SI20424A - Nepeptidna GnRH sredstva - Google Patents

Nepeptidna GnRH sredstva Download PDF

Info

Publication number
SI20424A
SI20424A SI9920026A SI9920026A SI20424A SI 20424 A SI20424 A SI 20424A SI 9920026 A SI9920026 A SI 9920026A SI 9920026 A SI9920026 A SI 9920026A SI 20424 A SI20424 A SI 20424A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
compound
compounds
substituted
formula
multimer
Prior art date
Application number
SI9920026A
Other languages
English (en)
Inventor
Mark Anderson
Alexander Polinsky
Yufeng Hong
Vlad Gregor
Original Assignee
Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agouron Pharmaceuticals, Inc. filed Critical Agouron Pharmaceuticals, Inc.
Publication of SI20424A publication Critical patent/SI20424A/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/78—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms, with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/81—Amides; Imides
    • C07D213/82—Amides; Imides in position 3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/12—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/30—Indoles; Hydrogenated indoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D209/42—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/12—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/16—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/70—Nitro radicals
    • C07D307/71—Nitro radicals attached in position 5
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/77—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D307/91—Dibenzofurans; Hydrogenated dibenzofurans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D317/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D317/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3
    • C07D317/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D317/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms having the hetero atoms in positions 1 and 3 ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D317/48—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring
    • C07D317/62—Methylenedioxybenzenes or hydrogenated methylenedioxybenzenes, unsubstituted on the hetero ring with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to atoms of the carbocyclic ring
    • C07D317/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/38—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
    • C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D333/68—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C07D333/70—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen attached in position 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Quinoline Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Compounds Containing Sulfur Atoms (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Furan Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

Nepeptida GnRH sredstva sposobna inhibirati učinek hormona, ki sprošča gonadotropin, imajo splošno formulo (I), kjer so X1, X2, Y in Z definirane spremenljivke. Takšne spojine in njihove farmacevtsko sprejemljive soli, multimeri, metabolni prekurzorji (angl. "prodrugs") in aktivni metaboliti so primerni za zdravljenje reprodukcijskih motenj sesalcev in tumorjev, ki so posledica delovanja steroidnega hormona, kot tudi za reguliranje plodnosti, pri čemer je indicirana preprečitev sproščanja gonadotropina. Prav tako so opisane metode za sintezo spojin in intermediatov uporabnih za njihovo pripravo.ŕ

Description

Prijava se navezuje na ameriško patentno prijavo s številko 60/076,983, ki je bila vložena 3. maja 1998 na ime Anderson s sodelavci.
Tehnično področje in industrijska uporabnost izuma
Izum se v splošnem nanaša na spojine, ki vplivajo na delovanje človeškega hormona, ki sprošča gonadotropin (GnRH). Bolj natančno se nanaša na nepeptidne GnRH antagoniste ali agoniste in na njihovo pripravo. Ta nepeptidna GnRH sredstva imajo ugodne fizikalne, kemijske in biološke lastnosti, in so učinkovita zdravila za zdravljenje bolezni ali stanj, ki so povzročena z modulacijo pituitame-gonadne osi. S spojinami, ki so predmet izuma, seje mogoče izogniti razgradnim in biodistribucijskim problemom, ki so značilni za peptidna sredstva.
Osnova izuma
Sproščanje hormona (biokemijske snovi, ki jih proizvajajo.specifične celice ali tkiva in povzročajo spremembo ali aktivnost v celici ali tkivu, ki se nahaja druge v organizmu) ob anteriomi učesni mečici (angl. 'anterior lobe') hipofize (ki se nahaja v možganskem deblu in izloča hormone, ki so odgovorni za rast in seksualni razvoj) ponavadi zahteva predhodno sproščanje drugih vrst hormonov, ki jih proizvaja hipotalamus (struktura v nižjem delu možganov, ki je povezana s hipofizo in kontrolira njeno delovanje). Eden izmed hormonov hipotalamusa deluje kot faktor, ki sproža sproščanje gonadotropnih hormonov, posebej LH (luteinizirajoč hormon, ki je pituitami hormon, ki povzroča, da moška moda in ženski ovariji proizvajajo spolne hormone) in FSH (hormon, ki stimulira folikl, ki je pituitami hormon, ki stimulira rast folikla pri ženskah in tvorbo sperme pri moških). Ta hormon je v kontekstu označen kot “GnRH” (gonadotropin sproščujoč hormon) in/ali “LH/RH” (luteinizirajoč hormon - sproščujoč hormon), .GnRH je dekapeptidni hormon, ki ga proizvajajo arkuatna jedra hipotalamusa (arkuatno jedro je katerakoli izmed celičnih snovi v talamusu, hipotalamusu ali medulla oblongata), ki kontrolirajo hipofizno proizvodnjo in sproščanje gonadotropinov (hormonov vključno z FSH in LH, ki nastanejo v hipofizi, ki kontrolira reproduktivno funkcijo). GnRH (LH-RH) je lahko predstavljen s sekvenco ’pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2’, ali z enočrkovno kodno oznako ‘pyro-EHWSYGLRG-NH2.‘. GnRH deluje na pituitame receptorje z visoko afiniteto, da stimulirajo proizvodnjo in sproščanje LH in FSH.
Pituitami odziv na GnRH se močno spreminja skozi življenje. GnRH in gonadotropini se najprej pojavijo v fetusu v približno desetih tednih gestacije. Po kratkem dvigu v prvih treh mesecih po rojstvu, občutljivost na GnRH pojema vse do nastopa pubertete. Pred nastopom pubertete je FSH odziv na GnRH večji kot LH. Ko se prične puberteta, narašča občutljivost na GnRH. Sledi pulzno izločanje LH. Kasneje v puberteti in v obdobju reproduktivnih let se takšno pulzno izločanje dogaja čez dan, pri čemer je LH dovzetnost večja kot FSH. Po menopavzi FSH in LH koncentracije naraščajo, postmenopavzalni FSH nivoji pa so višji od LH nivojev.
Pulzno sproščanje GnRH povzroča pulzno sproščanje LH in FSH. Kakorkoli, nepretrgana infuzija GnRH in njegovih analogov vodi v inhibicijo sproščanja LH in FSH. Ta fenomen se je uporabljal pri uspešnem zdravljenju gonadotropinsko povzročene prezgodnje pubertete z nepretrgano uporabo LH-RH ali njegovih analogov. Nasprotno lahko pri ljudeh s pomanjkanjem GnRH pulzna uporaba LH-RH ponovno vzpostavi normalni menstrualni cikel ali normalno produkcijo sperme in testosterona.
GnRH agonisti, spojine, ki stimulirajo hipofizo k sproščanju ali modulaciji FSH in LH, se lahko zaradi omejenega števila primernih antagonistov, ki so na voljo za klinično ocenjevanje oz. evalvacijo, izberejo kot metoda za zdravljenje spolno-steroidno odvisnih patofiziologij. Predmet ocenjevanja so sedaj GnRH antagonisti, spojine, ki zadržujejo hipofizno sproščanje FSH in LH.
GnRH antagonisti so lahko učinkoviti pri prenehanju izločanja gonadotropina in preprečevanju ovulacije v ženskih osebkih, GnRH antagonisti so bili proučevani v kontracepcijske namene in za reguliranje period zanositve, kot tudi za zdravljenje neplodnosti, za nadzor pričetka ovulacije pri ženskah s kronično anovulacijo in za oploditev oz. fertilizacijo in vitro. GnRH antagonisti so lahko prav tako uspešni pri zdravljenju prezgodnje pubertete, endometrioze (vključno z endometriozo z bolečino), aken, amenoreje (npr. sekundarne amenoreje), materničnega mioma, jajčnih in cističnih bolezni dojk (vključno s policističnim obolenjem jajčnikov) ter prsnih in ginekoloških rakov. GnRH antagonisti so lahko prav tako uporabni za simptomatično reševanje predmenstrualnega sindroma (PMS). Prav tako se lahko uporabljajo za zdravljenje hiperandrogenizma in hirzutizma jajčnikov. Antagonisti so se izkazali kot koristni pri reguliranju izločanja gonadotropinov pri moških sesalcih in se lahko uporabljajo za zaustavljanje spermatogeneze, npr. kot moška kontracepcija (za zdravljenje moške spolne disfunkcije) in za zdravljenje hipertrofije prostate. Natančneje, GnRH antagonisti se lahko uporabljajo za zdravljenje steroidno pogojenih tumorjev, kot so tumorji prostate in tumorji na dojkah, in za časovni nadzor ovulacije ter fertilizacijo in vitro. GnRH antagonisti se lahko prav tako uporabljajo za zdravljenje pacientov z boleznimi, kot je AIDS, pri čemer bi bila koristna stimulacija timusa za proizvodnjo T-celic. Vse takšne uporabe se nanašajo oz. so pogojene s sposobnostjo GnRH antagonista, da blokira aktivnost GnRH.
Do sedaj razpoložljivi GnRH antagonisti so bili prvenstveno peptidni analogi GnRH. Glej npr. mednarodno publikacijo s št. WO 93/03058. Peptidni antagonisti peptidnih hormonov so pogosto precej učinkoviti. Vseeno pa so za uporabo peptidnih antagonistov značilni problemi, ki so povezani z razgradnjo peptidov pod vplivom fizioloških encimov in s slabo distribucijo znotraj organizma, ki ga zdravimo. Tako so le ti omejeno učinkoviti kot zdravila. Posledica omenjenih pomanjkljivosti je potreba po nepeptidnih antagonistih peptidnega hormona GnRH.
Povzetek izuma
Predmet izuma je potemtakem zagotoviti nepeptidne spojine, ki so GnRH sredstva (agonisti ali antagonisti), ki se vežejo na GnRH receptorje in tako modulirajo aktivnost, še posebej kadar gre za močne GnRH antagoniste. Drugi predmet izuma je zagotovitev efektivne terapije za posameznike, ki potrebujejo terapevtsko reguliranje GnRH in predpisati metode zdravljenja bolezni in stanj, ki so povezana z reguliranjem GnRH.
Omenjeni cilji so bili doseženi z nepeptidnimi GnRH spojinami v okviru izuma, ki so uporabne kot zdravila za indikacije povezane z reguliranjem GnRH. Spojine na ravni izuma imajo s farmacevtskega stališča prednosti v primerjavi s peptidnimi spojinami, ker omogočajo boljšo biodistribucijo in so bolj odporne na razgradnjo s fiziološkimi encimi. V okviru izuma so nadalje predpisane metode sinteze spojin kot tudi intermediatnih spojin uporabnih za izdelavo spojin.
GnRH sredstva v okviru izuma imajo splošno formulo I:
o
Xi xi (I) pri čemer je:
Z je skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, heterocikla, arila, heteroarila, CH2OR in C(O)OR, kjer je R substituiran ali nesubstituiran alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril ali heteroaril in kjer je celotno število ogljikovih atomov prisotnih v Z, ne da bi bile vključene možne substituente, v območju od 1 do 12;
Y je lipofilna skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila, kjer je celotno število ogljikovih atomov prisotnih v Y, ne da bi bile vključene možne substituente, v območju od 6 do 20;
Xt je strukturna enota ali razmikalnica, uporabljena za vezanje CH2NC(O), X2, Y in Z funkcionalnih enot v 3-dimenzionalnem prostoru, ki je izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila tako, da je število atomov v verižnem delu enote, ki veže osrednji dušik (N atom v formuli I je imenovan kot “osrednji dušik”, da bi se izognili zamenjavi s katerimikoli drugimi dušik vsebujočimi substituentami) na X2, v območju od 3 do 8, preferenčno od 4 do 6; in
X2 je bazična skupina s pKa vrednostjo višjo kot 8, ki je preferenčno izbrana izmed substituirane in nesubstituirane gvanidinilne, amidinilne, acilamidinilne, azetidinilne in amino skupine.
Razen spojin s formulo I, GnRH sredstva v okviru izuma vključujejo tudi farmacevtsko sprejemljive soli, multimerne oblike, metabolne prekurzorje spojine s formulo I ali njihove soli (angl. ‘prodrugs’) in aktivne metabolite spojine s formulo I. Takšna nepeptidna sredstva imajo s farmacevtskega stališča prednost pred peptidnimi sredstvi, ker omogočajo boljšo biodistribucijo in so bolj odporna na razgradnjo s fiziološkimi encimi.
Izum se prav tako nanaša na farmacevtske oz. zdravilne pripravke, ki vsebujejo terapevtsko učinkovite količine GnRH sredstva, ki je predmet izuma, v kombinaciji s farmacevtsko sprejemljivim nosilcem ali topilom. Izum se nanaša tudi na metode za reguliranje izločanja gonadotropinov v sesalcih, ki obsegajo uporabo terapevtsko učinkovitih količin GnRH sredstev izuma.
Izum se nadalje nanaša na postopke za sintezo spojin, kot tudi na intermediate uporabne za izdelavo spojin. Spojine intermediatov, uporabne za izdelavo spojin s formulo I, so spojine s formulami II, III in IV:
.r’ λζ”
N I ch2
K
AN'R
I ch2 k(H2C)
N
R8 A 'rW / N ,11
N I
CHi
ch2 I ch2 | CH, |
I nh2 I nh2 I NHX
(Π) (III) (IV)
pri čemer je:
j je 1 ali 2; kje 1, 2, 3,4 ali 5;
R je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil;
R9 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CN, N02, ali CO2R*;
R10 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CH2OR*; (CH^pOR1, CO2r’, ali (CH2)PC(O)R2, kjer je p celo število od 1 do 6 in R2 je H, OR1, SR1, NCR1^ ali CCR^a; R11 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CH2O-fenil, CH2O-benzil, fenil, ali benzil;
ali katerakoli dva izmed R8, R9, R10 in R11 (R8 in R9 ali R8 in R11 ali R8 in R10 ali R9 in R10 ali R9 in R11 ali R10 in R11) vezana skupaj v obliko 5 ali 6 členskega heterocikla;
in kjer je vsak R1 neodvisno izbran izmed H in substituiranim ali nesubstituiranim nižjim alkilom, O-nižjim alkilom in S-nižjim alkilom.
Druge značilnosti, predmeti in prednosti izuma bodo postale razvidne iz sledečega podrobnega opisa izuma in njegovih preferiranih vsebin.
Kratek opis slik
Slika 1 je prikaz premaknitvene krivulje, ki je dobljena na osnovi meritev količine radioaktivno označenega GnRH vezanega na membrane, ki vsebujejo GnRH receptorje v odvisnosti od koncentracije neoznačenega GnRH.
Slika 2 je prikaz procenta acidifikacije v celicah, ki izraža odziv človeških GnRH receptorjev na naraščajočo koncentracijo GnRH v odsotnosti in prisotnosti GnRH antagonista.
Podroben opis in preferirane vsebine izuma GnRH sredstva
Nekatere izmed spojin izuma vsebujejo en ali več centrov asimetrije in lahko-tako vodijo do nastanka oz. tvorbe enantiomerov, diastereoizomerov in drugih stereoizomemih oblik.
Izum vključuje vse takšne možne stereoizomere kot tudi racemne in optično čiste oblike.
Ko spojine opisane v kontekstu vsebujejo olefinske dvojne vezi, le te obsegajo obe cis in trans geometrijski izomeri.
Kemijske formule omenjene v kontekstu lahko prikazujejo fenomen tavtomerije. Ker strukturne formule predstavljene v tem opisu prikazujejo samo eno od možnih tavtomemih oblik, je potrebno razumeti, da izum obsega vse tavtomerne oblike.
Termin “alkil” se nanaša na ravno in razvejano-verižne alkilne skupine z enim do dvanajstimi ogljikovimi atomi. Primeri alkilnih skupin so metil (Me), etil, n-propil, izopropil, butil, izobutil, sek-butil, terc-butil (tBu), pentil, izopentil, terc-pentil, heksil, izoheksil in podobne. Termin “nižji alkil” označuje alkil z 1 do 8 ogljikovimi atomi (C^g alkil). Primerni substituirani alkili so fluorometil, difluorometil, trifluorometil, 2fluoroetil, 3-fluoropropil, hidroksimetil, 2-hidroksietil, 3-hidroksipropil in podobni.
Termin “alkenil” se nanaša na ravno in razvejano-verižne alkenilne skupine z 2 do 12 ogljikovimi atomi. Primeri alkenilnih skupin so prop-2-enil, but-2-enil, but-3-enil,
2-metilprop-2-enil, heks-2-enil in podobni.
Termin “alkinil” se nanaša na ravno in razvejano-verižne alkinilne skupine z 2 do 12 ogljikovimi atomi. Primeri alkinilov so prop-2-inil, 3-metilpent-4-inil, heks-2-inil in podobni.
Termin “karbocikel” se nanaša na monociklične ali policiklične ogljikove obročne strukture (brez heteroatomov) s 3 do 7 ogljikovimi atomi v vsakem obroču, ki so lahko nasičeni, deloma nasičeni ali nenasičeni. Primeri karbociklov so cikloalkili in arili.
Termin “heterocikel” se nanaša na monociklične ali policiklične obročne strukture z enim ali večimi heteroatomi izbranimi izmed N, O in S in, ki imajo od 3 do 7 atomov (ogljikove atome plus katerikoli heteroatom(e)) v vsakem obroču, kije lahko nasičen, deloma nasičen ali nenasičen. Primeri heterociklov so tetrahidrofuranil, tetrahidropiranil--azetidinil, pirolidinil, piperidinil, piperazinil in podobni.
Termin “cikloalkili” , kot je uporabljen v kontekstu, se nanaša na nasičene karbocikle s 3 do 12 ogljiki vključno z bicikličnimi in tricikličnimi cikloalkilnimi strukturami. Primerni cikloalkili so ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil in podobni.
Termina “arili” in “heteroarili” se nanašata na monociklične in policiklične nenasičene ali aromatske obročne strukture, pri čemer se “aril” nanaša na· karbocikle in “heteroaril” na tiste, ki so heterocikli. Primeri aromatskih obročnih struktur so fenil, naftil, 1,2,3,4tetrahidronaftil, furil, tienil, pirolil, piridil, piridinil, pirazolil, imidazolil, pirazinil, piridazinil, 1,2,3-triazinil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, l-H-tetrazol-5-il, indolil, kvinolinil, benzofuranil, benzotiofenil (tianaftenil) in podobni. Lahko so substituirani z eno ali večimi primernimi substituentami, na primer s substituento izbrano med halogenom (F, Cl, Br in I); nižjim alkilom; OH; NO2; CN; CO2H; O-nižjim alkilom; arilom; aril-nižjim alkilom; CO2CH3; CONH2; OCH2CONH2; NH2; SO2NH2; OCHF2; CF3; OCF3; in podobnimi. Lahko so prav tako substituirani z vezano (poli)obročno strukturo ali mostom, na primer OCH2-O.
Termin “aril-nižji alkil” pomeni nižji alkil vezan na aril. Primeri so benzil, fenetil, piridilmetil, naftilmetil, in podobni. Aril-nižji alkil je lahko prav tako substituiran.
Na splošno so lahko različni deli ali funkcionalne skupine za Xb X2, Ϋ in Z v formuli I substituirane z eno ali več primernimi substituentami. Vzorčne substituente so halogen (F, Cl, Br ali I), nižji alkil, -OH, -NO2, -CN, -CO2H, -O-nižji alkil, -aril, -aril-nižji alkil, CO2CH3, -CONH2, -OCH2CONH2, -NH2, -SO2NH2, haloalkil (npr. -CF3, -CH2CF3), -Ohaloalkil (npr. -OCF3, -OCHF2) in podobne.
“Zaščitne skupine” se nanašajo na skupine, ki preprečujejo, da bi ena ali več inherentnih funkcionalnih skupin prezgodaj reagirale. Primerne zaščitne skupine lahko strokovnjaki na tem področju rutinsko izberejo glede na njihovo funkcionalnost in še posebej kemijo, ki vodi do tvorbe spojin. Primeri primernih zaščitnih skupin so na primer opisani v publikaciji Greene in Wutz, Protecting Groups in Organic Synthesis, 2. izdaja, John Wiley & Sons, New York, New York (1991). Primeri zaščitnih skupin uporabni v običajnem postopku v okviru izuma so terc-butoksikarbonil (Boc) in podobni.
Spojine v okviru izuma, uporabne kot GnRH sredstva, so spojine z naslednjo formulo I:
o
Xi
Χχ (I) pri čemer je:
Z je skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, heterocikla, arila, heteroarila, CH2OR in C(O)OR, kjer je R substituiran ali nesubstituiran alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril ali heteroaril in kjer je celotno število ogljikovih atomov prisotnih v Z, ne da bi bile vključene možne substituente, v območju od 1 do 12;
Y je lipofilna skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila, kjer je celotno število ogljikovih atomov prisotnih v Y, ne da bi bile vključene možne substituente, v območju od 6 do 20;
Xi je strukturna enota ali razmikalnica, uporabna za povezavo CH2NC(O), X2, Y in Z funkcionalnih enot v 3-dimenzionalnem prostoru, ki je izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila tako, daje število atomov v verižnem delu enote, ki veže osrednji dušik (N atom v formuli I je imenovan kot “osrednji dušik”, da bi se izognili zamenjavi s katerimikoli drugimi dušik vsebujočimi substituentami) in X2, v območju od 3 do 8, preferenčno od 4 do 6; in
X2 je bazična skupina s pKa vrednostjo višjo kot 8, ki je preferenčno izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih gvanidinila, amidinila, acilamidinila, azetidinila in amino skupine; in farmacevtsko sprejemljive soli, metabolni prekurzorji (‘prodrugs’), farmacevtsko aktivni metaboliti in mimerične oblike takšnih spojin.
Nadalje, formula I obsega, kjer je uporabno, solvatne kot tudi nesolvatne oblike spojin. Tako se formula I nanaša na navedene strukture vključno z hidratnimi kot tudi nehidratnimi oblikami.
Preferirane Z skupine so: substituirani in nesubstituirani furili, na primer, 2-furil, 3-furil, 5metil-2-furil, in 5-nitro-2-furil; substituiran in nesubstituiran pirolil; substituirani in nesubstituirani naftili, na primer, 1-naftil in 2-naftil; substituirani in nesubstituirani tienili, npr. 2-tienil; substituirani in nesubstituirani piridili, na primer, 2-kloropirid-5-il in 2metiltiopirid-3-il; substituirani in nesubstituirani cikloalkili, na primer, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, in cikloheksil; in substituirani in nesubstituirani nižji alkili, kot je metil, etil, propil, butil, in podobni, pri čemer so še posebej preferirani tisti, ki so substituirani s fluorom, npr. CF3. Posebej preferirane Z skupine so furili, pirolili, tienili in CF3.
Preferirane Y skupine so: substituiran in nesubstituiran fenil, na primer 4-izopropilfenil, 4-N,N-dimetilaminopropiloksifenil, 2,4,5-trietoksifenil,
2,3-dibenziloksifenil, in 2-(4’-kloro feniloksijfenil; substituiran in nesubstituiran naftil in njegovi delno ali popolnoma nasičeni derivati, na primer, 1,2,3,4-tetrahidro-l, 1,4,4,6pentametilnaftalen; substituiran in nesubstituiran dibenzilfuril in njegovi nasičeni in deloma nasičeni derivati; substituiran in nesubstituiran kinolinil, izokinolinil, kinoksalinil, in podobni, na primer, 3-kinolinil; in substituirani in nesubstituirani cikloalkili in policiklični alkili. Lipofilne skupine, ki so velike, so še posebej preferirane Y skupine, zlasti ena izmed naslednjih skupin;
Preferirane X) skupine vključujejo alkilenske, alkilen-cikloalkil-alkilenske in alkilen-arilalkilenske verige, kjer se termin “alkilen” nanaša na (CH2)n, pri čemer je n celo število v območju od 1 do 6. Posebej preferirane Xi skupine so naslednje:
-(CH^- , -(CHjV ,
Preferirane X2 skupine so močno bazične, npr. imajo pKa višji kot 9, ali še bolje višji kot približno 10. Vzorčne X2 skupine so gvanidinil, amidinil in amino, ki so lahko nesubstituirane ali substituirane z enim ali večimi nižjimi alkili. Posebej preferiran X2 je gvanidinil.
Preferirane spojine so tiste spojine, ki so zajete z naslednjima subgeneričnima formulama Γ in II’ (Y in Z sta definirana zgoraj):
Preferirani posebni deli spojin s formulo I vključujejo naslednje spojine označene s številkami 1-120 (na slikah spodaj so alkilne in alkilenske substituente prikazane v skladu s stenografsko konvencijo, npr. “ | ” za metilno skupino):
2Ζ
νη2
ΗΝ^ΝΗ
ΝΗ?
L
ΗΝ ΝΗ
CI
NH,
L
N NH o4 υ
CI
ci
Izmed specifičnih spojin, ki so navedene zgoraj, so še posebej preferirane spojine s številkami 4, 5,13,25,26,30,40,47,48, 55 in 80.
Druga posebej preferirana GnRH sredstva s formulo I vključujejo naslednje spojine s številkami 121-124:
122
123
124
Kot je pokazano zgoraj, GnRH sredstva skladno z izumom prav tako vključujejo aktivne tavtomeme in stereoizomerne oblike spojin s formulo I, ki jih je mogoče enostavno dobiti s pomočjo na področju znanih tehnik. Na primer, optično aktivne (D) in (L) izomere so lahko pripravljene s stereospecifično sintezo, npr. z uporabo kiralnih sintonov (angl. 'synthons') in kiralnih reagentov, ali racemne zmesi lahko razpadejo z uporabo konvencionalnih tehnik.
GnRH sredstva nadalje vključujejo večvalentne ali multimeme oblike aktivnih oblik spojin s formulo I. Takšni 'multimeri' so lahko pripravljeni z vezanjem ali namestitvijo večjega števila primerov aktivne spojine v tesno, neposredno bližino, npr. na delu carrierja oz. nosilca. Multimeri različnih dimenzij (tj. z vsebnostjo spremenljivega števila reprodukcij aktivne spojine) so lahko preizkušam tako, da je dosežen multimer optimalne velikosti s stališča vezanja receptorja. Priprava takšnih večvalentnih oblik aktivnih receptor vezajočih spojin z optimalnim razmikom med receptor vezaj očimi deli lahko izboljša vezanje receptorja (glej npr. Lee s sodelavci, Biochem., 1984, 23:4255). Strokovnjak s področja lahko kontrolira večvalentnost in razmik z izbiro primernega'carrierja oz. nosilnega dela ali veznih enot. Uporabni deli vključujejo molekularne podpore, ki vsebujejo mnogoterost funkcionalnih skupin, ki lahko reagirajo s funkcionalnimi skupinami vezanimi na aktivne spojine izuma. Raznolikost nosilnih delov je lahko uporabna za izgradnjo visoko aktivnih multimerov, vključno s proteini kot je BSA (bovin serum albumin) ali HAS, peptidi kot so pentapeptidi, dekapeptidi, pentadekapeptidi in podobni, kot tudi nebioloških spojin izbranih zaradi njihovih ugodnih učinkov v smislu absorbtivnosti, transporta in trajanja učinka znotraj ciljnega organizma. Funkcionalne skupine na nosilnem delu, kot so amino, sulfhidril, hidroksil in alkilamino skupine, so lahko izbrane tako, da se vzpostavijo stabilne vezi s spojinami izuma, optimalni razmik med imobiliziranimi spojinami in optimalne biološke lastnosti.
Nadalje, GnRH sredstva izuma vključujejo farmacevtsko sprejemljive soli spojin s formulo I. Termin 'farmacevtsko sprejemljive' se nanaša na oblike soli, ki so farmakološko sprejemljive in v osnovi netoksične za osebek na katerem se uporablja GnRH sredstvo. Farmacevtsko sprejemljive soli vključujejo konvencionalne kisle soli ali bazične soli nastale iz primernih netoksičnih organskih ali anorganskih kislin ali anorganskih baz. Primeri kislih soli vključujejo tiste, ki so nastale iz anorganskih kislin, kot je klorovodikova kislina, bromovodikova kislina, jodovodikova kislina, žveplova kislina, sulfaminska kislina, fosforjeva kislina in dušikova kislina in tiste, ki so nastale iz organskih kislin kot je p-toluensulfonska kislina, metansulfonska kislina, etandisulfonska kislina, izetionska kislina, oksalna kislina, p-bromofenilsulfonska kislina, ogljikova kislina, jantarna kislina, citronska kislina, benzojska kislina, 2-acetoksibenzojska kislina, ocetna kislina, fenilocetna kislina, propionska kislina, glikolna kislina, stearinska kislina, mlečna kislina, jabolčna kislina, vinska kislina, askorbinska kislina, maleinska kislina, hidroksimaleinska kislina, glutaminska kislina, salicilna kislina, sulfanilna kislina in fumama kislina. Primeri bazičnih soli vključujejo tiste, ki so nastale iz amonijevih hidroksidov, (npr. kvatememega amonijevega hidroksida kot je tetrametilamonijev hidroksid), tiste, ki so nastale iz anorganskih baz kot so alkalijski ali zemeljsko alkalijsko kovinski (npr. natrijev, kalijev, litijev, kalcijev ali magnezijev) hidroksidi in tiste, ki so nastale iz organskih baz, kot so amini, benzilamini, piperidini in pirolidini.
Termin “prodrug” se nanaša na metabolni prekurzor spojine s formulo I (ali na njegovo sol), ki je farmacevtsko sprejemljiv. Tak metabolni prekurzor je lahko v fazi uporabe neaktiven, vendar se v aktivno spojino s formulo I pretvori in vivo. Termin “aktivni metabolit” se nanaša na metabolni produkt spojine s formulo I, ki je farmacevtsko sprejemljiv in učinkovit. Metabolni prekurzorji in aktivni metaboliti spojin s formulo I so lahko določeni z uporabo poznanih tehnik.
Za določanje stopnje aktivnosti različnih oblik spojin v GnRH sistemu se lahko uporabljajo številne znane analize in tehnike. Analize vezanja liganda se uporabljajo za določanje interakcij z receptorjem, ki nas zanima. Ko nas zanima vezanje, se lahko uporablja označen receptor, pri čemer je marker fluorescer, encim, radioizotop ali podoben, ki registrira merljive spremembe nastale zaradi vezanja receptorja. Alternativno lahko strokovnjak s tega področja pripravi protitelo receptorja, ki je markirano. S tem je omogočeno povečanje oz. ojačanje signala. Vezanje je lahko prav tako določeno s kompetitivno premestitvijo liganda vezanega na receptor, pri čemer je ligand označen z detektabilnim markerjem. Aktivnost agonista in/ali antagonista je lahko določena na osnovi proučevanja intaktnega organizma ali celice, pri čemer se določa sprememba v funkciji organizma ali sprememba v celični funkciji zaradi vezanja spojine, ki je predmet zanimanja. Na voljo so različne naprave za detektiranje celičnega odziva, kot je mikrofiziometer proizvajalca MolecularDevices, Redwood City, Kalifornija. Prav tako so na strokovnem področju poznane in vitro in in vivo analize za merjenje aktivnosti GnRH antagonista. Glej npr. Bowers s sodelavci, “LH suppression in cultured rat pituitary celiš treated with 1 ng of LHRH”, Endocrinology, 1980, 106:675-683 (in vitro) in Corbin s sodelavci, “Antiovulatory activity (AOA) in rats”.
Endocr. Res. Commun. 1975, 2:1-23 (in vivo). Spodaj so opisani posebni testni protokoli, ki se lahko uporabljajo.
Na primer, antagonisti GnRH receptorja so lahko funkcionalno določeni z merjenjem spremembe v zunaj celičnih acidifikacijskih hitrostih. Sposobnost spojin, da zavirajo ekstracelulamo acidifikacijsko hitrost, ki je povzročena z GnRH v HEK 293 celicah kot Človeških GnRH receptorjih, je merilo za antagonistično aktivnost spojin in vitro. Približno 100,000 celic/ustrezno posodo je mobiliziranih v agaroznem suspenzijskem mediju (Molecular Devices) in poškropljenih oz. premočenih z nepufranim MEM medijem z uporabo mikrofiziometra Cytosensor® Microphysiometer’ (Molecular Devices). Sledi vzpostavljanje celičnega ravnotežja dokler ni doseženo stanje stabilne bazalne acidifikacijske hitrosti (približno eno uro). Posnete so kontrolne odzivne krivulje na določeno količino GnRH (10'11 M do 10’7 M). Spojine so nato prepuščene 15 minutnemu inkubiranju pred stimulacijo z GnRH. in testirane na aktivnost antagonista. Po inkubaciji s testnimi spojinami so v prisotnosti ali odsotnosti različnih koncentracij testnih spojin ponovno dobljene kontrolne odzivne krivulje na določeno količino GnRH. Da bi določili ali spojine nevtralizirajo povečanje ekstracelulamih acidifikacijskih hitrosti, ki so posledica kompetitivnih reakcij GnRH z GnRH receptorjem, je izvedena Schild regresij ska analiza. Glej npr. acidifikacijski odziv z uporabo antagonista peptida Antide (kataloška številka
CAS je 11258-12-4) prikazan na sliki 2 (Antide je bil kupljen pri Sigma-i, gre za produkt št. A8802 (‘acetyl-B-(2-Napthyl)-D-Ala-D-p-Chloro-Phe-B-(3-Pyridyl)-D-Ala-Ser-Ne(Nicotinoyl)-Lys-Ne-(Nicotinoyl)-D-Lys-Leu-Ne-(Isopropyl)-Lys-Pro-D-Ala-NH2’). Acidifikacijski odzivi celic na GnRH so prikazani na krivuljah na sliki 2, kjer je krivulja A značilna za prvo izpostavitev, krivulja B za drugo izpostavitev in krivulja C za tretjo izpostavitev. Celični odziv na GnRH v prisotnosti 30 nM Antide je prikazan na krivulji D slike 2.
Pri drugem testu lahko akumulacijo celotnih inozitol fosfatov merimo z ekstrakcijo mravljične kisline iz celic, kiji sledi separacija fosfatov na Dowex koloni. Celice so ločene z uporabo tripsina v dve plošči z 12-imi odprtinami in predhodno označene oz. markirane z 3H-mioinozitolom (1.85χ101θ Bq - 0.0074χ101θ Bq na ml) za 16-18 ur v brezinozitolnem mediju. Medij je nato izsesan, celice pa so sprane ali z IX HBSS, 20mM HEPES (pH 7.5) ali brezserumskim DMEM, IX HBSS, 20 mM HEPES (pH 7.5), ki vsebuje agonist. Nato je dodan 20 mM LiCl, celice pa so inkubirane za željen čas. Medij je nato izsesan, reakcija pa je ustavljena z dodatkom ledeno mrzle 10 mM mravljične kisline, ki prav tako služi za ekstrakcijo celičnih lipidov. Inozitol fosfati so ločeni z ionsko izmenjalno kromatografijo na Dowex kolonah, ki so nato sprane s 5 ml 10 mM mioinozitola in 10 mM mravljične kisline. Kolone so nato sprane z 10 ml 60 mM natrijevega formata in 5 mM boraksa. Celotni inozitol fosfati so eluirani z 4.5 ml IM amonijevega formata, 0.1 M mravljično kislino.
V okviru izuma so preferirana tista GnRH sredstva, ki imajo K; vrednost približno 10 μΜ ali manj. Še posebej so preferirana tista GnRH sredstva, ki imajo K, vrednost v nanomolarnem območju.
Farmacevtske učinkovine
Farmacevtske učinkovine v okviru izuma obsegajo učinkovito GnRH supresivno količino najmanj enega GnRH sredstva v skladu z izumom in inerten ali farmacevtsko sprejemljiv nosilec ali topilo. Te sestavine so lahko pripravljene v enoti - dozirni obliki, ki je primerna za željen način uporabe, npr. parenteralno ali oralno.
Za zdravljenje bolezni ali stanj, ki so posledica GnRH agonizma ali antagonizma, se farmacevtska učinkovina v okviru izuma uporablja v primerni obliki nastali s kombiniranjem terapevtsko učinkovite količine (tj. GnRH modulirana količina, ki je učinkovita pri doseganju terapevtske učinkovitosti) najmanj enega GnRH sredstva, ki je predmet izuma (kot aktivne sestavine) z enim ali večimi farmacevtsko primernimi nosilci ali topili. Takšne oblike so lahko pripravljene v skladu s konvencionalnimi postopki, npr. s primernim mešanjem, granuliranjem in stiskanjem ali raztapljanjem sestavin na poznane načine. Alternativno so lahko v farmacevtski učinkovini uporabljene ena ali več različnih aktivnih sestavin, kot so različni GnRH antagonisti.
Farmacevtski nosilec je lahko ali v trdni ali tekoči obliki. Vzorčni trdni nosilci vključujejo laktozo, sukrozo, loj, želatino, agar, pektin, akacijo, magnezijev stearat, stearinsko kislino in podobne. Tekoči nosilci se lahko nahajajo v obliki sirupa, kikirikijevega olja, olivnega olja, vode in podobno. Podobno lahko nosilec ali topilo vključuje časovno zadržane (angl. ‘time-delay’) ali časovno sproščujoče (angl. ‘time- release’) materiale, kot je gliceril monostearat ali gliceril distearat, sam ali v kombinaciji z voskom, etilcelulozo, hidroksipropilmetilcelulozo, metilmetakrilatom ali podobnimi.
Uporabljene so lahko različne farmacevtske oblike. Npr., če je uporabljen trden nosilec, ima lahko preparat obliko tablete, trdne želatinaste kapsule, praška, pilule, majhne okrogle tabletke ali pastile. Količina trdnega nosilca se lahko močno spreminja, in sicer od približno 25 mg do približno 1 g. Če je uporabljen tekoč nosilec ima lahko preparat obliko sirupa, emulzije, mehke želatinaste kapsule, sterilne injekcijske raztopine, suspenzije v ampuli ali epruveti ali brezvodne tekoče suspenzije.
Da bi dobili stabilno, v vodi topno dozirno obliko, so lahko farmacevtsko sprejemljive soli spojine s formulo I raztopljene v vodni raztopini organske ali anorganske kisline, kot je 0.3M raztopina jantarne kisline ali še bolje v citronovi kislini. Če topna oblika soli ni na voljo, potem je sredstvo lahko raztopljeno v enem ali večih primernih topilih. Primeri ustreznih topil vključujejo alkohol, propilen glikol, polietilen glikol 300, polisorbat 80, glicerin in podobne v koncentracijah v območju od 0% do 60% celotnega volumna. V predstavljenem primeru je spojina s formulo I raztopljena v DMSO in razredčena z vodo. Učinkovina je prav tako lahko v obliki raztopine soli spojine s formulo I v primernem vodnem mediju, kot je voda ali izotonična slana ali dekstrozna raztopina.
Farmacevtske učinkovine, ki so predmet pričujočega izuma, so lahko proizvedene z uporabo konvencionalnih tehnik, npr. postopkov mešanja, topljenja, granuliranja, izdelave dražejev, drobljenja, izdelave emulzij, kapsul ali liofiliziranja. Farmacevtske učinkovine so lahko oblikovane na konvencionalni način z uporabo enega ali več fiziološko sprejemljivih nosilcev, ki vsebujejo ekscipiente ali pomožna sredstva izbrana z namenom olajšanja predelave aktivnih spojin v farmacevtske preparate. Primerna oblika je izbrana glede na način uporabe.
Za pripravo injekcijskih preparatov so lahko sredstva, ki so.predmet izuma, oblikovana v vodne raztopine, preferenčno v fiziološko kompatibilne pufre, kot je Hanksova raztopina,
Ringerjeva raztopina ali fiziološki slani pufer. Za transmukosalno uporabo se uporabljajo prodiranja sposobni penetranti in so izbrani izmed poznanih na tem področju.
Za oralno uporabo so sredstva lahko oblikovana s kombiniranjem aktivnih sestavin s farmacevtsko sprejemljivimi nosilci poznanimi na strokovnem področju. Takšni nosilci omogočajo, da so snovi, ki so predmet izuma, oblikovane v tablete, pilule, dražeje, kapsule, tekočine, gele, sirupe, blata, suspenzije in podobne za oralno uporabo bolnika, ki ga zdravimo. Farmacevtski preparati za oralno uporabo so lahko dobljeni s kombiniranjem enega ali več sredstev s trdnim ekscipientom, možnim brušenjem nastale zmesi v granule, obdelavo zmesi granul po dodatku primernih pomožnih sredstev, če je to seveda potrebno, da bi dobili tablete ali dražeje. Primerni ekscipienti vključujejo polnila, kot so sladkoiji (npr. laktoza, sukroza, manitol ali sorbitol) in celulozni preparati (npr. koruzni škrob, pšenični škrob, rižev škrob, krompirjev škrob, želatina, drevesna smola, metil celuloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijeva karboksimetilceluloza in/ali polivinilpirolidon (PVP)). Če je potrebno, so lahko dodana sredstva za razkrojevanje, kot je zamrežen PVP, agar ali alginska kislina ter njena sol, kot je natrijev sulfat.
Jedra dražejev so obdana s primernimi premazi. V ta namen se lahko uporablja koncentrirana raztopina sladkorja, ki lahko eventualno vsebuje arabski gumi, PVP, Carbopol™ gel, polietilen glikol, titanov dioksid, lakirne raztopine in/ali eno ali več primernih organskih topil. Tabletam in premazom za dražeje so lahko dodana barvila ali pigmenti za identifikacijo ali za karakterizacijo različnih kombinacij aktivnih spojin v dozi.
Farmacevtske oblike, ki so primerne za oralno uporabo, vključujejo 'push-fit' kapsule narejene iz želatine, kot tudi mehke, hermetično zaprte kapsule napravljene iz želatine in mehčalnega sredstva, kot je glicerol ali sorbitol. 'Push-fit' kapsule lahko vsebujejo aktivne sestavine v primesi z enim ali več polnili, kot je laktoza, z vezivnim sredstvom, kot je Škrob, in/ali lubrikanti oz. mazivi, kot je loj ali magnezijev stearat, in eventualno stabilizatorji. V mehkih kapsulah je aktivna snov lahko raztopljena ali suspendirana v primerni tekočini, kot je maščobno olje, tekoč parafin, ali tekoč polietilen glikol. Nadalje, dodani so lahko stabilizatorji. Za ustno uporabo so lahko učinkovine oblikovane v obliko tablet ali pastil na konvencionalni način.
Za inhalacij sko uporabo se lahko spojine v okviru pričujočega izuma uporabljajo v obliki aerosolnega spreja iz zavoja, ki je pod tlakom ali razpršilca, z uporabo primernega nosilnega plina, npr. diklorodifluorometana, triklorofluorometana, diklorotetrafluoroetana, ogljikovega dioksida, ali drugega primernega plina. V primeru aerosolov pod tlakom je lahko dozirna enota določena z nastavitvijo ventila, da dovede odmegeno količino. Kapsule ali patrone npr. želatine, ki jih uporabljamo v inhalatorju ali insuflatogu, so lahko oblikovane tako, da vsebujejo praškasto mešanico sredstva in primerne praškaste osnove, kot je laktoza ali škrob.
Sredstva so lahko oblikovana v obliko za parenteralno uporabo z injiciranjem, npr. z injekcijo s pilulo ali s kontinuirno infuzijo. Oblike za vbrizgavanje so lahko pripravljene v obliki dozirne enote, npr. v ampulah ali v večdoznih embalažah, z dodanim prezervativom. Učinkovine se lahko oblikujejo v oblike, kot so suspenzije, raztopine ali emulzije v oljnem ali vodnem mediju, in lahko vsebujejo sredstva za oblikovanje, kot so suspendiraj oča, stabilizirajoča in/ali disperzna sredstva.
Farmacevtske oblike za parenteralno uporabo vključujejo vodne raztopine aktivnih spojin v vodotopni obliki. Nadalje, suspenzije aktivnih snovi so lahko pripravljene v obliki primernih oljnih injicimih suspenzij. Primerna lipofilna topila ali mediji vključujejo maščobna olja, kot je sezamovo olje, ali sintetične estre maščobnih kislin, kot so etil oleat ali trigliceridi ali liposomi. Vodne injekcijske suspenzije lahko vsebujejo snovi, ki povečujejo viskoznost suspenzij, kot je natrijeva karboksimetil celuloza, sorbitol ali dekstran. Eventualno lahko suspenzije vsebujejo tudi primerne stabilizatoge ali sredstva, ki povečujejo topnost spojin in s tem omogočajo pripravo visoko koncentriranih raztopin.
Aktivna sestavina se lahko nahaja tudi v praškasti obliki predenje uporabljena pomešana s primernim medijem, npr. sterilno vodo brez pirogena. Snovi so lahko oblikovane kot rektalne farmacevtske oblike, kot so npr. svečke ali zadrževalni klistirji (angl. ‘retention enemas’), ki npr. vsebujejo konvencionalno supozitomo osnovo, kot je kakavovo maslo ali drugi gliceridi.
Kot dodatek oblikam, ki so bile opisane zgoraj, so lahko spojine oblikovane kot skladiščeni preparati. Takšne dolgo delujoče oblike se lahko uporabljajo z implantacijo (na primer, subkutano ali intramuskulamo) ali z intramuskulamim injiciranjem. Tako so npr. spojine lahko oblikovane s primernimi polimernimi ali hidrofobnimi materiali (npr. kot emulzija v sprejemljivem olju) ali ionsko-izmenjevalnimi smolami, ali kot slabo topni derivati, na primer kot slabo topna sol.
Primer farmacevtskega nosilca za hidrofobne spojine v okviru izuma je sistem topila, ki vsebuje benzil alkohol, nepolamo površinsko aktivno sredstvo, organski polimer, ki se meša z vodo in vodno fazo. Sistem topila je lahko sistem VPD topila (VDP je 3% w/v raztopina nepolamega površinsko aktivnega polisorbata 80 in 65% w/v raztopina polietilen glikola 3000, razredčenega do željenega volumna z absolutnim etanolom). Sistem VPD topila (VPD:5W) sestoji iz VPD, ki je v razmerju 1:1 razredčen s 5% raztopino dekstroze v vodi. Ta sistem topila dobro raztaplja hidrofobne spojine, nastale oblike pa so nizko toksičnoste za sistemsko uporabo. Kot bo očitno, se lahko deleži primernega sistema topila spreminjajo glede na topnostne in toksikološke karakteristike. Nadalje, identiteta komponent topila se lahko spreminja; na primer, namesto polisorbata 80 se lahko uporabljajo druga nizko toksična površinsko aktivna sredstva; delež polietilenglikola se lahko spreminja; eden ali več drugih biokompatibilnih polimerov (npr. PVP) je lahko dodanih ali lahko zamenjajo polietilen glikol; in drugi sladkorji ali polisaharidi lahko nadomestijo dekstrozo.
Alternativno se lahko za hidrofobne farmacevtske spojine uporabljajo drugi transportni sistemi. Liposomi in emulzije so znani primeri transportnih medijev ali nosilcev za hidrofobna zdravila in se lahko uporabljajo za formiranje primernih preparacij. Prav tako so lahko uporabljajo določena organska topila, kot je dimetilsulfoksid, čeprav lahko ta povzroča povečanje toksičnosti. Nadalje je lahko transport dosežen z uporabo sistema z nepretrganim sproščanjem, kot so semipermeabilni matriksi trdnih hidrofobnih polimerov, ki vsebujejo terapevtsko sredstvo. Na voljo so različni nepretrgano sproščujoči materiali in so poznani strokovnjakom na tem področju. Kapsule z nepretrganim sproščanjem lahko odvisno od njihove kemijske narave sproščajo spojine v časovni periodi, ki traja od nekaj tednov ali do več kot 100 dni. Odvisno od kemijske narave in biološke stabilnosti terapevtskega sredstva se lahko uporabljajo dodatne tehnike za proteinsko stabilizacijo.
Farmacevtske učinkovine lahko prav tako vsebujejo primerne trdne ali gelne nosilce ali ekscipiente. Primeri takšnih nosilcev ali ekscipientov vključujejo kalcijev karbonat, kalcijev fosfat, sladkorje, škrobe, celulozne derivate, želatino in polimere, kot so polietilen glikoli.
Nekatere od spojin, ki so predmet tega izuma, se lahko nahajajo v obliki soli s farmacevtsko kompatibilnimi nasprotnimi ioni. Farmacevtsko sprejemljive soli so lahko oblikovane s številnimi kislinami, vključno s klorovodikovo, žveplovo, ocetno, mlečno, vinsko, jabolčno, jantarno in podobnimi kislinami. Soli so bolj topne v vodi ali drugih protonskih topilih kot so ustrezne nesolne oblike.
Upoštevano bo, da se bodo dejanske količine sredstev uporabljenih v učinkovinah v okviru izuma spreminjale glede na posamezen kompleks, ki je uporabljen, in sicer glede na posamezno formulirano učinkovino, glede na način uporabe in posamezno lego, gostitelja in bolezen, ki jo zdravimo. Optimalne količine oz. doze za določen niz pogojev lahko določijo strokovnjaki s tega področja, z uporabo konvencionalnih testov za določanje doz glede na eksperimentalne podatke za določeno spojino. Za oralno uporabo bo primerna uporabljena dnevna doza od 0.001 do približno 1000 mg/kg telesne teže, pri čemer se postopek zdravljenja ponavlja v primernih intervalih. Metabolni prekurzoiji so lahko dozirani v teži, kije kemijsko ekvivalentna teži popolno aktivnih spojin.
Primeri specifičnih farmacevtskih preparacij glede na izum so opisani v nadaljevanju spodaj.
Parenteralna sestava: Za pripravo farmacevtske učinkovine v okviru pričujočega izuma, ki je primerna za uporabo z injiciranjem, je potrebno 100 mg farmacevtsko sprejemljive v vodi topne soli spojine s formulo I raztopiti v DMSO in nato mešati z 10 ml 0.9% sterilne solne raztopine. Nastala zmes je prenesena v obliko dozirne enote, ki je primerna za uporabo z injiciranjem.
Oralna sestava: Za pripravo oralno uporabljive farmacevtske učinkovine je potrebno 100 mg spojine s formulo I zmešati z 750 mg laktoze. Nastala zmes je prenešena v obliko dozirne enote, kije primerna za oralno uporabo, kot je trdna želatinasta kapsula.
Sinteza GnRH sredstev
Intermediati
Spojine s formulo I so lahko izdelane z uporabo intermediatnih spojin skladno z izumom. Bolj natančno, intermediatne spojine izuma so spojine z naslednjimi formulami II, III in IV:
R\
R9 n'
I ZR I R11
R9
R9
A/
R\
H
An'' (10
CH2 ch2
CH2 k(H2C) ch2
CH2
CH2 nh2 nh2 (II) nh2 (III) (IV) pri čemer je:
j je 1 ali 2; kje 1,2, 3,4 ali 5;
o
R je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil;
R9 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CN, NO2 ali CO2R1;
R10 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil; CH2OR1; (CF^jpOR1; CO2R1;
ali (CH2)pC(O)R2, kjer je p celo število od 1 do 6 in R2 je H, OR1, SR1, N(Rl)2, ali C(R*)3; R11 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CH2O-fenil, CH2O-benzil, fenil ali benzil;
ali katerakoli dva izmed R8, R9, R10 in R11 skupaj tvorita 5- ali 6- členski heterocikel; in vsak R1 je neodvisno izbran izmed H in substituiranih ali nesubstituiranih nižjega alkila, O-nižjega alkila, in S-nižjega alkila, s tBu kot preferirano R*skupino. Preferirani intermediati vključujejo:
H xt\L .NHBoc
Y
NBoc
HjN'
Takšne intermediatne spojine sodelujejo pri tvorbi XrX2 dela spojin, ki so predmet pričujočega izuma, pri čemer pri reakciji amino skupine z aldehidom nastane sekundarni amin, kije lahko nato aciliran v spojine s splošno formulo I.
Reakcijska shema
Spojine s formulo 1 so lahko pripravljene v skladu z naslednjo splošno reakcijsko shemo, kjer sferični simbol predstavlja (CH2)j, ciklopentil, cikloheksil, ali benzilni del formul 11,111 ali IV:
z
Za ilustracijo, pri sintezi prikazani v reakcijski shemi spodaj nastopajo intermediati s formulo II pri pripravi spojin s formulo I, kjer je enota Xi-X2 l-gvanidinometil-4aminometilcikloheksil. Kot je bolj podrobno opisano spodaj, korak 1 vključuje zaščito bazične skupine z uporabo terc-butoksikarbonila (Boc) kot zaščitne skupine. V prikazani shemi je bazična skupina gvanidinil, vendar, kot bo zlahka očitno za poznavalce, je ta reakcija uporabna tudi za druge bazične skupine, kot so amini in amidini. Korak 2 vključuje tvorbo sekundarnega amina pri reakciji z aldehidom Y-CHO, pri čemer je Y definiran zgoraj. Korak 3 vključuje aciliranje sekundarnega amina z Z-COC1, pri čemer je Z definiran zgoraj. Korak 4 vključuje odstranitev zaščite za bazične skupine s kislo hidrolizo. Produkt je lahko izoliran kot ustrezna sol.
Korak 1: Priprava zaščitene spojine z l-(N,N'-diDoc)-gvanidinoinelilacijo:
Spodaj opisana alternativna koraka 1 (A) in 1(13) predstavljata dva splošna l-(N,N’-diBoc)gvanidinometilacijska postopka.
Korak 1(A): K raztopini diamina (2.00 nnnol ekv.) v THF (0.7M) je dodana raztopina 1-Hpirazol-l-(N,N-bis(terc-buloksikarbonil)karboksamidina) (1.00 mmol ekv.) v THF (0.7M). Raztopina je izpostavljena 3 urnemu mešanju pri sobni temperaturi, ali dokler ni mogoče opaziti nadaljnje tranformacije s TLC (tankoplastno kromatografijo). Topilo je nato odstranjeno pod reduciranim tlakom. Nastane gosto tekoč preostanek, ki je prenesen v etil acetat (~1.5 kratna količina volumna THF uporabljenega pri reakciji ali volumen topila, ki je potreben za raztopitev količine dobljenega ostanka) in spran z vodo do nevtralnega pH. Organski sloj je spran s slanico, posušen na MgSO4 in koncentriran. Produkt je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s primernim eluirnim topilom (ki ga je mogoče lahko določiti, npr. z uporabo 5% MeOH v diklorometanu kol začetno točko). Topila so nato odstranjena in vacuo in tako nastane l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-vczan amin. Dodatno so lahko uporabljeni drugi reagenti, ki omogočajo vezanje zaščitene N,N’diBoc-gvanidinske enote na diamine, kot je l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2tiopscvdosečnina (kataloška številka CAS 107819-90-0). Alternativno je lahko namesto raztopine opisane zgoraj dodan l-H-pirazol-l-(N,N-bis(tercbutoksikarbonil)karboksamidin) v trdni obliki.
Korak (1Β): K raztopini diamina (1.00 mmol ekv.) v THF (0.07M) je po deležih v trdni obliki (v 10-minutnem časovnem obdobju) dodajan l-H-pirazol-l-(N,N-bis(terc-butoksikarbonil)karboksamidin) (1.00 mmol ekv.). Raztopina je izpostavljena 0.5 urnemu mešanju pri sobni temperaturi. Topilo je nato odstranjeno pod reduciranim tlakom in tako nastane gosto tekoč ostanek. Le ta je prenešen v etil acetat (0.5 kratna količina volumna THF uporabljenega pri reakciji ali volumen topila, ki je potreben za raztopitev količine dobljenega ostanka) in dvakrat spran z vodo. Plasti so ločene, produkt pa je očiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s 100% etil acetatom, da so odstranijo kakršnekoli nepolame nečistoče in nato še s 100% izopropil alkoholom. Tako nastane čist produkt. Topila se odstranijo in vacuo in tako preostane željen produkt. Značilni TLC pogoji so 15:85:0.1 metanol/kloroform/ocetna kislina. Značilni izkoristek se nahaja v območju od 40% do 44% za željeno zaščiteno spojino.
Korak 2: Reduktivno aminiranje
Reduktivno aminiranje je lahko izvedeno na primerni način. Za reduktivno aminiranje aldehidov in ketonov z natrijevim triacetoksiborohidridom glej v splošnem: Abdel-Magid s sodelavci, J. Org. Chem., 1996, 61:3849. Dva alternativna reduktivna-aminacijska postopka sta opisana spodaj.
Korak 2(A): 3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naft-aldehid (1.00 mmol ekv.) in 1(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-vezan-amin (1.00 mmol ekv.) sta raztopljena v metanolu (0.09M). Nato je dodana 1% ledocetna kislina v raztopini metanola (10% volumna uporabljenega metanola), ki ji sledi dodatek NaCNBH3 (1.00 mmol ekv.). Reakcijska zmes je izpostavljena mešanju čez noč. Reakcija je spremljana s TLC zasledovanjem treh komponent (aldehida, željenega produkta in začetnega gvanidinskega derivata). Reakcija je prekinjena z dodatkom vode (50% volumna uporabljenega metanola), ekstrahirana z diklorometanom (10 kratni volumen uporabljenega metanola), in sprana z nasičenim natrijevim bikarbonatom. Organska plast je posušena na magnezijevem sulfatu, filtrirana in koncentrirana. Produkt je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran z ustreznim elucijskim topilom (npr. 3:1 etil acetata v heksanih za odstranitev nezreagiranega aldehida, ki ji sledi eluiranje z 1:1 etil acetatom v heksanih), da bi bil tako dobljen željen reduktivni aminacijski produkt. V nekaterih primerih bo 2 urno segrevanje do temperature vrenja vodilo do reakcije tvorbe imina. Glej tudi, Abdel-Magid s sodelavci, J. Org. Chem., 1996, 61:3849, ki opisuje reduktivno aminiranje aldehidov in ketonov z natrijevim triacetoksiborohidridom.
Korak 2(B): 3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-naft-aldehid (1.00 mmol ekv.) in 1(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-vezan-amin (1.00 mmol ekv.) sta raztopljena v metanolu (0.09M). Nato je dodan NaBH4 (1.00 mmol ekv.) (v etanolu z dodatnimi laboratorijskimi postopki podanimi spodaj, ali previdno kot trdna snov) in vsebina reakcije je mešana čez noč. Reakcija je spremljana s TLC z zasledovanjem treh komponent (aldehida, željenega produkta in začetnega gvanidinskega derivata). Reakcija je prekinjena z dodatkom vode (50% volumna uporabljenega metanola), ekstrahirana z diklorometanom (10 kratni volumen uporabljenega metanola) in sprana z nasičenim natrijevim bikarbonatom. Organska plast je posušena na magnezijevem sulfatu, filtrirana in koncentrirana. Produkt je očiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s primernim elucijskim topilom (ki ga poznavalec zlahla določi ali, npr. z 3:1 etil acetatom v heksanih za odstranitev nezreagiranega aldehida, ki mu sledi eluiranje z 1:1 etil acetata v heksanih), da bi bil tako dobljen željen reduktivni produkt aminiranja. V nekaterih primerih lahko 2 urno segrevanje do temperature vrenja privede do tvorbe imina.
Korak 3: Aciliranje
Produkti reduktivnega aminiranja (1.00 mmol ekv.) so raztopljeni v diklorometanu (~0.2 do 0.05M, odvisno od topnosti snovi), sledi dodatek trietilamina (2.00 mmol ekv.) in 2furoil klorida (1.00 mmol ekv.). Vsebine reakcije so čez noč izpostavljene mešanju pri sobni temperaturi (RT). Reakcijska zmes je raztopljena z diklorometanom (5 kratna količina uporabljenega diklorometana) in sprana z nasičenim natrijevim bikarbonatom. Organski sloj je posušen na magnezijevem sulfatu in filtriran. Produkt je očiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s primernim elucijskim topilom (npr. 3:1 heksani: etil acetat). Topila so nato odstranjena in vacuo in tako nastane aciliran produkt.
Korak 4: Odstranitev zaščite bazične skupine
Produkt iz koraka aciliranja (1.00 mmol ekv.) je raztopljen v raztopini 25-50% TFA v diklorometanu (0.02M), in reakcijske vsebine so mešane pri sobni temperaturi (15-20 minut; raztopina postane svetlo rdeče oranžna). Reakcijske vsebine so mešane za nadaljnjo 1 uro in 20 minut ali dokler ni zaključena odstranitev zaščite BOC. Reakcija je prekinjena s koncentracijo in vacuo, ki ji sledi dodatek voda/acetonitril (0.006M) in liofilizacija čez noč. Končna spojina je očiščena z metodologijo tekočinske kromatografije z visoko ločljivostjo (HPLC). Topila so odstranjena in vacuo (izkoristek je v območju med 30 do 50%). Tako dobimo končen produkt.
Alternativni postopek za odstranjevanje Ν,Ν’-bis-BOC gvanidinov z uporabo kositrnega tetraklorida, ki lahko daje odgovarjajoče gvanidin kloridne soli, je opisan v publikaciji Miel s sodelavci, Tetrahedron Letters, 1997, 38:7865-7866.
Priprava reagentov:
Reagenti uporabni za sintezo spojin so lahko dobljeni ali pripravljeni v skladu s tehnikami, ki so na področju poznane. Na primer, priprava prostih aminov iz navadnih oblik soli in matičnih raztopin reagenta je zelo uporabna za izvedbo reakcij v laboratoriju. Glej tudi Abdel-Magid s sodelavci, “Reductive amination of aldehydes and ketones with sodium triacetoxyborohydride”, J. Org. Chem., 1996,61:3849.
Metanolne raztopine prostih baz so lahko pripravljene iz vodikovega klorida, divodikovega klorida, vodikovega bromida ali drugih soli, ko so proste baze topne v metanolu. V okviru tega postopka je enkrat dodan natrijev metoksid, pozornost je potrebno usmeriti na preprečitev izpostavitve zraku, ker se proste baze, še posebej primarni amini absorbirajo na ogljikov dioksid iz zraka in tvorijo soli. 10 ml količina 0.1 M raztopine proste baze v metanolu je lahko pripravljena kot sledi. Zatehtaj 1.0 mmol soli monovodikovega klorida v očiščeno erlenmajerico z vrelnim kamenčkom in dodaj 7 ml metanola. Mešani gošči dodaj 229 ml (1.0 mmol, ekv.) natrijevega metoksida v metanolu (25 utežnih %, 4.37M), zapri steklenico in zmes intenzivno mešaj 2 uri. Videz gošče se bo včasih spremenil zaradi tvorbe finejše mlečne oborine natrijevega klorida. Filtriraj goščo skozi 15 ml stekleni filter s srednjo poroznostjo, speri filtmo pogačo z 1-2 ml metanola in prenesi filtrat v 20 ml stekleničko in razredči na 10 ml z metanolom. Teoretični izkoristek natrijevega klorida je približno 59 mg, rekuperacija pa zaradi slabe topnosti v metanolu ponavadi ni kvantitativna. Za sol divodikov klorid je zahtevan drugi ekvivalent natrijevega metoksida (458 ml).
0.5M raztopina natrijevega borohidrida v etanolu je lahko pripravljena kot sledi. Natrijev borohidrid (520 mg, 13.8 mmol) je mešan v čistem (ne-denaturiranem) brezvodnem etanolu (25 ml) za ~2-3 minute. Suspenzija je filtrirana skozi stekleni filter s srednjo poroznostjo, da bi bila tako odstranjena majhna količina neraztopljene trdne snovi (značilno je približno 5% celotne mase borohidrida, ali 25 mg). Filtrat mora imeti videz brezbarvne raztopine, ki razvija samo malo vodika. Raztopina mora biti uporabljena nemudoma, ker znatno razpade v periodi nekaj ur, pri čemer nastane želatinasta oborina. Natrijev borohidrat je higroskopičen. Zato je potrebno preprečiti izpostavitev na zraku s pripravo raztopine takoj po tehtanju trdne snovi. Natrijev borohidrid ima topnost približno 4% v etanolu pri sobni temperaturi. To ustreza malo čez 0.8M. Kakorkoli, včasih celo po mešanju za > 5 minut ostane majhen procent trdne snovi, ki je neraztopljena ne glede na pripravljalno koncentracijo.
Za izvedbo laboratorijske sinteze spojin s formulo I, lahko priprava različnih reaktantov, ki so potrebni v reakcijski shemi opisani zgoraj, poteka v skladu z reakcijami opisanimi spodaj. Kot v preostali specifikaciji, so vse temperature v nadaljnjem opisu v stopinjah Celsiusa, vsi deleži in procenti se nanašajo na težo, razen če je drugače posebej omenjeno.
Vhodni materiali in drugi reagenti uporabni v primerih, ki sledijo, so lahko nabavljeni pri komercialnih dobaviteljih, kot sta Aldrich Chemical Company ali Lancaster Synthesis Ltd., in uporabljeni brez nadaljnjega čiščenja, razen če je drugače navedeno. Tetrahidrofuran (THF) in Ν,Ν-dimetilformamid (DMF) sta nabavljena pri Aldrich-u v SureSeal® steklenicah in sta uporabljena v obliki, v kateri sta dobljena. Vsa topila so prečiščena z uporabo standardiziranih metod, ki so poznane na področju, razen v primerih, ko je to drugače posebej omenjeno.
Spodaj opisane reakcije potekajo pod pozitivnim tlakom dušika ali z sušilno cevjo, pri sobni temperaturi (razen, če je drugače omenjeno), v brezvodnih topilih, reakcijske steklenice so zaprte z gumenimi septami za uvajanje substratov in reagentov z injekcijsko iglo. Steklovina je posušena v peči in/ali posušena s segrevanjem. Analizna tankoplastna kromatografija (TLC) je izvedena na steklenih silikagelskih 254 ploščah (Analtech (0.25 mm)) pri temperaturi 15.56°C pri čemer eluiranje poteka s primernimi razmerji topil (v/v). Reakcije so spremljane s TLC in prekinjene na osnovi porabljenega vhodnega materiala.
Tipske plošče so vizualizirane s p-anizaldehidnim razpršilnim reagentom ali fosfomolibdenskim kislinskim sredstvom (Aldrich Chemical, 20 utežnih % v etanolu) in aktivirane s toploto. Reakcije so značilno izvedene s podvajanjem reakcijskega volumna z reakcijskim topilom ali ekstrakcij skim topilom in nato sprane s potrebnimi vodnimi raztopinami z uporabo 25% volumna ekstrakcij skega volumna (razen v primerih, ko je drugače zahtevano). Nastale raztopine so posušene na brezvodnem Na2SO4 pred filtracijo, evaporacija topil poteka pod reduciranim tlakom na rotacijskem evaporatoiju dokler niso topila odstranjena in vacuo. 'Flash' kolonska kromatografija (Stili et al., A.J. Org. Chem., 1978, 43:2923) je izvedena z uporabo Baker-jevega flash silikagela (47-61 mm), pri Čemer je razmerje med silikagelom in surovim materialom približno 20:1 do 50:1, razen če je drugače določeno. Hidrogenoliza je izvedena pri potrebnem tlaku ali pri ambientnem tlaku.
1 H-NMR spektri so posneti z Brukerjevim instrumentom, ki obratuje pri 300 MHz, ^NMR spektri pa so posneti pri obratovanju pri 75 MHz. NMR spektri so dobljeni kot CDC13 raztopine (ovrednotene v ppm) z uporabo kloroforma kot referenčnega standarda (7.25 ppm in 77.00 ppm) ali CD3OD (3.4 in 4.8 ppm in 49.3 ppm) ali z internim tetrametilsilanskim standardom (0.00 ppm), ko je to ustrezno. Druga NMR topila so uporabljena, ko je to potrebno. Ko so zabeleženi večkratni piki, so uporabljene naslednje okrajšave: s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet, br = razširjen, dd = dublet dubletov, dt = dublet tripletov. Ko so podane konstante spajanja, so le te izražene v herzih.
Infrardeči spektri so posneti na Perkin Elmer FT-IR spektrometru, in sicer kot čista olja, kot KBr tablete, ali kot CDCI3 raztopine, pri čemer so spektri posneti v odvisnosti od valovnih števil (cm’1). Masni spektri so posneti z uporabo LSIMS ali elektrospreja. Tališča so nekorigirana.
Priprava gradbenega bloka 1-H-pirazol-l-karboksamidina:
V
1-H-pirazol-1-karboksamidin je pripravljen glede na referenco Bematowicza s sodelavci, J. Org. Chem., 1992, 57:2497-2502 (in reference navedene v tem prispevku) in zaščiten z diterc-butildikarbonatom. Tako nastane 1 -H-pirazol-1 -(N, N-bis(tercbutoksikarbonil)karboksamidin) v skladu z referenco Drake-a s sodelavci, Synth., 1994, 579-582.
Priprava l-(N,N'-diBoc)~ gvanidinometil-4-aminometilcikloheksana:
(a)
K raztopini 1,4-bis-aminometil-cikloheksana (20g, 0.14 mol) v THF (200 ml) je dodana raztopina 1-H-pirazol-1-(N,N-bis(terc-butoksikarbonil)karboksamidina) (22.0 g, 0.07 mol) v THF (100 ml). (Upoštevaj da l-H-pirazol-l-(N,N-bis(tercbutoksikarbonil)karboksamidin) ni nujno raztopljen v THF; ugodneje je, če je dodan čist kot trdna snov k procesu). Raztopina je 3 ure mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom tako, da nastane gosto tekoč preostanek, ki je prenešen v etil acetat (500 ml) in spran z vodo do nevtralnega pH. Organska plast je sprana s slanico, posušena na MgSO4 in koncentrirana. Produkt je prečiščen s pomočjo kolonske kromatografije na silikagelu in eluiran s 5% MeOH v diklorometanu. Topilo je odstranjeno in vacuo. Tako dobimo 11.6 g (43% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-4aminometil cikloheksana (spojina (a)). *H NMR (CDC13) δ 11.5 (br s, IH), 8.35 (br s, IH), 3.26 (dt, 2H), 2.52 (dd, 2H), 1.82-0.97 (m, 28H, s singletom pri 1.5).
Alternativna priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-3-aminometilcikloheksana je naslednja. K raztopini cis/trans 1,4-bis-aminometil-cikloheksana (9.0 g, 63.3 mmol) v THF (903 mL, 0.07M) je po deležih dodan kot trdna snov (v časovnem obdobju več kot 10 minut) l-H-pirazol-l-(N,N-bis(terc-butoksikarbonil)karboksamidin) (19.6 g, 63.3 mmol). Raztopina je 0.5 ure mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom tako, da nastane gosto tekoč ostanek, ki je prenešen v etil acetat (500 ml) in dvakrat spran z vodo. Sloji so ločeni in nastal produkt je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s 100% etil acetatom, da se odstrani o kakršnekoli nepolame nečistoče, sledi eluiranje s 100% izopropil alkoholom in tako nastane čist produkt. Topilo je odstranjeno in vacuo in tako dobimo 10.2 g (42% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)gvanidinometil-4-aminometilcikloheksana. *H NMR (CDC13) δ 11.5 (br s, IH), 8.35 (br s, IH), 3.26 (dt, 2H), 2.52 (dd, 2H), 1.82-0.97 (m, 28H, s singletom pri 1.5).
Reduktivno atniniranje:
3,5,5,8,8-pentametil-5,6,7,8-tetrahidro-2-nafit-aldehid (0.2021 g, 0.88 mmol) in 1-(N,N’diBoc)-gvanidinometil-4-aminometilcikloheksan (spojina (a), 0.337 g, 0.88 mmol) sta raztopljena v metanolu (10 ml). Nato je dodana 1% raztopina ledocetne kisline v metanolu (ΙΟΟμΙ); sledi dodatek NaCNBH3 (55.4 mg, 0.88 mmol, 1.0 ekv.). Reakcijske vsebine so izpostavljene mešanju čez noč. Reakcija je spremljana s TLC z zasledovanjem treh komponent (aldehida, željenega produkta in začetnega gvanidinskega derivata). Reakcija je prekinjena z dodatkom vode (-5 ml), ekstrahirana z diklorometanom (~100 ml), in sprana z nasičenim natrijevim bikarbonatom. Organska plast je posušena na magnezijevem sulfatu, filtrirana, koncentrirana in izpostavljena kolonsko kromatografskemu eluiranju z raztopino etil acetata v heksanih, pri čemer je razmerje med njimi 3:1, da se tako odstrani nezreagiran aldehid. Sledi eluiranje z raztopino etil acetat v heksanih, pri čemer je razmerje med njimi 1:1, ki vodi do željenega produkta (spojine (b), cikloheksila, cis/trans zmesi). Topila so odstranjena in vacuo (značilen splošen izkoristek je v območju med 50 in 80%).
Priprava aciliranega derivata, ki ji sledi odstranitev zaščite gvanidina:
Produkt reduktivnega aminiranja (320 mg, 0.54 mmol, 1.0 ekv.) je raztopljen v diklorometanu (10-15 ml). Sledi dodatek trietilamina (129 mg, 1.08 mmol, 2 ekv.) in 2furoil klorida (0.53 mmol, 52 μΐ, 1.0 ekv.) Reakcijske vsebine so izpostavljene mešanju čez noč pri sobni temperaturi. Raztopina je razredčena z diklorometanom (50 ml) in sprana z nasičenim natrijev bikarbonatom. Organska plast je posušena na magnezijevem sulfatu, filtrirana in prečiščena s kolonsko kromatografijo in eluirana z uporabo heksanov v etil acetatu, pri čemer je razmerje med njimi 3:1. Topila so odstranjena in vacuo (značilen splošen izkoristek reakcije je v območju od 50 do 80%). Tako nastane spojina (c).
Produkt reakcije aciliranja (spojina (c), 220 mg, 0.318 mmol, 1.0 ekv.) je raztopljen v raztopini 50% TFA v diklorometanu (20-25 ml). Reakcijske vsebine so mešane pri sobni temperaturi (15-20 minut; raztopina postane svetlo rdeče-oranžna). Reakcijske vsebine so izpostavljene mešanju še naslednjo 1 uro in 20 minut, dokler popolnoma ne poteče odstranitev zaščite. Prekinitev reakcije je pogojena s koncentracijo in vacuo (izkoristek je v območju od 30 do 50%). Tako nastane spojina (d).
Zgornja razprava se nanaša na pripravo spojin označenih od (a) - (d). Razprava v nadaljevanju se nanaša na pripravo vzorčnih spojin odznačenih od (e) - (k). Spojine (e) (k) se lahko uporabljajo, kot je opisano zgoraj, za izdelavo odgovarjajočih spojin z odstranjeno zaščito (prosti gvanidinil), pri čemer je potrebno izvesti hidrolizo v kislem.
Priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-3-amonimetilcikloheksana:
Raztopina cis/trans-1,3-bis-aminometilcikloheksana (7.5 g, 52.8 mmol) v THF (30 ml) je v 0.5 ure dodana k raztopini l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudosečnine (7.65 g, 26.3 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom, produkt pa je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/metanol kot eluenta. Dobimo 2.2 g (22% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil~3-aminometilcikloheksana (spojina (e)). ‘H NMR (CDC13) δ 11.53 (br s, IH), 8.40 (br s, IH), 3.28-3.30 (m, 2H), 2.54-2.61 (m, 2H), 1.81 (br s, 2H), 1.27-1.58 (m, 26H), 0.89 (m, IH), 0.65 (m, IH).
Alternativno je lahko spojina (e) pripravljena kot sledi. K raztopini cis/trans 1,3-bisaminometilcikloheksana (10.0 g, 70.3 mmol) v THF (1000 ml, 0.07M) je po deležih dodan v obliki trdne snovi (v časovnem obdobju več kot 10 minut) l-H-pirazol-l-(N,N-bis(tercbutoksikarbonil)karboksamidin)) (21.8 g, 70.3 mmol). Raztopina je 0.5 ure mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom tako, da nastane gosto tekoč preostanek, ki je prenešen v etil acetat (500 ml) in dvakrat spran z vodo. Plasti so ločene, produkt pa je prečiščen s pomočjo kolonske kromatografije na silikagelu in eluiran s 100% etil acetatom z namenom, da se odstranijo kakršnekoli nepolame nečistoče. Sledi eluiranje s 100% izopropil alkoholom. Nastane čist produkt. Topila so odstranjena in vacuo. Tako dobimo 11.4 g (41% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidinomelil-3aminometilcikloheksana. 'H NMR (CDC13) δ 11.53 (br s, IH), 8.40 (br s, IH), 3.28-3.30 (m, 2H), 2.54-2.61 (m, 2H), 1.81 (br s, 2H), 1.27-1.58 (m, 26H), 0.89 (m, IH), 0.65 (m, IH).
Priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-4-aminometilbenzena:
K raztopini p-ksililendiamina (6.44 g, 47.4 mmol) v THF (30 ml) je v 0.5 uri dodana raztopina l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopsevdosečnine (6.63 g, 22.9 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom, produkt pa je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/metanol kot eluenta. Tako dobimo 8.0 g (92% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-4-aminometil benzena (spojina (f)). !H NMR (CDC13) δ 11.54 (br s, IH), 8.56 (br s, IH), 7.29 (s, 4H), 4.60 (d, 2H), 3.86 (s, 2H), 1.64 (br s, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.48 (s, 9H).
Priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-3-aminometilbenzena:
(g)
K raztopini m-ksililendiamina (7.14 g, 52.5 mmol) v THF (30 ml) je v 0.5 uri dodana raztopina l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopsevdosečnine (7.57 g, 26.1 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom, produkt pa je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/metanol kot eluenta. Dobimo 7.9 g (80% izkoristek) 1(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-3-aminometilbenzena (spojina (g)). *H NMR (CDC13) δ 11.54 (br s, IH), 8.58 (br s, IH), 7.19-7.34 (m, 4H), 4.62 (d, 2H), 3.86 (s, 2H), 1.83 (br s, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.48 (s, 9H).
Priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidin-4-aminobutana:
nh2 (h)
K raztopini 1,4-diaminobutana (4.15g, 47.1 mmol) v THF (30 ml) je v 0.5 uri dodana raztopina l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopseudosečnine (6.83g, 23.6 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom, produkt pa je očiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/metanol kot eluenta. Dobimo 3.0 g (40% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidino-4-aminobutana (spojina (h)). *H NMR (CDCI3) δ 11.49 (br s, IH), 8.35 (br s, IH), 3.42-3.47 (m, 2H), 2.72-2.76 (t, 2H), 0.86-1.65 (m, 24H).
Alternativen postopek za pripravo spojine (h) je naslednji. K raztopini 1,4 diaminobutana (6.0 g, 68.1 mmol) v THF (972 ml, 0.07M) je po deležih v trdni obliki (v časovnem obdobju več kot 10 minut) dodan l-H-pirazol-l-(N,N-bis(tercbutoksikarbonil)karboksamidin) (21.5 g, 68.1 mmol). Raztopina je 0.5 ure mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom tako, da nastane gosto tekoča snov, ki je prenešena v etil acetat (500 ml) in dvakrat sprana z vodo. Plasti so ločene, produkt pa je očiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu in eluiran s 100% etil acetatom, da se odstranijo kakršnekoli nepolame nečistoče in nato še s 100 % izopropil alkoholom. Tako nastane čist produkt. Topilo je odstranjeno in vacuo. Dobimo 10.0 g (44% izkoristek) l-(N,N’-diBoc)-gvanidino-4-aminobutana. *H NMR (CDC13) δ 11.49 (br s, IH), 8.35 (br s, IH), 3.42-3.47 (m, 2H), 2.72-2.76 (t, 2H), 0.86-1.65 (m, 24H).
Priprava l-N,N-dimetilaminometil-4-aminometilbenzena:
K raztopini l-N,N-dimetil aminometil-4-karbonitril benzena (4.8 g, 30 mmol) v THF je dodana raztopina IM boran tetrahidrofuranskega kompleksa (90 ml). Zmes je 16 ur segrevana pri temperaturi vrelišča v dušikovi atmosferi. Po ohlajevanju na sobno temperaturo je dodana IM raztopina HCI v metanolu (100 ml). Reakcijska zmes je 3 ure segrevana pri temperaturi vrelišča. Produkt, ki izpade, je zbran s filtracijo, spran z dietil etrom in posušen in vacuo. Tako dobimo 5.9 g (83% izkoristek) produkta v obliki klorovodikove soli (spojina (i)): *H NMR (DMSO-d6) δ 8.65 (br s, 3H), 7.55 (dd, 4H), 4.25 (s,2H), 3.98 (s, 2H), 2.62 (s, 6H).
Priprava l-(N,N’-diBoc)-gvanidinometil-2-aminometilbenzena:
nh2
C
K raztopini o-ksililendiamina (7.14 g, 52.5 mmol) v THF (30 ml) je v 0.5 ure dodana raztopina l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-metil-2-tiopsevdosečnine (7.57 g, 26.1 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topilo je odstranjeno pod reduciranim tlakom in produkt je prečiščen s kolonsko kromatografijo na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/metanol kot eluenta. Tako nastane l-(N,N’-diBoc)gvanidinometil-3-aminometil benzen (spojina (j)).
Alternativno je lahko spojina (j) pripravljena na način, ki je analogen zgoraj opisani alternativni pripravi za spojino (e).
Priprava l-(N,N'-diBoc)-gvaHidinoiiielil-2-ainmoiiielilcikl(jlieksaiia:
o,
Y o
o
(k)
K raztopini cw//ra«s-l,2-bis-aniinometilcikloheksana (7.5 g, 52.8 mmol) v T1IF (30 ml) je v 0.5 ure dodana raztopina l,3-bis(terc-butoksikarbonil)-2-inelil-2-liopscvdoscčnine (7.65 g, 26.3 mmol) v THF (40 ml). Raztopina je 5 ur mešana pri sobni temperaturi. Topile je odstranjeno pod reduciranim tlakom, produkt pa je očiščen s kolonsko kromatografije na silikagelu z uporabo zmesi metilen klorid/niclanol kol eluenta. Tako dobimo 1-(N,N’diBoc)-gvanidinometil-2-aminomelilcikloheksan (spojina (k)).
Alternativno je lahko spojina (k) pripravljena na način, ki je analogen zgoraj opisani alternativni pripravi za spojino (e).
Priprava benzilaminov:
Naslednji splošen potek reakcije opredeljuje metodo za pripravo benzilaminov za uporabo z aldehidi, ki vsebujejo zaščitene gvanidine kol alternativo za dianiinc. Rcduklivna aminiranja potekajo pod identičnimi reakcijskimi pogoji kot veljajo za prej opisane zaščitene gvanidinske amine.
DMF/RT
VE2:
Ph3P
K raztopini 6-klorometil-1,2,3,4-tetrahidro-l, 1,4,4,-tetrametilnaftalena (10 g, 42.2 mmol, 1.00 mmol ekv.) v DMF (84 ml) je dodan natrijev azid (13.7 g, 211.2 mmol, 5.00 mmol ekv.) pri sobni temperaturi. Vsebine reakcije so mešane čez noč. Reakcija je spremljana s TLC (5% etil acetat v heksanih). Reakcija je prekinjena s prenosom reakcijskih vsebin v vodo in ekstrahiranjem z etil acetatom. Organska topila so odstranjena in vacuo, čist produkt pa je filtriran skozi zamašek silikagela (razmerje 10:1) in eluiran s heksani. Topilo je odstranjeno in vacuo in shranjeno pod vacuo. Tako nastane 10 gramov želj enega produkta 6-azidometil-l,2,3,4-tetrahidro-l,l,4,4-tetrametilnaftalena (97% izkoristek).
K raztopini 6-azidometil-l,2,3,4-tetrahidro-l,l,4,4-tetrametilnaftalena (9.0 g, 37 mmol, 1.00 mmol ekv.) v voda/THF (razmerje 1:5, 0.16M, 231 ml) je dodan na polimer vezan trifenilfosfm (14.8g, 44.38 mmol, 1.20 mmol ekv., ~3 mmol/g smole) pri sobni temperaturi. Reakcijske vsebine so mešane za 18-24 ur. Reakcija je spremljana s TLC (5% etil acetat v heksanih). Reakcija je prekinjena s filtriranjem skozi filterski papir in pranjem smole z metanolom. Produkt je kontroliran z *H NMR. Organska topila so odstranjena in vacuo, in produkt je filtriran skozi zamašek silikagela (razmerje 10:1) in eluiran s 25% izopropil alkoholom v kloroformu. Tako se odstranijo hitreje potujoče majhne nečistoče. Organska topila se odstranijo in vacuo, pri čemer nastane gosto olje, ki po določenem času otrdi (7.5 g, 93% izkoristek).
Zgoraj opisane kemijske reakcije imajo splošno uporabnost pri pripravi GnRH sredstev izuma. Podobno so lahko, z ustrezno modifikacijo, npr. z zaščito motečih skupin, s prilagoditvijo za uporabo z drugimi konvencionalnimi reagenti, in/ali z rutinskimi modifikacijami reakcijskih pogojev, pripravljena tudi druga GnRH sredstva kar bodo strokovnjaki s področja zlahka razumeli in upoštevali.
Biološko testiranje
Spojine so glede na aktivnost testirane v skladu z naslednjim protokolom.
Stabilna transfekcijo človeških GnRH receptorjev cDNA za človeški GnRH receptor je kloniran v plazmidni vektor, pcDNA 3 (In Vitrogen) in nespremenjen transformiran v HEK 293 celice (celična linija, ki jo je razvil dr. Stuart Sealfon, Mount Sinai Medical School, New York, New York).
Človeški GnRH receptor (hGnRH) je kloniran v pcDNA 3 (In Vitrogen), ki daje visok izrazni nivo in neomicinski rezistenčni marker. Lipofektamin (GIBCO BRL) je uporabljen za transfekcijo HEK 293 celic s plazmidno DNA. Ta metoda vključuje mešanje plazmida in reagenta v brezserumskem mediju, kar omogoča tvorbo DNA-liposomskih kompleksov in prekritje celic s to raztopino. HEK 293 celice so posajene na 10 cm ploščo s tkivno kulturo z gostoto 3x106 celic/ploščo en dan pred transfekcijo. Za vsako ploščo je 8 pg DNA plus 0.8 ml brezserumskega medija mešanih z 48 μΐ lipofektamina plus 0.8 ml brezserumskega medija. Sledi 30 minutna inkubacija pri sobni temperaturi, ki vodi do nastanka DNA-liposomskih kompleksov. Brezserumski medij je dodan z namenom, da je vzpostavljen končni volumen 6 ml/ploščo. Celice so dvakrat sprane z brezserumskim medijem in prekrite z DNA-liposomsko zmesjo. Pet ur po transfekciji je dodan identičen volumen (6 ml) medija, ki vsebuje 20% FBS (fetalni bovinski serum). Celice so nato nahranjene s svežim kompletnim medijem 18-24 ur po transfekciji. Celice so ločene 72-ur po transfekciji pri gostoti 1:10 in 1:20. Stabilni transformanti so izbrani na osnovi rasti celic v mediju, ki vsebuje antibiotik (G418, Sigma Chemical Company (prav tako znan kot Geneticin)). Kolonije so izolirane in testirane na receptor s pomočjo vezave radioliganda in z določanjem fosfoinozitolne spremembe.
Priprava celične kulture in celične membrane
Zgoraj opisane po transfekciji s človeškimi GnRH receptorji nespremenjene HEK 293 celice so zrasle v MEM (minimalno potrebnem mediju, ki je komercialno dosegljiv pri
Sigma Chemical Company) z dodanim 0.1% G418 (Sigma Chemical Company). Celice so homogenizirane v pufru A, ki vsebuje 50mM Tris (pH 7.4), 0.32M sukrozo, 2 mM etilenglikol-bis(p-aminoetil)-N,N,N',N'-tetraocetno kislino (EGTA), lmM fenilmetilsulfonil fluorid (PMSF), 5pg/ml aprotinena, 5pg/ml Pepstatina A in lpg/ml leupeptina. Homogenizirane celice so centrifugirane pri 4°C pri 20,000 x g za 25 minut, resuspendirane v pufru A in recentrifugirane pri 4°C pri 20,000 x g za nadaljnjih 25 minut. Celotna proteinska membrana je določena z BCA kitom (Pierce, Rockford, Illinois). Membrane so shranjene pri -70°C pri končni membranski proteinski koncentraciji 5 mg/ml.
12SI-GnRH-A preparacija
Radiojodiniran agonist, kije analog GnRH, [des-Gly10, D-Ala8]GnRH etilamid (GnRH-A), je uporabljen kot označevalni ligand. En pg GnRH-Α raztopljen v 0.1M ocetni kislini je dodan v Iodogen®prevlečeno borosilikatno stekleno cev (Pierce), ki vsebuje 35 μΐ 0.05M fosfatnega pufra (pH 7.4-7.6) in 1 mCi Na[125I]. Reakcijska zmes je vorteksirana in inkubirana za 1 minuto pri sobni temperaturi. Po eni minuti je zmes ponovno vorteksirana in inkubirana za nadaljnjo minuto. Dva ml 0.5 M ocetne kisline/1% BSA je dodane v reakcijsko cev in zmes je dodana v 08 Sep-Pak kolono oz. kartjušo. Kartjuša je sprana z naknadnimi spiranji s 5 ml H2O in 5 ml 0.5M ocetne kisline in nato eluirana z 5x1 ml 60% CH3CN/40% 0.5M ocetne kisline. Eluent je razredčen z 3x volumnom HPLC pufra A (0.1% TFA v H2O) in napolnjen v kolono C18. Jodiniran produkt je eluiran v 20-25 minutah, z gradientom 25-100% CH3CN, ki vsebuje 0.1% TFA. Radioaktivne frakcije (750 μΙ/frakcijo) so zbrane v čistih polipropilenskih cevkah, ki vsebujejo 10μ1 10% BSA. Frakcije so ovrednotene na biološko aktivnost z vezanjem radioliganda. Aktivne frakcije se uporabljajo za screening spojin v testih kompetitivnega vezanja.
Testi kompetitivnega vezanja radioliganda
Membrane HEK celic, ki nespremenjene izražajo hGnRHR (človeške GnRH receptoije) so razredčene do 0.5-1.0 mg/ml s testnim pufrom, ki vsebuje 50 mM HEPES (pH 7.4), 1 mM etilendiamintetraocetno kislino (EDTA), 2.5 mM MgCl2 in 0.1% BSA. Membrane so inkubirane z 50,000 CPM (približno 0.05-0.lnM) 125I-GnRH-A v končnem volumnu 200μ1 v prisotnosti ali odsotnosti kompetitivnih sredstev za 1 uro pri sobni temperaturi. Analiza je ustavljena s hitro filtracijo na 96-luknjičastih GF/C filtrih namočenih v 0.1% polietilenimin. Filtri so trikrat sprani z ledeno mrzlo PBS (50mM NaPO4, 0.9% NaCl, 2mM MgCl2 in 0.02 % NaN3, pH 7.4) z uporabo Packardovega 96-luknjičastega celičnega harvesteija. Nadalje je k vsaki filtmi luknji dodanega 35 μΐ scintilacijskega koktajla, filtri pa so nato prešteti na Packardovem Top števcu. Nespecifmo vezanje je določeno v prisotnosti lOOnM GnRH. Kontrolne dozirne odzivne krivulje na GnRH (0.1 nM-100 nM) so posnete za vsak eksperiment. Kontrolne dozirne odzivne krivulje so prikazane na sliki 1, ki prikazuje količino radiooznačenega GnRH vezanega na celične membrane (CPM) v odvisnosti od koncentracije neoznačenega GnRH.
Primeri
Kot bodo ugotovili strokovnjaki, je lahko glede na izum pripravljenih veliko spojin. Npr., pripravljene so lahko spojine s formulo I s kombinacijo Χ1-Χ2, Y in Z delov kot so prikazane v tabeli A spodaj, pri čemer so Χ1-Χ2, Y in Z deli predstavljeni v tabelah 1,2 in 3.
Tabela A Vzorčne spojine
ΧχΧί ΆΥ ζ
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-1
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-1
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-2
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-2
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-2
Χ,Χ2-7 Υ-1 Ζ-3
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-3
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-3
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-4
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-4
Χ,Χ2-7 Υ-1 Ζ-5
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-6
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-6
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-6
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-6
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-7
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-7
χ,χ2 ' Υ ·;·: υζ
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-7
Χ,Χ2-7 Υ-11 Ζ-7
Χ,Χ,-7 Υ-1 Ζ-8
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-8
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-3
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-4
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-4
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-4
Χ,Χ,-5 ¥-11 Ζ-4
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-5
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-5
Χ,Χ,-5 Υ-11 Ζ-5
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-6
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-6
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-7
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-8
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-8
Tabela A
Vzorčne spojine (nadaljevanje)
Χ.Χ. ¥ ζ
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-1
X,Xr9 Υ-10 Ζ-1
X,X,-9 Υ-1 Ζ-2
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-3
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-3
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-4
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-4
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-5
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-5
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-6
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-6
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-8
Χ,Χ,-3 Υ-1 Γζ-ι
Χ,Χ2-3 Υ-3 Ζ-1
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-1
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-Ι
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-2
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-2
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-2
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-3
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-3
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-3
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-4
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-4
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-4
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-4
Χ,Χ,-3 Ϋ-11 Ζ-4
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-5
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-5
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-5
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ž-5
Χ,Χ,-3 Υ-Ι Ζ-6
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-6
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-7
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-7
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-7
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-7
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-8
Χ,Χ, Υ Ζ
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-8
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-8
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-1
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-2
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-3
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-4
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-5
χ,χ,-ιι Υ-1 Ζ-6
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-7
Χ,Χ,-11 Υ-1 Ζ-8
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-9
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-9
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-9
χ,χ,-ι Υ-16 Ζ-9
Χ,Χ,-1 Υ-10 Ζ-9
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-10
χ,χ,-ι Υ-ίΟ Ζ-10
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-11
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-11
χ,χ,-ι Υ-10 Ζ-11
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-12
Χ,Χ,-1 Υ-7. Ζ-12
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-12
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-12
Χ,Χ,-1 Υ-10 Ζ-12
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-7
Χ,Χ,-1 Υ-10 Ζ-7
Χ,Χ,-1 Υ-10 Ζ-8
Χ,Χ,-1 Υ-10 Ζ-13
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-14
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-15
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-17
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-20
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-22
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-23
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-24
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-25
Tabela A
Vzorčne spojine (nadaljevanje)
Υ Ζ
X,X,-l Υ-7 Ζ-26
X,X,-1 Υ-7 Ζ-27
χ,χ,-ι Υ-7 Ζ-28
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-30
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-31
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-32
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-33
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-34
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-36
Χ,Χ,-1 Ϋ-7 Ζ-37
Χ,Χ,-Ι Υ-7 Ζ-39
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-40
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-41
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-42
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-43
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-44
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-47
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-52
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-53
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-54
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-55
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-56
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-58
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-60
Χ,Χ,-ι Υ-7 Ζ-61
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-62
Χ,Χ,-1 ' Ϋ-7 Ζ-63
Χ,Χ,-1 Ύ-7 Ζ-64
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-65
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-66
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-67
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-68
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-70
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-71
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-73
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-74
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-75
. χ,χ,-ι Υ-7 Ζ-76
χ,χ, Υ Ζ
Χ,Χ,-ι Υ-7 Ζ-77
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-78
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-80
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-81
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-83
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-84
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-85
Χ,Χ,-1 Ϋ-7 Ζ-86
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-87
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-88
Χ,Χ,4 Υ-7 Ζ-89
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-91
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-92
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-93
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-94
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-95
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-98
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-99
Χ,Χ,-1 Υ-17 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-20 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-23 Ζ-5.
Χ,Χ,-1 Υ-24 Z-5'
Χ,Χ,-1 Υ-25 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-26 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-27 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-29 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-30 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-31 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-32 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-33 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-34 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-35 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-38 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-39 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-41 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-42 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-44 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-46 Ζ-5
Tabela A
Vzorčne spojine (nadaljevanje)
X,X2 Υ Ζ
Χ,Χ,-1 Υ-47 Ζ-5
X,X,-1 Υ-48 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-49 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-50 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-51 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-54 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-56 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-58 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-59 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-61 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-63 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-65 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-66 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-67 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-69 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-70 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-71 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-72 Ζ-5
Χ,Χ, Υ Ζ
Χ,Χ,-1 Υ-78 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-85 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-86 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-87 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-88 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-90 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-91 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-92 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-94 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-95 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-96 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-97 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-99 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-100 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-101 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-102 Ζ-5
Χ,Χ,-1 Υ-103 Ζ-5
Χ,Χ2-1 Υ-104 Ζ-5
Druge vzorčne spojine s formulo I , ki so predstavljene v tabelah 4 in 5 spodaj, so bile sintetizirane v skladu z reakcijsko shemo, ki je na splošno opisana zgoraj. Čiste spojine so bile testirane z uporabo analize kompetitivnega vezanja radioliganda, ki je opisana zgoraj. Rezultati analize GnRH kompetitivnega vezanja so prikazani v tabelah 4 in 5. Χ1-Χ2, Y in Z deli za spojine navedene v tabeli 4 so prikazani v tabelah 1, 2 oz. 3. Rezultati za spojine navedene v tabeli 4 so bili dobljeni pri posamezni koncentraciji 10 μΜ. Vezanje specifičnega topila (medija) je bilo določeno kot celotna količina vezanega radioliganda minus količina vezana v prisotnosti 100 nM GnRH. Procent preostalega specifičnega vezanja (% v tabeli 4) v prisotnosti vsake spojine je bil izračunan v skladu z naslednjo enačbo: {specifično vezanje v prisotnosti spojine/specifično vezanje v prisotnosti topila (medija)}xl00%. Za spojino v tabeli 4, za katero je značilen 50% preostanek, je K; približno ΙΟμΜ. Vedeti je potrebno, da nižja kot je vrednost vezanja v %, višji je procent inhibicije.
Tabela 1
XiX2 segmenti
T
NH
NH2 nh2
N^NHBoc
T
NBoc
HjN'
H ,N^NK2
NH
NH2
ΧΛ-2
H
N ..NHBoc
T
NBoc
X,Xr5
H
N^NH2
NH
H ,N NHBoc
Y
NBoc
X1Xr6
NH2
Χ,Χ,-7
N^NHBoc NBoc
h3c ch3 .N
NH2
X,X2-8
H
N. NHBoc n
NBoc
Tabela 2
Y segmenti
Tabela 2
Y segmenti
Tabela 2
Y segmenti
Tabela 2
Y segmenti
Tabela 2
Ysegmenti
Tabela 3 Z segmenti
Z-l Z-2 Z-3 Z-4
a ύο Cr
UU
Z-5 Z-6 Z-7 Z-8
Cr P —ch2ch3 ό Cl
Z-9 Z-10 Z-ll Z-12
o X) —ch2och3
Ž-13 Z-14 1 Z-15 Z-16
ό 0 /CH* —n o 0
Z-l z Z-l 8 Z-19 Z-20
χ) cAq
Z-21 Z-22 Z-23 Z-24
H}C' 0 f
^0-° p4 ,0 H,C O-,'·· °V°yS ch3
Tabela 3
Z segmenti
Tabela 3
Z segmenti
Tabela 3
Z segmenti
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I
X,X,. Υ ζ %
X,X,-7 Υ-2 Ζ-1 66
X,X2-7 Υ-3 Ζ-1 75
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-1 79
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-1 55
X,X,-7 Υ-6 Ζ-1 73
X|X2-7 Υ-7 Ζ-1 51
X,X,-7 Υ-8 Ž-1 65
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-1 75
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-1 80
X|X2-7 Υ-2 Ζ-2 57
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-2 60
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-2 64
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-2 40
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-2 55
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-2 60
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-2 78
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-2 69
Χ,Χ,-7 Υ-2 Ζ-3 55''
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-3 53
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-3 65
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-3 41
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-3 65
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-3 57
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-3 66
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-3 74
χ,χ,-7 Υ-2 Ζ-4 61
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-4 75
Χ,Χ2-7 Υ-4 Ζ-4 73
Χ,Χ,-7 Υ-5 Γ Ζ-4 47
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-4 82
Χ,Χ,-7 Υ-7 Η Ζ-4 74
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-4 73
Χ,Χ,-7 Υ-10 Γ Ζ-4 88
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-4 89
Χ,Χ,-7 Υ-2 Ζ-5 56
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-5 77
Χ,Χ, Υ. Ζ' %
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-5 78
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-5 51
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-5 87
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-5 14
Χ,Χ,-7 Υ-8 Γ Ζ-5 59
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-5 91
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-5 52
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-5 91
Χ,Χ,-7 Υ-2 Ζ-6 59
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-6 65
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-6 71
Χ,Χ,-7 Υ-5 Γ Ζ-6 42
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-6 81
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-6 47
Χ,Χ,-7 Γ Υ-11 Ζ-6 78
Χ,Χ,-7 Υ-2 Ζ-7 71
Χ,Χ,-7 Υ-3 Ζ-7 84
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-7 81
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-7 58
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-7 60
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-7 91
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-7 94
Χ,Χ,-7 Υ-2 Ζ-8 58
Χ,Χ,-7 Υ-4 Ζ-8 71
Χ,Χ,-7 Υ-5 Ζ-8 51
Χ,Χ,-7 Υ-6 Ζ-8 79
Χ,Χ,-7 Υ-7 Ζ-8 50
Χ,Χ,-7 Υ-8 Ζ-8 46
Χ,Χ,-7 Υ-9 Ζ-8 85
Χ,Χ,-7 Υ-10 Ζ-8 81
Χ,Χ,-7 Υ-11 Ζ-8 80
Χ,Χ,-5 Υ-1 Ζ-1 78
Χ,Χ,-5 Υ-2 Ζ-1 53
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-1 73
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-1 67
Χ,Χ,-5 Υ-5 Ζ-1 64
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
χ,χ, ; Υ · Ζ %
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-1 71
X,X2-5 Υ-7 Ζ-1 56
Χ,Χ,-5 Υ-8 Ζ-1 52
X,Xr5 Υ-9 Ζ-1 74
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-1 70
Χ,Χ,-5 Υ-11 Ζ-1 72
X,X2-5 Υ-1 Ζ-2 73
X,X2-5 Υ-2 Ζ-2 48
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-2 63
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-2 61
Χ,Χ,-5 Υ-5 Ζ-2 41
Χ,Χ2-5 Υ-6 Ζ-2 59
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-2 46
Χ,Χ2-5 Υ-8 Ζ-2 45
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-2 69
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-2 64
Χ,Χ2-5 Υ-11 Ζ-2 74
Χ,Χ2-5 Υ-1 Ζ-3 74
Χ,Χ2-5 Υ-2 Ζ-3 53
Χ,Χ2-5 Υ-3 Ζ-3 59
Χ,Χ2-5 Υ-4 Ζ-3 66
Χ,Χ2-5 Υ-5 Ζ-3 35
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-3 63
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-3 53
Χ,Χ2-5 Υ-8 Ζ-3 59
Χ,Χ2-5 Υ-9 Ζ-3 65
Χ,Χ2-5 Υ-11 Ζ-3 76
Χ,Χ2-5 Υ-2 Ζ-4 56
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-4 75
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-4 74
Χ,Χ2-5 Υ-5 Ζ-4 63
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-4 74
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-4 70
Χ,Χ2-5 Υ-8 Ζ-4 68
Χ,Χ,-5 Υ-2 Ζ-5 61
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-5 67
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-5 68
Χ,Χχ Υ Ζ %
Χ,Χ,-5 Υ-5 Ζ-5 66
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-5 78
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-5 29
Χ,Χ,-5 Υ-8 Ž-5 71
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-5 74
Χ,Χ,-5 Υ-2 Ζ-6 63
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-6 72
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-6 70
Χ,Χ,-5 Υ-5 Ζ-6 66
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-6 72
Χ,Χ2-5 Υ-7 Ζ-6 44
Χ,Χ,-5 Υ-8 Ζ-6 50
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-6 78
Χ,Χ2-5 Υ-11 Ζ-6 79
Χ,Χ,-5 Υ-2 Ζ-7 80
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-7 82
Χ,Χ,-5 Υ-4 Ζ-7 70
Χ,Χ2-5 Υ-5 Ζ-7 75
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-7 78
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-7 59
Χ,Χ,-5 Υ-8 Ζ-7 50
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-7 84
Χ,Χ,-5 Υ-10 Ζ-7 78
Χ,Χ2-5 Υ-11 Ζ-7 80
Χ,Χ,-5 Υ-2 Ζ-8 61
Χ,Χ,-5 Υ-3 Ζ-8 83
Χ,Χ2-5 Υ-4 Ζ-8 74
Χ,Χ,-5 Υ-5 Ζ-8 62
Χ,Χ,-5 Υ-6 Ζ-8 88
Χ,Χ,-5 Υ-7 Ζ-8 52
Χ,Χ,-5 Υ-8 Ζ-8 64
Χ,Χ,-5 Υ-9 Ζ-8 79
Χ,Χ,-5 Υ-11 Ζ-8 85
Χ,Χ,-9 Υ-2 Ζ-1 69
Χ,Χ,-9 Υ-3 Ζ-1 91
Χ,Χ,-9 Υ-4 Ζ-1 95
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-1 59
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
¥ Ζ %
X,X2-9 Υ-6 Ζ-1 7ΐ·
X,X,-9 Υ-7 Ζ-1 57
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-1 64
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-1 77
X,Xj-9 Υ-11 Ζ-1 82
X,X,-9 Υ-2 Ζ-2 74
X,Xr9 Υ-3 Ζ-2 71
X,Xj-9 Υ-4 Ζ-2 81
X,X2-9 Υ-5 Ζ-2 59
X,X,-9 Υ-6 Ζ-2 70
X,X,-9 Υ-7 Ζ-2 65
X,X2-9 Υ-8 Ζ-2 71
X,X,-9 Υ-9 Ζ-2 67
X,X,-9 Υ-10 Ζ-2 91
X|X2-9 Υ-11 Ζ-2 77
X,X2-9 Υ-2 Ζ-3 68
X,X2-9 Υ-3 Ζ-3 56
X,X2-9 Υ-4 Ζ-3 68
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-3 46
X,X2-9 Υ-6 Ζ-3 63
Χ,Χ,-9 Υ-7 Ζ-3 60
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-3 69
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-3 75
X|X2-9 Υ-11 Ζ-3 , 74
Χ,Χ,-9 Υ-2 Ζ-4 67
Χ,Χ,-9 Υ-3 Ζ-4 86
X,X2-9 Υ-4 Ζ-4 85
X,X2-9 Υ-6 Ζ-4 92
Χ,Χ,-9 Υ-7 Ζ-4 81
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-4 78
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-4 98
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-4 82
Χ,Χ,-9 Υ-11 Ζ-4 Ί 98
Χ,Χ2-9 Υ-2 Ζ-5 63
Χ,Χ2-9 Υ-3 Ζ-5 83
Χ,Χ,-9 Υ-4 Ζ-5 88
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-5 75
Χ,Χζ Υ Ζ %
Χ,Χ,-9 Υ-6 Ζ-5 94
Χ,Χ2-9 Υ-7 Ζ-5 12
Χ,Χ,-9 Γ Υ-8 Ζ-5 76
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-5 82
Χ,Χ2-9 Υ-11 Ζ-5 94
Χ,Χ,-9 Υ-2 Ζ-6 76
Χ,Χ,-9 Υ-3 Ζ-6 89
Χ,Χ,-9 Υ-4 Ζ-6 83
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-6 67
Χ,Χ,-9 Υ-6 Ζ-6 81
Χ,Χ,-9 Υ-7 Ζ-6 69
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-6 74
Χ,Χ,-9 Γ Υ-9 Ζ-6 87
Χ,Χ,-9 Υ-11 Ζ-6 93
Χ,Χ2-9 Υ-1 Ζ-7 84
Χ,Χ,-9 Υ-2 Ζ-7 84
Χ,Χ2-9 Υ-3 Ζ-7 83
Χ,Χ2-9 Υ-4 Ζ-7 88
Χ,Χ2-9 Υ-5 Ζ-7 81
Χ,Χ,-9 Υ-6 Ζ-7 86
Χ,Χ2-9 Υ-7 Ζ-7 69
Χ,Χ,-9 Υ-8 Ζ-7 67
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-7 96
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-7 88
Χ,Χ,-9 Υ-11 Ζ-7 96
Χ,Χ,-9 Υ-1 Ζ-8 94
Χ,Χ,-9 Υ-2 Ζ-8 78
Χ,Χ,-9 Υ-3 Ζ-8 89
Χ,Χ,-9 Υ-4 Ζ-8 82
Χ,Χ,-9 Υ-5 Ζ-8 69
Χ,Χ,-9 Υ-6 Ζ-8 89
Χ,Χ,-9 Υ-7 Ζ-8 66
Χ,Χ,-9 Υ-9 Ζ-8 87
Χ,Χ,-9 Υ-10 Ζ-8 90
Χ,Χ,-9 Υ-11 Ζ-8 84
Χ,Χ2-3 Υ-2 Ζ-1 60
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-1 54
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
χ,χ, Υ Ζ %
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-1 66
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-1 57
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-1 57
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-1 72
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-1 67
Χ,Χ,-3 Υ-1 Ζ-2 73
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-2 46
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-2 39
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-2 47
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-2 46
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-2 50
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-2 61
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-2 59
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-3 54
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-3 45
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-3 51
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-3 48
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-3 48
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-3 49
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-3 50
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-3 65
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-4 47
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-4 64
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-4 76
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-4 62
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-4 68
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-4 70
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-5 65
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-5 77
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-5 77
Χ,Χ, Υ ζ;' %
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-5 64
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-5 81
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-5 -2
Χ,Χ,-3 Υ-10 Ζ-5 50
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-6 58
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-6 70
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-6 68
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-6 61
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-6 70
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-6 56
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-6 49
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-6 72
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-6 76
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-7 65
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-7 81
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-7 70
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-7 77
Χ,Χ,-3 Υ-6 Ζ-7 68
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-7 47
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-7 49
Χ,Χ,-3 Υ-2 Ζ-8 63
Χ,Χ,-3 Υ-3 Ζ-8 74
Χ,Χ,-3 Υ-4 Ζ-8 64
Χ,Χ,-3 Υ-5 Ζ-8 53
Χ,Χ,-3 Υ-7 Ζ-8 57
Χ,Χ,-3 Υ-8 Ζ-8 46
Χ,Χ,-3 Υ-9 Ζ-8 70
Χ,Χ,-3 Υ-11 Ζ-8 80
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
Χ.Χ, . Y Z % %' Av%
X,X2-11 Υ-2 Z-l 88 82 85
Χ,Χ,-11 Υ-3 Z-l Γ 107 101 104
Χ,Χ,-11 Υ-4 Z-l 88 88 88
X,X2-11 Υ-5 Z-l 86 78 82
X,X2-11 Υ-6 Z-l 97 90 93.5
X,X,-ll Υ-7 Γ z-i 75 79 77
X,X2-11 Υ-8 Z-l 84 69 76.5
X,X2-11 Ϋ-9 Z-l 106 93 99.5
X,X,-11 Υ-10 Z-l 94 81 87.5
Χ,Χ,-11 Υ-11 Z-l 96 95 95.5
X,X2-11 Υ-2 Z-2 Γ 80 76 78
X,X2-11 Υ-3 Z-2 99 94 96.5
X,X2-11 Υ-4 Z-2 93 83 88
Χ,Χ,-11 Υ-5 Z-2 69 58 63.5
X,X2-11 Υ-6 Z-2 88 80 84
X,X2-11 Υ-7 Z-2 73 63 68
Χ,Χ,-11 Υ-8 Z-2 74 69 71.5
X,X2-11 Υ-9 Z-2 95 88 91.5
x,x2-i1 Υ-10 Z-2 92 78 85
X,X2-11 Υ-11 Z-2 98 87 92.5
X,X2-11 Υ-2 Z-3 79 77 78
X,X2-11 Υ-3 Z-3 98 81 89.5
X,X2-11 Υ-4 Z-3 93 85 89
Χ,Χ,-11 Υ-5 Z-3 51 44 47.5
X,X2-11 Υ-6 Z-3 81 81 81
X,X2-1 1 Υ-7 Z-3 74 68 71
X,X2-11 Υ-8 Z-3 70 64 67
X|X2-11 Υ-9 Z-3 83 78 80.5
x,x2-n Υ-10 Z-3 80 72 76
X,X2-11 Υ-11 Z-3 90 81 85.5
Χ,Χ,-11 Υ-2 Z-4 85 70 77.5
X,X2-11 Υ-3 Z-4 103 98 100.5
X, X2-11 Υ-4 Z-4 92 83 87.5
X|X,-11 Υ-5 Z-4 90 79 84.5
Χ,Χ,-11 Υ-6 Z-4 102 94 98
X,X2-11 Υ-7 Z-4 73 61 67
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
x,x2 Y Z % % Av%
Χ,Χ,-11 Υ-8 Z-4 59 54 56.5
Χ,Χ,-11 Υ-9 Z-4 107 97 102
x,x2-n Υ-10 Γ z-4 98 97 97.5
X,X2-11 Υ-11 p Z-4 105 100 102.5
X,X2-11 Υ-2 Γ Z-5 Γ 92 75 83.5
X,Xj-U Υ-3 Z-5 102 98 100
X,X2-11 Υ-4 Z-5 90 87 88.5
χ,χ,-ιι Υ-5 Π Z-5 Γ 101 r 82 91.5
Χ,Χ,-11 Υ-6 Z-5 lil 92 101.5
X,X2-11 Υ-7 Z-5 80 74 77
X,X2-11 Υ-8 Z-5 47 43 45
X,X2-11 Υ-9 Z-5 101 90 95.5
X,X2-11 Υ-10 Z-5 95 94 94.5
X,X2-11 Υ-11 Z-5 108 94 101
X,X2-11 Υ-2 Z-6 86 80 83
X,X2-11 Υ-3 Z-6 114 97 105.5
Χ,Χ,-11 Υ-4 Z-6 85 102 93.5
X,X2-11 Υ-5 Z-6 88 82 85
Χ,Χ,-11 Υ-6 Z-6 100 97 98.5
X,X2-11 Υ-7 Z-6 74 72 73
X,X,-11 Ϋ-8 Z-6 73 68 70.5
X,X2-11 Υ-9 Z-6 103 95 99
X,X,-11 Υ-10 Z-6 101 90 95.5
Χ,Χ,-11 Υ-11 Z-6 103 95 99
Χ,Χ,-11 Υ-2 Z-7 105 90 97.5
X,X2-11 Υ-3 Z-7 107 104 105.5
X,X2-11 Υ-4 Z-7 104 96 100
Χ,Χ,-11 Υ-5 Z-7 108 94 101
Χ,Χ,-11 Υ-6 Z-7 104 92 98
X,X2-11 Υ-7 Z-7 87 75 81
X,X2-11 Υ-8 Z-7 76 73 74.5
Χ,Χ,-11 Υ-9 Z-7 108 100 104
X,X,-11 Υ-10 Z-7 106 97 101.5
X,X2-11 Υ-11 Z-7 106 98 102
X,X,-11 Υ-2 Z-8 90 84 87
Χ,Χ,-11 Υ-3
Z-8 112 97 104.5
X|X,-11 Υ-4 Z-8 96 89 92.5
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
x,x2 Υ Ζ % % Αν%
Χ,Χ,-11 Υ-5 Ζ-8 85 76 80.5
Χ,Χ,-11 Υ-6 Ζ-8 98 101 99.5
Χ,Χ,-11 Υ-7 Ζ-8 Γ 79 79 79
Χ,Χ,-11 Υ-8 Ζ-8 78 71 h 74.5
χ,χ,-ι ί Υ-9 Ζ-8 110 95 102.5
Χ,Χ,-11 Υ-10 Ζ-8 97 96 96.5
Χ,Χ,-11 Υ-ΐί Ζ-8 101 101 101
Χ,Χ2-1 Υ-2 Ζ-9 76 79 77.5
Χ,Χ,-1 Υ-12 Γ Ζ-9 Γ 65 62 63.5
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-9 91 95 93
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-9 95 88 91.5
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-9 50 48 49
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-9 92 92 92
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-5 54 65 59.5
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-5 89 88 88.5
Χ,Χ2-1 Υ-12 Ζ-5 70 66 68
Χ,Χ2-1 Υ-13' Ζ-5 79 79 79
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-5 73 66 69.5
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-5 -4 -4 -4
Χ,Χ2-1 Υ-14 Ζ-5 56 45 50.5
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-5 64 66 65
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-5 91 82 86.5
Χ,Χ,-1 γ-ιο η Ζ-5 57 47 52
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-1Ο 64 72 68
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-1Ο 97 98 97.5
Χ,Χ,-1 Υ-12 Ζ-1Ο 68 59 63.5
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-1Ο 82 77 79.5
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-1Ο 71 54 62.5
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-1Ο 28 25 26.5
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-1Ο 81 71 76
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-1Ο 85 79 82
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-1Ο 93. 76 84.5
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-11 71 81 76
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-11 96 92 94
χ,χ,-ι Υ-12 Ζ-11 64 60 62
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-11 79 82 80.5
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-11 46 35 40.5
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
x,x2 Υ Ζ % % Αν %
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-11 73 79 76
X,X,-1 Υ-15 Ζ-11 Γ 88 76 82
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-11 93 84 88.5
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-12 49 54 51.5
Χ,Χ,-1 Υ-12 Ζ-12 66 57 61.5
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-12 73 79 76
X,X2-1 Υ-5 Ζ-12 59 58 58.5
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-12 73 79 76
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-12 66 69 6Α5
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-7 71 81 76
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-7 101 98 99.5
χ,χ,-ι Υ-12 Ζ-7 59 58 Γ 58.5
X,X2-1 Υ-5 Ζ-7 86 82 84
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-7 53 57 55
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-7 85 85 85
Χ,Χ2-1 Υ-15 Ζ-7 77 76 76.5
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-7 96 86 91
Χ,Χ2-1 Υ-16 Ζ-7 89 77 83
Χ,Χ2-1 Υ-2 Ζ-8 67 67 67
Χ,Χ2-1 Υ-3 Ζ-8 95 89 92
Χ,Χ,-1 Υ-12 Ζ-8 60 60 60
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-8 80 . 82 81
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-8 66 62 64
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-8 52 44 48
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-8 82 73 77.5
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-8 69 64 66.5
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-8 80 87 83.5
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-8 70 69 69.5
Χ,Χ,-1 Υ-2 Ζ-13 59 57 58
Χ,Χ,-1 Υ-3 Ζ-13 83 92 87.5
Χ,Χ,-1 Υ-12 Ζ-13 48 56 52
Χ,Χ,-1 Υ-13 Ζ-13 81 85 83
Χ,Χ,-1 Υ-5 Ζ-13 76 63 69.5
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-13 52 50 51
Χ,Χ,-1 Υ-14 Ζ-13 81 72 76.5
Χ,Χ,-1 Υ-15 Ζ-13 64 62 63
Χ,Χ,-1 Υ-9 Ζ-13 87 80 83.5
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
Χ,Χζ Υ Z % % Αν%
Χ,Χ,-1 Υ-16 Ζ-13 77 63 70
Tabela 4
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine s formulo I (nadaljevanje)
x.x2 Υ Ζ %
X,X,-1 Υ-7 Ζ-16 82
Χ,Χ,-Ι Υ-7 Ζ-18 58
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-19 66
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-21 66
X,X,-1 Υ-7 Ζ-29 75
X,X,-1 Υ-7 Ζ-35 64
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-38 60
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-45 64
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-46 55
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-48 63
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-49 62
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-50 69
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-51 71
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-57 57
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-59 62
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-69 62
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-72 53
Χ,Χ,-1 Υ-7 | Ζ-79 62
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-82 53
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-90 65
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-96 56
Χ,Χ,-1 Υ-7 Γ Ζ-97 70
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-100 68
Χ,Χ,-1 Υ-7 Ζ-101 77
Χ,Χ,-1 Υ-18 Ζ-5 91
Χ,Χ,-1 Υ-19 Ζ-5 130
Χ,Χ,-1 Υ-21 Ζ-5 94
Χ,Χ,-1 Υ-22 Ζ-5 78
Χ,Χ,-1 Υ-28 Ζ-5 76
Χ,Χ,-1 Υ-36 Ζ-5 88
Χ,Χ,-1 Υ-37 Ζ-5 83
Χ,Χ,-1 Υ-40 Ζ-5 91
Χ,Χ,-1 Υ-43 Ζ-5 61
Χ,Χ,-1 Υ-45 Ζ-5 80
Χ,Χ,-1 Υ-52 Ζ-5 87
Χ,Χ,-1 Υ-53 Ζ-5 97
χ,χ,-ι Υ-55 Ζ-5 95
Χ,Χ2 Υ Ζ %
Χ,Χ,-1 Υ-57 Ζ-5 83
Χ,Χ,-1 Υ-60 Ζ-5 83
Χ,Χ,-1 Υ-62 Ζ-5 83
Χ,Χ,-1 Υ-64 Ζ-5 79
Χ,Χ,-1 Υ-68 Ζ-5 56
Χ,Χ,-1 Υ-73 Ζ-5 95
Χ,Χ,-1 Υ-74 Ζ-5 74
Χ,Χ,-1 Υ-75 Ζ-5 86
Χ,Χ,-1 ~Υ-76 Ζ-5 82
Χ,Χ,-1 Υ-77 Ζ-5 83
Χ,Χ,-1 Υ-79 Ζ-5 62
Χ,Χ,-1 Γ Υ-80 Ζ-5 100
Χ,Χ,-1 Υ-81 Ž-5 86
Χ,Χ,-1 Υ-82 Ζ-5 95
χ,χ,-ι Υ-83 Ζ-5 99
Χ,Χ,-1 Υ-84 Ζ-5 63
Χ,Χ,-1 Γ Υ-89 Ζ-5 68
Χ,Χ,-1 Υ-93 Ζ-5 67
Χ,Χ,-1 Υ-98 Ζ-5 89
Tabela 5
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine (vsaka testirana pri 10μΜ)
Spojina % preostanka po 1. testu % preostanka po 2. testu Povprečen % preostanka
1 57 57 57
2 59 54 57
3 58 57 55
4 40 40 40
5 31 33 37
6 47 45 46
7 51 55 53
8 42 48 45
9 51 53 52
10 51 54 53
11 55 50 53
12 57 58 58
13 14 11 13
14 56 54 55
15 58 60 59
16 50 47 49
19 47 42 45
20 60 54 57
21 46 51 49
22 52 57 55
23 48 50 49
24 58 58 56
25 41 51 46
26 35 37 36
27 56 62 59
28 46 57 52
29 53 61 57
30 29 37 33
31 44 45 45
32 52 61 57
33 52 65 59
34 45 57 51
35 50 54 52
36 56 59 58
37 59 61 60
38 59 55 57
39 46 45 46
40 12 11 12
Tabela 5
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine (vsaka testirana pri ΙΟρΜ) (nadaljevanje)
Spojina % preostanka po 1. testu % preostanka po 2. testu Povprečen % preostanka
41 46 43 45
42 54 62 58
43 47 53 50
44 58 62 60
46 45 52 49
47 39 44 42
48 48 40 44
49 53 · 62 58
50 47 62 55
51 48 63 56
52 57 59 58
53 46 55 51
54 49 59 54
55 -2 -1 -2
56 56 60 58
57 47 63 55
58 57 60 59
59 57 60 59
62 49 55 52
63 49 47 48
64 46 51 49
65 50 59 55
66 50 57 54
68 61 44 48
69 59 54 57
70 47 48 45
71 54 65 60
72 49 54 52
73 59 57 58
74 51 48 50
75 59 58 59
76 60 60 60
77 48 56 52
78 59 58 59
79 50 48 49
80 -4 -4 -4
81 28 25 27
Tabela 5
Rezultati testa kompetitivnega vezanja GnRH receptorja za spojine (vsaka testirana pri ΙΟμΜ) (nadaljevanje)
Spojina % preostanka po L testu % preostanka po 2. testu Povprečen % preostanka
82 46 35 41
83 53 57 55
84 52 44 48
85 52 50 51
86 56 45 51
87 57 47 52
88 58 56 57
94 61 52 57
96 44 60 52
98 58 58 58
100 52 58 55
102 66 54 60
105 56 56 56
117 59 54 57
118 62 58 60
119 57 57 57
Izum je bil prikazan s stališča preferiranih vsebin in primerov oz. vzorcev. Strokovnjak bo pri rutinski praksi prepoznal številne druge možnosti modifikacij in izboljšav glede na obstoječe znanje in razvoj področja.. Tako je potrebno izum razumeti ne kot omejen s prej navedenim podrobnim opisom, pač pa definiran z dodanimi patentnimi zahtevki in njihovimi ekvivalenti.

Claims (23)

1. Spojina s formulo I:
o
II
I
Xi
I (D pri čemer je:
Z je skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, heterocikla, arila, heteroarila, CH2OR, in C(O)OR, pri čemer je R substituiran ali nesubstituiran alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril ali heteroaril in kjer je število ogljikovih atomov prisotnih v Z od 1 do 12;
Y je lipofilna skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila, kjer je število ogljikovih atomov prisotnih v Y od 6 do 20;
Xi je strukturna enota, ki veže CH2NC(O), X2, Y in Z v tridimenzionalnem prostoru in je izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila tako, da je število atomov v verižnem delu enote, ki veže centralni dušik na X2 od 3 do 8; in
X2 je bazična skupina, ki ima pKa višjo kot približno 8; ali njeni farmacevtsko sprejemljiva sol, multimer, metabolni prekurzor (angl. ‘prodrug’) ali aktivni metabolit.
2. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je Z substituiran ali nesubstituiran furil, pirolil, naftil, tienil, piridil, C3-C8 cikloalkil, CrC8 alkil, CH2CF3 ali CF3.
3. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je Z furil, pirolil, tienil, ali CF3.
4. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je Y substituiran ali nesubstituiran fenil, naftil, nasičen ali deloma nasičen naftilni derivat, dibenzilfuril, nasičen ali deloma nasičen dibenzilfurilni derivat, kinolinil, izokinolinil, kinoksalinil, nasičen ali deloma nasičen cikloalkil, ali policiklični alkil.
5. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je Y 4-izopropilfenil, 4-N,N-dimetilaminopropiloksifenil, 2,4,5trietoksifenil, 2,3-dibenziloksifenil, 2-(4’-klorofeniloksi)fenil ali njihov deloma ali popolnoma nasičen derivat ali 1,2,3,4-tetrahidro-l,1,4,4,6-pentametilnaftalen-7-il.
6. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer Y je
7. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je Xj alkilen, alkilen-(C5.6-cikloalkil)-alkilen, ali alkilen-(C5^-aril)-alkilen.
8. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 7, pri čemer je Xi izbran iz skupine, ki sestoji iz:
(CH2)a- , -(CHz)j- , /
ch2
CHi h2c.
Z z
9. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer ima skupina X2 pKa višjo kot približno 9.
10. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer je X2 gvanidinil, amidinil, ali amino, nesubstituiran ali substituiran z enim ali večimi nižjimi alkili.
11. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 10, pri čemer je X2 gvanidinil.
12. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer ima spojina naslednjo formulo:
NHj_
13. Spojina, sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit glede na patentni zahtevek 1, pri čemer ima spojina naslednjo formulo:
14. Spojina glede na patentni zahtevek 1, izbrana izmed skupine, ki sestoji iz:
H2NyNH
U ali njena farmacevtsko sprejemljiva sol, multimer, metabolni prekurzor ali aktivni metabolit.
15. Farmacevtska učinkovina, ki sestoji iz: terapevtsko učinkovite količine GnRH sredstva izbranega iz skupine, ki sestoji iz spojin s formulo 1 in njihovih farmacevtsko sprejemljivih soli, multimerov, metabolnih prekurzorjev in aktivnih metabolitov, kot je definirano v patentnem zahtevku 1; in farmacevtsko sprejemljivega nosilca ali topila.
16. Farmacevtska učinkovina glede na patentni zahtevek 15, pri čemer so spojine s formulo 1 izbrane izmed spojin s formulo:
NHj_
17. Farmacevtska učinkovina glede na patentni zahtevek 15, pri čemer so spojine s formulo 1 izbrane izmed spojin s formulo:
18. Uporaba terapevtsko učinkovite količine GnRH sredstva izbranega iz skupine, ki sestoji iz spojin s formulo 1 in njihovih farmacevtsko sprejemljivih soli, multimerov, metabolnih prekurzorjev in aktivnih metabolitov, kot' so definirani v patentnem zahtevku 1, za proizvodnjo zdravil za reguliranje izločanja gonadot-ropinov v sesalcih.
19. Uporaba glede na patentni zahtevek 18, pri čemer so spojine s formulo 1 izbrane izmed spojin s formulo:
ΝΗχ
20. Uporaba glede na patentni zahtevek 18, pri čemer so spojine s formulo 1 izbrane izmed spojin s formulo
21. Spojina z eno izmed naslednjih formul II, III in IV:
Ry
R“
R\
CH2 r\
J ch2 nh2 (ID
N
I ch2 k(H2C) ch2 nh2 (III)
R\
M N
N I I R ch2
X ch2 nh2 (IV) .R pri čemer je:
j je 1 ali 2; kje 1,2, 3,4 ali 5;
g
R je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil;
R9 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CN, N02 ali CO2R1;
R10 je H ali substituiran ali nesubstituiran: nižji alkil, CH2OR1; (CH^jpOR1; CO2R1;
ali (CH2)PC(O)R2, kjer je p celo število od 1 do 6 in R2 je H, OR1, SR1, N(R')2 ali C(R1)3; R11 je H ali substituiran ali nesubstituiran nižji alkil, CF^O-fenil, Ck^O-benzil, fenil ali benzil;
ali katerakoli dva izmed R8, R9, R10 in R11 , ki skupaj tvorita 5- ali 6- členski heterocikel;
in kjer je vsak R1 neodvisno izbran izmed H in substituiranih ali nesubstituiranih nižjega alkila, O-nižjega alkila in S-nižjega alkila.
22. Spojina glede na patentni zahtevek 21, izbrana iz skupine, ki sestoji iz:
h2n^ ό1 , iN H N ' .NHBoc Γ /k NBoc 23. Postopek za izdelavo spojine s formulo 1: 0 II Hz xc\Y
p
Χχ (I) pri čemer je:
Z je skupina, kije izbrana izmed substituiranih ali nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, heterocikla, arila, heteroarila, CH2OR in C(O)OR, kjer je R substituiran ali nesubstituiran alkil, alkenil, alkinil, cikloalkil, aril ali heteroaril, in kjer je število ogljikovih atomov prisotnih v Z od 1 do 12;
Y je lipofilna skupina izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila in heteroarila, kjer je število ogljikovih atomov prisotnih v Y od 6 do 20;
Xi je strukturna enota, ki povezuje CH2NC(O), X2, Y in Z v tridimenzionalnem prostoru in je izbrana izmed substituiranih in nesubstituiranih alkila, alkenila, alkinila, cikloalkila, arila, in heteroarila tako, da je število atomov v verižnem delu enote, ki veže centralni dušik na X2 od 3 do 8; in
X2 je bazična skupina s pKa višjo kot približno 8; proces obsega stopnji:
(i) reduktivnega aminiranja aldehida s formulo Y-CHO, kjer je Y kot je definiran zgoraj, s spojino izbrano izmed:
;in (ii) aciliranja produkta stopnje (i) pri reakciji z acil halidom s formulo Z-COC1, pri čemer je Z kot je definiran zgoraj.
24. Postopek kot je definiran v patentnem zahtevku 23, ki nadalje obsega stopnjo hidroliziranja produkta stopnje (ii) pod kislimi pogoji.
SI9920026A 1998-03-05 1999-03-01 Nepeptidna GnRH sredstva SI20424A (sl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US7698398P 1998-03-05 1998-03-05
PCT/US1999/004457 WO1999044987A1 (en) 1998-03-05 1999-03-01 NON-PEPTIDE GnRH AGENTS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI20424A true SI20424A (sl) 2001-06-30

Family

ID=22135425

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9920026A SI20424A (sl) 1998-03-05 1999-03-01 Nepeptidna GnRH sredstva

Country Status (12)

Country Link
US (2) US6218426B1 (sl)
EP (1) EP1068178A1 (sl)
JP (1) JP2002505318A (sl)
KR (1) KR20010041656A (sl)
AU (1) AU753540B2 (sl)
BR (1) BR9908619A (sl)
CA (1) CA2322444A1 (sl)
LT (1) LT4829B (sl)
LV (1) LV12631B (sl)
NZ (1) NZ506459A (sl)
SI (1) SI20424A (sl)
WO (1) WO1999044987A1 (sl)

Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6753006B1 (en) 1993-02-22 2004-06-22 American Bioscience, Inc. Paclitaxel-containing formulations
US6235755B1 (en) * 1998-08-07 2001-05-22 Applied Research Systems Ars Holding N.A. FSH mimetics for the treatment of infertility
US6906069B1 (en) 1999-01-08 2005-06-14 Amgen Inc. LXR modulators
DE60030450T2 (de) * 1999-09-08 2007-08-30 Transgene S.A. Von MUC-1 abgeleitete Peptide
WO2001055107A2 (en) * 2000-01-28 2001-08-02 Melacure Therapeutics Ab Aromatic amines and amides acting on the melanocortin receptors
WO2001060818A1 (en) * 2000-02-14 2001-08-23 Tularik Inc. Lxr modulators
US7115653B2 (en) * 2000-03-30 2006-10-03 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US8852937B2 (en) * 2000-03-30 2014-10-07 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US6683108B1 (en) * 2000-03-30 2004-01-27 Curis, Inc. Agonists of hedgehog signaling pathways and uses related thereto
US6613798B1 (en) 2000-03-30 2003-09-02 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US20050070578A1 (en) * 2000-03-30 2005-03-31 Baxter Anthony David Small organic molecule regulators of cell proliferation
US6683192B2 (en) * 2000-03-30 2004-01-27 Curis, Inc. Small organic molecule regulators of cell proliferation
US6673543B2 (en) 2000-04-05 2004-01-06 Tularik, Inc. Solid phase synthesis of LXR ligands
US20040033267A1 (en) * 2002-03-20 2004-02-19 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of angiogenesis inhibitors
CA2425285A1 (en) * 2000-10-30 2002-05-10 Warner-Lambert Company Llc Amidino-urea serotonin receptor ligands and compositions, their pharmaceutical uses, and methods for their snythesis
DE10122862A1 (de) * 2001-05-11 2002-11-21 Noxxon Pharma Ag GnRH bindende Nukleinsäure
BR0210191A (pt) * 2001-06-06 2004-04-06 Agouron Pharma Agentes não peptìdicos da gnrh, composições farmacêuticas e métodos para o seu uso, e processos para os preparar e aos seus intermediários
US20030054042A1 (en) * 2001-09-14 2003-03-20 Elaine Liversidge Stabilization of chemical compounds using nanoparticulate formulations
EP1476425A4 (en) 2002-01-30 2010-05-05 Amgen Inc Heterocyclic Aryl Sulphonamidocyclic Compounds
AU2003202115A1 (en) 2002-02-12 2003-09-04 Pfizer Inc. Non-peptide compounds affecting the action of gonadotropin-releasing hormone (gnrh)
US20080220075A1 (en) * 2002-03-20 2008-09-11 Elan Pharma International Ltd. Nanoparticulate compositions of angiogenesis inhibitors
US6858637B2 (en) 2002-03-28 2005-02-22 Neurogen Corporation Substituted biaryl amides as C5a receptor modulators
BR0312123A (pt) 2002-06-13 2005-03-29 Pfizer Agentes de gnrh não peptìdicos, composições farmacêuticas e métodos para o seu uso
CN1289467C (zh) 2002-08-30 2006-12-13 日本烟草产业株式会社 二苄胺化合物及其药物用途
US11117870B2 (en) 2017-11-01 2021-09-14 Drexel University Compounds, compositions, and methods for treating diseases

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4565804A (en) 1984-09-07 1986-01-21 The Salk Institute For Biological Studies GnRH Antagonists VI
US5352796A (en) * 1989-10-30 1994-10-04 The Salk Institute For Biological Studies Amino acids useful in making GnRH analogs
US6414112B1 (en) * 1991-05-24 2002-07-02 Ole Buchardt Peptide nucleic acids having 2,6-diaminopurine nucleobases
US5719262A (en) * 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
CA2112566A1 (en) * 1991-07-01 1993-02-18 Graham J. Moore Non-desensitizing analogs of gnrh and other biologically active ligands
US5506207A (en) 1994-03-18 1996-04-09 The Salk Institute For Biological Studies GNRH antagonists XIII
SK77598A3 (en) * 1995-12-14 1999-01-11 Merck & Co Inc Nonpeptide derivatives, pharmaceutical composition containing them and their use
US6245746B1 (en) * 1998-01-23 2001-06-12 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Efflux pump inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
KR20010041656A (ko) 2001-05-25
LV12631A (en) 2001-03-20
US6218426B1 (en) 2001-04-17
LT4829B (lt) 2001-08-27
AU2885399A (en) 1999-09-20
BR9908619A (pt) 2001-10-02
LV12631B (lv) 2001-08-20
US6646137B1 (en) 2003-11-11
JP2002505318A (ja) 2002-02-19
AU753540B2 (en) 2002-10-24
EP1068178A1 (en) 2001-01-17
CA2322444A1 (en) 1999-09-10
NZ506459A (en) 2003-09-26
WO1999044987A1 (en) 1999-09-10
LT2000093A (en) 2001-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI20424A (sl) Nepeptidna GnRH sredstva
EP1105120B1 (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS, METHODS AND INTERMEDIATES FOR THEIR PREPARATION
US7101878B1 (en) Non-peptide GNRH agents, methods and intermediates for their preparation
JP3789538B2 (ja) チエノピリミジン誘導体、その製造法および用途
CN106573937B (zh) 作为fshr调节剂的吡唑化合物及其用途
JP2015187181A (ja) Ｉｄｏ阻害剤
WO2010033360A1 (en) Methods of treating a botulinum toxin related condition in a subject
JP2008508296A (ja) イミダゾ［４，５−ｄ］ピリミジン、それらの使用および調製方法
US20050250846A1 (en) Non-peptide GnRH agents, pharmaceutical compositions and methods for their use
US4320148A (en) 2-Aminotetralin compounds, pharmaceutical compositions and method of producing central alpha1 agonist activity
US20040010033A1 (en) Non-peptide GnRH agents, methods and intermediates for their preparation
CN112533581A (zh) Prc1抑制剂及用其进行治疗的方法
CN106661044B (zh) Nampt抑制剂和方法
CN1902195B (zh) 细胞粘着调节剂
MXPA00008537A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS
MXPA01001834A (en) NON-PEPTIDE GnRH AGENTS, METHODS AND INTERMEDIATES FOR THEIR PREPARATION

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20061108