SE445921B - Derivat av substansen sf-1739, benemnd sf-1739 hp-c, framstelld genom odling av streptomyces griseoplanus stam sf-1739(atcc 31451) och komposition innehallande substansen - Google Patents

Description

7905693-3 sen SF-1739 HP-C vilken sedermera visat sig ha följande struk- turformel ____O t.

O H3C i N-cfl; I N\ .Q Y 0 CN fe OH samt en bakteriehämmande och tumörhämmande komposition vilken som aktiv ingrediens innehåller detta derivat av substansen SF-1739. Detta derivat och utgångssubstanserna för ställningen därav beskrives närmare nedan.

I. Substansen SF-1739 HP (1) Fysikalisk-kemiska egenskaper: Denna substans uppvisar ingen bestämd smältpunkt och smälter under mörkfärgning inom ett brett omrâde med början vid ca 150-l80°C. Den uppvisar ett UV-absorptionsspektrum som när- mare framgår av bifogade fig. l i metanol (angivet med hel- dragen linje i fig. 1) med tre absorptionsmaxíma vid 220 nm (Ena - 407). 275 nm (132) och 535 nm (21). i 0.05 N HCl-95% 1cm ' metanol (visat med punktad linje i fig. 1) med två absorp- tionsmaxima vid 265 nm (E%:m = 754) och 410 (16) och i 0.05 N Na0H-95% metanol (visat med en streckad linje i fig. 1) med absorptionsmaxima vid 221 nm (Eäâm = 440). 277 (124). 345 (rygg) och 540 (24). Substansen uppvisar ett IR-absorptions- spektrum (i Nujol) illustrerat i bifogade fig. 2 med karak- teristiska absorptionsband vid 3350. 1655. 1600. 1540. 1355. 1265. 1235. 1180, 1120. 1080. 1020. 1000. 965. 945. 920. 910.

B65, 830. 790 och 750 cm_l och ett NHR-spektrum (i D20) illustrerat i bifogade fig. 3. Dess masspektrum visar toppar vid m/e 412, 430. medan molekylvikten uppskattas till att vara ungefär densamma som hos substansen SF-1739. Substansen upp- 7905693-3 visar följande analytiska sammansättning: C 62.19%, H 6.952. N 8,50% och 0 22.362 (genom differens). Den uppvisar en fördel- ningskurva för den optiska rotationen i enlighet med vad som illustreras i fig. 4. ur vilken dess specifika vridningsför- måga [a ]åâ9 + 700 kan beräknas (i 0,05% metanol). Den är en mörkt purpurfärgad substans, som är lättlöslig i vatten och metanol. löslig i aceton och etylacetat och svårlöslig i hexan. Dess RF-värden vid tunnskiktskromatografi på silikagel- skivor är 0.45 vid framkallning med kloroform:metanol (9:1) och 0.23 vid framkallning med n-butanol:metanol:0.l N HC1 (4:2:l). medan motsvarande värden för substansen SF-1739 är 0.76 respektive 0.39. Stabiliteten hos substansen SF-1739 HP är starkt förbättrad i jämförelse med stabiliteten hos ut- gångssubstansen SF-1739 och den är stabil under såväl sura som alkaliska betingelser. Till och med vid förvaring i 5 N HCl vid rumstemperatur över natten förblir den helt stabil. medan utgångssubstansen SF-1739 till största delen omvandlas till substansen SF-1739 HP. Även vid förvaring i 0.1 N Na0H i metanol vid rumstemperatur över natten uppvisar den ingen påtagligt reducerad antibakteriell aktivitet. medan utgångs- substansen SF-1739 blir starkt inaktiverad. (2) Framställning: Denna substans kan framställas ur substansen SF-1739 genom behandling med en syra. Bland syror. som kan användas för denna behandling, må nämnas mineralsyror såsom saltsyra. brom- vätesyra. svavelsyra och liknande och organiska syror såsom trifluorättiksyra. metansulfonsyra. trifluormetansulfonsyra och liknande. Reaktionsparametrarna kan variera alltefter arten och koncentrationen av använd syra och använt lösnings- medel. I fallet med mineralsyra genomföras behandlingen helst under kylning eller vid rumstemperatur under mellan l dag och 1 vecka vid användning av en högre koncentration av 5-10 N eller vid rumstemperatur eller högre under en till flera dagar när en lägre koncentration av högst 5 N användes. Vid förhöjd temperatur av över 80°C tenderar den bildade mängden bipro- dukter ibland att öka något. Behandlingen kan ske ganska 7905693-5 snabbt i vattenlösning medan den går långsammare i med vatten utspädd metanol. Omvandlingen av substansen SF-1739 till substansen SF-1739 HP kan äga rum vid ett pH under 3.

Efter avslutad behandling kan substansen SF-l739 HP lätt utvinnas ur reaktionsblandningen på konventionellt sätt under utnyttjande av ovan angivna fysikalisk-kemiska egenskaper hos substansen SF-1739 HP. Exempelvis kan reaktionsblandningen neutraliseras med en bas, t.ex. natriumvätekarbonat. kalium- karbonat eller liknande. koncentreras till torrhet och åter- stoden extraheras med metanol. varefter extraktet direkt renas genom preparativ tunnskiktskromatografí på silikagel. Alterna- tivt kan. eftersom mindre biprodukter bildas vid denna behand- ling. reaktíonsblandníngen koncentreras. återstoden lösas i metanol och den resulterande lösningen neuâšaliseras och där- efter matas genom en kolonn med “Sephadex RXLH-20". som där- efter kan framkallas med metanol eller en lösningsmedelblanâ~ ning av etylacetat och metanol för att rena den önskade produkten.

II. Substansen SF-1739 HP-C (1) Fvsikaliskt-kemiska egenskaper: Substansen uppvisar ingen bestämd smältpunkt utan smälter under mörkfärgning inom ett brett temperaturområde med början vid ca 120-l50°C. Den uppvisar ett UV-absorptionsspektrum illustrerat i bifogade fig. 5 i metanol (visat med heldragen linje) med tre absorptionsmaxima vid 222 nm (Eåšm = 400). 273 nm (146) och 540 nm (30) i 0.1 N HCl-90% metanol (visat med punktad linje i fig. 5) med absorptionsmaxima vid 204 nm. 266 nm (E%:m = 174) och 410 nm (22) och i 0.1 N NaOH-90% metanol (visat med streckad linje i fig. 5) med absorptions- maxima vid 222 nm (Eåšm = 422). 275 nm (140) och 550 nm (32). substansen uppvisar ett IR-absorptionsspektrum (i Nujol) illustrerat i bifogade fig. 6 med karakteristiska absorptionsf band vid 3350. 1660. 1535. 1355. 1265. 1235. 1200. 1175. 1140. 1120. 1080. 1060; 1000. 940. 910. 880, 835 och 795 cm_l. en ___..1_...._.__.:._.__...-,... ,_ _ , _ W-G-...qfl-.v-...ï- 7905695-'3 fördelningskurva för den optiska rotationen i enlighet med vad som är visat i bifogade fig. 7 och ett NMR-spektrum (i D20) som illustreras i bifogade fig. 8. Den uppvisar den analytiska sammansättningen C 59.58%. H 6,14%, N 12,632 och 0 2l,65% (genom differens). Den är en mörkt purpurfärgad substans. som är lättlöslig i vatten och metanol, löslig i aceton och etyl- acetat och svårlöslig i hexan. Dess Rf-värden uppmätta vid tunnskiktskromatografi på silikagelplatta ligger vid 0.40 vid framkallning med kloroformzmetanol (9:l) och 0.70 vid fram- kallning med etylacetatzmetanol (3:2) medan motsvarande värden för substansen SF-1739 HP är 0.26 respektive 0.31. Den är stabil i torrt tillstånd och i neutral. sur och alkalisk metanollösning. (2) Framställning av substansen SF-1739 HP-C Substansen SF-1739 HP-C kan framställas ur substansen SF-1739 HP erhållen enligt I. (2) genom omsättning därav med en cyanid. Bland cyanider. som kan användas. må nämnas exempelvis ett alkalimetallsalt. jordalkalimetallsalt. metallaminsalt eller salt av organisk amin (inklusive ammoniak) av cyanväte- syra. såsom natrium-. kalium-, litium-. magnesium- eller ammoniumcyanid och en förening med förmåga att alstra en cyanidjon (CN') sekundärt. såsom cyanbromid med flera.

Reaktionen kan fås att förlöpa snabbt under kylning eller vid rumstemperatur och vara i huvudsak avslutad inom ca 5-30 minuter. Vid förhöjd temperatur över rumstemperatur har ibland biprodukter en benägenhet att bildas. Som lösningsmedel vid reaktionen kan exempelvis användas vatten. någon alkohol. dimetylformamid, en lösningsmedelhlandning av ett med vatten blandbart organiskt lösningsmedel och vatten och liknande.

Efter avslutad reaktion kan den önskade produkten lätt utvin- nas och renas på konventionellt sätt under utnyttjande av ovan angivna fysikaliskt-kemiska egenskaper nos vardera substansen.

Exempelvis kan reaktionsblandningen koncentreras till torrhet och återstoden extraheras med metanol. varefter extraktet 7905693-5 renas direkt genom preparativ tunnskiktskromatografi på silikagel.

Alternativt kan. eftersom mindre mängd biprodukter bildas vid varje reaktion, reaktionsblandningen koncentreras och återsto- den lösas i metanol och den resulterande lösningen sedan matas genom en kolonn med "Sephadex LH-20". som därefter kan framkallas med metanol eller en lösningsmedelblandning av etylacetat och metanol för att rena den önskade produkten.

För referensändamål lämnas nedan fullständiga uppgifter om stammen SF-1739. som kan användas för frambringande av den som utgångsmaterial använda gulfärgade metaboliten.

Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 har deponerats under 'nummer 3002 hos Technical Research Institute of Mícrobial Industry. Agency of Industrial Science & Technology. the Ministry of International Trade and Industry. Japan. och under depositionsnummer 31451 hos American Type Culture Collection (ATCC), USA. De morfologiska egenskaperna hos nämnda stam nummer 3002 är följande: (I) M2r§ele9;= Luftmycel tillväxer ymnigt på vetemjölagar. jästmaltagar och liknande under rik sporbildning. Enkla grenar iakttas men knippeliknande grenar saknas. Lös öppen spiral bildas i toppen av luftmycelet. En specifik konfiguration såsom sclerotia kan ej iakttas. Vid mikroskopisk undersökning visar sig sporytan vårtig och delvis taggig. Sporerna är från elliptiska till kort cylindriska till formen och mellan 0.6 och 0.8 x 0,8-1.2 um stora. Sporkedjor föreligger med i allmänhet 10 sporer eller flera per kedja.

(II) Tillväxt på olika medier (iakttagen efter odling vid 2a°c) 7905693-3 Medium Tillväxt och färg Luftmycel Lösligt pigment Sukros~ god. blekt gulgrå grått inget nitratagar G1ukos~ ringa. gräddfärgad svagt ut- inget asparagin- vecklat. agar vitt Glycerol- blekt grå grått inget asparagin- agar Stärkelse- god. blekt gulgrå- grâtt~o1iv- inget agar svagt olívgrå grått Havremjöls- god, blekt gulgrå omfattande. inget agar grått Jäst.malt- god. gråaktigt omfattande. inget agar gulbrun mörkgrått Tyrosin- mörkgrå olivgrått inget agar Näríngs- blekgul-grågul grått inget agar (III) Fysiologiska egenskaper: Temperaturområde för tillväxt: Gelatinförvätskníng: Hydrolys av stärkelse a ø Koagulering av skummjölk Petonisering av skummjölk Malaninbildning (IV) Koltillgodogörandemönster medium vid 28°C) 20-4o°c på jäst-ma1t-agar- medium långsamt vid odling vid 20°C under längre tid än 21 dagar (stark via za°c) positiv positiv (stark vid 28°C och 37°c) positiv (vid 28°C och 37°C) negativ (pâ Pridham-Gottliebs agar- 7905693-3 K D~glukos + D-fruktos + D-xylos + D-mannitol + I-insitol + L-arabinos + ramnos + sukros + raffinos - En summering av ovan angivna egenskaper ger vid handen att stammen SF-1739 tillhör arten Streptomyces. är spiralformad i toppen av luftmycelet och har en vårtig sporyta. Tillväxten på olika medier är grå till grâaktígt gulbrun och luftmycelet är grått. Någon melaninhildning kan ej iakttas och inte heller några lösliga pigment.

Egenskaperna hos stammen SF-1739 liknar mycket egenskaperna hos Streptomyces griseoplanus bland arterna av släktet Streptomyces. Båda överensstämmer helt vad beträffar spiral- form. vårtig sporyta. grått luftmycel och avsaknad av melanin- bildning. I jämförelse med stammen SF-l739 och Streptomyces griseoplanus beskriven i ISP (International Streptomyces Project) (jämför International Journal of Systematic Bacteriology. lg. 124-126, (1968)) skiljer sig den stam. som är återgiven i ISP. från stammen SF-1739 vad beträffar por- tillväxt på stärkelseagar. tillgodogörande av raffinos och avsaknad av tillgodogörande av sukros. L-inositol. D-mannitol och ramnos men den förra påminner mycket om den senare vad beträffar sporytans vårtlika och något taggiga utseende.

Av det föregående förefaller det rimligt att stammen SF-1739 tillhör arten Streptomyces griseoplanus. eftersom de morfo- logiska egenskaperna stämmer väl överens och andra viktiga egenskaper också överensstämmer väl. Men den förra skiljer sig från den stam. som är angiven i ISP. vad beträffar koltill- godogörandemönster och annat. Därför har stammen SF-1739 7905693-3 benämnts Streptomyces griseoplanus stam SF-1739. Även om framställningen här förklarats huvudsakligen med avseende på stammen SF-1739 är det välkänt att olika egenska- per hos samtliga mikroorganismer tillhörande släktet Strepto- myces ej är otvetydiga utan mikroorganismer av släktet štreptomyces kan lätt varieras naturligt och artíficíellt. Det bör därför framhållas att samtliga stammar med förmåga att alstra de antibiotiska gula metaboliterna som man utgår från och tillhör släktet Streptomyces inkluderande varianter och mutanter. omfattas och kan användas i detta sammanhang.

Odlingen kan på ett tillfredsställande sätt utföras på samma sätt som vanligen tillämpas när det gäller odling av stammar av släktet Streptomyces. Som odlingsíngredienser kan man använda vilket som helst välkänt näringsmaterial för släktet Streptomyces. Som kolkälla kan exempelvis användas glukos, sukros. stärkelse. glycerol, majssirap. melass. sojabönolja och liknande. Som kvävekälla kan användas sojabönmjöl, vete- groddar. köttextrakt. pepton, torrjäst. majssaft. ammonium- sulfat, natriumnitrat och liknande. Vidare kan vid behov sådana oorganiska salter som kalciumkarbonat. natriumklorid. kaliumklorid. fosfater etc. tillsättes. Även små mängder ämnen. som kan främja stammens tillväxt och påskynda produk- tionen av de antibiotiska gula metaboliterna.

Odlingen kan utföras i vätskekultur på det sätt som vanligen tillämpas vid produktion av kända antíbiotiska substanser och helst under vätskenivå. Odlingstemperaturen ligger företrädes- vis inom området 25-35°C. oftast omkring 28°C. Den maxi- mala produktionen kan vanligen uppnås inom 2-6 dagar.

De gula metaboliter. som sålunda ansamlas i odlíngsbuljongen. är basiska. halvt vattenlösliga substanser. som är extremt instabila och som man ej lyckats isolera och identifiera.

För den föredragna koncentrationen av metaboliten kan man an- vända vilken som helst känd teknik som används för utvinning 7905693-5 LO av en basisk, halvt vattenlöslig naturprodukt inom detta fack~ omrâde. Exempelvis kan en odlingsbuljong filtreras. filtratet göras basískt. mättas med natriumklorid. ammoniumsulfat och liknande och därefter extraheras med ett med vatten icke blandbart organiskt lösningsmedel. t.ex. n-butanol. etyl- acetat. butylacetat eller eter. Fíltratet kan också adsorberas på ett katjonbytarharts. såsom "hmberlite RÉIRC-50".

"CG-50". “IR-120" eller "Dowex RJSOW". varefter elueringen kan utföras med en syra såsom saltsyra eller svavelsyra för erhållande av metaboliten i koncentrerat tillstånd.

För att erhålla den önskade metaboliten í det mera renade tillståndet kan man använda vilken som helst kombination av ovannämnda extraktionstekniker och alternativt tillämpa ad- sorptíon med ett harts, t.ex. "XAD-2". desorption. rening medelst kolonnkromatografi med “Sephadex<5'G-10". karboxi- metylcellulosa och liknande och/eller tunnskiktstekník med silíkagel.

De biologiska aktiviteterna hos derivatet SF-1739 HP-C enligt uppfinningen av substansen SF~l739 återges nedan i jämförelse med derivatet SF-1739 HP.

I. Antimikrobiell aktivitet Nedanstående tabell 1 anger den minsta inhiberande koncentra- tionen (MIC) av derivatet av substansen SF-1739 enligt uppfin- ningen í jämförelse med derivatet SF-1739 HP.

Tabell H 1 7905693-3 Antimikrobiell aktivitet hos derivat av substansen SF-1739 Mikrob |MIC (/ug/ml) I _ \Substans SF-1739 ÉHP HP-C l Bacillus subtílís f<0.09 0,78 Staphylococcus aureus 209P §<0.09 3,125 Sarcina lutea ,<0.09 <0.l9 Escherichia coli Å 3,125 >100 Escherichía coli K-12R { 3,125 >100 Klebsiella pneumonia E 3,125 50 Pseudomonas aeruginosa } 3.125 >100 Proteus vulgaris 0.39 50 II. Tumörhämmande aktivitet A: Cvtopatogen aktivitet in vitro Nedanstående tabell 2 anger den minsta cytopatogena koncetra- tionen av derivatet enligt uppfinningen av substansen SF~l739.

Tabe11_2 Testsuhstans Minsta cytopatogena koncentration ir (/ug/ml) t _J .

HeLa S3 f Hep. ”-2 i Sarcoma 180 i 1 * n SF«1739 HP 0.9 1 <0.4 ¿ sF»1739-HP C 0.9 E <0.4 I 0,9 i i I i * Utvärderad efter vävnadsodlínq under 48 timmar. 7905693-5 5-11 B: Karcínostatisk effekt på möss in vívq Hanmöss av stammen CDFl (ca 5 veckor gamla, vägande l9¿lg och varje grupp bestående av 3-5 djur) ympades íntraperítone- alt med P-388 leukemíceller i en dos av 106/0.02 ml/mus.

Testsubstansen löstes i vatten vid angiven dos och administre- rades intraperítonealt med 0.2 ml/dag/mus under tre på varand- ra följande dagar räknat 24 timmar från ympningen. Därefter bestämdes den ökade livslängden (ILS). Resultaten är samman- fattade i nedanstånede tabell 3.

TLÖSÅLÃ Test-substans Dos (mg/kg) i ILS (%) SF--l739 HP 2 i 75,0 1 i 43.3 0,5 l 43.3 0.25 É 45.0 1 SF~l739 HP-C _16 70,2 8 53.8 4 113,5 2 61.5 1 59.4 III. 353; toxícítet I nedanstående tabell 4 anges den akuta toxícíteten (LDSO) hos derívatet enligt uppfinningen av substansen SF-1739 vid administrering intravenöst på möss. 7905693-3 in lefzêll.- 4.

Substans LDSO (mg/kg) l _ SF-1739 HP 2 SF 1739 HP-C , 20»25 5F~l739 0.45 Vid användning av derivatet av substansen SF-1739 för behand- ling av olika typer av tumörer kan det administreras oralt eller parenteralt i form av ett preparat vanligen uppblandat med en konventionell fast eller flytande. farmaceutískt god- tagbar bärare. Det fasta preparatet för oral administrering kan utgöras av kapslar, tabletter. granulat. plattor och lík~ nande och de topiskt applicerbara preparaten kan utgöras av stolpiller. salvor och liknande. De vätskeformiga preparaten kan utgöras av lösningar, suspensioner. sirap och liknande och appliceras oralt. topiskt eller genom injektion. Sådana prepa- rat kan lätt beredas med användning av konventionella material med hjälp av lämplig välkänd teknik. Mängden aktiv ingrediens i preparaten liksom valet av prepartform kan lätt väljas beroende på typen och allvarlighetsgraden av sjukdomen som skall behandlas. admínistreringssättet. kroppsvikten och åldern på patienten. substansens aktivitet och toxicítet med mefê.

När det gäller injicerbara preparat är det önskvärt att för vuxna administrera preparaten subkutant. intramuskulärt eller företrädesvis intravenöst eller intraarteriellt i en daglig dos av 1~100 mg kontinuerligt under flera dagar eller i en dos av 2-200 mg varannan eller var tredje dag. Det kan ibland vara effektivt att när det gäller vissa tumörer injicera preparatet direkt i själva tumören.

I fallet med oral administrering är det önskvärt att för vuxna 79Û5693-5 Ifi administrera preparatet i en enda daglig dos av l-500 mg varje dag eller varannan dag.

I fallet med topisk applicering kan den aktiva ingrediensen anbringas direkt på den angripna eller sjuka delen i form av en blandning med en lämplig bas utgörande 1-20% av den aktiva ingrediensen.

Man kan också gå tillväga så att man använder det aktiva deri» vatet ensamt eller i kombination med andra kända tumörhämmande medel och/eller någon immunoaccelerator.

I det fall derivatet av substansen SF-1739 skall användas som antimikrobiellt medel, isynnerhet som bakteriehämmande medel. kan det också administreras oralt eller parenteralt i form av fasta eller flytande preparat av den typ som vanligen användes för andra kända bakteriehämmande medel eller antibiotika. Som preparat för oral administrering kan användas exempelvis en kapsel. tablett, pulver. granulat. lösning. suspension eller sirap. För topisk applicering kan användas exempelvis ett stolpiller. en salva eller liknande. Som preparat för parente- ral administrering kan användas en injicerbar lösning eller suspension och preparatet kan ges subkutant, intramuskulärt eller intravenöst. Mängden aktiv komponent kan variera beroen- de på typen och allvarlighetsgraden av sjukdomen. kroppsvikten och åldern hos patienten. substansens aktivitet och toxícitet och andra faktorer men den aktiva komponenten kan när det gäller vuxna vanligen användas i en daglig dos av l-500 mg för oral administrering i enkeldosform eller flera uppdelade doser eller i en enkeldos av 1-100 mg för parenteral. t.ex. intra~ muskulâr eller intravenös administrering. Högre eller lägre doser kan väljas och användas av läkaren med speciell hänsyn tagen till sjukdomens allvarlighetsgrad. patientens fysiska tillstånd och eventuella ogynnsamma effekter.

Derivatet enligt uppfinningen av substansen SF-1739 kan administreras antingen ensamt eller i kombination med andra 7905693-5 kända antlmínrobiella medel, såsom olika antibiotika och lik- nande.

Efterföljande exempel avser att belysa uppfinningen mera i detalj.

Ešåfißêlml Framställning av substansen 5F»l739 HQ En lösning av 6 mg SF-1739 hydrokloriden i 3 ml 5 N saltsyra fick stå vid rumstemperatur under l vecka. Lösningen neutrali- serades därefter med fast natriumvätekarbonat och den neutra- líserade lösningen koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck. Återstoden löstes i en liten mängd metanol och det olösliga materialet frânfiltrerades och filtratet koncentrera- des. Återstoden placerades på en tunn skiva av silikagel för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som där- efter framkallades med en lösníngsmedelblandníng av kloroform och metanol (9:l). Ett purpurfärgat band med Rf = 0.45 skars ut från skivan och extraherades med metanol.

Extraktet koncentrerades till torrhet. Återstoden löstes i en lösningsmedelblandning av metanol och acetcn (2:l) och olös- ligt material frånfiltrerades. Filtratet koncentrerades till torrhet och man erhöll 3.3 mg av substansen SF~l739 HP.

Biàllßëi Framställning av substansen SF-1739 HP-C Till en lösning av 71 mg av substansen SF-1739 HP i 5 ml vat- ten sattes I44 mg natriumcyanid och den resulterande bland- ningen fick stå vid rumstemperatur under 30 minuter. Därefter koncentrerades den till torrhet vid reducerat tryck under 35°C under tillsats av n-butanol. Återstoden löstes i en liten mängd metanol. olösligt material frânfiltrerades och fíltratet koncentrerades. Återstoden placerades på en skiva av sílikagel för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som därefter framkallades med en lösningsmedelblandníng 7905693-3 av etylacetat och metanol (322). Ett purpurfärgat band med Rf=O.70 skrapades av och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet och återstoden löstes upp i en blandning av metanol och aceton (2:l). varefter olösligt material fränfiltrerades och filtratet koncentrerades till torrhet. varigenom erhålls 35 mg av substansen SF-1739 HP-C ExemQel_§ Framställning av substansen SF-1739 HP-C Till en lösning av 73 mg av substansen SF-1739 HP i 2 ml metanol sattes 72 mg kaliumcyaníd och den resulterande bland- ningen omrördes vid rumstemperatur under 5 minuter. Reaktions- blandningen placerades på en silikagelplatta för preparativ tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm), som därefter fram- kallades med en blandning av etylacetat och metanol (322). Ett purpurfärgat band med Rf=0.70 skrapades av och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en blandning av metanol och aceton (2:l). olösligt material frânfiltrerades och filtratet koncentrerades därefter till torrhet. varigenom erhölls 50 mg av substansen SF-1739 HP-C.

Framställninq av substansen SF-1739 HP Sporer av Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 (depositions- nummer 3002 från Technical Research Institute of Microbial Industry) infördes i 1,6 1 av en vätska hållande l.0% stärkel- se och 3,0% sojabönmjöl (pH 7.0) och vätskemediet skakades vid 28°C under 30 timmar med användning av 16 Sakaguchi-flaskor för frambringande av en odlingskultur.

Den sålunda erhållna odlingskulturen ympades på 70 1 av ett vätskemedium bestående av 3.0% stärkelsesirap. 2.0% sojabön- mjöl, l.0% köttextrakt. 1.0% vetegrodd och 0.3% natriumklorid (pH 6,6) och kulturen skakades under lufttillträde vid 28°C under 90 timmar med användning av två fermenteringskärl var- dera rymmande É0 1. 7905695-3 Den odlade buljongen inställdes på pH 3-4 med 6 N saltsyra och tiltrerades med en filtersyra "Hyflo Super Cel". Filtratet (ca 47 1) inställdes på pH 6 med 3 N natriumhydroxid ochgmatades genom en kolonn med ca 4 1 jonbytarharts "Amberlite IRC-50" (H+) för adsorption av antibiotiska metaboliter.

Kolonnen tväftades noggrant med vatten och eluerades med 0.2 N saltsyra. Aktiv fraktion om ca 4,5 1 mättades med natrium- klorid, inställdes på pH 8.0 med natríumhydroxid och extra- herades därefter två gånger med vardera 1 1 etylacetat under kylning. Etylacetatextraktet extraherades ånyo med 200 ml 0.05 N saltsyra. Den resulterande vattenlösningen (pH 2.0) koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck under bildning av 1.68 g antibíotiska metaboliter som ett rått pulver. Detta pulver löstes i 20 ml 5 N saltsyra. som fick stå vid rums~ temperatur under 1 vecka och därefter koncentrerades till torrhet vid reducerat tryck. Återstoden löstes i 20 ml metanol och den resulterande gulröda lösningen neutraliserades med fast natriumvätekarbonat tills den blev purpurfärgad. Olösligt material frånfiltrerades, filtratet koncentrerades och åter- stoden placerades därefter på 7 silikagelplattor för prepara- tív tunnskiktskromatografi (2 x 100 x 100 mm). som därefter framkallades med en blandning av etylacetat och metanol (3:2).

Från de första silíkagelplattorna skrapades purpurfärgade band av med Rf 0.31 och extraherades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en liten mängd metanol och placerades på två silíkagelplattor för preparativ tunnskíktskromatografi (2 X 100 x 100 mm). som där~ efter framkallades med en blandning av kloroform och metanol (9:l). Purpurfärgade band med Rf 0,26 skrapades av och extra- herades med metanol. Extraktet koncentrerades till torrhet. återstoden löstes i en blandning av metanol och aceton (2:1), olösligt material frånfiltrerades och fíltratet koncentrerades till torrhet, varigenom erhölls 99 mg av substansen SF~1739 HP.

Claims (1)

1. 7905695~3

1. n a per: H) (2) (3) (4) (5) (6) SGI! /3 Patentkgag En substans här benämnd SF-1739 HP-C, k ä n n e t e c k - d .av att den uppvisar följande fysikalisk~kemiska egenska- Mörkt purpurfärgad substans UV-absorptionsspektrum enligt bifogade fig. 5 IR-absorptionsspektrum enligt bifogade íig. 6 med karaktefl ristiska absorptionsband vid 3350, 1660, 1600, 1535, 1355, 1265, 1235, 1200, 1175, 1140, 1120, 1080, 1060, 1000, 940, 910, aso, 835 och 795 cm” Spridningskurva för optisk rotation enligt bifogade fig. 7 NMR-spektrum enligt bifogade fig. 6 Elementaranalys: Funnet: C 59,58%, H 6,14%, N 12,63%, O 21,65% (genom differens) Löslighet. Lättlöslig i vatten och metanol, löslig i aceton och etylacetat och svårlöslig i hexan Kromatografi. Vid tunnskiktskromatografi på silikagel Rf-värden 0,40 (kloroformzmetanol 9:1) och 0,70 (etylacetat: metanol 3:2) och framställbar genom odling av Streptomyces griseoplanus stam SF-1739 (ATCC 31451). Antibakteriell eller tumörhämmande komposition, k ä n n e ~ c k n a d av att den som aktiv ingrediens innehåller substan- SF-1739 HP-C enligt krav 1 och en farmaceutískt godtagbar bärare. __,__-V.... _ _... ._ _ ._ --...__, .- -,. -_ . ..._....-....__ _.