SE442117B - Cytostatiska foreningar innefattande derivat av vinblastin och leurosidin, sett for deras framstellning och farmaceutiska beredningar innehallande dessa foreningar - Google Patents

Description

15 20 25 30 35 40 8104878-7 2 grupp med 5-7 kolatomer, eller en aralkylgrupp med 1-3 kolatomer i alkyldelen; R1 är metoxi och R: acetyl, fö- rutsatt att om R3 är a-etyl och R” B-hydroxyl represen- terar R" någon av de angivna grupperna med undantag av etyl. _ De nya föreningarna, som faller under den ovan definierade allmänna formeln I, uppvisar cytosta- tisk aktivitet.

En strukturellt närbesläktad förening, näm- ligen N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vinblastin íen förening som faller under den ovan angivna formeln I, i vilken RI [ representerar metoxi, R2 acetyl, Rs m-etyl, R” 6-hydroxyl och R" etyl) och framställning av denna förening beskri- ves i den europeiska patentansökningen 80301290.5 (publi- cerad under nr 18231). Enligt det förfarande, som beskri- ves i denna patentskrift framställes N-desmetyl-N-(etoxi- metyl)-vinblastin genom omsättning av vinblastin med kromtrioxid i ett lämpligt lösningsmedel och i närvaro av etanol i stort överskott. Reaktionen innefattar om- vandling av gruppen _::Na-CH3 i vinblastin till gruppen >Na-cH,-o-c2H5 .

Vid försök att framställa ytterligare fören- ingar I har det visat sig, att endast en del av förening- arna I kan framställas på det sätt som utvecklats för framställning av N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vinblastin, dvs endast vissa alkoholer kan omvandla gruppen ::Na-CHa i utgångsföreningen till den motsvarande gruppen :3Na-CH2-OR". Närmare bestämt har det vid de arbeten som ligger till grund för förevarande uppfinning visat sig, att den erforderliga omvandlingen kan genomföras med alkoholer, i vilka R" är en rakkedjig alkylgrupp med 1-10 kolatomer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kolato- mer, där kolatomen, vid vilken gruppen -OH är bunden har primär eller sekundär konfiguration eller i vilken R" representerar en arylalkyl med 1-3 kolatomer i alkyldelen.

Följaktligen kan endast föreningar I, där R" har den ovan, begränsade definitionen, användas för den ovan beskrivna oxidationen. Dessa föreningar betecknas i fortsättningen som "föreningar I framställda genom oxidation".

"Det'har visat sig, att alla de ovan beskrivna “Q Wïïevïfifif .i L , r .s na... 10 15 20 25 81048713-7 föreningarna I och N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vinblastin kan framställas genom ometring av någon av föreningarna I framställd genom oxidation. Med "ometring" avses i fö- revarande sammanhang en reaktion, vid vilken gruppen :)Na~CH2-OR' omvandlas till en grupp :>Na-CH2-O~R", vilken omvandling sker i närvaro av ett stort överskott på en alkohol med den allmänna formeln III vid ett pH mel- lan 3 och 5.

Denna ometring har följande huvudfördelar: 1. På detta sätt kan man framställa även för~ eningar I, som icke kan framställas genom oxidation. 2. Föreningar som skulle kunna framställas genom direkt oxidation men med dåligt utbyte, kan framställas ur andra föreningar, vilka framställes oxidativt med utmärkt utbyte utbyte genom ometring och på detta sätt kan utbytet av dessa föreningar väsentligt förbättras. Som exempel fördubblas ut- bytet av N-desmetyl-N-(bensyloximetyl)-vinblastin, när denna förening framställes enligt reaktionsschemat: vinblastin -~9§à%%åÉ9§~-å N-desmetyl-N-(metoximetyl)- vinblastin ometring bensylalkohol ' i stället för genom direkt oxidation av vinblastin i närvaro av bensylalkohol.

Enligt uppfinningen avses också ett sätt att framställa föreningar med den allmänna formeln HJOR QUÄLÉTY 10 15 20 25 30 35 CC! . La» G3 CC» \J (I) där R“ är ß-hydroxyl och R3 a-etyl; eller Rk är väte och R3 är ß-etyl; R" är en rakkedjig alkylgrupp med 1-10 kolatomer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kolato- mer, i vilka grupper den kolatom som är bunden vid grup- pen :ZNa~CH2-O- har primär eller sekundär konfiguration eller en alkenyl- eller alkinylgrupp med 3-6 kolatomer, eller en cykloalkylgrupp med 5-7 kolatomer eller en aral- kylgrupp, i vilken alkyldelen innehåller 1-3 kolatomer: R1 är metoxi och R2 är acetyl, genom att en förening med den allmänna formeln 10 15 20 25 30 35 40 8'!04878-? CH2 HO OR' där R1, R2, Ra och R“ har ovan angivna betydelser och R' är en rakkedjig alkylgrupp med 1-10 kolatomer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kolatomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen :>Na-CH2-O- har primär el- ler sekundär konfiguration, eller en alkenylgrupp med 3-6 kolatomer, en alkinylgrupp med 3-6 kolatomer, en cyk- loalkylgrupp med 5-7 kolatomer eller en aralkylqrupp, i vilken alkyldelen innehåller 1-3 kolatomer, förutsatt att R' i utgângsföreningen II representerar annan grupp än den som representeras av R" i slutprodukten I, omsättes med en alkohol med den allmänna formeln R"-oH (III) där R" har ovan angiven betydelse, vilken alkohol använ- des i stort överskott och varvid reaktionen genomföras vid pH 3-5, varpå reaktionsblandningens pH injusteras på 10 15 20 25 30 35 40 8104878-7 6 7-8, föreningen I och eventuella epimerer därav isoleras och, om så önskas, renas.

Såsom ovan påpekats har de nya föreningarna I intressanta farmakologiska egenskaper, och i synnerhet uppvisar de cytostatisk aktivitet. De är mindre toxiska än de i handeln tillgängliga, kända bis-indolalkaloider- na.

Föreningarnas enligt uppfinningen akuta toxi- citet har provats på hanmöss (Swiss) med kroppsvikt 72-3l g.

Proven genomfördes på grupper om vardera 6 möss. Testfören- ingarna administrerades intraperitonealt, som injicierbara lösningar framställda med fysiologisk saltlösning och even- tuellt en droppe “Tween" 80. Doserna ökades successivt från en dos som icke orsakade någon mortalitet upp till den lefi tala dosen. Resultaten utvärderades enligt den av Lichfield och Wilcoxon utarbetade metoden och är sammanställda i föl- jande tabell 1.

Tabell 1 Förening LD50 (mg/kg, Paralytisk i¿p. möss) biverkan N-desmetyl-N-(metoximetyl)~vin- blastin N100 0 N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vin- blastin w110 O N-desmetyl-N-(propoximetyl)-vin- blastin w80 0 N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)- vinbiastin ' weo o N-desmetyl-N-(heptoximetyl)-vin- blastin N60 0 N-desmetyl-N-(allyloximetyl)- vinblastin M45 0 N-desmetyl-N-(bensyloximetyl)- vinblastin w70 0 N-desmetyl-N-(cyklohexylmetyl)- U vinblastin m60 O vinkristin 4,2 + vinblastin 7,6 0 vindesin 4,0 + Testföreningarna är 15-25 gånger mindre toxis- 10 15 20 25 30 35 7 8104878-7 ka än vinkristin respektive vindesin och 8-13 gånger mind- re toxiska än vinblastin. I motsats till vindesin ger test- föreninganaingenparalytisk biverkan under detta prov.

Den cytostatiska effekten hos de nya förening- arna har också provats i vävnadskulturer och olika trans- planterade tumörarter.

Testföreningarna löstes i vävnadskulturen (HeLa-kultur) i koncentrationer varierande från tröskel- dosen 1 x 10-3 pg/ml upp till 100 ng/ml. I 24 timmars kul- turer erhölls genom mikroskopisk bedömning av den metafas- arreterande effekten in vivo följande resultat.

Tabell 2 Dos som inducerar stark blockering Förening (ug/ml) N-desmetyl-N-(metoximetyl)-vinblastin 0,001 N-desmetyl-N-(propoximetyl)-vinblastin 0,001 N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)-vinblas- tin 0,001 N-desmetyl-N-(heptoximetyl)-vinblastin 0,001 N-desmetyl-N-(alloximetyl)-vinblastin 0,001 N-desmetyl-N-(bensyloximetyl)-vinblas- tin 0,01 N-desmetyl-N-(cyklohexyloximetyl)-vin- blastin 0,001 Under samma betingelser men med användning av silade vävnadskulturer kunde också mindre skillnader ob- serveras, vilka kan klassificeras på följande sätt: Det första stadiet (minsta effektiva dos) kän- netecknas av ökat förhållande av blockerade mitoser. En del av dessa är onormala mitoser, sålunda uppträder också exempelvis 3-gruppmitoser eller polära kromosomer. I all- mänhet har redan anafaser försvunnit.

I det andra stadiet observeras en kraftig metafasblockering och det föreligger praktiskt taget ingen reguljär mitos. Kromosomaser föreligger i form av en lös glomus. Proportionen interfasceller är låg.

I det tredje stadiet har kromosomaserna aggre- gerat till en massa i cellens mitt. Detta stadium beteck- :pooa 10 15 20 25 30 35 40 8104878-7 8 nas som piknomitos av "Ball-Metaphase".

I det fjärde stadiet påverkas redan interfas- cellerna. Närmare bestämt minskas antalet blockerade cel- ler, enär de icke kan deltaga i mitosen. Citoplasman hos cïllerna (i interfas) ökas. Dess gränser är oregelbundna, fransade, och cellerna har ofta utsträckt, fihroplastlik- nande form.

I det femte stadiet slutligen är citoplasman utfylld av en fin, nätliknande struktur och ínterfascel- len har otvetydigt dödats genom behandlingen.

De ovan angivna stadierna kunde tydligt sär- skiljas vid provningen av föreningarna enligt uppfinning- en.

Följande observationer gjordes: Den mest ef- fektiva föreningen var heptoxiderivatet, som inducerade en kraftig metafasblockering redan i en dos om 0,001 pg/ml.

Pyknomitos observerades vid en dos om 0,1 pg/ml, under det att interfascellerna påverkades vid en dos mellan 1 och 10 ug/ml. Isobutoxiderivatet hade en om en storleksordning lägre effekt, ty vid en dos om 0,001 ng/ml observerades fortfarande reguljära mitoser. Bensyloxiderivatet hade den svagaste effekten. Vid den minsta av de tillämpade doserna inducerade denna förening en minimal blockering med flera deformerade mitoser men utan anafaser. vid 0,01 ng/ml var blockeringen måttlig och en stark blockering och pyknomi- tos inducerades först vid en dos om 1 ng/ml.

De nya föreningarnas effekt på intraperito- nealt transplanterbara tumörer (P 388 musleukemi och NK/Ly askiteslymfom) beskrives här nedan. P 388 leukemiprov ge- nomfördes på hybridmöss (BDF). Proven genomfördes i grup- per om vardera 6 möss och 106 tumörceller per försöksdjur transplanterades intraperitonealt. Administrationen av 7 testföreningarna påbörjades den 24:e timmen efter trans- plantationen. Behandlingen genomfördes intraperitonealt och försöksdjurens kroppsvikt och tillstånd bestämdes var- je dag. Den på de behandlade försöksdjuren uppnådda effek- ten angives i procent av medellivslängden i dagar för kontrollgruppen.

Resultaten som angives i följande tabell visar att livslängden hos möss med leukemi (P 388) väsentligt ~ . __ pgagffeffd-.ëf-r 10 15 20 25 30 35 9 8104 878 - 7 ökas av testföreningarna.

Tabell 3 Dos Medellivslängd Behandlade/ mg/kg (da ar) kontroll Förening i.p. behandlade kontroll % Toxicitet N-desmetyl-N-(hep- 8 x 0,4 14,3 10,3 39 toximetyl)-vin- 8 x 4,0 18,7 10,3 181 blastin 8 x 8,0 21,3 9,9 247 N-desmetyl-N-(ben- 8 x 0,4 13,0 10,3 126 syloximetyl)-vin- 8 x 4,0 18,3 10,3 178 blastin 5 x 8,0 19,2 9,9 195 N-desmetyl-N-(iso~ 8 x 0,4 13,7 10,3 133 butoximetyl)-vin- 8 x 4,0 20,0 10,3 194 blastin 8 x 8,0 20,5 9,9 208 N-desmetyl-N-(me- 8 x 1,0 12,7 10,3 122 toximetyl)-vin- 8 x 2,0 18,7; 16,8 10,5 178; 155 blastin B x 4,0 19,0; 17,7 11,1 171; 163 8 x 6,0 19,2 10,5 182 8 x 8,0 18,7; 20,2 10,8 172; 205 N-desmety1-N-(pro- 8 x 1,0 15,0 10,3 145 poximetyl)-vin- B x 2,0 20,8 10,5 198 blastin 8 x 4,0 19,0 11,1 171 8 x 8,0 20,2 9,9 205 B X 10,0 14,7 10,3 142 toxisk* N-desmetyl-N-(al- 8 X 0,4 15,0 10,3 145 lyloximetyl)-vin- 8 x 4,0 21,0 10,3 200 8 x 8,0 20,5 9,9 207 N-desmetyl-N-(cyk- 8 x 0,4 13,1 10,3 127 lohexyloximetyl)- 8 x 4,0 18,8 10,3 181 vin- B x 8,0 1 ,3 9,9 197 N-desmetyl-N- 8 x 2,0 20,3 10,5 193 (etoximetyl)-vin- 8 x 4,0 18,5 11,1 167 blastin 8 x 8,0 20,5 9, 208 *Försöksdjuren dog tumörfria.

I grupper om vardera 10, genom utavel för- ädlade möss (Swiss-H/Riop Gedeon Richters egen försöks- djursavel) transplanterades intraperitonealt 5 x 105 askitestumörceller. 24 timmar efter transplantationen igångsattes behandlingen och föreningarna administrera- des dagligen, totalt fem gånger. Den genomsnittliga livslängden i kontrollgruppen uppgick till 15,7 dagar.

Liknande prov genomfördes med N-desmetyl-N- -(metoximetyl)-20'-desoxi-leurosidin. Vid dessa prov va- d I wuralsålïfií ' rierades doserna och antalet behandlingar. i 8104878-7 10 10 15 20 25 30 35 40 Följande resultat erhölls: Tabell 4 Dos Medellivslängd Behandlade/ mg/kg (da ar) kontroll Förening i.p. behandlade kontroll % N-desmetyl-N-(me- 4 x 8 ' 21,8 12,1 180 toximetyl)-20'-des- 8 x 4 20,8 11,6 180 oxi-leurosidin 4 x 7 17 , 1 12 , 1 142 8 x 1 21,7 12,2 178 8 x 0,5 15,3 12,2 126 Föreningarna gav en väsentlig ökning av livs- längden, vilket framgår av följande tabell.

Tabell 5 Dos På den 25:e dagen På den 30:e dagen Förening mg/kg levande tumör- tumörfria i.p. fria N-desmetyl-N-(hep- 5 x 6,0 10/10 7/10 3/10 toximetyl)-VLB N-desmetyl-N-(iso- 5 x 4,0 10/10 10/10 7/10 butoximetyl) -VLB N-desmetyl-N-(a1- 5 x 4,0 10/10 10/10 6/10 lyloximetyl)~VLB N-desmetyl-N-(cyk- 5 x 4,0 10/10 5/10 3/10 lohexyloximetyl)- VLB Den tumörinhiberande effekten hos de nya för- eningarna på arterna P 388 och NK/Ly är signifikant vid en dos om 4-8 mg/kg och dag och är lika stor som de kända diindolalkaloidernas effekt. Samtidigt är föreningarna en- ligt uppfinningen mycket mindre toxiska än de kända fören- ingarna med analog struktur.

För human behandling kan föreningarna bäst an- vändas intravenöst eller som infusioner.

Enligt uppfinningen framställes föreningarna med den allmänna formeln I genom omestring. Som utgångsma- terial användes föreningar med den allmänna formeln II. _ Det föredrages att börja med föreningarna II, vilka kan framställas i utmärkta utbyten genom oxidation.

Genom oxidation kan de föreningar med formeln II framställas, i vilka R“ är B-hydroxyl och R?a-etyl; el- ler R“ är väte och Ra är 8-etyl; R" är en rakkedjig alkyl- grupp med 1-10 kolatomer, en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kolatomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen 10 15 20 30 35 40 11 8104878-7 Na-CH2-O-grupp har primär eller sekundär konfiguration, eller en arylgrupp innehållande 1-3 kolatomer i alkyldelen, R1 är metoxi och R2 acetyl.

Ovannämnda föreningar II kan framställas genom följande oxidativa förfarande: En förening med den allmänna formeln (IV) där R1, R2, Ra och R“ har ovan angivna betydelser, eller ett syraadditionssalt därav, omsättes med en alkohol med den allmänna formeln III, där R" representerar en rakked- jig alkylgrupp med 1-10 kolatomer eller en förgrenad al- kylgrupp med 3-10 kolatomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen -OH har primär eller sekundär konfigu- ration, eller R" representerar en arylalkylgrupp innehål- lande 1-3 kolatomer i alkyldelen, vid vilken omsättning nämnda alkohol användes i överskott och vilken omsättning genomföres i närvaro av kromtrioxid, ett lämpligt orga- niskt lösningsmedel och ättiksyraanhydrid och en syra vid en temperatur mellan -60 och -30, företrädesvis mellan -50 och -60°C, varpå reaktionsblandningens pH injusteras på 8-10 och den bildade produkten isoleras, eventuellt efter rening.

Oxidationen belyses ytterligare i exemplen I V fr' _ J '- yfwrflnršr mä Quinn; SJ 8104878-7 12 10 15 20 25 30 35 40 1-9. Genom det oxidativa förfarandet erhålles N-desmetyl- N-(metoximetyl)-derivaten i de bästa utbytena och följ- aktligen är dessa de mest föredragna utgångsföreningarna för omestringen. Denna sistnämnda är fullständigt rever- sibel, dvs ur vilken som helst av föreningarna II kan vil- ken som helst av föreningarna I framställas, och vice-ver- sa. För att bevisa detta har följande försök genomförts: metoxi :5=======š2 allyloxi :::::::::Éf heptoxi :> etoxi metoxi <=_---- heptoxi metoxi _=-_-_--- etoxi metoxi <=----- bensyloxi ----š> heptoxi metoxi =5======šE2 cyklohexyloxi --E> heptoxi metoxi =5;======š= isopropoxi ----š> heptoxi metoxi ;5=======E= isobutoxi En förening II omsättes med en alkohol III, den senare i stort överskott. I föreningarna II och III är definitionen av R” respektive R" identiska, förutsatt att i ett givet par av reaktionskomponenter R” och R" all- tid är inbördes olika. Alkoholer III användes företrädes- vis i en mängd av 30-50 molekvivalenter i förhållande till föreningarna II.

Reaktionen mellan föreningarna II och III ge- nomföres i ett organiskt lösningsmedel. Som sådant kan exempelvis nämnas lösningsmedel av etertypen (dietyleter, tetrahydrofuran, dioxan); lösningsmedel av typen klorera- de kolväten (diklormetan, kloroform, koltetraklorid); el- ler sådana lösningsmedel som bensen och bensenhomologer (toluen, xylen) eller andra lösningsmedel, exempelvis etylacetat, aceton och dimetylformamid; eller också kan man som lösningsmedel använda ett överskott av reaktions- komponenten III. Bland de ovan nämnda lösningsmedlen är de klorerade kolvätena de mest föredragna i frånvaro av 10 15 20 25 30 35 13 8104878-7 vatten.

Reaktionen genomföres i närvaro av en syra vid pH 3-5, som injusteras med mineralsyror, exempelvis saltsy- ra, svavelsyra eller en Lewis-syra, såsom klortrifluorid- dietyleterat.

Reaktionstemperaturen väljes mellan det använda lösningsmedlets fryspunkt och kokpunkt. Reaktionen genomfö- res i allmänhet vid en temperatur mellan -60 och +25°C.

När reaktionen avslutats injusteras reaktions- blandningens pH på 8-10, exempelvis med en ammoniumhydroxid- lösning eller (företrädesvis) med fast kaliumkarbonat.

Produkten isoleras från reaktionsblandningen genom extraktion och/eller indunstning, och om så önskas renas produkten genom kromatograíering och/eller kristal- lisation. Kromatografering genomföres på partiellt desak- tiverad aluminiumoxid eller finkornigt kiseldioxidgel.

Uppfinningen belyses ytterligare i följande icke begränsande exempel.

Exemgel 1 N-desmetyl-N-(metoximetyl)-vinblastin 1,0 g (1,1 mol) vinblastinsulfat löstes i en blandning av 240 ml alkoholfri, absolut diklormetan, 8,0 ml metanol och 25 ml isättika. Lösningen kyldes till -55°C. En lösning av 0,5 g (5,0 mmol) kromtrioxid i 40 ml ättiksyraanhydrid kyldes till -55°C och sattes därefter droppvis under loppet av 5 minuter till vinblastinlösning- en under torr kväveatmosfär och kraftig omrörning. Under tillsatsen får reaktionsblandningens temperatur icke stiga över -SOOC. Oxidationsreaktionens fortskridande övervaka- des medelst tunnskiktskromatografering (DC-Alufolien Kie- selgel 60 F25r; en blandning av dietyleter, etanol, ben- sen och dietylamin i förhållandet 10:0,5:0,5;0,5). I all- mänhet avslutas oxidationen på 20-30 minuter. Därefter sattes till reaktionsblandningen under kylning en bland- ning av 190 ml koncentrerad vattenlösning av ammoniumhyd- roxid och 200 g is. Temperaturen steg från -55°C till en temperatur mellan 0 och +10°C. När denna temperatur uppnåtts avbröts kylning utifrån och lösningen, vars pH var 8,5-9, omrördes kraftigt i 10 minuter. Faserna separerades och den vattenhaltiga fasen extraherades med diklormetan (3 x Pool: 8104873'7 10 15 20 25 30 35 14 30 ml) och extrakten tvättades med en blandning av vatten och ammoniumhydroxid 1:1 (4 x 25 ml) och därefter med vat- ten (2 x 30 ml). Den organiska fasen torkades med vatten- fritt magnesiumsulfat, filtrerades och filtratet indunsta- des i vakuum. Man erhöll 0,35 g råproduk'. Denna renades genom kromatografering på en kolonn fylld med 0,3 g alu- miniumoxid med aktivitetsgrad II-III i en diklormetanlös- ning. Fraktioner om vardera 6 ml diklormetan uppsamlades och analyserades medelst tunnskiktskromatografering (DC- Alufolien Kieselgel 60 F254, art. 5554; lösningsmedel: en blandning av diklormetan och metanol i förhållandet 5;0,4; detektion: jodånga eller UV-ljus med våglängd 254 nm).

Alla fraktioner, som innehöll en och samma alkaloid, kombinerades och varje kombination indunstades för sig. Den önskade slutprodukten ingick i fraktionerna 6-25.

Utbyte: 64% av rubrikföreningen (med "rubrik- föreningen" avses i förevarande sammanhang den i rubriken till ifrågavarande exempel angivna föreningen), vilken var kromatografiskt likformig. Smältpunkt 205-210°C (etanol). [a]É° = +23° (c = 1, kloroform). la-NMR (cncla, 100 nnz)= 6 9,05 (S, 1H, cl,-on), 8,05 (S, 1H, Na,H), 7,35 (s, 1H, C12,-H), 7,13-7,26 (m, 3H, C9,- C11,~H), 6,68 (S, 1H, C9-H), 6,33 (s, 1H, C12-H), 5,84 (d, 1H, C14-H), 5,37 (s, 1H, C11-H), 5,28 (d, 1H, C15-H), 4,42 (za, :>Na~cn,-o-1, 4,1s (5, 1H,c2-H), 3,9? (S, an, C15-C02CH3), 3,77 (s, 3H, C11-OCH3), 3,62 (s, 3H, C16, -CO2CH3), 3,26 (s, 3H, -OCH3), 2,73 (s, 1H, C21-H), 2,00 (S, 3H, OCOCH3), 0,8-0,96 (Zt, 6H, C15-H3, C18,-H3).

MS m/e: 840 (M+ 100%), 810, 809, 781, 751, 681, 651, 650, 601, 499, 355, 282, 243, 241, 154, 149- Exemgel 2 N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)-vinblastin 0,5 g (0,55 mmol) vinblastinsulfat löstes i g en blandning av 120 ml absolut diklormetan, 3,7 ml isobu- i tanol och 12,5 ml isättika och lösningen kyldes till -5S°C. Därefter tillsattes 0,25 g (2,5 mmol) kromtrioxid i 40 ml isättika kyld till -55OC och reaktionens fortskri- dande övervakades med hjälp av tunnskiktskromatografering 10 15 20 25 30 35 40 15 8104878-7 på sätt som angives i exempel 1 (DC-Plastikfolien Kiesel- gel 60 Fzsu, art. 5735; en blandning av eter, etanol, ben- sen och dietylamin i förhållandet 10:0,5:0,5:0,5). Reak- tionen slutfördes på 140 minuter. Reaktionsblandningen vi- darebehandlades på sätt som angives i exempel 1 och man erhöll 0,65 g råprodukt. Denna renades genom kolonnkroma- tografering på Kieselgel 60 (art. 9385) som adsorptions- medel i diklormetan som lösningsmedel. Kolonnen tvättades och eluerades med diklormetan. Fraktioner om vardera 10 ml uppsamlades. Det första eluatet (330 ml) innehöll ingen alkaloid. Elueringen fortsattes med diklormetan innehål- lande 3% metanol. Det första eluatet (90 ml) innehöll den önskade rubrikföreningen, vilken isolerades genom indunst- ning.

Utbyte: 169 mg (35%) av rubrikföreningen.

Smältpunkt: 215-218°C (aceton och eter).

IR-spektrum (KBr): 3400 (NH, OH), 1730 (CO2CH3), 1605, 1220 (cm/OAC). *fx-mm (cncla, 100 mm: <5 8,1 (s, m, man), 7,5 (m, m, C12,-H), 7,05-7,2 (m, 3H, C9,-C11,-H), 6,70 (s, 1H, C;-H), 6,36 (s, 1H, C12-H), 5,87 (d, 1H, Clq-H), 5,37 (s, 1H, C17-H), 5,30 (d, 1H, C15-H), 4,75, 4,15 (ZH, JABl0 Hz, >Na-cr¶,-o->, 4,u (s, m, cz-H), 3,78, 3,15 (25, en, COZCH3), 3,63 (s, 3H, C11-OCH3), 2,75 (S, 1H, C21H), 2,1 (s, 3H, OCOCH3), 0,95-0,70 (12H, CH;-grupper).

MS m/e: 882 (M+, 100%), 864, 851, 823, 810, 779, 751, 723, 651, 650, 514, 355, 346, 329, 154.

Exemnel 3 N-desmetyl-N-(heptoximetyl)-vinblastin Det i exempel 2 beskrivna förfarandet upprepa- des med den ändringen, att 3,7 ml isobutanol utbyttes mot 3,7 ml 1-heptanol. Reaktionstiden var ca 90 minuter. Man erhöll ur reaktionsblandningen 4 g råprodukt. Reningen genomfördes i en kromatografisk kolonn innehållande Kie- selgel 60 (art. 9385) i 30 ml diklormetan. Kolonnen tvät- tades och eluerades med diklormetan. Fraktioner om vardera 10 ml uppsamlades. Det första eluatet (300 ml) innehöll ingen alkaloid. Elueringen fortsattes med diklormetan in- nehállande 3 % metanol. Det första eluatet (120 ml) inne- höll den önskade rubrikföreningen. ï' ”W -n-w 'hrx ___ I :Üulwæa w våld-il h H' Ä 10 15 20 25 30 35 8104878-7 16 Utbytet uppgick till 21%.

Smältpunkt 200-205°C (aceton/eter).

IR-spektrum (KBr)= 3450 (oH, NH), 1740 (cozcna), 1610, 1220 (cm/OAC).

IH-NMR (cncla. 100 MHz)= 0 s,07 (s, 15, Na,H), 7,52 (m, ; 1H, c,,,-H), 7,2-7,02 (m, 3H, ç._,,-c,_,,-H), 6,70 (s, 151, cffn, 6,35 (s, m, cu-H), 5,05 (aa, 1:a, c,,-H>, 5,39 ' (s, 1H, C17-H), 5,30 (d, 1H, C15-H), 4,75, 4,15 (2H, JAB 10112, >ma-cn,-o-), 4,0 (s, 1:1, c,-H>, 3,00, 3,75 (zs, 6H, CO2CH3), 3,65 (s, 3H, C11-OCH3), 2,75 (S, 1H, C21-H), 2,10 (s, 1H, OCOCH3), 0,7~1,0 (3t, 9H, CH,-grupper).

MS m/e: 924 (M+, 100%), 906, 893, 865, 822, 810, 765, 751, 737, 651, 650, 649, 469, 455, 355, 282, 154, 135, 122.

Exemgel 4 N-desmetyl-4-(bensyloximetvl)-vinblastin Det i exempel 2 beskrivna förfarandet uppre- pades med den ändringen, att 3,7 ml isobutanol utbyttes mot 4,3 ml bensylalkohol. Efter 45 minuter erhölls 4 ml av en oljeartad produkt, som isolerades med hjälp av tunnskiktskromatografering (Kieselgel PF255+3§6; en bland- ning av 100 ml diklormetan och 80 ml metanol).

Utbyte: 75 mg (15%) av rubrikföreningen.

Smältpunkt 215-218°C (metylenklorid/eter).

IR-spektrum (KBr): 3400 (OH, NH), 1740 (COZCH3), 1610, 1230 (cm/OAc).

Ira-mm (cnclg, 100 Mfizn e 8,07 (s, 1H, Nam), 7,52 (m, 1H, C12,-H), 7,2-7,08 (m, 3H, C9,-C11,-H, 3H, aromatisk), 6,75 (s, 1H, Cg-H), 6,20 (s, 1H, C12-H), 5,85 (dd, 1H, C15-H), 5,41 (s, 1H, Cl,-H), 5,30 (d, 1H, C15-H), 4,80, 4,20 (25, JAB 10112, >Na-cr12-o-), 4,40 (s, 211, bensyl- -CH2), 4,00 (s, 1H, C2-H), 3,70, 3,68 (2s, 6H, COZCHS), 3,63 (s, 3H, C11-OCH3), 2,75 (s, 1H, C21-H), 1,0-0,70 (2t, 6H, CH;-grupper).

MS m/e: 916 (M+, 100%), 885, 857, 822, 810, 796, 779, 757, 751, 737, 651, 650, 649, 514, 355, 346, 329, 282, 154, 135. , Exemgel 5 ¿ N-desmetyl-N-(metoximetyl)~vinblastin 5 g (5,5 mmol) vinblastinsulfat löstes i 150 ml vattep.¿Vlnbla§tinbasen írigjordes genom tillsats av en koncenttešad äågššälöšnång av ammoniumhydroxid (pH 8) wfif? 1, 11-14; ~ ..=¿""”wg x 10 15 20 25 30 35 40 17 8104878-7 och behandlades med fyra fraktioneronrvardera 50 ml di- klormetan. Diklormetanlösningen torkades över natrium- sulfat, filtrerades och filtratet indunstades till torr- het i vakuum. Man erhöll 4 g vinblastinbas. Denna löstes i en blandning av 1000 ml alkoholfri diklormetan, 120 ml ättiksyra och 6 ml metanol. Lösningen kyldes till -55°C.

Till lösningen sattes under loppet av 5 minuter en lös- ning av 2,5 g (25 mmol) kromtrioxid i 470 ml ättiksyra- anhydrid, vilken lösning också kylts till -55°C. Reak- tionsblandningen omrördes vid -55OC i 45 minuter, varpå den sattes till en blandning av 940 ml av en koncentrerad vattenlösning av ammoniumhydroxid och 940 ml isvatten.

Temperaturen får därvid icke överstiga 300°C. Faserna se- parerades och diklormetanfasen blandades med 1000 ml av en 1% vattenlösning av ammoniumhydroxid. Den organiska fasen avskildes, torkades över vattenfritt natriumsulfat, filtrerades och filtratet indunstades till torrhet i va- kuum. Man erhöll 3,8 g râprodukt. Rening genomfördes i en kromatografisk kolonn framställd av 230 g aluminium- oxid med en aktivitetsgrad av II-III (Brockmann) och ben- sen. Râprodukten löstes i 20 ml av en blandning av bensen och kloroform 8:2 och skiktades därefter på kolonnen.

Eluering genomfördes med ungefär 8 l av en blandning in- nehållande bensen och kloroform i de ovan angivna propor- tionerna. Man uppsamlade fraktioner om vardera 100 ml.

Dessa analyserades medelst tunnskiktskromatografering (kise1dioxidgel; en blandning av bensen, etanol, dietyl- amin och dietyleter 5:5:5:100). Fraktioner innehållande samma substans kombinerades och indunstades. Man erhöll 2,1 g av rubrikföreningen. Utbyte (efter omkristallisa- tion i 6 ml etanol) 1,5 g. Produkten hade samma fysikalis- ka egenskaper som produkten enligt exempel 1.

Exempel 6 N-desmetyl-N-(propoximetyl)-vinblastin Pâ sätt som angives i exempel 5 men med an- vändning av 4,5 ml propanol i stället för metanol som reaktionskomponent erhölls 0,6 g av rubrikföreningen, Smältpunkt 200-210°C (etanol). [a]2° = +31,2° (C = 1, kioroformy. ln-NMR (cncla. 100 nHzh a 9,05 (s, m, cu-oH), 8,06 (s, Pgggä Qrnauags i" 8104878-7 18 10 15 20 25 30 35 1H, Na,H), 7,34 lm, 1H, C12-H), 7,34-7,12 (m, 3H, C9, -C11,-H), 6,68 (s, 1H, C9-H), 6,35 (s, 1H, C12-H), 5,84 (dd, 1H, Clr-H), 5,36 (s, 1H, C11-H), 5,28 (d, 1H, C15- m, 4,75, 4,15 (za, JAB 10 Hz, >Na-cn2-o-), 4,18 (s, m, C2-H), 3,78 (s, 3H, COZCH3), 3,75 (s, 3H, C11-OCH3), 3,62 (s, 3H, COZCH3), 2,73 (s, 1H, C21-H), 2,09 (5, 3H, OCOCH3), 0,65-0,94 (m, 9H, CH;-grupper).

Exempel 7 _ N-desmetyl-N-(metoximetvl)-vinblastin t ; På sätt som angives i exempel 1 men utgående från vinblastindihydroklorid i stället för vinblastinsul- fat framställdes rubrikföreningen, Utbyte 28%. Produkten hade samma fysikaliska egenskaper som produkten enligt exempel 1.

Exempel 8 N-desmetyl-N-(metoximetvl)-vinblastin 'På sätt som angives i exempel 1 men med an- vändning av alkoholfri kloroform, dikloretan respektive aceton som lösningsmedel i stället för diklormetan fram- ställdes rubrikföreningen. Utbyte 40-50% bereonde på det använda lösningsmedlet. Produkten hade samma fysikaliska E egenskaper som produkten enligt exempel 1.

Exempel 9 N-desmetvl-N-(metoximetvl)-20'-desoxileuro- sidin 60 mg (0,067 mmol) 20'-desoxileurosidinsulfat, som framställts genom katalytisk hydrering í?d/C, metanol) av 3',4'-anhydrovinblastin och efterföljande omvandling till det motsvarande sulfatet, löstes i en blandning av 20 ml absolut diklormetan, 1,5 ml isättika och 0,5 ml me- tanol. Lösningen kyldes till -55°C och försattes med en lösning av 30 mg (0,3 mmol) kromtrioxid i 3,5 ml ättiksy- raanhydrid, vilken lösning också hade kylts.till -55°Cfl Reaktionen avslutades på 60 minuter. Till reaktionsbland- ningen sattes en blandning av 12 ml koncentrerad vatten- lösning av ammoniumhydroxid och 12 g is och faserna till- , läts separera. Den vattenhaltiga fasen skakades med di- klormetan (3 x 10 ml). De kombinerade organiska faserna tvättades med en blandning av ammoniumhydroxid och vatten 1:1 (2 x 10 ml) och därefter med vatten (2 x 5 ml). Genom 10 15 20 25 35 40 19 8104878-7 torkning och indunstning av den organiska fasen erhölls 48 mg råprodukt. Rening genomfördes i en kromatografisk kolonn (kiseldioxidgel 0,040-0,063 mm Merck, art. 9385; lösningsmedel CH2Cl2 åtföljd av en blandning av 3% meta- nol och CH2Cl2). Man erhöll 18 mg (32%) av rubrikfören- ingen. smältpunkt 185-19o°c (sönaerde1ning>. [d]D = +50O (c = 1, kloroform).

IR-spektrum (KBr): 3400 (NH), 1720 (COZCH3), 1610, 1230 (cm/OAc). ln-NMR (cnclal: e 7,95 (s, m, nav-H), 7,54 (m, en, cm, -I-I), 7,2-7,'I (m, 31-1, Cgf-Clu-l-I), 6,56 (s, 1H, Cg-H), 6,11 (s, 1H, C12-H), 5,87 (dd, 1H, Cl,-H2, 5,45 (s, 1H, cU-H), 5,37 (d, m, 015-14), 4,72, 435 (za, :yxïa-cnz-o-L 3,80, 3,75, 3,61 (9H, CO2CH;), 2,1! (S, 1H, OCOCH3), 1,0- 0,6 (6H, CH3-grupper).

Genom den ovan angivna kromatografiska re- ningen isolerades 46 mg (22%) N-desmetyl-N-formyl-20'- desoxileurosidin som en biprodukt. smältpunkt 205-21o°c (sönderaeining). [d]D = +54° (c = 1, kloroform). Égemgel 10 N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)-vinblastin 0,80 g av en råprodukt framställd på sätt som angives i exempel 1, vilken råprodukt innehöll 65% E-des- metyl-N-(metoximetyl)-vinblastin löstes i en blandning av 50 ml torr diklormetan och 2,4 ml (25 mmol) isobutanol.

Lösningen kyldes till OOC och HCl i absolut eter tillsat- tes under kväveström och omrörning till pH 3. Reaktionens fortskridande övervakades medelst tunnskiktskromatograíe- ring (DC-Alufolien Kieselgel 60 Fzsn, Art. 5554; lösninge- medel: en blandning av eter, etanol, bensen och dietylamin 10:0,5:0,5:O,5). Reaktionsblandningen sattes därefter till 2 ml av en koncentrerad vattenlösning av ammoniumhydroxid, faserna separerades och den vattenhaltiga fasen extrahera- des med diklormetan (3 x 5 ml). De kombinerade extrakten tvättades med vatten (3 x 3 ml), varpå den organiska fasen torkades med magnesiumsulfat, filtrerades och filtratet indunstades. Man erhöll 1,7 g av en råprodukt. Denna lös- tes i 25 ml diklormetan och underkastades kolonnkromato- Poor» šwffi* nå. nagel,-e___._i_.....~.»-ifie__eev n 10 15 20 25 30 35 8104878-7 2° grafering på Kieselgel 60 (Art. 9385). Eluering påbörja- des med 120 ml diklormetan och fortsattes med diklorme- tanlösningar innehållande 1, 2 respektive 4% metanol. Den första fraktionen (290 ml) innehöll ingen alkaloid. Den följande fraktionen (300 ml) innehöll rubrikföreningen.

Utbyte 416 mg av rubrikföreningen. Denna visade sig ha samma fysikaliska egenskaper som produkten enligt exem- pel 2. A Exempel 11 N-desmetyl-N-(heptoximetyl)-vinblastin På sätt som angives i exempel 10 men med an- vändning av 2,5 ml (17 mmol) 1-heptanol i stället för iso- butanol och genomförande av den tunnskiktskromatografiska mätningen på skikt av DC-Plastikfolien Kieselgel 60 Fzss, art.5735, framställdes rubrikföreningen. Râprodukten rena- des genom kolonnkromatografering på sätt som beskrives i exempel 10. Den första fraktionen (310 ml) innehöll ingen alkaloid. Den följande fraktionen (200 ml) innehöll rub- rikföreningen. Utbyte 350 mg. Produktens fysikaliska egen- skaper visade sig vara identiska med de som fastställdes för produkten enligt exempel 3.

Exempel 12 _ N-desmety1-N-(bensyloximetyl)-vinblastin 0 Det i exempel 10 beskrivna förfarandet uppre- pades med den ändringen, att man i stället för 1-heptanol använde 3,0 ml (27 mmol) bensylalkohol som reaktionskom- ponent. Den erhållna råprodukten renades på sätt som an- gives i exempel 10. Den första fraktionen (350 ml) inne- höll ingen alkaloid. Det följande eluatet (300 ml) inne- höll rubrikföreningen. Utbyte 320 mg. Produktens fysika- liska egenskaper visade sig vara identiska med de som fastställdes för produkten enligt exempel 4.

Exempel 13 N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)-vinblastin 0,1 g råprodukt framställd på sätt som angi- ves i exempel 1, vilken råprodukt innehöll 65% N-desmetyl- N-(metoximetyl)-vinblastin, löstes i en blandning av ï5 ml diklormetan och 30-50 molekvivalenter isobutanol, och vid 0°C tillsattes under omrörning HCl i absolut eter till pH 3.

När reaktionen slutförts sattes kalidmkarbonat till reaktions- 10 15 20 25 30 35 40 Ü 8104878-7 blandningen till pH 7. Det utfällda saltet avfiltrerades och filtratet renades genom kolonnkromatografering, på sätt som angives i exempel 10, efter direkt indunstning eller partiell indunstning i vakuum. Utbyte 53% av rub- rikföreningen. Denna visade sig ha samma fysikaliska egen- skaper som produkten enligt exempel 2.

Följande föreningar framställdes på analogt sätt med användning av lämpliga utgångsföreningar: N-desmetyl-N-(isopropoximetyl)-vinblastin (utbyte 34%). smältpunkt 170-1s2°c (sönaerae1ning1.

IR-spektrum (KBr): 3400 (OH, NH), 1730 {CO2CH3), 1610, 1220 (cm/OAC). ln-NMR (cDc1,, 100 MHz)= 0 8,1 (S, 1n, Na,-H), 7,51 im, 1H, C12,-H), 7,2-7,03 (m, 3H, Cg,-C11,-H), 6,70 (s, 13, C;-H), 6,35 (s, 1H, C12-H), 5,85 (dä, 1H. C11-H), 5,38 (s, 1H, C17-H), 5,30 (d, 1H, C15-H), 4,75, 415 (ZH, JAB 10 Hz, j:Na-cs,-0-1, 4,0 (S, 1H, c,-H1, 3,70, 3,75, 3,05 (9H, CO2CH3, C11-OCH3), 2,75 (S, 1H, C21-H), 2,1 (s, 3H, OCOCH3), 0,95-0,60 (12H, CH;-grupper).

N-desmetyl-N-(allyloximetyl)-vinblastin (utbyte 55%).

Smältpunkt 205-210°C (sönderdelning).

IR-spektrum (KBr): 3300 (OH, NH), 1730 (COZCH3), 1610, 1220 (cm/OAC). ln-NMR (CDC13, 100 MHz); 0 8,05 (S, 10, Na,-H), 7,50 (m, 1H, C12,-H), 7,2-7,08 (m, 3H, Cg,-C11,-H), 6,73 (s, 1H, C9-H), 6,25 (s, 1H, C12-H), 6,1-5,85 (m, ZH, Cl»-H, CH2=Cg-CH2-), 5,40 (s, 1H, C17-H), 5,25-5,10 (m, 3H, cl,-H, gg,=cn-ca,-1, 4,74, 4,15 (za, 2:Na-cnz-o-1, 4,15 (d, 211, cflficn-glír), 3,70, 3,68, 3,63 (911, cozcna, all-oem), 3,73 (s, na, cH-H), 2,1 (s, 3H, ococng). 1,0-0,7 (2t, 6H, CH;-grupper).

N-desmetyl-N-(cyklohexyløximetyl)-vinblastin (utbyte 36%).

Smältpunkt 175-180°C (sönderdelning) IR-spektrum (KBr): 3400 (05, NH), 1730 (COQCHQ), 1610, 1230 (cm/OAc). ln-NHR (cnclh 100 man: 0 8,05 (s, 111, Nam), 7,5 (m, m, C12,-H), 7,2-7,0 (m, 3H, C9,-C11,-H), 6,72 (s, 1H, CQH), nu Pont 0011-11114 10 15 20 25 30 35 8104878-7 22 6,32 (s, 1H, C12-H), 5,85 (dd, 1H, Clq-H), 5,37 (s, 1H, C11-H), 5,30 (d, 1H, C15-H), 4,72, 4,15 (ZH, Na-CH2~0-), 4,05 (s, m, cz-H), 3,8, 3,75, 3,68 (ss, cozcflg. oil-cozzi), 2,1 (s, 3H, OCOCHa), 0,95-0,65 (2t, CH;-grupper).

Exemgel 14 N-desmetyl-N-(metoximetyl)-vinblastin 0,15 g (0,17 mmol) N-desmetyl-N-(isobutoxi- metyl)-vinblastin löstes i en blandning av 30 ml diklor- metan och 1,5 ml metanol. Lösningen kyldes till OOC och försattes droppvis med en lösning av HCl i absolut eter till pH 3, Reaktionens fortskridanäe övervakaåes genom tunnskiktskromatografering (Kieselgel 60 Fisk, Art; 5735; en blandning av eter, etanol, dietylamin och bensen 20:1:1:1). När reaktionen slutförts neutraliserades reak- tionsblandningen med fast kaliumkarbonat, filtreraåes och filtratet indunstades i vakuum. Utbyte 1,14 g av rubrik- föreningen. Denna visade sig ha samma fysikaliska egen- skaper som fastställdes för produkten enligt exempel 1.

Exemgel 15 N~desmetv1-N-(etoximetyl)-vinblastin En lösning av 50 mg N-äesmetyl-N-(allyloxi- metyiy-vinblastin i 10 m1. absolut alkiormetan och 0,30 ml etanol surgjordes vid OOC till pH 3 med HCl i absolut eter. Efter 5 minuter neutraliseraêes lösningen med fast kaliumkarbonat, êet utfällda saltet avfiltrerades och man erhöll 46 mg N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vinblastin genom indunstning av filtratet. smältpunkt 235-23s°c. [a]É5 = +30,5 (c = 1, kloroform).

Exemgel 16 N-desmetyl-N-(propoximetyl)-vinblastin Till en lösning av 100 mg N~desmetyl-N-(hep- toximetyl)-vinblastin i 20 ml absolut bensen sattes 1 ml n-propylalkohol, varpå pH injusterades på 3 med HCl i ab- solut eter. Efter 5-10 minuter neutraliseraåes saltsyran med fast kaliumkarbonat. Reaktionsblandningen filtrerades och filtratet indunstades ooh man erhöll 90 mg N-desmetyl- N-(propoximetyl)-vinblastin, vars fysikaliska egenskaper visade sig vara identiska med de som fastställts för pro- dukten enligt exempel 6. 10 15 20 25 30 35 40 23 8104878-7 Vid användning av dietyleter, dioxan, ace- ton respektive dietylacetat som lösningsmedel skedde reak- tionen på fullt analogt sätt.

Exemgel 17 N-desmetyl-N-(allvloximetyl)-vinblastin En lösning av 50 mg N-desmetyl~N~(metoximetyl,- vinblastin i 10 ml absolut diklormetan och 0,5 ml allyl- alkohol surgjordes vid OOC till pH 3 med en 50% lösning av bortrifluorideterat i absolut eter. Efter 5 minuter neutraliserades lösningen med kaliumkarbonat och det ut~ fällda saltet avfiltrerades. Filtratet indunstades och man erhöll 40 mg N-desmetyl-N-(allyloximetyl)-vinblastin.

Föreningens fysikaliska egenskaper visade sig vara identiska med de som fastställdes för produkten en- ligt exempel 13.

POÛï-ê ._ “'=¥HH1uxå¿ -Qz

Claims (9)

10 15 20 25 30 35 8194878-7 24 Patentkrav

1. Sätt att framställa en förening med den allmänna formeln cnao N//W L. w HZH OR ll där R* är s-hyaroxyl och :<3 a-eryl; eller n” är väte och R3 är B-etyl; R" är rakkedfig alkylgrupp med 1-10 kolato- mer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kolatomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen :}Na-CH2-O- har primär eller sekundär konfiguration, eller en alkenyl- eller alkinylgrupp med 3-6 kolatomer, eller en cykloalkyl- grupp med 5-7 kolatomer, eller en aralkylgrupp med 1-3 kolatomer i alkyldelen; R1 är metoxi och R2 acetyl, förut- satt att om Rs är u-etyl och R“ 8-hydroxyl representerar R" någon av de angivna grupperna med undantag av etyl och eventuellt epimerer därav, k ä n n e r e c k n a t a v att en förening med den allmänna formeln E .VÉ ï-z IT. , ._ _ _ -_-~-~ V feaär* a L: ßdefl-g- RQ' Enn ;l-=.',-_'»_> ä. 10 15 20 25 30 35 25 8. ...än ca m w OC a -~1 H / å) IÉI' éï / / //_ g H - där RI, R2, Rs och R” har ovan angivna betydelser och R” är en rakkedjig alkylgrupp med t -G kolatomer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-1G kolatome , r kolatomen bunden vid gruppen :>Na-CH2-O- ler sekundär konfiguration, eller en alkenylqrg¿ 3-6 kolatomer, en alkinylgrupp med 3-6 kolatsmer, en cyk- loalkylgrupp med 5-7 kolatomer eller en eralkylgrupp, i vilken alkyldelen innehåller 1-3 kolatomer, förutsaât att R' i utgångsföreningen II representerar annan grupp än den som representeras av R" i slutprodukten I, omsättes med en alkohol med den allmänna formeln R"-C'H íïlïlíš där R" har ovan angiven betydelse, vilken alkohol använ- des i stort överskott och varvid reaktionen qenomföres vid pH 3-5, varpå reaktionsblandningens på injusteras på 7,8, föreningen I och eventuella epimerer därav isoleras och, om så önskas, renas. 90611 res-MJ 10 15 20 25 30 35 8104878-7 26

2. Sätt enligt krav 1, k ä n n e t e c k - n a t a v att man använder 30-50 molekvivalenter av en alkohol med den allmänna formeln (III) räknat på mäng- den förening med den allmänna formeln (II).

3. Sätt enligt krav 1 för framställning av N-desmetyl-N-(etoximetyl)-vinblastin, k ä n n e t e c k - n a t a v att en förening med den allmänna formeln (II), där R' har i krav 1 angiven betydelse med undantag av etyl, RI är metoxi, R2 acetyl, R3 a-etyl och R“ ß-hyd- roxyl, omsättes med etanol vid pH 3-5.

4. Sätt enligt krav 1 för framställning av N-desmetyl-N-(bensyloximetyl)-vinblastin, k ä n n e - t e c k n a t a v att en förening med den allmänna formeln (II), där R' har i krav 1 angiven betydelse med undantag av bensyl, RI är metoxi, R2 är acetyl} Ra är a- -etyl och R“ är B-hydroxyl, omsättes med bensylalkohol vid 5 pn 3-5. I

5. Sätt enligt krav 1 för framställning av ' N-desmetyl-N-(allyloximetyl)-vinblastin, att en förening med den allmänna k ä n n e ~ t e c k n a t a v formeln (II), där R' har i krav 1 angiven betydelse med undantag av allyl, R1 är metoxi, R2 är acetyl, R3 är u- -etyl och R“ är 6-hydroxyl, omsättes med allylalkohol vid pH 3-5.

6. Sätt enligt krav 1 för framställning av N-desmetyl-N-(cyklohexyloximetyl)-vinblastin, k ä n - n e t e c k n a t a v att en förening med den allmän- na formeln (II), där R' har i krav 1 angiven betydelse med undantag av cyklohexyl, R1 är metoxi, R2 är acetyl, Rs är a-etyl och R* är B-hydroxyl, omsättes med cyklohexylalkohol 2 vid pH 3-5.

7. Förening med den allmänna formeln I 10 15 20 25 35 40 27 8104878-7 å” h? I m U där R“ är 6-hydroxyl och Ra a-etyl; eller R" är väte och Rs är 6-etyl; R" är rakkedjig alkylgrupp med 1-10 kolets- mer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 koletomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen :)Na-CH2-0- har primär eller sekundär konfiguration, eller en alkenyl- eller alkinylgrupp med 3-6 kolatomer, eller en cykloalkyl- grupp med 5-7 kolatomer, eller en aralkylgrupp med 1-3 kolatomer i alkyldelen; R1 är metoxi och R2 acetyl, för- utsatt att om R3 är a-etyl och R“ B-hydroxyl represente- rar R" någon av de angivna grupperna med undantag av etyl.

8. Förening enligt krav 6, n ä m l i g e n N-desmetyl-N-(metoximetyl)-vinblastin, N-desmetyl-N-(propoximetyl)-vinnlastin, N-desmetyl-N-(isopropoximetyl)-vinblastin, N-desmetyl-N-(isobutoximetyl)-vinblastin, N-desmetyl-N-(heptoximetyl)-vinblastin, N-desmetyl-N-(allyloximetyl)-vinblastin, N~desmetyl-N-(bensyloximetyl)-vinblastin, N-desmetyl-N-(cyklohexyIöäímetyl}-vinblastin, . v- -r~- Pøon evfißfiJiif-ï; ,... ..._....._...-.--=-VV-_.,., .,.,.-.... _ _ 10 15 20 25 30 35 8104878-7 28 eller N-desmetyl-N-(metoximetyl)-20'-disoxileurosodin.

9. Farmaceutisk beredning med cytostatisk akti- vitet, k ä n n e t e c k n a d därav, art den innehåller en farmaceutiskt effektiv mängd av en förening enligt krav 7 med den allmänna formeln I 4 u 3 4 u .H _ ar fß-hydroxyl. och R l2á-e-t_l; eller R ar vare ocr; där R R3 är ß -etyl; R" är en rakkedjig alkylgrupp med 1-30 kol- atomer eller en förgrenad alkylgrupp med 3-10 kølatomer, i vilka grupper kolatomen bunden vid gruppen :Z=Ea-CH2~O- har primär eller sekundär konfiguration, eller en alkenyle eller alkinylgrupp med 3-6 kolatomer, eller en cykloalkylgrupp med 5-7 kolatomer, eller en aralkylgrupp med ï-3 kolatomer aik» i yldelen; R1 är metoxi och R2 acetyl, förutsatt att em R3 är 0(-etyl ecfi R%fßl;hydrQxyl representerar R" någon av de an- givna grupperna med undantag av etyl, i blandning med konven- tionella farmaceutiska bärare och/eller ytterligare tillsat- _5532”. . eu (Äl- aüß-ï* *L ' v,