SE448121B - Elektroforetiskt forfarande och anordning for separation av partiklar i en gelplatta - Google Patents

Description

15 20 25 30 448'121,_ 2.

Detta ernås medelst förfarandet enligt uppfinningen huvudsakligen genom att separationsmediet vrids med förutbestämda intervaller i ett plan mellan olika vrid- ningslägen i ett och samma elektriska fält. var Anordningen enligt uppfinningen kännetecknas huvudsakligen av att den innefattar dels en vridbar bärplatta för upp- bärande av separationsmediet, vilken bärplatta är anordnad mellan fältalstringsorgan för alstring av ett elektriskt fält, och dels en tidsstyrd drivanordning för vridning av bärplattan med förutbestämda intervaller i ett plan mellan olika vridningslägen i det elektriska fältet.

FIGURBESKRIVNING Uppfinningen beskrives närmare nedan under hänvisning till bifogade ritning, på vilken , Fig. l.schematiskt visar en utföringsform av en anordning enligt uppfinningen med ett separationsmedium i ett första vridningsläge och f to Fig. 2 visar'anordningen enligt Fig. l med separations- medietfi¿ett andra vridningsläge.

BESKRIVNING ü n I Fig. l betecknar 10 en utföringsform av en konventionell íelektroforeskammarei Den i planvy visade kammaren 10 är öppen uppåt, rektangulär-samt gjord av ett elektriskt isole- 7 rande material, exempelvis plexiglas. Vid den visade utförings- formen sträcker sig elektroder ll och l2 längs kammarens 10 kort- sidor. Dessa elektroder ll och 12 är anslutna till en lik- spänningskällasil3 plus-respektive minuspol. Elektrofores- kammaren 10 är på i.och för sig känt sätt fylld med lämplig buffertlösning.

Enligt uppfinningen är en vridbar bärplatta 14 anordnad i elektroforeskammaren 10, vilken bärplatta 14 är avsedd att uppbära ett separationsmedium, exempelvis en gelplatta 15, 10 '15 I Fig. 2 överensstämmer Éšlt och hållet med Fig..l med 20 lzs 30 polika långa: Härigenom hl 448 121 3 i vilken en separation av partiklar i på gelplattan 15 anbragta prov l6 är avsedd att äga rum med hjälp av det elektriska fältet mellan elektroderna ll och l2.

Bärplattan 14 är anordnad vridbar med hjälp av en i och för sig känd drivanordning 17, exempelvis en elektrisk g mOtOr .

Enligt uppfinningen vrids plattan 14 med hjälp av motorn l7l runt sin centrumaxel med förutbestämda intervaller med hjälp av en tidskrets 18 mellan olika, förutbestämda vridnings- lägen.

Såsom antydes medelst en streckad linje 19 kan tidskretsen 18 vara ansluten till likspänningskällan 13 för att bort-p koppla denna under vridningen av bärplattan 14. vridningsintervallen som v"Åointervallen mellan dessa_blir Eldet-möjligt att göra vinfi mellan de olika vridningslägena för plattan 14 olika stora. _undantag av att bärplattan.l4 med gelen 15 vridits tilld w ett andra vridningsl ge somiskiljer sig med mer än 900 från det i Fig. l visade vridningsläget, i än Genom att i engi _ t me fföreliggande uppfinning vrida separatíonsmedieL 3 gelen 15 vid den visade utförings- formen, erhâl es . elektrisk synpunkt förenklad och förbättraa ke st u~ ion.jämfört med de hittills kända anord ningarna. Z M Vridningsvinkelns betydelse för det erhällna separatioñse resultatet belyses nedan.

Två elektroforesseparationer genomfördes under identiska förhållanden vad beträffar spänning, buffert, temperatur 10 157 20 448 121 4. och prov. I båda fallen var proven en oligomerisk serie av )\-DNA-molekyler. I I Molekylernas rörelsehastighet i gelen, d, beräknades med : m gd cosA I hastighet längs gelens centrumlinje och A är vinkeln-mellan hjälp av formeln , där m är molekylernas rörelse- g denna centrumlinje och det elektriska fältet.

I det ena fallet vreds gelen 800 med l0 s intervall, medan gelen i det enarefallec vrede llo° med lo e intervall." ' I fallet med en vridningsvinkel av 800 upnmättes rörelse- hastigheten hos Å ÉDNA längs gelens centrumlinje till , 2,8 mm/s och hos oligomererna till mellan 2,4 och 2,55/um/s.

Om man dividerar dessa värden med cos 400 erhålles följande rörelsehastigheter_genom gelen under pulsen: 3,6/pm/s för monomeren och mellan 3,1 och 3,3jmm/s för oligomererna.

I fallet med en vridningsvinkel av ll0°.uppmättes rörelse- hastigheten hos Å-DNA längs gelens centrumlinje till 2¿l)mVs.

Oligomererna uppdelades tydligt i ett stegmönster med rörelsehastigheter från 1,8 pm/s för dimeren till 0,46 pm/s för de ouppdelade molekylerna större än oktameren. Genom - att dividera med cos 550 erhålles 3,61 pm]s för monomeren eoch mellan 3,1 och 0,8 pm/s för oligomererna. _Härav framgår det att vid en vridningsvinkel, som är större än 900, reduceras stora molekylers rörelsehastighet mycket mer än små molekylers. -w Vä

Claims (10)

448 1121 V PATENTKRAV

1. l. Elektroforetiskt förfarande för separation av partiklar 1 en gelplatta (15) där partiklarna drives växelvis i olika riktningar i geipiattan (15) , k äfn n e t e cpk n a t a v, att gelplattan (15) vrids med förutbestämda intervaller i sitt eget plan mellan olika vridningslägen i ett och samma elektriska fält. _

2. Förfarande enligt kravet 1, k ä n n e t e c k n a t a v, att intervallen göres olika långa.

3. Eörfarande enligt kravet l, k ä n n e t e c k n a t a v, att vinklarna mellan vridningslägena görs varierbaraß

4. Förfarande enligt kravet 3, k ä nvn e t e c k n a t a'v, att vinklarna göres större än 900.

5. Förfarande enligt kravet l, k ä n n e t e c k n a t a v, att det elektriska fältet göres homogent.

6. ; Elektroforetisk anordning för separation av partiklar i en gelplatta (15) och innefattande organ för att driva partiklarna växelvis i olika riktningar i gelplattan, k ä n nde t e c k n a d a v, att nämnda organ innefattar dels en vridbar bärplatta (14) för uppbärande av gelplattan (15), vilken bärplatta (14) är anordnad mellan fältalstringsf organ (ll, 12) för alstring av ett elektriskt fält, och dels en tidsstyrd drivanordning (17) för vridning av bärplattan (14) med förutbestämda intervaller i sitt plan mellan olika vridningslägen i det elektriska fältet.

7. Anordning enligt kravet 6, k ä n n e t e c k n a d a v, att fältalstringsorganen (ll, 12) är anordnade att alstra ett homogent elektriskt fält, 448 121 >

8.- Anordning enligt kravet 6, k ä n n e t e c k n a d a v, att drivanordningen (17) är styrd att variera inter- vallens längd.

9. Anordning enligt kravet 6, k ä n n e t e c k n a d a V, att drivanórdningen (17) är styrd att variera vrid- ningsvinklarna.

10. Anordning enligt kravet 9, R åvn n e t e_c k n a d n . . 4 r n n ot a v, att vrldnlngsvlnklarna ar storre an 90 . .J ë då uím ~