SE524310C2 - Fröhölje för tillverkade frön samt förfarande för framställning av fröhölje - Google Patents

Description

.øuua lO 15 20 25 30 35 524 510 v .- .ua-o 2 näringsämnen för överlevnad under de kritiska stegen av sàning och groning.

Höljet till ett tillverkat frö är en viktig skyd- dande egenskap. Vid vissa utföringsformer av tillverka- de frön utnyttjas ett fröhölje tillverkat av med vax impregnerat papper med en vaxkomponent som utgörs av nio delar paraffin, vilket är tillgängligt från Koster Keunen, Inc., Watertown, Connecticut (CAS nr 8002-72-2), och en del karnaubavax, också tillgängligt fràn Koster (CAS nr 8015-86-9) (dvs ett förhållande mellan paraffin och karnaubavax av 9:1).

Keunen, Inc.

Denna vaxbland- ning har vid användning i samband med ett hölje till ett tillverkat frö av föreliggande uppfinnare observerats spricka vid temperaturer av cirka 1°C och lägre. Brott eller mikrosprickor i höljet till det tillverkade fröet gör embryot känsligt för angrepp av mikrober, svampar och bakterier. Mikrosprickor eller brott leder dessutom till att växtembryot blir känsligt för uttorkning och mekanisk skada, vilket reducerar fröets möjligheter för framgångs- rik groning.

Mikrosprickbildning i höljet till ett tillverkat frö vid lägre temperaturer äventyrar i en ännu större omfatt- ning framgångsrik groning med tanke pà de nyligen för- bättrade metoderna för làngtidsförvaring som beskrivs i USA-patentskrifterna nr 5 666 762 (”Respirationsbegränsat tillverkat frö”) och 5 732 505 (”Tillverkat frö inbegri- pande torkad och/eller frusen växtvävnad”), också i nam- net Weyerhaeuser Company. Dessa förbättrade metoder för längtidsförvaring kan kräva exponering av tillverkade frön för temperaturer vid eller under fryspunkten under en längvarig tidsperiod.

Det finns åtskilliga vaxformuleringar som motstàr sprickning vid temperaturer under cirka l°C, men dessa vaxer saknar de andra egenskaper som är nödvändiga för användning i samband med tillverkade frön. I tillverkade frön av den typ som beskrivs här utnyttjas t ex en cel- lulosainnehàllande del, sàsom ett pappersrör (”paper s=>ac 10 15 20 25 30 35 5:24 3.10 2==É3f fï"f_§ïÉ.x":L 3 straw”). Vaxkompositionen appliceras på cellulosaröret med hjälp av en av ett flertal lämpliga appliceringsför- faranden. Applicering av vaxkompositionen kräver ett vax med en viskositet som är unik för det specifikt utnyttja- de appliceringsförfarandet. Användbara appliceringsför- faranden sträcker sig från doppning av pappersstrået i smält vax till besprutning av vaxet därpå. Dessutom måste tillverkade frön ha förmåga att upprätthålla en grad av styvhet, och vaxet som används för höljet till det till- verkade fröet måste ha förmåga att förbli fast (dvs ej smälta) vid omgivande betingelser, som kan vara ganska varma, särskilt när fröet befinner sig på en sluttning som är exponerad för direkt solljus. Sålunda måste vax- kompositionen som är användbar i samband med tillverkade frön ha en smältpunkt och en viskositet som är lämplig för användning i samband med ett hölje till ett tillver- kat frö.

Med basis på ovanstående föreligger ett behov av ett förbättrat fröhölje för tillverkade frön med förmåga att motstå mikrosprickbildning orsakad av exponering för låga temperaturer. Dessutom föreligger ett behov av en vax- formulering för användning i samband med höljen till tillverkade frön med egenskaper som överensstämmer med en sådan användning (dvs en lämplig smältpunkt för att motstå flytning och en lämplig viskositet för antingen manuell eller automatiserad applicering) och som kan möj- liggöra att höljet till det tillverkade fröet motstàr sprickning vid temperaturer under cirka l°C.

Sammanfattning av uppfinningen Under beaktande av de ovan beskrivna problemen och de som kommer att framgå av den detaljerade beskrivningen nedan, tillhandahålls med föreliggande uppfinning till- verkade frön och förfaranden för framställning av till- verkade frön med fröhöljen som utgörs av ett cellulosa- substrat och en vaxkomposition, där höljet till det till- verkade fröet har förmåga att motstå sprickning vid tem- peraturer under cirka l°C. Vid en föredragen utförings- renas 10 15 20 25 30 35 v n» f- 524 310 4 form inkluderar det tillverkade fröet ett fröhölje som framställts av ett cellulosasubstrat och en vaxkomposi- tion med en viskositet av cirka 23 centipoise till cirka 50 centipoise vid en förutbestämd appliceringstemperatur.

Vid en föredragen utföringsform kan vaxkompositionen som utgör en del av fröhöljet inkludera cirka 47 vikt% paraffinkolvätekedjor med 21-40 kolatomer per kedja.

Dessutom har paraffinkolvätekedjorna som är inkluderade i vaxkompositionen som används vid den föredragna ut- föringsformen av uppfinningen en gaussfördelning med en maximal kolkedjelängd inom området 28-33.

Följande detaljerade beskrivning visar att före- liggande uppfinning möjliggör produktion av tillverkade frön med fröhöljen som kan motstå sprickning vid tempe- raturer under cirka l°C och som uppvisar andra önskvärda egenskaper som gör uppfinningen lämplig för användning vid ett flertal tillämpningar för tillverkade frön.

Kort beskrivning av ritningarna Ovannämnda aspekter och många av det åtföljande fördelarna med föreliggande uppfinning inses lättare av efterföljande detaljerade beskrivning tillsammans med de åtföljande ritningarna.

I fig 1 visas i tvärsnitt ett tillverkat frö som framställts enligt föreliggande uppfinning.

I fig 2 visas en tabell över viskositetsvärden ut- tryckta i centipoise för ett föredraget vax som är an- vändbart enligt föreliggande uppfinning.

I fig 3 visas grafiskt de i fig 2 angivna värdena.

I fig 4 visas en tabell över mängden paraffinkol- väten i den föredragna vaxkompositionen som är användbar enligt föreliggande uppfinning.

I fig 5 visas grafiskt de i fig 4 erhållna värdena.

I fig 6 visas ett fotografi av fröhöljet som an- vänds för tillverkade frön inom känd teknik i sex gàngers förstoring efter exponering för temperaturer under l°C.

I fig 7 visas ett fotografi av ett fröhölje som framställts enligt föreliggande uppfinning i sex gàngers ,»|øo 10 15 20 25 30 35 ~ » n . n. v» n. f 524 310 .H..:mmu-m ~ -- -.. . , :_:_ a. , å' _~o' :n- fl u .. 5 förstoring efter exponering för temperaturer under cirka l°C.

Detaljerad beskrivning av föredragna utföringsformer Fröhöljet till ett tillverkat frö enligt föreliggan- de uppfinning kan användas i samband med vilken utform- ning som helst av tillverkade frön inkluderande, men inte begränsat till, de som diskuteras i USA-patenskrifterna nr 4 769 945 ("Leveransenhet för växtvävnad” i namnet Kirin Brewery Co, Ltd, Tokyo, Japan); 5 382 269 (”Konst- gjorda frön” i namnet Rhone-Poulenc Agrochimie, Lyons, Frankrike) och 6 164 012 (”Biologiskt material inbäddat i hydrogeler, ett förfarande för inbäddning därav och användning därav såsom ett konstgjort frö", i namnet Bayer Aktienge-Sellschaft, Leverkusen, Tyskland), liksom den europeiska patentskriften nr O696163B1 och Dupuis et al, Bio/Technology l2:385-389, 1994. Det här beskrivna fröhöljet används för inneslutning av ett embryo som ut- görs av en enhet av totipotent växtvävnad och en hydra- tiserad gel, varigenom embryot skyddas fràn mekanisk skada, uttorkning, angrepp av patogener, herbivorer och andra skadedjur.

A. Exempel pà struktur för ett tillverkat frö En strukturell utföringsform av ett tillverkat frö som är lämpligt för användning med ett fröhölje enligt föreliggande uppfinning visas i fig 1, där det tillver- kade fröet 250 har ett lock 274 med en nippel 275 eller utskjutande del. Ett tillverkat frö av den typ som av- bildas i fig 1 beskrivs mer detaljerat i USA-patentskrif- ten nr 6 119 395 i namnet Weyerhaeuser Company of Federal Way, Washington, som i helhet härmed är införlivad som referens. Det tillverkade fröet 250 inbegriper i allmän- het ett fröhölje 252 som väsentligen omger en hydrati- serad gel 258, som fungerar som en artificiell gametofyt för en enhet av totipotent växtvävnad 266. Materialen som utgör den artificiella gametofyten och enheten av toti- potent växtvävnad beskrivs mer detaljerat nedan och även i USA-patentskrifterna nr 5 427 593, 5 451 241 och 10 15 20 25 30 35 524 310 ---- -- 6 5 701 699 i namnet Weyerhaeuser Company, vilka härmed i helhet är införlivade som referenser. Fröhöljet 252 ombesörjer fysiskt skydd för det inre av det tillverkade fröet 250, medan det samtidigt möjliggör att groddämnet (”germinant”) som utvecklas från den totipotenta växt- vävnaden 266 tränger ut från det tillverkade fröet under groning.

Fröhöljet 252 har en öppen ände 254 och en sluten ände 256. Fröhöljet 252 kan enligt minst en utförings- form av föreliggande uppfinning konstrueras med utgångs- punkt från ett cellulosamaterial, såsom en del av ett vanligt papperssugrör, såsom de som är tillgängliga från Sweetheart Cup Company, Owings Mills, Maryland.

Papperssugrören har företrädesvis en diameter av cirka 6,5 mm och är 10-20 mm långa. Enligt föreliggande upp- finning görs rören väsentligen vattenresistenta med hjälp av sådana metoder som doppning i en flytande varm vax- komposition, såsom beskrivs mer detaljerat nedan, dvs en blandning av paraffin som är tillgänglig från Koster Connecticut (CAS nr 8002-74-2) och Blue Plasti-Ject Injection Jewelry Wax, Keunen, Inc, Watertown, som är till- gängligt från the Kindt Collins Company of Cleveland, Ohio. Ett fröhölje 252 som delvis tillverkats av cellu- losa eller andra bionedbrytbara material är föredraget, varvid förökningsbäddar inte nedskräpas med förbrukade fröhöljen från tidigare grödor, men det är också före- draget att fröhöljena förblir intakta ända tills förupp- komsten av den primära roten. Den slutna änden 256 kan åstadkommas genom användning av en lämplig plugg eller barriär, eller genom tillböjning (”crimping”) för åstad- kommande av en något kupolformad eller konisk ände.

Den hydratiserade gelen 258 som används för fram- ställning av den artificiella gametofyten kan vara vilken som helst av de typer av geler som är kända genom tek- niken och kan eventuellt inbegripa näringsämnen och syre- bärare. En föredragen gel 258 är agarbaserad, eftersom agar gelar (dvs ”stelnar” eller ”härdas”) spontant vid .. uu»- . ~ ...v- s.. 10 15 20 25 30 35 sänkning av temperaturen. Den hydratiserade gelen 258 bör vara något fast för förhindrande av läckage av vätska från gelen in i hålrummet 262 som innehåller växtvävna- den. Dylikt inflöde i hålrummet 262 kan förorsaka en liten procentuell andel normala groddämnen.

Storleken av fröhöljet 252 kan variera beroende på den växtart som skall förökas. Det relativa dimensionerna av fröhöljet 252 och gelen 258 som avbildas i fig 1 är lämpliga för förökning av totipotent växtvävnad av barr- träd och bör inte betraktas som begränsande för denna eller andra typer av växter.

Växtvävnaden 266 är inhyst i ett innerrör 260 för åtminstone delvis, àstadkommande av, en tillräcklig skottbegränsning. Innerröret 260 har en öppen ände 263 och en sluten ände 264. Växtvävnaden 266 är belägen i det tillverkade fröet 250 på så sätt att skottet och/ eller hjärtbladen 268 är orienterade i riktning mot den slutna änden 264 och det latenta rotämnet 270 i riktning mot den öppna änden 263. Röret 260 kan vara tillverkat av olika material som inte är fytotoxiska och som möjliggör tillräcklig tillgång för den totipotenta växtvävnaden 266 till fukt, gaser och näringsämnen som är nödvändiga för groning. Materialen är företrädesvis också porösa. Sådana material som filterpapper, gips, keramiska ämnen och någorlunda styva skumplaster med öppna celler, dock utan begränsning till dessa, har samtliga visat sig vara till- fredsställande. Ett rör tillverkat av filterpapper eller liknande material kan eventuellt innehålla små perfo- reringar.

Innerdiametern av röret 260 bör vara tillräcklig för att möjliggöra en något förstorad skottände 268 hos den totipotenta växtvävnaden för att föreligga i intim kon- takt med väggarna av röret 260. Röret 260 möjliggör till- gång till näringsämnen, gaser och vätskor som är nödvän- diga för groning av växtvävnaden.

Ett koaxiellt inre hålrum är utformat i den hydra- tiserade gelen 258 för mottagning av röret 260. Efter 6- nu 10 15 20 25 30 35 utformning av hålrummet och insättning av röret 260 däri kan växtvävnaden 266 sättas in i röret 260 med skottänden först. Före eller efter insättning av växtvävnaden 266 kan det tillverkade fröet 250 förses med gas i form av syre eller andra gaser.

En primär ändtillslutning 272 appliceras över gel- ytan och kring den utskjutande öppna änden 263 av röret 260 före insättning av växtvävnaden i gelen. Den primära ändtillslutningen 272 bör emellertid inte täcka den öppna änden 263 av röret 260. Det bör noteras att en primär ändtillslutning inte är nödvändig och kan uteslutas.

Många material är lämpliga för den primära ändtillslut- ningen 272. Paraffinvax av den typ som hittills har be- skrivits har visat sig vara lämpligt. En andra ändtill- slutning, eller lock, 274 appliceras för att täcka den öppna änden 263 av den primära ändtillslutningen 272.

Såsom visas i fig 1 inkluderar locket företrädesvis en nippel 275 som sträcker sig utåt från det tillverkade fröet. Locket kan emellertid alternativt vara platt eller format av antingen ett i förväg sträckt eller osträckt material.

Locket 274 är företrädesvis mycket tunt, vanligtvis inte mer än cirka 1 mm tjockt. Det kan vara tillverkat av samma material som den primära ändtillslutningen 272.

Företrädesvis är emellertid locket 274 ett gaspermeabelt, vattenimpermeabelt membran, såsom i förväg sträckt Parafilm®, som kan tillslutas på plats över den öppna änden 263 genom värmeutlöpning eller mekaniskt tryck.

Sträckning av ett material, såsom Parafilm®, för åstad- kommande av ett lock 274 med en utskjutande del eller nippel 275, såsom visas, orsakar en förtunning av locket i den i förväg sträckta regionen i förhållande till lockets ej sträckta del. Den utskjutande delen kan ha vilken form eller konfiguration som helst och kan vara symmetrisk eller asymmetrisk till formen. 10 15 20 25 30 35 524 310 šjjf 9 Liksom med fröhöljet 252 kan ett antibiotikum even- tuellt tillsättas till utsidan eller insidan av de pri- mära och sekundära ändtillslutningarna.

Den slutna änden 264 av röret 260 har visat sig vara fördelaktig. Den slutna änden 264 förhindrar skottänden eller hjärtbladen 268 som växer inuti röret 260 från att penetrera röret och expandera in i gelen 258. Expansion av skottänden eller hjärtbladen 268 in i gelen 258 skulle resultera i infångning i gelen, vilket skulle förhindra den växande växten från att tränga ut från det tillver- kade fröet och/eller orsaka groddämnesabnormaliteter. Den växande skottänden är företrädesvis endast tillfälligt begränsad i röret 260. När den växer och förlängs trycker skottänden mot rörets innerytor, vilket pressar skott- änden ut från röret och som en följd därav ut från den hydratiserade gelen, vilket simulerar funktionen för ett naturligt frö.

B. Hölje för tillverkat frö Under fortsatt hänvisning till fig 1 kommer höljet 252 till det tillverkade fröet att beskrivas mer detalje- rat. Höljet 252 till det tillverkade fröet skyddar liksom ett naturligt fröhölje den totipotenta växtvävnaden 266 och andra inre strukturer i det tillverkade fröet från mekanisk skada, uttorkning, angrepp av mikrober, svampar, insekter, nematoder, fåglar och andra patogener, herbi- vorer och skadedjur, såsom en av flera funktioner.

Höljet 252 till det tillverkade fröet enligt före- liggande uppfinning kan framställas med utgångspunkt från cellulosamaterial och vaxer. Materialen av vilka fröhöljet 252 är tillverkat är väsentligen icke-toxiska och ger företrädesvis en grad av styvhet. Företrädesvis är fröhöljet 252 bionedbrytbart, men det är också före- draget att fröhöljet 252 förblir intakt tills efter upp- komsten av den groende totipotenta växtvävnaden 266. Det är också föredraget att fröhöljet 252 fram till efter uppkomsten är resistent mot penetrering av mikrobiella patogener eller andra växtpatogener. Såsom förklaras mer « 10 15 20 25 30 35 | » u n ., 10 detaljerat nedan kan det tillverkade fröhöljet 252 motstá sprickning vid temperaturer under cirka l°C.

Höljet till det tillverkade fröet 252 inkluderar en inneslutande del 202 som pà endera sidan begränsas av den slutna änden 256 och den öppna änden 254. Den öppna änden 254 är täckt eller pá annat sätt tillsluten av en primär och sekundär ändtillslutning 272 resp 274. I stället för den primära och sekundära ändtillslutningen kan den inne- slutande delen alternativt inkludera en region som är tunn eller försvagad i relation till andra regioner av den inneslutande delen. Den tunnare eller försvagade delen täcker den öppna änden 254 och har en lägre sprängstyrka än resten av den inneslutande delen 202.

Ett groende embryo tränger sålunda företrädesvis ut fràn höljet till det tillverkade fröet genom penetrering genom den öppna eller tunnare eller svagare ytan av den inne- slutande delen 202. fDen inneslutande delen 202 är företrädesvis till- räckligt styv för att ge embryot mekaniskt skydd, t ex under sàning, och är väsentligen impermeabel för gaser, vatten och jordmikrober. Företrädesvis är rotämnet 268 av den totipotenta växtvävnaden 266 orienterat i riktning mot öppningen 274 eller det svagare omrâdet pà den inne- slutande delen 202 för underlättande av utskjutande till- växt av primärroten hos den groende totipotenta växtväv- naden 266 fràn det tillverkade fröet.

Höljet 252 till det tillverkade fröet utgörs före- trädesvis av tvà kompositioner. Den första är ett cellu- losamaterial som är relativt eftergivligt och vatten- permeabelt. Den andra kompositionen är ett vax som appli- ceras pä cellulosan för betydande reduktion av vatten- permeabiliteten och àstadkommande av strukturell styvhet.

Reduktion av vattenpermeabiliteten är önskvärd av minst tvä skäl. För det första kan vatten som tillåts tränga in i det tillverkade fröet späda ut näringsämnen. För det andra kan vatten som tillàtits tränga in i det tillver- kade fröet medbringa mikrober och bakterier, bland andra 10 15 20 25 30 35 310 . ' n' ' . '. n.. I' ' - n. .v f p I vv z n' 2 z _' n a. . 4: .I a: nu 1. . _ __ :if a u. , : . - -^ ~: .- - - n nu , . ll skadegörare. Vid en utföringsform kan cellulosakomposi- tionen inbegripa ett relativt eftergivligt cellulosa» material eller analogt material som är utformat till att åtminstone delvis överensstämma med formen av massan av den hydratiserade gelen som skall placeras däri och som har minst en avsmalnande ände. Vid en föredragen utföringsform är t ex det eftergivliga cellulosamate- rialet ett tillböjt eller pä annat sätt avsmalnande pappersrör täckt av en primär och sekundär ändtillslut- ning, som kan inkludera en nippel 275, såsom visas i fig l.

C. Lämpliga vaxformuleringar Såsom förklarats ovan utgörs företrädesvis fröhöljet 252 av tva eller flera kompositioner, varvid den första utgörs av cellulosamaterial och den andra utgörs av en fram- ett vaxkomposition. Vaxkompositionen som används för ställning av fröhöljet 252 utgörs väsentligen av paraffinvax som är ett färglöst eller vitt, nàgot genom- skinligt, hårt vax bestående av en blandning av fasta rakkedjiga kolväten med en smältpunkt som sträcker sig från cirka 48 till 66°C.

Det här använda uttrycket ”paraffinkolväte” avser vilket som helst av de mättade kolväten som har den all- H är en männa formeln Cßbnn, varvid C är en kolatom, väteatom och n ett heltal. Paraffiner innehållande färre än 5 kolatomer per molekyl är vanligtvis gasformiga vid rumstemperatur, de med 5-15 kolatomer är vanligtvis vätskeformiga och rakkedjiga paraffiner med mer än 15 kolatomer per molekyl är fastämnen. Paraffinkolväten är ej blandbara med vatten, men är lösliga i absolut alko- hol, eter och aceton.

En föredragen vaxkomposition som är användbar i sam- band med föreliggande uppfinning är en blandning i för- hàllandet 7:3 av vaxet Blue Plasti-Ject Injection, till- gängligt fràn Kindt Collins Company, Cleveland, Ohio, och paraffinvax, tillgängligt frän Koster Keunen, Inc. (CAS nr 8002-74-2).

Denna blandning skiljer sig fràn vaxbland- 10 15 20 25 30 35 524 510 »acw-q . ana-u 12 ningen som används i höljen till tillverkade frön inom känd teknik, som vanligtvis är en blandning i förhàl- (CAS nr (CAS landet 9:1 av paraffin fràn Koster Keunen, Inc 8002-74-2) och karnaubavax fràn Koster Keunen, Inc. nr 8015-86-9). fröhöljen som framställts av vaxblandningen fràn känd Föreliggande uppfinnare har observerat att teknik sprack vid temperaturer under cirka l°C. En före- dragen vaxkomposition enligt föreliggande uppfinning är en blandning av 7 delar vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och 3 delar paraffin. Andra lämpliga förhäl- 5:5, 4:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, 8:2 and 9:1. Även om de beskrivna vaxkompositionerna är före- landen inkluderar 6:4, dragna, kan vilken vaxkomposition som helst med önskvärda egenskaper för användning i samband med ett tillverkat frö och med förmåga att motstå sprickning vid tempera- turer under cirka 1°C vara användbara enligt föreliggande uppfinning. De här beskrivna specifika vaxkompositioner- na är endast nägra exempel pà lämpliga vaxkompositioner.

Såsom nämnts ovan har vaxkompositionen som är användbar enligt föreliggande uppfinning en viskositet och en smältpunkt som gör den lämplig för användning i samband med tillverkade frön tillsammans med ett cellulosasub- strat, såsom ett pappersrör. Den önskade viskositeten för en lämplig vaxkomposition förändras beroende pà förfaran- det som används för applicering av vaxkompositionen pà cellulosasubstratet. Ett föredraget appliceringssätt som beskrivs här är doppning av cellulosasubstratet i en kom- position av smält vax när denna vaxkomposition är fly- tande vid en temperatur av cirka l45°C. När detta appli- ceringsförfarande används, bör vaxkompositionen inte vara så viskös vid appliceringstemperaturen att den inte kan belägga samtliga ytor av cellulosasubstratet under en rimlig tidsperiod eller vara alltför tjock pà vissa ställen sä att tjockleken inte blir enhetlig. Å andra sidan bör vaxkompositionen inte vara så flytbar vid appliceringstemperaturen att skiktet av avsatt vax är lO l5 20 25 30 35 ~ ø I | u - » | o nu u o ø ; | v 1 p .- 13 alltför tunt. Olika viskositeter är önskvärda för olika appliceringsförfaranden, såsom sprutning eller borstning.

Med hänvisning till fig 2 och 3 visas viskositets- tabeller och -kurvor som förklarar viskositeten för en föredragen vaxkomposition som är användbar i samband med föreliggande uppfinning. I fig 2 visas en tabell över viskositetsvärdena uttryckta i centipoise för en föredragen vaxkomposition, där viskositeten mäts med hjälp av en Brookfield-thermocell av typ Spindell nr 21 vid olika temperaturer. I fig 2 visas att viskositeten för en föredragen vaxkomposition är 23-50 centipoise vid olika temperaturer. En vaxkomposition med en viskositet inom området 23-50 centipoise är lämplig för många appli- ceringsförfaranden som sträcker sig från manuell doppning till automatiserad besprutning. Det är emellertid viktigt att notera att föreliggande uppfinning inte på något sätt är begränsad till en vaxkomposition med en viskositet inom detta område. Med hänvisning till fig 3 visas gra- fiskt de i fig 2 erhållna värdena. Såsom framgår är viskositeten för en föredragen vaxkomposition som är användbar tillsammans med föreliggande uppfinning 183 centipoise vid 74°C och minskar snabbare från 70°C till 80°C samt minskar därefter ganska gradvis till cirka 165°C, där viskositeten är 23 centipoise.

Med hänvisning till fig 4 och 5 analyseras mer detaljerat den delen av en föredragen vaxkomposition som utgör paraffinkolvätet. I en föredragen komposition har vaxkompositionen som är användbar enligt föreliggande uppfinning en huvudsaklig paraffinkomponent, där paraf- finkolvätena har en kolkedjelängd som sträcker sig från C21 till C40. Såsom visas i fig 4 och 5 inbegriper en föredragen vaxkomposition som är användbar enligt före- liggande uppfinning cirka 47 vikt% paraffinkolväte med kolkedjelängder som sträcker sig från C21 till C40. Såsom visas bäst i fig 5 är fördelningen av paraffinkolväte i en föredragen vaxkomposition en gaussfördelning, och maximumtypen av paraffinkolväte i föredragen vaxkompo- -.- ~øvq »-.- ~ u _ v.. _ n. vv v... 10 15 20 25 30 35 524 310 ggf u... ~ .>~" ._- Q u aoo-a u .nano 14 sition är hentriakontan, som är ett rakkedjigt paraffin- kolväte med 31 kolatomer per kedja. Trots att den i fig 4 och 5 avbildade vaxkompositionen har en maximal paraffin- kolvätehalt av hentriakontan, är det viktigt att notera att en lämplig vaxkomposition inte behöver ha detta som sitt maximum.

Vax av typ Blue Plasti-Ject Injection fràn Kindt Collins Company, Cleveland, Ohio, som beskrivits ovan, utgörs av cirka 50% petroleumvax (som övervägande är ett fast paraffinkolväte med minst 15 kolatomer per kedja), cirka 20% mikrokristallint petroleumvax, cirka 20% etylenvinylacetatsampolymer och cirka 10% kolväteharts.

Vaxet av typ Blue Plasti-Ject Injection används normalt inom juvelerarindustrin och har i sig egenskaper som kräver att det upphettas till en sàdan hög temperatur att det för att flyta vid en användbar viskositet är inkompa~ tibelt med beredning av fröhöljen genom användning av ett cellulosasubstrat, eftersom cellulosan kan brytas ner vid sàdana höga temperaturer. Paraffinvax som är tillgängligt (CAS nr 8002-74-2) viskositetsegenskaper som gör det alltför flytande för fràn Koster Keunen, Inc. har däremot användning vid beredning av fröhöljen med användning av ett cellulosasubstrat, eftersom vaxskiktet blir alltför tunt. Paraffinet fràn Koster Keunen har dessutom en smältpunkt som är alltför låg för användning i höljen till tillverkade frön, eftersom det flyter eller smälter vid mànga omgivande temperaturer som föreligger hos fröer på en plantskola eller på ett fält, särskilt pà slutt- ningar som exponeras för intensivt solljus. Tillverkade frön mäste ha förmåga att förbli fasta och skydda växt- embryot, varvid sålunda höljet mäste förbli fast vid tem- peraturer av cirka 49°C och mer.

Enligt föreliggande uppfinning kan följaktligen en vaxkomposition beredas genom att skäddarsy ett vax som uppvisar de önskade viskositetsegenskaperna beroende pà appliceringsförfarandet. Trots att en specifik utförings- form av föreliggande uppfinning har beskrivits ovan med 10 15 20 25 30 35 524 310 un... sunny. 15 avseende på en blandning i förhållandet 7:3 av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin, kan sålunda andra förhållanden ge lämpliga vaxkompositioner, förut- satt att de resulterar i ett fröhölje som inte spricker vid temperaturer av cirka 1°C eller lägre. Vaxkomposi- tioner som inbegriper andra vaxer än paraffin som är tillgängligt från Koster Keunen (CAS nr 8002-74-2) eller vax av typ Blue Plasti-Ject Injection, kan dessutom vara lämpliga för höljen till tillverkade frön enligt förelig- gande uppfinning, förutsatt att sådana vaxkompositioner resulterar i ett fröhölje som inte spricker vid cirka l°C eller lägre och som uppvisar viskositetsegenskaper som gör vaxkompositionen lämplig för applicering på ett cel- lulosasubstrat.

D. Lämpliga totipotenta växtvävnader Ett tillverkat frö inbegriper enligt en aspekt av föreliggande uppfinning en enhet av totipotent växtväv- nad. Såsom är allmänt känt inom tekniken kan totipotent växtvävnad erhållas från vilket som helst av flera områden av en växt, såsom meristemvävnad och Växtembryo- vävnad.

Meristemvävnad utgörs av odifferentierade växtceller som delar sig för erhållande av andra meristemceller, liksom differentierade celler som förlängs och speciali- seras ytterligare för bildning av stukturvävnader och organ hos växten. Meristemvävnad är t ex belägen i de yttre ändarna av växande skott eller rötter, i knoppar och i kambiumskiktet hos vedartade växter.

Växtembryovävnad finns (i form av ett ”zygotiskt” embryo) i ett botaniskt frö av en växt som produceras genom sexuell reproduktion. Även ”somatiska” växtembryon kan produceras genom odling av totipotent växtvävnad, såsom meristemvävnad, med hjälp av standardmetoder vid laboratoriebetingelser där cellerna som inbegriper väv- naden är åtskilda från varandra och drivs att utvecklas till mycket små fullständiga embryon. Alternativt kan ett förfarande benämnt ”klyvningspolyembryogeni”, som är a 'flluu .w v-.. v.. ~ _ 10 15 20 25 30 35 n v u» v 0 . . - - n n u Q .. 4 o a ~ . . . .. n . . . . u u» .u .. . .. - u u u n .- . ~ ~ u s u u > v". a 16 känt inom teknikomràdet, induceras under naturlig embryo- utveckling i ett frö.

Det här använda uttrycket ”enhet” av totipotent växtvävnad är en massa av sådan vävnad som kan hanteras individuellt och som kan utvecklas till ett groddämne och slutligen till en växt vid gynnsamma betingelser.

För användning vid föredragna utföringsformer av tillverkade frön enligt föreliggande uppfinning utveck- las enheten av totipotent växtvävnad företrädesvis till- räckligt sä att den har en skottände och en rotämnesände.

Hos vissa växtarter inkluderar skottänden ett eller flera hjärtblad i ett visst utvecklingsskede. Sådan totipotent växtvävnad av gymnospermer har till exempel vanligtvis flera hjärtblad belägna pä eller nära skottspetsen. Detta är också fallet med mànga tvähjärtbladiga växter.

Tillverkade frön enligt föreliggande uppfinning kan inkludera en enhet av totipotent växtvävnad fràn vilken växtart som helst (tvàhjärtbladiga, enhjärtbladiga, gym- nospermer etc).

E. En lämplig artificiell gametofyt I tillverkade frön enligt föreliggande uppfinning kan en hydratiserad gel tillsammans med eventuella andra ämnen inkluderade däri fungera som en artificiell gameto- fyt för enheten av totipotent växtvävnad. Beredningen av hydratiserade geler är välkänd inom teknikomràdet och involverar omvandling av ett ämne som beretts i en vat- tenbaserad kolloidal lösning till ett halvfast material (det här använda uttrycket ”hydratiserad” betecknar när- varo av fritt vatten genomgàende insprängt i matrisen av gelmolekyler, och ”härdning” eller ”stelnande” av den hydratiserade gelen hänför sig till förfarandet för omvandling av den vätskeformiga gellösningen till ett halvfast material).

Lämpliga gelämnen avsedda för upplösning är lös- liga i vatten, ej cytotoxiska och väsentligen icke- fytotoxiska. Det här använda uttrycket ”ett väsentligen icke-fytotoxiskt” ämne är ett ämne som väsentligen inte 10 15 20 25 30 35 17 interfererar med normal växtutveckling, såsom genom att döda ett betydande antal växtceller, väsentligen förändra den cellulära differentieringen eller mognaden, orsaka mutationer, sönderdela ett betydande antal cellmembraner eller avsevärt störa den cellulära metabolismen eller avsevärt störa vissa andra vitala processer. Kandi- datgelfastämnen och förfaranden för upplösning av fast- ämnena och beredning av den hydratiserade gelen är väl- kända inom teknikområdet. Närmare bestämt beskrivs kan- didatgelfastämnen och förfaranden för framställning av hydratiserade geler som är lämpliga för användning enligt föreliggande uppfinning mer detaljerat i USA-patentskrif- ten 6 199 395, som härmed i helhet är införlivad som referens.

En hydratiserad gel kan såsom diskuterats ovan ”syr- sättas” till att ha en högre syrekoncentration än vad som annars skulle kunna absorberas från atmosfären. Gelen kan också förmàs att inkludera andra önskvärda gaser utöver syre. En syrsatt gel säkerställer att den toti- potenta växtvävnaden förses med tillräckligt med syre för att undergå groning. Syrsättning av en gel eller in- förlivning av andra önskvärda gaser i gelen kan uppnås med hjälp av vilken som helst av flera representativa metoder, såsom utförligt beskrivits i t ex USA-patent- skrifterna nr 5 236 469 och 5 427 593, sin helhet är införlivade som referenser. Lämpliga gro- som båda här i ningsförsök involverande en serie av annars identiska tillverkade frön, av vilka vart och ett har en stegvis annorlunda syrekoncentration jämfört med andra tillver- kade frön i serien, kan användas för bestämning av den minimala syrekoncentrationen. Syrekoncentrationen bör vara åtminstone tillräcklig för att understödja till- räcklig tillväxt och groning av rotämnet hos en särskild växtart.

Företrädesvis förses den totipotenta växtvävnaden med vilken som helst av ett flertal tillsatser, t ex våxtnäringsämnen och andra fördelaktiga ämnen, såsom 10 15 20 25 30 35 2 .."... .. 5 4 3.10 ' ” '---'-"I-“A ."n :.¿ "'__'~|- ---- .... ... .. .""..."“ ._ _... ... _ _ _ -- - - . _. . : 18 vitaminer och en kol- och energikälla (här kollektivt benämnda ”näringsämnen”), antibiotika eller planttill- växtregulatorer (se t ex ”adjuvansen” som är listade i USA-patentskriften nr 4 779 376, som härmed i sin helhet är införlivad som referens).

De olika sätten att dispergera sådana tillsatser i en hydratiserad gel är välkända inom tekniken. Ett antal lämpliga näringsämnesformuleringar existerar inom teknik- området, inkluderande ett antal lämpliga formuleringar.

Ett populärt medium är t ex ”MS-vätska” (Murashige och Skoog, Physiologia Plantarum l5:473-497(l962)). ämneslösningen kan också inkludera planttillväxthormoner Närings- och andra föreningar som tjänar till att ytterligare öka sannolikheten för groddämnesöverlevnad.

Efter beredning av gelvätskan kan beredningen av enheter av härdad hydratiserad gel för användning vid framställning av tillverkade frön utföras pá ett antal sätt. Vätskeöverföring mellan den totipotenta växtväv- naden och den hydratiserade gelen kan utföras, t ex genom direkt kontakt eller via en intervenerande vatten- permeabel ”brygga”, såsom ett filterpapper. Den totipo- tenta växtvävnaden anordnas företrädesvis i ett i förväg utformat häl eller hàlrum i ett block av hydratiserad gel. Sàsom diskuterats ovan inkluderar det i förväg utformade hålet eller hálrummet företrädesvis en skott- begränsning. Gelen kan härdas i förformat tillstànd till ett föredraget tillstànd eller kan den formas som en större härdad massa och skäras till önskad storlek och form före insättning av den totipotenta växtvävnaden.

F. Definitioner Följande här använda uttryck definieras enligt föl- jande: ”Somatiskt embryo” är ett växtembryo som utvecklas via laboratorieodling av totipotenta växtceller eller genom inducerad klyvningspolyembryogeni.

”Zygotiskt embryo” är ett växtembryo som avlägsnats från ett frö av motsvarande växt. 10 15 20 25 30 35 . . . . ,, 524 310 19 ”Groddämne” är en enhet av totipotent växtvävnad som har undergått tillräcklig tillväxt och utveckling för att skjuta ut från ett fröhölje, vilket är analogt med upp- komst för ett naturligt botaniskt frö.

”Rotämnesände” är den del av en enhet av totipotent växtvävnad som utvecklas till växtens primära rot.

”Skott” eller ”skottände” totipotent växtvävnad som utvecklas till luftportioner av är den del av en enhet hos växten och inkluderar hjärtblad(en), epikotyl och/eller hypokotyl.

”Hjärtblad” hänför sig i allmänhet till den första, det första paret eller den första kransen (beroende på växttyp) av bladliknande strukturer på ett växtembryo som huvudsakligen fungerar så att de producerar närings- ämnen i fröet som är tillgängliga för den totipotenta växtvävnaden under utveckling, men som i vissa fall fungerar som näringsförråd eller fotosyntetiska struk- turer.

”Hypokotyl” är den del av ett växtembryo_eller en groddplanta som är belägen under hjärtbladen men ovanför rotämnet.

”Epikotyl” är den del av växten som utvecklas efter groning från stamspetsen.

”Hypokotylgroddämne” betecknar uppkomsten av ett skott från kapseln, vilket orsakas av en förlängning av hypokotylen på ett sätt som är tillräckligt för att spräcka kapseln. Detta uttryck beaktar inte eventuell längd, kriterier eller avsaknad av hypokotylmissbildningar.

”Totipotent” hänför sig till förmågan att växa och utvecklas i en normal växt. Totipotent växtvävnad har både den fullständiga genetiska informationen hos en växt och den färdiga förmågan att utvecklas till en fullstän- dig växt om den odlas vid gynnsamma betingelser.

”Artificiell gametofyt” hänför sig till den hydra- tiserade gelen tillsammans med andra eventuella ämnen 10 15 20 25 30 35 524 310 20 inkluderade däri för att fungera som en näringskälla för den totipotenta växtvävnaden.

Uppfinningen kommer att inses ytterligare genom hän- visning till följande exempel, som är avsett att endast belysa det bästa kända sättet för utövande av uppfin- ningen. Uppfinningens skyddsomfàng ska emellertid inte betraktas som begränsat till detta.

Exempel Pappersrör skars till fröhöljebildande längder av 1,9 cm. När de väl skurits ut formades fröhöljeslängdseg- menten till fröhöljen genom tillböjning av ena änden av de öppna ändarna så att den tillslöts. Olika vaxformu- leringar bereddes genom upphettning av vaxet i ett drag- skàp till en temperatur av 165-180°C. Tjugofem segment av 1,9 cm släpptes ner i vaxet, omrördes med omrörarstav och nedsänktes (vid behov). Nedsänkning av segmenten i vaxet säkerställer fullständig beläggning inuti. Detta tog cirka 2-5 minuter i anspråk att fullborda. När fröhöljena väl fullbordats avlägsnades de ett i taget och hälldes av pà kanten av en bägare. Den öppna änden läskades därefter pà en stapel av Kimwipes® (3-4 hög). När de väl läskats placerades fröhöljena över en tapp pà ett torkställ. Frö- höljena läskades för förebyggande av vaxuppbyggnad kring den öppna änden under torkning pà stället. Lufttorkning utnyttjades.

Fyra separata vaxformuleringar undersöktes. Den första vaxformuleringen är en blandning av paraffinvax som är tillgängligt fràn Koster Keunen, Inc. (CAS nr 8002-74-2) och karnaubavax, också tillgängligt frän (CAS nr 8015-86-9) i ett förhållande av 9:1 mellan paraffin och karnaubavax. Den första vax- Koster Keunen, Inc. formuleringen är det vax som användes i de tillverkade fröna som beskrivits inom den kända tekniken. Ytterligare vaxformuleringar bereddes med utgångspunkt fràn en bland- ning av paraffinvaxet som är tillgängligt fràn Koster Keunen och vax av typ Blue Plasti-Ject Injection Jewelry Cleveland, Ohio, i olika för- från Kindt Collins Company, 10 15 21 hàllanden mellan vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin. Trettio kopior av fröhöljen fylldes, tömdes på innehåll, försågs med lock för varje vaxformulering samt placerades samtidigt i en kyl vid 4°C. Dagligen under en period av fem dagar öppnades kylen och fröna undersöktes med avseende på sprickor. Sprickor bedömdes genom undersökning av fröna under ett standardmässigt dissektionsmikroskop. I fig 6 visas fröhöljet från känd teknik och i fig 7 visas fröhöljet som framställts enligt föreliggande uppfinning efter det att båda exponerats för temperaturer av cirka l°C och lägre. När väl bedömningen med avseende på sprickor inledningsvis utförts, sänktes kyltemperaturen med 2°C tills en temperatur av -5°C uppnåddes. När väl den slutliga temperaturen uppnåtts, avlägsnades fröna och bedömdes på nytt med avseende på sprickor. Resultaten är rapporterade i tabell l.

Tabell l Vax uppvärmt till Vax uppvärmt till Vaxformulering lsooc' lsooc' Temperatur sänkt Temperatur grad- till l°C. vis sänkt till 4°C till -5°C.

Blandning av paraffin Samtliga spruckna Samtliga spruckna och karnaubavax i för- hàllandet 9:1 (känd teknik) Blandning av vax av Inga sprickor Inga sprickor typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 7:3 Blandning av vax av Inga sprickor Inga sprickor typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 6:4 Blandning av vax av Inga sprickor Inga sprickor typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 5:5 524 310 ø = I u »- 22 . ø o u av Vaxformulering Vax uppvärmt till l80°C.

Temperatur sänkt till l°C.

Vax uppvärmt till l80°C.

Temperatur grad vis sänkt till 4°C till -5°C.

Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 4:5 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 4:6 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 3:7 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti~Ject Injection och paraffin i förhållandet 2:8 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 1:9 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 8:2 Inga sprickor Inga sprickor Blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 9:1 Inga sprickor Inga sprickor Värdena i tabell 1 ovan visar att åtskilliga bland- ningar av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin inte spricker vid temperaturer under l°C.

Dessutom bereddes fröhöljen som tillverkats i enlig- het med en föredragen vaxformulering enligt föreliggande uppfinning såsom beskrivits ovan och placerades direkt i en frys vid -20°C och hölls vid denna temperatur under 10 15 .I 0000 I 0 L':"':' ° - - --- ---- Ü Û bl: u n u v u nu u u u , .iH ' ' U i -. .v . , 23 cirka 24 timmar. Efter 24-timmarsperioden vid -20°C be- dömdes fröhöljet som framställts i enlighet med en före- dragen vaxformulering (en blandning av vax av typ Blue Plasti-Ject Injection och paraffin av 7:3) med avseende pà sprickor, och inga sprickor pàträffades. Resultaten av detta försök rapporteras i tabell 2.

Tabell 2 Vax uppvärmt till l4S° och placerat direkt i en frys vid -28°C Vaxformulering Blandning av vax av typ Blue Inga sprickor Plasti-Ject Injection och paraffin i förhållandet 7:3 Biologiska studier utfördes i jord från en plant- skola under simulerade plantskolebetingelser för bestäm- ning av viabiliteten av det nya fröhöljet och för bestäm- ning av huruvida den nya vaxformuleringen skadligt pâver- kar groning. Resultaten av dessa studier visas i tabell 3 och 4.

Tabell 3 Laterala Epikotyl- Groning Normalitet rötter förekomst Naturligt frö 100% 100% 100% 100% Blandning av paraf- 5l,4% 65,7% 57,l% 65,7% fin och karnauba i förhållandet 9:1 (känd teknik) Blandning av vax av 4l,4% 67,l% 5l,4% 67,1% typ Blue Plasti-Ject Injection och paraf- fin i förhållandet 7 3(nytt vax) 10 15 ' u» n- u u 5:24 3 'O - ----. vn“w sn: --- - - --.... .. . . H. : u. zu" n u , " ß run :unna nu. o n . u - , . , _ - -- - N . .. : . : 24 I tabell 3 visas procentuell groning, normalitet, laterala rötter och epikotylförekomst för samtliga be- handlingar. Ingen betydande skillnad registrerades vid ett a-värde av 0,0005. Groningen registrerades 34 dagar efter sàning.

Tabell 4 Rotämnes- Hypokotyl- Hjärtblads- längd längd längd Blandning av paraffin 7,94 cm 2,08 Cm 1,65 Cm och karnaubavax 1 for- hàllandet 9:1 (känd teknik) Blandning av vax av typ 6,40 cm 1,99 cm 1,60 cm Blue Plasti-Ject Injec- tion och paraffin i för- hållandet 7:3 I tabell 4 visas olika organlängder för vaxkompo- sitioner fràn känd teknik och för vaxkompositionerna enligt föreliggande uppfinning. I tabell 4 visas allmänt att vaxformuleringen enligt uppfinningen inte resulterar i någon statistiskt signifikant ändring i organlängd. Det förelåg inga betydande skillnader vid ett a-värde av 0,0005 i den analyserade datauppsättningen. Groningen registrerades 34 dagar efter sàning, och värdena àter- speglar endast de normala groddämnena.

Claims (21)

10 15 20 25 30 35 524 310 u v . . n. 25 PATENTKRAV

1. Tillverkat frö ingripande en enhet av totipotent vàxtvàvnad och ett hölje till det tillverkade fröet som innesluter den totipotenta växtvävnaden och som har en inneslutande del, varvid den inneslutande delen inbegri- per ett cellulosasubstrat och en vaxkomposition, som utgörs av cirka 47 vikt% paraffinkolvätekedjor med 21-40 kolatomer per kedja, och varvid den inneslutande delen motstàr sprickning vid temperaturer under cirka 1°C.

2. Tillverkat frö enligt kravet 1, varvid vaxkompo- sitionen har en viskositet av cirka 23 centipoise till cirka 50 centipoise.

3. Tillverkat frö enligt kravet 1, varvid vaxkompo- sitionen har en smältpunkt av 48-66°C.

4. Tillverkat frö enligt kravet 1, varvid cellulosa- substratet är ett pappersrör.

5. Tillverkat frö enligt kravet 1, varvid höljet till det tillverkade fröet är vattenimpermeabelt.

6. Tillverkat frö enligt kravet 1, varvid paraffin- kolvätekedjorna har gaussfördelning med en maximal kol- kedjelàngd inom området 28-33.

7. Tillverkat frö enligt kravet 6, varvid den maxi- mala kolkedjelängden är 31.

8. Fröhölje till tillverkade frön inbegripande ett cellulosasubstrat och en vaxkomposition, som utgörs av cirka 47 vikt% paraffinkolvätekedjor med 21-40 kolatomer per kedja, varvid fröhöljet motstàr sprickning vid temperaturer under cirka l°C.

9. Fröhölje enligt kravet 8, varvid vaxkompositionen har en viskositet av cirka 23 centipoise till cirka 50 centipoise.

10. Fröhölje enligt kravet 9, varvid vaxkomposi- tionen har en smältpunkt av 48-66°C.

11. Fröhölje enligt kravet 9, varvid cellulosasub- stratet är ett pappersrör. 10 15 20 25 30 524 310 26

12. Fröhölje enligt kravet 9, varvid fröhöljet är vattenimpermeabelt.

13. Fröhölje enligt kravet 14, varvid paraffin- kolvätekedjan har en gaussfördelning med en maximal kolkedjelängd i området cirka 28-33.

14. Fröhölje enligt kravet 15, varvid den maximala kolkedjelängden är 31.

15. Förfarande för framställning av ett tillverkat frö inbegripande tillhandahållande av en enhet av totipotent växtväv- nad; inneslutning av den totipotenta vävnaden i ett frö- hölje med en inneslutande del, varvid den inneslutande delen inbegriper ett cellulosasubstrat och en vaxkomposi- tion, som utgörs av cirka 47 vikt% paraffinkolvätekedjor med 21-40 kolatomer per kedja, och varvid den inneslut- ande delen motstàr sprickning vid temperaturer under cirka 1°C.

16. Förfarande enligt kravet 15, varvid vaxkompo- sitionen har en viskositet av cirka 23 centipoise till cirka 50 centipoise.

17. Förfarande enligt kravet 17, varvid vaxkomposi- tionen har en smältpunkt av 48-66°C.

18. Förfarande enligt kravet 17, varvid cellulosa- substratet är ett pappersrör.

19. Förfarande enligt kravet 17, varvid höljet till det tillverkade fröet är vattenimpermeabelt.

20. Förfarande enligt kravet 15, varvid paraffin- kolvätekedjorna har en gaussfördelning med en maximal kolkedjelängd inom området cirka 28-33.

21. Förfarande enligt kravet 20, varvid den maximala kolkedjelängden är 31.