SA95150618B1 - فيروس ألفا مطفر - Google Patents
فيروس ألفا مطفر Download PDFInfo
- Publication number
- SA95150618B1 SA95150618B1 SA95150618A SA95150618A SA95150618B1 SA 95150618 B1 SA95150618 B1 SA 95150618B1 SA 95150618 A SA95150618 A SA 95150618A SA 95150618 A SA95150618 A SA 95150618A SA 95150618 B1 SA95150618 B1 SA 95150618B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- virus
- cells
- mutated
- mentioned
- cell
- Prior art date
Links
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 title claims description 14
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 title abstract description 14
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 title abstract description 5
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 title abstract description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 112
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 44
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 28
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims abstract description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 20
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims abstract description 14
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 98
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 claims description 43
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 30
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 28
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 16
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 12
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 10
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 claims description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 3
- CXENHBSYCFFKJS-OXYODPPFSA-N (Z,E)-alpha-farnesene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C\C=C(\C)C=C CXENHBSYCFFKJS-OXYODPPFSA-N 0.000 claims 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 13
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 abstract description 11
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 abstract description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 26
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 17
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 13
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 11
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 11
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 11
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 10
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 9
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 9
- 230000008859 change Effects 0.000 description 9
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- -1 DTNB thiol Chemical class 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 6
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 6
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 6
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000711466 Murine hepatitis virus Species 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 4
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 4
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 4
- RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N actinomycin D Natural products CC1OC(=O)C(C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)C2CCCN2C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)NC4C(=O)NC(C(N5CCCC5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)C(C(C)C)C(=O)OC4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000007499 fusion processing Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 3
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108010092160 Dactinomycin Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 2
- RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N actinomycin D Chemical compound C[C@H]1OC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C(=O)[C@@H]2CCCN2C(=O)[C@@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]1NC(=O)C1=C(N)C(=O)C(C)=C2OC(C(C)=CC=C3C(=O)N[C@@H]4C(=O)N[C@@H](C(N5CCC[C@H]5C(=O)N(C)CC(=O)N(C)[C@@H](C(C)C)C(=O)O[C@@H]4C)=O)C(C)C)=C3N=C21 RJURFGZVJUQBHK-IIXSONLDSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 229960000640 dactinomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 238000011946 reduction process Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ROUFCTKIILEETD-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-2-[(5-nitropyridin-2-yl)disulfanyl]pyridine Chemical compound N1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1SSC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=N1 ROUFCTKIILEETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000510930 Brachyspira pilosicoli Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 101100326341 Drosophila melanogaster brun gene Proteins 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010025421 Macule Diseases 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- IXUZXIMQZIMPSQ-ZBRNBAAYSA-N [(4s)-4-amino-4-carboxybutyl]azanium;(2s)-2-amino-4-hydroxy-4-oxobutanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC[NH3+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC(O)=O IXUZXIMQZIMPSQ-ZBRNBAAYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000531 effect on virus Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000007446 host cell death Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 229960005030 other vaccine in atc Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- CRUSHRATSSNWSB-UHFFFAOYSA-N phenyl-sulfanylidene-sulfidoazanium Chemical compound [S-][N+](=S)C1=CC=CC=C1 CRUSHRATSSNWSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000034005 thiol-disulfide exchange Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/18—Baker's yeast; Brewer's yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/36011—Togaviridae
- C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
- C12N2770/36121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/36011—Togaviridae
- C12N2770/36111—Alphavirus, e.g. Sindbis virus, VEE, EEE, WEE, Semliki
- C12N2770/36122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Botany (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
الملخص: يتعلق هذا الاختراع بتركيب مادة تتضمن فيروس غير معدي ومطفر ملائم للاستخدام في تحضير لقاح . كما يعمل على تجهيز plasmid مجهز بحيث يتم التعبير عنه في خلية مدمجة تتضمن DNA يشفر لفيروس مطفر mutated virus غير معدي وعناصر تنظيمية ضرورية للتعبير عن DNA المذكور في الخلية . ويتم أيضا إعداد طرق لتثبيط انتشار عدوى الفيروس تتضمن خطوة تلامس هذا الفيروس المذكور مع مركب والذي يثبط نشاط إنزيم اختزال thiol/protein disulfide isomerase في الفيروس المذكور.
Description
Y
فيروس ألفا مطفر الوصف الكامل خلفبة الاإختراع: يتعلق هذا الاختراع عامة بمجال علم الفيروسات ؛ علم المناعة وكيمياء البروتينات. وعلى الأخص ؛ فإن هذا الاختراع يتعلق بعوامل جديدة مضادة للفيروسات وطرق جديدة لتحضير اللقاحات. ° أن الفيروسات عبارة عن تركيبات معقدة ذات ثلاثة أبعاد والتي تعمل كأنظمة لتوصيل الجينات gens . وتكون الفيروسات من جينوم genome من J RNA 0118 في داخل غلاف يتكون من بروتين أو اتحاد من بروتينات ترتبط مع غشاء من طبقة مزدوجة بها غلاف دهني . ولكي يعيش جينوم الفيروس virus genome في الطبيعة ؛ فانه يتكاثر عن طريق تدمير الآلية الكيميائية الحيوية لخلية عائل ملائمة . وطريقة ٠ الإصابة تلك كثيراً ما ينتج عنها موت خلية العائل ؛ وهي عملية يتم التعبير عنها في صورة مرض في نبات أو حيوان والناتج النهائي لعملية الإصابة تكون عبارة عن مئات إلى آلاف من الجزيثات الفيروسية virus particles تنطلق من الخلية المصابة أو النسيج المصاب وكل جزيئ من تلك الجزيئات الفيروسية له القدرة على إصابة WL أخرى أو أنسجة أخرى . يتم حماية المادة الجينية للفيروس من التدمير بسبب العوامل yo البيئية بواسطة الغلاف المحيط . وبينما يجب على هذا الغلاف أن يقاوم التكسير بالعوامل المحيطة؛ فانه يجب أن يكون له القدرة على التفكك لإطلاق المادة الجينية في داخل خلية العائل. تفتقد الأبحاث السابقة لوسيلة مؤثرة لتثبيط انتشار فيروسات معينة . وتفتقد الأبحاث السابقة أيضاً لوسيلة مؤثرة للتأكد من أن الفيروس المستخدم كلقاح يكون غير مسبب © لمرض ؛ وهذا الاختراع يعمل على إشباع تلك الحاجات والرغبات المذكورة في هذا المجال. 6ل
-
الوصف العام للاختراع:
في أحد تجسيمات هذا الاختراع ؛ يتم إعداد تركيب يتضمن فيروس غير مسبب لمرض ؛ ومطفر ملائم للاستخدام في تحضير لقاح.
وفي تجسيم أخر لهذا الاختراع ؛ يتم إعداد plasmide مدمج مجهز بحيث يمكن
© التعبير die في خلايا ثديية تتضمن 1118 مشفر لفيروس مطفر غير معدي وعنامصسسر
منظمة مجهزة للتعبير عن هذا DNA المذكور في الخلية.
وفي تجسيم أخر لهذا الاختراع ؛ يتم إعداد فيروس له نشاط اختزال .thiol/protein disulfide isomerase
وفي تجسيم أخر لهذا الاختراع ؛ يتم إعداد طريقة لتثبيط انتشار الفيروس thiol enzyme المعدي وتتضمن تلك الطريقة تلامس الفيروس المذكور مع مركب يقبط ٠ في الفيروس المذكور. protein disulfide isomerase اختزال
وفي تجسيم أخر لهذا الاختراع ؛ يتم إعداد عامل مضاد للفيروسات لتثبيط انتشار العدوى الفيروسية حيث أن العامل المذكور المضاد للفيروسات يعمل على تثبيط نشاط اختزال thiol/protein disulfide isomerase في الفيروس المذكور.
\o سوف تكون تلك المظاهر ومظاهر أخرى وخصائص ومميزات لهذا الاختراع واضحة من الوصف التفصيلي التالي للتجسيمات المفضلة لهذا الاختراع والتي يتم إعطائها بهدف التوضيح. شرح مختصر للرسومات:
يمكن فهم الخصائص ؛ المميزات وأهداف هذا الاختراع بالإضافة إلى
٠ أشياء أخرى بالتفصيل من هذا الاختراع ؛ ويتم توضيح وصف أكثر تفضيلاً لهذا الاختراع بالرجوع إلى تجسيمات معينة والتي يتم توضيحها في الرسومات المصاحبة . وتلك الرسومات تشكل جزء من هذا الطلب . ويجب أن يلاحظ على أي حال أن الرسومات الملحقة توضح تجسيمات مفضلة لهذا الاختراع ولا تعتبر محددة لمجال هذا الاختراع.
¢ إل
£ يوضح الشكل :١ خطوة اندماج واحدة بدون 177170 في خلايا cells BAK عند قيمة od هيدروجيني 8,7 في وجود (2-ME) 2-mercaptoethanol . ولقد تم تعريف المركبات المعقدة للخلايا الفيروسية لوسط اندماج منخفض الأس الهيدروجيني pH يتضمن العديد من تركيزات عامل الاختزال 2-148 كما هو موصوف فيما 0 بعد . ولقد تم تحديد الانتدماج كما هو موصوف led بعد. يوضح الشكل ؟: تعدد (MOI) الاعتماد على 1771770 ذات خطوتين في خلايا cells BHK تعرض للمركب (2-ME) 2-mercaptoethanol . تم تعريض الخلايا الفيروسية لوسط إندماج منخفض الأس الهيدروجيني pH يحتوى على 0.٠65 نانومول من 2-ME (مربعات) أو مدون 2108 مثلثات لمدة © دقائق ؛ ثم بعد ذلك أعيد الأس الهيدروجيني PH إلى ٠ التعادل وتم تقسيم الاندماج كما هو موصوف Lad بعد. يوضح الشكل ©: التأثير المباشر لمركب DTMB على مستوى إصابة فيروس سندبيس Sindbis virus . ولقد تم تعريض الفيروس لكمية ١ مليمول من DTMB لعدة فترات من الوقت ولقد تم عمل معايرة للكمية المتبقية من الفيروس المعدي على خالايا cells BHK . يتم التعبير عن الفيروس المعدي لأنسجة مئوية مقارنة مع المقارن الغير معالج. yo يوضح الشكل ؛: التغيرات في الشكل الفراغي في الغلاف Bl أثتاء اختراق غشاء فيروس سندبيس Sindbis virus عند قيمة منخفضة للأس الهيدروجيني pH والتي تحدث اندماج الغشاء . يوضح الشكل 1¢ أن glycoprotein في الفيروس الناضسج يكون له جزء وظيفي وجزء تركيبي ويدخل كليهما في الاندماج Adal) وسلامة الغلاف ؛ على الترتيب . يوضح الشكل ؛ب التغيرات في الشكل الفراغي والتي تحدث ٠ بواسطة التفاعل بين المستقبل والفيروس أو بالتعرض لقيمة أس هيدروجيني pH منخفضة لإظهار قناطر ثاني كبريتيد معينة ؛ حيث يتم إعادة تنظيم قناطر ثاني كبريتيد. يوضح الشكل ؛ أن الانخفاض في عدد قناطر ثاني كبريتيد حتى عدد معين يكون مسئول عن الاحتفاظ بالارتباط بين البروتينات ويعمل على تدمير البلورة العشرانية الوجوه ؛ مما يسمح بالاندماج مع غشاء خلوي . توضح المربعات الداكنة Yo ارتباط 21-81 ؛ والمربعات الفاتحة توضح peptide الاندماج.
° يوضح الشكل © البروتين المطفر BE] mutated protein المحتوي على سرين Serine 8 الموقع ١١ لفيروس سندبيس Sindbis virus . ولقد تمت متابعة methionine/cysteine المحتوي على الكبريت المشع 5 35 ولقد تمت المدة بحد عند الدقيقة صفر (الصف )١ ء # (الصف ٠١ (VY (الصف ؟)ء Yo (الصف ؛) في وجود هه cycloheximide . ولقد تم ترسيب نواتج تحلل الخلايا بواسطة أجسام مضادة للمصسل منتجة ضد الفيروس المنقى . يتم تعقب البروتينات الفيروسية المحتوية على سرين Serine PE2 ١" ؛ E1 « 122و © و DE2 إلى E2 . ويوضح الميكروسكوب الالكتروني الفيروسات المركزة من أوساط الخلايا المصابة والمنقاة بواسطة الطور المركزي بالكثافة . يتم توضيح المحتوى البروتيني في الفيروس المطفر mutated virus المحتوي على المواد ٠ المشعة في الصف 0 يوضح الشكل :١ تأثير عامل إغلاق DTNB thiol إصابة الخلايا بواسطة نموذج فيروس كورونا Corona virus ؛ فيروس الالتهاب الفيروسي للفأر mouse hepatitis virus -(MHV) الوصف التفصيلي: \o في هذا الاختراع ؛ وباستخدام الفيروس المحتوي على الغشاء والمسمى Sindbis (النوع الابتدائي من الفيروسات ألفا (Alpha viruses « فانه يتضح أن لهذا الفيبروس ¢ كمكون لأحد الأغشية في glycoproteins ؛ شق بروتيني والذي في تركيبه ووظيفته ؛ يناظر بروتينات لها نشاط اختزال .thiol-reductase/protein disulfide isomerase ويوضح هذا الاختراع Lad « أن فيروس كورونا Corona virus النموذجي ٠ (فيروس الالتهاب الكبدي الفيروس للفأر (Mouse Hepatitis virus يكون له All إصسابة تمائل تلك الموصوفة في فيروس سندبيس Sindbis virus وعلى ذلك ؛ فان تلك الآلية تستخدم بواسطة فيروسات أخرى لإصابة الخلايا العائل. تحتوي بروتينات السطح العديد من الفيروسات الحيوانية قناطر ثاني كبريتيد معقدة والتي يمكن أن تثبت الجزئيات والتي يجب أن تتكسر وذلك لإتمام عملية الإصابة Yo وانطلاق جينوم الفيروس virus genome ويعمل هذا الاختراع على تحديد آلية والتي تفسر الطريقة التي تتم عند إصابة العوائل بواسطة تلك الفيروسات وهذا النشاط الفريد الا
ٍ والذي لم يسبق أن وصف يحدد إستراتيجية جديدة للتحكم في العدوى الفيروسية وإنتاج اللقاحات. يوضح هذا الاختراع أن الفيروس نفسه يكون له القدرة على تقليل عدد Dbl ثاني كبريتيد بعد الارتباط مع مستقبل خلية عائل JD . والتفاعل بين البروتين التركيبي 0 للفيروس والمستقبل الخاص بالعائل يعمل على تنشيط تغيرات فراغية في الفيروس بما يسمح بإتمام عملية الاختزال. يوضح هذا الاختراع أن التغير بين disulfide thiol يكون أساس في عدوى الخلايا بواسطة فيروسات الفا Alpha viruses وفيروسات كورونا .Corona viruses وفي حالة فيروسات Alpha viruses Wl » فان هذا الاختزال يحدث بواسطة نشساط اختزال thiol-reductase/disulfide isomerase ٠ الذي يقع في داخل الفيروس نفسه . ويكون للعديد من الفيروسات (والتي تتضمن فيروس فقد المناعة) قناطر ثاني كبريتيد والتي يتضح أنها أساسية في تركيب وتجميع الفيروس. والسلامة التركيبية للفهروس تعتمد على تلك القناطر ثاني كبريتيد والتي يجب أن تنكسر وذلك لإتمام عدوى العائل . والطفرة الخاصة بهذا الاختراع تمثل طريقة جديدة لإنتاج فيروس غير معدي للاستخدام كلقاح . ٠ والفيروسات المطفرة mutated viruses الخاصة بهذا الاختراع تكون أفضل من اللقاحات الأخرى في أنها ليس من المطلوب تثبيطها بواسطة معالجات كيميائية أو فيزيائية أخرى . وتلك الفيروسات تعطي الجهاز المناعي antigens أكثر تطابقاً مع تنك antigens الموجودة في تلك الفيروسات المعدية. يتم في هذا الاختراع أيضاً وصف طرق لتعريف العوامل الكيميائية التي يمكن أن تتداخل مع نشاط اختزال thiol-reductase والتي ٠٠ تعمل كأدوية لمنع انتشار العدوى الفيروسية. و thiol-reductase enzyme الخاص بالفيروس يكون مطابق للإنزيمات المعروفة . وعلى ذلك ؛ فان العوامل التي لها القدرة على إغلاق أحد تلك الأنشطة في فيروس يمكن أن تغلق التنشاط في الفيروسات الأخرى. يعمل هذا الاختراع على إعداد تركيب مادة تتضمن فيروس مطفر Yo عنصل mutated غير معدي والذي يكون Dla لتحضير لقاح . وعلى وجه 6ل
العموم ء فان الفيروس يكون مطفر باستبدال حمض أميني بالسيستاين cysteine والشخص ذو الخبرة العادية في هذا المجال يمكن أن يميز أن هناك عدد قليل من الأحماض الأمينية التي يمكن أن تستخدم بدلاً من cysteine في طرق و تركيبات هذا الاختراع . فمثلاً ؛ انه في طرق وتركيبات هذا الاختراع يتم يدل oo الحمض الأميني سيستاين cysteine بسرين Serine . ويفضل أن يتم إيدال الحمض الأميني للحصول على فيروس مطفر يخص هذا الاختراع ووحدات cysteine تلك تكون في جزء من البروتين الفيروسي مسئول عن شاط اختزال thiol- .reductase/protein disulfide isomerase من المعروف أن طرق هذا الاختراع والتركيبات التي تخص هذا الاختراع يمكن أن تستخدم مع أي فيروس معروف . ويفضل أن يكون الفيروس المطفر mutated virus عبارة عن فيروس مطفر virus 7001:18:60 يتم اختياره من المجموعة التي تتكون من فيروسات Alpha viruses Lill « وفيروسات كورونا Corona viruses . والمثال على فيروس ألفا Alpha virus هو فيروس سندبيس Sindbis virus والمثال على فيروس كورونا Corona virus هو فيروس الالتهاب الكبدي الفيروسي للفأر . والمثال على فيروس ١٠ سندبيس Sindbis virus المطفر هو الفيروس المطفر .E1-SER62 يعمل هذا الاختراع على إعداد بلازميدات plasmids جديدة مجهزة بحيث يتم إنتاجها في خلايا Cua تتضمن تلك البلازميدات DNA plasmids مدمج يفر لفيروس مطفر mutated virus غير معدي وعنصر تنظيمي ضروري للتعبير عن DNA المذكور في الخلية. وبلازميدات plasmids هذا الاختراع يمكن أن تجهز بحيث ٠ يتم التعبير عنها في خلايا بكتيرية ؛ خلايا حشرات أو خلايا ثديية . والأملة على خلايا الخميرة تتضمن Pichia and kluyveromyces « Saccaromyces . والأمثلة عن الخلايا البكتيرية تتضمن. Salmonella typhimurium » Bacillus subtilis » E. coli « ٠ Staphylococcus Streptomyces + Pseudomonas والأمثلة على الخاايا الشذييسة تتضمن Hela ¢ Vero « BHK-21 ؛ ومبيض الهامستر الصيني Chinese Hamster . ٠؟ (CHO) الا
A mutated هذا الاختراع على فيروس مطفر plasmids تحتوي بلازميدات
Alpha virus لهذا الاختراع . ويفضل أن يكون الفيروس عبارة عن ألفا فيروس virus والأمثلة على ألفا المطفر يتضمن فيروس سندبيس . Corona virus وفيروس كورونا المطفر هناك Sindbis virus المطفر . والمثال على فيروس سندبيس Sindbis virus .E1-SER62 الفيروس المطفر ٠ على AB, . مصابة جديدة DUA dae) يعمل هذا الاختراع أيضاً على aie المذكور في plasmid الخلايا المصابة تتضمن خلية مصابة تتضمن البلازميد
NE المذكور في عنصر الحماية plasmid وخلية مصابة تتضمن البلازميد ١ الحماية وبالإضافة إلى ذلك ؛ فان هذا الاختراع يعمل أيضاً على إعداد فيروسات غير معدية ومطفرة والتي يتم إنتاجها بواسطة الخلايا المصابة الخاصة بهذا الاختراع. ٠ طريقة لتثبيط انتشار عدوى الفيروس حيث Leaf يتضمن هذا الاختراع تتضمن تلك الطريقة تلامس الفيروس المذكور مع مركب يعمل على تثبيط
Lad في الفيروس المذكور . يتم thiol/protein disulfide isomerase اختزال lia إعداد عامل مضاد للفيروسات لتثبيط انتشار العدوى الفيروسية حيث أن العامل thiol/protein disulfide isomerase المضاد للفيروسات يعمل على تثبيط نشاط اخترزال \o في الفيروس المذكور . وبإتباع ما ذكر في هذا الاختراع ؛ فان الشخص ذو الخجبرة العادية في هذا المجال يمكن أن يبتكر مركبات إضافة والتي تثبط نشاط اختزال في الفيروس الذي يدور حوله الاهتمام. thiol/protein disulfide isomerase يتم إعطاء الأمثلة التالية بهدف توضيح العديد من تجسيمات هذا الاختراع وليس الهدف منها تحديد مجال هذا الاختراع بأي صورة من الصور. ٠ :١ مثال الخلايا ؛ الفيروسات والأوساط.
Jad عند درجة حرارة ١م في وسط BHK-21 cells تم زرع خلايا ْ من مصل بقري جنين 7٠١ مجهز بكمية (MEM) أقل وسط أساس 5 تم إمرار فيروس . 2 mM L- glutamine tryptose phosphate 28 « (GIBCO) Yo
AF:
q ؛ والذي تم إمداده بواسطة من (SVHR) المقاوم للحرارة Sindbis virus سندبيس بمعدلات ضعيفة وتمت (Darmouth Midical College) E.pfefferkorn شركة V4 المجلد Virol كما وصف في رينز وبرون ؛ 3111621 cells WA المعايرة على ١ فى YAY =VYVo الصفحات مثال ؟: °
Sindbis virus الوسيط في فيروس سندبيس FFEWO ٠٠٠١ Sindbis virus الوسيط في فيروس سندبيس FFWO لقد كانت الاختلافات في . دقيقة ٠١ عند ؛"م لمدة BHK cells وحدة تكوين نقرة من 597118 لكل خلية من خلايا بواسطة وسط اندماج عند درجة viral وبعد ذلك تم استبدال المزرعة الفيروسية
MES مليمول ٠١ « bicarbonate يتكون من وسط إيجل 1881658 بدون "FV حرارة ٠
HEPES مليسول مسن ٠١ g[ethanesulfonic acid (morpholino -N) Y] ولقد تم عمل تحليسل . (2-ME) 2-mercaptoethanol —N'- hydroxyethylpiperazine) للاندماج باستخدام الميكروسكوب العاكس للطور بعد © ساعات من التحضين عند من 77٠9 ولقد تم القياس كما يلي:- لا يوجد اندماج » + أقل من . FY درجة حرارة . الخلايا قد تم اندماجها ؛ ++ 775 من الخلايا ٠ منخفضة pH عند قيمة أس هيدروجيني 1771770 by as باختصار ؛ فقد تم من الخلايا المندمجة ؛ +++ .0- 90 من الخلايا قد تم اندماجها 75٠ بالامتصاص إلى (عدد الخلايا/ عدد -١ ولقد تم حساب مستوى الاندماج كما يلي: . كما سبق أن ذكر فيما pH تم إدخال 271770 عند قيمتي أس هيدروجيني ail . الأنوية) ؛ وبعد ذلك أعيد وسط الاندماج SVHR عدا أنه تم استخدام العديد من متكررات vy, المحتوي على 70.05 نانومول من 2-205 وأعيدت المركبات المعقدة المكونة من الفيروس الخلية إلى وسط النمو بعد © دقائق من التحضين في وسط الاندماج عند قيمة أس - virus منخفضة . ولقد تم أخذ صور للطبقات تحت إضاءة بانعكاس الطور بعد pH هيدروجيني ساعة من التحضين عند درجة حرارة ”م وتم التقييم كما سبق أن ذكر.
Yo إلا
Yo ia الأدوية لا يحتوي على مصل . ولقد وجد أن تركيزات MEM أذيب 01713 في التي تصل إلى * مليمول لم تؤثر على حيوية الخلايا ؛ وذلك كما قيس باستخدام 8 الخلوية التي تم ترسيبها بواسطة RNA في aiid) يحتوي على الهيدروجين [PHuridine © أو أخذ أحمر » trypan blue باستثناء أزرق تريبان (TCA) trichloroacetic acid على الإصابة بفيروس سندبيس DTNB متعادل . ولقد تم تحديد التأثير المباشر ل بتحضين المركب مع الفهروس لفترات مختلفة من الوقت ؛ ثم إضمار Sindbis virus التحضين بواسطة تخفيفات متتالية في محلول ملح منظم بالفوسفات يحتوي على في تجربة بقع (إبلاك) 3111 cells مصل بقري جنين وتمت المعايرة على خلايا ZF ٠
YAY =VVYo الصفحات :١9 المجنلد J.Virol Renz and Brown قياسية كما وصف في .)١77( مثال ؛: تجارب الاختراق تم عمل تحليل لمستوى تخليق 8248 الفيروس بتحديد مستوى اندماج المحتوي على الهيدروجين المشضع في المادة القابلة للترسيب [PH]uridine يوريدين معالجة بواسطة ؛ ميكرو وحدة . جرام من BHK cells في خلايا TCA بواسطة dactinomycin لكل مل لمدة 90 دقيقة قبل الإصابة وتم الاحتفاظ بها في dactinomycin ١ بواسطة 31116 cells تمت معالجة الطبقات التي تحتوي على أعداد متساوية من خلايا دقيقة عند درجة حرارة ”ثم عند ثلاث أوقات مختلفة "٠ مليمول من 01718 لمدة 7٠ من 57118 لكل (Bh) بالنسبة للامتزاز خلال فترة ساعة لعدد © وحدات تكوين بقع
MEM عند "م . وبعد الامتزاز ؛ فقد تم غسل كل الطبقات الأحادية بواسطة cell خلية للسماح باختراق الفيروس الذي تم امتزازه. FY لا يحتوي على مصل وتم التحضين عند إما في DTNB دقيقة بواسطة Vo ولقد تم تتفيذ عملية المعالجة التي استمرت . بعد فترة الاختراق تلك FY الحال قبل الامتزاز ؛ أثناء فترة الاختراق عند Yo [Hluridine ؛ فقد تم غسل الطبقات الأحادية . بعد ذلك أضيف DTNB والمعالجة بواسطة ل
١١ ميكروسيمنز/مل) من 90 دقيقة من الاختراق ؛ ٠١( المحتوي على الهيدروجين المشع sodium dodecyl sulfate وبعد © ساعات ؛ فقد تم عمل تحلل للطبقات الأحادية برواسمطة خليط بارد متلج وتم chloro acid من ثالث كلورو حمض 7٠١ وتم الترسيب بواسطة بطريقة تكوين البلاك Lind ولقد تم عمل تحليل للاختراق ele ay) عد النشاط دقيقة تحت ٠١ لمدة DTNB مليمول من ١ على طبقات ج811 والتي تعرضت لكمية © كما (DL) ظروف المعالجة السابقة الذكر . ولقد تم تحديد مستويات تكون البقع
VAY =VVe المجلد 114 الصفحات J.Virol Renz and Brown وصف في رينز وبراون (Yavy) منخفضة pH عند قيمة أس هيدروجيني FFWO | ٠ على قيمة الأس الهيدروجيني Sindbis virus يعتمد معدل 171770 لفيروس سندبيس دورادس ١ PH بعد التعرض لقيمة منخفضة للأس الهيدروجيني cells التي عليها الخلايا pH . )١5( 8-279 الصفحات :١7 المجلد 1.00 Virol Edwards and Brown وبرون أعلى ولا يحدث عند قيسم أس pH يحدث الاندماج أسرع عند قيم أس هيدروجيني من “,5 وهي المطلوبة للحصول على ظروف الاندماج عند العودة Ji pH هيدروجيني ٠ في أن pH على الأس الهيدروجيني thiol-disulfide للتعادل . تعتمد تفاعلات التبادل بين يحدث التفاعل في Cua ؛ pH معدلات التفاعل تتأثر بصورة مباشرة بالأس الهيدروجيني
J Biol.Chem. الأوساط المتعادلة إلى القلوية كما هو موضح في ينز وزملاؤه في وإذا كان الاتخفاض في عدد قناطر . (1290) YAYAS 1789850 المجلد 7765 : الصفحات
GL ضروري لتدمير الغلاف الصلب قبل الاندماج مع الغشاء ؛ فان disulfide ٠
PH يمكن أن يحدث عند قيمة منخفضة للأس الهيدروجيني ولكي يتم توضيح دور هذا الحدث الاختزالي في 171770 الذي يحدث بواسطة فقد حدث الاندماج عند قيمة منخفضة للأس BHK cells لخلايا Sindbis سندبيس « cysteine وعلى عكس 011و . 2-ME في وجود عامل الاختزال pH الهيدروجيني وفاعلي © pH يعتبر عامل اختزال مؤثر عند قيمة أس هيدروجيني 2208 (6 Yo إلا ¢
VY
(Torchinskii, Sulfhydryl and Disulfide Groups of Proteins, Plenum Publishing, يعمل على 2-ME ولقد وجد أن المعالجة بواسطة تركيزات مختلفة من . NLY.1974) على الرغم من أن حدود 5,7 pH عند قيمة أس هيدروجيني FFWO تنشيط od الذي ينشط الاندماج عند قيمة 2-ME التركيزات تلك تختلف . ولقد وجد أن منخفضة يكون حساس جداً لعدد من العوامل ؛ تلك العوامل تتضمن pH هيدروجيني © عدد إمرارات الخلايا ومستوى ازدحام الطبقات الخلوية + وذلك ليس أساس عند المتعادلة . ومعالجة الطبقات الأحادية بواسطة pH العودة لقيمة الأس الهيدروجيني هيدروجيني of Aad في غياب الفهيروس وتحضين الخلايا الفيروسية عند 8 في غياب 2248 لا يحدث الاندماج . والتركيزات المنخفضة جدا من عامل 5,7 pH التي يتم disulfide الاختزال الضروري لإحداث 7711770 يفتقرض أن قناطر ٠ لا تحدث الإندماج ؛ ومن 2-ME اختزالها تكون مشدودة جداً . والتركيزات العالية من
FFWOs . الممكن أن يكون ذلك بسبب أن الغلاف الفيروسي يدمر قبل حدوث الاندماج منخفضة pH عند قيمة أس هيدروجيني Sindbis virus الذي يتم بواسطة فيروس سندبيس يكون متناغم مع الاختزال في عدد قناطر 2-ME في وجود تركيزات منخفضة من الهامة للاندماج بين الفيروس والخلايا. وبالإضافة إلى ذلك ؛ فقد تفسر disulfide ١ المتعادل. pH للعودة لوسط الأس الهيدروجيني FFWO متطلبات :١ مثال FFWO على مطلب تعدد 2-ME تأثير أن PH تنشيط 2-108 للاندماج عن قيمة منخفضة للأس الهيدروجيني a Ss تعتمد على FFWO الذي يحدث بواسطة Sindbis virus سندبيس ug yb فاعلية ٠
FFWO على متطلبات التعدد ل 2-ME عملية الاختزال . يوضح الشكل ؟ تأثير المثالي . وعامل الاختزال المذكور ؛ Sindbis virus التي تحدث بواسطة فيروس سندبيس - عندما يكون موجود أثناء التعرض الخفيف للمركبات المعقدة المكونة من فيروس إشاء 171770 ؛ فان ذلك يزيد من pH خلية عند قيم مختلفة للأس الهيدروجيني كفاءة الاندماج بعد العودة للتعادل . ويتم الاندماج الأمثل في الطبقات المعالجة Yo وحدة تكوين بلاك (بقعة)/خلية ؛ بحيث أن ٠٠١ وعند تكرار يصل إلى 2-ME بواسطة
YY
وحدة تكوين بقعة يكون مطلوب في ٠٠٠١ إلى 9٠٠0 التعدد الذي يصل إلى
FFWO يجب أن تعكس متطلبات التعدد المرتفعة ل . 2-ME غياب المعالجة بواسطة وهو مطلب هام (LDU al جزئياً عدد مرات تلامس الفيروسات من التلامس المتعدد للاندماج بين الخلايا والفيروسات. وإذا كانت ظاهرة الاندماج تلك تعتمصد على أن تعكس عدد Lad ؛ فان متطلبات التعدد يمكن thiol-disulfide تفاعل التبادل بين o thiol donors التي تخص الفيروس مع مانع disulfide المرات التي ترتبط بها قناطر بسبب عامل الاختزال thiols الملاثم . والزيادة في إتاحة كمية الفيولات يمكن أن يقلل من عدد الفيروسات المطلوب لإنتاج أقصى اندماج 2-ME الخارجي بين كل خلية والأخرى . ويدعم ذلك بالانخفاض في عدد المرات المطلوب 2-ME للحصول على أقصى اندماج بعد التعرض الخفيف للمركب ٠
Sindbis virus في اختراق فيروس سندبيس thiol-disulfide تفاعلات التبادل بين .BHK cells Lal في الغلاف disulfide يوضح هذا الاختراع الانخفاض في عدد قناطر ll والذي يكون مطلوب للاندماج الغشائي Sindbis virus الصلب لفيروس السندبيس yo لاا يسمح sulfhydryl الدخول . ومركب 171118 يكون عبارة عن عامل إغالااق thiol- عن طريق تفاعل التبادل بين sulfhydryl بالمرور الغشضائي وهو يعدل من وحيث أن هذا المركب لا يؤثر بصورة مباشرة على عدوى فيروس سندبيس disulfide يعتبر مركب ممتاز DTNB ؛ فان BHK cells Wa (الشكل “) أو حيوية Sindbis virus plasma التي تحدث عند غشاء البلازما thiol-disulfide التوضيح تفاعلات تبادل ٠ .Sindbis virus أثتاء اختراق فيروس سندبيس :+ مثال viral على اختراق الفيروسات 8 ils عند معدلات منخفضة للإصابة LAN على اختراق الفيروسات DTNB تأثير RNA المحتوي على الهيدروجين المشضع في PHJuridine بواسطة مستوى دخول Yo إل
Y¢
الفيروس تحت ثلاث ظروف معالجة كما وصف في مثال ؛ وجدول ١.في وجود dactinomyein ؛ فقد تمت معالجة BHK cells LOLA لمدة ٠١ دقيقة بواسطة ١ مليمول من Ld DTNB قبل إمتزاز الفيروس عند ثم ؛ أثناء اختراق الفيروس عند "م أو بعد فقرة الاختراق . وفي كل Alla ؛ فقد تم عمل تحاليل (RNA) الفيروس © بعد 0 ساعات من فترة الاختراق بقياس مستوى دخول PHuridine المحتوى على الهيدروجين المشع إلى المادة القابلة للترسيب بواسطة TCA . ولقد كان للمعالجة بواسطة DTNB قبل الإصابة تأثير مثبط خفيف على تخليق RNA الفبروس؛ بينما أدت المعالجة أثناء اختراق الفيروسات إلى تثبيط إنتاج 848 إلى حوالي 74٠0 من مستوى المقارن . والانخفاض في معدلات تخليق RNA الملحوظ عند معالجة الخلايا ٠ قبل الإصابة ينتج من القصور في إزالة كل كمية الدواء قبل الإصابة . ولق د وجد أن المعالجة بواسطة DTNB بعد فترة ابتدائية من الاختراق يكون له تأثير مثبط محدود . وعلى أي حال ؛ فان انخفاض معدلات تخليق RNA بعد تلك المعالجة يمكن أن يكون بسبب حقيقة أن العدوى بفيروس سندبيس Sindbis virus يزيد من سماحية الخلايا ؛ Loy يسمح لبعض المركبات التي لا يسمح بمرورها sll من
Vo الوصول المباشر إلى السيتوبلازم cytoplasm ؛ حيث يمكن أن يكون لها تأثير ثانوي. لقد تم تحديد تأثير DTNB على اختراق فيروس سندبيس Sindbis virus بعمل تحليل لمستويات تكوين البلاك كما هو موضح في جدول 1 . وفي الدراسات daa sal في الجدول 1 ؛ فقد تم إمتزاز الفيروس على أعداد متساوية من خلايا 3116 لمدة ساعة عند درجة حرارة 0 ثم يتم استبدال الوسط بوسط 10524 دافئ ويتم ٠ التحضين عند درجة حرارة "م للسماح بالاختراق . ولقد تمت معالجة الخلايا مدة Ye دقيقة 0( أو ٠ دقيقة (ب) بواسطة ١ ملي مول من DTNB عند الفترات الموضحة . وبعد ذلك تم غسل الطبقات لإزالة الدواء قبل التحضين عند YY في وسط لا يحتوي على DTNB ولقد كانت النتائج عبارة عن متوسطات #٠ تجارب مستقلة + الانحراف المعياري . ولقد تم تحديد كمية RNA الفهيروسية الكلية بعد © Yo ساعات من تدفئة cells WAY عند FY لبدء الاختراق . ولقد وضع على الطبقات
الأحادية agarose وتم مباغتها بواسطة أحمر متعادل بعد A ساعة من الإصابة. ل
ولقد نتج عن المعالجة المسبقة للخلايا بواسطة DTNP حدوث تثبيط خفيف لمعدلات تكوين البلاك (البقع) بينما المعالجة Lt فترة العدوى تثبيط معدلات تكوين البلاك إلى حوالي 7؛7 من مستيات المقارنة الغير معالجة . ومرة أخرى ؛ فان الانخفاض في تكوين البلاك والمشاهد عندما تمت معالجة الطبقات الأحادية © بواسطة JADTNB العدوى يمكن أن ينتج من عدم القدرة على إزالة كل من كمية المركب قبل العدوى . ولقد وجد أن المعالجة بواسطة 01113 بعد العدوى لا يكون له تأثير متبط على تكوين البلاك ؛ والذي يكون متوافق مع الانخفاض في مستويات RNA عند المعالجة بواسطة DTNB بعد كون العدوى ليست بسبب التأثير المباشر على اختراق الفيروس virus . وعلى الرغم من التعارض ؛ فقد ٠ وجد أن أعداد البلاك الموجود في مزارع الخلايا cells المعالجة بعد العدوى أعلى Sk بعد العدوى. جدول :١ تأثير DTNB على اختراق الخلايا cells بواسطة فيروس سندبيس Sindbis Virus فترة المعالجة كنسبة مئوية للمقارن. طق م فون سس TTT إل
أن الملحوظ الشيقة على أن اختراق فيروس سندبيس Sindbis virus يبط بواسطة DTNB عندما يكون المركب موجود أثناء فقرة العدوى يفترض أن مجموعات ثيول المستهدفة يتم إظهارها أثتاء الدخول إلى عملية تفاعل تعاون بين الفيروس virus والمستقبل . وهذا التفاعل والطبيعة السريعة لهذا التفاعل يمكن © أن يخلق ظروف لا يمكن Led تنافس DTNB مع قنطرة disulfide الخاصة بالفيروس والتي Jax في تفاعل تبادل بين thiol-disulfide . وتلك التفاعلات تكون ذات معدلات عالية حيث تكون حوالي al * ٠١ عند قيمة أس هيدروجيني ApH وعدم كفاءة في alkylating thiols الأساسية يمكن أن يؤدي إلى عدم القدرة على منع
اختراق فيروس سندبيس .Sindbis virus
٠١ يوضح الشكل ؛ التغير في الشكل الفراغي في 51 أثتاء اختراق فيروس سندبيس Sindbis virus للغشاء والاندماج الغشنائي عند قيمة أس هيدروجيني PH منخفضة . يوضح الشكل ؛اً أن الجليكوبرتين glycoprotein في الفيروس الناضج يكون له شق وظيفي وآخر تركيبي Jang كليهما في عملية الاندماج Fal وسلامة الغشضاء ؛ على الترتيب . يوضح الشكل 4ب التغير في الشكل
ye الفراغي الذي يحدث بواسطة التفاعل بين المستقبل والفهيروس أو بالتعرض لقيمة منخفضة (SU الهيدروجيني pH لإخفاء قناطر disulfide ؛ مما يؤدي إلى تفضيل إعادة ترتيب قناطر disulfide . يوضح الشكل af أن الانخفاض في عدد قناطر 90106 الأساسية والذي يكون مسئول عن الاحتفاظ بين باتحاد البروتيسن- البروتين يدمر الشكل البلوري الغشائي الأوجه للبروتين؛ مما يسمح بالاندماج مع
2٠ الغشاء الخلوي . وتوضح المربعات ASI اتحادات 21-81 بينما المربعات الفاتحة توضح ببتيدة peptide الاندماج.
أن اندماج فيروسات الغشاء بواسطة الأغشية الخلوية أثتاء الاختراق يكون
بروتين وتكون إحداث اندماج داخل الخلية وبين الخلايا. وتعرض جزء الاندماج في بروتين الغلاف 51 يدخل في اندماج فيروسات «Alpha viruses Lill الأغشضية إل
VY disulfide الخلوية . وبالإضافة إلى ذلك ؛ فان هذا الاختراع يوضح أن قنطرة التي تثبت بواسطة 31-81 للغلاف يجب أن تدمر لحدوث الاندماج الغشائي . والآلية في تفاعل بين بروتين Sindbis virus الأكثر أحمالاً لتفكك غلاف فيروس سندبيس تلك عن طريق تفاعلات disulfide وبروتين أثشاء التحضير هو الانخفاض في قناطر .thiol-disulfide هه تبادل عن طريق التفاعل المنجذب للنسخة thiol-disulfide تحدث تفاعل التبادل بين ويعتمد ذلك كثيرا على قيمة الأس disulfide على قنطرة thiol ل dua sal ؛ والشكل الفراغي . يتطلب تفاعل thiol ل PKa dad للوسط ؛ pH الهيدروجيني : من متعادلة إلى قلوية pH قيمة أس هيدروجيني thiol-disulfide بين سيستاين و Jalal من فيروس سندبيس HR الذي يحدث بواسطة السلالة FFWO ويتطلب «alkaline ٠ مع العودة إلى قيم أس هيدروجيني 5,7 pH التعرض لأس هيدروجيني Sindbis virus لإحداث الاندماج . ويزيد معدل الاندماج مع زيادة قيمة الأس ١ أعلى من pH لعودة الفيروس - الخلايا ولا يحدث الاندماج عند مستويات الأس pH الهيدروجيني المنخفضة المطلوبة للاندماج . وبالمثل ؛ فان التفكك السريع للغلاف pH الهيدروجيني 5,7 pH يتطلب التعريض الخفيف إلى قيمة أس هيدروجيني DTT الفيروسي بواسطة Vo المتعادلة . وتلك الملاحظات pH مع إتباع ذلك بالعودة إلى قيمة الأس الهيدروجيني في تفاعل التبادل بين pH توضح دور محدد للوسط المتعادل للأس الهيدروجيني توضح تعليمات هذا الاختراع انه بالنسبة للاندماج بين الفهيروس . thiol-disulfide تكون thiol-disulfide ؛ فان تفاعلات بين ثيول- ثاني كبريتيد cells والخلايا virus أساسية في عملية الاندماج. ٠ عن PH تختلف طريقة 77170 التي تحدث بواسطة انخفاض الأس الهيدروجيني طريقة العدوى في أنها تتطلب عدد كبير من الفيروسات ولا تعتمد على مستقبل البروتين. وعلى أي حال ؛ فان كل من الآليتين يجب أن تعطي آلية لتتمير بروتين الغشاء قبل الاندماج . يوضح هذا الاختراع أن كل من الحدثين يعمد على أن من عامل الاختزال lan وإضافة تركيزات منخفضة . thiol-disulfide تفاعل تبادل Yo ؛ يقلل الكفاءة biological thiols والثيولات البيولوجية DTT (والذي ؛ على عكس 2-ME إل
YA
¢ ينشط الاندماج الخلوي في الوسط الحامضي (0,1 pH عند قيمة أس هيدروجيني يمكن أن يحدث الاندماج في disulfide مما يفترض أن الاختزال الكيميائي لقناطر 2-ME وسط اختزال غير مفضل . يكون هناك حاجة لتركيز منخفض جداً من التي تختزل تكون disulfide لتتشيط عملية الاندماج تلك ويؤكد ذلك على أن تناظر المنخفض يحدث تغير في pH والأس الهيدروجيني las في تركيب فراغي مشدود 0 عن Jie الغشضاء ويمكن أن يكون ذلك proteins الشكل الفراغي في بروتينات المشدودة ويمكن أن يفسر الطبيعة السريعة جداً لتفكك disulfide تعريض مناظر
PH الهيدروجيني (ol) بعد التعرض لقيمة منخفضة DTT الفيروس في المعمل بواسطة لخلية العازل على Sindbis virus تعتمد طريقة اختراق فيروس سندبيس المستقبل ولقد تم تعريض تعريف العديد من أنواع المستقبلات . وتفاعل الفيروس مع ٠ المتعادلة يحدث تغير فراغي pH مستقبل سطح الخلية عند قيمة الأس الهيدروجيني والذي يتم عملية الاختراق . يوضح virus glycoprotein (ws dll في جليكوبروتين هذا الاختراع أن هذا التفاعل بين المستقبل والفيروس يؤدي لإحداث تغيرات فراغية في داخل بروتينات الغشاء بواسطة تفاعلات disulfide ويسمح ذلك باختزال قناطر والتحرك من المستقبل يحدث تغيرات فراغية في توزيع . thiol-disulfide تغير ٠ شبكة بروتين الغشاء يمكن أن يحدث بسرعة جداً . وحقيقة أن تثبيت بروتين قناطر بينما DTNB و 511 Jw لا يتم الوصول بها إلى جزيئات thiols والثيولاث disulfide في الحالة العادية ؛ يتحد بمعدل سريع جداً وعند ذلك يحدث الاختزال بعد أن يسبب المستقبل تغيرات في الشكل الفراغي يمكن أن يفسر عدم كفاءة 01108 في إغلاق التي تتم عمليات الاختزال تلك يمكن أن تقع إما في thiols تك العملية . والثيولات ٠ بروتين المستقبل أو في داخل الفيروس نفسه . وفي الحالة الأخيرة ؛ فإن إعادة ترتيب بعد الارتباط يمكن أن يؤدي إلى التدمير المطلوب لبروتين disulfide قناطر الغشاء في الشبكة . وفي هذا النموذج ؛ فإن تفاعل الفيروس مع المستقبل الملاثم يغير disulfide من الشكل الفراغي الذي يخشص 1 ؛ وبذلك يفضل إعادة ترتيب قناطر الترتيب لقناطر sale) وعملية . thiol-disulfide عن طريق تفاعلات التبادل بين Yo ل
disulfide يؤدي إلى تدمير الارتباط الصلب بين البروتينات في الغلاف مما يسمح باندماج الغلاف الفيروسي مع غشاء البلازما. مثال A إنتاج B1-SER® المطفرة:-
° تم الحصول على تركيب البروتينات التي يكون لها نشاط اختزال ثيول / بروتين ثاني كبريتيد أيزوميراز thiol/protein disulfide isomerase من antigens . وعلى الرغم من أنه ليس هناك أحماض أمينية amino acid محفوظة بالكامل في الأجزاء الوظيفية من تلك البروتينات ؛ فقد كان السيستاين الماح "donor" cysteine يقع في شق بروتيني يحتوي على أحماض أمينية قاعدية موجبة الشحنة . وفي الواقع ؛ فإن نشاط
٠ اختزال ثيول thiol-reductase في تلك البروتينات يمكن أن يزيد بزيادة الشحنة الموجبة الكلية في هذا الشق . ولقد تم اختبار تتابعات الأحماض الأمينية في جليكوبروتينات glycoproteins 21 لكل أنواع فيروسات Alpha viruses Lull المعروفة ولقد أظهر البحث وحدتي سيستاين TY) cysteines و (VA وكلتاهما ثابتتين وتقعان في أجزاء Jia الشقات موجبة الشحنة لوحدات اختزال ثيول thiol-reductase المعروفة . وعلى ذلك
٠ ء فإن الطفرة التي تزيل واحدة من هاتين الوحدتين يجعل الفيروس غير معدني بإزالة نشاط اختزال المرتبط بهذا الشق.
ولقد تم إنتاج طفرة السيستاين cysteine إلى سرين Serine عند الموقع 17 في تتابع جليكوبروتين E1 glycoprotein لفيروس سندبيس Sindbis virus بالبادئ الكبير لما وصف بواسطة Cell Biol.
Liu and Brown .1 المجلد ١٠١ : الصفحات
-4760 ولقد تم تصميم بادئين ؛ وهما يمثلان التتابعات . (V44Y) 8م SAVY,
8 (البادئ أ) والنيوكليوتيدات ٠١40 nucleotides حتى ٠١77 (البادئ ب) في التتابع النيوكليوتيدي لسندبيس توتو ١١١١ nucleotide sindbis Toto في صورة بادثات طرفية. البادئ أ؛ -CGATGATGATTGGCGTAACT-3" 5 ٠؟ البادئ ب: 5-GGAAAAATCAAATCCTGCGGCTCC-3" إلا
Ye والبادئ المطفر والذي يتم فيه تغيير القاعدة من 6 إلى © يتكون من النيوكليوتيد .٠١١١؟ 94 حتى ٠١١١١ nucleotide 5-CCAAAAATCAAATCCTGC-3"
G (النوع العادي) ° ولقد تم توليد البادئ الكبير بإضافة بادئ مطفر والبادئ ب إلى القالب توتو Toto الذي ينتج المنتج الأول: النيوكليوتيد ٠١777 nucleotide حتى ٠٠١448 بطفرة وموقع انقسام 8811 عند 81 Ve لقد تمت استطالة البادئ الكبير لإدخال موقع إنزيم enzyme تحديد ثاني باتحاد البادئ أ مع منتج تفاعل PCR الأول . ولقد كان القالب عبارة عن قطعة منقاة من توتو ١٠١١ Toto)» المحتوي على النيوكليوتيد ٠١81 = 851/1 nucleotide المنتج بالتعميم بواسطة إنزيمات enzymes التحديد SPLISTUT . ولقد كان المنتج الثاني عبارة عن النيوكليوتيد nucleotide 9977658 حتى £60 -٠١ بالطفرة المطلوبة ومواقع الانقسام (NT 9804) BSIW enzymes و -(NT 10301) SPLI لقد تم استخدام الانزيمين BSIW enzymes و 5011 لقطع قطعة تتراوح من ١ 5804 حتى VFA من توتو ١١ Toto ومنتج 208 ثاني . ولقد تم ربط منتج الطفرة السابق الذكر في توتو ١١١١ Toto بدلاً من التتابع الطبيعي وينتج عن ذلك بلازميد plasmid يحتوي على تتابع فيروس سندبيس Sindbis virus مع استدال السرين Serine بالسيستاين cysteine عند الموقع TY . ولقد تم تضخيم هذا الأنزيم enzyme في أ. كولاي coli ولقد تم استخدام RNA المنتج من البلازميد plasmids ٠ بالنسخ في المعمل لإصابة خلايا BHK-21 cells (الثديية) لإنتاج الفيروس الموضح في الشكل Lo في تلك النسيلة الخاصة بهذا الاختراع يتم استخدام منشط SP6 لإنتاج RNA ناقل من نسيلة تطابق RNA للفيروس virus السليم عند استخدام النسيلة لبرمجة deli نسخ في المعمل . وعندما يتم إدخال منتج RNA لهذا التفاعل في خلايا cells ثديية Yo مزروعة ؛ فإنه ينتج عن ذلك إصابة والتي تستمر بأسلوب يطابق هذا الذي يتم إلا
د الحصول عليه بواسطة الفيروس السليم (أنظر الشكل 0( ولقد تم إنتاج فيروسات viruses ناضجة والتي لا يمكن تمييزها تركيباً وكيميائياً (فيما عدا الاستبدال بالسرين (Serine عن الفيروس الطبيعي . ولقد وجد أن تلك الجبزيئات الفيبروسية virus particles غير معدية وذلك كما قيس بالتجارب القياسية.
glycoproteins يوضح هذا الاختراع أن التغير الفراغي في جليكوبروتينات o الغشاء يحدث عندما يتفاعل الفيروس مع مستقبل سطح الخلية. وهذا التغير في الشكل الفراغي يكون مطلوب لاختراق الغشاء . يعمل هذا التغير الفراغي على مع عامسل biochemically والتي يمكن أن تتفاعل thiol تعريض مجموعة ثيول وتفاعل هذا العامل مع هذا الثهيول . dithionitrobenzene وهو thiol لإغلاق ثيول
thiol ٠ يغلق عملية الاختراق الفيروسي . يكون الثيول thiol الهدف إما في بروتين المستقبل على سطح الخلية أو في جليكوبروتين glycoprotein الغشاء الخلوي.
يعطي هذا الاختراع دليل جيني genetic مباشر أن ماح القيول thiol وثاني كبريتيد thiol and disulfide الهدف يقعان على الجليكوبروتين الفيروسسسسي various glycoprotein وأن شق البروتين protein الذي يحيط ويتضمن السيستاين
/ اختزال ثيول enzyme إنزيم Silay في التتابع 1 يكون له نشاط TY cysteine ٠ المعروف. thiol/protein isomerase بروتين أيزوميراز
| Ae J —:Corona virus فيروس كورونا على عدوى الخلايا DTNB thiol يتم توضيح تأثير عامل إغلاق الثيول
٠٠ ولك بواسطة فيروس كورونا Corona virus » فيروس الالتهاب الكبدي Mouse Hepatitis virus الفيروس للفئران في الشكل ١ . ولقد تمت WL ald alles المزروعة بواسطة 01708 قبل ؛ أثناء أو بعد الإصابة بالفيروس كما هو موضح . لقد تم استخلاص RNA الفيروسي وتم فصل RNA الفيروسي من عدد مساوي من
الخلايا بالاسياب الكهربي على الجل . ولقد أوضح التسجيل بمقياس الكثافة أن
Yo كمية ١ أنواع من RNA الفيروس قد انخفضت بنسبة 7560 عندما كان DTNB موجود بينما تحدث العدوى ثم يغير 77718 كثيراً من كمية RNA المنتجة في تجارب
إل
YY
DTNB 4— المعالجة المسبقة والمعالجة التالية مقارنة بالمقارن والذي لم يضف (السطر الخارجي الأيمن) . وعلى ذلك فإن الخطوط المتوازية لفيروس الالتهاب توضح أن Sindbis virus الكبدي الفيروسي للفئران والتي وجدت مع فيروس سندبيس يكون أساس لعدوى الخلايا بواسطة فيروسات كورونا thiol- disulfide تفاعل تبادل الموجودة في الأغشية. Corona virus ه٠ تكون كل البراءات والنشرات الموضحة في هذا الطلب موضحة ؛ على حسب مستويات الأشخاص ذوي الخبرة في هذا المجال . وكل البراءات والنشرات المذكورة هنا على سبيل المرجع تكون بنفس المستوى وكان كل نشرة قد تم إدخالها على حدة هنا على سبيل المرجع. سوف يدرك الشخص ذو الخبرة في هذا المجال أن هذا الاخخراع مجهز ٠١ لتنفيذ الأهداف والحصول على المميزات المذكورة ؛ بالإضافة إلى ما هو مذكور هنا والأمثلة المذكورة هنا مع الطرق ؛ المعالجات ؛ الجزيئات والمركبات المعينة . المفضلة وليس الهدف منها embodiments للتجسيمات Alias المنكورة هنا تكون تحديد مجال هذا الاختراع . والتغييرات المذكورة هنا والاستخدامات الأخرى سوف خبرة ذوي الخبرة في هذا المجال وسوف تدخل في مجال هذا Jae تتم في داخل ٠ الاختراع وذلك كما هو معرف في مجال عناصر الحماية. ل yy قائمة التتابعات معلومات عامة: )١( التتابعات : ؟ sae (V) ١ : معلومات تخص تعريف التتابع رقم )7( خصائص التتابع: )١( ٠١ (أ) الطول: > (ب) النوع: حمض نووي (ج) نوع الخليط: مزدوج (د) وصف الخليط: خطي نوع الجزيئي: (Y) الوصف: حمض نووي آخر ()) ٠١ النظري: لا يوجد )( (؟) الخليط المقابل: لا يوجد المصدر الرئيسي: )7( (ب) الشد (ج) الفصل الخاص: \o مرحلة التطوير: (3) (و) نوع النسيج (ز) نوع الخلية: (ح) الخط الخلوي: :١ وصف التتابع: تعريف التتابع رقم: (9) Y.
CGATGATGATTGGCGTAACT20 إلا
(7) معلومات تخص تعريف التتابع رقم : ؟:
)١( خصائص التتابع: (أ) الطول: Ye (ب) النوع: حمض نووي
° (ج) نوع الخليط: مزدوج (د) وصف الخليط: خطي )7( نوع الجزيئي: (أ) الوصف: حمض نووي Al (Y) النظري: لا يوجد
٠١ (؛) الخليط المقابل: لا يوجد )1( المصدر الرئيسي: (ب) الشد (ج) الفصل الخاص: (د) مرحلة التطوير:
Ve (و) نوع النسيج (ز) نوع الخلية: (ح) الخط الخلوي: (9) وصف التتابع: تعريف التتابع رقم: ؟: CGAAAAATCAAATCCTGCGGCTCC24
الا
Yo :3 : معلومات تخص تعريف التتابع رقم )7(
)١( خصائص التتابع:
(أ) الطول: VA
(ب) النوع: حمض نووي ° (ج) نوع الخليط: مزدوج
(د) وصف الخليط: خطي
(Y) نوع الجزيئي:
(أ) الوصف: حمض نووي آخر
(7) النظري: لا يوجد Vo (©) الخليط المقابل: لا يوجد
)1( المصدر الرئيسي:
(ب) الشد
(ج) الفصل الخاص:
(د) مرحلة التطوير: vo (و) نوع النسيج
(ز) نوع الخلية:
(ح) الخط الخلوي:
)3( الخاصية:
(VY) وصف التتابع: تعريف التتابع رقم: ؟: CCAAAAATCAAATCCTGCI8 ٠
الا
Claims (1)
- عناصر الحماية -١ ١ فيروس ألفا مطفر mutated alphavirus غير معدي ملائم للاستخدام في تحضير لقاح ؛ حيث يتم تطفير هذا الفيروس باستبدال الحمض الأميني سيستاين cysteine ¥ المحفوظ بحمض أميني مختلف في البروتين 121 وحيث أن السيستاين cysteine ؛ المذكور يكون في شق من البروتين الفيروسي يكون مسئول عن نشاط اختزال.thiol/protein disulfide 1901001856 ° ١ "- فيروس ألفا المطفر mutated alphavirus المذكور في عنصر الحماية Cam) أن " فيروس ألفا المطفر mutated alphavirus عبارة عن فيروس سندبيس مطفر mutant Sindbis virus ¥ ٠١ “- الفيروس المطفر mutated virus المذكور في عنصر الحماية oY حيث أن فيروس "| سندبيس المطفر mutated Sindbis virus يكون من النوع E1-SER® ١ ؛- بلازميد DNA plasmid مدمج والذي يشفر لفيروس Lal مطفر mutated alphavirus غير معدي ؛ حيث أن الفيروس المذكور يكون مطفر باستبدال الحمض الأميني » - سيستاين في البروتين 11 بحمض أميني مختلف ؛ حيث أن السيستاين cysteine المذكور ؛ يكون في جزء من البروتين الفيروسي مسئول عن نشاط اختزال كبريتيد.thiol/protein disulfide ° ١ #- البلازميد plasmid المذكور في عنصر الحماية ؛ ؛ حيث أن فيروس ألفا المطفر mutated alph virus Y يكون عبارة عن فيروس سندبيس .mutated Sindbis virus ihe ١ +- البلازميد المذكور في عنصر الحماية © ؛ حيث أن فيروس سندبيس المطفر mutated Sindbis virus 7 يكون عبارة عن فيروس E1-SER®* -١ ١ خلية cell مصابة تتضمن البلازميد plasmid المذكور في عنصر الحماية 3 الاYv الخلية المصابة المذكورة في عنصر الحماية 7 ؛ حيث يتم اختبار الخلية A) خلايا » bacterial cells بكتيرية LOL 2 المذنكورة من المجموعة التي تتكون من Y mammalian cells خميرة ¢ خلايا حشرات ؛ وخلايا ذبية 7 ؛ حيث تكون الخلية المنكورة A الخلية المصابة المذكورة في عنصر الحماية -+ ١ عبارة عن خلية ثديية يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من 8116-21 م1111 " .Vero و CHO و.١ المذكور في عنصر الحماية plasmid خلية مصابة تتضمن البلازميد -٠١ ١ ؛ حيث يتم اختبار الخلية ٠١ الخلية المصابة المذكورة في عنصر الحماية -١١ ١ ؛ خلايا خميرة bacterial cells المذكورة من المجموعة التي تتكون من خلايا بكتيريا ¥ mammalian cells 4p خلايا حشرات وخايا ٠» 1 ؛ حيث أن الخلية المذكورة ١١ الخلية المصابة المذكورة في عنصر الحماية -١؟١ ١ تكون عبارة عن خلية ثديية يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من 1116-21 ؛ .Vero و CHO « HELA 1 إلا
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/213,860 US5532154A (en) | 1994-03-21 | 1994-03-21 | Mutated alpha virus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA95150618B1 true SA95150618B1 (ar) | 2006-04-22 |
Family
ID=22796796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA95150618A SA95150618B1 (ar) | 1994-03-21 | 1995-04-25 | فيروس ألفا مطفر |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5532154A (ar) |
| EP (1) | EP0755440A4 (ar) |
| JP (1) | JP3821484B2 (ar) |
| KR (1) | KR100394163B1 (ar) |
| CN (1) | CN1122105C (ar) |
| AU (1) | AU688887B2 (ar) |
| CA (1) | CA2186044C (ar) |
| FI (1) | FI963717A (ar) |
| IL (1) | IL112990A (ar) |
| NZ (1) | NZ283575A (ar) |
| RU (1) | RU2194754C2 (ar) |
| SA (1) | SA95150618B1 (ar) |
| WO (1) | WO1995025788A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA952259B (ar) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6015686A (en) | 1993-09-15 | 2000-01-18 | Chiron Viagene, Inc. | Eukaryotic layered vector initiation systems |
| US6451592B1 (en) | 1996-04-05 | 2002-09-17 | Chiron Corporation | Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis |
| US6458560B1 (en) | 1996-04-05 | 2002-10-01 | Chiron Corporation | Recombinant alphavirus-based vectors with reduced inhibition of cellular macromolecular synthesis |
| WO1998051297A1 (en) * | 1997-05-14 | 1998-11-19 | The University Of New Mexico | Inhibition of cell surface protein disulfide isomerase |
| US7335363B2 (en) * | 1997-09-18 | 2008-02-26 | Research Development Foundation | Membrane virus host range mutations and their uses as vaccine substrates |
| US7128915B2 (en) * | 1997-09-18 | 2006-10-31 | Research Development Foundation | Membrane virus host range mutations and their uses as vaccine substrates |
| DE1066395T1 (de) * | 1998-03-27 | 2002-04-04 | Cytos Biotechnology Ag Zuerich | Induzierendes alphavirengen- expressionssystem |
| US6451579B1 (en) | 1998-07-29 | 2002-09-17 | Invitrogen Corporation | Regulated expression of recombinant proteins using RNA viruses |
| US8647864B2 (en) * | 1999-04-14 | 2014-02-11 | Novartis Ag | Compositions and methods for generating an immune response utilizing alphavirus-based vector systems |
| WO2000061772A2 (en) * | 1999-04-14 | 2000-10-19 | Chiron Corporation | Compositions and methods for generating an immune response utilizing alphavirus-based vector systems |
| US6890487B1 (en) | 1999-09-30 | 2005-05-10 | Science & Technology Corporation ©UNM | Flow cytometry for high throughput screening |
| US7416903B2 (en) * | 1999-09-30 | 2008-08-26 | Stc.Unm | Wavy interface mixer |
| US6498189B1 (en) * | 1999-11-10 | 2002-12-24 | University Of New Mexico | Method for induction of L-selectin shedding |
| AU1647501A (en) | 1999-12-10 | 2001-06-18 | Cytos Biotechnology Ag | Replicon based activation of endogenous genes |
| AU2001256609A1 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-20 | Cyril John Higgins | Method of organized retrieval of world-wide web pages |
| CA2410948C (en) | 2000-05-31 | 2012-07-17 | Chiron Corporation | Method for the purification of alphavirus replicon particles |
| WO2002006456A1 (en) * | 2000-07-13 | 2002-01-24 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for rapid protein and peptide extraction and isolation using a lysis matrix |
| US7198924B2 (en) | 2000-12-11 | 2007-04-03 | Invitrogen Corporation | Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites |
| EP2311994A1 (en) * | 2003-08-01 | 2011-04-20 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for preparing short RNA molecules and other nucleic acids |
| WO2006110814A2 (en) * | 2005-04-12 | 2006-10-19 | Romark Laboratories, L.C. | Methods for treating diseases through inhibition the function of molecular chaperones such as protein disulfide isomerases, pharmaceutical compositions comprising them, and screening methods for identifying therapeutic agents |
| US20110195089A1 (en) * | 2008-10-08 | 2011-08-11 | The Adminstrators Of The Tulane Educational Fund | Compositions, methods, and kits for enhancing the immunogenicity of pathogenic antigens |
| US8823943B2 (en) | 2009-05-21 | 2014-09-02 | Intellicyt Corporation | System and method for separating samples in a continuous flow |
| US9752964B1 (en) | 2009-06-22 | 2017-09-05 | Stc.Unm | Flow cytometry apparatus pulling sample stream through observation chamber |
| RU2720518C1 (ru) * | 2018-12-18 | 2020-04-30 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Штамм вируса лихорадки Синдбис 1383 клон 3 (Sindbis fever virus 1383 clone 3) |
| MX2022011138A (es) * | 2020-03-13 | 2023-02-16 | Nuo Beta Pharmaceutical Tech Shanghai Co Ltd | Efecto contra coronavirus y aplicacion de inhibidor de fosfatidilinositol 4-cinasa. |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69032028T2 (de) * | 1989-10-31 | 1998-05-20 | Us Health | Entwurf und konstruktion von nichtinfektiösen menschlichen retrovirusmutanten mit mangel an genomischer rna |
| WO1994004185A2 (en) * | 1992-08-19 | 1994-03-03 | Trustees Of Boston University | Method of inhibiting reduction of disulfide bonds |
-
1994
- 1994-03-21 US US08/213,860 patent/US5532154A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-01-01 ZA ZA952259A patent/ZA952259B/xx unknown
- 1995-03-14 IL IL11299095A patent/IL112990A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-03-21 EP EP95914815A patent/EP0755440A4/en not_active Withdrawn
- 1995-03-21 KR KR1019960705200A patent/KR100394163B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-03-21 CA CA002186044A patent/CA2186044C/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-21 WO PCT/US1995/003605 patent/WO1995025788A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-03-21 AU AU21913/95A patent/AU688887B2/en not_active Ceased
- 1995-03-21 CN CN95192229A patent/CN1122105C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-21 JP JP52480695A patent/JP3821484B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-03-21 RU RU96119259/13A patent/RU2194754C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-03-21 NZ NZ283575A patent/NZ283575A/en unknown
- 1995-04-25 SA SA95150618A patent/SA95150618B1/ar unknown
-
1996
- 1996-09-19 FI FI963717A patent/FI963717A/fi not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0755440A4 (en) | 1998-08-19 |
| KR970701778A (ko) | 1997-04-12 |
| CA2186044C (en) | 2005-08-23 |
| RU2194754C2 (ru) | 2002-12-20 |
| IL112990A0 (en) | 1995-06-29 |
| KR100394163B1 (ko) | 2004-10-20 |
| NZ283575A (en) | 2001-03-30 |
| IL112990A (en) | 1999-11-30 |
| AU688887B2 (en) | 1998-03-19 |
| US5532154A (en) | 1996-07-02 |
| CA2186044A1 (en) | 1995-09-28 |
| CN1122105C (zh) | 2003-09-24 |
| JP3821484B2 (ja) | 2006-09-13 |
| JPH09510613A (ja) | 1997-10-28 |
| EP0755440A1 (en) | 1997-01-29 |
| FI963717A (fi) | 1996-11-20 |
| ZA952259B (en) | 1996-09-20 |
| WO1995025788A1 (en) | 1995-09-28 |
| CN1144536A (zh) | 1997-03-05 |
| AU2191395A (en) | 1995-10-09 |
| FI963717A0 (fi) | 1996-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA95150618B1 (ar) | فيروس ألفا مطفر | |
| Utt et al. | Versatile trans-replication systems for chikungunya virus allow functional analysis and tagging of every replicase protein | |
| Barber | VSV-tumor selective replication and protein translation | |
| Emonet et al. | Rescue from cloned cDNAs and in vivo characterization of recombinant pathogenic Romero and live-attenuated Candid# 1 strains of Junin virus, the causative agent of Argentine hemorrhagic fever disease | |
| Kirkegaard et al. | Cellular autophagy: surrender, avoidance and subversion by microorganisms | |
| Ventoso et al. | HIV-1 protease cleaves eukaryotic initiation factor 4G and inhibits cap-dependent translation | |
| Doherty et al. | Accessing complexity: the dynamics of virus-specific T cell responses | |
| Conover et al. | Stage-specific expression of a family of proteins that are major products of zygotic gene activation in the mouse embryo | |
| Ratinier et al. | Bluetongue virus NS4 protein is an interferon antagonist and a determinant of virus virulence | |
| Fraenkel-Conrat et al. | Viral Cytopathology: Cellular Macromolecular Synthesis and Cytocidal Viruses Including a Cumulative Index to the Authors and Major Topics Covered in Volumes 1–19 | |
| Bonzano et al. | Odour enrichment increases adult‐born dopaminergic neurons in the mouse olfactory bulb | |
| Sun et al. | Human cytomegalovirus protein pUL38 prevents premature cell death by binding to ubiquitin-specific protease 24 and regulating iron metabolism | |
| Carrasco et al. | The regulation of translation in picornavirus-infected cells | |
| Nelson et al. | Inhibition of chlamydiae by primary alcohols correlates with the strain-specific complement of plasticity zone phospholipase D genes | |
| Yuen et al. | An interferon-integrated mucosal vaccine provides pan-sarbecovirus protection in small animal models | |
| Jackson et al. | Cytotoxic T cells recognize very early, minor changes in ectromelia virus‐infected target cells | |
| Kim et al. | SARS-CoV-2 protein ORF8 limits expression levels of Spike antigen and facilitates immune evasion of infected host cells | |
| Oldstone | The role of cytotoxic T lymphocytes in infectious disease: history, criteria, and state of the art | |
| Dongchao et al. | Loss of rhoptry protein 9 impeded Toxoplasma gondii infectivity | |
| Kawai et al. | Nuclear accumulation of β‐catenin and transcription of downstream genes are regulated by zygotic Wnt5α and maternal Dsh in ascidian embryos | |
| Lu et al. | SARS accessory proteins ORF3a and 9b and their functional analysis | |
| Satou et al. | Implication of the HTLV-I bZIP factor gene in the leukemogenesis of adult T-cell leukemia | |
| Oldstone | Rous-Whipple Award Lecture. Viruses and diseases of the twenty-first century. | |
| Panfili et al. | Immunochemical evidence of the independence of the Ca2+/Na2+ antiporter and electrophoretic Ca2+ uniporter in heart mitochondria | |
| Zimmer | First antibody trial launched in COVID-19 patients |