (m, 1H, CW2), 1.80 (s, 3H, NHCOC/73), 1.83-1.94 (m, 1H, CW2), 2.33-2.41 (m, 1H, CH2), 2.60-2.77 (m, 3H, CW2, CH2), 3.82-3.96 (m, 1H, 6-CH), 6.24 (s, 2H, 2-NH2), 7.88 (d, 1H, J=6.78 Hz, NHCO), 7.93 (s, 1H, 4-CH).
Elementna analiza za C10H14N4O:
Izračunana: 58.24% C, 6.84% H, 27.18% N.
Ugotovljena: 57.88% C, 6.77% H, 26.91% N.
2. Sinteza (±)- 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidrokinazolina
Raztopino A/-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)acetamida (3.0 g, 14.6 mmol) in natrijevega hidroksida (30 g, 0.75 mol) v zmesi vode (30 mL) in metanola (90 ml_) refluktiramo 16 ur. Dodamo vodo in ekstrahiramo z diklorometanom. Združene organske faze nato spiramo z brinom, sušimo z Na2SO4 in topilo uparimo pod znižanim tlakom. Dobimo 1.40 g (58 %) bele trdne spojine.
Tališče: 178-181 °C.
IR (KBr): v= 3412, 1652, 1602, 1558, 1487, 1428, 1362, 1258, 1209, 1103, 1060, 1013, 952, 805, 786, 752, 719 cm’1.
MS (ΕΙ): m/z(%) 164 (M+, 100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.41-1.55 (m, 1H, CH2), 1.80-1.92 (m, 1H, CW2), 2.16-2.24 (m, 1H, CH2), 2.53-2.69 (m, 3H, CW2, CW2), 2.91-3.02 (m, 1H, 6-CH), 6.18 (s, 2H, 2-NH2), 7.90 (s, 1H,4-CH).
Elementna analiza za C8H12N4:
Izračunano: 58.51% C, 7.37% H, 34.12%N.
Ugotovljeno: 58.09% C, 7.11 % H, 33.91% N.
PRIMER 6 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/V-(benzilsulfonil)-D-fenilalanil]-L-prolinamid
NH.
Raztopini A/-(benzilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH (219 mg, 0.53 mmol) in 2,6-diamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolina (82 mg, 0.50 mmol) v 1.1 ml_ DMF dodamo HOBt (80 mg, 0.53 mmol). Z /V-metilmorfolinom uravnamo pH raztopine na 8 (z vlažnim pH papirčkom). Nato dodamo EDC (101 mg, 0.53 mmol) in reakcijsko zmes mešamo pri sobni temperaturi čez noč. Dodamo etilacetat (30 ml_) in organsko fazo spiramo z nasičeno vodno raztopino NaHCO3 (3 χ 10 mL), nasičeno vodno raztopino NaCI (3 χ 10 mL), sušimo z Mg SO4 ter topilo uparimo pod znižanim tlakom. Po čiščenju s kolonsko kromatografijo (Florisil, topilo za spiranje CHCl3/3-5% MeOH) dobimo 245 mg (87 %) bele trdne spojine.
Tališče: 117-120°C.
IR (KBr): v= 3442, 1636, 1557, 1456, 1318, 1200, 1152, 1125, 945, 784, 699, 545 cm1.
MS (FAB): m/z (%) 563 (MH+, 53).
PRIMER 7 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/V-Boc-D-fenilalanil]- L-prolinamid
Spojino pripravimo iz Boc-D-Phe-L-Pro-OH in 2,6-diamino-5,6,7,8-tetrahidrokinazolina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 77%
Tališče: 110-113°C.
IR (KBr): v= 3477, 1648, 1541, 1457, 1367, 1252, 1166, 750, 701 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 509 (MH+, 31).
PRIMER 8
A/-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[D-fenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
HCI
V raztopino /V-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/V-Boc-D-fenilalanil]-L-prolin-amida (240 mg, 0.47 mmol) v 15 ml_ ledocta uvajamo HCI 50 minut pri sobni temperaturi. Ocetno kislino uparimo pod znižanim tlakom in preostanek večkrat prelijemo z etrom. Dobimo 141 mg (62%) bele trdne spojine v obliki dihidroklorida.
Tališče: 205-208°C.
IR (KBr): v= 3421, 1654, 1541, 1456, 1362, 1202, 948, 764, 704 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 409 (MH+, 37).
PRIMER 9
A/-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/7-indazol-5-il)-[/V-(benzilsulfonil)-D-fenilalanil]-L-prolinamid
NH
N
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH in 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/7indazol dihidroklorida po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 78%
Tališče: 114-116°C.
IR (KBr): v= 3482, 1651, 1541, 1456, 1318, 1154, 955, 700, 544 cm'1. MS (FAB): m/z (%) 536 (MH+, 49).
PRIMER 10
A/-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/-/-indazol-5-il)-[A/-Boc-D-fenilalanil]- L-prolinamid
Spojino pripravimo iz Boc-D-Phe-L-Pro-OH ter 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/7-indazol dihidroklorida po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 80%
Tališče: 108-110°C.
IR (KBr); v= 3464, 1636, 1540, 1456, 1367, 1252, 1165, 1089, 957, 749, 702 cm1. MS (FAB): m/z (%) 482 (MH+, 66).
PRIMER 11
A/-(4,5,6,7-Tetrahidro-2H-indazol-5-iI)-[D-fenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
Spojino pripravimo iz /V-(4,5,6,7-tetrahidro-2/-/-indazol-5-il)-[/\/-Boc-D-fenilalanil]-Lprolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 77%
Tališče: 203-206°C.
IR (KBr): v= 3417, 1639, 1453, 1362, 1199, 1083, 919, 761, 703 cm·1.
MS (FAB): m/z (%) 382(MH+, 100).
PRIMER 12 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinilmetil)-[/V-(benzilsulfonil)-D-fenilalanil]-L-prolinamid
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH in 2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6kinazolinmetilamina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 87%
Tališče: 118-121°C.
IR (KBr): v= 3464, 1636, 1558, 1541, 1457, 1318, 1125, 952, 699 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 577(MH+, 47).
PRIMER 13 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/\/-Boc-L-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid
nh2
Spojino pripravimo iz Boc-L-3,3-(Ph)2-Ala-L-Pro-OH in 2,6-diamino-5,6,7,8 tetrahidrokinazolina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina. Izkoristek: 98%
Tališče: 127-130°C.
IR (KBr): v 3418, 1649, 1541, 1457, 1367, 1250, 1166, 864, 752, 701 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 585 (MH+, 52).
PRIMER 14 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/\/-Boc-D-3,4-diklorofenilalanil]- L-prolinamid
Spojino pripravimo iz Boc-D-3,4-CI2-Phe-L-Pro-OH in 2,6-diamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 94%
Tališče: 114-117°C.
IR (KBr): v 3447, 2977, 1648, 1557, 1472, 1251, 1165, 1029, 667 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 577 (MH+, 95).
PRIMER 15 /V-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/7-indazol-5-il)-[/\/-Boc-L-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid
ch3
Spojino pripravimo iz Boc-L-3,3-(Ph)2-Ala-L-Pro-OH in 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/-/-indazol dihidroklorida po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 73 %
Tališče: 127-130°C.
IR (KBr): v 3448, 1649, 1540, 1454, 1367, 1250, 1166, 1092, 957, 861, 751,701 cm'1. MS (FAB): m/z (%) 558 (MH+, 60).
PRIMER 16 /V-(4,5,6,7-Tetrahidro-2H-indazol-5-il)-[/\/-Boc-D-3,4-diklorofenilalanil]- L-prolinamid
N
O
Spojino pripravimo iz Boc-D-3,4-CI2-Phe-L-Pro-OH in 5-amino-4,5,6,7-tetrahidro-2/-/-indazol dihidroklorida po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 54%
Tališče: 116-119°C.
IR (KBr): v 3419, 2976, 1648, 1540, 1455, 1367, 1251, 1165, 1029, 957, 753, 599 cm’1. MS (FAB): m/z (%) 550 (MH+, 40).
PRIMER 17
A/-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[L-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
Spojino pripravimo iz A/-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/\/-Boc-L-3,3-difenilalanil]L-prolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 98%
Tališče: 212-215°C.
IR (KBr): v 3415, 1645, 1558, 1456, 1397, 1161,617 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 485 (MH+, 64).
PRIMER 18 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[D-3,4-diklorofenilalanil]-L-prolinamid dihidroklorid ci
HCI
Spojino pripravimo A/-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/\/-Boc-D-3,4-dikloro fenilalanil]-L-prolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina ’ obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 93%
Tališče: 201-204°C.
IR (KBr): v 3417, 1650, 1541, 1472, 1396, 1241, 1032, 828, 593 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 477 (MH+, 50).
PRIMER 19 /V-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/-/-indazol-5-il)-[L-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
HCI
N
Spojino pripravimo iz /V-(4,5,6,7-tetrahidro-2/7-indazol-5-il)-[/\/-Boc-L-3,3-difenilalanil]-Lprolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 95%
Tališče: 195-198°C.
IR (KBr): v 3415, 2930, 1649, 1541, 1453, 1341, 1237, 1084, 753, 704 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 458 (MH+, 87).
PRIMER 20 /V-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/7-indazol-5-il)-[D-3,4-diklorofenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
Cl
H
HCI
Spojino pripravimo iz A/-(4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazol-5-il)-[A/-Boc-D-3,4-diklorofenil-alanil]L-prolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 80%
Tališče: 199-202°C.
IR (KBr): v 3417, 1645, 1541, 1472, 1263, 1134, 1032, 598 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 450 (MH+, 39).
PRIMER 21 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/V-(benzilsulfonil)-D-cikloheksilalanil]-Lprolinamid
O:
NH
Spojino pripravimo iz A/-(benzilsulfonil)-D-(cikloheksil)-Ala-L-Pro-OH in 2,6-diamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 53%
Tališče: 114-117°C.
IR (KBr): v 3415, 2925, 1641, 1541, 1457, 1149, 615 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 569 (MH+, 55).
PRIMER 22
A/-(4,5,6,7-Tetrahidro-2/-/-indazol-5-il)-[A/-(benzilsulfonil)-D-cikloheksilalanil]-L-prolinamid
Η
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-(cikloheksil)-Ala-L-Pro-OH in 5-amino-4,5,6,7tetrahidro-2/7-indazol dihidroklorida po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 81%
Tališče: 106-109°C.
IR (KBr): v 3429, 2925, 2851, 1642, 1544, 1448, 1319, 1154, 954, 786, 698, 545 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 542 (MH+, 46).
PRIMER 23 /V-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/\/-Boc-D-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid
Spojino pripravimo iz Boc-D-3,3-(Ph)2-Ala-L-Pro-OH in 2,6-diamino-5,6,7,8tetrahidrokinazolina po postopku, opisanem v primeru 6. Produkt je bela trdna spojina.
Izkoristek: 81%
Tališče: 128-131°C.
IR (KBr): v= 3414, 2974, 1639, 1548, 1452, 1366, 1253, 1166, 1017, 864, 755, 701, 604 cm'1 MS (FAB): m/z (%) 585 (MH+, 94).
PRIMER 24
A/-(2-Amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[D-3,3-difenilalanil]- L-prolinamid dihidroklorid
NH2HCI
Spojino pripravimo iz /V-(2-amino-5,6,7,8-tetrahidro-6-kinazolinil)-[/V-Boc-D-3,3-difenilalanil]L-prolinamida po postopku, opisanem v primeru 8. Produkt je bela trdna spojina v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 86%
Tališče: 199-202°C.
IR (KBr): v= 3274, 1655, 1527,1449, 1350, 1244, 1102, 917, 755, 704, 595 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 485 (MH+, 100).
PRIMER 25 terc-Butil-(1/?)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6il)amino]karbonil}pirolidinil)-1-benzil-2-oksoetilkarbamat
Raztopini Boc-D-Phe-L-Pro-OH (580 mg, 1.60 mmol) in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol2,6-diamin dihidrobromida (482 mg, 1.46 mmol) v 3.7 mL /V,/\/-dimetilformamida dodamo HOBt (247 mg, 1.60 mmol). Z /V-metilmorfolinom uravnamo pH raztopine na 8 in dodamo EDC (313 mg, 1.60 mmol). Reakcijsko zmes mešamo pri sobni temperaturi čez noč. Uparimo topilo, preostanek prelijemo z etilacetatom in nasičeno raztopino NaHCO3. Organsko fazo spiramo z nasičeno raztopino NaCI, sušimo z MgSO4, filtriramo ter topilo uparimo pod znižanim tlakom. Po čiščenju s kolonsko kromatografijo (silikagel, CHCI3/MeOH=9/1) dobimo 480 mg svetlo rjave kristalinične spojine spojine (64%).
Tališče: 120-123°C.
IR (KBr): v= 3418, 2975, 1646, 1523, 1448, 1367, 1252, 1167, 860, 752, 702 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 514 (MH+, 59/2.50), 70 (100).
PRIMER 26 (2S)-1-[(2R)-2-Amino-3-fenilpropanoil]-/V-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2pirolidinkarboksamid dihidroklorid
V raztopino A/-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-/V-Boc-D-fenilalanil-Lprolinamida (360 mg, 0.70 mmol) v 10 mL ledocta uvajamo HCI plin pri sobni temperaturi.
Ledoct uparimo in preostanek večkrat prelijemo z etrom. Dobimo 280 mg svetlo rumene trdne spojine (82%).
Tališče: 225-228°C.
IR (KBr): v= 3418, 2970, 1643, 1538, 1454, 1361, 1202, 762, 704 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 414 (MH+, 100).
PRIMER 27 (2S)-/V-(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3fenilpropanoil}-2-pirolidinkarboksamid
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-L-Pro-OH ter 4,5,6,7-tetrahidro-1,3benzotiazol-2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25. Produkt je trdna spojina svetlo rumene barve.
Izkoristek: 49%.
Tališče: 126-129°C.
IR (KBr); v= 3362, 3192, 2926, 1646, 1522, 1454, 1315, 1152, 1124, 944, 751,698, 547 cm'1 MS (ΕΙ): m/z (%) 567 (M+, 27), 371 (100).
MS (FAB): m/z (%) 568 (MH+, 100).
MS (HR): izračunano za C28H33N5O4S2: 567.197399; izmerjeno 567.195929.
PRIMER 28 (2S)-A/-(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3cikloheksilpropanoil}-2-pirolidinkarboksamid
Spojino pripravimo iz A/-benzilsulfonil-(p-cikloheksil)-D-Ala-L-Pro-OH in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3benzotiazol-2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25. Produkt je trdna kristalinična spojina svetlo rjave barve.
Izkoristek: 54%.
Tališče: 127-130°C.
IR (KBr): v= 3357, 2924, 2848, 1638, 1523, 1448, 1311, 1125, 754, 697, 546 cm'1.
MS: m/z (%) 574 (MH+, 100).
PRIMER 29 (2S)-/V-(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3(3,4-diklorofenil)propanoil}-2-pirolidinkarboksamid
Spojino pripravimo iz /V-benzilsulfonil-(3,4-dikloro)D-Phe-L-Pro-OH in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3benzotiazol-2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25.
Dobimo trdno spojino.
Izkoristek: 15%.
IR (KBr); v= 3326, 1654, 1522, 1448, 1317, 1152, 1128, 1031, 697, 544 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 636 (MH+, 100).
PRIMER 30 (2S)-/V-(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(naftilsulfonil)amino]-3fenilpropanoil}-2-pirolidinkarboksamid (2S)-1-[(2/?)-2-Amino-3-fenilpropanoil]-/V-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-2pirolidinkarboksamid dihidroklorid (0.38 mmol, 185 mg) v 6 ml_ diklormetana prepihamo z argonom in dodamo najprej 2-naftalensulfonilklorid (0.38 mmol, 84 mg) in nato trietilamin (1.52 mmol, 0.21 ml_). Mešamo pri 0°C 1 uro. Čez noč reakcijsko zmes pustimo pri sobni temperaturi. Uparimo diklormetan, preostanek prelijemo z etilacetatom, dodamo diklormetan in ekstrahiramo z vodo, z nasičeno raztopino NaHCO3 in z nasičeno raztopino NaCI. Organsko fazo sušimo z magnezijevim sulfatom, filtriramo, uparimo pod znižanim tlakom. Po čiščenju s kolonsko kromatografijo (silikagel, CHCIs/MeOH = 9/1) dobimo 70 mg trdne spojine umazano bele barve (31%).
Tališče: 128-131 °C.
IR (KBr): v= 3363, 1637, 1522, 1438, 1308, 1153, 1074, 962, 861, 816, 750, 656, 547, 479 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 604 (MH+, 100).
PRIMER 31 (2/?)-/V-{2-[(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oksoetil}-243 [(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamid
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-Gly-OH in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo belo trdno spojino.
Izkoristek: 37%.
Tališče: 119-122°C.
IR (KBr): v= 3346, 2926, 1655, 1522, 1455, 1371, 1314, 1233, 1126, 956, 750, 698, 543, 487 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 528 (MIT, 88), 91 (100).
PRIMER 32 (2R)-/V-{(1S)-2-[(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-1-metil-2-oksoetil}-2[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanamid
X-,
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-L-Ala-OH in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo belo trdno spojino.
Izkoristek: 37%.
Tališče: 122-125°C.
IR (KBr): v= 3314, 3200, 2929, 1654, 1523, 1455, 1371, 1315, 1231, 1152, 1126, 952, 750, 698, 545 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 542 (MH+, 100).
PRIMER 33 (2S)-/V-(2-Amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)-1-[2-(tritilamino)acetil]-2pirolidinkarboksamid
Spojino pripravimo iz (2S)-1-[2-(tritilamino)acetil]tetrahidro-1 Η-2-pirolkarboksilne kisline in 4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-2,6-diamin dihidrobromida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo svetlo rumeno kristalinično trdno spojino.
Izkoristek: 36%.
Tališče: 125-128°C.
IR (KBr): v= 3410, 2926, 1660, 1640, 1529, 1444, 1411, 1306, 1206, 1031, 901, 748, 104, 535 cm1.
MS (FAB): m/z (%) 566 (MH+, 66/10), 243 (100).
PRIMER 34
1,1 -Dimetiletil (1/?)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]karbonil}pirolidinil)-1-[(3,4-diklorofenilmetil)]-2-oksoetilkarbamat
Spojino pripravimo iz Boc-D-3,4-CI2-Phe-L-Pro-OH in 2,6-diamino-4,5,6,7tetrahidrobenzotiazol dibromida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo svetlo rumeno trdno spojino.
Izkoristek: 77%.
Tališče: 116-119°C.
IR (KBr): v= 3409, 2977, 1637, 1529, 1444, 1367, 1250, 1165, 1029, 753, 679 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 582 (MH+, 49), 70 (100).
PRIMER 35
1,1 -Dimetiletil (1 S)-2-((2S)-2-{[(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il)amino]karbonil}pirolidinil)-1-(difenilmetil)-2-oksoetilkarbamat
Spojino pripravimo iz Boc-L-3,3-(Ph)2-Ala-L-Pro-OH in 2,6-diamino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiazol dibromida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo svetlo rumeno trdno spojino.
Izkoristek: 62%.
Tališče: 127-130°C.
IR (KBr): v= 3305, 2977, 1634, 1526, 1443, 1368, 1249, 1165, 1018, 862, 753, 700 cm’1. MS (FAB): m/z (%) 590 (MH+, 35), 70 (100).
PRIMER 36 (2S)-1-[(2/?)-2-amino-3-(3,4-diklorofenil)propanoil]-/V-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3benzotiazol-6-il)-2-pirolidinkarboksamid dihidroklorid ci
Cl
Spojino pripravimo iz 2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiazolil /V-Boc-D-3,4-diklorofenilalanil-L prolinamida po postopku opisanem v primeru 26. Produkt je svetlo rumena trdna spojina ’ obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 96%.
Tališče: 166-169°C.
IR (KBr); v= 2973, 1643, 1469, 1358, 1261, 1132, 1032, 878, 826, 713, 586 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 482 (MH+, 100).
PRIMER 37 (2S)-1-[(2S)-2-amino-3,3-difenilpropanoil]-/\/-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidro-1,3-benzotiazol-6-il) 2-pirolidinkarboksamid dihidroklorid
Spojino pripravimo iz /V-(2-amino-4,5,6,7-tetrahidrobenzotiazolil)-[A/-Boc-L-3,3-difenilalanil]-Lprolinamida po postopku opisanem v primeru 26. Produkt je trdna spojina umazano bele barve v obliki dihidroklorida.
Izkoristek: 97%.
Tališče: 155-158°C.
IR (KBr): v= 3390, 2974,1641, 1449, 1347, 1242, 1112, 913, 753, 704 cm1.
MS (FAB): m/z (%) 490 (MH+, 73), 149 (100).
PRIMER 38 (2S)-/V-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)-1-{(2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-2pirolidinkarboksamid
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-OH in /V-(2-amino-1,3-benzotiazolil-6-il)pirolidinkarboksamid dihidroklorida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo kristalinično spojino svetlo rumene barve.
Izkoristek: 33%.
Tališče: 130-133°C.
IR (KBr): v= 3314, 1637, 1526, 1466, 1407, 1307, 1227, 1150, 1123, 934, 819, 748, 698, 544,488 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 564 (MIT, 100).
PRIMER 39 (2R)-A/-{2-[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]-2-oksoetil}-2-[(benzilsulfonil)amino]-3fenilpropanamid
Spojino pripravimo iz /V-(benzilsulfonil)-D-Phe-OH in 2-amino-/\/-(2-amino-1,3-benzotiazol-6il)acetamid dihidroklorida po postopku opisanem v primeru 25. Dobimo intenzivno rumeno obarvano trdno spojino.
Izkoristek: 29%.
Tališče: 127-130°C.
IR (KBr); v= 3351, 1639, 1530, 1466, 1408, 1307, 1123, 958, 818, 697, 539 cm'1.
MS: m/z(%) 524 (MIT, 100).
PRIMER 40
Benzil (2S)-2-{[(4-amino-6-kinazolinil)amino]karbonil}-1-pirolidinkarboksilat
Z-L-Pro-OH (1.61 g, 7.5 mmol) raztopimo v 6 ml Ν,Ν-dimetilformamida, dodamo etilkloroformat (0.79 mL, 8.25 mmol) in trietilamin (1.15 mL, 8.25 mmol). Zmes nekaj ur pustimo na ledeni kopeli pri -15°C, da na TLC opazimo mešani anhidrid in nato dodamo 4,6kinazolindiamin (1.2 g, 7.5 mmol). Čez noč postavimo v zmrzovalnik. Po končani reakciji odnučamo oborino, uparimo Ν,Ν-dimetilformamid. Dobimo rumeno rjavo olje, ki ga očistimo s kolonsko kromatografijo na silikagelu. Mobilna faza: kloroform/metanol=9/1. Produkt je rjavkasto olje.
Izkoristek: 47% 1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.93-1.97; 2.09-2.27 (2*m, 4H, ProCH2p, ProCH^), 3.463.52 (m, 2H, ProOH2č), 4.40-4.46 (m, 1H, ProCHa), 4.95-5.15 (m(2*AB-sistem), 2H, (Z)PhCH2)*, 7.07-7.15; 7.23-7.40; 7.50-7.80; 8.30-8.39 (4*m, 11 H, (Z)PhCH-(2-6), KinCH(2,5,7,8), KinNH2-4), 10.28 (s, 1H, KinNHCO).
zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina.
Elementna analiza za C2iH21N5O3*2.25H2O:
Izračunano: 58.40% C, 5.38% H, 16.22% N.
Ugotovljeno: 58.29% C, 5.88% H, 15.98% N.
PRIMER 41 (2S)-N-(4-Amino-6-kinazolinil)-2-pirolidinkarboksamid
Benzil (2S)-2-{[(4-amino-6-kinazolinil)amino]karbonil}-1-pirolidinkarboksilata (1.97 g, 5 mmol) raztopimo v 100 mL metanola in dodamo 0.2 g Pd-C (10%) in uvajamo vodik pri tlaku cca. 40 psi (2.76 bar). Katalizator s filtriranjem odstranimo in topilo odparimo. Produkt je rjavkasto olje.
MS (ΕΙ): m/z (%) 257 (M+, 50), 70 (100).
MS (HR): izračunano za C13H15N5O: 257.127660; izmerjeno: 257.127060.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.60-1.70; 1.80-1.90; 2.00-2.15 (3*m, 4H, ProCH2p, ProCH2Y), 2.90-3.00; 3.45-3.55 (2*m, 2H, ProCH2č), 3.70-3.80 (m, 1H, ProCHct), 7.37 (s, 2H, KinNH2-4), 7.63 (d, 1H, J=9.0 Hz, KinCH-8), 8.12 (dd, 1H, J-,=9.0 Hz, J2=2.2 Hz, KinCH-7), 8.24 (d, 1H, J=2.2 Hz, KinCH-5), 8.31 (s, 1H, KinCH-2), 10.18 (s, 1H, KinNHCO).
Elementna analiza za C13H15N5O* H2O*MeOH:
Izračunano: 54.71% C, 6.89% H, 22.79% N.
Ugotovljeno: 54.72% C, 6.77% H, 22.79% N.
PRIMER 42 (2S)-/V-(4-Amino-6-kinazolinil)-1 -[(tritilamino)acetil]-2-pirolidinkarboksamid
Raztopini /V-tritilglicina (1.58 g, 5.0 mmol) in (2S)-/V-(4-amino-6-kinazolinil)-2pirolidinkarboksamida (1.15 g, 4.5 mmol) v 11 ml /V,/V-dimetilformamida dodamo pri 0 °C HOBt (0.770 g, 5.0 mmol). Z /V-metilmorfolinom uravnamo pH raztopine na 8 in po 10 minutah dodamo EDC (0.978 g, 5.0 mmol). Reakcijsko zmes mešamo 1 uro pri 0 °C nato pri sobni temperaturi čez noč. Uparimo topilo, spojino očistimo s kolonsko kromatografijo. Mobilna faza: kloroform/metanol=9/1.
Izkoristek: 42%.
Tališče: >250°C.
MS (ΕΙ): m/z (%) 557 (MH+, 25/10), 243 (100). MS (FAB); m/z (%) 556 (M+, 20/400).
1H-NMR* (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.75-2.05 (2*m, 4H, ProCH2p, ProCH2Y), 2.85-3.20; 3.403.50; 4.20-4.45 (7*m, 5H, ProCH26, ProCHa, GlyCH2), 7.00-7.40 (4*m, 16H, 3*(tritil)PhCH(2-6), KinCH-5), 7.50-7.66 (2*s+2*d (J=9.0 Hz), 3H, KinCH-8, KinNH2-4), 7.73 (dd, 1H, Ji=9.0 Hz, J2=2.2 Hz, KinCH-7), 8.28(8.30)* (2*s, 1H, KinCH-2), 8.33-8.35(m, 1H, GlyNH), 10.17(10.19)* (2*s, 1H, KinNHCO).
*zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina.
*podan premik za drug konformer ali drug konformer ni viden.
PRIMER 43 ferc-Butil 2-[(4-amino-6-kinazolinil)amino]-2-oksoetilkarbamat
Spojino smo pripravili kot je opisano v primeru 40 iz 4,6-kinazolindiamina in Boc-Gly-OH.
Izkoristek: 50%.
IR (KBr); v= 3336, 2977, 1700, 1575, 1540, 1510, 1367, 1164 cm’1.
MS (ΕΙ): m/z (%) 317 (M+, 25), 160 (100).
MS (FAB); m/z (%) 318 (MH+, 70).
MS (HR): izračunano za C15H19N5O3: 317.148790; izmerjeno: 317.148909.
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.38-1.40 (2*s, 9H, (CH3)3), 3.78 (d, 2H, J=6.2 Hz, GlyCH2), 7.07 (t, 1H, J=6.2 Hz, GlyNH), 7.60 (s, 2H, KinNH2-4), 7.64 (d, 1H, J=9.0 Hz, KinCH-8), 7.757.80 (dd, 1H, KinCH-7)+, 8.31 (s, 1H, KinCH-2), 8.33 (d, 1H, J=1.7 Hz, KinCH-5), 10.11 (s, 1H, KinNHCO).
sklopitev zaradi grafične ločljivosti ni bilo mogoče natančno razbrati.
PRIMER 44
2-Amino-/V-(4-amino-6-kinazolinil)acetamid dihidroklorid
HCI
NH,
N
N terc-Butil 2-[(4-amino-6-kinazolinil)amino]-2-oksoetilkarbamat (0.5 g, 1.58 mmol) raztopimo v 30 ml_ ledocetne kisline in uvajamo HCI plin, ki ga vodimo skozi H2SO4, reakcijo sledimo s tenkoplastno kromatografijo. Izoliramo kvantitativno količino soli.
IR (KBr): v= 3458, 1646, 1490, 1244 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 218 (MH+, 100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 3.90 (d, 2H, J=5 Hz, GlyCH2), 7.90 (d, 1H, J=9.0 Hz, KinCH-8), 8.14 (dd, 1H, 3,=9.0 Hz, J2=1.9 Hz, KinCH-7), 8.39 (s, 2H, KinNH2-4), 8.33 (d, 1H, J=1.9 Hz, KinCH-5), 8.76 (s, 1H, KinCH-2), 9.70 (s, 1H, GlyNH), 9.93 (s, 1H, GlyNH), 11.45 (s, 1H, KinNHCO).
PRIMER 45
2,4,6-Kinazolintriamin
Gvanidin karbonat (0.9 g, 5.0 mmol) raztopimo v 30 mL metanola in dodamo natrij (0.24 g, 10.4 mmol) 10 minut mešamo in nato segrevamo pri temperaturi refluksa nadalnjih 30 minut. Nastali natrijev karbonat odfiltriramo in speremo s 40 mL metanola. Nastali raztopini dodamo 2-amino-5-nitrobenzonitril (0.88 g, 5.4 mmol) in segrevamo pri temperaturi refluksa 24 ur. Po reakciji uparimo topilo in produkt katalitsko hidrogeniramo kot v Primeru 41.
Izkoristek: 45%.
Tališče: >250 °C.
MS: m/z (%) 175(MH+, 100).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 4.75 (s, 1H, KinNH2-2), 5.44 (s, 2H, KinNH2-6), 6.83 (s, 2H, KinNH2-4), 6.95-7.03 (m, 3H, KinCH-(5,7,8)).
PRIMER 46 ferc-Butil (1R)-1-benzil-2-({2-[(2,4-diamino-6-kinazolinil)amino]-2-oksoetil}amino)-2-oksoetilkarbamat
Spojino smo pripravili kot je opisano v primeru 42 iz 2-amino-/V-(2,4-diamino-6kinazolinil)acetamid dihidroklorida in Boc-D- Phe-OH.
IR (KBr): v= 3458, 1648, 1570, 1389, 1242 cm’1.
MS (FAB): m/z (%) 480 (MH+, 65).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.20-1.31 (m, 9H, (CH3)3), 2.73-3.31 (m(Abx), 2H, PheCH2), 3.95 (d, 2H, J=5.2 Hz, GlyCH2), 4.16-4.23 (m, 1H, PheCH), 7.00-7.72 (3*m, 9H, PheNH, KinCH-(5,7,8), (Phe)PhCH-(2-6)), 8.38-8.42 (m, 1H, GlyNH), 10.11 (s, 1H, KinNHCO).
PRIMER 47 (2R)-2-Amino-/\/-{2-[(2,4-diamino-6-kinazolinil)amino]-2-oksoetil}-3-fenilpropanamid
Spojino smo pripravili kot opisano v primeru 44 iz terc-butil (1 R)-1 -benzil-2-({2-[(2,4-diamino6-kinazolinil)amino]-2-oksoetil}amino)-2-oksoetilkarbamata.
IR (KBr): v= 3382, 3085, 1703, 1601, 1489, 1394, 1311, 1219 cm'1.
MS (FAB); m/z (%) 380 (MH+, 80).
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 3.03-3.23 (m(Abx), 2H, PheCH2), 3.99-4.06 (m, 2H, GlyCH2), 4.13-4.18 (m, 1H, PheCH), 7.27-7.33 (m, 5H, (Phe)PhCH-(2-6)), 7.44 (d, 1H, J=9.0 Hz, KinCH-8), 7.70(s, 2H, KinNH2-4), 7.88-7.91 (m, 1H, KinCH-7), 8.39 (m, 1H, KinCH-5), 8.77 (s, 2H, KinNH2-2), 9.07-9.11 (m, 1H, GlyNH), 10.45 (s, 1H, KinNHCO).
PRIMER 48
Benzil (2S)-2-{[(2,4-diamino-6-kinazolinil)amino]karbonil}-1 -pirolidinkarboksilat
Spojino smo pripravili kot v primeru 40 iz 2,4,6-kinazolintriamina.
IR (KBr): v= 3418, 1654, 1560, 1425, 1358, 697 cm'1. MS (El); m/z (%) 406 (M+, 35), 91 (100).
MS (FAB): m/z (%) 407 (MIT, 100).
PRIMER 49 (2/?)-1-{(2/?)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-A/-(2,4-diamino-6-kinazolinil)-2pirolidinkarboksamid
Spojino smo pripravili kot v primeru 42 iz (2S)-/V-(2,4-Diamino-6-kinazolinil)-2pirolidinkarboksamida in (2/?)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanojske kisline.
MS (FAB); m/z (%) 574 (MH+, 100).
1H-NMR* (300 MHz, DMSO-d6); δ 1.50-2.60 (6*m, 4H, 1-ProCH2Y(1.6), 2-ProCH2Y(1.9), 3ProCH2p(1.9), 4-ProCH2p(2.2), 5-ProCH2Y(2.3), 6-ProCH2p(2.6)), 2.70-3.50 (5*m (2*ABsjstem), 4H, 7-PheCH2(2.7), 8-PheCH2(2.8), 9-PheCH2(2.8), 10-ProCH25(2.9), 11-PheCH2(3.0), 12ProCH2č(3.5)), 3.6-4.9 (9*m (3*ABsistem), 4H, CH2SO2(1 )(3.6-3.8), 13-PheCH(3.9), 14PheCH(4.0), CH2SO2(2)(4.0-4.1), 15-ProCHa(4.1), CH2SO2(3)(4.1-4.3), 16-PheCH(4.2), 17ProCHa(4.3), 18-ProCHa(4.9)), 6.65 (bs, 2H, KinNH2-2), 7.15-7.83 (3*m, 11H, (Phe)PhCH(2-6), (BzSO2)PhCH-(2-6), PheNH), 7.16 (d, ΊΗ, J=9 Hz, KinCH-8)#, 7.59 (dd, ΊΗ, J,=9 Hz, J2=2 Hz, KinCH-7)# 7.65 (bs, 2H, KinNH2-4), 8.11(8.39/ (d, 1H, J=2Hz, KinCH-5), 9.89(10.53/(s, 1H, KinNHCO).
'zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina. Oznake izbranih signalov z njihovimi približnimi premiki v ppm (npr. 1-ProCH2Y(1.6)) so zaradi lažjega branja dvodimenzionalnih spektrov.
#podan premik za drug konformer ali drug konformer ni viden.
13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): δ 24.9, 30.1, 47.6, 56.7, 56.9, 58.9, 59.4, 60.9, 110.3, 111.2, 115.2, 119.5, 124.5, 127.1, 127.7, 128.7, 128.9, 129.1, 130.3, 130.4, 131.0, 131.5, 131.6, 131.8, 133.7, 137.4, 138.7, 158.1, 163.3, 170.7, 171.0.
DEPT135 (75 MHz, DMSO-d6): δ CH2: 24.9, 30.1, 47.6, 58.9, 59.4; CH: 56.7, 60.9, 115.2, 127.1, 127.7, 128.7, 128.9, 129.1, 130.3, 130.4, 131.0, 131.5, 131.6, 131.8.
HMQC- izbrane korelacijev alifatskem delu spektra.
Atom 13C [ppm] 1H korelacija [ppm]
ProCy 24.9 1.6 (1-ProCH2y), 1.9 (2-ProCH2y)
ProCp 30.1 1.9(3-ProCH2p)
PheCH2C 39.0 2.7 (7-PheCH2), 2.8 (9-PheCH2), 3.0 (11-PheCH2)
ProC3 47.6 2.9 (10- ProCH26), 3.5 (12- ProCH25)
PheCH 56.7 4.2 (15-PheCH)
CH2SO2C 58.9 3.6(3.8)+ (CH2SO2(1)), 4.0(4.1)+ (CH2SO2(2))
59.4 4.1 (4.3)+ (CH2SO2(3))
ProCa 60.9 4.3 (17- ProCHa), 4.9 (18- ProCHa)
ABSjStem
COSYGS- izbrani izvendiagonalni signali.
Atom δ [ppm] 1H korelacija [ppm]
1-ProCH2y 1.6 1.9(2-ProCH2y), 2.9(10-ProCH26), 3.5(12-ProCH25)
2-ProCH2y 1.9 2.9(10-ProCH26), 3.5(12-ProCH23)
3-ProCH2p 1.9 4.1(15-ProCH2p), 4.3(17-ProCHa)
4-ProCH2p 2.2 2.6(6-ProCH2p), 4.9(18-ProCHa)
5-ProCH2y 2.3 3.5(12-ProCH25)
6-ProCH2p 2.6 4.9(17-ProCHa)
7-PheCH2 2.7 2.8(8-PheCH2), 4.0(14-PheCH)
8-PheCH2 2.8 4.0(14-PheCH)
9-PheCH2 2.8 3.9(13-PheCH), 4.2(15-PheCH)
10-ProCH28 2.9 3.5(12-ProCH26)
11-PheCH2 3.0 3.9(13-PheCH)
KinCH-8 7.2 7.6(KinArCH-7)
KinCH-7 7.6 8.1(KinArCH-5)
KinCH-7 7.7 8.3(KinArCH-5)
PRIMER 50 (2S)-1-{(2/?)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanoil}-A/-(4-amino-6-kinazolinil)-2pirolidinkarboksamid
Spojino smo pripravili kot v primeru 42 iz (2S)-/V-(4-Amino-6-kinazolinil)-2pirolidinkarboksamida in (2R)-2-[(benzilsulfonil)amino]-3-fenilpropanojske kisline.
MS (FAB): m/z (%) 559 (MH+, 100).
1H-NMR* (300 MHz, DMSO-d6): δ 1.55-1.65 (m, 1H, 1-ProCH2Y(1.6)), 1.85-1.95 (m, 3H, 2ProCH2Y(1.9), ProCH2p), 2.85-3.10 (m, 3H, PheCH2, 1-ProCH25(3.0)), 3.55-4.35 (3*m(2*ABsistem), 4H, 2-ProCH26(3.6), CH2SO2(1 )(3.6-3.8), CH2SO2(2)(4.22 (ABsistem, Jab=13.7), 1-PheCH(4.0), 2-PheCH(4.3)), 4.35-4.90 (m, 1H, 1-ProCHa(4.3), 2-ProCHa(4.9)), 6.90-8.48 (5*m, 11 H, (Phe)PhCH-(2-6), (BzSO2)PhCH-(2-6), PheNH), 7.47 (bs, 2H, KinNH24), 7.54(7.71)* (d, 1H, J=9 Hz, KinCH-8), 7.77 (dd, 1H, Jt=9 Hz, J2=2.1 Hz, KinCH-7)#, 8.25(8.48)* (d, 1H, J=2.1 Hz, KinCH-5), 8.28 (s, 1H, KinCH-2), 10.08(10.70)* (s, 1H, KinNHCO).
zmes konformerov, ki so posledica cis-trans izomerije amidne vezi prolina. Oznake izbranih signalov z njihovimi približnimi premiki v ppm (npr. 1-ProCH2Y(1.6)) so zaradi lažjega branja dvodimenzionalnih spektrov.
*podan premik za drug konformer ali drug konformer ni viden.
13C NMR (75 MHz, DMSO-d6): δ 25.0, 30.1, 39.1, 47.6, 56.7, 59.5, 58.9, 60.9, 65.8 113.3, 115.2, 127.6, 127.7, 128.7, 128.8, 129.0, 129.1, 130.3, 131.0, 131.5, 131.5, 131.8, 136.5, 137.4, 147.2, 155.1, 162.1, 170.7, 171.2.
DEPT135 (75 MHz, DMSO-d6): δ CH2: 25.0, 30.1, 39.1, 47.6, 59.4; CH: 56.7, 60.9, 113.3, 127.6, 127.7, 128.7, 128.8, 129.0, 129.1, 130.3, 131.5, 131.8, 155.1.
HMQC- izbrane korelacije v alifatskem delu spektra.
Atom 13C [ppm] 1H korelacija [ppm]
ProCy 25.0 1.6(1-ProCH2y), 1,9(2-ProCH2y)
ProCp 30.1 1.9(ProCH23)
PheCH2C 39.1 2.8-3.0(PheCH2)
ProC5 47.6 3.0(1-ProCH25), 3.6(2-ProCH25)
PheCH 56.7 4.0(1-PheCH),4.3(2-PheCH)
CH2SO2C 59.5 3.6(3.8)+(CH2SO2(1)), 4.1 (4.3)+(CH2SO2(2))
ProCa 60.9 4.3(l-ProCHa), 4.9(2-ProCHa)
'sistem
PRIMER 51 terc-Butil (2S)-2-{[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]karbonil}-1 -pirolidinkarboksilat
Boc-L-Pro-OH (7.5 mmol, 1.61 g) raztopimo v 6 ml /V,A/-dimetilformamida, dodamo etilkloroformiat (8.25 mmol, 0.79 ml) in trietilamin (8.25 mmol, 1.15 ml). Zmes nekaj ur pustimo na ledeni kopeli pri -15°C, da na TLC opazimo mešani anhidrid in nato dodamo 1,3benzotiazol-2,6-diamin (7.5 mmol, 1.24 g). Čez noč postavimo v zmrzovalnik. Po končani reakciji odnučamo oborino, uparimo /V,/V-dimetilformamid. Dobimo rumeno rjavo olje, ki ga prelijemo z etrom, izpadati začne oborina rumeno rjave barve (2.21 g, 81%).
IR (KBr): v= 3303, 2974, 1672, 1531, 1472, 1411, 1230, 1159, 1124, 816 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 363 (MH+, 85), (100).
PRIMER 52 (S)-N-(2-Amino-1,3-benzotiazolil-6-il)-pirolidinkarboksamid dihidroklorid
V raztopino ferc-butil (2S)-2-{[(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)amino]karbonil}-1pirolidinkarboksilata (2.21 g, 6.1 mmmol) v 6 ml ledocta uvajamo HCI plin 1 uro pri sobni temperaturi. Ledocet uparimo in preostanek večkrat prelijemo z etrom, sušimo nad NaOH. Dobimo 1.35 g (54%) rjavkasto obarvane trdne spojine v obliki dihidroklorida.
IR (KBr): v= 2978, 1696, 1654, 1596, 1560, 1489, 1319, 1233, 838, 669 cm’1.
MS (ΕΙ): m/z (%) 262 (MH+, 9), 70 (100).
PRIMER 53 /erc-Butil 2-amino-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)acetamid
Spojino pripravimo iz Boc-Gly-OH in 1,3-benzotiazol-2,6-diamina po postopku opisanem v primeru 51. Dobimo rumeno obarvano trdno spojino.
Izkoristek: 20%.
IR (KBr): v= 3303, 2974, 1672, 1531, 1472, 1411, 1230, 1159, 1124, 816 cm'1.
MS (FAB): m/z (%) 323 (MH+, 100).
PRIMER 54
2-Amino-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)acetamid dihidroklorid η2ν
HCI
Spojino pripravimo iz ferc-butil 2-amino-N-(2-amino-1,3-benzotiazol-6-il)acetamida po postopku opisanem v primeru 49. Dobimo svetlo rumeno trdno spojino.
Izkoristek: 80%.
Tališče: 189-192°C.
IR (KBr): v= 3240, 3050, 1697, 1647, 1596, 1560, 1491, 1439, 1318, 1237, 946, 836, 670 cm1.
MS (FAB); m/z (%) 223 (MH+, 100).
V nekaterih primerih NMR spektri zaradi kompleksnosti niso podani.
PRIMER 55
REZULTATI TESTIRANJ AKTIVNOSTI SPOJIN
Spojina 2 x APTČ (μΜ)* 2 x PČ (μΜ)* 2 x TČ (μΜ)*
1 3583 4116 1235
2 332 578 84
3 59 114 16
Legenda: spojina 1
spojina 2:
o 'NH
V^NH2 •s 'V^NH2 s
x APTČ (μίΤΐ) χ PČ (μπι):
χ TČ (μπη):
Aktivirani parcialni tromboplastinski čas (podane so koncentracije inhibitorja, ki za dvakrat podaljšajo čas strjevanja krvi po dodanem reagentu, ki sproži proces strjevanja).
Protrombinski čas (podane so koncentracije inhibitorjev, ki za dvakrat podaljšajo protrombinski čas).
Trombinski čas (podane so koncentracije inhibitorjev, ki za dvakrat podaljšajo trombinski čas)
Univer i v Ljubljani Fakul sta za farmapjjo
Lek, tovarna farmacevtskih in kemičnih izdelkov d.d.

Claims (8)

  1. PATENTNI ZAHTEVKI
    1. Spojine s splošno formulo (I)
    D-CO-B-A-Het (I) v kateri pomenijo:
    Het:
    skupino n = 0,1 v kateri pomeni X: S, NH ali O skupino η = Ο, 1 v kateri pomeni Υ: N ali CH v kateri pomeni X: NH, O ali S v kateri pomeni Y: N ali CH skupino
    R1 je v vseh primerih lahko H ali NH2 in R2 je v vseh primerih lahko H ali NH2,
    A: -skupino -CONH- ali - CH2NH-, ki je vezana na Het z NH fragmentom,
    -skupino -CONHCH2- ali -CH2NHCH2-, ki je vezana na Het s CH2 fragmentom, -skupino -CH2NHCONH-, -CH2NHCH2CONH- ali -CH2NHCOCH2NH-, ki je vezana na
    Het z NH fragmentom,
    -skupino -CH2NHCONHCH2-, -CH2NHCH2CONHCH2- ali -CH2NHCOCH2NHCH2-, ki je vezana na Het s CH2 fragmentom,
    B je izbran izmed naslednjih struktur:
    v katerih pomenijo:
    Z: CH2, S ali CH-OH
    R3: H, običajen ali razvejan C1-C4 alkil, C3-C7 cikloalkil
    R4: H, običajen ali razvejan C-1-C4 alkil, C3-C7 cikloalkil
    D ima splošno strukturo:
    Rd
    I .CH
    Rc/ 'γ* v kateri je Rd lahko H, CH2OH, CH2SH ali skupina Ra /
    :h
    V v kateri sta
    Ra in Rb neodvisno izbrana izmed naslednjih skupin:
    -H,
    -C1-C4 običajen ali razverjan alkil, ki je lahko substituiran s C3-C7 cikloalkilom ali z do
    9 atomi halogena izbranega izmed F, Cl, Br, I,
    -C3-C7 cikloalkil,
    -C9-C10 bicikloalkil,
    -stabilen nasičen ali nenasičen 5-7 členski monociklični heterociklični sistem, ali 8-10 členski biciklični heterociklični sistem, ki vsebuje poleg ogljikovih atomov do 3 heteroatome izbrane izmed N, O in S, v katerem je lahko N ali S tudi oksidiran ali N kvaterniran,
    -aril (npr. fenil, naftil), kije lahko nesubstituiran ali substituiran na poljubnih mestih z enim ali dvema substituentoma izbranima izmed C1-4 alkil, C1.4 alkoksi, halogen ali hidroksi,
    Rcje izbran med skupinami:
    -nh2 -NH(CH2)nCH3, -NH(CH2)mOH, -NH(CH2)kCOOH, -NH(CH2)nCOOR5, kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3, kjer je m lahko 2, 3 ali 4, kjer je k lahko 1, 2 ali 3, kjer je n lahko 0, 1, 2 ali 3 in R5 pomeni Ci.4 običajni ali -NH(CH2)kCONR6R7, razvejani alkil, kjer je k lahko 1,2 ali 3 in sta R6 in R7 lahko neodvisno H ali običajen ali razvejan C-μ alkil, ali pa sta R6 in R7 skupaj -(CH2)4.5-, -(CH2)2O(CH2)2- ali -(CH2)2NH(CH2)2-, -NHO2S(CH2)n-W kjer je n lahko 0,1,2 ali 3, W pomeni fenil, naftil, nasičen ali nenasičen monociklični 5- ali 6- členski oz. nasičen ali nenasičen biciklični 8-10-členski heterociklični obroč z 1-3 heteroatomi poljubno izbranimi izmed N, 0 ali S v katerem je lahko N ali S tudi oksidiran ali N kvaterniran; vsak obroč je lahko poljubno substituiran z enim ali več substituenti izbranimi izmed Ci.4 alkil, Ci.4 alkoksi, amino, ciano, halogen ali hidroksi,
    N[O2S(CH2)n-W][(CH2)kCOOH]
    -NH(CH2)kNH2, -NHC(Ph)3, kjer je n lahko 0,1, 2 ali 3 in kjer je k lahko 1, 2 ali 3, kjer je k lahko 1, 2 ali 3,
    v obliki čistih diastereomerov in zmesi diastereomerov in njihove farmacevtsko sprejemljive soli z antikoagulantnim delovanjem.
  2. 2. Spojine s formulo I po zahtevku 1 označene s tem, da se uporabljajo kot terapevtsko učinkovite snovi.
  3. 3. Postopek za pripravo spojin s formulo (I) po zahtevku 1 označen s tem, da • v primerih, ko je A skupina -CONH- vezana na Het z -NH- fragmentom ali skupina -CONHCH2- vezana na Het s -CH2- fragmentom, kondenziramo fragment B, ki ima na N vezano zaščitno skupino ali fragment D-CO- in na dušiku sosednji ogljikov atom vezano skupino COOH, s spojino Het-NH2 ali Het-CH2NH2 in kadar je na N fragmenta B vezana zaščitna skupina, to po kondenzaciji odstranimo na načine, ki so v stroki splošno znani in tako dobljeni fragment kondenziramo s skupino D-COOH, pri čemer za kondenzacijo lahko v obeh primerih uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NH- vezana na Het z -NH- fragmentom ali skupina -CH2NHCH2- vezana na Het s -CH2- fragmentom, z reduktivnim aminiranjem aldehidov BCHO, v katerih je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P z amini Het-NH2 ali HetCH2NH2 pripravimo fragment P-B-CH2NH-Het ali P-B-CH2NHCH2-Het in po odstranitvi zaščitne skupine P dobljeno spojino kondenziramo s fragmentom D-COOH, pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHCONH- vezana na Het z -NH- fragmentom, iz aldehida B-CHO, v katerem je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P, katero uvedemo in po končani reakciji odstranimo na v stroki splošno znane načine, z reduktivnim aminiranjem z amonijevim acetom in nadaljnjo pretvorbo dobljenega amina z etil kloroformatom dobimo spojino tipa P-B-CH2NHCOOEt, ki jo kondenziramo s Het-NH2 in nato po odščiti fragment B-CH2NHCOHN-Het kondenziramo s fragmentom D-COOH , pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHCONHCH2- vezana na Het z -CH2- fragmentom, iz aldehida B-CHO, v katerem je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P, z reduktivnim aminiranjem z amonijevim acetom in nadaljnjo pretvorbo dobljenega amina z etil kloroformatom dobimo spojino tipa P-B-CH2NHCOOEt, ki jo kondenziramo s Het-CH2NH2 in nato po odščiti fragment B-CH2NHCOHNCH2-Het kondenziramo s fragmentom D67
    COOH , pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforil-azid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHCH2CONH- pripeta na Het z -NH- skupino iz aldehida B-CHO, v katerem je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P, z reduktivnim aminiranjem z amonijevim acetom in nadaljnjo pretvorbo dobljenega amina z etil bromoacetatom dobimo spojino tipa P-B-CH2NHCH2COOEt, ki jo kondenziramo s HetNH2 in nato po odščiti fragment B-CH2NHCOHN-Het kondenziramo s fragmentom D-COOH, pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforil-azid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHOH2CONHCH2- pripeta na Het s -CONHCH2fragmentom iz aldehida B-CHO, v katerem je na N vezana ustrezna zaščitna skupina P, z reduktivnim aminiranjem z amonijevim acetom in nadaljnjo pretvorbo dobljenega amina z etil bromoacetatom dobimo spojino tipa P-B-CH2NHCH2COOEt, ki jo kondenziramo s Het-CH2NH2 in nato po odščiti fragment B-CH2NHCH2COHNCH2-Het po odščiti kondenziramo s fragmentom D-COOH , pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHCOCH2NH- vezana na Het z -NH- fragmentom, najprej po običajnih postopkih izvedemo reakcijo med Het-NH2 in etil bromoacetatom, nato pa dobljeni ester HetNHCH2COOEt presnovimo s spojino B-CH2NH2, ki smo jo pridobili na prej opisan način v spojino B-CH2NHCOCH2NHHet in nato fragment BCH2NHCOCH2HN-Het kondenziramo s fragmentom D-COOH, pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate, • v primerih, ko je A skupina -CH2NHCOCH2NHCH2- vezana na Het s -CH2NHCH2fragmentom, najprej po običajnih postopkih izvedemo reakcijo med Het-CH2NH2 in etil bromoacetatom, nato pa dobljeni ester HetCH2NHCH2COOEt presnovimo s spojino B-CH2NH2, ki smo jo pridobili na prej opisan način v spojino B-CH2NHCOCH2NHCH2Het in nato fragment B-CH2NHCOCH2HNCH2-Het kondenziramo s fragmentom D-COOH , pri čemer za kondenzacijo uporabimo klasične reagente za tvorbo peptidne vezi kot npr. dicikloheksilkarbodiimid, 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid (EDC) difenilfosforilazid ali alkil kloroformate.
  4. 4. Uporaba spojin s formulo I po zahtevku 1 za pripravo zdravil, ki zavirajo trombin in nastajanje fibrina ter nastajanje trombusov.
  5. 5. Uporaba spojin s formulo I po zahtevku 1 za pripravo zdravil, ki se uporabljajo za preprečevanje in zdravljenje venske tromboze in pljučnih embolizmov, za preprečevanje sistemskih embolij pri srčnih bolnikih, za preprečevanje zapor pri rekanalizacijskih posegih na arterijah, za preprečevanje strjevanja krvi pri izventelesnem obtoku in hemodializi.
  6. 6. Farmacevtski pripravki označeni s tem, da vsebujejo terapevtsko učinkovito množino spojine s formulo I po zahtevku 1 in farmacevtsko sprejemljive pomožne snovi.
  7. 7. Farmacevtski pripravki po zahtevku 6 označeni s tem, da se uporabljajo za zaviranje trombina v krvi človeka in drugih sesalcev.
  8. 8. Farmacevtski pripravki po zahtevku 5 označeni s tem, da se uporabljajo za zaviranje tvorbe fibrina v krvi človeka in drugih sesalcev.
SI200000111A 2000-05-05 2000-05-05 Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba SI20582A (sl)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI200000111A SI20582A (sl) 2000-05-05 2000-05-05 Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba
US10/275,215 US7112590B2 (en) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitors
EP01925739A EP1287018B1 (en) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitors
AT01925739T ATE287416T1 (de) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitoren
DE60108495T DE60108495T2 (de) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitoren
AU2001252419A AU2001252419A1 (en) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitors
ES01925739T ES2239134T3 (es) 2000-05-05 2001-05-04 Inhibidores de trombina.
PCT/GB2001/001997 WO2001085760A1 (en) 2000-05-05 2001-05-04 Thrombin inhibitors

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SI200000111A SI20582A (sl) 2000-05-05 2000-05-05 Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI20582A true SI20582A (sl) 2001-12-31

Family

ID=20432649

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI200000111A SI20582A (sl) 2000-05-05 2000-05-05 Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba

Country Status (8)

Country Link
US (1) US7112590B2 (sl)
EP (1) EP1287018B1 (sl)
AT (1) ATE287416T1 (sl)
AU (1) AU2001252419A1 (sl)
DE (1) DE60108495T2 (sl)
ES (1) ES2239134T3 (sl)
SI (1) SI20582A (sl)
WO (1) WO2001085760A1 (sl)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050119226A1 (en) * 2003-09-09 2005-06-02 Trigen Limited Methods for synthesizing organoboronic compounds and products thereof
US20050282757A1 (en) * 2002-09-09 2005-12-22 Trigen Limited Peptide boronic acid compounds useful in anticoagulation
US7112572B2 (en) * 2002-09-09 2006-09-26 Trigen Limited Multivalent metal salts of boronic acids
GB0405272D0 (en) * 2004-03-09 2004-04-21 Trigen Ltd Compounds
KR100735639B1 (ko) * 2004-12-29 2007-07-04 한미약품 주식회사 암세포 성장 억제 효과를 갖는 퀴나졸린 유도체 및 이의제조방법
CN102796167B (zh) * 2011-05-26 2014-01-08 首都医科大学 (S)-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-L-脯氨酰-L-丙氨酰-L-氨基酸及其制备方法和应用
CN102807600B (zh) * 2011-06-03 2014-08-13 首都医科大学 氨基酸修饰的菠菜素衍生物及其制备方法和应用
WO2013178591A1 (en) * 2012-05-31 2013-12-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Aminoquinazoline and pyridopyrimidine derivatives
CN111848730B (zh) * 2019-04-30 2022-06-24 首都医科大学 茶氨酰四氢咪唑并吡啶-6-甲酰极性氨基酸的制备,活性和应用

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5510369A (en) 1994-07-22 1996-04-23 Merck & Co., Inc. Pyrrolidine thrombin inhibitors
US5827866A (en) * 1995-06-07 1998-10-27 Ortho Pharmaceutical Corporation Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
US5523308A (en) 1995-06-07 1996-06-04 Costanzo; Michael J. Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
US5811402A (en) * 1996-03-22 1998-09-22 Eli Lilly And Company Antithrombotic diamides
IL123986A (en) * 1997-04-24 2011-10-31 Organon Nv Medicinal compounds

Also Published As

Publication number Publication date
EP1287018A2 (en) 2003-03-05
ES2239134T3 (es) 2005-09-16
US7112590B2 (en) 2006-09-26
AU2001252419A1 (en) 2001-11-20
WO2001085760A1 (en) 2001-11-15
ATE287416T1 (de) 2005-02-15
US20030191139A1 (en) 2003-10-09
DE60108495T2 (de) 2006-01-12
EP1287018B1 (en) 2005-01-19
WO2001085760A8 (en) 2002-03-14
DE60108495D1 (en) 2005-02-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5523308A (en) Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
EP0820287B1 (en) Thrombin inhibitors
US5792779A (en) Pyridinone thrombin inhibitors
EP0934064B1 (en) Thrombin inhibitors
JP2011102312A (ja) テトラペプチド類似体
JPH02202898A (ja) ジペプチドの酵素‐阻害尿素誘導体
AU758237B2 (en) Thrombin inhibitors
CZ291690B6 (cs) Inhibitory serinové proteázy a farmaceutický prostředek
US5827866A (en) Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
US5827860A (en) Peptidyl heterocycles useful in the treatment of thrombin related disorders
SI20582A (sl) Novi inhibitorji trombina, njihova priprava in uporaba
JP2008542445A (ja) α２β１／ＧＰＩａ−ＩＩａインテグリン阻害剤
EP0858262B1 (en) Thrombin inhibitors
US5798377A (en) Thrombin inhibitors
SI21097A (sl) Inhibitorji trombina
US6462050B1 (en) Thrombin inhibitors
EP0483403A1 (en) Derivatives of amino acids as inhibitors of renin, methods for their preparation, medicaments containing them and their use
US6133297A (en) Thrombin inhibitors
CA2309347A1 (en) Thrombin inhibitors
US7084134B2 (en) Thrombin inhibitors
AU9583998A (en) Thrombin inhibitors
EP0884325A1 (en) Thrombin inhibitors containing a peptidyl heterocycle

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20100115