SE446006B - (20s) 3alfa-/(aminoacetyl)-amino/-5alfa-preganan-20-ol och additionssalter derav samt farmaceutiska kompositioner innehallande dessa - Google Patents

Description

soossos-3 Uppfinningen avser sålunda även (208) 3a-¿Ramino-ace- tyl)-aminqy-Su-pregnan-20-ol samt dess additionssalter med de farmaceutiskt godtagbara syrorna såsom läkemedel._Uppfinnin- gen avser farmaceutiska kompositioner som, såsom aktiv huvud- beståndsdel, innehåller minst ett enligt ovan definierat lä- kemedel. f Dessa kompositioner kan administreras i synnerhet oralt, rektalt och parenteralt. ' W De kan vara fasta eller vätskor och föreligga i de farmaceutiska former,_som ofta användes inom humanmedicinen, såsom t.ex. tabletter, enkla eller överdragna, kapslar, gra- _nulat, suppositorier, injicerbara beredningar. De framstäl- les med de vanliga förfarandena. .

”Den aktiva beståndsdelen eller de aktiva beståndsde- larna kan inkorporeras däri med utdrygningsmedel, som vanli- gen användes i dessa farmaceutiska kompositioner, såsom talk, gummi arabicum, laktos, stärkelse, magnesiumstearat, kakao- smör, vehiklar, vattenhaltiga eller ej, fetter av animaliskt eller vegetabiliskt ursprung, paraffinderivat, glykoler, vät-, .disperger- eller emulgermedel, konserveringsmedel.

Den administrerade dosen varierar beroende på den be- handlade åkomman, individen ifråga, administreringssättet och den avsedda produkten. Den kan t.ex. ligga mellan 1 och 100 mg/dag vid oral administrering till den vuxne.

De ovan definierade föreningarna kan framställas ge- nom att man omsätter funtumidin eller (20S) 3a-amino-5H-preg- nan-20-ol med en aminosyra med formeln O HO-C-CHZNHR II vari R beteeknar en skyddsgrupp, som lätt spaltas, i synner- I het med hydrogenolys, för framställning av en förening med formeln III 8005309-3 III som omsättes med ett spaltande medel för R-gruppen för fram- ställning av den önskade föreningen med formeln I OH som, om så önskas, omsättes med en syra för framställning av saltet därav.

Såsom R-grupp kan man t.ex. använda karbobensyloxi- gruppen eller karboter-butyloxigruppen. Uppfinningen avser i synnerhet ett förfarande, som kännetecknas av att skyddsgrup- pen R är karbobensyloxigruppen.

Reaktionen mellan (20S) 3a-amino~5a-pregnan-20-ol och aminosyran med formeln II kan ske i närvaro av ett kondensa- tionsmedel.

Kondensationsmedlet har naturligtvis till uppgift att aktivera syrafunktionen i aminosyran med formeln II ä? H0-C-CHZNHR II 8005309-3 Såsom kondensationsmedel kan man använda en karbodi- imid med formeln R -N=C=N-R vari R1 och R2, lika eller olika, betecknar en alkylgrupp med 1 - 8 kolatomer, och eventuellt är bärare av en dialkylamino- grupp, eller betecknar R1 och R2 en cykloalkylgrupp.

Bland de senare kan t.ex. nämnas dicyklohexylkarbodi- imid eller 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimid.

Man kan även använda ett alkylklorformiat såsom t.ex. metylklorformiat eller etylklorformiat. Man kan också använda ett alkylpyrofosfit såsom t.ex. etylpyrofosfit. Såsom konden- sationsmedel användes företrädesvis 1-etyl-3-(3-dimetylamino- -propyl)-karboaiimia.

Såsom spaltande medel användes företrädesvis väte i närvaro av palladium.

Framställningen av salter sker med de vanliga förfaran- de, t.ex. genom tillsats av syror. 7 Den använda utgångsprodukten, nämligen (208) 3u-amino- ~5a-pregnan-20-ol är en känd produkt (se härför Merck Index, nionde upplagan, paragraf 4144).

Följande exempel beskriver uppfinningen utan att be- gränsa den.

Exempel 1 (208) 3a-Lïaminoacetyl)-amino]-Su-pregnan-20-ol (klor- hydrat och bas) steg A (205) 3u-Zïbensyloxi-karbonylamino-acetyl)-aminQ7-5a- -pregnan-20-ol Man löser upp 5,2 q (205) 3u-amino-Su-pregnan-20-ol och 5,2 g N-karbobensuloxiglycin i 150 ml kloroform och 15 ml pyridin. Lösningen omröres 1 isbad under kväve, och 3,9 g 1-etyl-3-(3-dimetylaminopropyl)-karbodiimidklorhydrat till- sättes. Efter 1 timme tillsättes pâ nytt 310 mg 1-etyl-3-(3- _¿imety1aminopropyl)-karbodiimidklorhydrat, och omrörniugen upprätthålles under en halv timme i isbad, varefter spädes 8005309-3 med en mättad lösning av natriumvätekarbonat. Det olösliga materialet filtreras, tvättas för sig med en natriumväte- karbonatlösning, med vatten, med 1 N saltsyra och med Vatten samt torkas sedan vid 500 C. Man erhåller sålunda 5,1 g olös- ligt material. Kloroformfasen separeras från filtratet och tvättas därefter med vatten, 1 N saltsyra, med vatten, tor- kas och destilleras till torrhet. Man erhåller 4,6 g halv- kristalliserad återstod. Det olösliga materialet (5,1 g) och det torra extraktet (4,6 g) förenas och utröres till en deg med 25 ml metanol och âterloppskokas. Man kyler med is, cent- rifugerar, tvättar med metanol och torkar vid 500 C. Man er- håller sålunda 7,05 g av den önskade produkten med en smält- punkt av 250 - 2520 C, som användes som den är i följande steg. Det analytiska provet smältpunkt 2540 C, erhålles ge- nom omkristallisation i ättiksyra.

Steg B Klorhydrat av (20S) 3fl~-Llaminoacetyl)-aminq]-5d.- pregnan-20-ol. 7 g av den produkt, som erhölls i steg A, upplöses i värme i 150 ml ättiksyra. Man rör om den erhållna lösning- en under k ävegenombubbling, kyler till 45° C och tillsätter 700 mg palladium på kol 10 %. Man ersätter kvävegenombubb- lingen med en lätt vätgasgenombubbling. Efter l timme ersät- tes en kväveström med vätgasström, och genombubblingen fort- sättes under 15 minuter. Därefter filtreras katalysatorn och sköljes med ättiksyra. Filtratet indunstas till torrhet. Den kristalliserade produkten upplöses i 50 ml metanol. Genom tillsats av 4 ml av en 5,5 N saltsyralösning i etanol faller den önskade fällningen ut.

Suspensionen spädes med 50 ml absolut etanol. Den koncentreras till hälften och får stå en natt vid +50 C. Man centrifugerar, tvättar med etanol och torkar. Man erhåller 4,43 g av den önskade produkten.

Filtratet, försatt med 0,5 ml av en 5,5 N saltsyra- lösning i etanol och koncentrerat till liten volym ger ett andra utbyte om 0,35 g av den önskade produkten. Man erhåller den önskade produkten i ren form med en smältpunkt av 2710 C efter omkristallisation i 80-procentig etanol. 8005509-3 /az/âo = + 19°s 1 1° (1 %, pyriain med io % vatten) Steg C Framställning av basen.

Man har använt det råa klorhydrat, som erhölls i steg B. Det råa klorhydratet upplöses i varmt vatten. Genom tillsats av ett överskott av 2 N natriumhydroxid faller ba- sen ut. Den centrifugeras, tvättas med vatten, torkas och om- kristalliseras i metanol.

-Man erhåller sålunda den önskade rena produkten med en smältpunkt av 269° C. /ct/â° = +2s° i 1° (1 %, pyriain med io % vatten) Exempel 2 Farmakologisk undersökning av produkten i exempel l i form av dess klorhydrat, nedan benämnt produkt A, utförd i jämförelse med Levamisole.

-Levamisole är en känd produkt (Merch Index nionde upplagan, paragraf 8949), som har immuno-reglerande egenska- per, Cancer Research 35 927 (1975) eller New England Journal of'Meaicine 289 (21) 1148 (1973).

A Förstärkning av IgE-produktionen. 7 Råttor av honkön med en vikt av 28 - 30 g immunice- ras subkutant med ovalbumin, blandad med aluminiumoxid på dagarna 0 och 14, och deras serum uttages på dag 21 för be- stämning av de bildade IgE-antikropparna. De respektive in- jicerade mängderna av antigenet (ovalbumin) och adjuvanset (aluminiumoxid) väljs så att produktionen av antikroppar blir minimal.

De undersökta föreningarna administreras subkutant 3 timar före den första immuniseríngen.

Bestämningen av IgE utföres med passiv kutan ana- fylaxi-test. Detta test består i att man genom intravenös administrering av antigenet hos ett djur orsakar en antigen- antikropps-reaktion på ett hudställe, där man tidigare inji- cerat antikroppar, framställda hos ett annat djur med samma antigen. Denna reaktion åskådligörs tack vare ett färgämne, injicerat samtidigt med antigenet. Plötsligt uppträder vid injektionsstället för antikropparna en färgad fläck, bevis 8005309-3 på en krevad av sensibiliserade celler och på ökning av ka- pillärpermeabiliteten som en följd härav. Man bestämmer den största spädningen av serumet, som ger en fläck med en dia- meter av ll - 13 mm hos alla djuren. Den lämpliga spädningen av serumet injiceras intradermalt i en volym om 0,1 ml till råttor av hankön med en medelvikt av 250 g i ryggregionen. 48 timmar senare får djuren intravenöst 0,5 ml av en lösning innehållande 0,5 % ovalbumin och l % Evans blått i isoton upplösning av natriumklorid. 30 minuter efter denna injek- tion dödas de genom att blodet tappas, och diametern på den blåa fläcken mätes på den ut och in vända huden.

Följande resultat erhölls: produkt A 0,5 mg/kg vid subkutan administrering Levamisole 20 mg/kg vid subkutan administrering Slutsats: i detta test är produkt A mycket mer immuno- stimulerande än Levamisol. _ B Kronisk artrit orsakad av adjuvans.

Injektion av Freunds adjuvans (Mycobacterium butyricum 6 mg/ml i Bayol 55) i baktassen orsakar hos råtta en primär inflammatorisk skada, sedan efter en latenstid om 13 - 15 dagar igångsättning av sekundära inflammationer i den icke injicerade baktassen samt i framtassarna, svansen och öronen.

Denna sekundära artrit kan jämföras med human reu- matoid artrit, ty man anser att auto-immuna reaktioner är förknippade med dess bestämmande faktorer.

Råttor av hankön med en ålder av 42 - 50 dagar får en injektion i fotsulan om 0,10 ml Freunds adjuvans.

Behandlingen börjar dagen för injektionen av adju- vanset och varar tills dess att djuren dödas, vilket sker den sjuttonde dagen.

I Kriterierna för värdering av substansernas aktivitet är i allmänhet: - djurens viktökning, alltid bromsad ganska proportionellt mot artritens intensitet; - volymökningarna av de injicerade och icke injicerade bak- tassarna i förhållande till medelvolymen av motsvarande 8005309-3 tassar hos kontrolldjuren; _ - artriten i framtassarna, vars alltför lilla volym inte läm- par sig för en pletysmometrisk mätning och sålunda bestäm- mes subjektivt från O till 3 beroende på inflammations- intensiteten; _ - artriten i örona och svansen, bedömd l eller 0 beroende pâ närvaron eller frånvaron av knölar.

I föreliggande undersökning observerades alltid ef- fekten på sekundära inflammationer, d.v.s. på artrit i den icke injicerade baktassen, artriterna i baktassarna och in- flammationerna i öronen och svansen. w . Den aktiva dos, som minskar de sekundära inflammatio- nerna med minst 50 % bestämdes.

Resultaten var följande: produkt A aktiv dos l mg/kg (subkutan administrering) Levamisole aktiv dos 50 mg/kg (oral administrering) Slutsats: produkt A är sålunda mycket aktiv mot se- kundära fenomen av artrit, orsakad av adjuvans, under det att det erfordras en mycket hög subtoxisk dos av Levamisole för att en jämförbar effekt skall konstateras.

Ekempel 3 Exempel på farmaceutiska kompositioner.

Man har framställt tabletter med följande samman- sättning: V' produkt enligt exempel l (klorhydratï 10 mg utdrygningsmedel'(talk, stärkelse, magnesium- stearat) q.s.p. 1 tablett

Claims (2)

8005309-3 a I Parehtkrav

1. (208) 3u-Å~(aminoacetyl)-amino;7-Sa-pregnan-20-ol och additionssalter därav med de organiska syrorna eller mineralsyrorna.

2. Farmaceutiska kompositioner med immunstimulerande verkan, k ä n n e t e c k n a d e av att de såsom aktiv huvud~ beståndsdel innehåller (ZOS) 3u-Å_(aminoacetyl)-amino_7~5a- -pregnan-20-ol eller additionssalter därav med de farma- ceutiskt godtagbara syrorna såsom läkemedel.