SE452197B - Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma - Google Patents

Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma

Info

Publication number
SE452197B
SE452197B SE8205388A SE8205388A SE452197B SE 452197 B SE452197 B SE 452197B SE 8205388 A SE8205388 A SE 8205388A SE 8205388 A SE8205388 A SE 8205388A SE 452197 B SE452197 B SE 452197B
Authority
SE
Sweden
Prior art keywords
electrophoretic gel
acid
electrophoretic
gel according
agarose
Prior art date
Application number
SE8205388A
Other languages
English (en)
Other versions
SE8205388L (sv
SE8205388D0 (sv
Inventor
W A Gurske
Original Assignee
Beckman Instruments Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beckman Instruments Inc filed Critical Beckman Instruments Inc
Publication of SE8205388L publication Critical patent/SE8205388L/sv
Publication of SE8205388D0 publication Critical patent/SE8205388D0/sv
Publication of SE452197B publication Critical patent/SE452197B/sv

Links

Classifications

    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/26Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
    • G01N27/416Systems
    • G01N27/447Systems using electrophoresis
    • G01N27/44704Details; Accessories
    • G01N27/44747Composition of gel or of carrier mixture

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

452 197 2 _.
Ett problem vid tidigare kända elektroforetiska metoder för separering av serumproteiner är att en avsevärd tidrymd (av storleksordningen 30 minuter eller mer) erfordras för att serumproteinerna skall bli fixerade, dvs. kunna iakttagas visuellt. Denna förhållandevis långa proteinfixeringsperiod gör tidigare kända serumelektroforetiska metoder till en tids- ödande procedur.
Det skulle sålunda vara mycket önskvärt att erhålla en elekt- roforetisk metod för separering av serumproteiner, varvid proteinfixeringstiden är förhållandevis kort. En sådan för- bättrad elektroforetisk metod för separering av serumproteiner skulle göra det möjligt för kliniklaboratoriet att ge vital information till diagnosställaren inom en kortare tidrymd. gppfinningens huvuddrag.
Enligt föreliggande uppfinning åstadkommes en förbättrad rr; i; . elektroforetisk gel för separering av serumproteiner, varmed det är möjligt att erhålla en hastig fixering av serumpro- teiner. Den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen är av den typ, på vilken ett prov som skall analyseras anbringas och underkastas elektrofores. Den förbättrade elektroforetiska gelen enligt uppfinningen innehåller en polysackarid och kän- netecknas av att den dessutom innefattar en sur polysackarid och salter därav, varvid syragruppen innefattar minst en kar- boxylgrupp. Det är närvaron av den sura polysackariden samt salter därav i den elektroforetiska gelen, som gör det möjligt att erhålla hastig fixering av serumproteiner. Uppfinningen avser även användning av denna gel vid ett förbättrat elektro- foretiskt förfarande för analys av den relativa fördelningen av proteiner av den typ, varvid ett prov som skall analyseras tillföres till en elektroforetisk gel och den elektroforetiska gelen elektroforesbehandlas.
Ytterligare kännetecken och därav följande fördelar med före- liggande uppfinning framgår för fackmannen vid en läsning av 452 197 3 följande detaljerade beskrivning av de föredragna utförings- formerna.
Beskrivning av de föredragna utföringsformerna.
Sura polysackarider, som kan användas enligt uppfinningen, innefattar, men är icke begränsade till, arabinsyra, traga- kantsyra, khayasyra, alginsyra, pektinsyra och linfrösyra.
Den föredragna sura polysackariden är arabinsyra.
Salter av sura polysackarider, som kan användas enligt upp- finningen, innefattar, men är icke begränsade till, natrium-, kalium-, kalcium- och magnesiumsalter därav. Exempel på sådana salter av syrapolysackarider innefattar, men är icke begränsade till, gummi arabicumsyra,'tragakantgummisyra, khayagummisyra, algingummisyra, pektingummisyra och linfrö- gummisyra.
Polysackarider, som lämpligen kan användas i den elektro- foretiska gelen enligt uppfinningen, är agar och agaros.
Agarosen kan vara antingen låg-elektroendosmos-agaros, medium- -elektroendosmos- eller hög-elektroendosmos-agaros. Före- trädesvis är den polysackarid, som användes i den elektro- foretiska gelen enligt uppfinningen, hög-elektroendosmos- -agaros.
Företrädesvis har den^buffert, som användes enligt uppfin- ningen, ett pH av ca 7 till ca 10. I synnerhet har bufferten ett pH av ca 8 till ca 9.
Den elektroforetiska gelen enligt föreliggande uppfinning kan valfritt dessutom innefatta ett konserveringsmedel. Typiska konserveringsmedel innefattar, men är icke begränsade till, antibiotika, halogenerade organiska föreningar och oorganiska föreningar. Ett lätt tillgängligt konserveringsmedel, som kan användas enligt uppfinningen, är natriumazid.
Den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen kan även val- 452 197 4 fritt innehålla en alkylpolyol med 2-6 kolatomer och 2-4 hydroxylgrupper. Lämpliga alkylpolyoler, som kan användas enligt uppfinningen, innefattar, men är icke begränsade till, etylenglykol, propandiol, butandiol, pentandiol och glycerol.
Företrädesvis har alkylpolyolen 2-4 kolatomer.
De exakta koncentrationerna av de olika beståndsdelar, som användes i den elektroforetiska gelen enligt uppfinningen, är icke kritiska. Den elektroforetiska gelen enligt uppfin- ningen innehâller emellertid företrädesvis från ca 0,4 till ca 1,5 % vikt/volym hög-elektroendosmos-agaros} från ca 0,01 till ca 5 % vikt/volym arabinsyra; upp till 20 % volym/volym etylenglykol; upp till l % vikt/volym natriumazid; och en buffert med ett pH av från ca 7 till ca 10 samt en molaritet av ca 0,001 till ca 3. Företrädesvis innefattar den elektro- foretiska galen enligt uppfinningen från ca 0,7 till ca 1,2 % vikt/volym hög-elektroendosmos-agaros; från ca 0,5 till ca 1,5 % vikt/volym arabinsyra; från ca 1 till ca lO % volym/volym etylenglykol; från ca 0,05 till ca 0,15 % vikt/- volym natriumazid; och en buffert med ett pH av från ca 8 till ca 9 samt en molaritet av från ca 0,05 till ca l.
Optimalt innefattar den elektroforetiska gelen enligt upp- finningen ca l % vikt/volym hög-elektroendosmos-agaros; ca l % vikt/volym arabinsyra; ca 5 % volym/volym etylenglykol; ca 0,1 % vikt/volym natriumazid; och en barbitalbuffert med ett pH av ca 8,6 och en molaritet av ca 0,05.
De elektroforetiska gelerna enligt uppfinningen kan framstäl- las med godtycklig metod, som är välkänd för fackmannen. Se exempelvis Cawley, supra. I allmänhet beredes gellösningen genom sammanblandning av de olika beståndsdelar som närvarar i denna under upphettning av blandningen till en temperatur av ca 80 till ca lO0°C. Den elektroforetiska gelen kan fram- ställas med antingen formnings- eller gjutningsmetoder av standardtyp. Gelerna kan lagras vid godtycklig lämplig tem- peratur, exempelvis från ca 20 till ca 40°C, företrädesvis från ca 180 till ca 2600. Det är lämpligt att lagra de elektroforetiska gelerna i förseglade plastkärl tills de är 452 197 färdiga för användning.
Prover kan tillföras till de elektroforetiska gelerna enligt uppfinningen med godtyckliga metoder, som användes enligt tidigare känd teknik, exempelvis via en mikroliter-injektions- spruta. De elektroforetiska gelerna kan underkastas elektro- iâärës vid 100 volt 20 minuter. Om så önskas kan gelerna fixeras i en alkohol:ättiksyra-blandning, exempelvis 60 % reagensalkohol, 30 % dejoniserat vatten och l0 % isättiksyra.
Dessutom kan gelerna om så önskas torkas vid ca 80 till ca 90°C.
Följande exempel är avsedda att enbart åskådliggöra uppfin- ningen och är icke avsedda att begränsa den beskrivna uppfin- ningen.
Exempel 1.
De tvâ elektroforetíska gelkompositioner, som anges i tabell I, användes var och en i följande protokoll för att åskådliggöra den förbättrade elektroforetiska metoden enligt uppfinningen för separering av serumproteiner och den förbättrade elektro- foretiska gelen för användning härvid. Den enda skillnaden mellan de två elektroforetiska geler, som användes vid detta jämförande försök, var att den elektroforetiska gelen inom uppfinningsområdet innehöll arabinsyra, dvs. en specifik sur polysackarid, under det att den elektroforetiska gelen utanför uppfinningens omfång icke innehöll någon sur polysackarid.
Protokoll.
Elektroforetisk metod. l.O Ett serumprov anbringades på ytan av gelen via en schablonmetod. 2.0 Gelen underkastades elektrofores i barbital- buffert, pH 8,6. 3.0 Gelen infördes i en fixeringslösning innehållande dejoniserat vatten, etylalkohol och isättiksyra (3:6:l) tills utfällning erhölls och observerades. 452 197 6 De resultat som erhölls från ovan angivna protokoll för varje gelkomposition enligt tabell I anges även i tabell I.
Såsom serumproteinfixeringstiderna i tabell I visar, kan en elektroforetisk metod för separering av serumproteiner med användning av den förbättrade elektroforetiska gelen enligt uppfinningen ge fixering av serumproteiner inom mindre än 3 minuter. Till skillnad mot detta kunde en likadan metod, som skilde sig enbart i att den elektroforetiska gel som användes härvid saknade sur polysackarid (i vilken den sura gruppen innefattar minst en karboxylgrupp) eller salter därav, icke ge fixering av serumprotein ännu efter en 30~minuters period.
Baserat på denna beskrivning är en mångfald andra modifika- tioner och utföringsformer uppenbara för fackmän. Dessa är avsedda att innefattas av uppfinningens omfång. ' 452 197 OMAU MVH Hwßficflš ~^u_ wflummfifiumäflwcflwuonmšfluww X X N X cwmfiflcnflwmmø umfiflcw hm Hmm xwfluwuowouuxmfim cwmfiflsøflwmmø umflficm Hmm xmfluwuououuxmflm .H Hawfiflß mo.o mx»>»m=ofi “uom~|o~ wfl> H.o | @.w mm .uuwwwønfißpflnumm + floxæflmcmfimvw ucmuOumE>fl0> m wflmmësfiuumc H\m H muhmcfinmum H\m ofi Awoëwowøwouuxwfiw mwnv moumwm H\m ofl .HNHOUWUEWNWUQ

Claims (10)

1 krav, k ä n n e t e c k n a d därav, att den vidare inne- f fattar en alkylpolyol med 2-6 kolatomer och 2-4 hydroxyl- ' grupper. ägget hög-elektroendosmos-agaros. 452 197 Z PATENTKRAV
1.. Elektroforetisk gel av den typ, som innefattar en polysackarid, ktä n n e t e c k n a d av att den elektro- foretiska gelen vidare innefattar en sur polysackarid och salter därav, varvid syradelen av den sura polysackariden innefattar minst en karboxylgrupp.
2. Elektroforetisk gel enligt patentkravet l, k ä n n e - t e c k n a d därav, att den sura polysackariden väljes från gruppen bestående av arabínsyra, tragakantsyra, khayasyra, alginsyra, pektinsyra och linfrösyra.
3. Elektroforetisk gel enligt patentkravet 1 eller 2, k ä n n e t e c k n a d därav, att salterna väljes från en grupp bestående av salter av natrium, kalium, kalcium och magnesium.
4. Elektroforetisk gel enligt något av föregående patent- krav, k ä n n e t e c k n a d därav, att den vidare inne- fattar en buffert med ett basiskt pH, företrädesvis ca 7-10 och speciellt ca 8-9.
5. Elektroforetisk gel enligt något av föregående patent- krav, k ä n n e t e c k n a d därav, att den vidare inne- fattar ett konserveringsmedel, i synnerhet natriumazid och eventuellt en alkylpolyol med 2-5 kolatomer, i synnerhet 2-4 kolatomer, företrädesvis etylenglykol.
6. Elektroforetisk gel enligt något av föregående patent-
7. Elektroforetisk gel enligt något av föregående patent- krav, k ä n n e t e c k n a d därav, att polysackariden väljes från en grupp bestående av agar och agaros, i synner- L..._ ...us _.,._-__..>.. å!! 452 197 'i
8. Elektroforetisk gel enligt något av föregående patent- krav, k ä n n e t e c k n a d därav, att den innefattar: (a) från ca 4 till ca 15 g/l, företrädesvis ca 7-12 g/l hög~elektroendosmos-agaros, (b) från ca 0,1 till ca 50, företrädesvis ca 5-15 g/l arabinsyra, (c) upp till 20 volymprocent, företrädesvis 1-10 volymprocent etylenglykol, (d) upp till 10 g/l, företrädesvis ca 0,5-1,5 g/l natriumazid och (e) bufferten har ett pH av från ca 7 till ca 10, företrädesvis ca 8-9, och en molaritet av från ca 0,001 till ca 3, företrädesvis ca 0,05-1.
9. Elektroforetisk gel enligt patentkravet 8, k ä n n e - t e c k n a d därav, att den innefattar: (a) ca 10 g/l hög-elektroendosmos-agaros, (b) ca 10 g/l arabinsyra, (c) ca 5 volymprocent etylenglykol, (d) ca 1 g/l natriumazid och (e) barbitalbufferten har ett pH av ca 8,6 och en molaritet av ca 0,05.
10. Användning av en elektroforetisk gel enligt något av patentkraven 1-9 vid ett förbättrat elektroforetiskt för- farande för analys av den relativa fördelningen av proteiner av den typ, varvid ett prov som skall analyseras tillföres till en elektroforetisk gel och den elektroforetiska gelen elektroforesbehandlas.
SE8205388A 1981-01-19 1982-09-20 Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma SE452197B (sv)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/226,566 US4319976A (en) 1981-01-19 1981-01-19 Electrophoretic technique for separating serum proteins and improved electrophoretic gel for use therein

Publications (3)

Publication Number Publication Date
SE8205388L SE8205388L (sv) 1982-09-20
SE8205388D0 SE8205388D0 (sv) 1982-09-20
SE452197B true SE452197B (sv) 1987-11-16

Family

ID=22849431

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SE8205388A SE452197B (sv) 1981-01-19 1982-09-20 Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4319976A (sv)
DE (1) DE3231627C2 (sv)
IT (1) IT1151101B (sv)
SE (1) SE452197B (sv)
WO (1) WO1982002599A1 (sv)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0183711A1 (en) * 1984-03-12 1986-06-11 Beckman Instruments, Inc. Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and improved electrophoretic gel for use therein
US4808288A (en) * 1984-03-12 1989-02-28 Beckman Instruments, Inc. Electrophoretic gel for separating hemoglobin variants
EP0162657B1 (en) * 1984-05-14 1991-02-06 Fuji Photo Film Co., Ltd. Element for electrophoresis
JPS6266153A (ja) * 1985-09-18 1987-03-25 Fuji Photo Film Co Ltd 電気泳動用媒体
US5144013A (en) * 1986-09-24 1992-09-01 Ube Industries, Ltd. Body fluid purifying material and method for purifying body fluid by use thereof
US4997537A (en) * 1986-10-21 1991-03-05 Northeastern University High performance microcapillary gel electrophoresis
US5665216A (en) * 1986-10-21 1997-09-09 Northeastern University Capillary column for high performance electrophoretic separation and detection of SDS proteins and system and using the same
US4857163A (en) * 1987-07-17 1989-08-15 Beckman Instruments, Inc. High resolution electrophoretic gel and method for separating serum proteins
US4999340A (en) * 1988-08-04 1991-03-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Rehydratable agarose gels
FR2684998B1 (fr) * 1991-12-11 1994-10-28 Sebia Sa Procede de separation de la lp(a) par electrophorese, gels pour la mise en óoeuvre de ce procede, et application a la determination in vitro du risque atherogene lie a la presence de la lp(a).

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3527712A (en) * 1967-03-07 1970-09-08 Marine Colloids Inc Dried agarose gel,method of preparation thereof,and production of aqueous agarose gel
US3959251A (en) * 1970-06-25 1976-05-25 Exploaterings Aktiebolaget T.B.F. Stabilized agar product and method for its stabilization
US3956273A (en) * 1971-06-07 1976-05-11 Marine Colloids, Inc. Modified agarose and agar and method of making same
GB1435508A (en) * 1972-05-01 1976-05-12 Rech Et Dapplications Scient S Process for the preparation of crosslinked polysaccharide gels
US3766047A (en) * 1972-09-11 1973-10-16 F Elevitch Gel for electrophoresis
US3947352A (en) * 1974-05-31 1976-03-30 Pedro Cuatrecasas Polysaccharide matrices for use as adsorbents in affinity chromatography techniques
US4305798A (en) * 1980-04-11 1981-12-15 Bryce Allen Cunningham Method of preparative, Kohlrausch-regulated electrophoresis using polyethylene glycol derivatized trailing ions

Also Published As

Publication number Publication date
SE8205388L (sv) 1982-09-20
IT1151101B (it) 1986-12-17
WO1982002599A1 (en) 1982-08-05
US4319976A (en) 1982-03-16
DE3231627T1 (de) 1983-12-01
SE8205388D0 (sv) 1982-09-20
DE3231627C2 (de) 1987-06-19
IT8219190A0 (it) 1982-01-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Pauling et al. Structure of the nucleic acids
Cremonesi et al. Double-gradient DGGE for optimized detection of DNA point mutations
SE452197B (sv) Elektroforetisk gel samt anvendning av densamma
SE452371B (sv) Elektroforetiskt forfarande
Beattie et al. Analysis of metallothionein isoforms by capillary electrophoresis: optimisation of protein separation conditions using micellar electrokinetic capillary chromatography
Hamlin et al. The subunit characterization of Callinectes sapidus hemocyanin
JPS6352341B2 (sv)
Petermann et al. 5S Ribonucleic acid-protein complex extracted from rat liver ribosomes by formamide
EP1129344B1 (en) Methods and formulations for the separation of biological macromolecules
Reboud et al. Partial extraction of proteins from rat liver ribosomes, and the physical properties of the residual nucleoprotein particles
JPH1123530A (ja) 電気泳動技術に用いる安定な変性剤及びその使用方法
Leclair et al. Precision and accuracy in fluorescent short tandem repeat DNA typing: Assessment of benefits imparted by the use of allelic ladders with the AmpFlSTR® Profiler Plus™ kit
US4808288A (en) Electrophoretic gel for separating hemoglobin variants
US4696958A (en) Electrophoretic technique for separation of lipoproteins and electrophoretic gel for use therein
EP0189422B1 (en) Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and electrophoretic gel for use therein
US11815488B2 (en) Use of tri- and tetra-hydroxyl quaternary ammonium compounds as resolving agents for electrophoretic separations
WO1985004251A1 (en) Electrophoretic technique for separating hemoglobin variants and improved electrophoretic gel for use therein
US5635046A (en) Method for drying polyacrylamide gel after electrophoresis
US7083711B2 (en) Capillary electrophoresis gel especially for separation made for single stranded nucleic acid separations
Mort et al. Use of scavenger beads to remove excess labeling reagents from capillary zone electrophoresis samples
Cole et al. Modification of the electrokinetic properties of reversible electrophoresis gels for the separation and preparation of DNA: addition of linear polymers
Noordegraaf Electrophoresis of glucosaminoglycans on cellulose acetate membranes with cation electrolytes: an electrofocusing phenomenon
Aasted Highly purified agarose as stacking gel in sodium dodecyl sulphate/polyacrylamide-gel electrophoresis.
Draus Characteristic of a canine submaxillary mucoid
Gehrke et al. Semiquantitative Gel Electrophoresis

Legal Events

Date Code Title Description
NAL Patent in force

Ref document number: 8205388-5

Format of ref document f/p: F