SE469148B - Foerfarande och anordning foer att preparera cell- eller vaevnadsprov i analyssyfte - Google Patents

Description

469 ífå-å 2 fylls och töms på reagens. Nackdelen med dessa system är att de är mycket dyra och att högre koncentration av antikropp ofta krävs än vid manuell färgning.

När få patientprov ska prepareras sker'detta istället med manuell hantering av glasen individuellt eller i ett satsförfarande, varvid satsförfarandet består av gemensam doppning av objekt- glasen i olika bad, vilka har gemensamt att de består av billiga kemikalier. Vid denna doppning är objektlasen löst anordnade i en hållare. När dyra reagens ska anbringas tas objektglasen ut individuellt från hållaren och reagensen droppas för hand på objektglasen. Efter avslutande av detta steg sätts objektglasen tillbaka på plats i hållarna för att utföra ytterligare badsteg.

Dessa i och urplockningar i hållaren sker erfordrat antal gånger tills förloppet är avslutat och proven är redo att analyseras, t ex. genom mikroskopi. Detta förfarande har nackdelen att det är arbetsintensivt och följaktligen dyrt och tidskrävande.

Det var därför föreliggande uppfinnings uppgift att skapa ett förfarande och en anordning för satsvis färgning av cell- eller vävnadsprov som är billigt och tids- och arbetsbesparande samt som genom sin princip innebär en standardisering av förfarandet.

Föreliggande uppfinning löser detta genom de kännetecknande delarna till krav l respektive krav 5.

För att beskriva uppfinningens fördelar kommer först ett ett representativt förfarande för immunohistokemisk färgning enligt konventionell teknik och därefter ett enligt föreliggande uppfinning att beskrivas.

Efter paraffininbäddning av vävnadsprovet, snittningen och påföringen på objektglas, sker, vid det konventionella för- farandet, först ett antal bad för att avlägsna paraffinet, vilka i tur och ordning innehåller: xylen, absolut alkohol, 96% alkohol, 80% alkohol, 50% alkohol, destillerat vatten. Samtliga dessa steg sker i dragskåp, varvid objektglasen är anordnade i .,_,,..H_..H¿.“,.. .App _ _'.»_-,.,_,,,_. _17:- OO 3 en hållare och doppas satsvis i baden efter en bestämd tidscykel.

Därefter följer tvâ gemensamma steg: O,3% IQOZ i PBS (fosfat- buffrad saltlösning) och 1% BSA (bovint serumalbumin) i PBS.

Efter dessa steg ska den primära antikroppen tillsättas, vilket sker genom droppning på objektglasen. För detta ändamål måste objektglasen tas ut ur hållaren.och torkas torrt runt preparatet.

Flera snitt som härstammar från en enda patient vill man ofta testa på olika sätt genom att tillsätta olika primära antikroppar på varje individuellt objektglas. Om det handlar om snitt från flera patienter tillsätts samma primära antikropp till flera objektglas. Det behöver inte påpekas att noggrannheten.:i det förra fallet är mycket viktig eftersom varje objektglas ges en separat behandling.

Efter dessa steg sätts objektglasen tillbaka i hållaren och utsätts för en PBS-tvätt. Därefter tas glasen ur hållaren, torkas enligt tidigare beskrivning och förses med biotinylerad antikropp som droppas på snittet. När ytterligare ett PBS-bad har ge- nomförts tas objektglasen återigen ut ur hållaren och torkas, denna gång för att förses med droppar av ABC (avidin biotin)- komplex, och sedan in i hållaren för en ny PBS-tvätt.

Slutligen sker enzymframkallningen i dragskåp. Först plockas objektglasen ut ur hållarna och förses med enzymsubstrat, därefter in i hållarna igen för PBS-tvätt. De tre sista stegen, motfärgning, PBS-blåfärgning, PBS-tvätt, sker likaså med objektglasen på plats i hållarna. Efter detta är proven redo för analys.

Vid det konventionella förfarandet måste objektglasen plockas ur och in i hållarna sammanlagt tre till fyra gånger. Förutom de tids- och arbetskrävande aspekterna på detta kommer även risken för sammanblandning av objektglasen.

Vid förfarandet enligt föreliggande uppfinning används en speciellt utformad anordning. Anordningen visas i de bifogade ritningarna, i vilka 469 'šffä 4.

Fig. 1 är en stående sidovy av hållaren försedd med instuckna obj ektglas; Fig. 2 är en planvy av en hållare för objektglas eller andra provunderlag ; och Fig. 3 är en liggande sidovy av anordningen där ett kilformat element är infört i hållaren för att anordna objektglasen i trappstegs form.

En hållare 1 enligt uppfinningen är på insidan försedd med tungor 3 för parallell anordning av provförsedda objektglas 2 tätt intill varandra. Objektglasen hålls fast genom fjädring hos de tungor som formar spåren i vilka glasen skjuts in. Avstånden mellan de individuella glasen är litet och konstant, vilket minimerar reagensvolymerna. Hållaren l är öppen i båda ändarna och är i den ena änden försedd med tungorna 3. Vid samtliga badsteg, dvs. där rikligt med reagens används, är hållarna i det i Fig. 1 visade läget, dvs. samtliga objektglas skjuter ut lika långt från hållaren .

Till anordningen hör också en trappstegsformerare eller kilformat element 4, som visas i Fig. 3. Det kilformade elementet skjuts in från hållarens tungfria ände för att anordna obj ektglasen i trappstegsform vid de steg där reagensen ska droppas på de individuella glasen. Det är även tänkbart att ha en fast anordnad kilform i botten på hållaren.

Vid förfarandet enligt uppfinningen anordnas objektglasen 2 växelvis i rak form, dvs. en enhetlig längd av varje objektglas skjuter ut ur hållaren, och i trappstegsform, dvs. olika längd av varje objektglas skjuter ut ur hållaren, varvid den raka formen används vid doppning av objektglasen i olika bad och trappstegsformen, i vilken hållaren är vriden 90° i förhållande till den raka formen, används för påföring av små mängder reagens till proven på objektglasen. Proven är anordnade på ovansidan av 5 objektglasen vid trappstegsformen, lämpligen nära den främre kanten av respektive objektglas.

Enligt ytterligare ett särdrag av uppfinningen kan hållaren 1 vara sammankopplingsbar med en eller flera andra hållare. Vidare är det möjligt att utforma hållarna så att de är upphängningsbara i kyvetter eller andra.behållare för reagens- eller tvättlösning, t ex genom att en stång anbringas på hållarens tungfria ände, vilken stång skjuter ut från hållarens kanter och kan vila på en reagensbehållare så att objektglasen hänger ner i behållaren.

Dessutom är det tänkbart att utforma hållarna så att de är upphängningsbara i en robotarm. Kyvetter kan i sin tur vara fastsättbara. på en underlagsplatta på valfri plats för att möjliggöra sammansättning av en valfri reaktions- och tvättkedja.

När hållare med tvâ öppna ändar används kan underlagsplattan förses med en monterad trappstegsformerare.

Vid ovan nämnda steg i det konventionella förfarandet, i vilka objektglasen måste plockas ut ur hållaren för att förses med en droppe reagens och därefter föras in i hållaren igen, är det enligt föreliggande uppfinning möjligt att låta objektglasen vara kvar i hållaren genom att anordna dessa i trappstegsform. Genom trappstegsformen blir det möjligt att nå varje individuellt objektglas för att droppa på reagens på proven samtidigt som objektglasen sitter kvar i hållaren. När droppsteget är avslutat anordnas objektglasen återigen till utgångsläget enligt Fig. 1, där objektglasen är anordnade i rak form, dvs. de skjuter ut lika långt från hållares främre ände. Således sitter'objektglasen kvar på samma plats i hållaren såväl i början av förfarandet som i slutet därav, vilket minimerar risken för sammanblandning.

Eftersom i cmh urplockandet i hållarna bortfaller blir för- farandet dessutom ^tids- och. arbetsbesparande och. kräver' ett minimum av reagens.

Hållaren och dess tungor tillverkas företrädesvis av plast med deformeringszoner eller gummi eller annat material som har 469 'M8 6 förmåga att ta upp olika toleranser av objektglasen eller andra provunderlag.

Förutom ovan beskrivna immunohistokemiska färgning lämpar sig anordningen och förfarandet enligt uppfinningen för alla typer av färgningar, t ex immunocytokemiskt färgning, enzymhistokemisk färgning och in situ hybridisering. . me”. =.~.w.'»n~.v*e=vxflsn.~.z:-e m4» v. ....

Claims (4)

469 148 7 PATENTKRAV

1. Förfarande för att preparera cell- eller vävnadsprov i analyssyfte, vid vilket proven påförs på objektglas eller andra underlag och utsätts för tvättlösningar i relativt stora mängder och reagenslösningar i olika stor mängd, k ä n n e t e c k n a t av att förfarandet sker satsvis genom att_provförsedda objektglas (2) fästs i en hållare (1), och att objektglasen (2) anordnas växelvis i rak form, dvs. en enhetlig längd av varje objektglas skjuter ut ur hållaren, och i trappstegsform, dvs. olika längd av varje objektglas skjuter ut ur hållaren, varvid den raka formen används vid doppning av objektglasen i olika bad och trappstegsformen, i vilken hållaren är vriden 90° i förhållande till den raka formen, används för pâföring av små mängder reagens till proven på objektglasen.

2. Förfarande enligt krav 1, k ä n n e t e o k n a t av att objektglasen anordnas i trappstegsform för att applicera olika reagenslösning på de enskilda objektglasen.

3. Anordning för att preparera cell- eller vävnadsprov i analyssyfte, innefattande en hållare (1) för objektglas (2) eller andra underlag för proven, varvid hållaren (1) i ena änden på insidan är försedd med tungor (3) för bildande av spår för inskjutning och fäste av individuella objektglas, k ä n n e - t e c k n a d. av att anordningen innefattar ett kilformat element (4) för placering i hâllarens andra ände, vilket element orsakar att objektglasen anordnas i trappstegsform.

4. Anordning enligt krav 5, k ä n n e t e c k n a d av att det kilformade elementet (4) är löstagbart anordnat i hållaren, och att hållaren har två öppna ändar.