SA519401361B1 - معززات جديدة - Google Patents

معززات جديدة Download PDF

Info

Publication number
SA519401361B1
SA519401361B1 SA519401361A SA519401361A SA519401361B1 SA 519401361 B1 SA519401361 B1 SA 519401361B1 SA 519401361 A SA519401361 A SA 519401361A SA 519401361 A SA519401361 A SA 519401361A SA 519401361 B1 SA519401361 B1 SA 519401361B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
sequence
virus
equine
vector
alpha
Prior art date
Application number
SA519401361A
Other languages
English (en)
Inventor
اندريس جالى
كريستيتا ريهميت
اريك مارتين فاوجن
راميش كوكونتلا
روبيرت بارى مانديل
اليس موندت
Original Assignee
بورينجر انجلهايم فيتميديكا جى ام بى اتش
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by بورينجر انجلهايم فيتميديكا جى ام بى اتش filed Critical بورينجر انجلهايم فيتميديكا جى ام بى اتش
Publication of SA519401361B1 publication Critical patent/SA519401361B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/861—Adenoviral vectors
    • C12N15/8613—Chimaeric vector systems comprising heterologous sequences for production of another viral vector
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units
    • C12N7/045—Pseudoviral particles; Non infectious pseudovirions, e.g. genetically engineered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/00034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/00041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/00043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/00041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/00045—Special targeting system for viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10044—Chimeric viral vector comprising heterologous viral elements for production of another viral vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10061—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2710/10062—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/12011—Asfarviridae
    • C12N2710/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16111—Cytomegalovirus, e.g. human herpesvirus 5
    • C12N2710/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16744—Chimeric viral vector comprising heterologous viral elements for production of another viral vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/12011—Bunyaviridae
    • C12N2760/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بمجال اللقاحات vaccines (النواقل vector) وبصفة خاصة يتعلق بمتواليات معزز promoter sequences جديدة وكاسيتات تعبير expression cassettes ونواقل والتي تكون مناسبة للتعبير عن الجين genes محل الاهتمام وبصفة خاصة متواليات مشفرة لمولد الضد antigen encoding sequences. تكون النواقل الفيروسية viral vectors الخاصة بالاختراع الحالي مفيدة لإنتاج تركيبة مناعية immunogenic composition أو لقاح. شكل1

Description

معززات جديدة ‎NEW PROMOTERS‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بمجال اللقاحات ‎vaccines‏ (الناقلة ‎(vector‏ وبصفة خاصة يتعلق بمتواليات معزز ‎promoter sequences‏ جديدة وكاسيتات تعبير ‎expression cassettes‏ ونواقل والتي تكون مناسبة للتعبير عن الجين 8606 محل الاهتمام وبصفة خاصة متواليات مشفرة لمولد الضد ‎antigen encoding sequences‏ تكون النواقل الفيروسية ‎viral vectors‏ الخاصة بالاختراع الحالي مفيدة لإنتاج تركيبة مناعية ‎immunogenic composition‏ أو لقاح. ينتمي فيروس الهريس ألفا للخيول 1 1 ‎(EHV-1) Equid Alphaherpesvirus‏ الفرسي الممرض للخيول (فيروس إجهاض الخيول ‎(Equine abortion virus‏ إلى جنس فيروسات الحماق ‎Varicellovirus‏ في العائلة الفرعية من الفيروسات الهريسية ألا ‎ Alphaherpesvirinae‏ رتبة 0 الفيروسات الهريسية 118:08571:0168. وهو عبارة عن فيروس ‎virus‏ مغلف كبير به جينوم الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ‎(DNA) deoxyribonucleic acid‏ مزدوج الجديلة ‎double-stranded‏ به تقريباً 150000 زوج قاعدة. تشتمل الأعضاء المهمة الأخرى من الأجناس الفرعية من فيروس الحماق على فيروس هربس ألفا البشري 3 3 ‎Human Alphaherpesvirus‏ (فيروس الحماق النطاقي ‎«(Varicella Zoster Virus‏ والفيروس الهريسي ألما الكلبي 1 1 ‎Suid Alphaherpesvirus‏ (فيروس داء الكلب الكاذب ‎((PrV) Pseudorabies virus‏ » الفيروس الهريسي ألما من ‎Say‏ 1 ‎«(BHV-1) Bovine Alphaherpesvirus 1‏ (وفيروس التهاب القصبات الهوائية المعدي ‎Infectious‏ ‎(Bronchitis Virus‏ وفيروس الهريس ‎wll‏ من الخيول 4 4 ‎(EHV-4) Equid Alphaherpesvirus‏ (فيروس التهاب الأنف والرثة الخيلي ‎«Equine Rhinopneumitis Virus‏ فيروس الهريس ألفا من الخيول 4) ( 2015 ‎ww detvonline org/virostaxouomy asp Virus Taxonomy:‏ بي// :حاار ‎Release EC 47, London, UK, July 2015; Email ratification 2016 (MSL #30 0‏ تكون فيروس الهريس ألفا للخيول 1 وفيروس الهريس ألفا من الخيول 4 عبارة عن فيروسات متوطنة ‎endemic‏ ‏وتؤثر على الخيول في جميع أنحاء العالم. وبسبب أن فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 يسبب معظم العدوى المتوسطة ‎mild infection‏ في المسار التنفسي العلوي ‎cupper respiratory tract‏
فإن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 يمكنه أن يسبب العدوى العامة ‎systemic infection‏ بمدى من الأمراض من الأعراض التنفسية ‎respiratory symptoms‏ بالنسبة للإجهاض ‎abortion‏ والاعتلال النخاعي الشوكي ‎lethal myeloencephalopathy‏ المعتمد على الإجهاد ‎dally‏ المناعية ‎immunological status‏ للعائل. تم التصديق على اثنين من اللقاحات الحية المعدلة ‎modified‏ ‎(MLV) live vaccines 5‏ التي تمت إجازتها في مضادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 حالياً وهي متاحة في الولايات المتحدة وفي أورويا على الترتيب وهي ‎RhinomuneO;TM (Boehringer‏ ‎Ingelheim)‏ و(015 10:114مدنهعه»6. وتشتمل كل منها على سلالة فيروس الهريس ألما للخيول 1 ‎RacH‏ الموهنة ‎attenuated‏ بصورة كلاسيكية والتي تمر لمدة 256 مرة في ‎Wall‏ ‏الظهارية ‎epithelial cells‏ للخنزير لغرض التوهين ‎«(Ma et al. 2013) attenuation‏ إن ‎all‏
10 التوهين قد تم فحصها على المستوي الجزيئي ‎.molecular level‏ قام )1996( ‎Osterrieder et al.‏ بتوضيح أن 1 يفتقر لاثتين من النسخ الجينومية ‎genomic copies‏ من إطار القراءة المفتوح ‎(ORF67) open reading frame 67 67‏ والاستعادة الخاصة بأي نسخة التي تكون كافية لاستعادة الفوعة الفيروسية ‎virulence‏ بالإضافة إلى ذلك؛ فإن ‎RacH‏ تحمل الإزالة التي تكون عبارة عن 3 زوج قاعدة والتي تعمل على ‎STA)‏ من 90 من متوالية التشفير ‎coding sequence‏ من
إطار القراءة المفتوح 1 1 ‎(ORF) open reading frame‏ والتي تقوم بتشفير بروتين فيروسي ‎viral‏ ‎protein‏ كابح للمناعة ‎.immunosuppressive‏ يمكن أن تقوم تطفيرات ‎mutations‏ أخرى ‎Lad‏ ‏بالتأثير على التوهين ولكن لم يتم فحصها بالتفصيل. وذلك ذلك يجعل من ‎RacH‏ بمثابة سلالة لقاح آمنة جداً في شكل عودة لأي فوعة فيروسية من خلال إمرارها في الحيوانات المحصنة وهذه الحالة غير محتملة إلى حد كبير وذلك إذا كانت ممكنة.
0 يكون الكروموسوم الصناعي لبكتريا ‎(BAC) bacterial artificial chromosome‏ إيشريشيا كولاي ‎E. coli‏ التي تشتمل على الجينوم ‎genome‏ العالي من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 من سلالة اللقاح ‎:RacH‏ 11عمم-قابلة للاستئصال ‎(SE) self-excisable‏ معروفاً في شكل منصة خاصة بتطور لقاح الناقل ‎vaccine‏ :010©». تم توضيح أن اللقاحات الناقلة المعتمدة على فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ تكون قادرة على توضيح المناعة في العديد من الأنواع الثديية والتي تشتمل
5 على الخنازير والبقر والكلاب ( ‎Rosas et al. 2007, Rosas et al. 2008, Trapp et al. 2005, Said‏ ‎al. 2013‏ )6). يمكن أن يتم التعبير عن الجينات المشفرة لبروتينات مضادة لمولد الضد ‎antigenic‏
‎proteins‏ من الممرضات ‎pathogens‏ بواسطة فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ ناتج عودة الارتباط. تمت معالجة جينوم فيروس الهريس ألفا للخيول 8211-1 في صورة كروموسوم صناعي بكتري الخاصة به في إيشريشيا كولاي وتم تصميمها لكي تعبر عن البروتينات ‎proteins‏ الإضافة وبصورة طبيعية بواسطة إدراج كاسيتات تعبير عبر الجينات ‎transgene expression cassettes‏ ‎٠ (Tischer et al., 2010) 5‏ وعند نقل العدوى للحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ل11عمم-قابلة للاستتصال في خلايا أولية من المزرعة فإن انتساخ فيروس الهربس آلفا للخيول 1 يتم البدء به بواسطة عوامل انتساخ خلوية ‎cellular transcription factors‏ يؤدي نشاط بوليميراز ‎polymerase‏ ‏الحمض النووي دي أوكسي رببوزي الفيروسي إلى حذف كل المتواليات المتعلقة بناقل كروموسوم صناعي بكتري واستعادة جينوم فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 ‎RacH‏ إلى الحالة الأصلية الخاصة
0 -بد. يتم إنشاء الفيروس المعدي والذي يكون قابلاً للتمايز من ‎RacH‏ ‏عندما تتم معالجة ‎dhlE-pRacH‏ للاستئصال في إيشريشيا كولاي؛ على سبيل المثال»؛ بواسطة إدراج كاسيتات التعبير بداخل الجين؛ فإن الفيروسات التي يتم تحللها بعد نقل العدوى في الخلايا الأولية ‎isu permissive cells‏ تحمل تعديلات ويمكن أن يتم التعبير عنها في الجين الإضافي. إن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط يمكن استخدامه في شكل لقاح ناقل.
وعلى الرغم من ذلك فإن كمية بروتين الجين الانتقالي ‎transgenic protein‏ التي تم التعبير ‎Wie‏ ‏بدون المعزز الجيني الخارجي ‎exogenic promoter‏ الإضافي تكون عبارة عن كمية منخفضة نسبياً. وبالتالي فهناك حاجة لم يتم الوفاء بها لمعززات ‎promoters‏ إضافية والتي يتم استخدامها للتعبير عن البروتينات من النواقل المذكورة» وبصفة خاصة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ ‏ناتجة ‎sage‏ الارتباط.
0 تشتمل سلالات فيروس الهريس ألفا للخيول 1 من النوع غير المعالج ‎(WE) Wild-type‏ على إطارات القراءة المفتوحة ‎(orf) open reading frames‏ التي يطلق عليها إطار القراءة المفتوح 1 أو إطار القراءة المفتوح 2 2 ‎(ORF2) open reading frame‏ وإطار القراءة المفتوح 3 ‎open reading‏ ‎(ORF3) frame 3‏ عند طرف واحد من الأجزاء الفربدة الطويلة من الجينوم الخاص بها (إحداثيات المتوالية 3614-1298؛ الشكل رقم 2). يتم ترتيب إطار القراءة المفتوح 1 وإطار القراءة المفتوح 3
5 بصورة متسلسلة ويتم ترتيبه على أحد الجدائل من الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي بينما يتم تشفير إطار القراءة المفتوح 2 بواسطة الجديلة المتممة ‎complementary strand‏ يكون لسلالة
لقاح 1283 ‎RacH‏ حذف في المناطق التي تؤثر على إطار القراءة المفتوح 1 و2 والذي يوضح أن تلك الجينات غير أساسية فيما يتعلق بالانتساخ الفيروسي. ولهذا السبب؛ يتم استخدام الموضع في شكل موضع إدراج الجين الانتقالي ‎transgene insertion site‏ وباستخدام المعزز -المحسن 1 من الجين ‎gene‏ المبكر الفوري من الفيروس المضخم للخلايا البشرية ‎Human cytomegalovirus‏ ‎((Boshart et al. 1985) (HCMV) 5‏ فإنه قد تم تقرير أن الجينات الانتقالية قد تم التعبير عنها بفعالية من موضع إدراج إطار ‎sell‏ المفتوح 1 و3. في مثل تلك الدراسات فإن هرمون النمو البقري ‎(BGH) bovine growth hormone‏ من الإشارة الخاصة ببولي ‎polyadenylation (sia‏ قد تم استخدامها لتثبيت الانتساخات الخاصة بالتعبير ‎(Ma et al. 2012; Said et al. 2013) all‏ . وعلى الرغم من ذلك لا يوجد هناك دليل بأن الفيروس المضخم للخلايا البشرية يمكنه حث الأورام ‎tumours 0‏ في البشر ولا يمكن استثناء المخاطرة النظرية. وقبل أن يتم وصف محسن الفيروس المضخم للخلايا البشرية- أي إيه ‎(Boshart et 1. 1985( IE‏ فإن معظم المحسنات القوية يتم اكتشافها في الجينومات من الفيروسات الورمية ‎oncogenic viruses‏ المعروفة مثل الفيروس القردي ‎«(SV40) Simian Virus 40 40‏ والفيروسات المكونة للورم ‎polyoma viruses‏ أو فيروس الورم السرطاني الفأري لمولوني ‎Moloney murine sarcoma virus‏ وعلى الرغم من أن الفيروس المضخم للخلايا البشرية القوية بشكل مفرط وير الخاصة بالنسيج والفيروس المضخم للخلايا الفأري ‎(MCMV) Mouse cytomegalovirus‏ ومعززات -محسنات ‎[BE‏ مناسبة بشكل جيد للعديد من أنشطة البحث؛ فإنها يمكن أن تمثل الاختيار الأول الخاص بالمعزز الخاص بالناقل للجين الانتقالي من اللقاحات بصفة عامة. وبصورة خاصة فإن خطورة التعرض العرضي للحيوانات الجاري تلقيحها من خلال الأشخاص يمثل العقبة أمام اللقاح الذي تم ترخيصه. 0 الوصف العام للاختراع ولكي يتم تجنب أي من العقبات المشابه فإن الاختراع الحالي قام بتوفير متواليات حمض نووي تنظيمي ‎regulatory nucleic acid‏ جديدة/ متواليات معزز ‎promoter sequences‏ خاصة بالتعبير عن الجين الانتقالي وبصورة خاصة في سياق لقاحات النواقل وبصورة خاصة في سياق ناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1.
وبالتالي؛ فإن الحل الخاص بالمشكلة التقنية السابقة يتم تحقيقه من خلال وصف النماذج التي تم توضيحها في عناصر الحماية وفي الاختراع في سماته المختلفة التي تم تنفيذها طبقاً لعناصر الحماية. يوفر الاختراع الحالي متواليات حمض نووي منظمة جديدة / متتاليات معزز للتعبير عن الجين الانتقالي؛ وتركيبات مولدة للمناعة ‎immunogenic compositions‏ ولقاحات وطرق مترابطة والتي تتغلب على العيوب في الفن السابق. إن متواليات المعزز التي تم استخدامها على نحو واسع لاشتقاق المستويات العليا من التعبير عن الجين الانتقالي في العديد من أنظمة الناقل المشتملة على الفيروسات الهريسية ‎herpesviruses‏ ‏تكون ‎Ble‏ عن متواليات معزز من الجينات الفورية والمبكرة من فيروس المضخم للخلايا البشرية ‎(Boshart et al. 1985;Foecking and Hofstetter 1986( 0‏ أو الفيروس المضخم للخلايا من الفئران ‎(Dorsch-Hisler et al. 1985)‏ أو المعززات القوية من الفيروسات المولدة للورم مثل الفيروس القردي 40؛ على سبيل المثال؛ الفيروس القردي 40 الكبير من معزز مولد الضد ‎T-antigen T—‏ ‎promoter‏ والعديد من الصور الأخرى ‎Ae)‏ سبيل المثال» 1990 ‎(Kim et al.‏ كانت ‎Jie‏ تلك المعززات القوية مفضلة بواسطة علماء الأحياء بسبب أنها فعالة بصورة مستقلة في مختلف أنظمة 5 مزرعة الخلية ‎.cell culture systems‏ وفي ‎Glu‏ الانتساخ الفيروس ‎cviral replication‏ يتم تحويل خلية مصابة بالعدوى بواسطة الوظائف الفيروسية ‎viral functions‏ إلى ‎all‏ انتساخ للفيروس ‎.virus-replicating machine‏ وقد تم الفهم الجيد للطريقة الحيوية الخاصة بانتساخ وتشكيل الفيروسات الهريسية. وبعد العدوى يكون هناك فقط القليل من الجينات (جينات -» 0-8»68) قد تم انتساخها وتمت ترجمتها إلى بروتينات 0 مثبكرة وفورية ‎immediate-early proteins‏ (م18). تكون بروتينات مبكرة وفورية المذكورة ‎Ble‏ عن منشطات خاصة بالانتساخ ‎transcriptional activators‏ خاصة بجينات - 0 11-8606 التي تشفر إنزيمات فيروسية ‎viral enzymes‏ مشابهة ‎Jie‏ بوليميراز ‎polymerase‏ حمض دي أوكسي رببونيوكليك والعديد من الصور الأخرى. إن بداية الانتساخ الجينومي تعتبر أنها بداية للطور المتأخر من الانتساخ الفيروسي حيث تكون جينات ‎B‏ وجينات 7 ‎D-genes‏ عبارة عن جينات تم 5 اتتساخها ‎lly‏ تقوم بتشفير البروتينات البنائية الفيروسية ‎Fields, ) viral structural proteins‏ 013).
وعلى الرغم من ذلك ولكي يتم توفير لقاحات ناقلة محسنة؛ لا يتم وصف أي معززات قوية مستقلة من السابقة أنه أحد الخيارات» وبصفة خاصة بالنسبة لذلك المشتق من الفيروسات المشكلة للورم التي لها عيوب تتعلق في خصائص السلامة. ويالتالي هناك ‎dala‏ لتوفير معززات والتي يكون لها نشاط عال في سياق الانتساخ الفيروسي مثل تلك الخاصة بجينات فيروس ‎anal)‏ ألفا للخيول 1 ‎cys 8 5‏ وسبب أنه من غير ‎(Sad)‏ أن يتم استخدام متوالية حمض دي أوكسي رببونيوكليك متماثلة مرتين في أحد النواقل من الجزيء بدون مخاطر عودة الاتحاد الجيني الداخلية ويالتالي عدم الثبات الجيني فإن الاختراع الحالي قد قام بتوفير متواليات معزز بديلة جديدة تم اشتقاقها من المتوالية الجينومية المنشورة من فيروس الهربس ألفا للخيول 4 (من السلالة 11980567 والذي يقوم بإكمال الجينوم مع رقم وصول ‎AF030027‏ من النسخة ‎AF030027‏ و01:2605950؛ بتاريخ 21 مايو 0 1998). هوية المتوالية من الجينات مع جينات فيروس الهربس ألفا للخيول 1 والتي تكون في مدى من 55 إلى 784. يوفر الاختراع الحالي اثنين من المعززات الجديدة: 0430 و8455 والتي تكون واضحة بالنسبة للصورة الوظيفية في الخلفية من الانتساخ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الارتباط الجيني ‎RacH-(rEHV1) recombinant Equid Alphaherpesvirus 1‏ في مزارع الخلية ‎cell cultures‏ والتي ‎Lad‏ في الحيوانات (الخنازير والفئران). تظهر مستويات النشاط من اثنين من المعززات الجديدة أثناء دورة الانتساخ الفيروسي بأنها مشابهة جداً لتلك التي تم اشتقاقها من التجارب الحركية ‎kinetic experiments‏ الخاصة بالمعزز في المعمل. تسمح تلك الخصائص بإنشاء لقاحات ناقل ناتجة ‎sage‏ الارتباط تعتمد على فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ التي تعبر عن اثنين من مولدات الضد في صورة موزاية مع الفعالية المشابهة. 0 إذا تكون مستهدف اللقاح من اثنين من صور الوضع المختلفة للممرضات من اثنين من المعززات الجديدة في اثنين من مواضع الإدراج والتي يتم دمجها مع اثنين من متواليات المعالجة ببولي أدينيل ‎GB‏ ذلك يمكن أن يقلل من تكلفة السلع بشكل كبير ويمثل ميزة هامة بالمقارنة بالتعبير ‎Jal‏ فقط بالنسبة لمكون مولد للضد فقط. يوفر الاختراع الحالي معززات جديدة: 4086600 5 ‎lindas pMCP6004‏ من أطوال أقصر منها 5 والتي تم توضيحها بأنها وظيفية بعد نقل العدوى العابر في مزارع الخلية أو في الصورة الأساسية
من انتساخ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الارتباط ‎RacH- cual)‏ في الانتساخ الخاص بمزارع الخلية. وبصورة إضافية؛ تم توفير متواليات معزز جديدة تم توفيرها بواسطة الاختراع الحالي والتي تم توفيرها والتي تكون فعالة في الصور الأساسية من النواقل الأخرى مثل الفيروس الغدي من الكلاب ‎(CAV [CAdV) canine adenovirus 5‏ أيضاً. وعلى نحو مهم؛ فإن إنقاذ الفيروس الغدي من الكلاب من التوليفة يتم تحقيقه عنما يكون هناك إما متواليات المعزز ‎CAG‏ أو 08175 والتي تكون موجودة في كاسيتات التعبير الموجودة في منطقة 3. يظهر ذلك بأنه خاصاً بالمتوالية في شكل حجم كاسيتات التعبير التي لا يتم استثناؤها والتي تمت ملاحظتها من الحدود الحجمية للجينوم التجريبي. وبالتالي فإن هناك متواليات معزز يتم 0 اشتقاقها من فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 من الاختراع الحالي ‎p430 Jie‏ و8455 والتي لا تسهل فقط التعبير الجيني ولكنها تدعم الخطوة الهامة في الإنقاذ الفيروسي وبالتالي تكون مفيدة في ‎se‏ متواليات معزز الفن السابق. شرح مختصر. للرسومات تُشكل الأشكال التالي جزءاً من المواصفة الحالية وتم تضمينها لكي يتم الشرح الإضافي لسمات معينة من الاختراع الحالي. يمكن أن يتم فهم الاختراع الحالي بصورة أفضل من خلال الإشارة إلى واحد أو أكثر من تلك الأشكال في توليفة مع الوصف التفصيلي للنماذج المحددة التي تم عرضها هنا . يكون الشكل رقم: 1. عبارة عن توضيح تخطيطي لموضع إدراج إطار القراءة المفتوح 70: ‎UL‏ = جزءٍ 2 ‎long unique segment (hgh‏ 05 = جز فريد قصير ‎short unique segment‏ ‎Bang = IR‏ تكرار معكوسة داخلية ‎inner inverted repeat‏ ‎Sie Bang = TR‏ )8 معكوسة طرفية ‎terminal inverted repeat‏ 6 = بروتين سكري 6 6 ‎glycoprotein‏ ‏1 < البروتين السكري ‎glycoprotein IT IT‏ ‎torf 5‏ إطار قراءة مفتوح ‎=bp‏ زوج قاعدة
يقوم الشكل رقم 2: بتوضيح مخطط توضيحي يقارن مناطق إطار القراءة المفتوح 3/1 من سلالة فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 من النوع غير المعالج ‎(w) wild-type‏ وسلالة اللقاح الذي تم توهيته ‎attenuated vaccine strain‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎.RacH‏ الشكل رقم ‎ :3‏ يوضح تتائج تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎quantitative polymerase chain‏ .promoter kinetics experiment ‏من تجرية حركيات المعزز‎ (QPCR) reaction 5 ويوضح المخطط الموجود في الشكل رقم 3 ‎b=‏ حركيات الانتساخ من إطار القراءة المفتوح 72 ‎open reading frame‏ (0:172)؛ الذي يشفر البروتين السكري من ©. تم استخدام تم البيانات لكي تكون عبارة عن بيانات طبيعية بالنسبة للبيانات من حركيات الانتساخ ‎transcription kinetics‏ من ‎mCherry‏ (المخطط في 3-ب). 0 الشكل رقم 4: نتائج تفاعل سلسلة بوليمراز كمي من تجارب حركيات اثنين من المعززات المستفلة تم توضيح الارتباط المشترك الخاص بنشاط الانتساخ والقيمة. ينتج عن القيم ‎Ct‏ الطبيعية من تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎mCherry‏ عند أزمنة منختلفة بعد العدوى ‎ally‏ يتم طرحها من المتوسط المناظر من ‎Ct dad‏ عند +<0. تم توضيح اثنين من التجارب في اثنين من سلالات الخلايا المختلفة. الشكل رقم 5: ‎le‏ عن خريطة بلازميدية من بلازميد ناقل خاص بالإدراج والتعبير عن كاسيت ‎p455-H3-71 expression cassette‏ بداخل إطار قراءة مفتوح 70 من فيروس الهريس ألفا من الخيول 1 ‎.RacH‏ ‏الطرف 3'من متوالية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي الجينومية الفيروسية المحيطة بموضع الإدراج العلوي 0 الطرف 63( متوالية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي الجينومية الفيروسية لإطار قراءة مفتوح 0 المحيطة بموضع الإدراج البعدي 5م من التعبير الخاص بتشغيل المعزز من الجين الانتقالي ‎H3‏ الجين الانتقالي (الراصة الدموية ‎(HA) hemagglutinin‏ لفيروس أنفلوتزا ‎influenza A A‏ ‎.(IAV) virus‏ polyadenylation sequence (ua ‏«م71_متوالية معالجة ببولي‎ 25
I-Scel ‏ل‎ cleavage site ‏موضع انشطار‎ I-Scel
معزز ‎aph‏ من تعبير تشغيل المعزز ‎(Alay‏ النواة ‎prokaryotic promoter‏ من جين مقاومة لكانامايسين ‎Kanamycin‏ ‎LIS‏ إطار القراءة المفتوح مقاوم لكاناميسين ‎Kanamycine‏ ‎Jal ORI‏ الانتساخ من ناقل البلازميد ‎plasmid vector‏ ‎Apr 5‏ جين مقأوم ‎resistence gene‏ لأمبيسيلين ‎Ampicillin‏
‎¢Sall «EcoRI‏ لامال ‎Xbal «BamHI «Kpnl ¢HindIII‏ توضح مواضع انشطار إندوكلياز ‎endonuclease‏ خاصة بالتقييد . الشكل رقم 16 عبارة عن الموضع التخطيطي لجينوم فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ مع منطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 70 المكبرة
‏0 إطار القراءة المفتوح 69 69 ‎:(ORF69) open reading frame‏ إطار القراءة المفتوح عدد 69 من ‎eal‏ العلوي من موضع الإدراج في إطار القراءة المفتوح 70؛ و0455: معزز جديد تم وصفه هناء انظرء؛ على سبيل المثال 1؛ 113: الجين الانتقالي لراصة الدموية من فيروس أنفلونزا من الراصة الدموية؛ /م71:_متوالية بولي أدينيل ‎polyadenylation‏ جديدة؛ 1[ إطار القراءة المفتوح 70 والمتبقي من إطار القراءة المفتوح 70 المعزز لإطار القراءة المفتوح 71 والتي تشتمل على
‏5 البروتينات الفيروسية الهيكلية من البروتين السكري 1. الشكل رقم 7: اختبار تألق مناعي غير مباشر ‎iIndirect immunofluorescence assay‏ اختبار التألق المناعي غير المباشر من خلايا فيرو ‎VERO‏ المصابة بفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎-RacH-SE-70-p455-H3‏ ‏تم تثبيت ‎WIA‏ بداخل البريتون 24 ساعة مع إيثانول ‎ethanol‏ وتم التجفيف بالهواء. وياستخدام
‏0 الجسم المضاد أحادي النسيلة ‎monoclonal antibody‏ التجاري في مضادة 113 في ‎SE‏ جسم مضاد أولي ‎primary antibody‏ والجلوبيولين المتناعي ‎(IgG) immunoglobulin-gamma la‏ ‎alias‏ للفتران من الأرانب مترافق مع اف آي تي سي ‎FITC‏ من الجسم المضاد الثانوي فإن 113 قد تم توضيحه في الخلايا المصابة بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacHSE-70-p455-H3‏ من خلال القياس الميكروسكوبي بالتألق ‎fluorescence microscopy‏
‏5 الشكل رقم 8: تبقيع وِيسشْتزن ‎Western blot‏ 23 تبقيع الخلايا المصابة ببقعة ويسترن من المسارات المختلفة من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-‏
3 أو ‎due‏ المقارنة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎ALE-RacH‏ ‏للإستتصال أو المصابة بصورة وهمية ‎.mock-infected‏ تمت حضانة البقعة ‎replica blot‏ الموجودة على الجانب الأسر باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة ل 207نم الذي تم توجيهه إلى البروتين السكري ‎TT‏ من فيروس ‎Gael)‏ ألفا للخيول 1. تمت حضانة التبقيع المتماثل على الجاتب الأيسر باستخدام مصل مفرط مناعي ‎hyperimmune serum‏ من الفثران التجاري في مقابل راصة دموية أنفلونزا ‎A‏ من 113 (085-34930). شرح المسارات 1: فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 15 ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ من الخلايا المصابة ‎infected cells‏ 2: فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3 P10‏ من الخلايا المصابة 3: فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3 P15‏ من الخلايا المصابة 4: فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3 P20‏ من الخلايا المصابة 5 5: فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-MC70‏ من الخلايا المصابة 6: الخلايا التي تم لم نقل العدوى لها الشكل رقم 9419 غيارات ‎Titers‏ الفيروس: المخططات توضح الأحمال الفيروسية ‎viral loads‏ الخاصة بعينات من الرئة من الخنازير التي تم تلقيحها أو لم يتم تلقيحها بعد الاختبار. 0 السليم- عبارة عن لقاح غير منشط ‎inactivated vaccine‏ من ناحية اللقاح متاح تجارياً. فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول- فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-‏ ‏4553م ‏الشكل رقم 10: عبارة عن خريطة بلازميدية من بلازميد ناقل خاص بإدراج كاسيت التعبير -430م 111-هرمون النمو البقري في إطار القراءة المفتوح 3/1 من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎.RacH 5‏
الجانبية ‎Flank‏ أ من متوالية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي الجينومية الفيروسية المحيطة بموضع الإدراج العلوي الجانبية ب من متوالية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي الجينومية الفيروسية المحيطة بموضع الإدراج السفلي 430م من التعبير الخاص بتشغيل المعزز من الجين الانتقالي
H(A ‏الجين الانتقالي (الراصة الدموية لفيروس أنفلونزا‎ Hav ‏8م3011 متوالية معالجة ببولي أدينيل‎ 1-5681 ‏موضع انشطار ل‎ I-Scel ‏من تعبير تشغيل المعزز بدائي النواة من جين مقاومة لكانامايسين‎ aph ‏معزز‎ 0 كانا مقاوم لكاناميسين إطار القراءة المفتوح 1 أصل الانتساخ من ناقل البلازميد ‎Apr‏ جين مقاوم لأمبيسيلين ‎¢EcoRI‏ للدي ‎«BamHI «KpnI «HindIII <Notl‏ توضح مواضع انشطار إندوكلياز خاصة بالتقييد. 5 الشكل رقم 11: عبارة عن توضيح تخطيطي لجينوم فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav 1- cual‏ مع منطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 المكبرة. نا إطار القراءة المفتوح 1: عبارة عن الجزء المتبقي من إطار القراءة المفتوح 1 العلوي من موضع الإدراج؛ 0430؛ ومعزز جديد تم وصفه هناء ‎«phil‏ على سبيل المثال؛ المثال رقم 1؛ ‎:Hlav‏ ‏عبارة عن ‎daly‏ دموية لفيروس أنفلونزا من جين انتقالي؛ 8م3611: هرمون النمو ‎growth‏ ‎hormone 0‏ البقري من متوالية بولي أدينيل؛ إطار القراءة المفتوح 3: إطراق القراءة المفتوح 3 البعدي من موضع الإدراج. الشكل رقم 2: أظهر تبقيع ويسترن والتألق المناعي ‎LIAL immunofluorescence‏ المصابة بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav‏ التعبير الخاص بالجين الانتقالي. ‎Hlav= 25‏ فيروس الهرس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE1/3-p430-Hlav‏ recombinant Equid Alphaherpesvirus ‏للخيول معاد الاتحاد الجيني‎ lf ‏فيروس الهريس‎ = SE
‎dhlE-RacH—(rEHV)‏ للاستئتصال (عينة المقارنة)
‏العينة المزيفة ‎WAS = mock‏ غير مصابة (عية مقارنة)
‏الشكل رقم 13: عبارة عن توضيح تخطيطي للجينوم من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد
‏5 الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-H1av-70-p455-H3‏ (فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد
‏الاتحاد ‎RacH— Jad)‏ -قابلة للاستئصال ‎(B‏ مع اثنين من مناطق الإدراج المكبرة.
‏نا إطار القراءة المفتوح 1: عبارة عن الجزء المتبقي من إطار القراءة المفتوح 1 العلوي من موضع
‏الإدراج؛ ‎¢p430‏ ومعزز جديد؛ ‎tHlav‏ عبارة عن راصة دموية لفيروس أنفلونزا من جين انتقالي؛
‎:BGHpA‏ هرمون النمو البقري من متوالية بولي أدينينيل؛ إطار القراءة المفتوح 3: إطار القراءة 0 المفتوح 3 البعدي من موضع الإدراج.
‏إطار القراءة المفتوح 69: إطار القراءة المفتوح 69 من الجزءٍ العلوي من موضع الإدراج في إطار
‏القراءة المفتوح 70؛ و455م: معزز جديد؛ 113: الجين الانتقالي لراصة الدموية من فيروس أنفلونزا
‏من الراصة الدموية؛ /م71: متوالية بولي أدينيل جديدة؛ ‎١‏ إطار القراءة المفتوح 70 والمتبقي من
‏إطار القراءة المفتوح 70 المعزز لإطار القراءة المفتوح 71 والتي تشتمل على البروتينات الفيروسية الهيكلية من البروتين السكري ‎JI‏
‏الشكل رقم 14: تبقيع ويشتّزن تم إجراء تبقيع ويسترن للخلايا المصابة بفيروس الهريس ألفا للخيول
‏1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav-70-p455-H3‏ )2( الناقل المفرغ لفيروس
‏الهريس ألا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 11 -قابلة للاستتصال أو ‎due‏ المقارتة بصورة زائفة
‏(عينة المقارنة). تمت حضانة البقع باستخدام إما المصل المفرط المناعة من الأرانب التجارية ل ‎(H3) 123 0‏ والمصل مفرط المناعة من الأرانب التجارية )34929 ‎(PA‏ بالنسبة ل 111(111) الجسم
‏المضاد أحادي النسيلة ل 81207 بالنسبة لفيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎J‏
‏الشكل رقم 15: تحليل قياس التدفق الخلوي ‎Flow Cytometric Analysis‏ من فيروس غدي كلبي2
‏الفيروسات المضخمة ‎WAL‏ سي بي في ‎CPV‏ في بي2 ‎VP2‏ من الخلايا المصابة ب 81-57 5 2015 72 ساعة بعد العدوى.
الشكل رقم 16: ‎Ble‏ عن فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎recombinant canine‏ ‎(rCAV-2) adenovirus-2‏ مع معززات جديدة فيروس الهريس ‎Wl‏ من الخيول 4: تحليل قياس التدفق الخلوي من خلايا 2015 ‎AIST‏ المصابة. 48ساعة بعد العدوى الشكل رقم 17: عبارة عن فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني مع معززات جديدة فيروس الهربس ألفا للخيول 4: تحليل التبقيع النقطي لتعبير البروتين ‎CPV VP2‏ في خلايا إيه[بي ‎EIB‏ ‏ام دي سي كي ‎MDCK‏ المصابة (فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني جديدة). ‎a-CPV-FITC mAb (VMRD) 50/1 =°1‏ 2- بيروكسيداز ‎peroxidase‏ الجلوبيولين المناعي ‎Lis‏ من الفأر والماعز 1.000/1 (جاي آي ‎(JR J‏ 0 الشكل رقم 117: بيانات تبقيع نقطي أصلية الشكل رقم 17ب: بيانات كمية مشابهة يتم إنشاؤها من التبقيع النقطي بالنسبة للحساب الكمي فإن التبقيع النقطي يتم تحليله باستخدام .2008 ‎ImageJ software (Burger, W., Burge, 11.3. (Eds.),‏ معالجة الصور الرقمية: الإدخال الرياضي باستخدام جافا. ‎au Springer-Verlag, New York).‏ عكس ألوان الصورة لكي يتم إزالة الخلفية والكثافة المتكاملة لكل نقطة تم تسجيلها. تم تحديد القيم 5 بالعلامات + و- كما يلي: «ببيد» = <800000 , «ببد» = 500000 إلى 600000, حب“ = 300000 إلى 499999, ”+“ حئ 120000 إلى 299999, »/د» = 80000 إلى 119999 و “» = > 80000. الشكل رقم 18: اكتشاف ‎RabG‏ في الخلايا المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني 6 455م: تم توجيه التعبير في > 71 من الخلايا المصابة بفيروس غدي كلبي-2 ‎CMVie‏ ‎RabG 0‏ أصلي الشكل رقم 19: عبارة عن اكتشاف الخلايا المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني في ‎(I :p455 RabG‏ اختبار تألق مناعي ‎(TFA) immunofluorescence assay‏ الخاصة بالتعبير ‎CPV 2‏ في ‎WA‏ 2015 8157 المصابة؛ وب) اختبار تألق مناعي الخاص بالتعبير عن ‎RabG‏ في خلايا ‎ALST‏ 2015 ج) اختبار تألق ‎elie‏ الخاص بالتعبير عن ‎RabG‏ في خلايا ‎MDCK BIVI 25‏ 2011 وسلالة مزدوجة ل ‎RabG‏ وبفيروس غدي كلبي-2.
الشكل رقم 20: تم به توضيح درجة حرارة الجسم المتوسطة للمجموعات قبل وعند 1؛ 2؛ 3 أيام بعد الاختبار. قضبان الخطأً الاتحراف العياري ‎(SD) standard deviations‏ من اليسار إلى اليمين لكل يوم من الدراسة: مجموعات التحكم السلبية (عينة مقارنة سلبية)» مجموعة عينة المقارنة الخاصة بالاختراع (عينة مقارنة للاختبار) وبتم تلقيح الحيوانات مرة واحدة باستخدام ‎RacH-SE-70-‏ ‎p4SS-H3 5‏ (1* فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني)؛ أو يتم التلقيح مرتين باستخدام لقاح ‎X2) acH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني)؛
أو مرتين باستخدام لقاح فيروس انفلونزا ‎A‏ من الخنازير غير المنشط (2* مرة قتل). الشكل رقم 21: درجات الرئة المتوسطة ‎Mean lung scores‏ من المجموعات من يوم وثلاثة أيام بعد الاختبار. قضبان ‎Waal)‏ الانحراف العياري. تم عرض مجموعات ‎due‏ المقارنة ‎due)‏ مقارنة
0 سلبية)ء مجموعة عينة المقارنة الخاصة بالاختراع (عينة مقارنة للاختبار) ويتم تلقيح الحيوانات مرة واحدة باستخدام ‎X1) RacH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني)؛ أو يتم التلقيح مرتين باستخدام لقاح ‎X1) acH-SE-70-p4S5-H3‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني)؛ أو مرتين باستخدام لقاح فيروس انفلونزا م من الخنازير غير المنشط (2* مرة قتل).
الشكل رقم 22: يوضح عيارات التعادل الخاصة بالمصل ‎(SN) serum neutralization‏ من أمصال الحيوان في مقابل سلسلة اختبار فيروس انفلونزا ‎A‏ 113 من الخنازير و8452-14 تم تجمعيها عند يوم الاختبار. 20؛ حد الاكتشاف تم عرض مجموعات عينة المقارنة (عينة مقارنة سلبية)» ‎die de gens‏ المقارنة الخاصة بالاختراع ‎die)‏ مقارنة للاختبار) وبتم تلقيح الحيوانات مرة واحدة باستخدام ‎X1) RacH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد
0 الجيني)؛ أو يتم التلقيح مرتين باستخدام لقاح ‎x1) acH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 2 معاد الاتحاد الجيني)؛ أو مرتين باستخدام لقاح فيروس انفلونزا م من الخنازير غير المنشط (2* مرة قتل). الشكل رقم 23: تم أخذ النتائج من الإنترلوكين- ‎interleukin-Ibeta Vin]‏ (11-18) ومن مائع الغسل القصبي السنخي ‎(BALF) bronchioalveolar lavage fluid‏ عند يوم واحد أو يومين بعد
5 تطبيق اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ على الخنازير تمثل كل نقطة قيمة تم تحديدها لكل حيوان. تمثل مجموعة التحكم السلبية (عينة مقارنة سلبية)؛ وتمثل مجموعة التحكم الخاص بالاختبار (عينة
اختبار تويتم تلقيح الحيوانات مرة واحدة باستخدام ‎x1) RacH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1)؛ أو يتم التلقيح مرتين باستخدام لقاح ‎x2) RacH-SE-70-p455-H3‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1)؛ أو مرتين باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير غير المنشط ‎X2)‏ مرة قتل).
الشكل رقم 24: تم إجراء عملية إعادة تشجيع للنتائج من ‎interferon gamma lls (gpd)‏ ((171)-اختبار البقعة الخاصة بامتصاص المناعة المرتبطة بالإنزيم ‎enzyme-linked‏ ‎(ELISpot) immunosorbent spot assay‏ للخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي ‎peripheral‏ ‎(PBMCs) blood mononuclear cells‏ بعد 7 أيام ‎dang‏ مرتين من التلقيح. (أ)» مجموعة عينة مقارنة لم يتم تلقيحها؛ (ب) التلقيح مرتين باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير غير
0 المنشطة؛ (ج)؛ التلقيح مرة واحدة باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎¢RacH-SE-70-p455-H3‏ 5 )3( التلقيح مرتين باستخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎dually .RacH-SE-70-p455-H3‏ _لحيوانات التي تم تلقيحها مرة واحدة فقط باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ فإن إعادة التحفيز تكون مناظرة ل 7 أيام بعد عملية التلقيح الأولى. تمثل كل نقطة القيمة المحددة لكل حيوان
5 خاص بنقطة زمنية محددة وبعد إعادة التحفيز باستخدام وسيلة حث معينة. ولكي يتم إعادة التحفيز» يتم استخدام فيروس أنفلونزا ‎A‏ راصة دموية ناتج عودة الارتباط والذي تم التعبير عنه في الخنازير المناظر لمولد ضد لقاح 113 في فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎(HAV) RacH-SE-70-p455-H3‏ والتي تم التعبير عنها بصورة ناتجة عن عودة الارتباط في فيروس أنفلونزا ‎A‏ راصة دموية من الخنازير المناظر ل 113 من سلالة الاختبار و ‎Jl) HALCH‏
0 بي ام أي ‎«(RPMI‏ من ناقل فيروس الهربس ألفا للخيول 1 مفرغ من ‎RacH-SE‏ (فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎«(free‏ ولقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ (فيروس الهريس ألفا للخيول ‎((H3-1‏ ‏وسلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ اتش3ان2 ‎H3N2‏ من الخنزير من ‎(H3N2)‏ 8452-14 ومادة طافية ‎supernatant‏ من خلايا غير مصابة بالعدوى تم استخدامها لكي يتم إنماء 2452-14 ‎pl)‏ دي سي كي ‎(MDCK‏ أو تم التعبير عنها بصورة ناتجة عن عودة الارتباط في بروتين نووي
‎(NP) nucleoprotein 25‏ من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير. الشكل رقم 25: يوضح خريطة تخطيطية لبلازميد ناقل من ‎.pU1/3-p430-H1hu-BGHKBGH‏
الشكل رقم 26: يوضح خريطة تخطيطية لبلازميد ناقل من ‎.pU70-p455-H1pdm-71K71‏ ‏الشكل رقم 27: عبارة عن توضيح لجينوم الحمض النووي دي أوكسي رببوزي مزدوج الجديلة خطي من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-H1hu-70-p455-‏ ‎Hipdm‏ (فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎(RacH-SE_D‏ مع مناطق إدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 وإطار القراءة المفتوح 70 المكبرة. الشكل رقم 28: ‎Ble‏ عن بقع لوسترن من ‎WAY‏ المصابة مع فيروس الهرس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ أو ‎RacH-SE_D‏ أو ‎RacH-SE‏ أو غير المصابة ‎due)‏ ‏مقارنة). تمت حضانة المخططات الانتساخية إما باستخدام مصل مفرط المناعة من الأرانب متعددة النسيلة ‎polyclonal‏ تم توجيهه في مقابل ‎¢(PA5-34930)H3‏ مصل مفرط المناعة من 0 الأرانب متعددة النسيلة في مقابل ‎(PA5-34929) HI‏ أو الجسم المضاد أحادي النسيلة ‎(Ai2G7)‏ ‏في مضادة البروتين السكري ‎TT‏ لفيروس الهريس ألفا للخيول 1. تم إنتاج كل الأجسام المضادة من الأنماط المتوقعة التي تثبت التعبير الخاص بمولدات الضد المطلوبة من 113 و111 ‎Allg‏ تكون مشابهة لفعالية الانتساخ من فيروسات مختلفة كما ت قياس ذلك من تبقيع مشابه بصورة كبيرة من فيروس الهريس ‎WH‏ للخيول 1 البروتين السكري ‎ATT‏ كل عينات الخلية المصابة. 5 الشكل رقم 29: يوضح نتائج اختبارات تعادل فيروس أنفلونزا ‎A‏ من ‎obi Glad‏ * توضح قضبان الخطأً الانحراف القياسي. الشكل رقم 30: يوضح خريطة البلازميد الناقل ‎.pU70-455-SBVGc_71K71‏ ‏الشكل رقم 31 يوضح عن تتائج تفاعل سلسلة ‎Shade‏ -للانتساخ العكسي ‎reverse‏ ‎(RT-PCR) transcription-polymerase chain reaction‏ الكمي من الماشية من ‎due‏ المقارنة ‎control 0‏ التي لم يتم تلقيحها (اللوحة العلوية) والحيوانات التي تم تلقيحها مرتين باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- -فيروس شمالتبرج ‎Schmallenberg A Virus A‏ (5317)- ‎Ge‏ (اللوحة السفلي) الخاصة باكتشاف ‎asad)‏ الفيروسي من فيروس شمالنبرج م. تم تحديد الحيوانات الفردية بواسطة أنواع مختلفة من الخلايا والرموز لكل مجموعة من الحيوانات غير الملقحة والملقحة على الترتيب. تم توضيح العينة 1 في شكل خط أسود باستخدام دوائر مملوءة 5 باللون الأسود (مناظرة لقضيب أسود في الشكل رقم 27ب). تم توضيح الحيوان 2 في شكل خط رمادي متقطع مع مثلثات مملوءة باللون الرمادي (مناظرة للقضيب الرمادي الخفيف في الشكل رقم
7ب). تم توضيح الحيوان 3 في شكل خط أسود متقطع مع مربعات غير مملوءة (مناطر للقضيب الأبيض في الشكل رقم 27ب). تم توضيح الحيوان 4 في شكل خط رمادي متقطع مع
مُعينات مملوءة باللون الرمادي (مناظرة للقضيب الرمادي الداكن في الشكل رقم 27ب). الشكل رقم 31ب: نتائج اختبارات تعادل المصل من ماشية من عينة مقارنة غير معالجة باللقاح (للوحة العلوية) والحيوانات التي تمت معالجتها باللقاحات مرتين باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- فيروس شمالنبرج م ‎Gem‏ (اللوحة المنخفضة). تم تحديد الحيوانات الفردية بواسطة ألوان قضيب مختلفة/ ألوان ملء (من الأسود وحتى الرمادي الفاتح والرمادي الداكن إلى الأبيض) لكل مجموعة من الحيوانات التي لم يتم تلقيحها على الترتيب. تم توضيح الحيوان 1 في شكل قضيب أسود ‎Hale)‏ للخط الأسود من دوائر ملء في الشكل رقم 27). تم توضيح
0 الحيوان 2 في شكل قضيب رمادي خفيف (مناظراً للخط الرمادي المتقطع من مثلثات مملوءة باللون الرمادي في الشكل رقم 27( تم توضيح الحيوان 3 في شكل قضيب أبيض (مناظراً للخط الأسود المتقطع من مربعات غير مملوءة باللون الرمادي في الشكل رقم 27). تم توضيح الحيوان 4 في شكل قضيب ‎(gale)‏ داكن (مناظراً للخط الرمادي المتقطع من معينات مملوءة باللون الرمادي في الشكل رقم 27).
5 الشكل رقم 32: ‎Sad)‏ تعادل فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول تم توضيح كل النتائج التي تم الحصول عليها من العينات من الحيوان التوضيحي في المجموعة ذات الصلة في نفس الظل الرمادي: تم تمثيل أحد الحيوانات بواسطة قضيب مملوء باللون الأسود؛ وتم تمثيل حيوان آخر بواسطة قضيب مملوء باللون الرمادي الخفيف وتم تمثيل حيوان ثالث باللون بقضيب باللون الأبيض وتم توضيح حيوان ثالث بقضيب رمادي داكن.
0 الشكل رقم 33: تم تحديد عيارات الرئة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنزير في شكل نسيج رئة ‎lung‏ ‎tissue‏ الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين ‎tissue culture infectious dose‏ ‎fifty‏ (101050) /جم خاصة بالحيوانات التي تم قتلها بعد يوم الاختبار بيوم واحد؛ وتم توضيح عينة المقارنة السلبية ومجموعة عينة المقارنة السلبية؛ وعينة الاختبار ومجموعة ‎die‏ الاختبار؛ و2 ‎«IM X‏ ومجموعة تم تلقيحها مرتين بداخل العضلات؛ ويداخل الأنف + بداخل العضلات ؛
5 ومجموعة تم تلقيحها مرة أولى في الأنف ومرة ثانية بداخل العضلات؛ و2 ‎X‏ بداخل الأنف؛ وتم التلقيح مرتين بداخل الأنف. أوضحت تقاط البيانات المتوسطات التي تم الحصول عليها للحيوانات
الفردية. أوضحت الخطوط الأفقية المتوسطة متوسطات المجموعة على الترتيب. أوضح الخطوط العلوية والسفلية الانحرافات القياسية؛ على الترتيب. تكون ‎pail)‏ خاصة بالمقارنات الإحصائية المزدوجة الخاصة بالمجموعات التي تم إعطاؤها ‎Lad‏ يلي وتم حسابها بواسطة اختبار ؛ -باستخدام اختبار ‎Mann-Whitney‏ وهصمتظ ‎GraphPad‏ لبرنامج 7.02 ‎Windows software‏ وعطاعتهة06:001060500. ‎La Jolla,CA 92037,USA‏ وذلك باستخدام إعدادات البرامج القياسية على الترتيب. الشكل رقم 34: تم تحديد عيارات الرئة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنزير في شكل نسيج رئة الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين/ جم خاصة بالحيوانات التي تم قتلها بعد يوم الاختبار بثلاثة ‎abl‏ وتم توضيح ‎due‏ المقارنة السلبية ومجموعة ‎due‏ المقارنة السلبية؛ وعينة 0 الاختبار ومجموعة عينة الاختبار؛ و2 ‎X‏ بداخل العضلات»؛ ومجموعة تم تلقيحها مرتين بداخل العضلات؛ ويداخل الأنف + ‎daly‏ العضلات؛ ومجموعة تم تلقيحها مرة أولى في الأنف ومرة ثانية بداخل العضلات؛ و2 ‎x‏ بداخل الأنف؛ وتم التلقيح مرتين بداخل الأنف. أوضحت نقاط البيانات المتوسطات التي تم الحصول عليها للحيوانات الفردية. أوضحت الخطوط ‎LY)‏ ‏المتوسطة متوسطات المجموعة على الترتيب. أوضح الخطوط العلوية والسفلية ‎Clady)‏ ‏5 القياسية؛ على الترتيب. تكون القيم ‎p‏ خاصة بالمقارنات الإحصائية المزدوجة الخاصة بالمجموعات التي تم إعطاؤها فيما يلي وتم حسابها بواسطة اختبار + باستخدام اختبار ‎Mann-Whitney‏ ‎GraphPad Prism®‏ لبرنامج 7.02 ‎La .GraphPad Software,Inc 3 Windows software‏ ‎Jolla,CA 92037,USA‏ وذلك باستخدام إعدادات البرامج القياسية على الترتيب. الشكل رقم 35: تم تحديد عيارات الرئة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنزير في شكل نسيج رئة الجرعة 0 المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين/ جم خاصة بالحيوانات التي تم قتلها بعد يوم الاختبار بخمسة ‎ll‏ وتم ‎mung‏ عينة المقارنة السلبية ومجموعة ‎die‏ المقارنة السلبية؛ وعينة الاختبار ومجموعة ‎due‏ الاختبار؛ و2 ‎X‏ بداخل العضلات»؛ ومجموعة تم تلقيحها مرتين بداخل العضلات؛ ويداخل الأنف + ‎daly‏ العضلات؛ ومجموعة تم تلقيحها مرة أولى في الأنف ومرة ثانية بداخل العضلات؛ و2 “بداخل الأنف؛ وتم التلقيح مرتين ‎daly‏ الأنف. أوضحت نقاط 5 البيانات المتوسطات_ التي تم الحصول عليها للحيوانات الفردية. أوضحت الخطوط ‎LY)‏ ‏المتوسطة متوسطات المجموعة على الترتيب. أوضح الخطوط العلوية والسفلية ‎Clady)‏
القياسية؛ على الترتيب. تكون القيم ‎p‏ خاصة بالمقارنات الإحصائية المزدوجة الخاصة بالمجموعات التي تم إعطاؤها فيما يلي وتم حسابها بواسطة اختبار + باستخدام اختبار ‎Mann-Whitney‏ ‎GraphPad Prism®‏ لبرنامج 7.02 ‎La .GraphPad Software, Inc gy Windows software‏ ‎Jolla,CA 92037,USA‏ وذلك باستخدام إعدادات البرامج القياسية على الترتيب.
الشكل رقم 36: تم توجيه النتائج التي تم الحصول عليها من اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإتزيم ‎(ELISA) enzyme-linked immunosorbent assay‏ الخاص بالجلويولين المناعي من الخنازير في 6 (الجلوبيولين المناعي جاما) نحو مولد ضد 113 للراصة الدموية فيروس أنفلونزا ‎A‏ ‏من الخنازير التي تم التعبير عنها بشكل ناتج عودة لارتباط والتي تكون متجانسة بالنسبة ل 113 التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة اللقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني
0 | 011588م8. وبالنسبة للاختبار فإن كل عين تمت تغطيتيها ب 100 نانو ‎aha‏ من 113 الذي تم التعبير عنه بصورة ناتجة ‎sage‏ الارتباط. تم قياس العينات ‎hag)‏ يعني احتساب متوسطات العينات من القياسات الزوجية وتم حساب قيم المجموعة من متوسطات العينة وهي على الترتيب عينة المقارنة للاختبار ومجموعة المقارنة في عينة الاختبار (تم استخدامها في شكل عينة مقارنة سلبية)؛ و2 * بداخل العضلات؛ ومجموعة تم تلقيحها مرتين أولاً بداخل العضلات؛ ويداخل الأنف
5 + بداخل العضلات والمجموعة التي تم تلقيحها في اللقاح الداخلي الأول والتلقيح بداخل العضلات ثانيا؛ و2 بداخل الأنف؛ من المجموعة التي تم تلقيحها مرتين بداخل الأنف. توضح قضبان الخطاً الاتحرافات العيارية. تم توضيح ‎all‏ الدراسة ‎(SD) Study days‏ في مفتاح الشلك على اليمين من المخطط. الشكل رقم 37: تم توجيه النتائج التي تم الحصول عليها من اختبار الامتصاص المناعي المرتبط
0 بالإنزيم الخاص بالجلوبولين المناعي من الخنازير في 6 (الجلوبيولين المناعي جاما) نحو مولد ضد 113 للراصة الدموية فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم التعبير عنها بشكل ناتج عودة لارتباط والتي تكون متجانسة بالنسبة ل 113 التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة اللقاح فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎dually \RacH-SE_B‏ للاختبار فإن كل عين تمت تغطيتها ب 100 نانو جرام من 113 الذي تم التعبير عنه بصورة ناتجة عودة الارتباط. تم قياس
5 العينات زوجياً؛ يعني احتساب متوسطات العينات من القياسات الزوجية وتم حساب قيم المجموعة من متوسطات العينة وهي على الترتيب عينة المقارنة للاختبار ومجموعة ‎Akal‏ في عينة
الاختبار (تم استخدامها في شكل عينة مقارنة سلبية)؛ و2 ‎X‏ بداخل العضلات؛ ومجموعة تم تلقيحها مرتين أولاً بداخل العضلات؛ وبداخل الأنف + بداخل العضلات والمجموعة التي تم تلقيحها في اللقاح الداخلي الأول والتلقيح بداخل العضلات ثانيا؛ و72 بداخل ‎oY)‏ من المجموعة التي تم تلقيحها مرتين بداخل الأنف. توضح قضبان الخطاً الانحرافات العيارية. تم توضيح أيام الدراسة في مفتاح الشكل على اليمين من المخطط.
الشكل رقم 38: عبارة عن نتائج اختبار البقعة الخاصة بامتصاص المناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة يجاما ‎interferon gamma-specific enzyme-linked immunosorbent spot assay‏ ‎(IFNy ELISpot)‏ تمت تنقية الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من الدم وتم أخذها من حيوان الدراسة عند يوم الدراسة 28. يتم إعادة تقدير الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي مرة ثانية إما 0 باستخدام سلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من ‎H3N2‏ ل ‎R452-14‏ عند المضاعفة على العدوى ‎(MOI) multiplicity on infection‏ ب 1 ‎H3N2)‏ عند المضاعفة على العدوى ب1) أو باستخدام مولد الضد فيروس أنفلونزا ‎HZ A‏ من الخنازير الذي تم التعبير ‎die‏ بصورة ناتجة عن عودة الارتباط والذي يكون مشابهاً ل 113 الذي تم التعبير عن بواسطة سلسلة لقاح فيروس الهريس ألا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ عند تركيز من 1 ميكرو جرام/مل (113: 1 5 ميكرو جرام/مل) وباستخدام الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي؛ فقد تم إجراء اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما وتمت معالجة القيم التي تم الحصول عليها عند 10 ‎A‏ 6 خلية وتم الحساب في شكل متوسط لكل مجموعة؛ على الترتيب. وعينة الاختبار ومجموعة مقارنة عينة الاختبار (التي تم استخدامها في شلك عينة مقارنة سلبية)؛ 2* في العضلات؛ والمجموعة التي تم تلقيحها مرتين في العضلات؛ وبداخل الأنف + في العضلات 0 والمجموعة الأخرى قد تم تلقيحها أولاً في الأنف وثانيا في العضلات و2*بداخل الأنف؛ والمجموعة
الأخرى قد تم تلقيحها مرتين في الأنف. توضح قضبان الخطأً الانحرافات العيارية. الشكل رقم 39: عبارة عن نتائج اختبار البقعة الخاصة بامتصاص المناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة بإنترفيرون جاما. تمت تنقية الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي وتم أخذها من حيوان الدراسة عند يوم الدراسة 28. يتم إعادة تقدير الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي مرة ثانية إما 5 باستخدام سلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من ‎H3N2‏ ل ‎R452-14‏ عند المضاعفة على العدوى ب 1 ‎H3N2)‏ عند المضاعفة على العدوى ب1) أو باستخدام مولد الضد فيروس أنفلونزا
‎A‏ 113 من الخنازير الذي تم التعبير ‎die‏ بصورة ناتجة عن عودة الارتباط والذي يكون مشابهاً ل 3 الذي تم التعبير عن بواسطة سلسلة لقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ عند تركيز من 1 ميكرو جرام/مل ‎1H3)‏ 1 ميكرو جرام/مل) وياستخدام الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي؛ فقد تم إجراء اختبار البقعة الماصة للمناعية المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما وتمت معالجة القيم التي تم الحصول عليها عند 10 ‎OM‏ خلية وتم الحساب في شكل متوسط لكل مجموعة؛ على الترتيب. وعينة الاختبار ومجموعة مقارنة عينة الاختبار (التي تم استخدامها في شلك عينة مقارنة سلبية)؛ 2* في العضلات؛ والمجموعة التي تم تلقيحها مرتين في العضلات؛ وبداخل الأنف+ في العضلات والمجموعة الأخرى قد ت تلقيحها أولاً في الأنف ‎Lily‏ في العضلات و2*بداخل الأنف؛ والمجموعة الأخرى قد تم تلقيحها مرتين في 0 الأنف. توضح قضبان الخطأً الانحرافات العيارية. يقوم الاختراع الحالي بحل المشكلات الموجودة في الفن السابق ويوفر سمة تقدم مميزة في حالة الفن . وبصفة عامة؛ يوفر الاختراع الحالي متواليات معزز/ حمض نووي معزز ومتواليات تشتمل على 5 0600عم4 (متوالية بهوية رقم 1) أو 014006004 (متوالية بهوية رقم 2) أو متواليات نيوكليوتيد متممة ‎complementary nucleotide sequences‏ منها أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد ‎nucleotide‏ متممة منها حيث تؤيد متوالية المعزز المذكورة إلى التعبير عن متوالية النيوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل الاهتمام ويفضل الجين محل الاهتمام ويفضل أكثر المتوالية المشفرة ‎Algal‏ الضد. 0 في سمة معينة فإن الشظية الوظيفية أو المشتق يكون له طول من 550 نيوكليوتيد. ويفضل 500؛ 490 480 470 460 455 450 445 440 435 434 433 432 431 430 نيوكليوتيد والأكثر تفضيلاً 455 أو 430 نيوكليوتيد. في سمة أخرى» فإن الشظية الوظيفية أو المشتق يكون لها طول بين 430 إلى 550 نيوكليوتيد. من 430 إلى 500 نيوكليوتيد أو 430 إلى 0 نيوكليوتيد. يفضل أن تكون الشظية الوظيفية بها تطابق و/أو تشابه في المتوالية أو مشابهة 5 في المتوالية من 770 780 785 ويفضل 790 791 792 793 794 ويفضل أكثر
195 96 197 قوى ‎J99‏ 799.1 799.2 799.3 وو 995 799.6 99.7 99.8 799.9. في سمة محددة تتم زيادة التعبير. في ‎daw‏ محددة» فإن الشظية الوظيفية تكون عبارة عن جزءِ مقطوع من 40806600 (المتوالية بهوية رقم 1) أو متوالية النيوكليوتيد منها وبفضل كيان المتوالية والذي يكون به (على الأقل) 772 من الطول الكامل (أو أكثر). يفضل أن تكون الشظية الوظيفية من 4080600 (المتوالية بهوية رقم 1) ‎Ble‏ عن شظية تم تحديدها بأنها ‎pA30‏ (المتوالية بهوية رقم 3). وفي سمة ‎(AT‏ يكون التشابه في المتوالية (على الأقل) عبارة عن 770 780 785 ويفضل 390 391 92 093 94 ويفضل أكثر من 95 96ت 97 98 99 399.1 7992 99.3 99.4 5+ 99.6 99.7 799.8 199.9. 0 في ‎dew‏ محددة» فإن الشظية الوظيفية تكون عبارة عن ‎ein‏ مقطوع من 014006004 (المتوالية بهوية رقم 2) أو متوالية النيوكليوتيد منها ويفضل كيان المتوالية والذي يكون به (على الأقل) 778 من ‎shall‏ الكامل (أو أكثر). يفضل أن تكون الشظية الوظيفية من 0014006004 (المتوالية بهوية رقم 2) عبارة عن شظية تم تحديدها بأنها 455م (المتوالية بهوية رقم 4). وفي سمة أخرى يكون التشابه في المتوالية (على الأقل) عبارة عن 770 780 785 ويفضل 7290 791 792 5 293 294 ويفضل أكثر من 95ت 96 397 198 399 99.1 99.2 799.3 4.؛ و9 99.6 997 799.8 199.9. يوفر الاختراع الحالي ‎Load‏ متواليات معزز/ متوالية حمض نووي منظمة تشتمل على 0430 (متوالية بهوية رقم 3) أو 455 (متوالية بهوية رقم 4) أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها حيث تؤيد متوالية المعزز 0 المذكورة إلى التعبير عن متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام وبفضل الجين محل الاهتمام ويفضل أكثر المتوالية المشفرة لمولد الضد. يفضل أن يكون بالشظية الوظيفية تشابه في المتوالية ‎sequence homology‏ أو مشابهة في المتوالية ‎sequence identity‏ من 70 380 85 وشفضل 7290 791 7092 ‎J93‏ 294 ويفضل أكثر 395 196 ‎J98 J97‏ 399 199.1 099.2 99.3 99.4 299.5 399.6 299.7 7299.8 299.9. في سمة 5 محددة تتم زيادة التعبير.
يتعلق الاختراع الحالي أيضا بكاسيت تعبير يشتمل على متوالية معزز/ متوالية حمض نووي منظمة
تم اختيارها من المجموعة المكونة من: 80600م4 (متوالية بهوية رقم 1) 5 ‎pMCP6004‏ (متوالية
بهوية رقم 2) ومتواليات النيوكليوتيد المتممة منها والشظية الوظيفية ومشتق وظيفي منها ومتواليات
النيوكليوتيد المتممة منها و430م (المتوالية بهوية رقم 3) و0455 (المتوالية بهوية رقم 4( ومتوالية النيوكليوتيد التممة منها والشظية الوظيفية منها والمشتق الوظيفي منها ومتواليات النيوكليوتيد
المتممة منهاء
‎Cua‏ يكون المعزز قد تم ربطه بصورة فعالة مع المتوالية محل الاهتمام ويفضل الجين محل
‏الاهتمام أو المتوالية المشفرة لمولد الضدء ‎Juang‏ غير المتجانسة و/أو المتوالية خارجية المنشاً
‏محل الاهتمام؛ الجين محل الاهتمام والمتوالية المشفرة ‎algal‏ الضد.
‏0 حيث تؤدي متوالية المعزز المذكورة/ متوالية الحمض النووي المنظمة إلى التعبير عن متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام؛ وبفضل الجين محل الاهتمام وبفضل أكثر متوالية مشفرة لمولد ‎call‏ ‏حيث أن المتوالية المذكورة يفضل أن تكون عبارة عن متوالية معزز غير متجانسة / متوالية حمض نووي منظمة ويفضل أكثر متوالية معزز خارجية المنشاً / متوالية حمض نووي منظمة. في سمة محددة تتم زيادة التعبير.
‏5 في سمة محددة فإن كاسيت التعبير يكون عبارة عن كاسيت تعبير غير متجانس و/أو كاسيت تعبير خارجي المنشاً. في سمة محددة أخرى؛ تكون متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة عبارة عن متوالية حمض نووي ناتجة عودة الارتباط أو متوالية حمض نووي غير متجانسة و/أو متوالية حمض نووي خارجية المنشاً / متوالية حمض نووي منظمة. يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بناقل مثل الناقل الفيروسي أو البنية الفيروسية التي تشتمل على
‏0 كاسيت تعبير طبقاً للاختراع الحالي. يفضل أن يكون الناقل المذكور مفيداً لإنتاج تركيبة مولدة للمناعة أو لقاح. في سمة ‎«gal‏ يتعلق لا اختراع بناقل ‎Jie‏ الناقل الفيروسي أو البنية الفيروسية التي تشتمل على كاسيت تعبير يشتمل على متوالية معزز/ متوالية حمض نووي منظمة مختارة من المجموعة التي تتكون من: 86600م4 (متوالية بهوية رقم 1( 5 ‎pMCPO004‏ ( متوالية بهوية رقم 2) و ومتواليات
‏5 النيوكليوتيد المتممة منها والشظية الوظيفية ومشتق وظيفي منها ومتواليات النيوكليوتيد المتممة منها
و 8430 (المتوالية بهوية رقم 3) و455م (المتوالية بهوية رقم 4) ومتوالية النيوكليوتيد التممة منها
والشظية الوظيفية منها والمشتق الوظيفي منها ومتواليات النيوكليوتيد المتممة منهاء
‎Cua‏ يكون المعزز قد تم ربطه بصورة فعالة مع المتوالية محل الاهتمام ويفضل الجين محل
‏الاهتمام أو المتوالية المشفرة لمولد الضدء وبفضل غير المتجانسة و/أو المتوالية خارجية المنشاً
‏5 محل الاهتمام؛ الجين محل الاهتمام والمتوالية المشفرة لمولد الضد.
‏حيث تؤدي متوالية المعزز المذكورة/ متوالية الحمض النووي المنظمة إلى التعبير عن متوالية
‏النيوكليوتيد محل الاهتمام؛ وبفضل الجين محل الاهتمام وبفضل أكثر متوالية مشفرة ‎call Algal‏
‏حيث أن المتوالية المذكورة يفضل أن تكون عبارة عن متوالية معزز غير متجانسة / متوالية
‏حمض نووي منظمة ويفضل أكثر متوالية معزز خارجية المنشاً / متوالية حمض نووي منظمة. في 00 سمة محددة تتم زيادة التعبير. يفضل أن يكون الناقل المذكور مفيداً لإنتاج تركيبة مولدة للمناعة أو
‏لقاح.
‏يتعلق الاختراع الحالي بناقل(تعبير) غير متجانس مثل الناقل الفيروسي أو البلازميد الخاص بتلقيح
‏حمض دي أوكسي رببوزي الذي يشتمل على حمض نووي منظم/ متوالية معزز تشتمل على
‏0 (متوالية بهوية رقم 1 ) و/أو 004006004 (متوالية بهوية رقم 2) أو متوالية نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية مها أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو
‏0 (متوالية بهوية رقم 3) و/أو 455 (متوالية بهوية رقم 4) أو متوالية نيوكليوتيد متممة منها أو
‏شظية وظيفية منها أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منهاء حيث تؤدي متوالية
‏الحمض النووي المنظمة المذكورة/ متوالية المعزز إلى الانتساخ أو التعبير عن المتوالية محل
‏الاهتمام أو الجين محل الاهتمام أو المتوالية المشفرة لمولد الضد. في سمة محددة؛ تتم زيادة 0 الانتساخ أو التعبير للمتوالية المذكورة محل الاهتمام أو الجين محل الاهتمام أو مولد الضد المشفر
‏للمتوالية. يفضل أن يكون الناقل المذكور مفيداً لإنتاج تركيبة مولدة للمناعة أو لقاح.
‏في سمة محددة يكون الناقل عبارة عن ناقل ناتج عودة الارتباط غير متجانس و/أو ناقل خارجي
‏المنشأً. في سمة محددة ‎(GAT‏ تكون متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة عبارة عن
‏متوالية حمض نووي ‎sage dail‏ الارتباط أو متوالية حمض نووي غير متجانسة و/أو متوالية 5 حمض نووي خارجية المنشأ / متوالية حمض نووي منظمة.
في سمة محددة من كاسيت التعبير طبقاً للاختراع الحالي و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي؛ يكون الشظية الوظيفية أو المشتق (من متوالية المعزز متوالية الحمض النووي المنظمة) يكون بها تشابه في المتوالية أو تطابق في المتوالية من 70 « 780 785 ويفضل 090 91 792 93 794( وبفضل أن أكثر من 95ت 96ت 397 398 399 99.1 7992 799.3
994 99.5 99.6 799.7 199.8 199.9. في سمة محددة أخرى من الاختراع فإن كاسيت التعبير طبقاً للاختراع و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي والشظية الوظيفية؛ المشتق (من متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة) يكون له طول من 550 نيوكليوتيد. ويفضل 500 490 480 470 460 455 450 445 440
435 434 433 432 431 430 من النيوكليوتيدات» ويفضل أكثر 455 أو 430 0 نيوكليوتيد. في سمة محددة أخرى من الاختراع فإن كاسيت التعبير طبقاً للاختراع و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي والشظية الوظيفية؛ المشتق (من متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة) يكون له طول بين 430 إلى 550 نيوكليوتيد. 430 إلى 500 نيوكليوتيد أو 430 إلى 480 نيوكليوتيد. في سمة محددة ‎GAT‏ من كاسيت التعبير طبقاً للاختراع الحالي و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي؛ يكون الشظية الوظيفية أو المشتق (من متوالية المعزز متوالية الحمض النووي 5 المنظمة) يكون بها تشابه في المتوالية أو تطابق في المتوالية من 70 7 780 785 ويفضل 0 291 292 793 194 ويفضل أن أكثر من 95 396 97 98 ‎J99‏ ‏799.1 799.2 399.3 99.44 99.5 199.6« 99.7 799.8 199.9. في سمة محددة من الاختراع يكون كاسيت التعبير طبقاً للاختراع و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي والشظية الوظيفية؛ أو المشتق (من متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة) عبارة عن 0 جز مقطوع من ‎4pgG600‏ (المتوالية بهوية رقم 1) أو متوالية نيوكليوتيد متممة منها ويفضل هوية المتوالية التي تكون بها (على الأقل) 772 من الطول الكامل (أو أكثر من ذلك). يفضل أن تكون الشظية الوظيفية المذكورة من 80600م4 (المتوالية بهوية رقم 1) عبارة عن شظية تم تحديدها بأنها 0 (المتوالية بهوية رقم 3). في سمة محددة من الاختراع يكون كاسيت التعبير طبقاً للاختراع و/أو الناقل طبقاً للاختراع الحالي 5 والشظية الوظيفية؛ أو المشتق (من متوالية المعزز / متوالية الحمض النووي المنظمة) عبارة عن ‎sin‏ مقطوع من 011006004 (المتوالية بهوية رقم 2) أو متوالية نيوكليوتيد متممة منها ويفضل
هوية المتوالية التي تكون بها (على الأقل) 778 من الطول الكامل (أو أكثر من ذلك). يفضل أن
تكون الشظية الوظيفية المذكورة من ‎pMCPO004‏ (المتوالية بهوية رقم 2) عبارة عن شظية تم
تحديدها بأنها 0455 (المتوالية بهوية رقم 4).
في سمة محددة إضافية من كاسيت التعبير طبقاً للاختراع الحالي و/أو الناقل طبقاً للاختراع فإن كاسيت التعبير المذكور و/أو الناقل يشتمل على واحدة أو أكثر من المتواليات المنظمة مثل إشارة
الإنهاء وإشارة المعالجة ببولي أدينيل أو العنصر المنظم مثل مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية
.a2 peptide in ‏و/أو‎ (IRES) internal ribosome-entry sites
في سمة محددة يكون الناقل طبقاً للاختراع الحالي عبارة عن ناقل غير متجانس و/أو ناقل خارجي
المنشاً.
0 في سمة محددة أخرى من الاختراع الحالي يكون الناقل طبقاً للاختراع الحالي عبارة عن ناقل فيروسي وبفضل أن يتم اختياره من مجموعة تتكون من فيروسات هربسية مثل الفيروس الهريسي ألما من الخيول ‎ol‏ والفيروس الهريسي ألفا من الخيول 4 والفيروسات الحماقية ‎varicelloviruses‏ ‏الأخرى مثل فيروس داء الكلب الكاذب أو فيروس الهريس ألفا البقري 1 (الفيروس الهريسي البقري الكاذب 1 1 ‎(Bovine Herpesvirus‏ الفيروسات الغدية ‎Jie (AdV) Adenoviridae‏ الفيروس
5 الغدي من الكلاب؛ والفيروسات المرتبط بالفيروسات الغدية ‎Jie Adeno-associated viridae‏ الفيروس العصوي ‎Baculoviridae‏ والفيروسات القهقرية ‎Jie Lentiviridae‏ الفيروس الرجعي ‎Retroviruses‏ وفيروس الجدري ‎ -Poxviridae‏ سمة محددة أكثر فإن الناقل الفيروسي المذكور يكون عبارة عن عضو من عائلة الفيروسات الهريسية وبفضل من جين الفيروسات الهررسية ألفا ويفضل من الجنس الفرعي من الفيروسات الحماقية؛ ويفضل أكثر أن يكون الناقل المذكور عبارة
0 عن فيروس هرسي ألفا 1. يتعلق الاختراع ‎Mall‏ بطريقة لإنتاج ناقل» ويفضل ناقل فيروسي والتي تشتمل على: أ-توفير متوالية معزز و/أو متوالية حمض نووي منظمة طبقاً للاختراع الحالي؛
ب- تكامل متوالية المعزز المذكور من الخطوة أ) بداخل الصورة الأساسية للناقل المشتقة من الفيروس والتي يتم اختيارها من مجموعة تتكون من: فيروسات هريسية مثل الفيروس الهربس ألفا 1
5 الخاص بالخيول؛ والفيروس الهريس ‎Wl‏ 4 الخاص بالخيول والفيروس الهريسي مثل الفيروس
الهريس ألفا 1 الخاص بالخيول (فيروس داء الكلب الكاذب) والفيروس الهريسي البقري 1 الفيروس hg ‏الهريسي ألفا من الأبقار 1 والفيروس الغدي مثل الفيروس الغدي الكلبي والفيروسات الصغيرة مثل‎ ‏الفيروسات المرتبطة بالغدة والفيروسات العصوية والفيروسات الرجعية وفيروسات الجدري ويفضل‎ ‏الفيروسات الأساسية من الناقل المذكور والتي تم اشتقاقها من الفيروسات الهريسية ويفضل الصورة‎ ‏الأساسية من الناقل المذكور والتي تكون فيروس الهربس ألفا للخيول 1 أو فيروس الهريس ألفا من‎ .4 ‏الخيول‎ 5 ‏تتميز‎ eukaryotic ‏حقيقية النواة‎ host cell line ‏يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بسلالة خلية عائلة‎ ‏بأنها قابلة لانتساخ الناقل طبقاً للاختراع الحالي» ويفضل أن تكون سلالة الخلية العائلة المذكورة‎ ‏عبارة عن سلالة خلية ثديية أو سلالة خلية حشرية ويفضل أكثر أن تكون عبارة عن سلالة خلية‎ ‏وسلالة خلية آر كي13 81613 وسلالة خلية ام دي بي كي‎ PK/WRL ‏بي كي/دبليو آر ال‎ ‏و5021 وسلالة خلية زائدة‎ «SFY ‏وسلالة خلية‎ VERO ‏سلالة 1-57م وسلالة‎ ST ‏وسلالة‎ 10086 0 ‏و/أو مشتقات منها.‎ MDCK ‏من 52 وسلالة خلية‎ ‏بطريقة لتحضير خلية عائلة؛ تتميز بالخطوات التالية:‎ Load ‏يتعلق الاختراع الحالي‎ ‏أ-نقل العدوى لسلالة خلية عائلة حقيقية النواة طبقاً لعنصر الحماية 21 باستخدام ناقل طبقاً لأي‎ ‏من عناصر الحماية من 9 إلى 19؛‎ ‏ب-زراعة الخلايا المصابة تحت ظروف مناسبة؛‎ 5 ‏ج-التجميع بصورة اختيارية للخلية العائلة.‎ ‏سلالات الخلية العائلة الثديية كما تم وضيحها أعلاه والتي تتم زراعتها بصفة عامة في أوعية‎ ‏مزرعة نسيج بلاستيكي وبتم دمجها في الوسط الخاص بمزرعة الخلية الثديية مثل الوسط الأساسي‎
Earle’s ‏مع أملاح‎ Wily ‏التي تمت‎ (MEM) Minimal Essential Medium ‏عند الحد الأدنى‎ ‏يتم الحفاظ على سلالات الخلية الثديية في‎ (FBS) fetal bovine serum ‏والمصل البقري الجنيني‎ 0 carbon ‏وسيلة الحضانة عند 37 م في جو منتظم تم زيادتها إلى 75 من ثاني أكسيد الكريون‎ deg ‏(د60) وتقريباً عند 780 من الرطوية. تمت زراعة سلالات الخلية المصابة في‎ dioxide ‏الذي تم‎ tissue culture vessels ‏مزرعة النسيج البلاستيكية ويتم غمسها في وسط مزرعة الخلية‎ incubator ‏العدوى له ويتم الحفاظ عليها عند 27 في جو منتظم في وسيلة حضانة‎ Ji ‏يتعلق الاختراع الحالي أيضاً باستخدام متوالية حمض نووي تشتمل على 80600م4(متوالية بهوية‎ 5 ‏رقم 1) أو 004006004 (متوالية بهوية رقم 2) أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية‎ hg
أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منهاء مثل متوالية المعزز» حيث إن متوالية
الحمض النووي المذكورة تؤدي إلى التعبير من متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام ويفضل الجين
محل الاهتمام ويفضل أكثر متوالية مشفرة لمولد الضد. في سمة محددة تتم زيادة التعبير.
يتعلق الاختراع الحالي أيضاً باستخدام متوالية حمض نووي تشتمل على 80600م4(متوالية بهوية
رقم 1) أو 04006004م (متوالية بهوية رقم 2) أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية
أو مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منهاء مثل متوالية المعزز» حيث أن متوالية
الحمض النووي المذكورة تؤدي إلى التعبير من متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام ويفضل الجين
محل الاهتمام ويفضل أكثر متوالية مشفرة لمولد الضد. في سمة محددة تتم زيادة التعبير.
يتعلق الاختراع الحالي أيضاً باستخدام متوالية حمض نووي تشتمل على 80600م4(متوالية بهوية 0 رقم 3) أو 455 (متوالية بهوية رقم 4) أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية أو
مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منهاء مثل متوالية المعزز» حيث أن متوالية
الحمض النووي المذكورة تؤدي إلى التعبير من متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام ويفضل الجين
محل الاهتمام ويفضل أكثر متوالية مشفرة لمولد الضد. في سمة محددة تتم زيادة التعبير.
يتعلق الاختراع الحالي أيضاً باستخدام متوالية حمض نووي تشتمل على 80600م4(متوالية بهوية 5 رقم 3) أو 455 (متوالية بهوية رقم 4) أو متواليات نيوكليوتيد متممة منها أو شظية وظيفية أو
مشتق وظيفي منها أو متواليات نيوكليوتيد متممة منهاء مثل متوالية المعزز» حيث إن متوالية
الحمض النووي المذكورة تؤدي إلى التعبير من متوالية النيوكليوتيد محل الاهتمام ويفضل الجين
محل الاهتمام ويفضل أكثر متوالية مشفرة لمولد الضد. في سمة محددة تتم زيادة التعبير.
يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بطقم يتكون من ناقل طبقاً للاختراع الحالي وخلية (خلايا) عائلة 0 وشكل اختياري مادة (مواد) كاشفة ناقلة؛ كتيب تعليمات
يتعلق الاختراع الحالي أيضاً الناقل طبقاً للإختراع الحالي أو سلالة خلية ‎Able‏ حقيقية النواة طبقاً
للاختراع الحالي أو خلية عائلة حقيقية النواة طبقاً للاختراع لتصنيع تركيبة مولدة للمناعة أو لقاح
وبصورة اختيارية باستخدام المضاعفة على العدوى من 0.01 إلى 0.001.
وبصفة خاصة ولغرض استخدام الناقل الفيروسي فإن سلالات الخلية العائلة الثديية تتم زراعتها 5 وتتم إنماؤها بحيث تلتف بصورة مشتركة أو يكون بها التفاف فرعي بالاعتماد على سلالة الخلية.
يتم خلط الناقل الفيروسي باستخدام كمية مناسبة من وسط المزرعة وبتم التخفيف لكي يتم إنتاج
تنوع خاص بالعدوى (المضاعفة على العدوى) من 0.001 إلى 0.01. تمت إزالة وسط مزرعة الخلية من الخلايا العائلة وتم استبداله باستخدام الوسط المشتمل على ناقل فيروسي مخفف. تمت حضانة مزارع الخلية الملحقة عند 37 درجة ‎[Asie‏ 75 من ثاني أكسيد الكريون لمدة تقريبا من 2 إلى 4 أيام بالاعتماد على سلالة الخلية. ينتج عن انتساخ الناقل الفيروسي تأثير اعتلال خلوي ‎(CPE) cytopathic effect 5‏ والإتلاف المتوقع والوفاة للخلايا. تم تجميع المادة وتم تخزينها في -80
درجة ‎dade‏ وتم تحديد العيارات الفيروسية. يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بتركيبة مولدة للمناعة تشتمل على: أ-كاسيت تعبير طبقاً للاختراع الحالي؛ و/أو ب-ناقل طبقاً للاختراع الحالي؛ و/أو
0 ج-بولي ببتيد يتم التعبير ‎die‏ بواسطة كاسيت تعبير طبقاً للاختراع الحالي و/أو بولي ببتيد يتم التعبير عنه بواسطة الناقل طبقاً للاختراع ‎(Jad‏ مثل الفيروس أو الفيروس الحي المعدل ‎modified live virus‏ أو الجسيم المشابه للفيروس ‎(VLP) virus like particle‏ أو ما شابه ذلك و د-مادة حاملة أو سواغ ‎excipient‏ مقبول بشكل اختياري من الناحية الصيدلانية أو الناحية البيطرية والذي يكون مناسباً للإعطاء في الفم أو بداخل الجلد أو بداخل العضلات أو عبر الأنف.
في سمة محددة يفضل أن تشتمل التركيبة المولدة للمناعة المذكورة على فيروس. في سمة محددة أخرى يفضل أن تشتمل التركيبة المولدة للمناعة المذكورة على فيروس مُعدي ‎[infectious virus‏ يتعلق الاختراع أيضاً بلقاح أو تركيبة صيدلانية تشتمل على: أ-كاسيت تعبير طبقاً للاختراع الحالي؛ و/أو ب-ناقل طبقاً للاختراع الحالي؛ و/أو
ج-بولي ببتيد يتم التعبير ‎die‏ بواسطة كاسيت تعبير طبقاً للاختراع الحالي و/أو بولي ببتيد يتم التعبير عنه بواسطة الناقل طبقاً للاختراع الحالي؛ مثل الفيروس الحي المعدل أو الجسيم المشابه للفيروس أو ما شابه ذلك؛ و د -مادة حاملة أو سواغ مقبول من الناحية الصيدلانية أو الناحية البيطرية والذي يكون مناسباً للإعطاء في الفم أو بداخل الجلد أو بداخل العضلات أو عبر الأنف.
5 «-اللقاح المذكور بشكل اختياري والذي يشتمل على مادة مساعدة.
يتعلق الاختراع الحالي بعلاوة على ذلك بطريقة خاصة بتحضير تركيبة مولدة للضد أو لقاح خاص
بتقليل حدوث أو تقليل شدة واحدة أو أكثر من العلامات الإكلينيكية المرتبطة مع أو التي تسببها
العدوى وتشتمل الطريقة على الخطوات التالية:
‎Jar‏ العدوى ‎ADL‏ خلية عائل حقيقي النواة طبقاً للإختراع الحالي باستخدام ناقل طبقاً للاختراع
‏5 الحالي؛
‏ب-زراعة ‎WAY‏ المصابة تحت ظروف مناسبة؛
‏ج-تجميع الخلايا المصابة و/أو الناقل و/أو مكونات الفيروس؛
‏د-التنقية الاختيارية لما تم تجميعه في الخطوة ج)
‏ه-خلط المادة المجمعة المذكورة مع مادة حاملة مقبولة صيدلانياً. 0 طريقة المعالجة
‏يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بتركيبة مولدة للمناعة أو لقاح لاستخدامه في طريقة تقليل أو منع
‏العلامات الإكلينيكية أو المرض المسبب بواسطة العدوى باستخدام الممرض في الحيوان أو
‏لاستخدامه في الطريقة الخاصة بمعالجة أو الوقاية من العدوى باستخدام الممرض في الحيوان؛
‏ويفضل أن يكون الحيوان المذكور ‎Ble‏ عن حيوان منتج للطعام وبصورة خاصة الخنازير أو الماشية.
‏يوفر الاختراع الحالي أيضاً طريقة لتحصين حيوان مثل الحيوان المنتج للطعام التي تشتمل على
‏إعطاء الحيوان المذكورة تركيبة مولدة للمناعة أو لقاح كما تم وصفه هنا.
‏يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بطريقة لتحصين حيوان مثل الحيوان المنتج للطعام بما في ذلك
‏الخنازير في مضادة مرض إكلينيكي مسبب بواسطة ممرض في الحيوان المذكور؛ تشتمل الطريقة 0 المذكورة على خطوة الإعطاء للحيوان تركيبة مولدة للمناعة طبقاً للاختراع الحالي أو لقاح طبقاً
‏للاختراع ‎dla‏ حيث أن التركيبة المولدة للمناعة أو اللقاح تفشل في التسبب في وجود العلامات
‏الإكلينيكية الخاصة بالعدوى ولكنها تكون قادرة على حث الاستجابة المناعية في الحيوان في
‏مضادة أنواع الممرضات المذكورة.
‏في سمة محددة فإن المعالجة المولدة للمناعة ينتج عنها تقليل حدوث عدوى فيروس محدد في 5 القطيع أو في تقليل شدة العلامات الإكلينيكية المسببة بواسطة أو المرتبطة مع عدوى فيروس
‏محدد .
علاوة على ذلك؛ فإن تحصين الحيوان المنتج للطعام الذي في حاجة للتركيبات المولدة للمناعة كما تم توفيرها هنا ينتج عنه الوقاية من العدوى للحيوان المنتج للمرضى بواسطة عدوى الفيروس. ‎Jai‏ بشكل أكثر ‎Lad‏ أن ينتج عن التحصين استجابة مناعية تستمر لمدة طويلة واستجابة مولدة للمناع في مضادة العدوى الفيروسية المذكورة. سوف يتم فهم أن الفترة الزمنية المذكورة سوف تستمر لأكثر من 2 شهر ويفضل أكثر م 3 أشهر وبفضل أكثر من 4 أشهر ويفضل أكثر م 5 أشهر ويفضل أكثر من 6 أشهر. يجب أيضاً أن يتم فهم أن التحصين يمكن أن يكون فعالاً في كل الحيوانات/ الخاضعين الذين تم تحصينهم. ومع ذلك فإن هذا المصطلح يتطلب أن يكون هناك ‎oy‏ ‏كبير من الحيوانات/ الخاضعين من القطيع قد تم تحصينهم بفعالية. يوفر الاختراع الحالي طريقة خاصة بمعالجة أو الوقاية من العلامات الإكلينيكية المسببة بواسطة 0 الفيروس في حيوان مثل الحيوان المنتج للطعام الذي في حاجة للطريقة المشتملة على إعطاء الحيوان كمية فعالة علاجياً من التركيبة المولدة للمناعة أو اللقاح كما تم وصفه هنا. يفضل أن يتم تخفيض العلامات الإكلينيكية بمقدار 750 على الأقل أو يفضل أكثر بمقدار 760 على الأقل ويفضل أكثر أن تكون بمقدار 770 على الأقل أو حتى يفضل أكثر أن يكون التخفيض بمقدار 780 على الأقل أو يفضل أكثر أن يكون 790 على الأقل ويفضل أيضا أن يكون 795 5 على الأقل والأكثر تفضيلا 7100 بالمقارنة مع حيوان لم تتم معالجته (لم يتم تحصينه) ولكن تمت إصابته فيما بعد بواسطة فيرو أنفلونزا ‎A‏ للخنازير معين. يتعلق الاختراع الحالي كذلك بطقم لتلقيح ‎Olson‏ ويفضل حيوان منتج للطعام ‎Jie‏ الخنزير والماشية في مضادة مرض يرتبط و/أو يقلل من حدوث أو شدة واحد أو أكثر من الأعراض للعلامات الإكلينيكية المرتبطة مع أو المسببة عن الممرض في حيوان يشتمل على: 0 أ) وسيلة تشتيت تقدر على إعطاء لقاح لمريض مذكور؛ و ب) تركيبة مولدة للمناعة طبقاً للاختراع الحالي أو لقاح طبقاً للاختراع الحالي؛ و ج) وبصورة اختيارية كُتيب تعليمات. التعريفات وما لم يتم تحديد خلاف ذلك فإن كل المصطلحات التقنية والعلمية المستخدمة هنا لها نفس 5 المعاني المفهومة بصورة شائعة لذوي المهارة في المجال الذي ينتمي ‎Ad)‏ الاختراع عند زمن إيداعه. يجب أن يكون معنى ومجال المصطلحات واضحاً؛ وعلى الرغم من ذلك؛ وفي ‎Ala‏ وجود أي
— 3 3 — غمود فإن التعريفات التي تم توضيحها هنا تكون لها الأسبقية على أي قاموس أو تعريف خارجي. ‎Lad‏ إذا لم يقتض ‎Glad)‏ خلاف ذلك؛ ستشتمل المصطلحات المفردة على صيغ الجمع وستشتمل مصطلحات الجمع على المفرد. وهنا فإن استخدام "أو" يعني 'و/أو' ما لم يتم توضيح خلاف ذلك. علاوة على ذلك؛ فإن استخدام المصطلح 'مشتملاً على" وأيضاً كل الصور الأخرى مثل " يشتمل على" و"يشمل" لا يكون مقيداً. تم تضمين كل براءات الاختراع والنشرات هنا لغرض الإشارة إليها كمراجع. سوف يستخدم الاختراع الحالي ؛ ما لم يتم توضيح خلاف ‎cell)‏ التقنيات التقليدية الخاص بعلم ‎virology lug yall‏ والكيمياء الجزيثئية ‎molecular biology‏ والكيميائية الدقيقة ‎microbiology‏ ‏وتقنية الحمض النووي دي أوكسي ‎Ge)‏ ناتجة عودة الارتباط وكيمياء البروتين ‎protein‏ ‎ales chemistry 0‏ المناعة ‎Ally immunology‏ تكون في مقدور الماهر في المجال. تم وصف مثل تلك التقنيات بصورة كاملة في المراجع. ‎hil‏ على سبيل المثال» & ‎Sambrook, Fritsch‏ ‎Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Vols.
I, II and III, Second Edition‏ ‎DNA Cloning, Vols.
I and II (D.
N.
Glover ed. 1985); Oligonucleotide‏ ;)1989( ‎Synthesis (M.
J.
Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B.
D.
Hames & S.
J.‏ ‎Higgins eds. 1984); Animal Cell Culture (R.
K.
Freshney ed. 1986); Immobilized Cells 5‏ ‎and Enzymes (IRL press, 1986); Perbal, B., A Practical Guide to Molecular Cloning‏ ‎the series, Methods In Enzymology (S.
Colowick and N.
Kaplan eds., Academic‏ ;)1984( ‎Press, Inc.); Protein purification methods — a practical approach (E.L.V.
Harris and S.‏ ‎Angal, eds., IRL Press at Oxford University Press); and Handbook of Experimental‏ ‎C.
Blackwell eds., 1986, Blackwell 0‏ ل ‎Immunology, Vols.
I-IV (D.
M.
Weir and‏ ‎Scientific Publications‏ وقبل وصف الاختراع الحالي بالتفصيل» يجب أن يتم فهم أن الاختراع الحالي لا يقتصر على الحمض النووي دي أوكسى ‎SH)‏ محددء أو متواليات بولى ببتيد محددة أو متغيرات محددة ‎clea‏ ولكن يمكن أن تختلف تلك المتغيرات بصورة كبيرة. من المفهوم ‎Lad‏ أن المصطلحات 5 المستخدمة هنا هي لأغراض وصف نماذج معينة فقط من الاختراع ولا يُقصد منها أن تكون حصرية. يجب أن تتم ملاحظة ‎oof‏ وكما تم استخدامه في المواصفة وفى عناصر الحماية اللاحقة؛ صور المفرد من علامات التنكير والتعريف تشتمل أيضاً الإشارة إلى الجمع ما لم يتضح من المحتوي خلاف ذلك بصورة واضحة. وبالتالى؛ وعلى سبيل المثال 3 فإن الإشارة إلى ‎A ga”‏ ضد" يشتمل على خليط من اثنين أو أكثر من مولدات الضد ‎Ally‏ تتم الإشارة إليها بأنها 'سواغ' يشتمل 0 على خلائط من اثنين أو أكثر من السواغات وما شابه ذلك.
تعريفات ‎TTA Lill‏ يشير المصطلح ‎Jad‏ كما تم استخدامه هنا في المجال إلى بنية بولي نيوكليوتيد ‎polynucleotide‏ والتي تكون بصورة نمطية عبارة عن بلازميد أو كروموسوم صناعي بكتيري يتم استخدامه لإرسال مادة جينية إلى خلية عائلة. يمكن أن تكون ‎(JH)‏ على سبيل المثال» ‎Sle‏ ‏5 عن بكتريا ‎bacteria‏ فيروسات؛ وملتهمات ‎phages‏ كروموسومات صناعية من البكتيريا ‎bacterial‏ ‎artificial chromosomes‏ وكوزميدات ‎ccosmids‏ أو بلازميدات. يمكن أن تكون النواقل المستخدمة هنا مكونة من أو مشتملة إما على الحمض النووي دي أوكسي رببوزي أو الحمض النووي ‎Gs‏ ‎(RNA) ribonucleic acid‏ في بعض ‎oz ail)‏ فإن الناقل يتكون من الحمض النووي دي أوكسي رببوزي. في بعض النماذج, فإن الناقل يكون عبارة عن فيروس معدي. يشتمل الناقل الفيروسي 0 المذكور على جينوم فيروسي والذي تتم معالجته بطريقة بحيث يحمل الجين الغريب والذي لا يكون له وظيفة في الانتساخ الخاص بالناقل الفيروسي ولا في خلية المزرعة ولا في الحيوان العائل. وطبقاً لسمات معينة من الكشف الحالي؛ فإن الناقل يمكن استخدامه في السمات المتعددة مثل الانتقال المجرد الخاص بالمادة الجينية؛ وذلك للنقل إلى خلايا عائلة أو الكائنات الدقيقة؛ لاستخدامه في شكل لقاحات؛ على سبيل المثال؛ لقاحات الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي أو أغراض التعبير عن الجين. يكون التعبير عن الجين عبارة عن مصطلح يصف التخليق الحيوي الخاص بالبروتين في خلية كما تم توجيهه بواسطة متوالية بولي نيوكليوتيد محددة والتي يطلق عليها الجين. في سمة محددة فإن الناقل يمكن أن يكون عبارة عن "ناقل تعبير" والذي يكون ‎Sle‏ ‏عن ناقل قادر على توجيه التعبير الخاص بالبروتين الذي يمكن أن يتم تشفيره بواسطة واحد أو أكثر من الجينات التي يتم حملها بواسطة الناقل عندما تكون موجودة في وسط مناسب. 0 يمكن أن تكون النواقل وطرق تحضيرها و/أو استخدام ‎Jl)‏ (أو نواتج ‎sage‏ الارتباط ‎(recombinants‏ الخاصة بالتعبير عبارة عن طرق واستخدامات مشابهة للطرق التي تم الكشف عنها في: البراءات الأمريكية أرقام: 4,603,112« 4,769,330 5,174,993 5,505,941 3 5494807 4.722.848 5,942,235 5.364.773 5,762,938 2, 5,942,235, 382,425 « ونشرات ‎alla‏ براءة الاختراع الدولي رقم 16716/94
Paoletti, "Applications of pox virus vectors to ¢30018/95 ‏ودقم 39491/96 ورقم‎ 5 vaccination: An update, "PNAS USA 93: 11349-11353, October 1996; Moss, "Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression, vaccination, and
— 3 5 — ‎safety,” PNAS USA 93: 11341-11348, October 1996; Smith et al.,‏ » البراءة الأمريكية رقم ‎(recombinant baculovirus); Richardson, C. D. (Editor), Methods in 4,745,051‏ ‎Molecular Biology 39, "Baculovirus Expression Protocols" (1995 Humana Press Inc.);‏ ‎Smith et al., "Production of Human Beta Interferon in Insect Cells Infected with a‏ ‎Baculovirus Expression Vector”, Molecular and Cellular Biology, December, 1983, 5‏ ‎Vol. 3, No. 12, p. 2156-2165; Pennock et al., "Strong and Regulated Expression of‏ ‎Escherichia coli B-Galactosidase in Infect Cells with a Baculovirus vector, "Molecular‏ ‎¢and Cellular Biology March 1984, Vol. 4, No. 3, p. 406; EPAO 370 573;‏ ونشرة الطلب الأمريكي رقم 920,197 المودع في 16 أكتوير 1986 ونشرة الطلب الأوروبي رقم 265785 ‎(recombinant herpesvirus); Roizman, "The function of 4,769,331 ‏لأمريكية رقم‎ ١ ‏والبراءة‎ 0 herpes simplex virus genes: A primer for genetic engineering of novel vectors,” PNAS ‎USA 93:11307-11312, October 1996; Andreansky et al., "The application of genetically engineered herpes simplex viruses to the treatment of experimental brain tumors,"
PNAS USA 93: 11313-11318, October 1996; Robertson et al., "Epstein-Barr virus vectors for gene delivery to B lymphocytes”, PNAS USA 93: 11334-11340, October 5 1996; Frolov et al., "Alphavirus-based expression vectors: Strategies and applications,"
PNAS USA 93: 11371-11377, October 1996; Kitson et al., J. Virol. 65, 3068-3075, ‏;1991 ونشرة البراءة الأمريكية رقم 5,591,439 ورقم 5,552,143 والطلب_الدولي رقم 8 الذي تمت إجازته في الطلب الأمريكي بالرقم المسلسل 675,556/08 و ‎¢(recombinant adenovirus) 1966 sds 3 ‏وقد تم إيداع كل منهما في‎ 675,566/08 0
Grunhaus et ‏لة‎ 1992, "Adenovirus as cloning vectors," Seminars in Virology (Vol. 3) ‎p- 237-52, 1993; Ballay et al. EMBO Journal, vol. 4, p. 3861-65, Graham, Tibtech 8, ‎April, 1990: Prevec et al., J. Gen Virol. 70, 42434‏ ,85-87 و ‎PCT‏ للطلب الدولي رقم ‎Felgner et al. (1994), J. Biol. Chem. 269, 2550-2561, Science, 259: 1745- ¢11525/91‏ ‎49, 1993; and McClements et al., "Immunization with DNA vaccines encoding 25 glycoprotein D or glycoprotein B, alone or in combination, induces protective immunity ‎in animal models of herpes simplex virus-2 disease", PNAS USA 93: 11414-11420, ‎«October 1996‏ والبراءات الأمريكية أرقام 5,591,639 5,589,466, و5,580,859 ؛ ‎Lads‏ ‏الطلب الدولي رقم 11092/90< ورقم 19183/93< ورقم 21797/94؛ ورقم 11307/95؛ ورقم ‎Analytical Biochemistry 20660/95 0‏ لة ‎Tang et al., Nature, and Furth et‏ المتعلقة بنواقل التعبير الحمض للنووي دي أوكسي ريبوزي من بين أشياء أخرى. انظر أيضاً الطلب الدولي رقم ‎Ju et al., Diabetologia, 41: 736-739, 1998 (lentiviral expression system); ‏ا‎ ): 8 ‏وبراءة الاختراع‎ ¢Fischbachet al. (Intracel) ¢4,945,050 ‏والبراءة الأمريكية رقم‎ ¢Sanford et al
الدولية رقم ¢01543/90 271-283 ‎Robinson et al., Seminars in Immunology vol. 9, pp.‏ ‎(DNA vector systems); Szoka et al‏ ,(1997)؛ والبراءة ‎١‏ لأمريكية رقم 4,394,448 ) ‎method of‏ ‎«McCormick et al ¢(inserting DNA into living cells‏ والبراءة الأمريكية رقم 5,677,178 ‎¢(use of cytopathic viruses)‏ والبراءة ‎١‏ لأمريكية رقم 5,928,913 ‎(vectors for gene delivery)‏ وأيضاً الوثائق الأخرى المذكورة هنا. يشير المصطلح ‎"pug pb JIU‏ كما تم وصفه هنا إلى الفيروس المعدل ‎Linn‏ والذي تتم معالجته بواسطة تقنية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ناتجة عودة الارتباط بطريقة بحيث أن دخوله في خلية العائل الخاص به ينتج ‎aie‏ نشاطاً حيوياً محدداً؛ على سبيل المثال؛ تعبير الجين الانتقالي الذي يتم حمله بواسطة الناقل. في سمة محددة فإن الجين الناقل يكون عبارة عن مولد ضد. يمكن 0 أن يكون الناقل الفيروسي أو لا يكون عبارة عن مكون انتساخ في خلية أو نسيلة أو كائن حي مستهدف. يمكن تحقيق إنشاء الناقل الفيروسي باستخدام أي تقنيات معالجة جينية مناسبة معروفة في المجال ‎Jas All‏ على سبيل المثال وليس الحصرء التقنيات القياسية الخاصة باهتضام إندوكلياز خاص بالتقييد؛ والارتباط والتحويل وتنقية البلازميد وتوالي الحمض النووي دي أوكسي ‎Sion)‏ ونقل 5 العدوى في مزارع الخلية؛ على سبيل المثال» كما تم وصفه في ‎Sambrook et al. (Molecular‏ ‎Cloning: A Laboratory Manual.
Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y. (1989)) or‏ ‎K.
Maramorosch and H.
Koprowski (Methods in Virology Volume VIII, Academic‏ ‎.(Press Inc.
London, UK (2014)‏ يمكن أن يشتمل الناقل الفيروسي على متوالية من الجينوم من أي ‎GIS‏ معروف. يمكن أن يتم 0 تضمين المتواليات في صورتها الأصلية أو يمكن أن يتم تعديلها بأي صورة للحصول على النشاط ‎cold‏ على ‎Ji Jan‏ فإن المتواليات يمكن أن تشتمل على ‎lab‏ حذوفات أو استبدالات. يمكن أن يشتمل الناقل الفيروسي على مناطق تشفير خاصة باثنين أو أكثر من البروتينات محل الاهتمام. على سبيل ‎(JE‏ فإن ‎JU‏ الفيروسي يمكن أن يشتمل على منطقة تشفير خاصة 5 بالبروتين الأول محل الاهتمام ومنطقة تشفير للبروتين الثاني محل الاهتمام. يمكن أن يكون البروتين الأول محل الاهتمام والبروتين الثاني محل الاهتمام عبارة عن اثنين من البروتينات المتشابهة أو المختلفة. في بعض النماذج فإن الناقل الفيروسي يمكن أن يشتمل على منطقة
(مناطق) تشفير خاصة بالبورتين الثالث أو البروتين الرابع محل الاهتمام. يمكن أن يكون البروتين الثالث محل الاهتمام والبروتين الرابع محل الاهتمام عبارة عن اثنين من البروتينات المتشابهة أو المختلفة. يمكن أن يختلف الطول الإجمالي لاثنين أو أكثر من البروتينات محل الاهتمام التي تم تشفيرهما بواسطة ناقل فيروسي. على سبيل المثال؛ فإن الطول الإجمالي لاثنين أو أكثر من البروتينات يمكن أن يكون على الأقل حوالي 200 حمض أميني. وقد يكون على الأقل حوالي 0 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 300 حمض أميني؛ على الأقل ‎Joa‏ 350 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 400 حمض أميني؛ على الأقل ‎Joa‏ 450 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 0 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 550 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 600 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 650 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 700 حمض أميني؛ على الأقل حوالي
0 750 حمض أميني؛ على الأقل حوالي 800 حمض أميني؛ أو أطول. تشتمل النواقل الفيروسية المفضلة على نواقل فيروسية هريسية ‎fie‏ تلك التي تم اشتقاقها من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 أو فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 أو فيروسات حماقية ‎varicelloviruses‏ أخرى مثل فيروس داء الكلب الكاذب أو فيروس الهريس ألفا البقري 1 (الفيروس الهريسي البقري الكاذب 1.
‎Bly 5‏ لسمات محددة من الكشف الحالي؛ فإن المصطلح ‎BU‏ فيروسي" أو بصورة بديلة ‎nl‏ ‏فيروسية" تشير إلى بنية فيروسية ناتجة عودة الارتباط مشتقة من الفيروس ‎(lly‏ تم اختيارها من عائلات من الفيروسات الهريسية مثل فيروس ‎angel‏ ألفا للخيول ‎١1‏ فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 أو فيروسات حماقية مثل فيروس هريسي ‎Wl‏ للخيول 1 (فيروس داء الكلب الكاذب) وفيروس هريسي ‎Wl‏ بقري 1 (فيروس هربسي بقري 1 و الفيروس ‎Wl all‏ من الأبقار 1)
‏0 وفيروس غدي مثل ‎(ug pd‏ غدي من ‎(van Regenmortel et al «ASN‏ وفيروسات صغيرة مثل الفيروسات المرتبطة_بالغدة والفيروسات العصوية والفيروسات ‎Daal‏ أو فيروسات الجدري. ‎http://www ictvonline.org/virustaxonomy.asp Virus Taxonomy: 2015 Release EC 47, )‏ ‎London, UK, July 2015; Email ratification 2016 (MSL #30.‏ تشتمل النواقل الفيروسية المفضلة على نواقل فيروسية هريسية مثل تلك التي تم اشتقاقها من فيروس الهريس ألفا للخيول 1؛
‏5 فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 أو فيروسات حماقية أخرى ‎Jie‏ فيروس داء الكلب الكاذب أو الفيروس الهريسي ألفا من الأبقار 1.
يمكن استخدام المصطلحات ‎JU‏ فيروسي" و"بنية فيروسية" بصورة تبادلية. يشير المصطلح ‎ad‏ كما تم استخدامه هنا إلى حمض نووي ناتج عودة الارتباط مثل البلازميد؛ أو الكروموسوم الصناعي لبكتريا أو الفيروس ناتج عودة الارتباط والذي تم إنشاؤه بصورة صناعية. يشير المصطلح "بلازميد" إلى الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي سيتوبلازمي الذي يعمل على الانتساخ بصورة مستقبلة من الكروموسوم البكتيري بداخل الخلية العائلة البكتيرية. في ‎dow‏ محددة من الاختراع فإن المصطلح "بلازميد" و/أو "بلازميد ناقل" يشير إلى عنصر من تقنية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي ناتج ‎sage‏ الارتباط المفيدة لإنشاء؛ على سبيل المثال؛ كاسيت التعبير الخاص بالإدارج في الناقل الفيروسي. في سمة محددة أخرى فإن المصطلح ‎"uel‏ يمكن أن يتم استخدامه لكي يتم تحديد البلازميد المفيد لأغراض اللقاح للحمض النووي دي أوكسي ريبوزي. 0 وكما تم استخدامه هناء فإن المصطلحات "حمض نووي" و"بولي نيوكليوتيد" يتم استخدامهما بشكل تبادلي وبشيران إلى أي حمض نووي. يشير المصطلح "حمض ‎(gest‏ "متوالية حمض ‎(gest‏ متوالية نيوكليوتيد"» ‎Jo‏ نيوكليوتيد"؛ "متوالية بولي نيوكليوتيد" أو 'متوالية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي" كما تم استخدامها هنا إلى الأوليجيونيوكليوتيد ‎coligonucleotide‏ النيوكليوتيد أو البولي نيوكليوتيد وشظايا وأجزاء منها 5 والحمض النووي دي أوكسي ريبوزي أو الحمض النووي الرببوزي من أصل جنيومي أو أصل تخليقي والذي يمكن أن يكون عبارة عن جديلة منفردة أو جديلة مزدوجة ويمثل جديلة في اتجاه النسخ ‎sense strand‏ أو جديلة في عكس اتجاه النسخ ‎antisense strand‏ يمكن أن تكون المتوالية ‎Ble‏ عن متوالية غير مشفرة ‎non-coding sequence‏ أو متوالية تشفير أو خليط من كل منها. يمكن تحضير متوالية الحمض الأميني من الاختراع الحالي باستخدام تقنيات معروفة لذوي المهارة 0 في المجال. يشتمل المصطلح "حمض نووي” و ‎dof‏ نيوكليوتيد" ‎Load‏ وبصورة محددة على أحماض نووية مكونة من قواعد خلاف الخمسة قواعد الحادثة بشكل طبيعي (أدينين ‎¢adenine‏ جوانين ‎«guanine‏ ‎cthymine (pas‏ سيتوسين ‎cytosine‏ وبوراسيل ‎«(uracil‏ ‏تم استخدام المصطلحات "حمض نووي منظم”» و"عنصر منظم ‎regulatory clement‏ و"عنصر 5 خاص بالتحكم في التعبير" بصورة تبادلية وتشير إلى جزيئات حمض نووي والتي يمكن أن تؤثر على التعبير عن متوالية مشفرة مرتبطة بصوفة فعالية وبصورة خاصة بالكائن العائل. تم استخدام
تلك المصطلحات على نطاق واسع وتغطي كل العناصر التي تعمل على تعزيز الانتساخ المنتظم بما في ذلك المعززات ومتواليات المعزز أو العناصر الأساسية المطلوية للتفاعل الأساسي من بوليميراز ‎polymerase‏ الحمض النووي الريبوزي وعوامل انتساخ ‎transcription factors‏ وعناصر علوية ومحسنات ‎enhancers‏ وعناصر استجابة. تشتمل العناصر التوضيحية في الخلايا أولية النواة ‎prokaryotes 5‏ على معززات ومتواليات مشغل ومواضع ريط ريبوزومات ‎.ribosome binding sites‏ يمكن أن تشتمل العناصر المنظمة ‎Regulatory elements‏ المستخدمة في ‎LIAN‏ حقيقية النواة ‎ceukaryotic cells‏ بدون حثرء على متواليات ‎due‏ المقارنة الانتساخية والمتعلقة بالترجمة؛ ‎Jie‏ ‏المعززات والمحسنات وإشارات ‎splicing signals Jail‏ وإشارات المعالجة ببولي أدينينل ‎polyadenylation signals‏ ووسائل الإنهاء ‎terminators‏ وإشارات التحلل الخاص بالبروتين ‎protein degradation signals 0‏ ومواضع إدخال الريبوزوم الداخلية؛ ومتواليات بيكورنافيروس ‎A 2 picornaviridal‏ وما شابه ذلك والتي يتم توفيرها و/أو تنظيمها للتعبير الخاص بمتوالية تشفير
و/أو إنتاج بولي ببتيد مشفر في ‎Able WA‏ يقوم 'موضع دخول الريبوزوم الداخلي" بوصف المتوالية والتي تقوم بالتحسين الوظيفي لبدء الترجمة الوراثية المستقلة عن الجين 5 من مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية والتي تسمح لاثنين من مركبات السيسترون (إطارات القراءة المفتوحة) بحيث يتم ترجمتها من ناتج الانتساخ المنفرد في خلية الحيوان. يقوم مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية بتوفير موضع دخول الريبوزوم الخاص بالترجمة من إطار القراءة المفتوح بصورة مباشرة في الجزء البعدي منه. وعلى النقيض من الحمض النووي الرببوزي الرسول ‎(mRNA) messenger ribonucleic acid‏ والذي يمكن معالجة ببولي سيسترونيك ‎¢«polycistronic‏ أي ¢ يتم تشفيره ببولي ببتيدات مختلفة متعددة والتي تتم ترجمتها بصورة متتابعة من الحمض النووي الريبوزي الرسول وفي الغالب من الحمض النووي ‎(Shon‏ الرسول في شكل خلايا حيوانية والتي تكون أحادية السيسترون وتكون بمثابة شفرة لتخليق بولي ببتيد واحد فقط. وياستخدام ناتج الانتساخ من بولي سيسترونيك في الخلية حقيقية ‎lol)‏ فإن الترجمة سوف تبداً من الموضع الغلب لبدء الترجمة وهو 5 ” وتنتهي عند أول كودون إيقاف وسوف يتم إطلاق ناتج الانتساخ من الريبوزوم مما ينتج عنه ترجمة لبولي ببتيد مشفر أول فقط في الحمض النووي الريبوزي الرسول. 5 في الخلية حقيقية النواةء فإن ناتج الانتساخ المعالج ببولي سيسترونيك يكون له مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية مرتبط بشكل فعال مع إطار قراءة مفتوح ثاني أو تالي في ناتج الانتساخ لكي
يسمح بالترجمة المتتابعة من إطار القراءة المفتوح البعدي لكي ينتج اثنين أو أكثر من البولي ببتيدات التي يتم تشفيرها بواسطة نفس ناتج الانتساخ. يمكن أن تكون مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية من الطول المتغير ومن المصادر المتعددة؛ على سبيل المثال؛ فيروس التهاب العضلات والدماغ والقلب | ‎((EMCV) Encephalomyocarditis virus‏ الفيروسات البيكورناوية ‎Ae) picornaviruses 5‏ سبيل المثال» فيروس مرض القدم والقم ‎«Foot-and-mouth disease virus‏ وفيروس شلل ‎(PV) Polio virus JULY)‏ أو اف ام دي في ‎(FMDV‏ أو فيروس التهاب الكبد ‎C‏ ‎Hepatitis © virus‏ (1167). تم وصف متواليات مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية المتعددة واستخداماتها في بنية الناقل والتي تكون معرفة بشكل جيد في المجال. يتم ربط متوالية تشفير بعدية بصورة فعالة مع الطرف 3 ' من مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية وعند أي مسافة التي لا تؤثر
0 بصورة سلبية على التعبير عن الجين البعدي. يمكن بسهولة تحديد المسافة المثلى أو المسافة المسموح بها بين مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية وبداية جين التيار البعدي بواسطة تغيير المسافة وقياس التعبير في شكل داخلة للمسافة. يشير المصطلح "2" أو ‎amy‏ 28 " إلى متوالية أوليجيوببتيد قصير كما تم وصفه في شكل ‎2a‏ ‏وامشابهة ل-20» والتي تم استخدمها في شكل روابط والتي تكون قادرة على التوسط في انشطار
الترجمة المشتركة بين البروتينات بواسطة العملية التي تم تحديدها في شكل تخطي الريبوزوم ‎.ribosomal-skipping‏ يمكن استخدام متواليات ‎2a‏ وامتواليات 28 الشبيهة" (من الفيروسات البيكورناوية ‎Picornaviridae‏ وغيرها من الفيروسات أو المتواليات الخلوية ‎(cellular sequences‏ لكي يتم تكتيل العديد من المتواليات الجينية بداخل جين منفرد؛ مما يضمن التعبير المشترك ‎co-‏ ‎expression‏ بداخل نفس الخلية (انظنء 2013ن20:ي12 ‎.(Luke and‏
0 وكما تم استخدامه هناء يشير المصطلح ‎"ad‏ أو "متوالية معزز" إلى متوالية نيوكليوتيد والتي تسمح بالريط مع بوليميراز الحمض النووي الرببوزي وتقوم بتوجيه الانتساخ الخاص بالجين. وبصورة نمطية فإن المعزز يكون موجوداً في المنطقة غير المشفرة 5 ' من الجين والقريبة لموضع ‎PAY‏ الانتساخ ‎transcription initiation site‏ من الجين. تكون عناصر المتوالية بداخل المعززات والتي تكون وظيفية في بدء الانتساخ قد تم تمييزها في الغالب بواسطة متواليات النيوكليوتيد
5 اتوافقية. تشتمل أمثلة المعززات» على سبيل المثال لا الحصر على؛ المعززات من البكتريا والخميرة والنباتات والفيروسات والحيوانات مثل الثدييات ‎Le)‏ في ذلك الخيول والخنازير والماشية
والبشر)؛ ومن الطيور أو من الحشرات. يمكن أن يكون المعزز عبارة عن معزز قابل للحث أو قابل للكبت و/أو قابل للتشكيل. تقوم المعززات القابلة للحث ببدء مستويات متزايدة من الانتساخ من الحمض النووي دي أوكسي رببوزي تحت التحكم في الاستجابة لبعض التغييرات في ظروف المزرعة؛ مثل التغير في درجة الحرارة )2014 ‎(45S. (Ptashne,‏ أمثلة المعززات المعروفة بشكل جيد للشخص الماهر في المجال؛ على سبيل المثال؛ عبارة عن الفيروس القردي 40 الكبير من 7؛ فيروس مضخم للخلايا البشري والجين الفوري المبكر من فيروس مضخم للخلايا الفأري 1 ‎murine‏ ‎«(MCMV 1( cytomegalovirus 1‏ ومعزز عامل الاستطالة البشري ألفا. وكما تم استخدامه في سياق الاختراع الحالي فإن المصطلح معزز يشير بصفة خاصة إلى شظية وظيفية» على سبيل المثال» إلى ‎sia‏ مقطوع من 80600م4 (المتوالية بهوية رقم 1) أو متوالية 0 النيوكليوتيد منها ويفضل كيان المتوالية والذي يكون به (على الأقل) 772 من الطول الكامل (أو أكثر). علاوة على ذلك؛ وكما تم استخدامه في سياق الاختراع الحالي فإن المصطلح معزز يشير بصفة خاصة إلى شظية وظيفية؛ على سبيل المثال» إلى ‎ia‏ مقطوع من ‎4pMCP600‏ (المتوالية بهوية رقم 2) أو متوالية النيوكليوتيد منها ويفضل كيان المتوالية والذي يكون به (على الأقل) 778 من الطول الكامل (أو أكثر). يفضل ‎«JST‏ أن يشير "المعزز" إلى 0430 (المتوالية بهوية رقم 3( 5 أو 455م (المتوالية بهوية رقم: 4). وكما تم استخدامه هنا في سيقا الاختراع الحالي فإن المعزز يشير بصفة خاصة إلى مشتق وظيفي من 8430 (المتوالية بهوية رقم 3) أو ‎p455‏ (المتوالية بهوية رقم: 4) أو 80600م4 (المتوالية بهوية رقم 1) أو ‎4pMCPO00‏ (المتوالية بهوية رقم 2) التي تشتمل؛ على سبيل المثال؛ على استبدال صغير وتطفير أو تداخل ‎Jie‏ تلك الخاصة بهوية المتوالية والتي تكون بها 770 780 785 790 795 799 من التطابق أو التشابه. 0 تتم استخدم المصطلحات "ء"430م”؛ ‎"gGA30"‏ و"430"؛ على نحو متزامن وبصورة داخلية من خلال المواصفة والأشكال وقائمة المتواليات»؛ إلخ. تم استخدم المصطلحات ‎'p455"‏ و "455 ‎"MCP‏ ‏و" 455" على نحو متزامن وبصورة داخلية من خلال المواصفة والأشكال وقائمة المتواليات؛ إلخ. يشير المصطلح ‎"Gund‏ إلى متوالية بولي نيوكليوتيد ‎(Aly‏ يعمل فيها موضع سيس على النشاط الخاص بالمعزز وبالتالي يعمل على حث الانتساخ الخاص بالجين أو متوالية التشفير بصورة 5 نظيفية ‎aig‏ ربطه مع المعزز المذكور. وعلى العكس من تلك المعززات فإن تأثير المحسنات يكون مستقبلاً عن الموضع والاتجاه وبالتالي يمكن أن يتم تثبيتهم أمام أو خلف وحدة الانتساخ
‎transcription unit‏ بداخل الإنترون ‎intron‏ أو حتى بداخل منطقة التشفير. يمكن أن يوجد كل من المحسن بصورة قريبة فورية من ناتج الانتساخ وعند المسافة الكبيرة من المعزز. من الممكن أيضاً أن يكون له تراكب فيزيائي أو تراكب وظيفي بداخل المعزز. سوف يكون الماهر في المجال مدركاً لعدد المحسنات من العديد من المصادر (والتي تم إيداعها في بنوك البيانات مثل بنك الجينات ‎«GenBank 5‏ على سبيل ‎(Jd‏ محسنات 59740 ومحسنات فيروس مضخم للخلايا ‎(CMV) cytomegalovirus‏ ومحسنات إحداث الورم ‎polyoma‏ ومحسنات الفيروسات الغدية ‎Allg (adenovirus‏ تكون متاحة في شكل عناصر مستقبلة أو عناصر مستنسخة بداخل متواليات البولي نيوكليوتيد (على سبيل ‎(Jad)‏ تم ترسيبها عند ‎ATCC‏ أو من مصادر تجارية وفردية). يشتمل عدد من متواليات المعزز أيضاً على متواليات محسن مثل تلك التي تستخدم بصورة متكررة 0 محسن فيروس مضخم للخلايا. يكون محسن فيروس مضخم للخلايا البشري عبارة عن أحد المحسنات القوية التي تم تحديدها حتى الآن. يكون أحد أمثلة المعزز القابل للحث عبارة عن محسن ميتالو ثيونين ‎metallothionein‏ والذي يمكن أن يتم ‎dia‏ بواسطة مركبات جلوكورتيكويد ‎glucocorticoids‏ أو الفلزات ‎metals‏ الثقيلة. يقوم المصطلح "متواليات نيوكليوتيد متممة" بوصف واحدة من الجدائل من اثنين من جدائل الريط من البولي نيوكليوتيدات ‎Jie‏ الحمض النووي دي أوكسي رببوزي أو الحمض النووي الرببوزي. تقوم متوالية النيوكليوتيد من الجديلة المتممة بتوضيح متوالية النيوكليوتيد من الجديلة المرتبطة بها بحيث أنه ولكل أدينوسين فإنها تشتمل على ثيمين (أو يوراسيل خاص بالحمض النووي الرببوزي) لكل جوانين سيتوسين والعكس بالعكس. تكون متوالية النيوكليوتيد المتممة؛ على سبيل المثال ل 5" - ‎"3GCATAC-‏ عبارة عن 3: --50078716” أو للحمض النووي الريبوني 0618106-3- :5". 0 يكون للمصطلحات "جين" و"جين محل الاهتمام"؛ كما تم استخدامها هنا نفس المعاني وتشير غلى متوالية البولي نيوكليوتيد من أي طول ‎ally‏ تشفر منتج محل الاهتمام. يمكن أن يشتمل الجين أيضاً على متواليات منظمة تسبق (المتواليات غير المشفرة 5 " أو المتواليات غير المترجمة) ويليها المتواليات غير المشفرة 3 أو المتواليات غير المترجمة) من ‎Allie‏ التشفير. يمكن أن تكون المتوالية المختارة جين كامل الطول أو مقطوع أو جين اندماج ‎fusion gene‏ أو جين له علامة ‎tagged gene 5‏ ويمكن أن يكون عبارة عن الحمض النووي دي أوكسي ‎(Gy‏ المكمل ‎(cDNA) complement deoxyribonucleic acid‏ أو الحمض النووي دي أوكسي رببوزي جينومي
أو شظية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي. يجب أن يتم بصورة عامة فهم أن الحمض النووي دي أوكسي رببوزي الجينومي الخاص بالبول يببتيد أو الحمض النووي ‎(Gaull‏ قد تم تضمينه في المناطق غير المشفرة (أي الإنترونات) والتي يتم ربطها من الحمض النووي الريبوزي الرسول وبالتالي لا تكون موجودة في الحمض النووي دي أوكسي رببوزي المكمل المشفرة الخاصة بنفس البولي ببتيد أو الحمض النووي الرببوزي. ويمكن أن تكون ‎Ble‏ عن متوالية أصلية؛ أي صور حادثة بشكل طبيعي أو يمكن أن يتم تطفيرها أو تشتمل على المتواليات التي تم اشتقاقها من مصادر مختلف أو خلاف ذلك تم تعديلها طبقاً لما هو مرغوب. تشتمل مثل تلك التعديلات» على عمليات تحسين الكودون أو استخدام الكودون المحسن في خلية عائلة مختارة أو وضع العلامات. علاوة على ذلك؛ فيمكن أن تشتمل على مواضع ‎A‏ أو مواضع إضافة من مواضع التأثير على 0 سيس ‎cis-acting sites‏ مثل مائح ‎splice donor ball‏ (الخفي ‎(cryptic‏ أو مواضع المستقبل ‎Lali acceptor‏ التفرع وإشارات المعالجة ببولي أدينيل « وصناديق ‎TATA-‏ ومواضع ‎chi‏ ومواضع دخول الريبوزوم ومتواليات التكرار والبنيات الثانوية (على سبيل المثال؛ حلقات جذعية ‎stem‏ ‎(loops‏ ومواضع الربط الخاصة بعوامل الانتساخ أو عوامل منظمة أخرى ومواضع إنزيمات تقييد إلخ لكي يتم إعطاء القليل من الأمثلة أو الأمثلة غير الحصرية. يمكن أن تقوم المتوالية المختارة 5 بتشفير سيتوبلازمي ‎cytoplasmic‏ إفرازي ونووي أو تشفير مرتبط بالغشاء أو ببولي ببتيد سطح الخلية ‎.cell surface‏ يكون المصطلح " متوالية نيوكليوتيد محل الاهتمام" المستخدمة هنا عبارة عن مصطلح عام بالمقارنة بالجين محل الاهتمام حيث إنه من غير الضروري أن تشتمل على الجين ولكن يكن أن تشتمل على العناصر أو أجزاء من الجين أو أي معلومات جينية أخرى؛ على سبيل ‎ori «Jill‏ 0 (أصل الانتساخ). يمكن أن يكون النيوكليوتيد محل الاهتمام ‎Ble‏ عن أي متوالية الحمض النووي دي أوكسي ‎(gion)‏ أو الحمض النووي الرببوزي والتي تكون مستقلة عما إذا كانت مشتملة على متوالية تشير أو لا. يشير "إطار القراءة المفتوح" إلى طول متوالية الحمض النووي؛ إما الحمض النووي دي أوكسي ‎Sion)‏ أو الحمض النووي الريبوزي والتي تشتمل على إشارة بدء الترجمة أو كدود البدء ‎ATG Jie‏ 5 أو ‎AUG‏ وكودون الإنهاء ويمكن أن تتم ترجمتها إلى متوالية بولي ببتيد. يصف المصطلح "انتساخ” التخليق الحيوي للحمض النووي الرببوزي الرسول في خلية.
يشير المصطلح 'تعبير” كما تم استخدامه هنا إلى الانتساخ و/أو الترجمة الخاصة بمتوالية الحمض النووي في خلية عائل. وطبقاً لسمات محددة من الاختراع الحالي فإن المصطلح ‎"pad‏ يشير إلى الانتساخ و/أو الترجمة من متوالية غير متجانسة و/أو متوالية حمض أميني بداخل خلية العائل. إن مستوي التعبير الخاص بالمنتج المطلوب في الخلية العائلة يمكن أن يتم تحديده على أساس إما كمية الحمض النووي الريبوزي المناظرة أو الحمض النووي الرببوزي الرسول التي تكون موجودة في الخلية أو الكمية الخاصة بالبولي المطلوب الذي يتم تشفيره بواسطة المتوالية المختارة. على سبيل ‎(Jd)‏ فإن الحمض النووي الريبوزي الرسول يتم انتساخه من المتوالية المختارة والتي يتم حسابها على أنها تهجين ‎hybridization‏ بتبقيع نورثرن ‎Northern blot‏ وحماية الحمض النووي الريبوزي من رببونيوكلياز ‎ribonuclease‏ في التهجين الموضع فميا يتعلق بالحمض النووي الرببوزي الخلوي 0 أو بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز-للانتساخ العكسي الكمي (الانتساخ العكسي يلي ذلك تفاعل سلسلة بوليمراز ‎(PCR) polymerase chain reaction‏ الكمي) ‎٠.‏ يمكن أن تكون البروتينات التي تم التعبير عنها من المتوالية المختارة قد تم حسابها بصورة كمية بواسطة الطرق المتنوعة؛ على سبيل ‎«Jal‏ بواسطة اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم أو بواسطة تبقيع ويسترن أو بواسطة اختبار إشعاعي مناعي 0101005 أو بواسطة الترسب المناعي ‎immunoprecipitation 5‏ أو بواسطة الاختبار الخاص بالنشاط البيولوجي ‎biological activity‏ من البروتين أو بواسطة التبقيع المناعي ‎immunostaining‏ من البروتين يلي ذلك تحليل فرز الخلايا
المنشط بالتألق الومضي ‎-(FACS) fluorescence-activated cell sorter‏ يقوم المصطلح 'كاسيت التعبير" أو 'وحدة الانتساخ” أو 'وحدة التعبير ‎"expression unit‏ بتحديد المنطقة بداخل الناقل أو البنية أو متوالية البولي نيوكليوتيد والتي تشتمل على واحدة أو أكثر من 0 الجينات التي تم انتساخهاء حيث تقوم متواليات النيوكليوتيد بتشفير الجيئات التي تم وصفها وأيضاً متواليات البولي نيوكليوتيد المشتملة على عوامل منظمة بداخل كاسيت التعبير والتي يتم ربطها بصورة فعالة مع بعضها البعض. ‎alg‏ نسخها من المعزز ‎dug‏ إنهاء الانتساخ بواسطة إشارة معالجة ببولي أدينيل واحد على الأقل. في سمة واحدة محددة؛ فإنه يتم الانتساخ من معزز منفرد. ونتيجة لذلك فإن الجينات المختلفة تكون عبارة عن جينات مرتبطة بصورة انتساخية. يمكن أن يتم 5 وصف أكثر من بروتين أو منتج واحد وبتم التعبير عنه من وحدة الانتساخ (وحدة الانتساخ متعددة السيستيرون ‎(multicistronic‏ سوف تشتمل كل وحدة انتساخ على عناصر المنظمة ضرورية
— 5 4 — للانتساخ والترجمة من أي متواليات مختارة والتي يتم تضمينها بداخل الوحدة. ويمكن أن تشتمل كل وحدة على نفس العناصر المنظمة أو عناصر مختلفة. على سبيل المثال» فإن كل وحدة انتساخ يمكن أن تشتمل على نفس وسيلة ‎cell‏ أو عنصر مواضع إدخال الريبوزوم الداخلية أو الإنترونات والتي يمكن استخدامها للربط الوظيفي الخاص بالجينات بداخل وحدة الانتساخ. يمكن أن تشتمل متوالية الناقل أو البولي نيوكليوتيد على أكثر من وحدة انتساخ.
يشير المصطلح ‎pad‏ متزايد" أو عيار متزايد أو إنتاجية متزايدة" أو 'تعبير محسن أو "إنتاجية' إلى زيادة في التعبير أو التخليق أو الإفراز الخاص بمتوالية غير متجانسة و/أو متوالية خارجية المنشأ يتم إدخالها في خلية عائلة؛ على سبيل المثال ¢ من الجين المشفر للبروتين العلاجي بواسطة المقارنة مع ‎die‏ مقارنة مناسبة؛ على سبيل المثال؛ البروتين الذي تم تشفيره بواسطة فيروس 0 الحمض النووي دي أوكسي رببوزي المكمل أو بروتين تم تشفيره بواسطة الجين المشتمل على إنترون. هناك عيار متزايد أو إنتاجية خاصة بما إذا كانت الخلية طبقاً للاختراع قد تمت زراعتها طبقاً للطريقة الخاصة بالاختراع الذي تم وصفه هنا حيث يكون لتلك الخلية على الأقل 1.2 ضعف أو 1.5 ضعف أو ضعفين أو ثلاثة أضعاف أو أربعة أضعاف من الزيادة في الإنتاجية المحددة أو العيار. هناك ‎Lad‏ عيار متزايد أو ‎Lal)‏ خاصة؛ إذا تمت زراعة الخلية طبقاً للطريقة الخاصة 5 بالاختراع الذي تم وصفه هناء حيث يكون بتلك الخلية على الأقل 1.2 ضعف على الأقل أو 1.5 ضعف على الأقل أو ضعفين على الأقل أو ثلاثة أضعاف على الأقل من الزيادة فى إنتاجية محددة أو عيار محدد. هناك أيضاً عيار متزايد مخصص أو ‎dali]‏ خاصة إذا تمت زراعة تلك الخلية طبقاً للطريقة الخاصة بالاختراع الذي تم وصفه هناء حيث يكون بتلك الخلية-الخلية إذا تم ذلك-زيادة على الأقل 1.2 ضعف إلى خمسة أضعاف ويفضل من 1.5 ضعف إلى خمسة 0 أضعاف ويفضل ‎JST‏ من اثنين من الأضعاف إلى خمسة أضعاف وبصورة محددة ثلاثة أضعاف إلى خمسة أضعاف من الزيادة فى الإنتاجية المحددة أو العيار المحدد. يمكن أن يشير "تعبير متزايد" إلى أنه أيضا هناك المزيد من الخلايا التي تعبر بالفعل عن الجين/ المتوالية محل الاهتمام. على سبيل ‎(JB‏ فإن التعبير المتزايد يمكن أن يعني أن معززات جديد من الاختراع تكون فعالة
لفترة زمنية أطول أثناء دورة الريط الفيروسية خاصة بالمعززات الأخرى. ‎(Sa 5‏ الحصول على التعبير المتزايد أو العيار أو الإنتاجية بواسطة استخدام ناقل غير متجانس ‎heterologous vector‏ طبقاً للاختراع. يمكن أن يتم دمج ذلك مع طرق أخرى مثل الانتقاء بمساعدة
فرز الخلايا المنشط بالتألق الومضي من الخلايا العائلة ناتجة عودة الارتباط والتي تشتمل على كمرقم قابل للانتقاء إضافي على واحدة أو أكثر من بروتينات التألق ‎fluorescent proteins‏ (على سبيل المثال؛ بروتين التألق الومضي الأخضر) أو مرقم سطح الخلية. يمكن أن يتم أيضاً استخدام طرق للحصول على التعبير المتزايد وتوليفة من الطرق المختلفة بالاعتماد» على سبيل المثالء على استخدام العناصر الفعالة سيس ‎cis-active elements‏ الخاصة بمعالجة بنية كروماتين ‎chromatin‏ ‎le)‏ سبيل ‎(LCR JBI‏ وعنصر فتح كروماتين ‎mals‏ الانتشار ‎(UCOE) Ubiquitous Chromatin Opening Element‏ وايه أيه اس إيه ‎EASE‏ ووسائل العزل ‎isolators‏ وعناصر اس/ام أيه آر ‎(uly S/MARs‏ تي أيه آر ‎(STAR‏ على استخدام عوالم الانتساخ (الصناعية) ومعالجة الخلايا باستخدام العوامل التخليقية أو العوامل الطبيعية فيما يتعلق 0 بالتنظيم باطني النمو ‎endogenous‏ أو التنظيم غير المتجانس ‎heterologous‏ و/أو تعبير الجين خارجي النمو ‎exogenous‏ والذي يحسن من الثبات (فترة نصف العمر) الخاصة بالحمض النووي الريبوزي الرسول أو البروتين الذي يحسن بدء ترجمة الحمض النووي الرببوزي الرسول والزيادة في ‎deja‏ الجين بواسطة استخدام البلازميدات الإيبوزية ‎episomal‏ (بالاعتماد على استخدام المتواليات الفيروسية مثل أصل الانتساخ» على سبيل المثال» ‎(SVA0‏ إحداث الورم؛ والفيروس الغدي؛ فيروس 5 إيبشتاين بان ‎(EBV) Epstein barr virus‏ أو فيروس البابوي البقري ‎Bovine Paptiloma Virus‏ ‎((BPV)‏ واستخدام المتواليات المحسنة للتكبير أو أنظمة التكبير في المعمل المعتمدة على الصور المتسلسلة ‎concatemers‏ من الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي. ينطوي أحد الاختبارات الخاصة بقياس "التعبير المتزايد" على قياسات البروتين المعتمدة على كروماتوجرافي سائل-مطياف كتلة/مطياف الكتلة ‎liquid chromatography-mass spectrum/‏ ‎mass spectrum 0‏ (1.0-15/215)_مثل المراقبة الخاصة بالتفاعل المتعددة ‎multiple reaction‏ ‎¢(MRM) monitoring‏ وطرق الاكتشاف المعتمدة على الجسم المضاد ‎Jie‏ تبقيع وسترن أو تبقيع نقطي ‎dot blot‏ أو التوزيع المناعي ‎Immunodiffusion‏ وقياس التدفق الخلوي ‎flow cytometry‏ ‎(FC)‏ وقياس النشاط البيولوجي بواسطة اختبار الراصة الدموية. يتم قياس ‎BLE‏ المعزز" بصورة غير مباشرة من خلال الحساب الكمي من الحمض النووي 5 الرببوزي الرسول الذي تم انتساخه تحت تحكم المعزز ذي الصلة وبتم الحصول على الحمض
النووي ‎(ghoul‏ الرسول بصورة كمية بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز -للانتساخ العكسي الكمي ذات الصلة بالنسبة للقياس الباطني النمو. يكون المصطلح "عيار فيروسي ‎viral titre‏ عبارة عن قياس الوحدات المعدية بالحجم من مستحضر الفيروس. تكون عيارات الفيروس عبارة عن النقطة الطرفية في الإجراء البيولوجي والتي يتم تحديدها بأنها تخفيف يتم عنده إجراء نسبة معينة من الاختبارات في صورة متوازية والتي توضح التأثير ‎«(Reed and Muench,1938)‏ وبصورة خاصة فإن الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين لكل مل ‎hat‏ تخفيف خاص بمستحضر الفيروس به 750 من العدد خلايا المزرعة التي تلقيحها التي تكون في توازي مع التخفيفات التي تمت إصابتها. تشتمل "العناصر المنظمة للانتساخ" بصورة طبيعية على معزز عند الجزء العلوي من متوالية 0 الجين الذي يتم التعبير عنه ومواضع بدو مواضع إنهاء الانتساخ وإشارة المعالجة ببولي أدينيل. يشير المصطلح 'موضع بدء الانتساخ" إلى حمض نووي في البنية المناظرة للحمض النووي الأول الذي تم تضمينه في ناتج انتساخ أولي؛ أي؛ ‎sale‏ منتجة للحمض النووي الريبوزي الرسول. يمكن أن يتم تراكب مواضع بدء الانتساخ مع متواليات المعزز. تكون ‎SLAY‏ الإنهاء" أو 'وسيلة الإنهاء" أو إشارة المعالجة ببولي أدينينيل" أو بولي 8" أو 'موضع 5 إنهاء ناتج الانتساخ” أو "عنصر إنهاء ناتج الانتساخ” والذي يكون ‎Ble‏ عن متوالية إشارة والتي تسبب الانشطار عند موضع محدد عند الطرف 3 ' من الحمض النووي الريبوزي الرسول حقيقية النواة وتضمين ناتج انتساخ بعدي من نيوكليوتيدات المتوالية من حوالي 200-100 أدينين (طرف بولي ‎(A‏ عند طرف الانشطار 3 وبالتالي التسبب في جعل بوليميراز الحمض النووي الرببوزي يقوم بإنهاء الانتساخ. تشتمل إشارة المعالجة ببولي أدينينل على المتواليات ‎AATAAA‏ حوالي 0 30-10 نيوكليوتيد قبلي من موضع الانشطار والمتوالية الموجودة بصورة بعدية. تكون العديد من عناصر المعالجة ببولي أدينيل معروفة مثل ‎ctk polyA‏ و5740 متأخر وغراهم و هرمون النمو البقري ‎LS) polyA‏ تم وصفه؛ على سبيل المثال» في البراءة الأمريكية رقم: 561226458( أو هرمون النمو من الهامستر بولي ‎A‏ (الطلب الدولي رقم 2010010107). ‎Jails‏ "العناصر المنظمة الخاصة بالترجمة" على موضع بدء الترجمة ‎translation initiation site‏ ‎(AUG) 5‏ كودون الإيقاف ‎stop codon‏ وإشارة بولي م الخاصة ‎JS‏ بولي ببتيد فردي لكي يتم التعبير عنها. يمكن أن يتم تضمين موضع إدخال الريبوزوم الداخلي في بعض البنيات. ولكي يتم
تحسين التعبير؛ فيمكن أن يكون من المفيد أن تتم إزالة أو إضافة أو تغيير 5'-و/أو 3 -من المناطق غير المترجمة من متوالية الحمض النووي المراد التعبير عنها لكي يتم إنهاء أي كودونات بدء الترجمة البديلة غير المناسبة أو متواليات أخرى والتي يمكن أن تتداخل مع أو تقلل التعبير إما عند المستوي الخاص بالانتساخ أو الترجمة. يمكن إدراج مواضع الارتباط ‎binding sites‏ الخاصة بالريبوزوم (متوالية كوزاك ‎(Kozak sequence‏ بصورة مباشرة عند الجزءِ العلوي من كودون البدء لتحسين الترجمة وبالتالي التعبير. ولزيادة محتوي 7آ/هد حول موضع الريط من الريبوزوم»؛ يكون
هناك ربط ريبوزوم أكثر فعالية. وعن طريق التعريف فإن كل متوالية بولي نيوكليوتيد أو كل جين تم إدراجه في الخلية العائلة البروتين ذي الصلة أو الحمض النووي ‎(Gaull‏ يتم تشفيره بالتالي وتتم الإشارة إليه بأنه 'خارجي 0 المنشاً» 'متوالية خارجية ‎Clana)‏ أو "جين خارجي ‎Clana)‏ 'متوالية تشفير خارجية المنشاً” ‎Lovie‏ ‏يكو ذلك من أنواع 'فيروسية" مختلفة. ونتيجة لذلك؛ فإن المعززات المعتمدة على فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 من الاختراع الحالي تكون خارجية ‎Lidl)‏ في ضوءٍ ناقل فيروسي فيروس الهريس ‎Wf‏ للخيول 1. وكما تم استخدامه هنا فيما يتعلق بالمتوالية أو الجين محل الاهتمام مثل مولد الضد فإن المصطلح "خارجي المنشاً" يشير إلى متوالية مذكورة أو جين محل الاهتمام» وبصورة خاصة 5 فإن مولد الضد المذكور يتم التعبير عنه في سياق الأنواع الطبيعية. ونتيجة ‎(UN‏ فإن ‎Ase‏ الضد 3 من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير يكون عبارة أحد الأمثلة (انظر المثال رقم 3) من الجين خارجي المنشاً في استجابة لناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1. وبالتالي فإن أي متوالية خلاف تلك المأخوذة من الخيول أو الجين محل الاهتمام مثل مولد الضد من غير الخيول عبارة عن متوالية أو جينية خارجية ‎Lill‏ محل الاهتمام أو مولد ضد طبقاً لمسة معينة من الاختراع الحالي. 0 وعن طريق التعريف فإن كل متوالية بولي نيوكليوتيد أو كل جين تم ‎ashy‏ في الخلية العائلة والبروتين ذي الصلة أو الحمض النووي الرببوزي تم تشفيره بالتالي يطلق عليها " غير متجانسة " أو ' متوالية غير متجانسة" أو "جين غير متجانس"؛ أو متوالية تشفير غير متجانسة"؛ أو جين انتقالي أو "بروتين غير متجانس” بالنسبة للخلية العائلة. يمكن تطبيق ذلك حتى إذا كانت المتوالية بد تم إدخالها أو أن الجين محل الاهتمام كان متماثلاً بالنسبة للمتوالية الداخلية أو الجين الداخلي 5 .من الخلية العائلة. على سبيل المثال؛ فإن متوالية المعزز فيروس الهربس ألفا من الخيول 4 التي تم إدخالها في ناقل فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 عند موضع مختلف أو في صورة معدلة في
الفيروس من النوع غير المعالج فيروس الهربس ألفا من الخيول 4 تكون طبقاً للتعريف عبارة عن متوالية غير متجانسة. وكما تم استخدامه هنا ‎Lash‏ يتعلق بالمتوالية أو الجين محل الاهتمام ‎Jie‏ ‏مولد الضد فإن المصطلح "غير متجانس " يشير إلى متوالية مذكورة أو جين محل الاهتمام؛ وبصورة خاصة فإن مولد الضد المذكور يتم التعبير عنه في سياق الأنواع الفرعية. ونتيجة لذلك فإن أي متوالية غير محددة لفيروس الهربس ألفا للخيول 1 أو الجين محل الاهتمام مثل مولد الضدء على سبيل ‎(JB‏ تكون ‎Ble‏ عن مولد ضد من أي فيروس الهرس ‎Wl‏ للخيول 1 باستثناء فيروس ألفا الهربيسي ‎Jal‏ على سبيل المثال؛ الفيروس الهربسي ‎Wl‏ للخيول 3؛ وفيروس ألفا الهريسي للخيول 8 الذي يكون بالتالي عبارة عن متوالية غير متجانسة أو جين محل
الاهتمام أو طبقاً لأي سمة محددة من الاختراع.
0 يشير المصطلح "غير حادثة بشكل طبيعي" إلى أي متوالية أو أي جين محل الاهتمام والتي لا تحدث في هذا السياق بصورة طبيعية مثل المتوالية المهجنة أو المتوالية أو الجين محل الاهتمام مثل مولد الضد من أنواع مختلفة أو من متوالية من الجي محل الاهتمام مثل مولد الضد والذي لا يكون عبارة عن منتج من الطبيعة نتيجة وجود تطفير صناعي أو إدراج أو حذف أو ما شابه ذلك. تم استخدام المصطلح "ناتج عودة الارتباط" بصورة قابلة للتبادل مع المصطلحات "غير حادثة
5 بشكل طبيعي"؛ "غير متجانسة" وخارجية المنشاً” خلال مواصفة الاختراع الحالي. يكون البروتين 'ناتج عودة الارتباط" عبارة عن بروتين يتم التعبير عنه إما من متوالية بولي نيوكليوتيد غير متجانسة أو خارجية المنشاً. يشير المصطلح ‎sage ml‏ الارتباط" كما تم استخدامه مع الفيروس إلى فيروس تم إنتاجه من خلال معالجة صناعية من الجينوم الفيروسي. يشير المصطلح فيروس يشتمل على متوالية متغايرة أو متوالية خارجية ‎Lid‏ مثل مولد الضد خارجي المنشاً المشفر
0 لمتوالية إلى فيروس ناتج ‎sae‏ الارتباط. تم استخدام المصطلح فيروس ناتج ‎sage‏ الارتباط وفيروس حادث بشكل غير طبيعي بصورة تبادلية هنا. وبالتالي فإن المصطلح” ‎Jil‏ غير متجانس" يشير إلى ناقل يشتمل على متوالية بولي نيوكليوتيد غير متجانسة أو خارجية المنشاً. يشير المصطلح ‎JB‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط" إلى ناقل والذي يشتمل على متوالية بولي نيوكليوتيد غير متجانسة أو ناتجة عودة الارتباط.
5 .تم استخدام المصطلح " مرتبط بشكل فعال” لكي يتم يصف الربط بين العناصر المنظمة والجين أو المنطقة المشفرة منه. وبصورة نمطية فإن "جين التعبير يتم وضعه تحت تحكم واحد أو أكثر من
العناصر المنظمة؛ على سبيل ‎(JE‏ بدون تحديد والتي تشكل معززات غير قابلة للحث أو عناصر منظمة محددة للنسيج ومحسنات. يمكن أن يكون الجين أو المنطقة المشفرة عبارة عن 'منطقة مرتبطة بشكل فعال أو " أو مرتبطة بشكل فعال مع" أو مرتبطة بشكل فعال مع عناصر منظمة مما يعني أن الجين أو المنطقة المشفرة يتم التحم فيها أو التأثير عليها من خلال عنصر تنظيمي. على سبيل المثال؛ فإن المعزز يتم ربطه مع متوالية التشفير إذا كان المعزز يؤثر على الانتساخ أو التعبير الخاص بمتوالية التشفير. علاوة على ذلك وفي سياق الوصف الحالي فإن المصطلحات ‎dan)‏ وظيفي ‎"functional linking‏ و'مرتبط بصورة وظيفية' يشير غلى أن اثنين أو أكثر من متواليات الحمض النووي أو عناصر المتوالية يتم تثبيتهما في طريقة ‎mand‏ لهما بالعمل في الطريقة المذكورة. على سبيل المثال؛ فإن 0 المعزز/ المحسن أو ناتج الإنهاء يرتبط بصورة فعالة مع الجين متوالية الجين المضفر إذا كان قادراً على التحكم أو التعديل الخاص بالانتساخ من متوالية الجين المرتبطة بها في موضع سيس. وبصفة عامة؛ ‎(Sly‏ ليس بصورة ضرورية فإن متواليات الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي المرتبطة بصوفة وظيفية تكون متجاورة وحيث يكون من الضروري ربط اثنين من مناطق البولي ببتيد المشفرة أو في حالة وجود ببتيد إشارة خاص بالإفراز فإن تلك الببتيدات تكون متجاورة وتكون 5 في إطار القراءة. وعلى الرغم من ذلك فإن المعزز المرتبط بشكل فعال يكون موجوداً بصفة عامة أعلى التيار أو يرتبط بصورة فعالة مع وسيلة إنهاء ويكون موجوداً ‎dias‏ عامة في ‎all‏ البعدي من متوالية التشفير وليس بالضرورة أن يتجاور معها. لا يجب أن تكون المحسنات متجاورة ما دام أن لديها زيادة في الانتساخ من متوالية التشفير. ولهذا السبب يمكن أن توجد تلك الجينات أعلى التيار أو أسفل التيار من المتوالية المشفرة أو حتى عند بعض المسافة. يكون موضع المعالجة 0 ببولي أدينيل مرتبط بصورة فعالة مع متوالية التشفير إذا كان موجوداً عند الطرف 3 © من متوالية التشفير بطريقة يستمر فيها الانتساخ خلال متوالية التشفير وبداخل إشارة البولي أدينينل. يتم تحقيق عملية الريط بواسطة الطرق ناتجة عودة الارتباط المعروفة في المجال؛ على سبيل المثال» من خلال الريط عند موضع تقييد منظار أو نهايات ‎sala‏ أو من خلال استخدام طريقة تفاعل سلسلة بوليمراز خاصة بالاندماج. ‎(Sa‏ استخدام روابط الأوليجيونيوكليوتيد التخليقية أو المهايئات ‎adapters 25‏ طبقاً للممارسة التقليدية إذا كانت مواضع التقييد المناسبة غير موجودة.
وطبقاً للمصطلح 'شظية وظيفية؛ أو 'مشتق وظيفي" أو متوالية معزز” فإن ذلك يعني أن الشظية أو المشتق ما يزال يؤثر على نشاط المعزز. وعلى الرغم من ذلك فإن الاختبارات الوظيفية عن كيفية اختبار نشاط المعزز تكون معروفة بشكل جيد لذوي المهارة العادية في المجال ) ‎2000Bustin‏ ‏له ‎Nolan et‏ 2006). يشتمل النموذج التوضيحي من الاختبار الوظيفي المذكورء على سبيل ‎Jia 5‏ على تجارب حركيات المعزز. تتم حضانة الخلايا المصابة مع الفيروسات الناقلة التي تحمل كاسيتات لتعبير حيث يقوم المعزز أو الشظية منه بتوجيه الانتساخ من الجين الانتقالي للمسجل لفترات زمنية مختلفة. تم تحضير الحمض النووي ‎(Ghoul‏ الإجمالي من العينات التي تم تجميعها عند أزمنة مختلفة بعد العدوى. ‎days‏ تدمير الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي الملوث بواسطة اهتضام إنزيم دي أوكسي نيوكلياز 1 1 ‎(DNAse I) deoxyribonuclease‏ فإن الحمض 0 النووي الرببوزي يتم انتساخه ‎Spear‏ عكسية. تمت ‎dallas‏ عينة انتساخ باستخدام إضافة ترانسكريبتاز عكسي ‎reverse transcriptase‏ (87)؛_وتمت معالجة ناتج الانتساخ الثاني بدون إضافة ترانسكريبتاز عكسي لكي يتم توضيح الإزالة الناجحة الخاصة الحمض النووي دي أوكسي ‎(Som‏ الملوث من مستحضر الحمض النووي الريبوزي. تمت تنقية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي المكمل الناتج وتم استخدامه في شكل قالب في تفاعل سلسلة بوليمراز التقليدي. وفقط فإن العينات تستمر مع إضافة ترانسكريبتاز عكسي والتي ‎(Sa‏ أن تعمل على إنتاج تفاعل سلسلة بوليمراز. ويمكن بعد ذلك استخدام الحمض النووي دي أوكسي ‎ign)‏ المكمل لغرض تفاعل سلسلة بوليمراز الكمي مع البادئات ‎primers‏ الخاصة بالجين المسجل الانتقالي وفي صورة موازية مع البادئات ‎Lad‏ يتعلق بالجين الأساسي من الناقل الفيروسي (الجين القياسي الداخلي) والانتساخ منه الذ يوفر مقياس داخلي خاص بالفعالية المتعلقة بالعدوى والانتساخ. تم جعل قيم تفاعل سلسلة 0 بوليمراز الكمي من المسجل في الصورة الطبيعية منها بين البنيات المختلفة والأزمنة المختلة بعد الإصابة باستخدام قيم تفاعل سلسلة بوليمراز الكمي من الجينات القياسية الداخلية. يسمح ذلك
بالتفسير الخاص بأنشطة المعزز من المعززات المختلفة وشظايا منها. يشير " التشابه في المتوالية ‎"Sequence homology‏ كما تم استخدامه هنا إلى طريقة خاصة بتحديد القرابة بين اثنين من المتواليات. ولكي يتم تحديد التشابه في المتوالية فإن اثنين أو أكثر من 5 المتواليات تتم محاذاتهما بصورة مثالية ويتم إدخال الفجوات إذا كان ذلك ضرورياً. وعلى الرغم من
— 2 5 — ذلك وعلى النقيض من ‎Lig"‏ المتوالية ‎sequence identity‏ فإن استبدالات الحمض الأميني المحافظة يتم اعتبارها ‎Loh‏ مطابقة عندما يتم تحديد التشابه الخاص بالمتوالية. وبعبارة أخرى ولكي يتم الحصول على ‎Jol)‏ ببتيد المشابه أو البولي نيوكليوتيد الذي به 795 من التشابه في المتوالية مع المتوالية المرجعية؛ أو على سبيل المثال 785 من التشابه ويفضل 790 ‎J91 5‏ 792 793 794 حتى يفضل أكثر 5» 96 1974 98 799 299.9 من الوحدات البنائية للحمض الأميني أو النيوكليوتيدات في المتوالية المرجعية والتي يمكن أن تكون مطابقة أو مشتملة على استبدال محافظ مع حمض أميني آخر أو نيوكليوتيد. وعلى نحو بديل فإن هناك عدد من الأحماض الأمينية أو النيوكليوتيدات ‎lly‏ تصل لحوالى 715 ويفضل ما يصل لحوالى 0 فقث قث ‎J6 JT‏ أو حتى بصورة مفضلة ما يصل إلى ‎JS‏ فى 3 2 0 721 70.1 من الوحدات البنائية الإجمالية للحمض الأمينى أو النيوكليوتيدات ‎ally‏ لا تشتمل على استبدالات محافظة وفي المتوالية المرجعية ولكن يمكن إدراجها في المتوالية المرجعية. يفضل أن تشتمل المتوالية المتشابهة على تمديد على الأقل من 50 وبصورة أكثر تفضيلاً 100 أو يفضل أكثر 250 أو حتى يفضل ‎ST‏ 500 نيوكليوتيد. تشير "هوبة المتوالية" كما هو معروف فى المجال إلى العلاقة بين اثنين أو أكثر من متواليات ‎Jed) 5‏ ببتيد أو اثنين أو أكثر من متواليات البولي نيوكليوتيد وبصورة محددة متوالية مرجعية وتعطي متوالية وبصورة محددة متوالية مرجعية متوالية محددة يمكن مقارنتها مع المتوالية المرجعية. يتم تحديد هوية المتوالية بواسطة مقارنة متوالية معينة مع المتوالية المرجعية بعد أن تتم محاذاة المتوالية المرجعية لكي يتم إنتاج درجة عالية من التشابه؛ كما تم تحديده بواسطة التطابق بين الأحبال ‎Jie‏ ‏المتواليات. وعند مثل تلك المحاذاة فإن هوية المتوالية يتم التأكيد علها من خلال أساسي موضع بالنسبة ‎pia gal‏ على سبيل المثال فإن المتواليات تكون "متطايقة" عند موضع محدد إذا كان الموضع الخاص بالنيوكليوتيد أو الوحدات البنائية للحمض الأميني تكون متطابقة. يكون العدد الإجمالي من هويات الموضع قد تم تقسيمه بعد ذلك بواسطة العدد الإجمالي من النيوكليوتيدات أو الوحدات البنائية في المتوالية المرجعية بحيث تعطي 7 من المتوالية المرجعية. يمكن أن يتم حساب هوية المتوالية بسهولة بواسطة طرق معروفة والتي تشتمل؛ على سبيل المثال لا الحصر على تلك التي تم وصفها في ‎Computational Molecular Biology, Lesk, A.
N., ed., Oxford‏ ‎University Press, New York (1988), Biocomputing: Informatics and Genome Projects,‏ ‎Smith, D.W., ed., Academic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence‏
Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994);
Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987);
Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press,
New York (1991); and Carillo, H., and Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48: 1073 )1988((« وقد تم تضمين التعليمات الخاصة بها هنا كمرجع. تم تحديد الطرق المفضل لتحديد هوية المتوالية لإعطاء تطابق أكبر بين المتواليات التي تم اختبارها. تمت إتاحة طرق تحديد هوية المتوالية بصورة شائعة على برامج الكمبيوتر ‎lly‏ تقوم بتحديد هوية المتوالية بين متواليات معينة. تشتمل أمثلة مثل تلك البرامج» على سبيل المثال لا الحصرء على مجموعة برامج» ‎GCG‏
Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1):387 (1984)), BLASTP, BLASTN ) and FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990). The BLASTX 10 program is publicly available from NCBI and other sources (BLAST Manual, Altschul,
S. et ‏لد‎ NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 1990( 215:403-410(¢ وقد تم تضمين التعليمات الخاصة بها هنا) كمرجع. تتم محاذاة البرامج المذكورة بصورة مثالية من المتواليات باستخدام فجوات أساسية يتم وزنها لكي يتم إنتاج مستوي عال 5 من التماثل في الهوية بين المتواليات المحددة والمرجعية. وكما هو موضح بواسطة النيوكليوتيد المشتمل على متوالية نيوكليوتيد التي بها على الأقل؛ على سبيل ‎«Jal‏ 785؛ ويفضل 790 و 1 192 793 294 ويفضل أكثر ‎a‏ 795 796 7297 798 799 799.9 من "التطابق في المتوالية" مع متوالية النيوكليوتيد المرجعي؛ فإنه يقصد أن تكون متوالية النيوكليوتيد من البولي نيوكليوتيد المحدد متماثلاً بالنسبة للمتوالية المرجعية باستثناء متوالية البولي نيوكليوتيد العينة 0 والتي يمكن أن تشتمل على ما يصل لحوالي 15 وبفضل ما يصل لحوالي 10 أو حتى يفضل ما يصل لحوالي 5 طفرات نقطية ‎point mutations‏ لكل 100 نيوكليوتيد من متوالية النيوكليوتيد المرجعي. وبعبارة أخرى وفي البولي نيوكليوتيد المشتمل على متوالية النيوكليوتيد المشتملة على ‎JH‏ على 85 7 ويفضل 790 791 792 793 794؛ حتى أكثر تفضيلاً 795 796؛ ‏7 98 99 799.9 من التطابق بالنسبة لمتوالية النيوكليوتيد المرجعي وما يصل لحوالي ‏5 215 ويفضل 1210 19 78 ‎LT‏ 76 أو حتى يفضل 15 14 23 12 11 70.1 من النيوكليوتيدات في المتوالية المرجعية والتي يمكن أن يتم حذفها أو استبدالها باستخدام نيوكليوتيد ‏آخر أو عدد من النيوكليوتيدات ‎lly‏ تصل لحوالي 715 ويفضل 210 9 8ن ‎JT‏ 6 ‏حتى يفضل أكثر 75 74 73 72 21 720.1 من النيوكليوتيدات الإجمالية في المتوالية المرجعية والتي يمكن أن يتم إدراجها في المتوالية المرجعية. يمكن أن تحدث تلك الطفرات من
المتوالية المرجعية عند مواضع الطرف 5' أو 3' من متوالية النيوكليوتيد المرجعية أو أي موضع بين تلك المواضع الطرفية والتي يتم تقاطعها إما بصورة فردية أو بين النيوكليوتيدات في المتوالية المرجعية أو في واحدة أو أكثر من المجموعات المتجاورة بداخل متوالية مرجعية. وبطريقة مشابهة ومن خلال البولي ببتيد المشتمل على متوالية الحمض الأميني المذكورة والتي بها على سبيل ‎«Jill 5‏ 785 وفضل 790 و 791 792 793 294؛ ويفضل أكثر ‎a‏ 795 96 7 98( 799 من "التطابق في المتوالية" مع متوالية الحمض الأميني المرجعي؛ فإنه يقصد أن تكون متوالية الحمض الأميني من البولي ببتيد المحدد مشابهة بالنسبة للمتوالية المرجعية باستثناء متوالية البولي ببتيد المعينة والتي يمكن أن تشتمل على ما يصل لحوالي 15 ويفضل ما يصل لحوالي 10؛ 9< 8؛ 7< 6 أو حتى يفضل ما يصل لحوالي 5؛ 4؛ 3 12 من التغييرات 0 في الحمض الأميني لكل 100 حمض أميني من متوالية الحمض الأميني المرجعية. وبعبارة أخرى ‎Sy‏ يتم الحصول على متوالية بولي ببتيد بها على الأقل على 85 7 ويفضل 790 291 2 793 294 وحتى أكثر تفضيلاً 195 796 797 798 799 من التطابق بالنسبة لمتوالية الحمض الأميني المرجعي وما يصل لحوالي 715؛ ويفضل 710 79 78 77 أو حتى يفضل أكثر 75 74 73 72 71 من الوحدات البنائية للحمض الأميني في المتوالية المرجعية فيمكن أن يتم حذفها أو استبدالها باستخدام حمض أميني ‎AT‏ أو ما يصل لعدد من حوالي 715 ويفضل ما يصل لحوالي 710 79 78 ‎JT‏ حتى يفضل أكثر 5ن 5ن ‎dd‏ 33 32 11 من العدد الإجمالي من الوحدات البنائية للحمض الأميني في المتوالية المرجعية والتي يمكن أن يتم إدراجها في المتوالية المرجعية. يمكن أن تحدث تلك التغييرات من المتوالية المرجعية عند الأمين أو عند المواضع الطرفية من الكربوكسي ‎carboxy‏ من متوالية الحمض الأمينية المرجعية أو أي 0 موضع بين تلك المواضع الطرفية والتي يتم تقاطعها إما بصورة فردية من بين الوحدات البنائية في المتوالية المرجعية أو في واحدة أو أكثر من المجموعات المتجاورة بداخل المتوالية المرجعية. يفضل أن تختلف مواضع الوحدة البنائية التي لا تكون متطابقة من خلال استبدالات الحمض الأميني المحافظة. وعلى الرغم من ذلك؛ فإن الاستبدالات لا تشتمل على أي توافق عندما يتم تحديد هوية
المتوالية. 5 .تم استخدام المصطلحات "هوبة المتوالية" أو "النبة المئوية للتطابق هنا بصورة تبادلية. بالنسبة لغرض الاختراع تم هنا تحديد أنه ولكي يتم تحديد النسبة المئوية للتطابق فإن اثنين من متواليات
النسبة المئوية من متوالية الحمض الأميني أو اثنين م متواليات الحمض النووي والمتواليات تتم محاذاتها لأغراض المقارنة المثالية (على سبيل المثال؛ الفجوات التي يمكن إدخالها في المتوالية من احمض الأميني الأول أو الحمض النووي ‎Lad‏ يتعلق بالمحاذاة التوضيحية بالنسبة للأمين الثاني أو متوالية الحمض النووي). يتم بعد ذلك مقارنة الوحدات البنائية للحمض الأميني أو النيوكليوتيد عند حمض أميني مناظر أو مواضع نيوكليوتيد. عندما يتم شغل موضع في المتوالية الأولى بواسطة نفس الحمض الأميني أو الوحدة البنائية للنيوكليوتيد مثل الموضع المنظم في المتوالية الأنية فإن الجزيئات تكون متماثلة عند ذلك الموضع. تكون النسبة المئوية بين اثنين من المتواليات عبارة عن ‎dlls‏ لعدد المواضع لمتماثلة والتي تشترك في المتواليات (أي؛ 7 للتطابق-عدد المواضع المتطابقة/ العدد الإجمالي للمواضع المتطابقة (أي المواضع المتراكبة) * 100). يفضل 0 أن تكون اثنين من المتواليات لها نفس الطول. يمكن ‎shal‏ مقارنة المتوالية على الأطوال الكاملة لاثنين من المتواليات التي تمت مقارنتها أو على شظية من اثنين من المتواليات. وبصورة نمطية؛ فإن المقارنة يتم إجراؤها على مدى الطول الكامل من اثنين من المتواليات التي تمت مقارنتهم. وعلى الرغم من ذلك؛ فإن تطابق المتوالية يمنك تنفيذه على مجموعة؛ على سبيل المثال؛ من عشرين أو خمسي أو مائة أو أكثر من الوحدات البنائية 5 المتجاورة للحمض الأميني. سوف يكون الشخص الماهر في المجال واعياً لحقيقة أن هنا العديد من برامج الكمبيوتر المختلفة متاحة لتحديد التشابه بين اثنين من المتواليات. على سبيل المثال؛ فإن مقارنة المتواليات وتحديد النسبة ‎do gall‏ للتطابق بين اثنين من المتواليات يمكن إجراؤه باستخدام خوارزم رياضي. في نموذج مفضلء فإن النسبة المئوية للتطابق بين اثنين من الأحماض الأمينية أو متواليات الحمض الأميني 0 يتم تحديدها باستخدام ))1970( 444-453 :)48( ‎«(Needleman and Wunsch (J.
Mol.
Biol.‏ وهو خوازم تم تضيمنه ‎daly‏ برنامج ‎GAP‏ في مجموعة برنامج ‎Accelrys GCG‏ (المتاحة من ‎(http://www .accelrys.com/products/geg/‏ باستخدام إما قالب 62 ‎Blosum‏ أو قالب ‎PAM20‏ ‏ووزن الفجوة من 16 14( 12 10 68 أو4 أو وزن طولي من ‎432d‏ 5 6 سوف يدرك الشخص الماهر في المجال أن كل المتغيرات المختلفة سوف تعطي نتائج مختلفة قليلاً 5 ولكن النسبة المئوية الكاملة للتطابق بين المتواليات لن تتغير بصورة كبيرة عندما يتم استخدام نفس الخوارزميات.
يمكن استخدام متواليات البروتين أو متواليات الحمض الأميني من الاختراع الحالي في شكل 'متوالية استفسار ‎query sequence‏ لإجراء البحث في قواعد البيانات العامة؛ على سبيل المثال» لتحديد أعضاء العائلة الأخرى أو المتواليات ذات الصلة. يمكن إجراء مثل تلك الأبحاث باستخدام برامج بلاست ان ‎BLASTN‏ ويلاست بي ‎(version 2.0) BLASTP‏ من ‎etal. (1990) «Altschul‏ ‎Hosp. Biol. 215: 403-10 5‏ .1. يمكن إجراء عمليات البحث في البروتين بلاست ‎BLAST‏ باستخدام برنامج ‎(BLASTP‏ الدرجة 50 طول الكلمة =3 للحصول على متواليات الحمض الأمين المتجانسة بالنسبة لجزيئات البروتين من الاختراع. للحصول على المحاذاة الخاصة بأغراض المقارنة فإن ‎Gapped BLAST‏ يمكن أن يتم تعديله كما تم ‎Chay‏ ذلك في ‎Altschul et al.‏ ‎Nucleic Acids Res. 25(17): 3389-3402.‏ )1997( وعند استخدام برنامج ‎BLAST‏ وبرنامج ‎«Gapped BLAST 0‏ فيمكن استخدام متغيرات الصورة الألية من البرامج ذات الصلة (على سبيل المثال» ‎(BLASTN yg BLASTP‏ انظر الصفحة الرئيسية ‎National Center for Biotechnology‏ ‎Information at kttp://svww. neh nim uh gov!‏ ‎EHV-1 and EHV-4/ recombinant vector technology Definitions ‏يشير المصطلح "خيلي" أو 'فرسي" أو "من الخيول" إلى ما ينتمي للعائلة الخيلية والتي تشتمل على‎ ‏5 الخيول والحمير والُمر الوحشية ويفضل الخيول. بالإضافة إلى ذلك فإن مصطلح "خيلي" أو 'فرسي" أو من الخيول" يضم أيضاً الصور المهجنة من الأعضاء من العائلة الخيلية ‎Equidae‏ ‏(مثل البغال والنغال وما إلى ذلك). يشير 'فيروس هربسي" و ‎JI‏ فيروس هريسي" إلى أنواع في عائلة الفيروسات الهريسية في رتبة الفيروسات الهريسية. ‏0 يشير المصطلح ‎JU‏ فيروس الهريس ألفا للخيول" أو 'فيروس هربسي خيلي" إلى عضو من عائلة الفيروسات الهريسية التي تؤثر على الخيول. ولكي يتم تحديث الثمانية أنواع المختلفة من الفيروسات الهريسية من الخيول فإن هناك خمسة تنتمي إلى العائلة الفرعية الفيروسات الهرسية ‎Wl‏ (فيروس الهربس ألفا للخيول 1؛ الفيروس الهربسي ألفا للخيول 3؛ فيروس الهربس ألفا من الخيول 4؛ فيروس ألفا الهريسي للخيول 8 و فيروس ألفا الهريسي للخيول 9) وثلاثة تنتمي ‎bp dw ‏عصناده جاع‎ org/virestaxooomy ‏لقم‎ Virus) ‏لقفيروسات الهريسية جاماء‎ 25
Taxonomy: 2015 Release EC 47, London, UK, July 2015; Email ratification 2016 (MSL (#30
يشير المصطلح 'فيروس الهربس ‎Wl‏ للخيول 1" فيروس ألفا هربيسي 1؛ وعضو من المجموعة الفرعية من الفيروسات الهريسية الفرعية من جنس الفيروسات الهربسية من جنس ألفا في ‎le‏ ‏الفيروسات الهريسية. سوف تكون المتوالية المرجعية غير الحصرية الخاصة بفيروس الهريس ألفا للخيول 1( على سبيل المثال؛ عبارة عن سلالة ‎abd‏ من النوع غير المعالج فيروس الهربس ألفا للخيول 1 (رقم الوصول في بنك الجينات ‎(AY665713.1‏ أى ‎(Hiibert 1996) RacH‏ يشير المصطلح ‎(ug pd‏ الهريس ألفا من الخيول 4" وعضو من المجموعة الفرعية من الفيروسات الهريسية الفرعية من جنس الفيروسات الهريسية من جنس ألفا في عائلة الفيروسات الهريسية. يشير المصطلح "الفيروس الغدي من الكلاب" أو " الفيروس الغدي ‎SY‏ أو " الفيروس الغدي الكلبي2" أو " الفيروس الغدي الكلبي-2" إلى نوع فيروسي غدي كلبي 2 وعضو من عائلة 0 الفيروسية الغدية البدينة من عائلة الفيروسات الغدية. ‎Lady‏ سبق؛ تم استخدام المصطلحات فيروس غدي كلبي 1 1 ‎CAV-1) Canine adenovirus‏ أوالاه) والفيروس الغدي الكلبي 2 ‎canine‏ ‎CAV-2) adenovirus 2‏ أو ‎(CAV2‏ لكي يتم تحديد اثنين من الأنواع المختلفة من الفيروسات الغدية البدينة. ومع ذلك ووفقاً لأحدث التصنيفات ‎Release EC 47, 2015 :http://www.ictvonline.org/virustaxonomy.asp Virus Taxonomy)‏ ‎(London, UK, July 2015; Email ratification 2016 (MSL #30 5‏ فإن المصطلح فيروس غدي (الفيروس الغدي من الكلاب) يشتمل الآن على كل من النوع الفيروس الغدي الكلبي 2 والنوع الفيروس الغدي الكلبي 1. يشير المصطلح 'تم إدراجه في إطار القراءة المفتوح 70" إلى أن شظية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي تم إدراجها في الحمض النووي دي أوكسي ‎(Sign)‏ الجينومي عند موضع التشفير من 0 الفيروس الهريسي ألفا 1 من الخيول وذلك لإطار القراءة المفتوح 70. في سمة محددة من الاختراع الحالي فإن عملية الإدراج تشير إلى تلك الناتجة في عملية الحذف الخاصة . 5" من 801 زوج قاعدة من إطار القراءة المفتوح 70 إلى تترك 423 زوج قاعدة للمتبقي من الصورة السليمة من الطرف 73 ولكن يتم إلغاء التعبير الخاص بمنتج جين إطار القراءة المفتوح 70 من منتج البروتين السكري 06. إن البروتين السكري 6 يكون من العديد من الفيروسات الهربسية ألفا والتي تشتمل 5 على فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎Ally‏ يتم إفرازها من الخلايا المصابة وتكون الوظيفة في شكل البورتين المعدل بواسطة السيتوكينات الالتهابية المساعدة الخاصة بالريط. إن إلغاء التعبير الخاص
بها في الناقل الفيروسي ينبغي أن يزيد من توليد المناعة الخاصة بالعدوى الفيروسية بالمقارنة مع النوع غير المعالج من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 مع تعبير البروتين السكري 6. يشير المصطلح "الإدراج بداخل إطار القراءة المفتوح 3/1" إلى أن شظية الحمض النووي دي أوكسي ‎(Sign)‏ قد تم إدراجها في الجينوم الفيروسي عند الموضع حيث يكون هناك حذف سريع على مدى التمرير أثناء إجراء التوهين الخاص بسلالة اللقاح من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ 1283 زوج قاعدة من الشظية التي تشتمل على 790 من إطار القراءة المفتوح 1 وإطار القراءة المفتوح 2 الكاملة التي أصبحت مفقودة. تم اختيار موضع الإدراج المذكور بسبب احتمالية أن يكون هناك تعبير من الجين الانتقالي من الجين الانتقالي من الموضع المذكور والذي يمكن أن يتداخل مع الناقل من الانتساخ والذي يتم توقعه بأنه منخفض بصورة شديدة. 0 تعريفات اللقاح يشير المصطلح "تركيبة مولدة للمناعة أو تركيبة ‎"Lelie‏ إلى تركيبة من ‎sale‏ تشتمل على مولد ضد واحد على الأقل أو جزء مولد للمناعة منها ‎lly‏ تظهر استجابة مناعية في العائل من الخلية أو من الاستجابة المناعية التي يتوسطها الجسم المضاد بالنسبة للتركيبة. يتم فهم مصطلح ‎dod‏ الضد" هنا في المجال وبشتمل على مواد والتي تكون ‎alge‏ للمناعة؛ أي؛ 5 جينات مولدة للمناعة ‎Jie immunogens‏ المواد التي تحث عدم الاستجابة المناعية أو الطاقة؛ أي أن هناك عدم وجود تفاعلات من خلال آليات الدفاع في الجسم بالنسبة للمادة الخارجية. وكما تم استخدامه هنا فإن المصطلح ‎alge’‏ ضد" يقصد أن يعني بروتينات كاملة الطول وأيضاً شظايا ببتيدات منها والتي تشتمل على واحدة أو أكثر من القمم اللاصقة ‎epitope‏ ‏يشير المصطلح "حيوان ينتج ‎Malek‏ إلى الحيوانات التي يتم استخدامها للاستهلاك الأدمي ‎Jie‏ ‏0 الخنازير والماشية والدواجن والسمك وبفضل أن يشير المصطلح حيوان ينتج طعام إلى الخنازير والماشية ويفضل أكثر الخنازير. إن المصطلح "حيوان منتج للطعام" يستثني سلالة الفرس مثل الخيول. 'يمكن أن تشير 'تركيبة مناعية' كما تم استخدامها هنا إلى بولي ببتيد أو بورتين مثل؛ على سبيل ‎(JG)‏ بروتين سطحي فيروسي والذي يعرض استجابة مناعية مثل تلك التي تم وصفها هنا. يشير 5 المصطلح "شظية مولدة للمناعة' أو "جزء مولد للمناعة" إلى صورة شظية و/أو ‎sa‏ مقطع من البروتين أو البولي ببتيد والذي يشتمل على واحدة أو أكثر من القمم اللاصقة وبالتالي فإنها تعرض
استجابة مناعية كما تم وصف ذلك هنا. وبصفة عامة؛ فإن الصور المقطوعة و/أو الصور التي بها استبدال أو الشظايا سوف تشتمل على الأقل على أحماض أمينية متجاورة من البروتين كامل الطول. يمكن أن يتم تحديد مثل تلك الشظايا باستخدام أي عدد من تقنيات تخطيط القمة اللاصقة المعروفة بشكل جيد في المجال. انظرء على سبيل المثال؛ د ‎Epitope Mapping Protocols‏ ‎Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.
Morris, Ed., 1996) Humana Press, 5‏ ‎Totowa, New Jersey‏ على سبيل المثال؛ فإن القمم اللاصقة الخطية يمكن أن يتم تحديدها من خلال عدد أكبر تم تخليقه بصورة متزامنة من الببتيدات على الحوامل الصلبة والببتيدات المناظرة بالنسبة للبروتينات من جزيء البروتين وتفاعل الببتيدات مع الأجسام المضادة بينما ما تزال الببتيدات مرتبطة مع المادة الحاملة. تكون ‎Jie‏ تلك التقنيات معروفة وتم وصفها في المجال؛ 10 انظرء على سبيل المثال» البراءة الأمريكية رقم 4:7086871؛ ‎Geysen et al. (1984) Proc.
Natl.‏ ‎¢Acad.
Sci.
USA 81: 3998-4002‏ و709-715 :23 ‎.Geysen et al. (1986) Molec.
Immunol.‏ وبصورة مشابهة؛ فإن القمم اللاصقة التشاكلية يتم تحديدها بسهولة بواسطة تحديد التشاكل الحيزي من الأحماض الأمينية ‎(Jie‏ على سبيل ‎(Jl‏ من خللا القياس البلوري بإشعاع إكس ‎x-ray‏ ‎crystallography‏ والرنين المغناطيسي النووي ‎(NMR) nuclear magnetic resonance‏ 8 الأبعاد. انظرء بروتوكولات تخطيط القمة اللاصقة ‎Epitope Mapping Protocols‏ أعلاه ‎٠‏ تم أيضاً تضمين مولدات الضد التخليقية ‎Synthetic antigens‏ بداخل التعريف؛ على سبيل المثال؛ عديد القمم اللاصقة ‎polyepitopes‏ والقمم اللاصقة الجانبية ومولدات الضد المشتقة بصورة تخليقية أو تاتجة عودة الارتباط. انظرء على سبيل ‎Bergmann et al. (1993) Eur.
J.
Immunol. «Jal!‏ ‎Bergmann et al. (1996), J.
Immunol. 157:3242-3249; Suhrbier, A.‏ ;23:2777-2781 ‎Immunol. and Cell Biol. 75:402-408; and Gardner et al., (1998) 12th World 20‏ ,)1997( ‎.AIDS Conference, Geneva, Switzerland, June 28-July 3, 1998‏ (وقد ثم تضمين المبادئ
والمحتويات الخاصة بها كلها هناك كمرجع بكامله). ‎WS‏ تم استخدامه هناء يشير المصطلح ‎"mW‏ كما تم استخدامه هنا إلى تركيبة صيدلانية تشتمل على مكون فعال ‎elie‏ واحد على الأقل والذي يحث الاستجابة المناعية في حيوان وبصورة 5 محتملة ولكن ليس من الضروري واحد أو أكثر من المكونات الإضافية والتي تحسن من النشاط المناعي الخاص بالمكون الفعال. يمكن أن يشتمل اللقاح بصورة إضافية على مكونات والتي تكون بصورة نمطية عبارة عن تركيبات صيدلانية. وعلى سبيل المثال؛ فإن تمييز المكون الفعال ‎yall‏
للمناعة من اللقاح يشتمل على الجسيمات الفيروسية في صورتها الأصلية أو في شكل جسيمات موهنة فيما يطلق عليه لقاح حي معدل أو جسيمات غير فعالة بواسطة الطرق المناسبة فيما يطلق عليه لقاح تم قتله ‎(KV) Killed vaccine‏ في صورة أخرى فإن المكون الفعال بصورة مناعية من اللقاح يمكن أن يشتمل على عناصر مناسبة من الكائنات الحية (لقاحات الوحدة الفرعية ‎subunit‏ ‎(vaccines 5‏ حيث أن تلك العناصر يتم توليدها من خلال إتلاف كامل الجسيم أو مزارع النمو المشتملة على تلك الجسيمات وبصورة خاصة خطوات لتنقية البعدية التي تنتج بنيات مطلوية أو من خلال عمليات تخليقية تشتمل على معالجة مناسبة من خلال استخدام نظام مناسب يعتمد؛ على سبيل المثال» على البكتريا والحشرات والثدييات أو أي أنواع أخرى بالإضافة إلى العزل التالي بصورة اختيارية وإجراءات التنقية أو الحث الخاص بالعمليات التخليقية في الحيوان الذي يتطلب 0 لقاح بواسطة التضمين المباشر للمادة الجينية باستخدام تركيبات صيدلانية مناسبة (عملية ‎dallas‏ ‏باللقاح لبولي نيوكليوتيد). يمكن أن يشتمل اللقاح على واحد أو أكثر من واحد من العناصر التي تم وصفها أعلاه. وكما تم استخدامه هنا في سمات معينة من الاختراع الحالي؛ فإن "اللقاح" يشير إلى لقاح حي أو 'فيروس حي" والذي يطلق عليه ‎Lad‏ لقاح ناتج عودة الارتباط. في سمة محددة من الاختراع ‎(Jad‏ فإن "اللقاح” يشير إلى فيروس مقتول أو غير منشط بما في ذلك الجسيمات المشابهة للفيروس. وبالتالي فإن اللقاح يمكن أن يكون عبارة عن لقاح من الوحدة الفرعية أو لقاح غير منشط أو مقتول. إن المصطلح "التعدد في العدوى" يصف عدد الوحدات الخاصة بالعدوى؛ على سبيل المثال؛ الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من عملية عرض الفيروس يتم استخدامها لكل خلية لكي تتم إصابة ‎WDA‏ المزرعة. على سبيل المثال؛ فإن التعدد في العدوى من 0.01 0 يعني أنه لكل 100 خلية في وعاء المزرعة يكون هناك وحدة مصابة واحدة قد تم تلقيحها. يشير المصطلح ‎mil!‏ الحمض النووي دي أوكسي رببوزي" أو 'تلقيح بولي نيوكليوتيد" إلى التلقيح المباشر من المادة الجينية باستخدام تركيبات صيدلانية مناسبة. تكون العديد من الطرق الفيزيائية والكيميائية من التخميد معروفة في المجال. يشير مصطلح ‎aad‏ إلى الفيروس الذي كان ‎Bad‏ سابقاً أو الفيروس غير الخبيث أو البكتريا التي تمت 5 معالجتها بالأشعة (أو بالموجات فوق البنفسجية ‎(UV) ultraviolet‏ أو أشعة إكس ‎Xray‏ أو تلك التي تمت معالجتها بالأشعة الإليكترونية ‎(electron beam‏ أو إشماع جاما ‎(gamma radiation‏
والفيروسات التي تم تسخينها أو معالجتها بصورة كيميائية لكي يتم التخميد أو قتل تلك الفيروسات أو البكتريا مع الاحتفاظ بقابلية توليد المناعة لها. تشتمل عوامل عدم التنشيط المناسبة؛ على بيتا - بروديولاكتون ‎cbeta-propiolactone‏ والصورة الثنائية ‎binary‏ أو صورة بيتا ‎beta-‏ أو صورة أسيتيل -إيثيلين إيمين ‎cacetyl-ethyleneimine‏ وجلوتير ألديهيد ‎gluteraldehyde‏ وأوزون ‎ozone‏ ‏5 وفورمالين ‎formalin‏ (فورماتديهيد ‎.(formaldehyde‏ ‏وبالنسبة للتثببيط بواسطة الفورمالين أو الفورمالديهيد فإن الفورمالديهيد يتم خلطه بصورة نمطية مع الماء وكحول الميثيل ‎methyl‏ لكي يتم إنشاء فورمالين. إن إضافة كحول الميثيل يمنع التحلل الخاص بالتفاعل الجانبي أثناء عملية التنشيط. يستخدم أحد النماذج؛ حوالي 0.1 إلى 71 من 7 من المحلول من الفورمالديهيد لكي يتم تنشيط الفيروس أو البكتريا. من المهم أن يتم ضبط 0 كمية الفورمالين لكي يتم ضمان أن المادة غير فعالة ولكن ليس بكمية كبيرة بحيث أن التأثيرات الجانبية منها تكون عالية عند حدوثها. وبصورة أكثر تحديداً؛ فإن المصطلح "غير منشط' في سياق الفيروس يشير إلى أن الفيروس غير قادر على الانتساخ في الكائن الحي أو في المعمل؛ على الترتيب؛ وأن المصطلح "غير منشط" في سياق البكتريا ‎bacterium‏ فإنه يشير إلى أن البكتريا غير قادرة على التكاثر في الكائن الحي أو في المعمل. على سبيل المثال؛ فإن المصطلح "غير منشط" يمكن أن يشير إلى أن الفيروس قد تم تكاثره في المعمل وتم تخميد نشاطه باستخدام وسائل كيميائية أو فيزيائية بحيث أنه أصبح غير قادر على الانتساخ. في مثال آخر فإن المصطلح "غير منشط" يمكن أن يشير إلى البكتريا التي تم تكاثرها وبعد ذلك تم إيقاف نشاطها باستخدام وسائل كيميائية أو فيزيائية مما ينتج عن معلق من البكتريا أو من الشظايا أو من مكونات البكتريا ‎Jie‏ تلك الناتجة في البكتريا ‎ally‏ يمكن استخدامها 0 كمكون من اللقاح. وكما تم استخدامه هناء يتم استخدام المصطلحات "غير منشط" أو 'مقتول" كما تم استخدامها بصورة تبادلية. يشير المصطلح 'لقاح حي ‎live vaccine‏ إلى لقاح يشتمل إما على كائن حي أو مكون انتساخ للفيروس أو الناقل الفيروسي. 5 تتكون "لتركيبة الصيدلانية" بصورة أساسية من واحد أو أكثر من المكونات القادرة على التعديل الفسيولوجي؛ على سبيل المثال؛ الوظائف المناعية من الكائن الحي الذي تم إعطاؤها له أو الكائن
الحي الذي يعيش بداخل أو على كائن حي آخر. يشتمل المصطلح؛ على سبيل المثال؛ وليس الحصر ‎dad‏ على المضادات الحيوية أو مضادات الطفيليات وكذلك المكونات الأخرى المستخدمة بصورة شائعة لتحقيق بعض الأهداف الأخرى مثل؛ على سبيل المثال وليس الحصرء صفات المعالجة والتعقيم والثبات وقابلية الإعطاء للمراد إعطاء التركيبة له من خلال مسارات مركزية أو مسارات عن غير طريق القناة الهضمية ‎Jie‏ المسارات عن طريق الفم أو بداخل الأنف أو بداخل الوريد أو بداخل العضلات أو تحت الجلد أو بداخل البشرة أو مسار مناسب آخر أو لكي يتم التحمل بعد الإعطاء أو خصائص الإطلاق المتحكم فيه. يمكن تحضير مثال غير حصري واحد من تلك التركيبة الصيدلانية وهو لأغراض التوضيح فقط كما يلي: يتم خلط مادة طافية من مزرعة الخلية المصابة مع مادة مثبتة (على سبيل المثال؛ سبيريميدين ‎spermidine‏ و/أو ألبومين 0 مصل بقري ‎aby (BSA) bovine serum albumin‏ بعد ذلك التجفيف بالتجميد للخلائط أو المعالجة بالديهيدرات بواسطة طرق أخرى. وقبل أن يتم التلقيح؛ فإن الخليط يتم بعد ذلك إعادة معالجته بالهيدرات في مستحلب ‎Sle‏ (على سبيل المثال؛ محلول ملح ‎saline‏ أو محلول ملحي منظم بالفوسفات ‎(PBS) phosphate buffered saline‏ أو محاليل غير مائية ‎non-aqueous‏ ‎(Je) solutions‏ سبيل المثال؛ مستحلب زيتي ‎oil emulsion‏ أو مادة مساعدة تعتمد على ‎١٠ 15‏ لألومنيوم ‎-(aluminum‏ ‏وكما تم استخدامه هنا يشتمل المصطلح "مادة حاملة مقبولة من الناحية الصيدلانية أو الناحية البيطرية " على أي وكل المذيبات ‎solvents‏ وأوساط التشتيت ‎dispersion media‏ والطلاءات والمواد المساعدة وعوامل التثبيت ‎stabilizing agents‏ والمواد المخففة ‎diluents‏ والمواد الحافظة ومضادات البكتريا ‎antibacterial‏ وعوامل مضادة للفطريات ‎antifungal‏ وعوامل تساوي التوتر ‎isotonic agents 0‏ وعوامل ‎ali‏ الامتزاز ‎adsorption delaying agents‏ وما شابه ذلك. في بعض النماذج المفضلة؛ وبصورة خاصة تلك التي تشتمل على التركيبات المولدة للمناعة المجففة بالتجميد ‎lyophilized immunogenic compositions‏ عوامل التثبيت التي يتم استخدامها في الاختراع الحالي تشتمل على مواد مثبتة خاصة بالتجفيف بالتجميد ‎lyophilization‏ أو التجميد -التجفيف ‎.freeze-drying‏ ‏25 في بعض النماذج فإن التركيبة المولدة للمناعة من الاختراع الحالي تشتمل على مادة مساعدة. يمكن أن تشتمل "المواد ‎"sae lad)‏ كما تم استخدامها هنا على هيدروكسيد الألومثيوم ‎aluminum‏
‎chydroxide‏ فوسفات ‎١‏ لألومنيوم ‎aluminum phosphate‏ ومركبات الصابونين ‎«saponins‏ على
‎Quil A, QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 ‏سبيل المثال»‎ water-in-oil ‏ومستحلب ماء في زيت‎ « ((Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL
‎cemulsion‏ أو مستحلب زيت في ماء ‎oil-in-water emulsion‏ أو مستحلب ماء في زبت في ماء
‎.water-in-oil-in-water emulsion 5‏ يمكن أن يكون المستحلب معتمداً بصورة خاصة على ‎cw)‏ ‏برافين ‎paraffin oil‏ سائل خفيف ‎¢(European Pharmacopea type)‏ أو ‎cu)‏ برونويد متماثل
‎isoprenoid oil‏ مثل الإسكوالان ‎squalane‏ أو الإسكوالين ‎¢squalene‏ والزيت اذه الناتج من عملية المعالجة بأوليجيومر أو مركبات ألكين ‎alkenes‏ وبصفة خاصة أيزو بيوتين ‎isobutene‏ أو ديسين ‎decene‏ أو إسترات من الأحماض ‎acids‏ أو الكحولات المشتملة على مجموعة ألكيل ‎alkyl‏ خطية
‎linear 0‏ وبصورة خاصة زيوت نباتية ‎eplant oils‏ أو إيثيل أوليات ‎ethyl oleate‏ وبربيلين جليكول ‎gh‏ - (كبريلات/ كابرات) ‎propylene glycol di-(caprylate/caprate)‏ وجليسريل تراي - (كابريلات/ كابرات) ‎glyceryl tri-(caprylate/caprate)‏ أو بروييلين جليكول داي أوليات ‎glyceryl‏ ‎tri-(caprylate/caprate‏ إسترات ‎esters‏ من الأحماض الدهنية ‎fatty acids‏ المتفرعة أو كحولات؛ ‎dha,‏ خاصة إسترات حمض أيزو سيتياريك ‎Lisostearic acid esters‏ تم استخدام الزيت في توليفة
‏5 مع وسائل الاستحلاب ‎emulsifiers‏ لكي يتم تشكيل المستحلب. يفضل أن تكون المستحلبات عبارة عن مواد خافضة للتوتر السطحي غير أيونية ‎nonionic surfactants‏ بصورة مفضلة وبصفة خاصة إسترات من السوربيتان ‎sorbitan‏ من ‎mannide wile‏ (على سبيل ‎(Joa‏ أوليات
‏أنهيد رومانيتول ‎(anhydromannitol oleate‏ من الجليكول ‎dalle glycol‏ جليسيرول ‎polyglycerol‏ من بروبيلين جليكول ‎propylene glycol‏ ومن الأوليك ‎oleic‏ وأيزو سيتياريك
‎isostearic 0‏ وريسينوليك ‎ricinoleic‏ أو حمض هيدروكسي سيتياريك ‎hydroxystearic acid‏ والذي تتم معالجته بشكل اختياري بإيثوكسيل ‎ethoxylated‏ وبوليمرات مشتركة من كتل ‎copolymer‏ ‏065 بولي أوكسي ‎polyoxypropylene (lus‏ -بولي أوكسي إيثيلين ‎polyoxyethylene‏ ‏ويصفة خاصة منتجات بلورونيك ‎Pluronic‏ وبصفة خاصة 1121. ‎Hunter et al., The «kil‏ ‎Theory and Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D.
E.
S.), JohnWiley‏
‎wand Sons, NY, pp51-94 (1995) and Todd et al., Vaccine 15:564-570 )1997( 5‏ تكون أمثلة المواد المساعدة عبارة عن مستحلب ‎SPT‏ الذي تم وصفه في الصفحة 147 من " ‎Vaccine‏
Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach” edited by 11. Powell ¢Design 183 ‏الذي تم وصفه في الصفحة‎ MF59 ‏والمستحلب‎ and 11. Newman, Plenum Press, 1995
من نفس الكتاب. ينطوي مثال إضافي من المادة المساعدة في مركب تم اختيارها من بوليمرات من حمض ‎AST‏ ‎acrylic 5‏ أو حمض ميث أكريليك ‎methacrylic acid‏ والبوليمرات المشتركة من ماليك أنهيدريد ‎maleic anhydride‏ ومشتق ألكينيل انردعءاله. تكون المركبات المساعدة المفيدة ‎Ble‏ عن بوليمرات من حمض أكريليك أو حمض ميث أكريليك والتي يتم ريطه بصورة تشابكية مع إيثرات بولي ألكينيل ‎polyalkenyl ethers‏ من السكريات ‎sugars‏ ومركبات بولي ألكحول 01:018ل00172. تكون تلك المركبات معروفة من خلال المصطلح كريمومير ‎Phameuropa Vol. 8, No. 2, ) carbomer‏ ‎(June 1996 0‏ يمكن أن يرجع الشخص الماهر في المجال أيضاً إلى طلب البراءة الأمريكي رقم 2 الذي يصف بوليمرات الأكريليك والمرتبطة بشكل تشابكي مع المركب المعالج ببولي هيدروكسيل ‎polyhydroxylated‏ المشتمل على ثلاث مجموعات هيدروكسيل ‎hydroxyl‏ على ‎JN‏ ‏وبفضل ألا يزيد عن 8 وذرات الهيدروجين والتي تكون على الأقل ثلاثة من مجموعات الهيدروكسيل ‎lly‏ تم استبدالها بواسطة شقوق أليفاتية ‎aliphatic radicals‏ غير مشبعة تشتمل على 2 من ذرات ‎carbon atoms Osh‏ على الأقل. تكون الشقوق المفضلة المختارة عبارة عن تلك المشتملة على ما بين 2 إلى 4 ذرات من الكريون» ‎(Jeg‏ سبيل المثال» مركبات الفينيل ‎vinyls‏ ‏ومركبات الأليل ‎allyls‏ ومجموعات غير مشبعة أخرى من معالجة بالإيثيلين ‎ethylene‏ يمكن أن تشتمل الشقوق غير المشبعة نفسها على مكونات أخرى ‎Jie‏ الميثيل ‎methyl‏ تكون المنتجات التي تباع تحت اسم ‎((BF Goodrich, Ohio, USA) ¢{CARBOPOL®‏ مناسبة بصورة خاصة. وهي ترتبط بشكل تبادلي مع ‎(lf‏ سكروز ‎allyl sucrose‏ مع ‎ln Jal‏ أريل ‎allyl Jef‏ ‎.pentaerythritol‏ ومن بين ذلك ‎(Kad‏ ذلك ‎.Carbopol 974P, 934P » 934P 971P‏ يفضل أكثر استخدام ‎971P‏ ©.08880001. .ومن بين البوليمرات المشتركة من أنهيدريد ماليك ‎maleic‏ ‎anhydride‏ ومن مشتق ألكينيل يكون هناك بوليمرات مشتركة من إيه ام أيه ‎(Monsanto) EMA‏ والتي تكون عبارة عن بوليمرات مشتركة من أنهيدريد حمض ماليك وإيثيلين. إن التحلل الخاص 5 بالبوليمرات في الماء يؤدي إلى محلول حمض ‎acid solution‏ والذي يتم تعادله ويفضل أن يكون
برقم حموضة فسيولوجي ولكي يتم إعطاء محلول المادة المساعدة في الجين المناعي أو في تركيبة
اللقاح المناعي نفسها ‎Ally‏ يتم تضمينها. تشتمل؛ أمثلة مناسبة إضافية؛ على سبيل المثال لا الحصر؛ على نظام ‎sale‏ مساعدة آر آي بي أي 12181 ‎Inc)‏ نطانعا.) وكتلة بوليمر مشتركة ‎«(CytRx, Atlanta GA) Block co-polymer‏ واس أيه اف-ام ‎«(Emeryville CA «Chiron) SAF-M‏ وشحم مونو فوسفوريل | ‎monophosphoryl‏ ‎dlipid A‏ ومادة مساعدة من أفيريدين من شحم -أمين ‎Avridine lipid-amine‏ وإنتروتوكسين عطوب بالحرارة ‎heat-labile enterotoxin‏ من إيشرشيا كولاي (ناتج عودة الارتباط أو خلاف ‎(ella‏ أو توكسين كوليرا ‎«cholera toxin‏ آي ام اس ‎IMS‏ 1314 أو ميوراميل _داي_ببتيد ‎muramyl dipeptide‏ أو سيتوكينات ‎cytokines‏ ناتجة ‎sage‏ الارتباط حادثة بشكل طبيعي أو
تظائر منها أو مواد خاصة بالحث من إطلاق السيتوكين بداخل الخلايا ‎endogenous cytokine‏ ‎release‏ من بين أشياء أخرى . من المتوقع أن المادة المساعدة يمكن إضافتها في كمية من حوالي 100 ميكرو جرام إلى حوالي 0 مجم لكل جرعة وبفضل بكمية من حوالي 100 ميكرو جرام إلى حوالي 10 مجم لكل جرعة ويفضل أكثر بكمية من حوالي 500 ميكرو جرام إلى حوالي 5 مجم لكل جرعة وحتى يفضل أكثر
5 بكمية من حوالي 750 ميكرو جرام إلى حوالي 2.5 مجم لكل جرعة والأكثر تفضيلاً بكمية من حوالي 1 مجم لكل جرعة. وعلى نحو بديل؛ فإن المادة المساعدة ‎(Ka‏ أن تكون عند تركيز من حوالي 0.01 إلى 750 وبفضل في تركيز من حوالي 72 إلى 730 وبفضل أكثر في تركيز من حوالي 75 إلى 725 ويفضل أكثر عند تركيز من حوالي 77 إلى حوالي 722 وبفضل أكثر عند تركيز من 710 إلى 720 بالحجم من المنتج النهائي.
0 يمكن أن تشتمل "المواد المخففة" على ‎cole‏ محلول ملحي؛ وديكستيروز ‎Jelly dextrose‏ ‎ethanol‏ وجليسيرول ‎glycerol‏ وما شابه ذلك. يمكن أن تشتمل العوامل متساوية التوتر ‎Isotonic‏ ‎agents‏ على كلوريد صوديوم ‎sodium chloride‏ ديكستيروز» مانيتول ‎mannitol‏ وسوربيتول ‎sorbitol‏ واللاكتوز ‎lactose‏ وغير ذلك. تشتمل المواد المثبتة على ألبومين ‎albumin‏ وأملاح قلوية ‎alkali salts‏ من حمض إيثلين داي أمين تترا أسيتيك ‎ethylendiamintetracetic acid‏ من بين
5 أشياء أخرى.
يشير 'معزول" إلى التغيير 'بواسطة "يد الإنسان" من الحالة الطبيعية؛ أي؛ إذا حدثت في الطبيعة فإنها يتم تغييرها أو إزالتها من الوسط الأصلي الخاص باه أو كل من ذلك. على سبيل المثال؛ فإن البولي نيوكليوتيد أو البولي ببتيد الموجود بصورة طبيعية في الكائن الحي لا "يتم ‎"abe‏ ولكن نفس البولي نيوكليوتيد أو البولي ببتيد يتم فصله من المواد الموجودة بشكل مشترك من الحالة الطبيعية الخاصة به والذي يكون في ‎Alla‏ 'معزول" كما تم استخدام هذا المصطلح هنا. يشير مصطلح ‎"Attenuation (past‏ إلى تقليل حدة الممرض. في الاختراع الحالي فإن 'توهين" هو مرادف ل "عديم الفوعة". في الاختراع الحالي فإن الفيروس الذي تم توهينه يكون عبارة عن أح الفيروسات الذي تم تقليل الفوعة فيه بحيث أنها لا يسبب أي علامات إكلينيكية للعدوى ولكنه يكون قادراً على حث الاستجابة المناعية في الحيوان المستهدف؛ ولكن ذلك يعني أيضاً علامات
0 إكلينيكية والتي يتم تقليل حدوثها أو شدتها في الحيوانات المصابة بالفيروس الموهن؛ وبصفة خاصة ناقل فيروسي لفيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ كما تمت حمايته في مقارنة مع ‎degen‏ عينة المقارنة” من الحيوانات التي تمت إصابتها بفيروس موهن أو ممرض والتي لا تستقبل الفيروس الموهن. وفي هذا السياق؛ فإن المصطلح ‎[AG‏ تم تقليله" يشير إلى نقص على الأقل 710 ويفضل 725وبفضل أكثر 750 ‎Juang‏ أكثر 760 وحتى يفضل أكثر 770 ‎Ging‏
5 يفضل أكثر 780 ‎ing‏ يفضل 790 والأكثر تفضيلاً 7100 بالمقارنة مع مجموعة عينة المقارنة كما تم تحديده أعلاه. وبالتالي فإن الممرض الموهن أو الممرض الذي به فوعة ‎chang pb‏ على سبيل ‎(JB‏ يكون عبارة عن ‎BU‏ فيروسي موهن كما هو مطلوب حمايته وبصفة خاصة فيروس الهريس ألفا للخيول 1 (ويفضل ‎(RacH‏ وناقل فيروسي طبقاً لما هو مطلوب حمايته والذي يكون مناسباً لإنشاء لقاح حي معدل أو تركيبة مولدة للمناعة حية معدلة.
0 وهنا فإن "الجرعة الفعالة" تشير إلى؛ على سبيل المثال لا الحصر إلى؛ كمية من مولد الضد والتي توضح أو تكون قابلة لتوضيح الاستجابة المناعية والتي تنتج نقص في الأعراض الإكلينيكية في الحيوان الذي تم إليه إعطاء مولد الضد. وكما تم استخدامه هناء يشير المصطلح "كمية فعالة" في سياق التركيبة إلى كمية من التركيبة المولدة للمناعة قادرة على حث الاستجابة المناعية التي تقلل من حدوث أو الفقد في الشدة الخاصة
5 بالعدوى أو حدوث المرض في الحيوان. وبصفة خاصة فإن الكمية ‎lad‏ تشير غلى وحدات تشكيل المستعمرة ‎(CFU) colony forming units‏ لكل جرعة. وبصورة بديلة؛ وفي سياق العلاج؛
فإن المصطلح "كمية فعالة" يشير إلى كمية خاصة بالعلاج ‎ally‏ تكون كافية لتقليل أو تخفيف الشدة أو المدة من المرض أو الاضطراب أو واحدة أو أكثر من الأعراض التي تمنع تقدم المرض أو الاضطراب وتسبب ارتداد المرض أو الاضطراب وتمنع حدوث أو تطور أو بداية أو تطور واحدة أو أكثر من الأعراض المرتبطة مع المرض أو الاضطراب أو تحسن أو تزيد من الوقاية من أو معالجة أخرى أو عامل علاجي.
تشير الاستجابة ‎"due all‏ أو الاستجابة المولدة ‎da lial]‏ على سبيل المثال لا الحصر إلى تطور الاستجابة المناعية التي يتوسطها الجسم المضاد و/أو الخلية فيما يتعلق بالتركيبة (المولدة للمناعة) أو اللقاح محل الاهتمام. وبصورة عادية؛ فإن الاستجابة المناعية أو الاستجابة المولدة للمناعة؛ ‎dais‏ على سبيل المثال لا الحصر؛ على التأثيرات التالية: الإنتاج أو التنشيط الخاص بالأجسام 0 المضادة وخلايا ‎B cells B‏ وخلايا المساعد 1 ‎helper T cells‏ وخلايا الكبح 1 1 ‎suppressor‏ ‎LA) Ss cells‏ السامة للخلية 1 ‎cytotoxic 1 cells‏ والتي يتم توجيهها بصورة خاصة إلى مولد الضد أو مولدات الضد التي تم تضمينها في التركيبة أو اللقاح محل الاهتمام. ويفضل أن يقوم العائل بعرض إما الاستجابة العلاجية أو الاستجابة المولدة للمناعة الخاصة بالحماية (الذاكرة) مثل المقاومة لعدوى جديدة والتي تعمل على التحسين و/أو تقليل الشدة الخاصة بالمرض. سوف يتم 5 توضيح مثل تلك الحماية بواسطة إما نقص في عدد الأعراض أو شدة الأعراض أو النقص في واحدة أو أكثر من الأعراض المرتبطة مع العدوى الخاصة بالممرض أو نقص في بداية شدة الفيروس أو تقلل في مقاومة الفيروس أو نقص في الحمل الفيروسي الإجمالي و/أو تقليل في إفراز
الفيروس. 'الحماية ضد المرض"» "المناعة الخاصة بالحماية"» "المناعة الوظيفية"» "تقليل الأعراض 0 الإكلينيكية" ‎coals‏ / اختزال الأجسام المضادة الخاصة بالتعادل و/أ تحويل المصل" والعبارات المشابهة لذلك فإن ذلك يشير إلى الاستجابة الجزئية أو الاستجابة الكاملة في مضادة المرض أو الحالة المتولدة من خلال إعطاء واحدة أو أكثر من التركيبات العلاجية من الاختراع أو توليفة منها والتي ينتج عنها تأثيرات حذف أقل بالمقارنة بما هو متوقع في الخاضع غير المحصن والذي تم تعرضه للمرض أو للعدوى. أي أن شدة التأثيرات الضارة من العدوى يتم تقليلها في الخاضع الذي 5 .تمت معالجته باللقاح. يمكن تقلل العدوى أو تبطئتها أو يمكن أن يتم منعها بالكامل في الخاضع
الذي تمت معالجته باللقاح. وهنا فإن الوقاية الكاملة من العدوى تعني أنه قد تم تحديدها بصورة
خاصة. إذا لم يتم ذكر الوقاية الكاملة فإن المصطلح يعني وقاية جزئية. وهنا فإن "تقليل حدوث و/أو شدة العلامات الإكلينيكية" أو نقص الأعراض الإكلينيكية" فإن ذلك يعني؛ ليس على سبيل الحصر؛ نقص في عدد الخاضعين المصابين في المجموعة أو تقليل أو القضاء على عدد من الخاضعين الذين يعرضون علامات إكلينيكية من العدوى أو تقليل شدة أي علامة إكلينيكية والتي تكون موجودة في واحد أو أكثر من الخاضعين بالمقارنة مع العدوى من النوع عير المعالج. على سبيل المثال» يجب أن تتم الإشارة إلى أي نقص في حمل الممرض أو التدمير في الممرض أو النقص في انتقال الممرض أو النقص في أي من العلامات الإكلينيكية التي توضح أعراض الملاريا ‎malaria‏ يفضل أن يتم تقليل تلك العلامات في واحد أو أكثر من
0 الخاضعين الذي يستقبلون التركيبة العلاجية من الاختراع الحالي بالمقارنة على الأقل ب 710 في مقارنة مع الخاضعين الذين لا يستقبلون أن تركيبة والذين أصبحوا مصابين بالعدوى. وبصورة أكثر تفضيلاً فإن العلامات الإكلينيكية يتم تقليلها في الخاضعين الذي يستقبلون تركيبة من الاختراع بمقدر 720 على الأقل ويفضل 730 على الأقل وبفضل أكثر 740 على الأقل وحتى يفضل 0 على الأقل.
5 يشير المصطلح” الحماية المتزايدة” هناء على سبيل المثال وليس الحصر إلى النقص الإحصائي الخاص بواحد أو أكثر من الأعراض الإكلينيكية والتي ترتبط مع العدوى بواسطة عامل ناقل للعدوفي مجموعة معالجة باللقاح من الخاضعين في مقابل مجموعة عينة مقارنة غير معالجة باللقاح من الخاضعين. يشير المصطلح "نقص ‎pS‏ من الناحية الإحصائية من الأعراض الإكلينيكية"؛ على سبيل المثال لا الحصر غلى التردد في حدوث واحد على الأقل من الأعراض
0 الإكلينيكية في المجموعة التي تمت معالجتها باللقاح من الخاضعين والتي تكون على الأقل 710 ويفضل 720 والأكثر تفضيلاً 730 وبفضل أكثر 50”وحتى الأكثر تفضيلاً 770 أقل بالمقارنة مع مجموعة عينة المقارنة بعد اختبار العامل الناقل للعدوى. سوف تشير "الحماية الممتدة لمدة طويلة ‎"Long-lasting protection‏ إلى 'فعالية محسنة" والتي تكون مقاومة على الأقل لمدة 3 أسابيع ولكني فضل أن تكون على الأقل 3 أشهر وبفضل أكثر أن
5 تتكون على الأقل 6 أشهر. في حالة الماشية؛ يفضل أن تكون الحماية الممتدة بصورة طويلة تكون مقاومة للعمر المتوسط للحيوان والذي يتم بيعه لغرض إنتاج اللحوم.
— 9 6 — يشير المصطلح "نقص حدة الفيروس ‎"viremia‏ المستحثة بالفيروس إلى؛ على سبيل المثال وليس الحصرء ‎ard‏ في الفيروس الداخل في تيار الدم ‎bloodstream‏ من الحيوان» حيث إن مستوي الإصابة بالفيروس؛ أي عدد نسخ الحمض النووي دي أوكسي رببوزي أو الحمض النووي الريبوزي الفيروسية لكل مل من مصل الدم أو عدد المستعمرات المشكلة اللوحة لكل ديسي لتر من مصل الدم؛ يتم تقليلها في ‎dead)‏ الخاص بالحيوانات التي تستقبل تركيبة من الاختراع الحالي بمقدار على الأقل 750 بالمقارنة مع الحيوانات التي تستقبل تركيبات ويمكن أن تصبح مصابة. وبصورة أكثر تفضيلاً فإن المستوي الفيروسي يتم تقليله في الحيوانات التي تستقبل تركيبة من الاختراع بمقدر 790 على الأقل ويفضل 799.9 على الأقل وبفضل أكثر 799.99 على الأقل وحتى يفضل 799.999 على الأقل. 0 وكما تم استخدامه هناء يتم فهم المصطلح ‎san"‏ الفيروس" على أنه حالة تكون فيها جسيمات الفيروسات قد تم إنتاجها و/أو تم تدويرها في تيار الدم من الحيوان» وبصورة خاصو من الحيوان أو الطائر أو الحشرة. يشير مصطلح ‎ASW‏ إلى غياب التأثيرات الجانبية في الحيوان الذي تم تلقيحه بعد التلقيح والتي تشتمل على سبيل المثال لا الحصر على ‎Jos‏ لارتداد المحتمل للشدة الفيروسية الخاصة باللقاح 5 المعتمد على الفيروس ‎virus-based vaccine‏ أو وجود تأثيرات جانبية كبيرة بصورة إكلينيكية ‎Jie‏ ‏المرض المستمر أو المرض الذي يعم الجسم كل أو الالتهاب ‎inflammation‏ غير المقبول عند موضع إعطاء اللفاح. تشير المصطلحات "تلقيح" أو ‎ZL dalled‏ أو الصور المتغيرة منه؛ كما تم استخدامها هناء على سبيل المثال لا الحصرء غلى عملية تشتمل على إعطاء تركيبة مولدة للمناعة من ‎١‏ لاختراع 0 والتي عندما يتم إعطاؤها للحيوان فإنها تجعه يعرض أو يكون قادراً على عرض -بصورة مباشرة أو بصورة غير مباشرة-الاستجابة المناعية في الحيوان المذكور. تشير "'نسبة الوفيات" في سياق الاختراع الحالي إلى الموت الذي يكون سبب العدوى والذي يشتمل على ‎Als‏ تكون فيها العدوة شديدة جدياً حيث أن الحيوان يتم قتله بصورة رحيمه لإيقاف المعاناة ولتوفير نهاية إنسانية لحياة الحيوانات. الصيغ
يفضل أن يكون الخاضع الذي يتم إعطاؤه التركيبة عبارة عن أحد الحيوانات؛ ‎ally‏ تشتمل على سبيل المثال لا الحصر على؛ الماشية والخيول والغنم والخنازير والدواجن (على سبيل المثال؛ الدجاج) والماعز والقطط والكلاب والهامستر والفئران والجرذان ‎dig‏ أكثر أن يكون الثديي عبارة عن الخنزير.
تشتمل الصيغ الخاصة بالاختراع على كمية تحصين فعالة من واحدة أو أكثر من التركيبات المولدة للمناعة والمواد الناقلة المقبولة فسيولوجياً. تشتمل اللقاحات على كمية تحصين فعالة من واحدة أو أكثر من التركيبات المولدة للمناعة والموالد الناقلة المقبولة فسيولوجياً. يجب أن تكون الصيغة مناسبة لطريقة الإعطاء. يمكن أن تشتمل التركيبة المولدة للمناعة؛ إذا كان ذلك مرغوباً على كميات صغيرة من عوامل
0 الترطيب ‎wetting agents‏ أو عوامل الاستحلاب ‎emulsifying agents‏ أو العوامل المنظمة ‎buffering agents‏ للرقم الهيدروجيني . يمكن أن تكون التركيبة المولدة للمناعة عبارة عن محلول سائل أو معلق أو مستحلب أو قرص أو حبيبة أو كسولة أو صيغة إطلاق مستمر أو مسحوق. يمكن أن تشتمل الصيغة على المواد الحاملة ‎Jie‏ الدرجات الصيدلانية من المانيتول واللإاكتوز والنشا ‎starch‏ وسيتيارات الماغنسيوم ‎magnesium stearate‏ وسكارين الصوديوم ‎sodium‏ ‎saccharine 5‏ والسيليلوز ‎cellulose‏ وكريونات الماغنسيوم ‎carbonate‏ 08806810170 إلخ. طرق المعالجة تشتمل المسارات المفضلة من الإعطاء؛ على سبيل المثال لا الحصر على الإعطاء في الأنف أو في الفم أو الإعطاء في الجدل والإعطاء بداخل العضلات. من المرغوب أن يتم الإعطاء في ماء الشرب وبفضل أكثر في جرعة واحدة. سوف يتعرف الماهر في المجال بأن التركيبات من الاختراع 0 يمكن أ؛ يتم إعطاؤها في واحدة أو اثنين أو أكثر من الجرعات وأيضاً من خلال المسارات الأخرى من الإعطاء. على سبيل المثال؛ فإن المسارات الأخرى تشتمل الإعطاء تحت الجلد أو عبر الجلد أو ‎daly‏ البريتون أو بداخل الجدل وذلك يعتمد على المدة المطلوبة والفعالية الخاصة بالمعالجة وأيضاً التركيبات الخاصة بالاختراع والتي يمكن أن يتم إعطاؤها مرة واحدة أو عدة مرات وبصورة متقطعة أيضاً على سبيل ‎(JE)‏ على أساسي يومي أو كل عدة أيام أو أسابيع أو أشهر وفي 5 جرعات مختلفة مثل حوالي 103 إلى 108 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين (انظر العيار الفيروسي أعلاه). في سمة محددة من الاختراع الحالي؛ تكون الجرعة حوالي
3 إلى 108 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين وبصولة خاصة لفيروس حي/ لقاح حي. يمكن أن يتم عرض التركيبات؛ إذا كانت مرغوبة؛ في علبة أو في جهاز توزيع والذي يمكن أن يشتمل على واحدة أو أ: ثر من صور جرعة الوحدة المناسبة التي تشتمل على المكون الفعال. يمكن أن تشتمل ‎spall‏ على سبيل ‎(JB‏ على فلز أو رقائق من البلاستيك؛ ‎Jie‏ عبوة الحبيبات. يمكن أن يصاحب العبوة أو وسيلة التوزيع تعليمات خاصة بالإعطاء ويفضل التعليمات الخاصة بالثديي وبصورة خاصة الخنزير. وعلى نحو مرتبط مع تلك الحاوية (الحاويات) يمكن ملاحظة أنه في الصورة التي تمت التوصية بها بواسطة الوكالات الحكومية المنظمة لعملية التصنيع أو الاستخدام أو البيع الخاص بالمنتجات الصيدلانية أو المنتجات البيولوجية فإنه قد تمت ملاحظة 0 انعكاسات الموافقة على تلك المنتجات من ناحية وكالة التصنيع أو الاستخدام أو البيع للإعطاء البشري. نظرة ‎dale‏ على المتواليات تم عرض المتواليات التالية بالتفصيل وتم الكشف عنها هنا في الاختراع الحالي: المعززات: 5 متوالية بهوية رقم: 1 فيروس الهريس ألفا من الخيول 4 600 زوج قاعدة من حمض دي أوكسي ربيونيوكليك ‎4pgG600‏ ‏متوالية بهوية رقم: 2 فيروس الهريس ‎Ul‏ من الخيول 4 600 زوج قاعدة من حمض دي أوكسي ربيونيوكليك ‎4pMCP600‏ ‏متوالية بهوية رقم: 3 فيروس ‎sell‏ ألفا من الخيول 4 430 زوج قاعدة من حمض دي أوكسي 0 ربيونيوكليك 0430م متوالية بهوية رقم: 4 فيروس ‎sell‏ ألفا من الخيول 4 449 زوج قاعدة من حمض دي أوكسي ربيونيوكليك ‎p455‏ ‏متوالية بهوية رقم: 5 البادئ رقم 1130 الخاص بإطار القراءة المفتوح 72 ‎open reading frame‏ ‎(ORF72) 72‏ متوالية بهوية رقم: 6 البادئ رقم 1131 الخاص بإطار القراءة المفتوح 72 متوالية بهوية رقم: 7 البادئ رقم 1079 الخاص ب ‎mCherry‏
متوالية بهوية رقم: 8 البادئ رقم 1080 الخاص ب ‎mCherry‏ ‏موضع الإدراج: متوالية بهوية رقم: 9؛ بادئ تفاعل سلسلة بوليمراز لحمض نووي من متوالية صناعية ‎Artificial‏ ‎sequence‏ 1017 خاصة بمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 70 متوالية بهوية رقم: 10( بادئ تفاعل سلسلة بوليمراز لحمض نووي من متوالية صناعية 1018 خاصة بمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 70 متوالية بهوية رقم: ‎el]‏ بادئ تفاعل سلسلة بوليمراز لحمض نووي من متوالية صناعية 1007 خاصة بمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 متوالية بهوية رقم: 12 بادئ ‎Joli‏ سلسلة بوليمراز لحمض نووي من متوالية صناعية 1008 0 خاصة بمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 متوالية بهوية رقم: 13 من منطقة جانبية يسرى ‎(Up70)‏ من (417 زوج قاعدة) متوالية بهوية رقم: 14 من منطقة جانبية يمنى (م[711) من )431 زوج قاعدة) متوالية بهوية رقم: 15؛ منطقة جانبية يسرى (إطار القراءة المفتوح 70 علوي) في سلالة نوع غير معالج فيروس الهريس ألفا للخيول 1 من ‎abd‏ (رقم وصول في بنك الجينات ‎(AY665713.1‏ ‏5 الموجودة عند النيوكليوتيدات 127680-127264 متوالية بهوية رقم: 16( منطقة جانبية يمنى (إطار القراءة المفتوح 71 علوي) في سلالة نوع غير معالج فيروس الهريس ألفا للخيول 1 من ‎abd‏ (رقم وصول في بنك الجينات ‎(AY665713.1‏ ‏الموجودة عند النيوكليوتيدات 128484 -128913. متوالية بهوية رقم: 17 منطقة جانبية مقطوعة في نظام ‎:RED‏ من منطقة جانبية يسرى ‎(Up70)‏ ‏0 (283 زوج قاعدة) = المطابق ل 3 من 283 زوج قاعدة من 417 زوج قاعدة من "منطقة جانبية كلاسيكية' متوالية بهوية رقم: 18 منطقة جانبية مقطوعة في نظام 8280: من منطقة جانبية يمنى ‎(71Up)‏ ‏)144 زوج قاعدة) = المطابق ل 5" من 144 زوج قاعدة من 431 زوج قاعدة من "منطقة جانبية كلاسيكية". 5 متوالية بهوية رقم: 19( الجزء المحذوف في ‎abd‏ من النرع المعالج ( ‎Genbank accession‏ ‎(number AY665713.1‏ من متوالية الجينوم 128482 - 127681 ‎«nt‏
متوالية بهوية رقم: 20 من الجزء المحذوف في متوالية الجينوم ‎RacH‏ (مع عدم وجود أرقام ‎nt‏ ‏متاحة بسبب متوالية جينوم كامل غير معروفة). متواليات البلازمي/ الناقل: متوالية بهوية رقم: 21 متوالية نيوكليوتيد من بلازميد ناقل من 17-01070م-هرمون النمو البقري متوالية بهوية رقم: 22( متوالية نيوكليوتيد من ناقل خاص بالنقل من ‎pUT0-p455-71KT1‏ ‏متوالية بهوية رقم: 23« متوالية نيوكليوتيد من بلازميد ناقل من ‎pU70-p455-H3-7T1K71‏ ‏متوالية بهوية رقم: 24 متوالية نيوكليوتيد من ناقل خاص بالنقل من ‎pU-1-3-p430-BGHKBGH‏ ‏متوالية بهوية رقم: 25« متوالية نيوكليوتيد من بلازميد ناقل من ‎pU1-3-p430-H1av-BGHKBGH‏ ‏متواليات الراصة الدموية 0 متوالية بهوية رقم 26: الراصة الدموية [فيروس أنفلونزا ‎A‏ (م/انفلونزا الخنازير/إيطاليا/ ‎[(H1N2)2010/116114‏ ‏بنك الجينات: ‎ADRO01746.1 Hlpdm‏ متوالية بهوية رقم 27: الراصة الدموية [فيروس أنفلونزا ‎A‏ (ه/انفلونزا الخنازير/ إيطاليا/ 7680[ ‎[(H3N2) 2001‏ 5 بنك الجينات: ‎:ABS50302.2 H3‏ متوالية بهوية رقم 28: الراصة الدموية [فيروس أنفلونزا ‎A‏ (م/انفلونزا الخنازير/ ‎J132/Gent‏ ‎[((HIN1)2005‏ ‏بنك الجينات: ‎:AFR76623.1 Hlay‏ متوالية بهوية رقم 29: الراصة الدموية [فيروس أنفلونزا ‎JA) A‏ انفلونزا الخنازير/ إيطاليا/ ‎[A675‏ ‎[(HIN2) 2003 0‏ بنك الجينات: ‎ADK98476.1* Hlhu‏ * برجاء ملاحظة أن الحمض الأميني 531 (10؛ كودون الإيقاف؛ قد م تغييره بواسطة المخترعون إلى 1): متواليات البنية فيروس شمالنبرج م 5 متوالية بهوية رقم: 30 متوالية الجين ‎GS‏
متوالية بهوية رقم: 31؛ متوالية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي تم تخليقها ‎lly‏ تشتمل على مواضع تقييد خاصة بالاستنساخ الفرعي المتوالية بهوية رقم: 32 شظية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي يتم استخدامها لناتج ‎sage‏ ‏الارتباط ‎RED‏ لكي يتم إنتاج ‎.pRacH-SE-70-455-SBVGe‏ ‏5 المتوالية بهوية رقم 33: بادئ ‎Up70F‏
المتوالية بهوية رقم 34: بادئ ‎Up71R‏ ‏المتوالية بهوية رقم 35: بادئ 560455-11 المتوالية بهوية رقم 36: بادئ بروتين ‎Ge‏ فيروس شمالنبرج ‎F1 A‏ المتوالية بهوية رقم 37: بادئ بروتين ‎Ge‏ فيروس شمالنبرج م ‎RI‏
0 الأمثلة تم تضمين الأمثلة التالية لتوضيح النماذج المفضلة من الاختراع. يجب أن يدرك الماهرون في المجال أن التقنيات التي تم الكشف عنها في الأمثلة تمثل تقنيات قد اكتشفها المخترعون بحيث تعمل بشكل جيد في تنفيذ الاختراع ويالتالي فيمكن اعتبارها بأنها تمثل طرق مفضلة من الممارسة الخاصة بالاختراع. ‎eg‏ الرغم من ذلك سوف يدرك ذوي المهارة في المجال في ضوء الكشف
الحالي أن هناك العديد من التغييرات يمكن أن يتم إجراؤها على النماذج المحددة التي تم الكشف عنها هنا وما تزال تلك النماذج تعطي نفس النتائج أو نتائج مشابهة بدون الخروج من مجال وفحوى الاختراع. المثال رقم 1: تحديد وإنشاء معززات جديدة
0 كانت استراتيجية تحديد متواليات المعزز المناسبة كما يلي:
0 زوج قاعدة من الشظايا من متوالية فيروس الهربس ألفا من الخيول 4 العلوية من اثنين من إطارات القراءة المفتوحة المعروفة والتي تم تحليلها أولاً بواسطة المحاذاة مع الاستجابة ذات الصلة من الشظايا من جينوم فيروس الهربس ألفا من الخيول 1. كانت الجينات المختارة عبارة عن إطار القراءة المفتوح42 ‎open reading frame42‏ (0:142) والتي تشفر بروتين الغلاف الرئيسي ‎major‏
‎(MCP) capsid protein 5‏ إطار القراءة المفتوح70 التي تشفر البروتين السكري 6. يكون غلاف البروتين الرئيسي عبارة عن واحد من معظم المكونات الوفيرة من الفيرون والتي تحتاج للتجميع من
— 5 7 — الأغلفة في الخلايا من النواة بمجرد أن يتم تخليق الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي الفيروسي والذي يكون جاهزاً للتغليف. وبالتالي يكون المعزز الخاص بها متوقع أن يكون نشط أثناء الأزمنة المبكرة والمتأخرة في دورة الانتساخ الفيروسي. بالنسبة للبروتين السكري 6 من المعروف أن تكون (إطار القراءة المفتوح70) نشطة وذلك أثناء الأزمنة المبكرة والمتأخرة في دورة الانتساخ ( ‎Colle et‏ ‎(al. 1995, Drummer et al. 1998 5‏ كانت هوية المتوالية هي 2 بالنسبة لمعزز بروتين الغلاف لرئيسي و82.3 بالنسبة لمعزز البروتين السكري 0. تم الأخذ في الاعتبار لتلك الاختلافات بحيث تكون كبيرة بدرجة كافية لمنع استخدام طريقة ناتج عودة الارتباط من واحدة من النواحي والتي تكون هامة للسماح بالتنشيط الانتساخي اثناء انتساخ فيروس الهريس ألفا من الخيول 1 على الجانب الآخر. وأيضاً لكي يتم اختبار نشاط المعزز» من 600 زوج قاعدة من شظايا حمض نووي دي أوكسي ريبوزي من ‎ApgGO00‏ ‎GCAGACTTTGGAGCAGCACAATTTCCGGTTGTGGACCCCATGGACCTTGGTT‏ ‎TGGCTGGTACCGTGGAAACTAACGCTCCGGAAGTTTTGGCCAGAGCAAAAT‏ ‎ACAATTCGAAGGTAGACATATGGAGCGCCGGAATAGTTCTGTTTGAAATGC‏ ‎TCGCATATCCATCAACTCTATTTGAGGACCCGCCGAGTACCCCACAAGAGTA‏ ‎TGTAAAAAGCTGTCATTCTCAACTACTGAGAATAATATCAAAGCTAAAGAT 5‏ ‎AAACCCTGAGGAGTTTCCACGGGAACCAGAGTCTAGGCTCGTGCGCGGATA‏ ‎CATCGAATACGCCAGCCTAGAGCGTAAGCCACATACGCGCTATCCTTGCTTC‏ ‎CAGCGCGTGAACCTACACATTGACGGGGAATTTTTGATCCATAAAATGCTA‏ ‎GCGTTCAATGCTGCGATGCGCCCATCCGCAGAAGAGTTGTTGTCCTACCCAA‏ ‎TGTTTATGAATCTGTAGGATGACTAACAGATTTGGGGTGGAGACGGCGTGG 0‏ ‎GCGATACTGTATAAAGTTGTACTACTTACCAGCCCAGTCAGTGTGCTGTAGT‏ ‎GCCACCACCTGTAAAGCTGTGATAAGCTGCAGTT‏ (متوالية بهوية رقم 1( pMCP6004 ‏و‎ ‎AGCTGGGGGAGTTTGTACTATAGTGTATTACATGCGGCTTGCAATAACTGCC ‎TGGTTTATGTTTCGCAACATTCAAGCAGACATGCTACCGCTAAACACTTTGC 5
AACAATTTTTTATTGGGTGTTTGGCCTTTGGTAGAACTGTCGCGTTTTTGGTG
GTAGCATATACTACCTTATTTATACGCTCCGAGCTGTTTTTCAGCATGCTAG
CACCCAACGCCGAGCGAGAGTATATAACTCCCATCATTGCCCACAAGCTTA
TGCCACTTATTAGCGTCCGCTCTGCCGTTTGCTTAGTCATAATATCTACCGCC
GTTTACGCAGCAGACGCTATCTGCGACACAATTGGATTTGCGATACCGCGC 30
ATGTGGATGTGTATTTTAATGAGATCAACCTCCATGAAGCGTAACTAGGGG
GCCTCCCACTGAGGCACTACCGGCTTAGCAGCTGACTAACACAGTATAAAA
CGTGAGAAGAAATCAGTCTCATGCGCCATTAGCGCTAGGCTAGTTAGCGTG
GAGGACCGGAGCGCTACCGCCAGCAGTTTCATCCGCCTGGTTACGGGTTTGT
‎TAACACCTACCGGTGTTTTACCGCTACCATA 5‏ (متوالية بهوية رقم 2(
والتي تم تخليقها وانتساخها بصورة علوية من جين المسجل ‎reporter gene‏ الذي يشفر ببروتين آلي شفاف ‎autofluorescent protein‏ من ‎(Shaner et al., 2004) mCherry‏ إشارة إنهاء انتساخ ووظيفة تثبيت الحمض النووي الرببوزي الرسول خاصة بمتوالية معالجة ببولي أدينينيل لهرمون ‎(Goodwin & Rottman, 1992 $BGHpA) (sll sail‏ التي تم تثبيتها بصورة مباشرة أسفل عند الطرف 3 من الجين المسجل. ولكي يتم استخدامه في شكل عينة مقارنة موجبة؛ فإن المعزز يتم تضخيمه من البلازميد المتاح من ‎(Invitrogen) pcDNA3.1‏ والانتساخ العلوي من جين مسجل ‎mCherry‏ والذي يطلق عليه هنا بأنه ‎BGHpA‏ كما تمت إضافته عند الطرف 3" من الجين المسجل. تم نقل العدوى لمزارع الخلية مع ثلاثة من البلازميدات ‎pBlu-5 «pBlu-4pMCPmCherry «pBlu-4pgGmCherry)‏
‎(CMVmCherry 0‏ وتم الفحص بواسطة الميكروسكوب الدقيق الخاص بالتألق ل و60. كان النشاط القوي لمعزز واضحاً عند أزمنة مختلفة بعد نقل العدوى. كان معزز 80600م4 أيضاً نشطاً بعد نقل العدوى وبعد النشاط الخاص بمعزز ‎pMCP6004‏ القابل للاكتشاف ولكنه ضعيف في مقارنة مع معزز 408806600 وحتى أكثر من ذلك عند المقارنة مع معزز الفيروس المضخم للخلايا حتى بعد ثلاثة أيام من نقل العدوى.
‏5 ولكي يتم فحص تأثير منتجات الجين الفيروسي على نشاط المعزز» فإن مزارع النشاط يتم نقله العدوى لها إما باستخدام ‎pBlu-4pgG600-mCherry‏ أو ‎pBlu-4pMCP600-mCherry‏ التي يتم نقل العدوى لها بشكل فائق من يوم بعد نقل العدوى مع التألق الأخضر فيروس الهريس ألفا للخيول ‎.RacHI-EF 1‏ يتم التنشيط العرضي لمنتجات الجين الفيروسية من معزز 001006004 بالنسبة للنشاط الأعلى بالمقارنة مع غياب انتساخ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 111-87هم8. كان التأثير
‎Lad 0‏ موجوداً في مزرعة الخلية التي تم نقل العدوى لها ب ‎pBlu-4pgG600-mCherry‏ وتم نقل العدوى لها بصورة فائقة باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacHIEF‏ وإن لم يكن ذلك بشكل أساسي في غياب الانتساخ الفيروسي والذي يكون أعلا من النشاط الأولي في غياب الانتساخ الفيروسي والذي يكون ‎lel‏ من ذلك الذي تمت ملاحظته ‎Led‏ يتعلق ب ‎PBlu-‏ ‎ey .4pMCP600-mCherry‏ نحو إضافي؛ وبالنسبة لمعزز 600 زوج قاعدة فقد تم توضيح
‏5 تأثير نقل العدوى من الاتساخ الفيروسي على الأنشطة الخاصة به في مزرعة الخلية.
— 7 7 — يمكن أن يتم شرح هذا التأثير إذا كان متوالية 600 زوج 520 مشتملة على عناصر كابحة والتي تكون موجودة بصفة طبيعية في ‎gall‏ القبلي من عناصر التنشيط. ونتيجة لذلك فيمكن أن يكون المعزز الأقصر أكثر نشاطاً في غياب المنتجات الجينية الفيروسية. ولكي يتم اختبار ذلك فإن كل من متواليات المعزز فيروس الهربس ألفا للخيول 4 يتم قطعها تقريباً إلى 775 من الأطوال الأصلية ‎Sug‏ اختبارها مرة ثانية. وبصفة خاصة فإن المعزز 600 زوج قاحدة يتم قطعه إلى 430 زوج قاحدة ل 004 بالاسم الجديد 0مم: ‎TCTATTTGAGGACCCGCCGAGTACCCCACAAGAGTATGTAAAAAGCTGTCA‏ ‎TTCTCAACTACTGAGAATAATATCAAAGCTAAAGATAAACCCTGAGGAGTT‏ ‎TCCACGGGAACCAGAGTCTAGGCTCGTGCGCGGATACATCGAATACGCCAG 0‏ ‎CCTAGAGCGTAAGCCACATACGCGCTATCCTTGCTTCCAGCGCGTGAACCTA‏ ‎CACATTGACGGGGAATTTTTGATCCATAAAATGCTAGCGTTCAATGCTGCGA‏ ‎TGCGCCCATCCGCAGAAGAGTTGTTGTCCTACCCAATGTTTATGAATCTGTA‏ ‎GGATGACTAACAGATTTGGGGTGGAGACGGCGTGGGCGATACTGTATAAAG‏ ‎TTGTACTACTTACCAGCCCAGTCAGTGTGCTGTAGTGCCACCACCTGTAAAG 5‏ ‎CTGTGATAAGCTGCAGTT‏ (متوالية بهوية رقم 3( وحتى 449 زوج قاعدة ل ‎ApMCP‏ بالاسم الجديد: 455م: ‎TTGGTGGTAGCATATACTACCTTATTTATACGCTCCGAGCTGTTTTTCAGCAT‏ ‎GCTAGCACCCAACGCCGAGCGAGAGTATATAACTCCCATCATTGCCCACAA‏ ‎GCTTATGCCACTTATTAGCGTCCGCTCTGCCGTTTGCTTAGTCATAATATCTA 0‏ ‎CCGCCGTTTACGCAGCAGACGCTATCTGCGACACAATTGGATTTGCGATACC‏ ‎GCGCATGTGGATGTGTATTTTAATGAGATCAACCTCCATGAAGCGTAACTAG‏ ‎GGGGCCTCCCACTGAGGCACTACCGGCTTAGCAGCTGACTAACACAGTATA‏ ‎AAACGTGAGAAGAAATCAGTCTCATGCGCCATTAGCGCTAGGCTAGTTAGC‏ ‎GTGGAGGACCGGAGCGCTACCGCCAGCAGTTTCATCCGCCTGGTTACGGGT 5‏ ‎TTGTTAACACCTACCGGTGTTTTACCGCTACCATA‏ (متوالية بهوية رقم: 4). تم نقل العدوى للبلازميدات المسجلة من ‎mCherry‏ المشتملة على معززات قصيرة في مزارع الخلية وتم فحصها بواسطة قياس التألق الضوئي. وعلى الرغم من أن نشاط ‎mCherry‏ قد تمت مقارنته مع نسخة بها 600 زوج قاعدة ((86600م40؛ فإن نشاط 8455 يزيد بشكل كبير على النشاط 0 الخاص ب 1400600م4. كانت تلك النتيجة طبقاً للنتائج الخاصة بنقل العدوى / نقل العدوى الفائق باستخدام نسخ من 600 زوج قاعدة من اثنين من المعززات وعلى نحو خاص وجود الانتساخ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 في نفس الخلية التي توفر آلية خاصة بالتنشيط التشابكي من معزز
‎4pMCP600‏ والذي يزيد من النشاط بصورة ‎Ligh‏ بينما يكون معزز 4880600 واضحاً ولكنه أقل بالإضافة إلى وجود اثنين من المعززات الجديدة والتي تكون ‎Ble‏ عن متوالية ‎polyA‏ المطلوية للتعبير عن موضع إدراج إطار القراءة المفتوح70 جديد. يطلق على هذا العنصر 8/م71. تم تخليق متوالية النيوكليوتيد ‎die‏ وتم الانتساخ البعدي لإطار القراءة المفتوح ‎mCherry‏ في البلازميد الناقل المشتمل على 0455 المستهدف لموضع انتساخ إطار القراءة المفتوح70 في ‎.pRacH-SE‏ ‏وبعد ذلك فإن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE‏ قد تم تخليقه لكي يتم اختبار أنشطة المعزز في الصورة الأصلية من الانتساخ الفيروسي (الجدول رقم 1). تم استخدام اثنين من المعززات فيروس الهريس ألفا للخيول 4 ‎p430)‏ و455م)؛ ومعزز الفيروس المضخم 0 للخلايا - الفيروس المضخم ‎WAN‏ الفأري من معزز آي إيه1 151 لكي تم ‎dng‏ التعبير عن ‎mCherry‏ في توليفة مع إشارة هرمون النمو البقري ‎polyA‏ لزيادة الثبات الخاص بالحمض النووي الريبوزي الرسول. إن المعزز الفيروس المضخم للخلايا ‎TED (Ul‏ (المحسن) كما تم وصفه هنا بواسطة ‎Dorsch-Hisler et al‏ (1985) قد تم تخليقه وتم انتساخه في ناقل بلازميد والذي تم ‎die‏ ‏انتساخه بصورة فرعية بداخل البلازميد الناقل. بالإضافة إلى ذلك؛ فإن 455م يمكن أن يتم 5 اتتساخها في موضع الإدراج من إطار القراءة المفتوح70 من التعبير الذي تم اشتقاقه من ‎mCherry‏ في توليفة مع إشارة ‎polyA‏ جديدة من 7108. تم تضمين عينة مقارنة أخرى من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacHMCT0‏ في التجارب. تقوم الخلايا التي تمت إصابتها بالفيروس ناتج عودة الارتباط المذكور بالتعبير عن ‎mCherry‏ تحت تحكم معزز الجليكويروتين © داخلي النمو ‎(egGp) endogenous gG promoter‏ (الجدول رقم 1). الجدول رقم 1 موضع الإدراج إطار القراءة | موضع الإدراج إطار القراءة ‎mCherry HCMV 1/3-‏ هرمون لا يوجد لا يوجد لا يوجد ‎IE1 CMV-‏ ‎mC‏ النمو
— 7 9 —
‎mCherry MCMV 1/3-‏ رمون لا يوجد لا يوجد لا يوجد ‎eae 151 MCMV-‏ و >
‏البقري ‎mCherry p455 1/3-‏ هرمون لا يوجد لا يوجد لا يوجد ‎p455-‏ ‎mC‏ النمو
‏البقري ‎mCherry p430 1/3-‏ هرمون لا يوجد لا يوجد لا يوجد ‎p430-‏
‏البقري ‏-70 لا يوجد ‎sap‏ لا يوجد ‎mCherry endogenous‏ هرمون ‎egGp-‏ 20 ‎mC‏ النمو
‏البقري
‎7ipA mCherry p455 ‏لا يوجد لا يوجد‎ dal 70-p455-
‎m{ ‎mCherry ‏باستخدام ستة من الفيروسات المعبرة عن‎ PK/WRL ‏أو‎ VERO WIA ‏تمت غصابة‎ ‏وتم‎ opi ‏المصابة عند الساعة 0؛ 4؛ 8 و12 من‎ LIAN ‏عند مضاعفة العدوى من 1. تم تجميع‎ ‏تحضير الحمض النووي الرببوزي الإجمالي. تم إتلاف الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي‎ ‏إنزيم دي أوكسي نيوكلياز 1. إن التآكل الخاص بالحمض النووي الريبوزي وإزالة الحمض النووي‎ 5 ‏الفيروسي قد تم توضيحه بواسطة الانتساخ العكسي باستخدام أو بدون استخدام‎ (Shem) ‏دي أوكسي‎ ‏ترانسكريبتاز يلي ذلك تفاعل سلسلة بوليمراز باستخدام زوج بادئ تم تحديده بالنسبة لإطار القراءة‎ ‏(متوالية بهوية‎ TGTCTACCTTCAAGCTTATG) «1131/1130 ‏المفتوح72 (معززات أرقام‎ ‏البروتين السكري‎ jada ‏(متوالية بهوية رقم 6)) التي‎ CTAGCGCAGTCGCGTTG /)5: ‏رقم‎ ‏تم تضخيم منتجات 169 زوج قاعدة‎ .1 Jal all ‏الهيكلي | لأساسي من © من فيروس الهريس‎ 10 ‏من تفاعل سلسلة بوليمراز فقط من عينات الانتساخ العكسي (الحمض النووي دي أوكسي رببوزي‎ ‏تم تحضيرها‎ All ‏المكمل) حيث إن ترانسكريبتاز عكسي قد تمت إضافته؛ وبصورة خاصة العينات‎
عند 1( = 4 ساعة .200.1 = 8 ساعات؛ ‎pi‏ و3 =12 ساعة؛ ‎pi‏ ليست من العينات التي تم تحضيرها عند 0( =0 ساعة ‎opi‏ وقد أظهرت كل العينات أن الترانسكريبتاز العكسي لم تتم إضافته غلى التفاعل ولم ينتج أي منتج تفاعل سلسلة بوليمراز كما هو متوقع. وبالتالي فقد تم توضيح أن العينات (الحمض النووي دي أوكسي رببوزي المكمل) والتي تم استخدامها في شكل قوالب لتفاعل سلسلة بوليمراز كمي لا تشتمل على الحمض النووي دي أوكسي ‎Siow‏ جينومي.
تم الحصول على الأحماض النووي دي أوكسي ريبوزي المكمل من الانتساخ العكسي مع إضافة إنزيم وبعد ذلك التحليل باستخدام تفاعل سلسلة بوليمراز كمي الذي يستخدم زوج بادئ تم تحديده بالنسبة ل ‎mCherry‏ (بادئات أرقام 1080/1079 ‎GCGAGGAGGATAACATGG)‏ (متوالية بهوية رقم ‎ACCCTTGGTCACCTTCAG/(7‏ (متوالية بهوية رقم 8)) وزوج بادئ إطار القراءة 0 المفتوح72 1130/ 1131 ‎TGTCTACCTTCAAGCTTATG‏ (توالية بهوية رقم 5)/ ‎CTAGCGCAGTCGCGTTG‏ (توالية بهوية رقم 6)). تم استخدام ‎Ct af‏ لتفاعل سلسلة بوليمراز كمي إطار القراءة المفتوح72 لكي يتم اختبار قابلية المقارنة بالنسبة لعدوى الفيروس المختلف بصورة موازية ولكي يتم تعادلها بالنسبة لقيم ‎Ct‏ الخاصة بتفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎.mCherry‏ وبالتالي فإن انتساخ ‎mCherry‏ يمكن حسابه كمياً بالنسبة للزمن بعد نقل ‎all‏ ومع
5 وجود فيروسات مختلفة (الشكل رقم 3). وكما هو موضح في المخطط الأيسر في الشكل رقم 3 فإن قيم ‎Cf‏ الخاصة بنواتج انتساخ إطار القراءة المفتوح72 تكون متطابقة تقريباً بالنسبة لست فيروسات مختلفة عند ‎apf‏ فترات زمنية مختلفة بعد العدوى. وبصورة مثالية فإن كل الست فيروسات يمكن إنتاجها بصورة متطابقة عند الأزمنة التي تم فحصها وتكون سلالة واحدة فقط هي المرئية. أثبتت السلالات المتطابقة إلى حد كبير أن بها جودة كافية من التجارب والتي تكون ‎Lad‏ 12 ساعة .م والتي تكون ‎dalla‏ بسبب النقص كما تم مقارنته عند 8 ساعات ‎pi‏ الذي يوضح الزيادة الإضافية في عدد المنتسخات والتي تكون ممكنة فقط ‎Lovie‏ لا يتم تمرير الانتساخ عند الحد الأقصى له. تم حساب المتوسط الإحصائي لكل ‎opi‏ زمني. تم تقسيم قيمة كل فيروس عند الزمن المحدد له بواسطة المتوسط الذي تم حسابه لكل زمن وتم استخدامه في شكل عامل مع قيم ‎Ct‏ من تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎mCherry‏ والت 5 تكون طبيعية بحيث يتم جعلها مقارنة بصورة مباشرة. تم توضيح قيم ‎Ct‏ الطبيعية من تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎mCherry‏ في المخطط الأيمن في الشكل رقم 3. إن التباين في السلالات يوضح
اختلافات في الأعداد من نواتج انتساخ ‎mCherry‏ التي تم إنتاجها في خلايا مصابة بالفيروسات في نوع مختلف من المخططات في التجريتين فإن هناك أحدهما يستخدم خلايا ‎(V) VERO-EU‏ ويستخدم الآخر ‎Cus (P) PK/WRL WIA‏ يتم دمجهما (الشكل رقم 4). إن نوعية مستحضرات الحمض النووي الريبوزي والانتساخ الفيروسي على الوقت يوضح التثبت كما تم وصفه ‎Del‏ ‏بواسطة الانتساخ مع أو بدون إنزيم ترانسكريبتاز عكسي يلي ذلك تفاعل سلسلة بوليمراز مع بادئات إطار القراءة المفتوح72. تم الحصول على قيم تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎mCherry Ct‏ من ‎mCherry‏ التي تكون طبيعية كما تم وصف ذلك أعلاه على أساس قيم تفاعل سلسلة بوليمراز كمي ‎Ct‏ لإطار القراءة المفتوح72. كانت القيم الطبيعية ل ‎Ct‏ من 1+- 4 ساعة 1.م؛ 12 = 8 ساعة ‎pi‏ ‏0 35= 12 ساعة ‎pi‏ والتي تم طرحها من قيم ‎Ct‏ الطبيعية عند 0( (قيمة ‎Ct‏ دلتا الطبيعية) والتي ينتج عنها ارتباط موجب مع نشاط الانتساخ. على الرغم من أن اثنين من التجارب في خلايا ‎(V) VERO‏ أو ‎(P) PK/WRL‏ لا يمكن مقارنتهما بصورة مباشرة؛ فإن مستويات التعبير العالي في خلايا ‎PK/WRL‏ ترتبط بصورة كبيرة مع السمة الأولى الفائقة من ‎PK/WRL WA‏ لانتساخ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 والذي ينتج بشكل 5 روتيني في عشرة دقائق بعيارات أعلى من الفيروس المعدي. وعلى الرغم من أن الأنشطة الخاصة بمعززات مشتقة من فيروس الهربس ألفا للخيول من 08430 و 5 ومعزز الجليكوبروتين ‎G‏ داخلي النمو كلها مشابه لتلك الخاصة بالأزمنة ذات الصلة ‎pi‏ ‏المستخدمة لسلالة الخلية بغض النظر عن موضع الإدراج أو لم ‎poly‏ المستخدم (هرمون النمو البقري أو 8/م71)؛ فإن الأنشطة من معززات الفيروس المضخم ‎WAL‏ و الفيروس المضخم 0 للخلايا الفأري تكون أعلى في خلايا ‎.PK/WRL‏ وفي خلايا ‎VERO-EU‏ يكون هناك فقط معزز الفيروس المضخم للخلايا الفأري تم توضيحه بحيث يكون له نشاط أعلى ويكون المعزز الفيروس المضخم للخلايا غير فائق بالنسبة لمعززات فيروس الهريس ألفا للخيول. ومن تلك النتائج فقد تم استنتاج أن معززات فيروس الهربس ‎Ul‏ للخيول 4 من ‎p430‏ و 455م مناسبة لكي يتم استخدامها في الصورة الأصلية من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ لكي يتم اشتقاق التعبير عن الجينات الانتقالية من كل من مواضع إدراج إطار القراءة المفتوح 1/ 3 وإطار القراءة المفتوح70.
المثال رقم 2: استخدام 455 الجديد في لقاحات ناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ناتجة ‎sage‏ الارتباط ‎dug‏ ‏خاصة بفيروس ناتج عودة الارتباط. معزز: 0455
بالنسبة لتجرية الحيوان الأول فقد تم استخدام المجموعة الفرعية من الراصة الدموية 113 من فيروس أنفلوننا ‎A‏ من الأصل الخنزيري (م/انفلونزا الخنازير/ إيطاليا/ 7680/ 2001 ‎«((H3N2)‏ رقم الوصول_ في بنك الجينات رقم: 88550302.2). تم تخليق ‎Adige‏ التشفير الخاصة بها وتم الانتساخ الفرعي المولد للناقل الخاص بالنقل 170-0455-711671؛ حيث تم وضع 113 تحت تحكم معزز 0455 جديد وإشارة معالجة ببولي أدينيل جديدة 7108 وإطار خاص بالكاسيت مع منطقة
0 خاصة بإعادة الاتحاد الخاصة بالإدراج بداخل إطار القراءة المفتوح 70 (الشكل رقم 5). ومن خلال استخدام التطفير بطريقة ‎en-passant‏ يقوم النظام ‎RED‏ الخاص بناتج ‎sage‏ الارتباط ‎(Tischer et al. 2006)‏ _لكاسيت التعبير ‎pd55-H3-71‏ بالإدارج في إطار القراءة المفتوح 70 ل11ءمعم-قابلة للاستتصال لكي يتم إنشاء ‎pRacH-SE70-p455-H3‏ (الشكل رقم 6). تم نقل العدوى لخلايا ‎PK/WRL‏ باستخدام فيروس ‎mili‏ عودة الارتباط ‎pRacH-SE70-p455-H3‏ ‏5 .وتم إعادة إنقاذ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ و فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SET0-p455-H3‏ ومرتين تمت التنقية مرتين باستخدام اللوحة. تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة من جين الإدراج. تم تحليل التعبير الخاص بالجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر ‎indirect immunofluorescence‏ ‎(IFA) assay 0‏ (الشكل رقم 7). إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎IT‏ المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي غير المباشر (غير الموضح) وتبقيع ويسترن (الشكل رقم 8( باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 81207 (تمت ملكيته باستخدام 81). تم اختبار مظهر الترايمر من 113 على غشاء البلازما من الخلايا التي تم اختبارها بواسطة اختبار الامتزاز الدموي 5 باستخدام الكريات الحمراء من الدجاج (غير الموضحة). تم تحديد عيارات القمة ‎Jie‏ الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / مل في خلايا ‎PK/WRL‏ في نفس المدى في
شكل عيارات من فيروس أساسي فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎ALE-RacH‏ ‏للاستتصال والتي توضح تعبير الجين الانتقالي الذي لا يكون له تأثير ضار على الانتساخ الفيروسي (غير الموضح). تم التثبت من ذلك بواسطة تمرير فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ في خلايا ‎PK/WRL‏ والتي تصل للمسار 20 ‎(P20)‏ بعد الإنقاذ. تم توضيح ‎P10 9 PS‏ و15 ‎P205‏ من الفيروس من خلال المعايرة والتتابع وتبقيع ويسترن (الشكل رقم 8)؛ عند ‎P205 PIO‏ بصورة إضافية بواسطة التألق المناعي غير المباشر وتعبير راصة _دموية والثبات الجيني من راصة دموية المفرد ‎gall‏ المدرجة بطول المعزز ومتواليات ‎polyA‏ التي التثبت منها. تم توضيح اثنين من البقع في الشكل رقم 8 والتي تكون بمثابة انتفاخات تمت حضانتها مع أي من 0 الجسم المضاد أحادي النسيلة من 81207 (اليسار) والذي تم اكتشافه بواسطة البروتين السكري ]1 لفيروس الهريس ألفا للخيول 1 أو باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة التجاري من الأرنب (085-34930) الذي تمت زيادة مع المجموعة الفرعية من الراصة الدموية من الأنفلونزا 113 (اليمين). وتم اكتشاف البروتين السكري 17 في كل مزارع الخلايا والتي تمت إصابتها باستخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1؛ كما هو متوقع. تم اكتشاف 113 كاملة الطول في كل ‎Wal‏ ‏5 المصابة بمسارات مختلفة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ كما هو متوقع. وبصورة خاصة فقد تم توضيح مضاد المصل 113 في نفس تبقيع ويسترن انظر؛ المسار 06 . وهنا فقط خريطة البروتين السكري ‎TT‏ التي تنتج تفاعل؛ كما هو متوقع مع الجسم المضاد ل 113 والذي لا يرتبط بمسار ناتج الانتساخ ذي الصلة. ومن خلال اختبار التألق المناعي المزدوج ‎(dIFA) double immunofluorescence assay‏ من 0 اللوحات الفيروسية في ‎WAN‏ المصابة باستخدام 720 التي تستخدم الجسم المضاد ل 113 أحادي النسيلة ومضاد المصل ‎antiserum‏ من فيروس الهربس ألفا للخيول للحصان فقد تم التثبت من أن كل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 تعمل بصورة افتراضية على حث اللوحات ‎Lady‏ تعبر عن ‎H3‏ ‏(غير موضح). أثبتت كل الاختبارات الثبات الخاص ب فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE-‏ ‎70-p455-H3‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط. 5 المثال رقم 3:
— 4 8 — الدليل على مفهوم ‎(POC I) Proof of concept‏ باستخدام معزز ‎pd55‏ وتقييم الاستجابة الخاصة بالمصل ‎:serological response‏ حيوانات الاختبار: معايير الإدراج والتصميم التجريبى: تم إدراج خمس مجموعات مكونة من عشرة خنازير مولودة من خنازير لم تتم إصابتها بأنفلونزا ‎A=‏
في دراسة الدليل على المفهوم كما تم تلخيص ذلك في الجدول رقم 2. الجدول رقم 2
_— 5 8 _— عدد المجموعة | المعالجة باللقاح المسار الجرعة الحيوانات 2 مل كلوريد الصوديوم ¢ 2 مل فيروس ‎xl‏ كلوريد : الهريس ألفا الصوديوم ¢ بداخل للخيول 1؛ ‎١ 1‏ 1 لقاح ناقل 10 العضلات | 1.00 ‎x‏ 10 7 فيروس الهريس ٍّ الجرعة المعدية ألفا للخيول 1 لمزرعة النسيج التي تصل إلى ‎x2‏ 2 مل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ¢ ‎x2‏ لفاح ناقل بداخل | ‎710x1.00‏ ‏2 فيروس الهريس 10 ‎١‏ العضلات | الجرعة المعدية ألفا للخيول 1 لمزرعة النسيج التي تصل إلى ‎x2‏ كلوريد بداخل ‎x2‏ مل 3 10 الصوديوم ¢ العضلات كلوريد الصوديوم ¢ ‎x2‏ لقاح غير بداخل ‎x2 10 4‏ مل 101؛ نا العضلات ‎x2‏ كلوريد بداخل ‎x2‏ مل
الصوديوم ؛ العضلات | كلوريد الصوديوم؛
عن ‎[en‏ ا مجموعة | علاج التحدي المسار الجرعة الحيوانات 8 مل؛ 1.00 ‎x‏ ‏فيروس أنفلونزا ‎A‏ 0 7/ الجرعة 1 | من 11382 من 0 | داخِل ‎falas‏ المعدية لمزرعة الخنازير النسيج التي تصل إلى خمسين 8 مل ,: 1.00 »* فيروس أنفلونزا ‎A‏ 0 7 / الجرعة ‎١ 2‏ من ‎H3N2‏ من 10 ‎dala‏ الرُغام | المعدية لمزرعة الخنازير النسيج التي تصل إلى خمسين 8 مل ,: 1.00 »* فيروس أنفلوننا ‎A‏ 0 7 / الجرعة 3 من ‎H3N2‏ من 10 ‎dala‏ الرُغامَ | المعدية لمزرعة الخنازير النسيج التي تصل إلى خمسين 8 مل ,: 1.00 »* فيروس أنفلونزا ‎A‏ 0 7 / الجرعة ‎١ 4‏ من 1332 من 10 داخِلَ الرُغامَ | المعدية لمزرعة الخنازير النسيج التي تصل إلى خمسين لس ‎or po]‏ ‎ast das ١ 0 5‏ 8 مل (عينة مقارنة سلبية) تم وضع جرعة معدية من 1 ‎X‏ 710 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من فيروس الهرس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-70-p455-H3‏ (فيروس الهرس ألفا
للخيول 1) إما مرة واحدة أو عند خمسة أسابيع من العمر أو مرتين عند الأسبوع الثاني والأسبوع الخامس من العمر. ولغرض المقارنة فإن اللقاح غير الملقح المتاح بشكل تجاري (السليم) يتم أخذه مرتين عند الأسبوع الثاني والأسبوع الخامس من العمر. وكانت كل الخنازير خالية من الأجسام المضادة المشتقة من الأمهات لكيلا يتم إلغاء تأثير اللقاح غير المنشط (108©0). لم يتم تلقيح اثنين 5 .من المجموعات ولكنها استقبلت مواد حقن باستخدام محلول كلوريد صوديوم فسيولوجي لكي يتم استخدامها في شكل ‎due‏ مقارنة للاختبار أو ‎due‏ مقارنة سلبية مقيدة؛ على الترتيب. وبعد 21 يوماً من التلقيح فإن كل المجموعات باستثناء مجموعة عينة المقارنة السلبية المقيدة قد تم اختبارها باستخدام 1 ‎x‏ 10 7 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من سلالة أنفلونزا غير متجانسة ‎INFLUENZA A VIRUS FROM SWINE R452-14) A‏ 113712 والصور 10 المعزولة التي تم اختبارها المملوكة بواسطة ‎(BI‏ وعلى الرغم من أنه في مجموعة عينة الاختبار غير الملقحة ‎die)‏ المقارنة للاختبار) فإن كل الخنازير يكون لها عيارات فيروس أنفلونزا عالية في ‎cl)‏ عند اليوم الأول وعند الثلاثة أيام بعد عدوى الاختبار وأن كل الخنازير في المجموعة الخاصة بالتحكم السلبية (المجموعة اللبية) والمجموعة التي تم تلقيحها مرتين ‎X2)‏ فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول) مع فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ ‏5 كانت سلبية بالنسبة لفيروس انفلونزا ‎A‏ عند كلا اليومين. في المجموعة التي تم تلقيحها مرتين باستخدام لقاحة عينة المقارنة غير المنشط (غير المنشط ‎(x2‏ فإن واحدة أو خمسة من الحيوانات يكون لها عيار فيروس انفلونزا ‎A‏ عند اليوم الثالث بعد الاختبار. في المجموعة التي تم تلقيحها ‎Bye‏ ‏واحدة ‎x1)‏ فيروس الهربس ألفا للخيول) عند 21 يوماً قبل الاختبار باستخدام فيروس الهرس ‎ll‏ ‏للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ فإن هناك اثنين من خمس حيوانات لها 0 غعيارات فيروس انفلونزا ‎A‏ منخفضة وواحدة من الخمسة عند ثلاثة أيام بعد الاختبار. (الشكل رقم 9 تقوم اثنين من التلقيحات باستخدام ‎XT‏ 710 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين بالحماية الكاملة لخنازير فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-‏ ‏70-4553 في مضادة عدوى الاختبار باستخدام فيروس انفلونزا ‎A‏ من النوع غير المتجانس من المجموعة الفرعية ‎H3N2‏
تم توضيح أن ناقل فيروس الهربس ألفا للخيول 1 من ‎ALlE-RacH‏ للإستئصال يكون مناسباً لعملية التلقيح الخاصة بالخنازير وأن هناك المعزز 8455 الذي يكون وظيفياً في اشتقاق التعبير المولد للمناعة من الراصة الدموية من فيروس انفلونزا ‎BA‏ الخنازير التي تم تلقيحها. المثال رقم 4:
استخدام 430م الجديد في لقاحات ناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ناتجة ‎sage‏ الارتباط ‎dug‏ ‏خاصة بفيروس ناتج عودة الارتباط. تم استخدام معزز 430م المحدد بشكل جديد لكي يتم اشتقاق التعبير عن الراصة الدموية الأخرى من الأنفلونزا من فيروس ‎HINT‏ (.ه/انفلونزا الخنازير/ ‎¢((HIN1)2005 [132/Gent‏ رقم الوصول
0 في بنك الجينات رقم: 81876623.1). وسبب أن جين الراصة الدموية في الفيروس المذكور يقوم بعزل الجزء الأصلي من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الطيور فإنه يطلق عليه بأنه ‎Hla‏ تم تخليق ‎Hlav‏ وتم الانتساخ الفرعي في ناقل خاص بالنقل لمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 لكي يتم إنشاء 0101/3-0430-1118-3011-16-86011. تم وضع تعبير 11187 تحت تحكم معزز 430 وهرمون النمو البقري من إشارة بولي م (الشكل رقم 10).
5 ومن خلال استخدام التطفير بطريقة ‎en-passant‏ يقوم النظام ‎RED‏ الخاص بناتج ‎sage‏ الارتباط ‎(Tischer et al. 2006)‏ لكاسيت التعبير «430-1118م-هرمون النمو البقري بالإدارج في 3/14 من 81م -قابلة للاستئصال لكي يتم إنشاء ‎pRacH-SE1/3-p430-Hlav‏ (الشكل رقم 11). تم نقل العدوى لخلايا ‎PK/WRL‏ باستخدام فيروس ناتج ‎sage‏ الارتباط ‎pRacH-SE1/3-p430-‏ ‎Hlav‏ وتم ‎sale]‏ إنقاذ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE1-p430-‏
0 1018# وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ ومرتين تمت التنقية مرتين باستخدام اللوحة. تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة من جين الإدراج. تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر وتبقيع ويستر باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارباً أحادية النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل (الشكل رقم 12).
5 إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎I‏ المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي غير المباشر وتبقيع ويسترن باستخدام الجسم المضاد أحادي
النسيلة 81207 (تمت ملكيته باستخدام ‎BI‏ (غير موضح). تم اختبار المعالجة الصحيحة للناقل من 1118# وتم التحديد الموضعي في غشاء البلازما من الخلايا المصابة بواسطة اختبار الامتصاص المناعي باستخدام كريات الدم الحمراء من الدجاج (غير الموضحة). تم تحديد عيارات القمة مثل الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / مل في ‎PK/WRL Wa‏ في نفس المدى في شكل عيارات من فيروس أساسي 80211-قابلة للاستتصال والتي توضح تعبير الجين الانتقالي الذي لا يكون له تأثير ضار على الانتساخ الفيروسي (غير الموضح). تكون مواد اكتشاف محددة من نواتج النقل بالحزمة الواسعة عند 75 كيلو دالتون بواسطة ‎PA-‏ ‏9 في تجانس مع المظهر المتوقع الخاص بالبروتين السكري ناتج عودة الارتباط راصة دموية كما تم التنبؤ عنه من المتوالية الخاصة به. يكون التلقيح الموضع الخاص بالأغشية الخلوية 0 باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة من ©102 في اتساق مع الموضع الخلوي الفرعي كما هو متوقع (الشكل رقم 12). ولكي يتم اختبار ما إذا تمت معالجة الراصات الدموية ناتجة عودة الارتباط التي تم التعبير عنها ونقلها كما هو متوقع فإن خلايا ‎VERO‏ تتم إصابتها ب فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎<RacH-SE-1/3-p430-Hlay‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎«SE-70-p455-H3 5‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 802611-قابلة للاستتصال (الأساسية) عند التعدد في العدوى من 0.01 أو يتم تركها بدون إصابة. تمت حضانة ‎WAY‏ الحية ‎sad‏ 24 ساعة المصابة ب ‎ip‏ والخلايا غير المصابة باستخدام معلق من كريات دم حمراء من الدجاج في محلول ملحي منظم بالفوسفات وتم الغسل باستخدام محلول ملحي منظم بالفوسفات وتم التبقيع باستخدام سلالة نووية من 33342 ‎Hoechst‏ الخاصة بالتبقيع المناعي. وسبب أن كريات 0 الدم الحمراء من الطيور تشتمل على نويات الخلية فإنها يتم تبقيعها باستخدام ‎Hoechst33342‏ ‏وتظهر في شكل بقع زرقاء من خلال القياس الطيفي بالتألق عند المقارنة مع الخلايا التي تمت إصابتها بالعدوى باستخدام فيروس ‎uel)‏ ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎ALE-RacH‏ ‏للاستئصال والتي لا تعبر عن الراصة الدموية والامتزاز الخاص بكريات الدم الحمراء بصورة هامة وتمت زيادتها على الخلايا المصابة إما بفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav 5‏ أو فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-‏ ‏70-4553 (غير الموضحة). ومن ذلك؛ فيمكن أن يتم التوصل إلى أن الراصة الدموية قد تم
تحويلها ومعالجتها ونقلها إلى غشاء البلازما من الفيروس الناقل من الخلايا المصابة بطريقة يتم إنتاجها بواسطة عدوى فيرو الأنفلونزا الطبيعي. يكون النمط الواضح من الامتزاز المناعي من الخلايا المصابة قد تم حمله فيما يتعلق الإشارات الخاصة بتبقيع ويسترن والاختبار الخاص بالتألق المناعي الذي يوضح التعبير الفعال الخاص ببروتينات الجين المتحولة ويقترح تشكيل ترايمرات وظيفية من راصة دموية على سطح الخلية من الخلايا المصابة بناقل فيروس الهربس ألفا للخيول 1. ‎JL‏ رقم 5: استخدام اثنين من المعززات من 0455 و ‎p430‏ في لقاحات ناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ناتجة عودة الارتباط في ‎(pil‏ من مواضع الإدراج بصورة متوازية 0 ولكي يتم توضيح أن اثنين من المعززات يمكن استخدامهما بصورة موازية فإن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ ناتج عودة الارتباط يقوم بالتعبير الذي تم توليده لاثنين من الراصات الدموية المختلفة من اثنين من الأنواع الفرعية لفيروس أنفلونزا م المختلفة. وبصورة خاصة فإن نقص الفعالية الخاص بالتشابك من الأجسام المضادة التجارية المتعددة النسيلة ل 113 (085-34930) و111 (085-34929) قد تم التثبت ‎die‏ من خلال تبقيع ويسترن من الخلايا 5 المصابة بفيروسات مدرجة منفردة من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎SE-70-pd55-H3‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-‏ ‎Hlav‏ (غير موضح). إن البدء باستخدام كروموسوم صناعي بكتري ‎pRacH-SE-70-p455-H3‏ ناتج ‎sae‏ الارتباط الجيني؛ كاسيت التعبير عن 430-11187م-هرمون النمو البقري كما تم تجمعيه في الناقل الخاص 0 بالنقل ‎pU1/3-p430-Hlav-BGH_K_BGH‏ (الشكل رقم 10) قد تم إدراجه في موضع إدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 بواسطة اثنين من نواتج التحويل ‎AUS RED‏ الخطوة لإنشاء ‎pRacH-SE-1/3-‏ ‎.p430-Hlav-70-p455-H3‏ تم نقل العدوى لخلايا ‎PK/WRL‏ باستخدام ‎pRacH-SE1/3-p430-‏ ‎Hlav-70-p455-H3‏ وفيروس ناتج عودة الارتباط فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE1/3-p430-Hlav-70-p455-H‏ وتم إعادة إنقاذه تمت التنقية مرتين باستخدام 5 اللوحة (الشكل رقم 13).
كان التحديد القصير لفيروس ناتج عودة الارتباط عبارة عن فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 80211-58-1. تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة من مناطق الإدراج مع المتواليات الجانبية. تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر ‎al)‏ يتم توضيحه) وتبقيع وسترن باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارياً أحادية النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل (الشكل رقم 14). إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎IT‏ المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي غير المباشر (غير الموضح) وتبقيع ويسترن باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 80207 (تمت ملكيته باستخدام ‎(8BI‏
(الشكل رقم 14).
0 وكما هو موضح في الشكل رقم 14؛ فإن كل من الجينات الانتقالية من 113 و1118 قد تم التعبير عنها في صورة موازية لمزرعة ‎WAN‏ المصابة ب فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎-p455-H370RacH-SE-1/3-p430-Hlay-‏ الذي تم إدراجه بصورة مزدوجة وصورة ناتجة عن عودة الارتباط (ب). كان التعبير عن الجين الانتقالي ثابتاً ولا يعوق العيارات الفيروسية التي تم اختبارها حتى المسار 11 في خلايا ‎PK/WRL‏ (غير الموضحة).
5 تتم توضيح اثنين من المعززات الجديدة من 0430 و8455 بحيث تكون وظيفية في سياق انتساخ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 124611 في مزارع الخلايا. تظهر مستويات النشاط أثناء دورة الانتساخ الفيروسي بأنها مشابهة جداً لتلك التي تم اشتقاقها من التجارب الحركية الخاصة بالمعزز في المعمل. تسمح تلك الخصائص بإنشاء لقاحات الناقل ناتج عودة الارتباط بالاعتماد على فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ أو المنصات الخاصة بالناقل الأخرى التي
0 تعبر عن اثنين من مولدات الضد في صورة موزاية مع الفعالية المشابهة. إذا تكون مستهدف اللقاح من اثنين من صور الوضع المختلفة للممرضات من اثنين من المعززات الجديدة في اثنين من مواضع الإدراج والتي يتم دمجها مع اثنين من متواليات المعالجة ببولي أدينيل فإن ذلك يمكن أن يقلل من تكلفة السلع بشكل كبير ويمثل ميزة هامة بالمقارنة بالتعبير الناقل فقط بالنسبة لمكون مولد للضد فقط.
5 المثال رقم 6: لقاحات فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني باستخدام معززات 0455 و0430 جديدة
الطرق تمت إصابة خلايا 81-57 2015 بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني التالية: 1- فيروس غدي كلبي-2 ‎CMVie‏ بي آر اس في ‎BRSV‏ (عينة مقارنة موجبة لمضاد لفيروس غدي كلبي-2؛ وعينة مقارنة سالبة لمضاد في بي2 ‎(VP2‏ ‏5 2- فيروس غدي كلبي-2 702 ‎p430 CPV‏ (1-2-1م تم إزالة تضغفيرهة) 3- فيروس غدي كلبي-2 ‎p430 CPV VP2‏ (01-5-1 تم إزالة ‎(asad‏ ‏4- فيروس غدي كلبي-2 702 ‎E1-8-1) p455 CPV‏ تم إزالة ‎(asad‏ ‏5- 5, فيروس غدي كلبي-2 ‎(n) p430 RabG‏ 6- 5, فيروس غدي ‎AS‏ -002م12 ‎(n) p455‏ 0 تتحليل التألق المناعي تم تثبيت ‎AIST WA‏ 2015 باستخدام نظام ‎Cytofix/Cytoperm‏ بعد 72 ساعة من العدوى وتم التبقيع باستخدام مضاد ‎«mAb)) CPV VP2-FITC‏ ومضاد ‎(RabG-FITC (mAb‏ وفيروس غدي كلبي -1110-2] (أمصال مضادة للخنازير ‎(porcine antisera‏ (في ام ‎Jf‏ دي ‎(VMRD‏ ‏قياس التدفق الخلوي تتم تثبيت خلايا ‎AIST‏ 2015 باستخدام نظام ‎Cytofix/Cytoperm‏ 48 8 72 ساعة بعد العدوى باستخام ‎WIA‏ مبقعة بمضاد فيروس غدي كلبي-1112-2 ومضاد ‎(VMRD) CPV VP2-FITC‏ وأمصال مفرطة المناعة للخنازير في مضادة ‎(Benchmark) CPV‏ ومضاد ‎‘RabG-FITC‏ ‏التخطيط النقطي ‎Dot Blot‏ ل ‎CPV VP2‏ تمت التنقية )6000 ‎x‏ جم؛ 5 دقائق) من المواد الطافية لمزرعة لانسيج/ نواتج التحلل/ التجميد/ 0 الإذابة) من ‎EIB MDCK‏ (بالنسبة لفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني) من الخلايا التي تم تخفيفها بصورة متسلسلة باستخدام محلول ملحي منظم بالفوسفات قبل غضافة الجهاز وتم الامتصاص بالنسبة لبي في دي اف ‎PVDF‏ من خلال الشفط. وكانت الخطوات التالية بعد 30 دقيقة من التعرض ل 75.0 من تبقيع ‎BioRad‏ من وسيلة إعاقة ‎Grade Blocker‏ في تي بي اس تي ‎(TBST‏ 1.0 ساعة من التعرض إلى الأجسام المضادة ل ]0 وثلاثة من مرات الغسل ‎TBST‏ ‏5 و1.0 ساعة من التعرض لبيروكسيداز مترافق مع الأجسام المضادة ل 02 (مضاد فأري ومضاد للخنازير من ‎(Jackson ImmunoResearch‏ وتم الفحص البصري من خلال تي ام بي ‎(TMB‏
بالنسبة للحساب الكمي فإن التبقيع النقطي يتم ‎alias‏ باستخدام ‎Image] software (Burger, W.,‏
‎Burge, 11.1. (Eds.), 2008.‏ معالجة الصور الرقمية: الإدخال الرياضي باستخدام جافا ‎Java‏
‎Springer-Verlag, New York).‏ يتم عكس ألوان الصورة لكي يتم إزالة الخلفية والكثافة المتكاملة
‏لكل نقطة تم تسجيلها. تم تحديد القيم بالعلامات + و- كما يلي: ”بببب» = >800000 , +++“ = 500000 إلى 600000, ++“ = 300000 إلى 499999, حد» حئ 120000 إلى
‏299999,«-/+« = 80000 إلى 119999 و “-» = > 80000.
‏بنية فيروس غدي كلبي-2 ‎VP2‏
‏يمكن أن يكون إنشاء الجسيمات المشابهة للفيروس ‎(VLPs) virus like particles‏ بواسطة خلايا
‏مصابة بفيروس لقاح ‎Ble‏ عن عامل مهم خاص بفعالية لفاح الفيروس الغدي الكلبي-2 الفعال.
‏0 وعلى الرغم من أن فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني تشتمل على كاسيت تعبير ‎CPV‏ ‏2 مشتق من ‎CMVie‏ يمكن إنقاذه إلى حد كبير والذي يشتمل على تعبير ‎VP2‏ (بالنسبة لإنشاء الجسيم المشابهة للفيروس) في الخلايا المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎CMVie CPV 2‏ والتي يمكن ألا يتم تحقيقها باستخدام معزز ‎CMVie‏ تقليدي. يشتمل فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎VP2‏ على معزز 014775 الذي يمكن أن يتم إنقاذه.
‏5 "تم استخدام تحليل التألق المناعي وقياس التدفق الخلوي ومخططات بقع لكي يتم اختبار المعزز فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 4 المشتق من التعبير الخاص ب ‎CPV VP2‏ في خلايا ‎AIST‏ 2015 المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني. تم اختبار تعبير بروتين فيروس غدي كلبي-2 باستخدام بورتين مترافق لمضاد فيروس غدي كلبي-1170-2 من (71080). تم سبر تعبير بروتين ‎CPV VP2‏ باستخدام أمصال أحادية النسيلة من ‎(VMRD) hil)‏ وأمصال مفرطة
‏0 المناعية من الخنازير ‎(Benchmark)‏ يتم الفحص الجيد لبروتينات فيروس غدي كلبي-2 و ‎CPV‏ ‏2 بواسطة تحليل التألق المناعي وتم اكتشافها بواسطة قياس التدفق الخلوي في نسبة فرعية من خلايا ‎AIST‏ 2015 المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني التي تحمل اثنين من صور النيوكليوتيد المتغيرة من ‎Despl and Gen0.95) CPV VP2‏ عند 48 ساعة و72 ساعة بعد العدوى). تم تحديد البروتين ‎CPV VP2‏ إلى حد كبير في المواد الطافية من مزرعة النسيج / نواتج
‏5 التتحلل (بعد التجميد/الذويان) بواسطة المخطط النقطي (وتعكس بصورة جيدة وجود الجسيمات المشابهة للفيروس متجمع).
تم اكتشاف تعبير ‎CPV VP2‏ في ‎WIA‏ 81-57 2015 بسهولة بواسطة تحليل التألق المناعي (انظر الشكل رقم 19أ). تم اكتشاف تعبير ‎CPV VP2‏ في أقل من 73 من ‎WAN‏ المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎CMVie CPV VP2‏ الأصلي (انظر الشكل رقم 15). وبالتالي؛ فإن فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني الذي يحمل كاسيتات تعبير 702 ‎CPV‏ ‏5 يتم تشغيله بواسطة المعززات 0430 و8455 والتي تم إنقاذها واختبارها لكي يتم تحددي ما إذا كانت قد تم تشغيلها بصورة فعالة بالنسبة للتعبير عن ‎CPV VP2‏ في الخلايا المصابة. وعلى نحو مدهش فإن تعبير ‎CPV VP2‏ قد تم اكتشافه في 14 7 إلى 736 من الخلايا المصابة (انظر الشكل رقم 16). وبصورة إضافية؛ ‎eg‏ النقيض من فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎Lal) CMVie CPV 2‏ ( حيث يوضح التبقيع النقطي أن إشارة 702 ‎CPV‏ التي تدفع ‎CMVie 0‏ كانت عند أو أقل من المستويات الأساسية- بالمقارنة مع المواد الطافية/ نواتج التحلل من الخلايا المصابة من فيروس غدي كلبي-2؛ وفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎CMVie‏ ‎F‏ 0857 والمادة الطافية لمزرعة الخلية/ نواتج التحلل من الخلايا المصابة والبيانات لم يتم توضيحها) وأن كمية كبيرة من ‎CPV VP2‏ تم اكتشاف أنها في المواد الطافية وفي نواتج التحلل من خلايا ‎AIST‏ 2015 المصابة (انظر الشكل رقم 17). يوضح الشكل رقم 17 أن بروتين ‎VP2‏ ‏5 يمكن أن يتم العرف عليه من خلال المادة الطافية ويالتالي فإنه لا يتوقع أن يكون به تشكل يتطلب (الجسيمات المشابهة للفيروس) أن يتم جعله في صورة مولدة للمناعة. ‎og‏ نحو مهم فإن إنقاذ فيروس غدي كلبي-2 من التوليفة يتم تحقيقه عنما يكون هناك إما متواليات المعزز ‎CAG‏ أو والتي تكون موجودة في كاسيتات التعبير الموجودة في منطقة 83. يظهر ذلك بأنه خاصاً بالمتوالية في شكل حجم كاسيتات التعبير التي لا يتم استثناؤها ‎lly‏ تمت ملاحظتها من الحدود 0 الحجمية للجينوم التجريبي. وبالتالي فإن هناك متواليات معزز يتم اشتقاقها من فيروس الهربس ألفا للخيول 4 من الاختراع الحالي ‎Jie‏ 0430 و 0455 والتي لا تسهل فقط التعبير الجيني ولكنها تدعم الخطوة الهامة في الإنقاذ الفيروسي. وفي ختام لذلك فإن تحليل التألق المناعي وقياس التدفق الخلوي والتبقيع النقطي يوضح تعبير قوي عن معزز فيروس الهريس ألفا للخيول 4 من الجين الانتقالي ل ‎CPV VP2‏ بواسطة فيروس غدي 5 كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني في ‎AIST WA‏ 2015 المصابة. أثبتت تلك النتائج استخدام متغيرات من فيروس الهريس ألفا للخيول 4 في الناقل خلاف فيروس الهربس ألفا للخيول 1.
بنية فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني ‎:(n)RabG‏ تم إنتاج بنية فيروس غدي كلبي-2 الثانية باستخدام معزز ‎PASS‏ مشتق من فيروس الهريس ألفا للخيول 4 جديد من الاختراع الحالي. تم اختيار فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني
CMVie ‏تمت ملاحظتها باستخدام معزز‎ lly ‏بسبب التعبير عن الخلايا المصابة‎ RabG(n) تقليدي. تم التثبت من هدف تلك التجرية بالنسبة للنشاط الخاص بمعزز فيروس الهريس ألفا للخيول 4 جديد في سياق فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني مع جين انتقالي ثاني ‎RabG‏ (بروتين غشائي ‎(membrane protein‏ بواسطة القياس الخاص بتعبير بروتين ‎RabG‏ مشتق من المعزز فيروس ‏الهريس ألفا للخيول 4 بواسطة ‎WA‏ 8157 2015 مصابة من فيروس غدي كلبي-2 معاد 0 الاتحاد الجيني ‎.p455 RabG (n)‏ ‏تم استخدام تحليل التألق المناعي والتدفق الخلوي لاختبار تعبير مشتق من معزز فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 4 من ‎RabG‏ في ‎WA‏ 81-57 2015 المصابة في فيروس غدي كلبي-2 معاد ‏الاتحاد الجيني. تم اختبار تعبير بروتين فيروس غدي كلبي-2 باستخدام بورتين مترافق لمضاد ‏فيروس غدي كلبي-2 ‎FITC‏ من ‎-(VMRD)‏ تم سبر تعبير بروتين ‎RabG‏ باستخدام الأجسام 5 المضادة أحادية النسيلة من الفثران ‎(Novus)‏ .5 الفحص النظري لبروتينات فيروس غدي كلبي-2 ‏و ‎RabG‏ بواسطة تحليل التألق المناعي وتم اكتشافها بواسطة التدفق الخلوي في ‎Wa‏ 8157 ‏5 المصابة بفيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني التي تحمل ‎(n) RabG‏ (عند 72 ‏ساعة بعد العدوى). ‏النتائج: وعلى الرغم من أن ‎RabG‏ يتم اكتشافه في الخلايا المصابة باستخدام فيروس غدي كلبي- 0 2 معاد الاتحاد الجيني ‎RabG‏ 8455 (انظر الشكل 19ب وج) من التعبير الذي تم اكتشافه في > ‏0 من ‎LIAN‏ المصابة باستخدام فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني 12800 ‎CMVie‏ ‏أصلي (انظر الشكل رقم 18). وعند الحد الأدنى مع عدم إشارة تمت ‎gus)‏ في الخلايا المصابة ‏باستخدام فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني مع الجين الانتقالي غير المرتبط (انظر ‏الشكل رقم 19ب» ‎VP2 «CPV‏ والتي لا تكون مرتبطة بالجسم المضاد ل 8200). وكما تمت 5 رؤيته في السلسلة المزدوجة من الشكل رقم 19ج فإن هناك العديد من الخلايا الموجبة لفيروس ‏غدي كلبي-2 من ‎‘RabG‏
وفي ختام لذلك فإن تحليل التألق المناعي والتدفق الخلوي توضح معزز فيروس الهريس ألفا للخيول 4 من التعبير من ‎RabG‏ للجين الانتقالي بواسطة فيروس غدي كلبي-2 معاد الاتحاد الجيني بواسطة ‎AIST Wa‏ المصابة. أثبتت تلك النتائج بصورة إضافية استخدام معززات من فيروس الهريس ألفا للخيول 4 من الاختراع الحالي الناقل خلاف فيروس الهريس ألفا للخيول 1. المثال رقم 7: الإنشاء وتوضيح الخصائص في المعمل والاختبار في الكائن الحي لفيروس الهريس ألفا للخيول 1 أحادي التكافؤ من لقاح فيروس أنفلونزا م الذي تمت إصابته بالعدوى (لقاح ‎(H3‏ وذلك للخنزير. فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من النوع المصلي 113 (المتوالية بهوية رقم 27(« (ه/انفلونزا الخنازير/ إيطاليا// 7680/ 2001 ‎((H3N2)‏ رقم الوصول في بنك الجينات رقم: 3550302.2م)؛ 0 والذي تم اختياره في شكل مولد ضد يتم اختباره بالنسبة لدراسة اللقاح في الخنازير. يقوم اللقاح الجديد في مضادة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير بتوفير سمة دي آي في أيه ‎DIVA‏ على سبيل ‎(Jal‏ من خلال اكتشاف الأجسام المضادة في مضادة بروتينات فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير بروتين نووي أو ‎NA‏ في الحيوانات والتي تمت إصابتها بواسطة السلالات في المجال فيروس أنفلونزا ‎A‏ ولكن ليس في الحيوانات فقط ولكن في التلقيح باستخدام اللقاح الذي تم وصفه هنا حيث 5 أنه يتم التعبير عنه فقط في بروتين فيروس أنفلونزا ‎A‏ راصة دموية من الخنازير. تم تخليق متوالية التشفير الخاصة بها وتم انتساخها بصورة فرعية من الناقل الخاص بالنقل -455-113م-1770م 1 حيث يتم وضع 113 تحت التحكم الخاص بمعزز 8455 جديد وإشارة معالجة ببولي أدينيل جديدة 8م71 وإطار خاص بالكاسيت مع مناطق ناتجة ‎sage‏ الارتباط خاصة بالإدراج بداخل إطار القراءة المفتوح 70 (الشكل رقم 1 و5). 0 وعن طريق التطفير بطريقة ‎en-passant‏ وياستخدام ناظم ناتج عودة الارتباط من كاسيت التعبير 0455-13-1 بالإدارج في إطار القراءة المفتوح 70 من 211ه8م-قابلة للاستئتصال لكي يتم إنشاء ‎.pRacH-SE70-p455-H3‏ ‏تم نقل العدوى لخلايا ‎PK/WRL‏ باستخدام فيروس ناتج عودة الارتباط ‎pRacH-SE70-p455-H3‏ ‏وتم إعادة إنقاذ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ ‏5 وفيروس الهررس ألما للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ ومرتين تمت التنقية مرتين باستخدام اللوحة. (الشكل رقم 6).
تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة من جين الإدراج. تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر (اختبار التألق المناعي؛ الشكل رقم 7) وتبقيع ويسترن (الشكل رقم 8( باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارباً أحادية النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل.
إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎I‏ المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي غير المباشر (غير الموضح) وتبقيع ويسترن (الشكل رقم 8( باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 81207 (تمت ملكيته باستخدام 81). تم اختبار مظهر الترايمر من 113 على غشاء البلازما من الخلايا التي تم اختبارها بواسطة اختبار الامتزاز الدموي باستخدام الكريات الحمراء من الدجاج (غير الموضحة). تم تحديد عيارات القمة مثل الجرعة
0 المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / مل في خلايا ‎PK/WRL‏ في نفس المدى في شكل عيارات من فيروس أساسي 80017-قابلة للاستتصال والتي توضح تعبير الجين الانتقالي الذي لا يكون له تأثير ضار على الانتساخ الفيروسي (غير الموضح). تم التثبت من ذلك بواسطة تمرير فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ في خلايا ‎PK/WRL‏ والتي تصل للمسار 20 ‎(P20)‏ بعد الإنقاذ. تم توضيح ‎P10 P5‏ و15 ‎P20‏ من
5 الفيروس من خلال المعايرة والتتابع وتبقيع وسترن (الشكل رقم 8)؛ عند ‎P10‏ و3720 بصورة إضافية بواسطة التألق المناعي غير المباشر وتعبير راصة دموية والثبات الجيني من راصة دموية المفرد ‎gall‏ المدرجة بطول المعزز ومتواليات 0178م التي التثبت منها. تم توضيح اثنين من البقع في الشكل رقم 8 ‎Ally‏ تكون بمثابة انتساخات تمت حضانئتها مع أي من الجسم المضاد أحادي النسيلة من 81207 (اليسار) والذي تم اكتشافه بواسطة البروتين السكري
‎TT 0‏ لفيروس الهربس ألفا للخيول 1 من أو باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة التجاري من الأرنب ‎(PAS-34930)‏ الذي تمت زيادة مع المجموعة الفرعية من الراصة الدموية من الأنفلونزا 113 (اليمين). وتم اكتشاف البروتين السكري ‎TT‏ في كل مزارع الخلايا والتي تمت إصابتها باستخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1؛ كما هو متوقع. تم اكتشاف 113 كاملة الطول في كل ‎Wal‏ ‏المصابة بمسارات مختلفة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ كما هو
‏5 متوقع. وبصفة خاصة فإن مضاد المصل 113 قد تم توضيحه من خلال بقع وبسرت من الخلايا المصابة الراصات الدموية من الأنفلونزا المعبرة عن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 011م8-قابلة
للاستئصال ناتج عودة الارتباط من فيروسات المجموعة الفرعية 111؛ انظر فيما يلي في الشكل رقم 14. ومن خلال اختبار التألق المناعي المزدوج من اللوحات الفيروسية في الخلايا المصابة باستخدام 0 التي تستخدم الجسم المضاد ل 113 أحادي النسيلة ومضاد المصل من فيروس ‎Gael)‏ ألفا للخيول فقد تم التثبت من أن كل فيروس الهربس ألفا للخيول 1 تعمل بصورة افتراضية على حث اللوحات وأيضاً تعبر عن 113 (غير موضح). أثبتت كل الاختبارات الثبات الخاص ب فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط. ولكي يتم فحص الخصائص الخاصة به في شكل لقاح محمول في الخنازير الصغيرة فإن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ قد تم اختباره في الدراسة 0 الخاصة باختبار التلقيح. ‎og‏ نحو مفصل تم تطعيم الخنازير التي لها مناعة مشتقة من الأمهات من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير (مع عدم وجود أجسام مضادة أساسية) مرتين ‎RacH-SE-70-‏ ‏4553م عند جرعة من 1 ‎X‏ 710 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين بداخل العضلات عمر من اثنين وخمسة أسابيع (اثنين من مرات اللقاح» و2 ‎X‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1)؛ أو بعمر من خمسة أسابيع فقط (لقاح ‎x1‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 بمرة واحدة). 5 تم استخدام مجموعة غير ملقحة تم اختيارها في شكل عينة مقارنة ومجموعة من الحيوانات التي تم تلقيحها عند اثنين وخمسة أسابيع من العمر بدون وجود لقاح فيروس أنفلونزا م من الخنازير غر المنشطة طبقاً لتعليمات المصنع (ولكن للنقاط الزمنية من اللقاح) والتي يتم استخدامها في شكل عينة مقارنة موجبة (تم قتلها). وعند العمر 8 أسابيع فإن الحيوانات وخصوصاً عينة المقارنة السلبية قد م اختبارها بواسطة الجرعة المستخدمة بصورة سلبية من ‎XT‏ 10 7 من الجرعة المعدية 0 المزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من سلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113702 من الخنازير (ناتج ‎Jie‏ فيروس المجال الأوروبي 8452-14 الذي به 113 غير متجانس بالنسبة لمولد ضد من اللقاح 113 المستخدم في 455-113م-80011-52-70). تم استخدام الحيوانات غير الملقحة والحيوانات التي لم يتم اختبارها في شكل عينة سلبية بينما لا يكون هناك أي حيوانات غير ملقحة أو أي حيوانات غير مختبرة يتم استخدامها في شكل عينة مقارنة للاختبار. وعند أو بعد التلقيح وقبل أو 5 بعد الاختبار فإن درجات حرارة الجسم يتم قياسها وبتم أخذ عينات الدم عند نقاط زمنية مختلفة. ويعد يوم ‎daly‏ من ‎LAY)‏ تم قتل نصف الحيوانات من كل مجموعة وتم إعطاء الرئات درجات
‎Lad‏ يتعلق بوجود آفات بها والتي تكون نمطية بالنسبة للعدوى فيروس أنفلونزا م الموجودة في الخنازير» ويتم أخذ ثلاث عينات من الرئة وذلك لكل رئة يمنى وبسرى لكل حيوان على الترتيب ويتم تحديد عيارات فيروس أنفلونزا .م في الخنازير التي تمت نقل العدوى لها في نواتج انتساخ الرئة ويتم أخذ ‎due‏ من مائع الغسل القصبي السنخي. تم تنفيذ نفس الإجراء باستخدام النصف المتبقي من الحيوانات لكل مجموعة وذلك بعد ثلاثة أيام من الاختبار. عندما يتم فحص زيادة درجة حرارة الجسم بعد استخدام فيروس الاختبار من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير فإن الحيوانات غير الملقحة تعرض زيادة في درجة حرارة الجسم من حوالي 1 درجة مئوية لكل يوم واحد بعد الاختبار. تم منع الزيادة في درجة حرارة الجسم المطلوية بعد يوم واحد من الاختبار وذلك لكي يتم التلقيح مرتين للمجموعة باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ (الشكل 0 رقم 20). إن الاختبار الخاص بدرجات الرئة من الحيوانات التي تم قتلها لمدة 1 أو 3 أيام بعد استخدام فيروس الاختبار من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير تكشف عن عينة تحكم سلبية توضح عدم وجود آفات في الرئة وبصورة نمطية خاصة بعدوى فيروس أنفلونزا ‎(A‏ والتحكم في الاختبار والذي يوضح آفات الرئة في مدى متوسط من 7-6 7 مع الأخذ في الاعتبار لقيم متوسطة من المجموعة 5 من درجات آفات الرئة التي تم تقليلها إلى واحد أو أقل من 74 بالنسبة لمجموعة من اللقاحات مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ (الشكل رقم 21). أظهرت عيارات الرئة من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من الحيوانات التي تم قتلها عند 1 أو 3 أيام بعد استخدام فيروس الاختبار من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير أن هناك عينة مقارنة سلبية توضح عدم وجود فيروس أنفلونزا ‎A‏ خنزيري في عينات ‎Al)‏ حيث إن عينة الاختبار توضح 0 عيارات الفيروس لكل نسيج رئة في مدى من أكثر من 5 (اليوم 3) إلى أكثر من 7 لوغارتم (اليوم 1). في تناقض صارخ لقيم المتوسط للمجموعة فقد تم التقليل بصورة قوية لحوالي اثنين من اللوغارتمات أو أقل للمجموعة التي تم تلقيحها ‎yall‏ واحدة باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ ‏ويتم تقليلها بالنسبة لمستويات غير قابلة للاكتشاف خاصة بالمجموعة التي لم يتم تلقيحها مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ (الشكل رقم 22). 5 وعند اختبار الحث الخاص بالأجسام المضادة المتعادلة من فيروس أنفلونزا له من الخنازير بعد اللقاح فإن الأمصال من الحيوانات يتم تلقيحها مرة واحدة باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏
والتي تعرض عيارات تعادل متكررة في مدى من حوالي 160 وذلك لمدة ثلاثة أسابيع بعد أول تلقيح وأمصال من الحيوانات التي تم تلقيحها مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ والذي يوضح عيارات التعادل من حوالي 2560 ثلاثة أسابيع وبعد أسبوعين من التلقيح؛ بينما يكون هناك أمصال من مجموعات غير ملقحة والتي لا يكون بها مستويات جسم مضاد متعادلة من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير (الشكل رقم 22).
وعندما يتم تحديد كميات السيتوكين المساعد للالتهاب إنترلوكين- ‎Lin]‏ في مائع الغسل القصبي السنخي من الحيوانات لمدة 1 أو 3 أيام بعد اختبار فيروس أنفلونزا .م في الخنازير فإن مستويات الإنترلوكين- ‎lial‏ أكثر من 100 بيكو ‎faba‏ حتى ما يصل إلى 900 بيكو جرام/مل والذي يكون قابلاً للإكتشاف في ثلاثة من أريعة حيوانات تم اختبارها عند اليوم 1 حيث أن تلك المستويات يتم 0 تقليلها إلى 300-100 بيكو جرام/ل من الإنترلوكين-آبيتا لمدة من مائع الغسل القصبي السنخي من الحيوانات التي تم تلقيحها مرة واحدة باستخدام ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ من اللقاح وحتى مع التقليل الإضافي للمستويات من 0 إلى أقل من 100 بيكو جرام/ل من الإنترلوكين- [بيتا لكل الحيوانات التي تم تلقيحها مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ (الشكل رقم 23). يوضح ذلك أن التلقيح باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ قد تم منعه بصورة فعالة فيما يتعلق بالحث 5 باستخدام سيتوكين التهابي مساعد من الإنترلوكين-1بيتا بعد عدوى فيروس ‎A Basil‏ من
الخنازير. وعند إعادة التحفيز لخلايا أحادية النواة من الدم المحيطي التي تم أخذ عينات منها عند يوم الدراسة 8 وعند استخدام وسيلة الحث المختلفة فإن عملية التحفيز الخاصة بالخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من الحيوانات غير الملقحة توضح أن هناك أقل من 75 / 1071" من العدات في اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما بغض النظر عن وسيلة الحث المستخدمة (الشكل رقم 24 أ). تكون هناك الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من العينات التي تستقبل اللقاح غير المنشط مرتين (والتي تم قتلها) والتي توضح حوالي 150 / 10" من العدات عندما تم ‎ale]‏ تحفيزها باستخدام بروتين نووي فيروس أنفلونزا م من الخنازير بروتين نووي وحوالي 3000 / 1 ‎X‏ 10 من العدات في اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم 5 المحددة لإنترفيرون جاما عندما يتم إعادة التحفيز باستخدام سلالة الاختبار من فيروس انفلونزا الخنازير 113112 من 8452-14 ولكنها توضح عدم وجود تفيز خاص بالخلايا وحيدة النواة من الدم
المحيطي (المستويات من 1/75 ‎X‏ 10 “" من العدات أو أقل) عندما يتم استخدام فيروس أنفلونزا ‎daly A‏ دموية من الخنازير ناتجة عودة الارتباط أو فيروس الهريس ألفا للخيول 1 التي تم استخدامها (الشكل رقم 24ب). ‎eg‏ النقيض من ذلك؛ فإن الحيوانات التي تم تلقيحها مرة واحدة أو مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ توضح أيضاً حوالي 200 (1* فيروس الهريس ألفا للخيول 1) إلى 300 ‎x2)‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1) / 1 ‎x‏ 10 * © عدات في بقع اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما عندما يتم إعادة التحفيز باستخدام 8452-14 من سلالة الاختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113802 من الخنازير ولكن مع عدم وجود إعادة تحفيز من للخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من (مستويات من 75/ 1 ‎x‏ 510 عدة أو أقل) عند وجود فيروس أنفلونزا ‎A‏ بروتين نووي والتي تم استخدامها (الشكل رقم 24 ‎z‏ ‏0 ود). عندما يتم استخدام فيروسات فيروس الهربس ألفا للخيول 1 لعملية التحفيز؛ فإن الحيوانات يتم تلقيحها مرة واحدة أو مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ والتي توضح حوالي 300/ 1 * 10 عدة في بقعة اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما عندما يتم إعادة التحفيز باستخدام لقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 المفرغ من 211مه8-قابلة للإستئتصال وتلك القيمة تمت زبادتها إلى أكثر من 400/ 1 ‎sae "10 x‏ عندما يتم التعبير عن 5 لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ الذي يعبر عن فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113 من الخنازير والذي تم استخدامه على الترتيب (الشكل رقم 24 ج ود). ونتيجة لذلك؛ عندما يتم استخدام فيروس أنفلونزا ‎A‏ راصة دموية من الخنازير ناتجة عودة الارتباط لعملية ‎sale)‏ التحفيز» يكون هناك الحيوانات التي تم تلقيحها مرة واحدة أو مرتين باستخدام لقاح ‎RacH-SE-70-p455-H3‏ التي تعرض حوالي 100- ‎x1) 1500‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1) إلى 200-150 ‎x2)‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1)1 0 * 10 * 6 عدة في اختبار البقعة الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما (الشكل رقم 24 ج ود). المثال رقم 8 إنشاء وتوضيح الخصائص في المعمل والاختبار في الكائن الحي لفيروس الهربس ‎Gl‏ للخيول 1 ثلاثي التكافؤ من لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ الذي تمت إصابته بالعدوى وذلك للخنزير. 5 وكما تم وصفه؛ ‎Lad‏ يلي وفي الاختراع الذي تم وصفه فإن هناك مولدات الضد الأربعة من الراصة الدموية من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير كما تم وصفها يتم اشتقاقها من ‎HIN2‏ و1132
‎HIN‏ من الطيور ‎HIND‏ من الخنازير من الأنواع المصلية الفرعية فيروس أنفلونزا ‎A‏ من
‏الخنازير؛ كما تم التعبير عنه بواسطة اثنين من فيروسات ناقل فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ناتج
‏عودة الارتباط. يقوم اللقاح الجديد في مضادة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير بتوفير سمة ‎(DIVA‏
‏على سبيل ‎(JU‏ من خلال اكتشاف الأجسام المضادة في مضادة بروتينات فيروس أنفلونزا ‎A‏ ‏5 من الخنازير بروتين نووي أو ‎NA‏ في الحيوانات ‎lly‏ تمت إصابتها بواسطة السلالات في المجال
‏فيروس أنفلونزا ‎A‏ ولكن ليس في الحيوانات فقط ولكن في التلقيح باستخدام اللقاح الذي تم وصفه
‏هنا حيث إنها تعبر فقط عن بروتين فيروس أنفلونزا ‎A‏ راصة دموية من الخنازير.
‏كان لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير ثلاثي التكافؤ الجديد ‎Basie‏ في المعمل وتم اختباره في
‎A ‏لغرض الفعالية الشديدة الخاصة به في مقابل فيروس أنفلونزا‎ Al A
‏0 تتم استخدام معزز 430 المحدد بشكل جديد لكي يتم دفع التعبير عن فيروس ‎HINT‏ (ل/انفلونزا الخنازير/ ‎[132/Gent‏ 011101(2005)؛ رقم الوصول في بنك الجينات رقم: ‎(AFR76623.1‏ ‏وسبب أن جين الراصة الدموية في الفيروس المذكور يقوم بعزل الجزء الأصلي من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الطيور فإنه يطلق عليه ‎ab‏ «ه111. تم ‎Hlav Galas‏ وتم الانتساخ الفرعي في ناقل خاص بالنقل لمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 لكي يتم إنشاء ‎pU1/3-p430-Hlav-‏
‎.BGH_K_BGH 5‏ إن التعبير عن ‎Hlav‏ قد تم وضعه تحت تحكم معزز 8430 وهرمون النمو البقري من ‎A BLE)‏ وتم جعله في إطار مع مناطق ناتجة ع ودة الارتباط الخاصة بالإدارج في إطار القراءة المفتوح 3/1 (الشكل رقم 10). وعن طريق التطفير بطريقة ‎en-passant‏ وباستخدام ناظم ناتج ‎sage‏ الارتباط من كاسيت التعبير «د430-111م-هرمون النمو البقري بالإدارج في إطار القراءة المفتوح 1 من 611همه2م-قابلة
‏0 اللاستئصال لكي يتم إنشاء ‎.(pRacH-SE1/3-p430-Hlav‏ 3 نقل العدوى ‎PK/WRL Al‏ باستخدام فيروس ناتج ‎sage‏ الارتباط ‎pRacH-SE1/3-p430-Hlay‏ وتم ‎sale)‏ إنقاذ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE1-p430-Hlay‏ وفيروس الهربس ‎ll‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE70-p455-H3‏ الشكل 11 ومرتين تمت التتقية مرتين باستخدام اللوحة. تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز
‏5 عال الدقة من جين الإدراج. تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر وتبقيع ويستر باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارياً أحادية
النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل (الشكل رقم 12). إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري 11 المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي غير المباشر وتبقيع ويسترن باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 8207 (تمت ملكيته باستخدام ‎BI‏ (غير موضح). تم اختبار المعالجة الصحيحة للناقل من 11187 وتم التحديد الموضعي في غشاء البلازما من ‎WAY‏ المصابة بواسطة اختبار الامتصاص المناعي باستخدام كريات الدم الحمراء من الدجاج (غير الموضحة). تم تحديد عيارات القمة ‎Jie‏ الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / مل في خلايا ‎PK/WRL‏ في نفس المدى في شكل عيارات من فيروس أساسي 617ه8-قابلة للاستئصال والتي توضح تعبير الجين الانتقالي الذي لا
يكون له تأثير ضار على الانتساخ الفيروسي (غير الموضح).
0 تكون مواد اكتشاف محددة من نواتج النقل بالحزمة الواسعة عند 75 كيلو دالتون بواسطة ‎PA-‏ ‏9 في تجانس مع المظهر المتوقع الخاص بالبروتين السكري ناتج عودة الارتباط راصة دموية كما تم التنبؤ عنه من المتوالية الخاصة به. يكون التلقيح الموضع الخاص بالأغشية الخلوية باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة من 6102 في اتساق مع الموضع الخلوي الفرعي كما هو متوقع.
5 ولكي يتم اختبار ما إذا تمت معالجة الراصات الدموية ناتجة عودة الارتباط التي تم التعبير عنها ونقلها كما هو متوقع فإن خلايا ‎VERO‏ تتم إصابتها ب فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎<RacH-SE-1/3-p430-Hlay‏ فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎<SE-70-p455-H3‏ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 802611-قابلة للاستتصال (الأساسية) عند التعدد في العدوى من 0.01 أو يتم تركها بدون إصابة. تمت حضانة ‎WAY‏ الحية
0 المدة 24 ‎dels‏ المصابة بداخل البربتون والخلايا غير المصابة باستخدام معلق من كريات دم حمراء من الدجاج في محلول ملحي منظم بالفوسفات وتم الغسل باستخدام محلول ملحي منظم بالفوسفات وتم التبقيع باستخدام سلالة نووية من 33342 ‎Hoechst‏ الخاصة بالتبقيع المناعي. وسبب أن كريات الدم الحمراء من الطيور تشتمل على نويات الخلية فإنها يتم تبقيعها باستخدام 2 وتظهر في شكل بقع زرقاء من خلال القياس الطيفي بالتألق عند المقارنة مع
5 الخلايا التي تمت إصابتها بالعدوى باستخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 81 -قابلة للاستئتصال والتي لا تعبر عن الراصة الدموية والامتزاز الخاص بكريات الدم الحمراء
بصورة هامة وتمت زيادتها على الخلايا المصابة إما بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav‏ أو فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎SE-70-p455-H3‏ (غير الموضحة). ومن ذلك؛ فيمكن أن يتم التوصل إلى أن الراصة الدموية قد تم تحويلها ومعالجتها ونقلها إلى غشاء البلازما من الفيروس الناقل من الخلايا المصابة بطريقة كما لو أنها يتم إنتاجها بواسطة انتساخ فيروس الأنفلونزا الطبيعي.
يكون النمط الواضح من الامتزاز المناعي من الخلايا المصابة قد تم حمله فيما يتعلق الإشارات الخاصة بتبقيع ويسترن والاختبار الخاص بالتألق المناعي (بالنسبة ل ‎Hav‏ الشكل رقم 12) الذي يوضح التعبير الفعال الخاص ببروتينات الجين المتحولة ويقترح تشكيل ترايمرات وظيفية من راصة
دموية على سطح الخلية من الخلايا المصابة بناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1.
0 وبصورة خاصة فإن نقص الفعالية الخاص بالتشابك من الأجسام المضادة التجارية المتعددة النسيلة ل 113 (085-34930) و111 (085-34929) قد تم التثبت ‎die‏ من خلال تبقيع ويسترن من الخلايا المصابة بفيروسات مدرجة منفردة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎SE-70-pd55-H3‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-‏ ‎Hlav‏ (غير موضح).
5 وبعد ذلك؛ تم إنشاء فيروس ‎uel)‏ ألفا للخيول 1 211ه8-قابلة للاستئصال ناتج عودة الارتباط الذي يعبر عن اثنين من الراصات الدموية من اثنين من فيروسات أنفلونزا ‎A‏ من النوع المصلي الفرعي. إن البدء باستخدام كروموسوم صناعي بكتري ‎pRacH-SE-70-p455-H3‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط كاسيت التعبير عن 430-11187م-هرمون النمو البقري كما تم تجمعيه في الناقل الخاص بالنقل
‎pU1/3-p430-Hlav-BGH_K_BGH ~~ 0‏ (الشكل رقم 10) قد تم إدراجه في موضع إدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 بواسطة اثنين من نواتج التحويل ‎AUS RED‏ الخطوة لإنشاء ‎pRacH-SE-1/3-‏ ‏430-11127-70-04553م. تم نقل العدوى لخلايا ‎PK/WRL‏ باستخدام ‎pRacH-SE1/3-p430-‏ ‎Hlav-70-p455-H3‏ وفيروس ناتج عودة الارتباط فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE1/3-p430-Hlav-70-p455-H‏ وتم إعادة إنقاذه وتمت التنقية مرتين باستخدام
‏5 اللوحة. كان التحديد القصير لفيروس ناتج عودة الارتباط عبارة عن فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ (الشكل رقم 13). تمت تنقية الإدراج الصحيح من كاسيت
التعبير بواسطة التتابع من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة من مناطق الإدراج مع المتواليات
الجانبية.
تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر
‎a)‏ يتم توضيحه) وتبقيع ويسترن باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارياً أحادية النسيلة
‏5 والأجسام المضادة متعددة النسائل (الشكل رقم 14). إن استعادة فيروس الهريس ألفا للخيول 1
‏البروتين السكري 17 المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي
‏غير المباشر (غير الموضح) وتبقيع ويسترن باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 81207
‏(تمت ملكيته باستخدام ‎(8¢BI‏ (الشكل رقم 14).
‏إن كل من الجينات الانتقالية من 113 5 ‎Hlav‏ قد تم التعبير عنها في صورة موازية لمزرعة الخلايا 0 المصابة بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ ناتج عود الارتباط
‏المدرج بصورة مزدوجة. كان التعبير عن الجين الانتقالي ثابتاً ولا يعوق العيارات الفيروسية التي تم
‏اختبارها حتى المسار 11 في ‎PK/WRL Wa‏
‏تم توضيح ناقل فيروس الهربس ألفا للخيول 1 المحسن باستخدام اثنين من مواضع الإدراج واثنين
‏من المعززات الجديدة التي تم توضيح أنها تعبر عن اثنين من الراصات الدموية من الأنفلونزا بصورة موازية. إن توضيح الموضع بواسطة التحديد الخلوي الفرعي كما تم تحديده بواسطة التألق
‏المناعي غير المباشر وقابلية النمو في اس دي اس 505-بي أيه جي إيه ‎(PAGE‏ كما تم تحديده
‏بواسطة تبقيع ويسترن يكون مناظراً الراصات الدموية الأساسية التي تم التعبير عنها في فيروس
‏أنفلونزا ‎A‏ الذي تمت إصابته في الخلايا المعروفة من المراجع.
‏وبعد ذلك» تم تخليق الراصات الدموية المعبرة عن فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد 0 الجيني ‎RacH‏ من 11150 المتوالية بهوية رقم 29 (8/انفلونزا الخنازير/ ‎[Wiad‏ 2003/4675
‎26 ‏متوالية بهوية رقم‎ Hipdms )98476.1 ADK ‏بنك الجينات برقم وصول‎ ¢(HIN2)
‏(ه/انفلونزا الخنازير/إيطاليا/ ‎¢(HIN2)2010/116114‏ رقم الوصول في بنك الجينات:
‎.(ADRO1746.1
‏إن متوالية التشفير من ‎Hlhu‏ قد تم تخليقها وتم انتساخها بصورة فرعية في ناقل خاص بالنقل 5 لمنطقة الإدراج إطار القراءة المفتوح 3/1 لكي يتم إنشاء ‎-pU1/3-p430-H1hu-BGHKBGH‏ إن
‏التعبير عن 1110 قد تم وضعه تحت تحكم معزز 0430 وهرمون النمو البقري من إشارة ‎A‏ وتم
جعله في إطار مع مناطق ناتجة عودة الارتباط الخاصة بالإدارج في إطار القراءة المفتوح 3/1 (الشكل رقم 25). تم تخليق متوالية التشفير من ‎Hipdm‏ وتم انتساخها بصورة فرعية من الناقل الخاص بالنقل -1770م ‎Gus »0455-1110000-1‏ يتم وضع ‎Hipdm‏ تحت التحكم الخاص بمعزز 0455 جديد وإشارة معالجة ببولي أدينيل جديدة 8م71 وإطار خاص بالكاسيت مع مناطق ‎dail‏ عودة الارتباط خاصة بالإدراج بداخل إطار القراءة المفتوح 70 (الشكل رقم 26). وبعد ذلك؛ فإن كاسيتات التعبير من 430-1118«7م-هرمون النمو البقري ‎p455-Hlpdm-715‏ يتم إدراجها في 81م -قابلة للاستتصال بواسطة التطفير باستخدام نظام ‎RED‏ ناتج ‎sage‏ الارتباط وإنشاء ‎pRacH-SE-1/3-p430-H1hu‏ أولاً. وباستخدام كروموسوم صناعي بكتري المعدل في شكل 0 مستهدف فإن 71-(00م0455-111 يتم إدراجه بواسطة نظام تطفير ‎en-passant‏ باستخدام نظام ناتج عودة الارتباط ‎RED‏ والذي ينتج ‎sig .pRacH-SE-1/3-p430-H1hu-70-p455-Hlpdm‏ نقل العدوى ل ‎RacH-SE-1/3-p430-H1hu-70-p455-Hlpdm‏ في خلايا ‎PK/WRL‏ وفيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-H1hu-70-p455-Hlpdm‏ الذي تم إنقاذه وتمت التنقية باللوحة ثلاث مرات. كانت التسمية القصيرة لفيروس ناقل ناتج عودة الارتباط الجديد 5 هو فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ (الشكل رقم 27). تم تحليل تعبير الجين الانتقالي في الخلايا المصابة بواسطة اختبار التألق المناعي غير المباشر ‎a)‏ يتم توضيحه) وتبقيع ويسترن باستخدام الأجسام المضادة المتاحة تجارياً أحادية النسيلة والأجسام المضادة متعددة النسائل (الشكل رقم 25). إن استعادة فيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري 17 المشفرة لإطار القراءة المفتوح 71 قد تم التثبت منه بواسطة التألق المناعي 0 غير المباشر (غير الموضح) وتبقيع ويسترن باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة 207نم (تمت ملكيته باستخدام ‎(8¢BI‏ (الشكل رقم 28). تم توضيح أنواع الثبات الجيني والثبات الخاص بالنمط الظاهري لفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ناتج عودة الارتباط من خلال التمرير في مزرعة الخلية وتحديد العيارات الفيروسية كل 5 مسارات. تم التثبت من مناطق الإدراج كل عشرة مسارات وأيضاً في شكل 5 الجينات العرضية التي تم التعبير عنها بواسطة تبقيع ويسترن (غير موضح). تم اختبار دقة التعبير ‎Expression fidelity‏ بواسطة التألق المناعي غير المباشر مزدوجة من اللوحات تحت
طريقة الترحيل ‎methocel‏ ولوحات الحساب ‎Ally counting plaques‏ تم تبقيعها باستخدام الأجسام المضادة لفيروس الهريس ألفا للخيول والأجسام المضادة المحددة بالجين الانتقالي (غير الموضح).
ولكي يتم فحص الخصائص الخاصة بها في شكل لقاح ناقل في الخنازير الصغيرة؛ فإن لقاح فيروس أنفلونزا م من الخنازير رياعي التكافؤ يتكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد
الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ ‏والذي تم اختباره في دراسة التلقيح -الاختبار. وعلى نحو مفضل فقد تم تطعيم الخنازير التي لها
مناعة مكتسبة من الأمها في مضادة فيروس أنفلونزا ‎A‏ الخنزيري (الموجب للأجسام المضادة الأساسية) وذلك مرتين باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ ‏وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ تحت جرعة من 1 ‎X‏ 110 من
0 الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين لكل سلسلة لقاح بداخل العضلات عند عمر من واحد إلى أربعة أسابيع (مرتين من التطعيم»؛ 2 * فيروس الهريس ألفا للخيول 1) عند
عمر من أربعة أسابيع فقط (مرة تطعيم واحدة؛ 1 ‎X‏ فيروس الهرربس ألفا للخيول 1). يتم استخدام مجموعة غير ملقحة في شكل عينة مقارنة سلبية. وعند العمر 11 أسابيع فإن الحيوانات وخصوصاً عينة المقارنة السلبية قد م اختبارها بواسطة الجرعة المستخدمة بصورة سلبية من 1 ‎X‏
5 910 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من سلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎H3N2 A‏ من الخنازير (ناتج عزل فيروس المجال الأوروبي 8452-14؛ الذي به 113 غير متجانس بالنسبة لمولد ضد من اللقاح 113 المستخدم في فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎(RacH-SE_B‏ .5 استخدام الحيوانات غير الملقحة والحيوانات التي لم يتم اختبارها
في شكل عينة سلبية بينما لا يكون هناك أي حيوانات غير ملقة أو أي حيوانات غير مختبرة يتم
0 استخدامها في شكل ‎due‏ مقارنة للاختبار. وعند أو بعد التلقيح وقبل أو بعد الاختبار فإن درجات حرارة الجسم يتم قياسها وتم أخذ عينات الدم عند نقاط زمنية مختلفة. وبعد يوم واحد من الاختبار
تم قتل نصف الحيوانات من كل مجموعة وتم إعطاء الرئات درجات فيما يتعلق بوجود آفات بها
والتي تكون نمطية بالنسبة للعدوى فيروس أنفلونزا ‎A‏ الموجودة في الخنازير» ويتم أخذ ثلاث عينات
من الرئة وذلك لكل رئة يمنى ويسرى لكل حيوان على الترتيب ويتم تحديد عيارات فيروس أنفلونزا
« في الخنازير التي تمت نقل العدوى لها في نواتج انتساخ الرئة ويتم أخذ ‎die‏ من مائع الغسل القصبي السنخي. تم تنفيذ نفس الإجراء باستخدام النصف المتبقي من الحيوانات لكل مجموعة
وذلك بعد ثلاثة أيام من الاختبار. تم تحليل مادة العينة وبيانات مجمعة لكي يتم تحديد؛ من بين
أشياء ‎(gal‏ التغييرات في درجة حرارة الجسم بعد الاختبار والعلامات الإكلينيكية بعد العدوى
بفيروس أنفلونزا ‎A‏ ودرجات الرئة وعيارات الرئة من فيروس أنفلونزا ‎A‏ للخنازير والتغييرات النسيجية
في نسيج الرئة وعيارات معادلة المصل ومستويات السيتوكين في مائع الغسل القصبي السنخي والتحفيز الخاص بالخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي كما تم قياسه بواسطة اختبار البقعة
الماصة للمناعة المرتبطة بالإنزيم المحددة لإنترفيرون جاما وتنشيط الخلية 3.
المثال رقم 9
حث استجابة الجسم المضاد المتعادل في مضادة اثنين من مولدات الضد في مقابل الفتران الملقحة
باستخدام لقاح ناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ثنائي التكافؤ
0 تتم استخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH SE B‏ (فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-p430-Hlav-7-p455-H3‏ انظر الشكل رقم 13) لغرض تحصين فتران ‎Balble‏ لكي يتم توضيح أن الجينات الانتقالية التي تم التعبير عنها مولدة للمناعة في أنواع أخرى بالمقارنة بالخنزير والأجسام المضادة المتعادلة التي يتم حثها في مضادة أي واحد من الاثنين من مولدات الضد من خلال الاستخدام بداخل الأنف.
5 وبصورة مفصلة؛ فإن ثلاثة مجموعات من خمسة ‎Balble Ol‏ في لكل مجموعة؛ عمرها من 5-3 أسابيع تم تطعيمها من خلال الأنف في يوم الدراسة 0 و21 إما باستخدام 40 ميكرو لتر من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 3 58 ‎RacH‏ (فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-1/3-430-Hlav-7-455-H3‏ المجموعة 1) أو 40 ميكرو لتر من الناقل المفرغ (فيروس ‎WH uel)‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 802011-قابلة للاستتصال
0 المجموعة 2 عينة المقارنة للناقل) أو 40 ميكرو لتر من وسط مزرعة النسيج (المجموعة 3 عينة المقارنة ‎(dla)‏ على الترتيب. بالنسبة للمجموعة 1 و2ن كانت جرعات فيروس الهربس ألفا للخيول 1 المعدية هي 1 ‎X‏ 10 5 /الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين40 ميكرو لترء على الترتيب. وقد تم جعل الحيوانات تنزف في أيام الدراسة 0 (قبل التطعيم ‎inoculation‏ الأول) و7 و14 و21 (قبل التطعيم الثاني) و28 و35. تم تحضير المصل من
عينات الدم وتم التخزين بصورة مجمدة عند -80 درجة مئوية. تم اختبار التألق المناعي بالنسبة لاكتشاف الأجسام المضادة في مضادة فيروس ناقل.
تمت الإصابة لخلايا 81-57 مع تعدد العدوى من 0.001 مع فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎(RacH-SE1212‏ والفيروس الذي تم إنقاذه من ناقل مفرغ كروموسوم صناعي بكتري 0180011521.2. تمت ملاحظة لوبحات متمايزة من داخل البربتون لمدة 24 ساعة وتمت معالجة الخلايا فيما يتعلق باختبار التألق المناعي. تم اختبار الأمصال من كل ثلاث مجموعات من مرات النزف (التي تم الحصول عليها عند 14 يوماً بعد التطعيم الثاني) وتم التخفيف عند 1: 0 محلول ملحي منظم بالفوسفات. وكمصل مقارنة موجب من حصان معالج باللقاح فيروس الهريس ألفا للخيول 1 فقد تم استخدامه في تخفيف من 1: 500. كانت الأجسام المضادة الثانوية متاحة من الجلوبيولين المناعي جاما فأري مضاد من ‎bY)‏ مترافق مع ‎FITC‏ وذلك لأمصال الفئران والجلوبيولين المناعي جاما مضاد للخيول مأخوذ من الماعز مترافق مع ‎Cys‏ وذلك في 0 شكل مصل للخيول وبتم استخدامه عند تخفيف من 1: 200. تم تقييم ارتباط الأجسام المضادة بواسطة القياس الطيفي المجهري. قامت كل الفئران التي تم تلقيحها بتطوير الأجسام المضادة والتي تكانت متفاعلة في التألق المناعي غير المباشر مع الخلايا المصابة بفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 211ه8-قابلة للاستئصال. لا ترتبط الخلايا غير المصابة بواسطة أي أمصال تم اختبارها. لم تعرض الأمصال من مجموعة المقارنة السلبية من الفئران أي ارتباط محدد مع 5 الخلايا المصابة أو الخلايا غير المصابة. وتم إيراد ملخص البيانات في الجدول أدناه. الجدول رقم 3. نتائج القياس الطيفي بالتألق من اختبار التألق المناعي للأجسام المضادة لفيروس الهريس ألفا للخيول 1 المعالجة ‎hall axe‏ | الهوية في | التخفيف الخلايا الخلايا التجرية غير المصابة المصابة المجموعة 3 11 1 1: 50 سلبية سلبية (عينة مقارنة سلبية) ‎wal fl‏ ام ةا ‎١ ١‏ اد« الله الله 4 0 لله إل
Cen ‏أله‎ ea ST ‏المجموعة 2 1 1: 50 سلبية | موجبة‎ ‏مرغ‎ Ji)
Empty (vector
EE EE I
Ce ‏الله‎ oa ١!
EE ET I
EE ET 10 03) 00 ‏المجمعة 111 11 1: 50 سلبية | موجبة‎ ‏(فيروس‎ ‏الهريس ألفا‎ 1 لويخلل‎ ‏معاد الاتحاد‎ ‏الجيني‎ ‎RacH SE (B oa ml
EE 30000 ‏)3003ل‎ ‎ee ‏إسلية‎ sa] Mp4)
Ce ae » BL 1 EER re ‏موجبة‎ ‏موجبة‎ | Lule | 51 22 ‏مصل فيروس‎ ‏الحصان الهريس ألفا‎ 1 ‏للخيول‎
‎LL EEE‏ ‎rr te‏ اثنوية ‎or‏ ‏ا ‎Tw fa‏ — ا الماعز المضاد ل ‎Oy5‏ من |الحصان 24 1: 200 سلبية سلبية الماعز المضاد ل ومن هذا يمكن أن نستنج أن تطعيم فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني في فتحتي الأنف من الفئران ينتج عنه العدوى والانتساخ الفيروسي بحيث أن الأجهزة المناعية للفئران يتم تحفيزها لإنتاج الأجسام المضادة لفيروس الهريس ألفا للخيول 1. اختبارات التعادل للفيروس ‎(VNT) Virus neutralization tests‏ ولكي يتم توضيح حث المناعة الخاصة بالحماية في مضادة الجينات المتحولة التي تم التعبير عنها والتي تنتج إما من فيروس ‎A Bisel‏ (8/انفلونزا الخنازير/ إيطاليا// 7680/ 2001 ‎((H3N2)‏ أو (/انفلوننا الخنازير/ ‎((HIN1)2005 [132/Gent‏ فإن أمصال تلك الفئران تم اختبارها لغرض نشاط التعادل في مضادة الفيروسات ذات الصلة ( :2010 ‎Allwinn et al.‏ ‎(Trombetta et al. 2014‏ تم استخدام فيروس أنفلونزا ‎A‏ فيما يتعلق باختبارات التعادل التي تم 0 عزلها_من_الخنازير في ‎Wildl‏ عام 2014 وبصورة خاصة من م//نفلونزا الخنازير/ ‎(H3N2) 2014/AR452/ skal‏ ول/انفلونزا الخنازير/ ألمانيا/2014/8181181 ‎(HINT)‏ وحيث أن تلك الفيروسات عبارة عن سلالات غير متجانسة فإن مستهدفات اللقاح يتم اشتقاقها من أي تعادل خاص بالفيروسات المذكورة بواسطة أمصال الفئران ‎Ally‏ تكون موضحة لعملية الحث الواسعة والفعالة الخاصة بالمناعة الخاصة بالحماية بواسطة تلقيح فيروس الهررس ألفا للخيول 1 5. معاد الاتحاد الجيني. وكمصل عينة مقارنة سالب؛ تم استخدام المصل من الخنزير الذي تم عرضه بحيث يكون سالباً بالنسبة للأجسام المضادة لفيروس الأنفلونزا.
اختبارات تعادل فيروس أنفلونزا ‎tA‏
تمت حضانة ‎MDCK WA‏ الخاصة بالتعادل وأيضاً المعالجة العيارية الخلفية في أطباق بها 96
‎Lag‏ لمدة يومين عند 37 درجة ‎Liga‏ /75 من ثاني أكسيد الكريون قبل الاستخدام. يتم ذويان
‏مخزونات فيروس أنفلونزا ‎A‏ ذات الصلة من ‎3N2‏ و1118171 في الوسط الأساسي عند الحد
‏5 الأدنى المشتمل على جينتاميسين ‎Gentamycin‏ وبتركيز مزدوج من التريسين (الوسط ‎١‏ لأساسي عند
‎(trypsin ‏تريسين‎ X 2 [Genta ‏الحد الأدنى‎
‏كانت الأمصال التي تم اختبارها من مرات النزف النهائية من المجموعة 1 (فيروس الهربس ألفا
‏للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎((RacH SEB‏ المجموعة 2 (الناقل المفرخ) وعينة المقارنة الموجبة
‏(المصل من الخنزير المعالج باللقاح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ متعدد التكافؤ غير منشط 0 وعينة المقارنة السالبة.
‏تم تسخين الأمصال غير المنشطة في اثنين أو ثلاثة من الاختبارات المستقبلة على الترتيب وتم
‏التخفيف بصورة متسلسلة 1: 2 بدءاً من 1: 16 حتى 1: 4096. تم تخفيف فيروس أنفلونزا ‎A‏
‏إلى حوالي 100 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / تفاعل التعادل. تمت
‏حضانة تفاعلات التعادل لمدة 2 ساعة عند 37 درجة ‎gia‏ ول 75 من ثاني أكسيد الكريون. تم إجراء عملية معايرة عكسية للفيروس في أجزاء رباعية. تمت إزالة وسط النمو وتم غسل الخلايا
‎MDCK‏ باستخدام الوسط المشتمل على جنتاميسين والتريسين قبل إضافة تفاعلات التعادل إلى
‏تخفيف الفيروس من العيارات العكسية. تمت حضانة اختبارات التعادل للفيروس وأطباق القياس
‏عند 37 درجة مثوية؛ 75 من ثاني أكسيد الكريون لمدة 1 ساعة بعد إضافية تفاعل التعادل أو
‏التخفيفات الخاصة بالفيروس لخلايا ‎MDCK‏ على الترتيب. ‎deg‏ ذلك تتم إزالة اللقائح ‎ang‏ تراكب 0 الخلايا مع وسط جديد مشتمل على جنتاميسين والتريسين. خمسة أيام بداخل البريتون تمت مراقبة
‏التأثير الممرض ‎(CPE) cytopathic effect WA‏ وتم التوثيق. وبالفاعل فإن عيار الفيروس
‏المستخدم في الاختبار تم حسابه في شكل الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين
‏/مل طبقاً ل ‎Reed and Miinch‏ والتخفيفات عند الأمصال التي تم اختبارها وتم منع الحث الخاص
‏بفيروس الأنفلونزا بصورة نمطية من التأثير الممرض للخلايا الذي تم تقريره؛ انظر الجدول ‎Lad‏ ‏5 يلي.
‏الجدول 4 نتائج انفلونزا 1118181 اختبارات التعادل للفيروس
اختبارات التعادل | اختبارات التعادل | اختبارات التعادل ‎Hlav‏ سعة الل للفيروس 2# للفيروس 3# ‎wl‏ ‏ِ 2 الجرعة 1 الجرعة 6 الجرعة المعدية لمزرعة المعدية لمزرعة ‎J‏ ‏المعدية لمزرعة الاتحرا النسيج التي النسيج ‎EL‏ ‏نسيج 3 ‎a ّ dai - dak‏ ألمت ف ‎dl 7 =‏ صن ا ‎Za‏ صن ا ‎a‏ | المتو - 3 1 ياري زم خمسين | ‎Omer‏ / سطة ‎١‏ ‏خمسين / العين العين العين ‎PI‏ تخفية تخفية الفأر متعادل متعادل متعادل تبادلي تبادلي تبادلي فيروس | 32 467 | 128 9 32 9 562485 الهربس 2 6 2 31 ‎wl‏ ‏للخيول ‏1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SEB -‏ 1 فيروس ‎١‏ 16 233 | 64 204 سلبى 219 1 204 الهريس 6 8 2 ‎wl‏ ‏للخيول ‏1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SEB -‏ 2 فيروس | 32 467 | 128 409 | 16 289 | 388 الهريس 2 6 6 8 ‎wl‏ ‏للخيول
1 معاد الاتحاد الجيني
RacH
SEB - 3 فيروس | 128 186 | 512 163 | 64 155115 | 362 الهريس 88 84 84 |52 4 ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني
RacH
SEB - 4 فيروس | 32 467 | 256 819 | 16 5251289 | 269 الهريس 2 2 6 ]3 51 ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني
RacH
SEB - ‎SW‏ .| غير محدد | غير | سلبي غير | سلبي غير | غير ا غير ‎Jal‏ 4~ ] ] : ِِ : متاح متاح متاح | متاح | متاح الناقل غير محدد ‎١‏ غير سلبي غير سلبي غير | غير غير ‎Jal‏ 4~ ] ] : ِِ : 2 متاح متاح متاح | متاح | متاح الناقل غير محدد | غير | سلبي غير | سلبي غير | غير ا غير ‎Jal‏ 4~ ] ] : ٍ : 3 متاح متاح متاح | متاح | متاح الاق .| سلبي ‎el‏ سلبي غير | سلبي غير | غير | غير الفارخغ-
‎Jes] Jes] |‏ متاح إمتاج إمتاج ا ‎JH‏ | غير محدد | غير | سلبي غير | سلبي غير | غير | غير لقان متا متا متاح | متاح | متا ‎z z 5‏ ح | متاج | متاح ‎de‏ |32 غير | غير غير | غير غير | غير | غير الخنازير " متاح محدد متاح محدد متاح متاح متاح المقارنة إيجابي الجدول رقم 5: نتائج أنفلونزا ‎H3N2‏ اختبارات التعادل للفيروس اختبارات التعادل ‏ | اختبارات التعادل ‏ | اختبارات التعادل ‎H3N2‏ ‏للفيروس 1# للفيروس 2# للفيروس 3# 16 24 15 الجرعة الجرعة الجرعة المعدية المعدية المعدية قدرة لمزرعة لمزرعة لمزرعة التعادل : : : الاتحرا النسيج النسيج النسيج المتوسط ‎dad) IEEE Cl asad ]‏ ف التي التي التي 5 المعياري إلى إلى إلى > ِ 0 > ِ 0 > ِ 0 / العين / العين / العين التخفيف التخفيف التخفيف الفأر ‎١‏ التعادلى التعادلى التعادلى التبادلى التبادلى التبادلى فيروس |4096 | 65536 | 1024 | 24576 | 2048 | 30720 | 40277 | 22089 الهريس ألا
للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SE B‏ 1 فيروس |1024 | 51216384 | 12812288 1920 | 10197 |7455 الهريس ‎all‏ ‏للخيول ‏1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SE B‏ 2 فيروس |1024 51216384 | 12288 |256 |3840 | 10837 | 6397 الهريس ‎all‏ ‏للخيول ‏1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SE B‏ 3 فيروس 256 | 4096 |256 |6144 | 64 3733 |2611 ‎CTT‏
ألا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SEB‏ ‏4 ‏فيروس 256 4096 | 128 3072 | 64 2709 1599 الهريس ألا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH‏ ‎SEB‏ ‏5- ‏الناقل | سلبي ‏ اغير ‎le] ريغا يبلس ١‏ أغير ‏ اغير ‏ اغير الفارخ- متاح متاح ‎a‏ متاح 1 ‎١ ريغا يبلس | dw‏ سلبي ‏ اغير ‏ اسلبي ‏ أغير ‏ اغير ‏ اغير الفارغ - متاح متاح متاح ‎١‏ متاح متاح 2 ‎١ ريغا يبلس | dw‏ سلبي ‏ اغير ‏ اسلبي ‏ أغير ‏ اغير ‏ اغير الفارخ- متاح متاح متاح متاح متاح 3 ولكي تتم مقارنة النتائج الخاصة بالاختبارات المستقلة فإن قدرة التعادل قد تم حسابها بواسطة تنويع التخفيف المصلي التبادلي والعيار ذي الصلة والذي يعمل على تعادله. تم بعد ذلك تقسيم
متوسطات من ثلاث اختبارات بمقدار 100 لكي يتم انعكاس التعادل الخاص ب 100 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين (الجداول 3 و4 و5). تم تلخيص البيانات وتم التوضيح بصورة تخطيطيه في الشكل رقم 29. تم تطوير كل الفتران باستخدام فيروس الهربس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH SE B‏ وتم التعادل للأجسام المضادة في مقابل السلاسل غير المتجانسة من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الأنواع الفرعية من 113302 و1112111. وبالتالي فقد تم التحفيز لاثنين من المضاعفات بداخل الأنف من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 11ه8-قابلة للاستتصال التي تعبر عن الراصات الدموية من فيروس أنفلونزا هه من موضع الإدراج إطار القراءة المفتوح 70 في ظل التحكم في المعزز 0455 من (113) وبصورة متوازية من إطار القراءة المفتوح 3/1 من موضع الإدراج في ظل التحكم في 0 معزز 0430 ‎(Hlav)‏ ويتم التحفيز بصورة ناجحة للاستجابة المناعية في ‎‘BALB/c (hy‏ يمكن أن يتم استنتاج أن الناقل فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎ALE-RacH‏ ‏للاستئصال يمكن استخدامه للتعبير المتوازي مع اثنين من الجينات الانتقالي المختلفة لكي يتم حث الاستجابة المناعية بعد اللقاح بداخل الأنف. المثال رقم 10 5 إنشاء وتوضيح الخصائص في المعمل والاختبار في الكائن الحي لفيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 الذي تم نقله من لقاح فيروس شمالنبرج ‎A‏ للماشية وواحدة من الفيروسات البنياوية ‎bunyaviruses‏ الناشئة عبارة عن فيروس شمالنبرج» وفيروس المجموعة الفرعية المصلية من سيمبو ‎Simbu‏ الأوروبية الأولى (جنس الفيروسات البنياوية)؛ والتي يمكن أن تتسبب في التوقفات؛ والمواليد الميتة وتشوه الجنين الشديد ‎Lovie‏ تكون الحيوانات حوامل 0 - مصابة أثناء الطور الحرج من الحمل ‎Ally‏ يمكن استخدامها في شكل فيروس نموذجي لدراسة الفيروسات البنيوية السوية ‎et al.)‏ »لل 2012). وبسبب أن فيروسات سيمبو تتم من خلال النواقل الخاصة بالحشرات وخيارات المعالجة والتي تكون غير متاحة يكون التطعيم عبارة عن المكون الرئيسي الخاص بعينة المقارنة للمرض. وفي مضادة فيروس شمالنبرج وفيروسات سيمبو إضافية مثل فيروس أكابان ‎(AKAV) Akabane virus‏ أو فبروس أيونو ‎Aino virus‏ غير منشط من 5 لقاحات فيروسية كلية ‎Allg‏ تكون متاحة ولقاحات موهنة حية في مقابل فيروس شمالنبرج ‎A‏ والتي تم تطويرها ‎Wernike et al., 2013b)‏ ;2015 لة ‎«((Anonymous, 2013, 2015; Kraatz et‏ وعلى
الرغم من ذلك فليس هناك أي من تلك اللقاحات تسمح بالتمايز بين الحيوانات الملقحة والتي وصلت للإصابة من المجال (مبادئ ‎(DIVA‏ وحالياً هناك لقاحات مجموعة فرعية متوافقة من ‎DIVA‏ تعتمد على 234 حمض أميني ‎(aa)‏ من طرف الأمين من فيروس شمالنبرج م من البروتين السكري ‎Ge‏ الذي تم اختبارها في نموذج الاختبار الحيواني وفي الماشية ( ‎Wernike et‏ ‎cal 5‏ 2017). وعندما يتم التوصيل في بلازميدات التعبير أو كما تم التعبير في نظام مزرعة الخلية الثديية فإن نطاق ‎Ge‏ يمنح الحماية ‎lad‏ يصل لحوالي 766 من الحيوانات بينما تكون كل الحيوانات قد تم تحصينها باستخدام نطاق ‎Ge‏ من فيروس شمالنبرج المرتبطة مع النطاق المناظر من فيروس أكابان ذي الصلة والذي تمت حمايته بصورة كاملة ‎Sy .)2017 «.Wernike et al)‏ يتم فحص استخدام فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 80211-قابلة للاستتصال 0 في شكل لقاح ناقل في الماشية فإن هناك 234 من الطرف الأميني من ‎aa‏ من بروتين ‎Ge‏ ‏لفيروس شمالنبرج م قد تم إدراجها في موضع إدراج إطار القراءة المفتوح 70 (جزءٍ فريد قصير 4) وتم التعبير ‎die‏ تحت التحكم في معزز 8455 جديد 5 ‎TIPA‏ من إشارة بولي م وتم الاختبار
في تجرية تلقيح-اختبار في الماشية. إنشاء فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ناتج عودة الارتباط المعبر عن مولد الضد المشتق من فيروس
شمالنبرج ‎A‏ للبروتين السكري ‎(Ge)‏ ‏تم تحسين 234 من ‎gia‏ الحمض الأميني من منطقة التشفير من البروتين السكري ج ‎(Ge)‏ ‏لفيروس شمالنبرج لم من خلال الاستخدام للتعبير في فيروس الهربس ألفا للخيول 1 وتم التعديل بصورة إضافية لكي يتم تحقيق النقل الفعال الخاص بالإدراج في أغشية البلازما من الخلايا المصابة بالعدوى. ولتلك النتيجة فإن المتوالية المشفرة لببتيد الإشارة المشتقة من فيروس أنفلونزا ‎A‏ ‏0 من الراصة الدموية ونوعها الفرعي ‎JA) HIN2‏ انفلونزا الخنازير/ ‎[Wiad‏ 116114/ 2010 (1111)؛_رقم الوصول_ في بنك الجينات ‎(ADRO1746.1‏ وأيضاً وسيلة التثبيت عبر الغشاء ‎(TM) transmembrane anchor‏ والطرف السيتوبلازمي ‎(cytoplasmic C-terminus C=‏ تلك راصة دموية التي تم ربطها مع الطرف 3575" على الترتيب. بالإضافة إلى ذلك فإن الرابط ‎GS‏ ‏من ‎HMGGSGGGGSGGGGSGGGT‏ (لمتوالية بهوية رقم 30) قد تم إدراجه بين بروتين ‎Ge‏ ‏5 ونطاق راصة دموية - وسيلة التثبيت عبر الغشاء. تم تخليق الحمض النووي دي أوكسي رببوزي (المتوالية بهوية رقم 31) وتم الانتساخ الفرعي في مواضع ‎Notl/Kpnl‏ من 1770-455-711671م
وناقل نقل العدوى الخاصة بالإدراج لكاسيتات التعبير للجين الانتقالي في إطار القراءة المفتوح 70 (جزء فريد قصير 4) من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 بواسطة المعالجة بناتج عودة الارتباط الذي يتوسطه ‎RED‏ من كروموسوم صناعي بكتري 611ه12م-قابلة للاستئصال. تم قطع البلازميد الناتج ‎pU70-455-SBVGe_71K71‏ (الشكل رقم 30) باستخدام ‎Xbal‏ لكي يطلق 3056 زوج قاعدة من شظية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي (المتوالية بهوية رقم 32) والتي يتم تحويلها إلى إيشريشيا كولاي 05121 1783 التي تحمل 180611م-قابلة للاستتصال. متوالية بهوية رقم: 31: تشتمل متوالية الحمض النووي دي أوكسي رببوزي التي تم تخليقها على مواضع تقييد خاصة بالاستنساخ الفرعي ‎subcloning‏ ‎GCGGCCGCATGAAGGCGATCCTGGTTGTGCTGCTGTACACCTTTGCC 0‏ ‎ACCGCCAACGCCGATACGCTGATCAACTGCAAGAACATCCAGAGCACC‏ ‎CAGCTGACAATCGAGCACCTGAGCAAGTGCATGGCCTTCTACCAGAAC‏ ‎AAGACCAGCAGCCCCGTCGTGATCAACGAGATCATCTCCGACGCCAG‏ ‎CGTGGACGAACAGGAACTGATTAAGTCTCTGAACCTGAACTGCAACGT‏ ‎GATCGACCGGTTCATCAGCGAGTCCAGCGTGATCGAGACACAGGTGT 5‏ ‎ACTACGAGTATATCAAGAGCCAGCTGTGTCCACTGCAAGTGCACGATA‏ ‎TCTTCACCATCAACAGCGCCAGCAACATCCAGTGGAAGGCCCTGGCC‏ ‎CGCAGCTTTACCCTGGGCGTGTGCAACACCAACCCCCACAAGCACATC‏ ‎TGCCGGTGCCTGGAATCCATGCAGATGTGTACCAGCACCAAGACCGA‏ ‎CCACGCCAGAGAGATGAGCATCTACTACGACGGCCACCCCGACAGAT 20‏ ‎TCGAGCACGACATGAAGATTATCCTGAATATCATGCGGTACATCGTGC‏ ‎CCGGCCTGGGCAGAGTGCTGCTGGACCAGATCAAGCAGACCAAGGAC‏ ‎TACCAGGCCCTGAGACACATCCAGGGCAAGCTGAGCCCCAAGTCCCA‏ ‎GAGCAACCTGCAGCTGAAGGGCTTCCTGGAATTCGTGGACTTCATCCT‏ ‎GGGCGCCAACGTGACCATTGAGAAAACCCCCCAGACCCTGACCACCC 5‏ ‎TGAGCCTGATTCATATGGGAGGTTCCGGAGGTGGAGGTTCCGGAGGT‏
GGAGGTTCCGGAGGTGGCACCATACTGGCCATTTACAGCACAGTTGC
GAGCAGCCTGGTCCTGATCGTGAGCCTGGGTGCTATATCATTCTGGAT
GTGCAGCAACGGCTCTCTCCAGTGCCGCATCTGTATCTGAGGTACC
‏متوالية بهوية رقم: 132 شظية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي المستخدمة لعملية المعالجة‎ .pRacH-SE-70-455-SBVGc ‏بناتج عودة الارتباط لجيني من 2250 لكي يتم إنتاج‎ 5 ‏بواسطة‎ Restriction enzyme cleavage ‏الخاص بالتقييد‎ ayy) ‏تم توضيح مواضع انشطار‎ )*( chen
T*CTAGACTCGAGCGCAAGCCCTACACGCGCTACCCCTGCTTTCAACGCGTC
AACCTGCACATTGACGGGGAGTTTCTGGTTCACAAGATGCTAGCGTTCAATG
CCGCGATGCGCCCATCGGCCGAGGAGCTGCTGTCATACCCAATGTTTGCTCA 0
ACTTTAGGATGACTAACCTGTTTCTGGGAGGAGACAGCGTGGGCGACGGTG
TATAAAGTTGGTCTGCTTTCAAGCCCTGCCACTGCGCTACAGTGCCACCAAC
TGTAAAGCGGTAGTAAGCTGCAGTGGTCGACTGGTGGTAGCATATACTACC
TTATTTATACGCTCCGAGCTGTTTTTCAGCATGCTAGCACCCAACGCCGAGC
GAGAGTATATAACTCCCATCATTGCCCACAAGCTTATGCCACTTATTAGCGT 15
CCGCTCTGCCGTTTGCTTAGTCATAATATCTACCGCCGTTTACGCAGCAGAC
GCTATCTGCGACACAATTGGATTTGCGATACCGCGCATGTGGATGTGTATTT
TAATGAGATCAACCTCCATGAAGCGTAACTAGGGGGCCTCCCACTGAGGCA
CTACCGGCTTAGCAGCTGACTAACACAGTATAAAACGTGAGAAGAAATCAG
TCTCATGCGCCATTAGCGCTAGGCTAGTTAGCGTGGAGGACCGGAGCGCTA 0
CCGCCAGCAGTTTCATCCGCCTGGTTACGGGTTTGTTAACACCTACCGGTGT
TTTACCGCTACCATAGGATCCGATCCATGGGCGGCCGCATGAAGGCGATCC
TGGTTGTGCTGCTGTACACCTTTGCCACCGCCAACGCCGATACGCTGATCAA
CTGCAAGAACATCCAGAGCACCCAGCTGACAATCGAGCACCTGAGCAAGTG
CATGGCCTTCTACCAGAACAAGACCAGCAGCCCCGTCGTGATCAACGAGAT 5
CATCTCCGACGCCAGCGTGGACGAACAGGAACTGATTAAGTCTCTGAACCT
GAACTGCAACGTGATCGACCGGTTCATCAGCGAGTCCAGCGTGATCGAGAC
ACAGGTGTACTACGAGTATATCAAGAGCCAGCTGTGTCCACTGCAAGTGCA
CGATATCTTCACCATCAACAGCGCCAGCAACATCCAGTGGAAGGCCCTGGC
CCGCAGCTTTACCCTGGGCGTGTGCAACACCAACCCCCACAAGCACATCTG 0
CCGGTGCCTGGAATCCATGCAGATGTGTACCAGCACCAAGACCGACCACGC
CAGAGAGATGAGCATCTACTACGACGGCCACCCCGACAGATTCGAGCACGA
CATGAAGATTATCCTGAATATCATGCGGTACATCGTGCCCGGCCTGGGCAG
AGTGCTGCTGGACCAGATCAAGCAGACCAAGGACTACCAGGCCCTGAGACA
CATCCAGGGCAAGCTGAGCCCCAAGTCCCAGAGCAACCTGCAGCTGAAGGG 5
CTTCCTGGAATTCGTGGACTTCATCCTGGGCGCCAACGTGACCATTGAGAAA
ACCCCCCAGACCCTGACCACCCTGAGCCTGATTCATATGGGAGGTTCCGGA
GGTGGAGGTTCCGGAGGTGGAGGTTCCGGAGGTGGCACCATACTGGCCATT
TACAGCACAGTTGCGAGCAGCCTGGTCCTGATCGTGAGCCTGGGTGCTATAT
CATTCTGGATGTGCAGCAACGGCTCTCTCCAGTGCCGCATCTGTATCTGAGG
TACCAATAAACGCGGTATGTCTACCTTCAAGCCTATGATGAACGGATGTTTG
GTGTTTGCGGCTATTATAACGCTCTTGAGTTTTATGCTATCTCTGGGAACAT
GCGAAAATTACAGGCGTGTGGTTCGGGATCCTAGGGATAACAGGGTAATCG
ATTTATTCAACAAAGCCACGTTGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCA 5
CAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAAC
AGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCTTGCTCG
AGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGG
GCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGATTGTATGGG
AAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCC 10
AATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATG
CCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACT
CACCACTGCGATCCCCGGGAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCC
TGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTG
CATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCT 15
CGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTT
GATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCAT
AAGCTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACT
TGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGA
CGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGC 20
CTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTA
TTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTT
TTTCTAAAATAAACGCGGTATGTCTACCTTCAAGCCTATGATGAACGGATGT
TTGGTGTTTGCGGCTATTATAACGCTCTTGAGTTTTATGCTATCTCTGGGAAC
ATGCGAAAATTACAGGCGTGTGGTTCGGGATCCGACCCTGTTGGTGGGTGC 25
GGTTGGACTCAGAATCTTGGCGCAGGCATGGAAGTTTGTCGGTGACGAAAC
ATACGACACCATCCGCGCAGAAGCAAAGAATTTAGAGACCCACGTACCCTC
AAGTGCTGCAGAGTCGT*CTAGA ‏الارتباط‎ sage ‏ناتج‎ pRacH-SE-70-455-SBV Gc. ‏تم تحضير الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي‎ ‏وتم التحقق من الإدراج الصحيح من كاسيت التعبير وكيان المتوالية بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز‎ 0 ‏من منتجات تفاعل سلسلة بوليمراز.‎ Sanger ‏وتتالي‎ HerculaseTM ‏عال الدقة باستخدام منتجات‎ .37 ‏للبادئات المستخدمة انظر الجدول 6» المتوالية بهوية رقم: 3 إلى المتوالية بهوية:‎ ‏الجدول 6 البادئات المستخدمة لتفاعل سلسلة بوليمراز والتوالى‎ 7 pr 5
بهوية رقم : ‎CGTGCGCGGATACAT‏ التوالي ‎‘3CG- 33‏ توالية ‎_e‏ ‎Se‏ > تفاعل سلسلة بوليمراز & ‎CGCTTCGCAGGTGGG | up71_R | : 5, 4,‏ ‎me‏ : التوالي ‎3C- 34‏ متوالية 5 ‎Nn seq455-‏ بهوية رقم : | 51ح ‎GACTGGTGGTAGCAT‏ التتالي ‎‘3ATAC- 35‏ بروتين متوالية ‎Ge‏ 5 بهوية رقم : | فيروس | ‎GATCAACGAGATCAT‏ | التتالي 36 شمالنبرج ‎3CTCC-‏ ‎F1 A‏ بروتين متوالية ‎Ge‏ 5 بهوية رقم + افيروس | ‎CTGGAGAGAGCCGTT‏ التتالي 37 شمالنبرج | ‎3GC-‏ ‎R1 A‏ إنقاذ وتوضحي خصائص فيروس الهريس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE-70-455-SBVGe‏ ناتج عودة الارتباط تم تحضير الحمض النووي دي أوكسي ردبوزي لكروموسوم صناعي بكتري من أربعة نسائل مختلفة من ‎.pRacH-SE-70-455-SBVGe‏ تم بذر ‎AEST WIA‏ (خط ‎WIA‏ الخصية للخنازير الخاص بستعطاءعم1-<هعمتته80) في أطباق بها 6 ‎«Corning Incorporated — Life Sciences) (ge‏ ‎Becton Circle‏ عدم ‎NC «Durham‏ 27712 الولايات المتحدة الأمريكية؛ ‎REF‏ 353046( وذلك بكثافة من 10 5 خلية/العين في وسط الوسط الأساسي عند الحد الأدنى ) ‎Sigma-Aldrich‏ ‎(Chemie GmbH, Munich, Germany, SAFC62892-1000M3056‏ الذي يشتمل على 710 من المصل ‎mall‏ الجنيني ) ‎Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Munich, Germany, SAFC, Cat‏ 0 ل(120030-1000). عندما كانت الخلايا بها من 770-60 من التلافيف؛ ‎Bale‏ في اليوم التالي؛
فإنه يتم نقلها مع 2 ميكرو جرام من الحمض النووي دي أوكسي رببوزي لكروموسوم صناعي بكتري باستخدام طقم نقل العدوى ‎MirusTM‏ الحمض النووي الريبوزي الرسول ( ‎Mirus Bio LLC,‏ ‎Science Drive, Madison, WI 53711 USA‏ 545( طبقاً للتعليمات بواسطة المورد. وبصورة مختصرة؛ تمت إضافة وسط 200 ميكرو لتر من ‎(Thermo Fisher Scientific) OptimemTM‏ إلى أنابيب بولييستيرين ‎polystyrene‏ 5 مل. تمت إضافة الحمض النووي دي أوكسي رببوزي وتم الخلط. ويعد إضافية 3 ميكرو لتر من كاشف تفاعل ‎Boost‏ والخلط بصورة دوامية يلي ذلك إضافية نفس الحجم من كاشف تقل العدوى ‎Transfection reagent‏ والحصول على ‎LIAN‏ بواسطة التدويم. تمت حضانة الخلائط لمدة 3 دقائق عند درجة حرارة الغرفة وتم الإنقاص بصورة مباشر في مزارع الخلية. تمت حضانة ‎WAY‏ عند 37 درجة مثوية/ 75 من ثاني أكسيد الكربون لمدة 5 0 أيام. تم غسل الخلايا في الوسط وتم التجميع لغرض التخزين عند -80 درجة مئوية. تم تحضير تخفيفات متسلسلة من 1: 10 من الفيروسات التي تم إنقاذها في ‎MEM‏ وتم وضعها في أطباق على طبقات أحادية الخلية من 8157 الملتفة في أطباق بها 6 عيون. وبعد الامتزاز لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية/ 75 من ثاني أكسيد الكربون تمت إزالة اللقائح وتم وضع الخلايا على وسط شبه صلب يشتمل على 70.5 من ميثوسيل (ميثيل سيليلوز من ‎(Ph.Eur., Fluka 64632-500G‏ 5 و75 من مصل بقري جنيني (1+0814-ميثوسيل). وبعد الحضانة عند 37 درجة مئوية/ 75 من ثاني أكسيد الكريون لمدة اثنين إلى ثلاثة أيام (المسار 1) تم وضع اللوحات الفردية في شكل منفصل من اللوحات المجاورة ما أمكن وتم الشفط في حجم من 10 ميكرو لتر وتمت التلقيح في مزارع 81-57 الجديدة في أطباق بها 6 عيون. تمت حضانة الخلايا التي تم تلقيحها لاثنين إلى ثلاثة أيام حتى ملاحظة التأثير الممرض للخلايا فائق (المسار 2). تم غسل الخلايا في الوسط وتم 0 التجميع لغرض التخزين عند -580 درجة مثوية. تم تكرار هذا الإجراء من التنقية باللويحات مرتين. تمت إصابة خلايا ‎ALST‏ باستخدام ثلاثة من اللويحات من الفيروسات التي تمت تنقيتها وتمت
المعالجة ‎Lad‏ يتعلق باختبار التألق المناعي غير المباشر أو تبقيع وسترن» على الترتيب. تم تحضير الحمض النووي دي أوكسي ‎(Shon)‏ الفيروسي من الخلايا المصابة وتم استخدامه في شكل قالب خاص بتفاعل سلسلة بوليمراز عال الدقة الذي يستخدم 116001846111 تم تحليل 5 منتجات تفاعل سلسلة ‎Shade‏ التي تم الحصول عليها بواسطة تتالي ‎Sanger‏ وياستخدام الهوية
الخاصة بمنطقة الإدراج مع التثبت من المتوالية النظرية الخاصة بالمتوالية من منتج تفاعل سلسلة بوليمراز مناظر من كروموسوم صناعي بكتري. اخبار التألق المناعي غير المباشر تمت إصابة خلايا 81-51 في أطباق بها 24 ‎«Corning Incorporated — Life Sciences) Lue‏ ‎REF 353047 «NC 27712 «Durham «One Becton Circle 5‏ :5نا)_باستخدام فيروس منقى باللويحات ثلاثة مرات وبصورة متسلسلة في ‎MEM‏ تم شفط وسط ‎sal‏ من الخلايا وتم وضع الخلايا مع 250 ميكرو لتر من الفيروس المخفف (التخفيفات من 10 -2 إلى 10 -7). تمت حضانة الخلايا لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية / ثاني أكسيد الكريون لغرض امتزاز الفيروس ويعد ذلك تمت ‎Ally]‏ اللقائح وتم وضع الخلايا مع 100 ميكرو لتر من ‎MEM‏ -ميثوسيل /العين 0 وتمت الحضانة عند 37 درجة ‎[Agia‏ 75 من ثاني أكسيد الكربون لمدة يومين. عندما تتم ملاحظة تشكيل اللويحات عن طريق الميكروسكوب؛ تتم معالجة الخلايا للتألق المناعي غير المباشر. يتم شفط الوسط وبتم غسل الخلايا مرة واحدة باستخدام 1 مل من محلول ملحي منظم بالفوسفات ‎REF 14190-136 (x1)DPBS + Gibco Life Technologies, Paisley PA49RF, UK)‏ ( /الخلية. تمت إزالة محلول ملحي منظم بالفوسفات وتم تثبيت الخلايا بواسطة إضافة 1 مل/ العين من -20 درجة مثوية من الإيثاتول البارد ( ‎Carl Roth GmbH, Schoemperlenstr. 3-5, D-76185‏ ‎(Karlsruhe, Art.
Nr. 5054.1‏ وتمت الحضانة لمدة 30 دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. تم شفط الإيثانول وتم تجفيف الخلايا بالهواء. وبعد المعالجة ‎coldly‏ تمت إضافة الخلايا باستخدام 1 ‎[da‏ ‏العين من محلول ملحي منظم بالفوسفات لمدة 10 دقائق عند درجة حرارة الغرفة وتم تخفيف الأجسام المضادة الأولية في محلول ملحي منظم بالفوسفات (150 ميكرو_لتر/ العين) وتمت 0 الحضانة لمدة 1 ساعة عند درجة حرارة الغرفة. تمت إزالة الأجسام المضادة الأولية وتم غسل الخلايا ثلاث مرات لمدة 2 دقيقة باستخدام 1 مل من محلول ملحي منظم بالفوسفات /العين قبل إضافة تخفيفات الجسم المضاد الثانوي )150 ميكرو لتر/ العين). ‎dang‏ الحضانة لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة التي تمت حمايتها من الضوء فقد تمت إزالة التخفيفات من الجسم المضاد الثانوي وتم غسل الخلايا ثلاثة مرات لمدة 2 دقيقة باستخدام 1 مل من محلول ملحي منظم 5 بالفوسفات / العين وتم تراكبها في النهاية باستخدام 500 ميكرو لتر من محلول ملحي منظم
بالفوسفات / العين فيما يتعلق بالفحص بواسطة القياس الطيفي بالتألق. تم توضيح الأجسام المضادة المستخدمة في الجدول رقم 7. الجدول رقم 7: مضاد مصل مناعي فائق من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 من | 10: 400 الخيول ) ‎Boehringer Ingelheim Veterinary Research Centre‏ ‎(proprietary‏ ‏الجسم المضاد أحادي النسيلة لبروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎A‏ 1: 50 ‎2015a) «(Wernike et al.‏ ‎FITC‏ مترافق مع الجلوبيولين المناعي جاما مضاد للفئران مأخوذ | 10: 200 من الماعز ‎Jackson Immuno Research‏ كتالوج رقم 115- 003-095. ‎Cy™‏ كمترافق مع الجلوبيولين المناعي جاما مضاد للخيول مأخوذ | 10: 200 من الماعز ‎Jackson Immuno Research‏ كتالوج رقم 108- 003-175 تبقيع ويسترن 1. العدوى: تمت إصابة ثلاثة عيون من الطبقات الأحادية من ‎WA‏ 81-57 في أطباق بها 6 عيون عند ‎LOM‏ من تقريباً 1 مع اثنين من نواتج عزل اللوحات المختلفة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎P6 ( RacH-SE-455-SBVGc‏ #121.131 و ‎P6‏ #121.232( ونتيجة عزل اللوحة من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 09 ‎RacH-SE1212‏ ‎Al)‏ تم ‎IE]‏ من كروموسوم صناعي بكتري ‎pRacH-SEL2‏ المفرغ الأصلي من خلال 0 الإضافية المباشرة ل 50 ميكرو لتر و10 ميكرو لتر على الترتيب من كتل الفيروس التي تمت إذابتها بالنسبة لوسط النمو. تم ترك ثلاثة من العيون لم يتم نقل العدوى لها. تمت حضانة الخلايا المصابة والخلايا غير المصابة لمدة يومين ويعد ذلك تمت معالجتها بتبقيع ويسترن. 2. مستحضر نواتج التحلل تم تحضير المحلول المنظم ‎buffer‏ لاختبار الترسيب المناعي اللاسلكي ‎(Radio Immunoprecipitation Assay (RIPA‏ المزود بمجموعة مثبط بروتياز ‎protease‏
‎(PI) inhibitor‏ (اختبار الترسيب المناعي اللاسلكي+ مثبط بروتياز) كما يلي: تمت إضافة 0.7 مل من 10 ‎X‏ من المحلول المنظم اختبار الترسيب المناعي اللاسلكي من ‎Millipore Cat#20-‏ 8 إلى 6.3 مل من ‎Fisher Scientific Cat# BP2470-1 5 <H20‏ و1 قرص تم إكماله بمجموعة مثبط بروتياز ‎11Roche cat#) TM Mini‏ 836 153 001) في 7 مل من المحلول المنظم من ‎XT 5‏ اختبار الترسيب المناعي اللاسلكي. تم كشط ‎lie‏ المقارنة غير المصابة في الوسط والمعلقات من ثلاثة عيون انتساخية والتي تم تجميها في 15 مل من أنابيب الطرد المركزي وتم وضعها على الثلج. تم غسل الخلايا المصابة في الوسط والمعلقات من ثلاثة عيون متكررة والتي تم تجميها في 15 مل من أنابيب الطرد المركزي وتم وضعها على الثلج. تم ترسيب الخلايا بواسطة الطرد المركزي عند 1000 العجلة 0 عند 4 لمدة 5 دقائق. تم سفط المواد الطافية بحرص وتم إعادة تعليق حبيبات الخلية في 300 ميكرو لتر وتمت إصابة الخلايا في 150 ميكرو لتر.). تمت حضانة المعلقات على الثلج لمدة 0 دقيقة وتم وضعها في وسيلة تدوير دوامي كل 10 دقائق. تم نقل المعلقات إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 مل وتم ترسيب المادة غير المتحللة بواسطة الطرد المركزي عند 15000 لفة في ‎dada)‏ عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق في وسيلة طرد مركزي دقيقة. تم نقل المواد الطافية الواضحة إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 وتم التخزين عند -80 درجة مئوية حتى الاستخدام. ‎SDS-PAGE .3‏ والناقل على أغشية من النيلون: المواد: مواد هلامية من نوع ‎BioRad Criterion‏ ‎«TGX Stain Free Precast Gels‏ و720-4 و أطباق بها 24 عينا برقم كتالوج ‎¢Cat#_567-8095‏ ‏وطقم ‎Rad Precision Plus Dual Colour Marker‏ مضل ‎Cat#161-0374; Bio Rad Precision‏ ‎Midi «Cat# 161-0373; Bio Rad Trans Blot Turbo transfer kit «Plus All Blue Marker 0‏ ‎x Laemmli Sample Buffer (Cat no. 161-0747) (Bio 4; Bio Rad 4159-170format Cat#‏ ‎Laboratories GmbH‏ فال 164 ‎(D-80939 Miinchen ¢Heidemannstrasse‏ ومحلول التشغيل المنظم ‎Running buffer‏ من تي جي اس ‎«(Sambrook et al) TGS‏ مع محلول الإعاقة 1: 75 من مصل بقري جنيني في محلول ملحي منظم بالفوسفات 1 ‎¢(.Sambrook ct al)‏ محلول ملحي 5 منظم بالفوسفات 1.
تم تحضير العينات بدون إضافة عامل اختزال. تمت إذابة العينات على الثلج وتم الخلط مع 1
حجم من ‎X4‏ من محلول منظم من ‎Limmli‏ وتم الغليان لمدة 60 دقائق عند 96 درجة مئوية وتم
الحفظ عند درجة حرارة الغرفة وتم التحميل على الهلام. تم تشغيل الهلام لمدة 30 دقيقة وعند 230
مل أمبير ‎dang‏ ذلك تم تجميعه لغرض ناقل الإليكترون باستخدام نظام ‎BioRad Trans Blot‏
10:00. تم ضبط عملية النقل عند 2.5 أمبير و25 فولت لمدة 10 دقائق وتم غسل الأغشية في
ماء مقطر وتمت الحضانة مع 5 مل من محلول الإعاقة 75 من مصل بقري جنيني في محلول
ملحي منظم بالفوسفات 1 لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مثئوية.
حضاتة الجسم المضاد والاكتشاف
«Bio Rad Laboratories GmbH) ‏من‎ Immun-Star WesternC Chemiluminecent pila ‏المواد:‎ ‎Cat#170-5070 ‏كتالوج رقم‎ (D-80939 Miinchen ¢Heidemannstrasse 164 0
الأجسام المضادة الأولية:
أ: الجسم المضاد أحادي النسيلة المحدد ببروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎(Wenike et al.) A‏
2015a) 1: 20
ب: الجسم المضاد أحادي النسيلة الفأري 81207 لفيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎(Boehringer Ingelheim proprietary) II 5‏
الجسم المضاد الثانوي: مضاد من الفتران والماعز المترافق مع بيروكسيداز ) ‎Jackson Immune‏
.5000 :1 ‏من‎ «(Research #115-035-146
تم إجراء كل عمليات الحضانة بحجم كافي تحت التقليب الثابت. تم تخفيف الأجسام المضادة في
5 من مصل بقري جنيني /تي بي اس تي ‎TBST‏ تمت حضانة الأجسام الأولية طوال الليل عند 0 4 درجة مئوية. تمت إزالة محلول الجسم المضاد وتم غسل البقع ثلاث مرات باستخدام ‎TBST‏ لمدة
10-5 دقائق. تمت حضانة الجسم المضاد المخفف مع التبقيع لمحددة 1 ساعة عند درجة حرارة
الغرفة؛ وتمت الإزالة والتبقيع والغسل ثلاث مرات باستخدام ‎TBST‏ لمدة 10-5 دقائق. تم وضع
البقع على وسيلة الحماية من اثرقاقة البلاستيكية ‎plastic sheet protector‏ الواضحة. تم خلط
محاليل البيروكسيد ‎Peroxide‏ وليومينو ‎Lumino‏ / المحسن مع 1 مل+1 مل (2 مل من لإجمالي 5 لكل بقعة) مع أنبوب صغير على البقع وتمت الحضانة لمدة 3 إلى 5 دقائق. ويعد ذلك يتم وضع
«ChemiDocXRS (Bio Rad Laboratories GmbH ‏الأغشية في نظام تصوير‎
‎(D-80939 Miinchen <Heidemannstrasse 164‏ وتم تسجيل الإشارات باستخدام برنامج ‎Image‏ ‎.Lab software‏ عيارات الفيروس
‎One Becton «Corning Incorporated — Life Sciences) Lue 96 ‏تم بذر الخلايا في أطباق بها‎
‎«NC 27712 «Durham «Circle 5‏ الولايات المتحدة الأمريكية؛ آر إيه اف ‎REF‏ 353072( عند 2
‎x‏ 0 4 خلية/ العين في ‎MEM‏ مزوج ب 710 من مصل بقري جنيني لمدة يوم واحد قبل العدوى.
‏تمت إذابة مخزونات الفيروس بصورة سريعة وتم وضعها على الثلج. تم تحضير عشرة من
‏التخفيفات المتسلسلة 1: 10 في ‎MEM‏ في 1.2 مل من الحجم لكل تخفيف. تمت إضافة 100
‏ميكرو لتر/العين من التخفيفات الفيروسية إلى الخلاياء وكانت هناك 8 عيون في كل صف رأسي
‏0 الكل تخفيف. تم استخدام الصفوف الرأسية 11 و12 من كل طبق في شكل عينة تحكم في الوسط
‏من خلال إضافة 100 ميكرو لتر/ العين من ‎MEM‏ تم إجراء عمليات المعايرة في ثلاثيات وتمت
‏حضانة العيون لمدة 5 أيام عند 37 درجة ‎[Asie‏ 75 من ‎SB‏ أكسيد الكريون. تم فحص مزارعة الخلية بصورة ميكروسكوبية وتمت ملاحظة العيون التي يتم منها استخلاص فيروس الهرس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ وبصورة نمطية التأثير الممرض للخلايا. تم حساب العيارات في شكل الجرعة
‏5 المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين /الملي طبقاً للطريقة الخاصة ب ‎Reed and Muench‏
‏(1938). ‏توضيح خصائص فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ناتج عودة الارتباط المستخدم للتلقيح
‏تم توضيح التعبير الخاص ببروتين ‎Ge‏ فيروس شمالنبرج ‎A‏ 234 المعدلة في الخلايا بواسطة تبقيع
‏ويسترن واختبار التألق المناعي المزدوج وذلك لعملية العزل باللوحة من فيروس الهريس ألفا للخيول
‏0 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-455-SBVGce‏ 121.232 يقوم اختبار التألق المناعي
‏المزدوج مع مضاد المصل من فيروس الهربس ألفا للخيول والجسم المضاد لفيروس شمالنبرج ‎A‏
‏أحادي النسيلة بالتثبت من التعبير عن الجين الانتقالي في 7100 ‎Li‏ من ‎WAY‏ المصابة
‏بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني. عندما يتم إجراء إصابة اختبار التألق المناعي
‏المزدوج من الخلايا باستخدام فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-‏
‎455-SBVGe_ 5‏ 121.232( فإن الخلايا الموجبة من مولد الضد فيروس الهربس ألفا للخيول 1 تم
‏تبقيعها باستخدام مضاد مصل فيروس الهربس ألفا للخيول (أرجواني) من الخيول المرتبط مع
الجسم المضاد أحادي النسيلة بالنسبة لبروتين ‎Ge‏ فيروس شمالنبرج ‎WA‏ تم ‎shal‏ عملية تبقيعات ويسترن تحت ظروف غير اختزالية مع التثبت من التعبير الخاص ببروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالتبرج ‎A‏ 234 المعدل في الخلايا والمصابة بفيروس الهربس ‎Wl‏ للخيول 1 ‎RacH-SE-70-455-‏ ‎dal SBVGe‏ عودة الارتباط. تم إجراء تبقيعات ويسترن لنواتج التحلل من الخلايا المصابة والغير مصابة التي تم جسها باستخدام الجسم المضاد أحادي النسيلة لبروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج 8 أو الجسم المضاد أحادي النسيلة لفيروس الهربس ألفا للخيول 1 البروتين السكري ‎JIT‏ وعلى الرغم من أن فيروس الهربس ‎Wl‏ للخيول 1 البروتين السكري 17 تم التعبير ‎die‏ في لك الخلايا المصابة فإن بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج م تم التعبير عنه فقط في ‎LAY‏ المصابة بفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-455-SBVGe‏ وليس في الخلايا المصابة باستخدام 0 الناقل المفرغ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 80211-521212. لم يتم اكتشاف أي بروتين فيروسي في نواتج التحلل من الخلايا المصابة بشكل زائف. تم التثبت من الحضانة الخاصة بالبقع المتوازية مع الجسم المضاد أحادي النسيلة في مقابل البروتين السكري ]1 من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 مع استعادة إطار القراءة المفتوح 71 ‎gia)‏ فربد قصير 5) بواسطة إجراء الاستبعاد الذاتي أثناء عملية الإنقاذ من الفيروس ناتج عودة الارتباط بعد نقل العدوى. تتم 5 زيادة مخزون فيروس ‎TP‏ من ثلاث لويحات تمت تنقيتها من نواتج الانتساخ فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-455-SBVGe_121.232‏ بالنسبة للعيار ‎Ball Je‏ من ‎X1.85‏ و10 9 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين /الملي في خلايا ‎ALST‏ والتي توضح انتساخ فيروس الهريس ألفا للخيول خاص بالإعاقة في سلالة الخلية المذكورة. هناك متوسط من ست عيارات من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎dejall Jie RacH-SE-70-455-SBVGe_121.232 0‏ المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / مل نتج عنها 1.85 ‎X‏ 10 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين / الملي مع الاتحراف العياري من 1.28 ‎x‏ 210 الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين /الملي.
الحيوانات والتصميم ‎ail)‏ ‏5 تتم تلقيح عدد من 4 ماشية من السلالات المحلية الألمانية مرتين على حدة كل ثلاثة أسابيع باستخدام 108 الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين فيروس الهريس ألفا للخيول
معاد الاتحاد الجيني-بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎A‏ مع 4 ماشية إضافية تم الحفاظ عليها بدون تلقيح كعينات مقارنة. ويعد ثلاثة أسابيع من التحصين الثاني فإن كل الحيوانات يتم تلقيحها تحت الجلد باستخدام 2 0.5% مل من السلالة المحلية من فيروس شمالنبرج ‎A‏ والتي تم تمريرها منفردة في الماشية ‎«.Wernike et al)‏ 2012). وخلال كامل الدراسة»؛ يتم قياس درجة حرارة الجسم وخصوصاً عند المستقيم وذلك للفصح عن العلامات الإكلينيكية بواسطة الأطباء البيطريين. تم أخذ الأمصال بشكل أسبوعي وتم التحليل بواسطة اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم معتمدة على 17 متاحة بشكل تجاري (تزاحم فيروس شمالتبرج ‎Schmallenberg virus Competition‏ 10 ‎ID vet «Screen®‏ فرنسا) وعن طريق الاختبار بالتعادل الدقيق في مقابل 11/501311 المعزول من فيروس شمالتبرج ‎A‏ بصورة سابقة ‎.(Wernike et al,2013a)‏ تم إجراء التقييم بواسطة التقييم 0 الخاص بالتأثير الممرض بعد 3 أيام؛ وتم اختبار كل العينات في رباعيات وتم حساب عيارات الجسم المضاد في شكل ‎50ND‏ طبقاً ل ‎.Kaerber y Behrens‏ تم أخذ الأمصال عند أيام من العدوى الخاصة بالتغيير وعند نهاية الدراسة على الترتيب والتي تم تحليلها بصورة إضافية بواسطة اختبارات التعادل الدقيقة في مقابل سلالة فيروس ‎(uel‏ ألفا للخيول من ‎RacH‏ (المجموعة فيروس الهريس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎A‏ والحيوانات من 5 عينة المقارنة غير الملقحة). وأثناء العشرة أيام الأولى بعد التغيير من عينات الدم الخاصة بالعدوى تم التجميع بصورة إضافية على أساس يومي. ومن تلك العينات؛ فإن الحمض النووي الريبوزي الفيروسي تم استخلاصه باستخدام ‎(Thermo Scientific, Braunschweig, Germany) King Fisher 96 Flex‏ في توليفة مع طقم 1148 ‎(Qiagen, Hilden, Germany)MagAttract Virus Mini‏ طبقاً لتعليمات التصنيع 0 والاختبارات بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز-للانتساخ العكسي في الزمن الفعلي المعتمد على جزء ‎.(Bilk et al, 2012) 5‏ تمت مراجعة البروتوكول التجريبي بواسطة أخلاقيات الحالة المسؤولة من خلال السلطة المختصة ‎Safety and Fisheries of Mecklenburg-Vorpommern«State Office for Agriculture)‏ 000 ‎(ref.
LALLF M-VTSD/7221.3-1.1-004/12 «Germany ¢Rostock‏ . 5 الملاحظة الكيميائية واكتشاف الحمض النووي الرببوزي الفيروسي.
لم تظهر أي من الحيوانات أي علامات إكلينيكية خاصة بفيروس شمالنبرج م -أثناء كامل الدراسة وتم الحفاظ على درجة حرارة الجسم في المدى الطبيعي لكل الحيوانات عند القياس بداخل المستقيم. وبداية من السوم واحد إلى اليوم الثاني عدوى الاختبار؛ تم اكتشاف الحمض النووي الريبوزي الفيروسي في عينات المصل من كل حيوان من عينة المقارنة غير المخصب وذلك لمدة أربعة أيام متتالية. أظهرت كل من الحيوانات من مجموعة فيروس الهريس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج م تركيزات الحمض النووي الريبوزي الفروسية المنخفضة بواسطة تفاعل سلسلة ‎Shades‏ -للانتساخ العكسي الكمي (الشكل رقم 31) خلال فترة أخذ العينة بكاملها. تم اختبار اثنين من الحيوانات من مجموعة فيروس الهريس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎A‏ أنها سلبية بالكامل بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز -للانتساخ 0 العكسي الكمي ‎Jal)‏ رقم 31ا) خلال فترة أخذ العينات الكاملة. وفي الاثنين من الحيوانات باستخدام فيروس الهربس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج ‎A‏ فإن ‎asia‏ فيروس شمالنبرج م تم اكتشافه عند مستويات منخفضة من ثلاثة أو من خمسة ‎abl‏ على الترتيب. استجابة الجسم المضاد 5 في حيوانات مجموعة المقارنة التي لم تتم معالجتها باللقاح؛ لم يتم اكتشاف أجسام مضادة محددة فيروس شمالنبرج م بواسطة اختبار تعادل المصل قبل عدوى الاختبار. ومن أسبوع إلى أسبوعين بعد العدوى فصاعداً فإن العيارات العالية من الأجسام المضادة الخاصة بالتعادل يتم اكتشافها في كل الحيوانات التي لم يتم تلقيحها (الشكل رقم 31ب). ‎leg‏ النقيض من مجموعة ‎die‏ المقارنة غير المعالجة ‎lL‏ فإن الأجسام المضادة المتعادلة 0 الخاصة بفيروس شمالنبرج م تكون قابلة للاكتشاف عند اليوم الخاص بالوظيفية التي تم اختبارها في اثنين من أربعة من الماشية التي تم تحصينها مع فيروس الهربس ألفا للخيول معاد الاتحاد الجيني- بروتين ‎Ge‏ لفيروس شمالنبرج م. في الاثنين من الحيوانات المتبقية من تلك المجموعة لا يكون هناك أي أجسام مضادة متعادلة خاصة بفيروس شمالنبرج م قد تم اكتشافها قبل العدوى الخاصة بالاختبار ولكن من اثنين من الأسابيع بعد العدوى مع الأجسام المضادة المتعادلة التي 5 تتكون موجودة (الشكل رقم 31ب). كانت عيارات الأجسام المضادة المتعادلة الخاصة بفيروس شمالنبرج م في الأربعة حيوانات التي تم تلقيحها أقل من مجموعة المقارنة للاختبار والتي توضح
انتساخ فيروسي فعال أقل من فيروس الاختبار وبالتالي فإنها تدعم ‎lily‏ تفاعل سلسلة بوليمراز - للانتساخ العكسي الكمية. اخْتبارٌ تعادل فيروس الهربس ألفا للخيول تم تحضير تخفيفات تصل إلى الضعفين من الأمصال في الوسط الأساسي عند الحد الأدنى بدءاً 5 .من 1: 5. تمت حضانة خمسين ميكرو لتر من الوسط الأساسي عند الحد الأدنى المشتمل على 100 101050 من 587 و 50 ميكرو لتر من الأمصال الخفيفة في أطباق مزرعة خلية سعة 96 عيئاً لمدة ساعتين. ويعد ذلك؛ تمت إضافة 100 ميكرو لتر من المعلق المحضر حديثاً م خلايا بي اتش كي ‎BHK‏ ( في الوسط الأساسي عند الحد الأدنى المشتمل على 710 من مصل جنين العجل) وتمت حضانة أطباق المزرعة ‎sad‏ 4-3 أيام عند 37 درجة ‎[Augie‏ 75 من ثاني أكسيد 0 الكربون. تم تقييم تأثير الاعتلال الخلوي من خلال القياس الميكروسكوبي الضوئي. تم اختبار كل الأمصال في ثنائيات وتم حساب عيار الجسم المضاد في شكل 11050 طبقاً ل ‎(1931)Kaerber‏ ‎Cua‏ إنه تم تعديله بواسطة ‎Behrens‏ (الاتصال الشخصي). تم توضيح البيانات كما هو واضح في الشكل رقم 32 والذي يوضح أن اللقاح من الماشية المصابة بفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-70-455-SBVGe‏ ينتج عنها انتساخ خاص بالفيروس الناقل الفعال بصورة كافية لحث الاستجابة المناعية. في واحد من الأربعة حيوانات من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 هناك عيار منخفض جداً من الأجسام المضادة الخاصة بالتعادل (1: 4) كان ‎St‏ ‏للاكتشاف بعد ثلاثة أسابيع بعد التلقيح الأولي. وبعد اثنين من مرات التلقيح الأولي وبعد ثلاثة أسابيع من الاستخدام الثاني فإن كل الماشية تقوم بإنتاج الأجسام المضادة المتعادلة عند عيار من 1 . ومن تلك النتيجة فيمكن استنتاج أن فيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH‏ يمكن أن يكون 0 فعالاً في شكل ناقل لقاح في الماشية ‎Jul‏ رقم 11 فعالية لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير ‎oly‏ التكافؤ المكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE_D‏ في مضادة فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113712 الخاص بالاختبار من الخنازير في الخنازير الصغيرة. 5 ولكي يتم فحص الخصائص الخاصة به؛ تم اختبار اللقاح المنقول في الخنازير الصغيرة ولقاح فيروس أنفلونزا م من الخنازير رياعي التكافؤ يتكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد
الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ (فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-‏ ‎«-pd55-H3701/3-p430-Hlav-‏ انظر الشكل رقم 13) و فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ (فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE-‏ ‎1/3-p430-H1hu-70-p455-H1pdm‏ انظر الشكل رقم 27) في دارسة التلقيح-الاختبار.
وفي هذه الدراسة؛ فإن الخنازير من الأنواع غير المحصنة وتلك السالبة من الناحية المصلية للأجسام المضادة الخاصة بالخنازير من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من خلال الاستخدام اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم الخاص ب 113 (الشكل رقم 26) ومن خلال اختبار التعادل الفيروسي (لم يتم توضيح البيانات) عند هذا الزمن من التلقيح فإنه قد تم تحصينها مرتين باستخدام لقاح رباعي التكافؤ المتكون من فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏
0 وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 800117-57-0. تم تلقيح الحيوانات في اليوم الأول في الأسبوع الأول من حياتها (يوم الدراسة 0) والمرة الثانية في الأسبوع الرابع من حياتها (اليوم 21 من الدراسة) على الترتيب إما بداخل العضلات أو بعد ذلك ‎daly‏ العضلات (2 ‎x‏ ‏بداخل العضلات) أو بداخل الأنف ويعد ذلك بداخل العضلات (بداخل الأنف + بداخل العضلات) أو مرتين بداخل الأنف ( 2* بداخل الأنف) عند جرعة من 1 ‎X‏ 710 الجرعة المعدية لمزرعة 5 النسيج التي تصل إلى خمسين في 2 مل من الجرعة لكل سلالة لقاح والحيوان ‎lilly‏ على الترتيب. تم استخدام المجموعة غير الملقحة في شل عينة مقارنة سالبة وتم استخدام مجموعة غير ملقحة أخرى في شكل ‎due‏ مقارنة للأسبوع الحادي عشر من الحياة (اليوم 69 أو 70؛ أيام الدراسة 43/42) وقد تم اختبار كل الحيوانات عدا عينات المقارنة السلبية من خلال الاستخدام الوضع بداخل الرغام من الجرعات من 10*72 7 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل 0 إلى خمسين من فيروس أنفلونزا م 113802 من الخنازير من سلسلة الاختبار (فيروس المجال الأوروبي المعزول من 8452-14 والذي يكون به لقاح 113 من مولد الضد قد تم استخدامه في فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎.(RacH-SE_B‏ تم استخدام الحيوانات غير الملقحة والحيوانات التي لم يتم اختبارها في شكل عينة سلبية بينما لا يكون هناك أي حيوانات غير ملقحة أو أي حيوانات غير مختبرة يتم استخدامها في شكل ‎due‏ مقارنة للاختبار. وعند أو بعد 5 التلقيح وقبل الاختبار يتم أخذ عينات الدم عند نقاط زمنية مختلفة.
ويعد يوم واحد من الاختبار» فإن هناك نصف الحيوانات لكل مجموعة تم قتلها وهناك ثلاث عينات من الرئة لكل رئة يسرى ورئة يمنى تم أخذها من كل حيوان؛ على الترتيب. ويعد ذلك فإن عيارات العدوى من كل خنزير فيروس أنفلونزا ‎A‏ تم إصابته بالعدوى لكل رئة تكون متجانسة وتم تحديدها فيما يتعلق بكل حيوان في شكل متوسط من الرئة اليسرى واليمنى لكل حيوان حيث إن كل منها يتم الحصول عليها من نواتج تجانس خاصة الثلاثة عينات التي تم تجمعيها لكل رئة يسترى وكل رئة يمنى ‎Ally‏ تكون في صورة متعادلة من الرثئة اليسرى والرئة اليمنى على الترتيب. تم تنفيذ نفس الإجراء باستخدام ‎Chall‏ المتبقي من الحيوانات لكل مجموعة وذلك بعد ثلاثة أيام من الاختبار. وبالنسبة لكل المجموعات التي تم تلقيحهاء فإن الأجزاء المتوسطة من العيارات من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير المعدية التي تم الحصول عليها من الحيوانات الفردية في المجموعة قد تم تقليلها 0 بصورة كبيرة والتي يتم تقليلها بالنسبة للعينات التي تم أخذها بعد الاختبار عند (011+1) عندما تتم المقارنة مع مجموعة التحكم الخاصة بالاختبار بينما تكون كل الحيوانات من مجموعة عينة المقارنة السالبة والتي توضح عدم وجود فيروسات أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم نقل العدوى لها في نواتج التجانس من الرئة (الشكل رقم 33). علاوة على ذلك؛ وبالنسبة لكل المجموعات التي تم تلقيحهاء فإن الأجزاء المتوسطة من العيارات من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير المعدية التي تم 5 الحصول عليها من الحيوانات الفردية في المجموعة قد تم تقليلها بصورة كبيرة والتي يتم تقليلها بالنسبة للعينات التي تم أخذها عند اليوم 3 بعد الاختبار ‎(CH+3)‏ عندما تتم المقارنة مع مجموعة التحكم الخاصة بالاختبار بينما تكون كل الحيوانات من مجموعة عينة المقارنة السالبة والتي توضح عدم وجود فيروسات أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم نقل العدوى لها في نواتج التجانس من الرئة (الشكل رقم 34). ‎ally‏ فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير يتكون 0 من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ بصورة هامة من الناحية الإحصائية ‎lly‏ تقلل أحمال الرئة من الخنازير فيروس أنفلونزا ‎A‏ عند يوم واحد أو ثلاثة أيام بعد الاختبار باستخدام سلالة فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113102 من الخنازير غير المتجانسة في الخنازير الصغيرة على الترتيب. ونتيجة لذلك؛
فإن اللقاح كما تم وصفه هنا يكون فعالاً في مضادة فيروس أنفلونزا 8 في الخنازير. 5 علاوة على ذلك؛ فإن المصل الذي تم أخذه من حيوانات الدراسة عند يوم الدراسة 0 (قبل اللقاح الأول ‎of‏ عند يوم الدراسة 21 (قبل ‎spe‏ التلقيح الثانية)» وعند يوم الدراسة 42 أو 43 (أيام الدراسة
4.2 قبل استخدام ‎sale‏ الاختبار) فقد تم تحليله بواسطة الاختبار المناعي المرتبط بالإنزيم الخاص بالجلويولين المناعي من الخنازير 6 (الجلوبيولين المناعي جاما) الذي تم توجيهه في مقابل مولد الضد من 113 ‎AV‏ من الخنازير الذي تم التعبير عنه بصورة ناتجة عن ‎sage‏ الارتباط عند 113 وتم التعبير عنه بواسطة سلالة اللقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎ley .RacH-SE B 5‏ الرغم من أن قيم أوه دي ‎OD‏ المتوسطة من الأمصال من مجموعة عينة المقارنة السلبية تعطي فقط قيم منخفضة جداً لكل النقاط الزمنية المقاسة؛ فإن الأمصال من المجموعات التي تم تلقيحها توضح وجود زيادة قوية من ‎OD af‏ بعد اثنين من الاستخدامات ‎daly‏ العضلات ( 2* بداخل العضلات؛ أيام الدراسة 21 وأيام الدراسة 43/42) بعد الاستخدام بداخل الأنف الأول والاستخدام بداخل العضلات( بداخل الأنف + بداخل العضلات ؛ وأيام الدراسة 0 43/42) وبعد اثنين من الاستخدامات بداخل الأنف ( 2* بداخل الأنف؛ أيام الدراسة 43/42)؛ الشكل رقم 36. وبالتالي فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير رباعي التكافؤ المتكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 180211-58-13 وفيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 8021150-10 الذي يوضح الاستجابة المناعية المصلية في الخنازير الصغيرة في مضادة الراصة الدموية من فيروس أنفلونزا م الخنزيري من 113 التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة اللقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏
‎(SE_B‏ على الترتيب. بالإضافة إلى ذلك تمت تنقية الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من الدم وتم أخذها من حيوان الدراسة عند يوم الدراسة 28. يتم إعادة تقدير الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي مرة ثانية إما باستخدام سلالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من ‎H3N2‏ ل ‎R452-14‏ عند المضاعفة 0 على العدوى ب 1 ‎H3N2)‏ عند المضاعفة على العدوى ب1) أو باستخدام مولد الضد فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113 من الخنازير الذي تم التعبير ‎die‏ بصورة ناتجة عن عودة الارتباط والذي يكون مشابهاً ل 3 الذي تم التعبير عن بواسطة سلسلة لقاح فيروس ‎anal)‏ ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ عند تركيز من 1 ميكرو جرام/مل ‎1H3)‏ 1 ميكرو جرام/مل) وياستخدام الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي الذي تم إعادة تحفيزه فإن اختبار التبقيع الماص المناعي المرتبط 5 بالإنزيم المحدد بجاماء قد تم إجراؤه؛ وتم الحصول على القيم بصورة طبيعية بالنسبة ل 10 6 خلية وتم الحساب لكل مجموعة على الترتيب (الشكل رقم 38). وعلى الرغم من إعادة التحفيز باستخدام
الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من مجموعة المقارنة الخاصة بالاختبار (التي تم استخدامها في شكل مجموعة سلبية خاصة بالاختبار فإن الحيوانات لم يتم تلقيحها) وتظهر متوسط من البقع في كل مجموعة أقل من 45 ويعد أي من إعادة التحفيز وإعادة التقدير للخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من حيوانات تم تلقيحها والتي تظهر بقع متوسطة لكل مجموعة من أعلى من 85 بعد اثنين من الاستخدامات بداخل الخلايا أو أكثر من 100 نقطة بعد المعالجة الداخلية في الأنف
وأكثر من 150 بقعة بعد اثنين من التطبيقات (2 * بداخل الأنف)؛ بعد إما إعادة التحفيزات على الترتيب (الشكل رقم 38). ‎Jil‏ فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا م من الخنازير ‎oly)‏ التكافؤ المتكون من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ و فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ الذي يوضح الاستجابة المناعية
0 الخلوية في الخنازير لكل من الراصة الدموية ل 113 من فيروس أنفلونزا م التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة لقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفي مقابل فيروس أنفلونزا ‎R452-14 A‏ 113802 من الخنازير المستخدمة لعدوى فيروس الاختبار غير المتجانس» على الترتيب. ‎Jail‏ فإن تلقيح الخنازير باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎ely A‏ التكافؤ المتكون من فيروس
5 الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ قد تم حثه في الأمصال القابل للكشف والاستجابة المناعية الخلوية في الخنازير والتي توضح الفعالية الخاصة باللقاح بواسطة أحمال فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم تقليلها بشكل كبير وبصورة إحصائية في نواتج التشابه من الرئة لمدة يوم وثلاثة أيام بعد اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ الخنزيري غير المتجانس.
0 المثال رقم 12 فعالية لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير ‎oly‏ التكافؤ المكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 ‎RacH-SE_D‏ في مضادة فيروس أنفلونزا ‎HIN2 A‏ الخاص بالاختبار من الخنازير في الخنازير الصغيرة؛ مع الأجسام المضادة المشتقة بصورة أساسية.
5 ولكي يتم فحص الخصائص الخاصة بها في شكل لقاح ناقل في الخنازير الصغيرة؛ فإن لقاح فيروس أنفلونزا م من الخنازير رياعي التكافؤ يتكون من فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد
الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏
والذي تم اختباره في دراسة التلقيح -الاختبار الثالث. في اليوم الثالث من الدراسة فإن الخنازير الصغيرة المولودة حديثاً والتي يتم إطعامها أول اللبن - تلك التي ترضع من الأمهات يتم تلقيحها مرتين أثناء فترة الحمل مع اللقاح غير المنشط المتاح بشكل تجاري في مضادة فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير الذي تم استخدامه. تم اختبار الخنازير الصغيرة بحيث تكون موجبة من الناحية المصلية بالنسبة للأجسام المضادة الخاصة بفيروس أنفلونزا م من الخنازير بواسطة استخدام اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم الخاصة ب 3 (الشكل رقم 37) وعن طريق استخدام اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم للجسم المضاد الخاص بفيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير المتاحة تجارياً ‎A (Vins‏ مسقم ‎(IDEXX‏ ‎IDEXX, Westbrook, Maine 04082, USA» tAntibody Testy ® 0‏ ( وذلك بإتباع توصيات التصنيع الخاصة بالمصنع (لم يتم توضيح البيانات) عند زمن التلقيح الأول والذي تم تلقيحه مرتين باستخدام لقاح رباعي التكافؤ يتكون من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎.RacH-SE_D‏ تم تلقيح الحيوانات في اليوم الأول في الأسبوع الأول من حياتها (يوم الدراسة 0) والمرة الثانية في الأسبوع 5 الرابع من حياتها (اليوم 21 من الدراسة) على الترتيب إما بداخل العضلات أو بعد ذلك بداخل العضلات (2 ‎X‏ بداخل العضلات) أو بداخل الأنف وبعد ذلك بداخل العضلات (بداخل الأنف + بداخل العضلات) أو مرتين بداخل الأنف ( 2* بداخل الأنف) عند جرعة من 1 ‎x‏ * 7 الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين في 2 مل من الجرعة لكل سلالة لقاح والحيوان والتلقيح؛ على الترتيب. يتم استخدام مجموعة غير ملقحة في شكل عينة مقارنة سالبة ومجموعة 0 غير ملقحة أخرى يتم استخدامها في شكل عينة مقارنة خاصة بالاختبار. وفي الأسبوع الحادي عشر من الحياة ‎ag)‏ الدراسة 69 أو 70 أيام الدراسة 70/69) يتم اختبار كل الحيوانات ما عدا عينات المقارنة السلبية من خلال وضع جرعة بداخل الرغام بجرعة من 2 ‎X‏ 10 7 من الجرعة المعدية لمزرعة النسيج التي تصل إلى خمسين من سلالة اختبار فيروس أنفلونزا لم 113812 من الخنازير (ناتج عزل فيروس المجال الأوروبي 8452-14؛ الذي به 113 غير متجانس بالنسبة لمولد 5 ضد من اللقاح 113 المستخدم في فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-‏ ‎(SEB‏ تم استخدام الحيوانات غير الملقحة والحيوانات التي لم يتم اختبارها في شكل عينة سلبية
بينما لا يكون هناك أي حيوانات غير ملقحة أو أي حيوانات غير مختبرة يتم استخدامها في شكل ‎die‏ مقارنة للاختبار. وعند أو بعد التلقيح وقبل الاختبار يتم أخذ عينات الدم عند نقاط زمنية وبعد خمسة أيام من الاختبارء فإن هناك نصف الحيوانات لكل مجموعة تم قتلها وهناك ثلاث عينات من الرئة لكل رئة يسرى ورئة يمنى تم أخذها من كل حيوان؛ على الترتيب. وبعد ذلك فإن عيارات العدوى من كل خنزير فيروس أنفلونزا ‎A‏ تم إصابته بالعدوى لكل رئة تكون متجانسة وتم تحديدها فيما يتعلق بكل حيوان في شكل متوسط من الرئة اليسرى واليمنى لكل حيوان حيث أن كل منها يتم الحصول عليها من نواتج تجانس خاصة الثلاثة عينات التي تم تجمعيها لكل رئة يسترى وكل رئة يمنى والتي تكون في صورة متعادلة من الرئة اليسرى والرئة اليمنى على الترتيب. 0 وبالنسبة لكل المجموعات التي تم تلقيحهاء فإن الأجزاء المتوسطة من العيارات من فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير المعدية التي تم الحصول عليها من الحيوانات الفردية في المجموعة قد تم تقليلها بصورة كبيرة والتي يتم تقليلها بالنسبة للعينات التي تم أخذها بعد الاختبار عند اليوم الخامس ‎(CH#5)‏ عندما تتم المقارنة مع مجموعة التحكم الخاصة بالاختبار بينما تكون كل الحيوانات من مجموعة ‎due‏ المقارنة السالبة والتي توضح عدم وجود فيروسات أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم 5 تقل العدوى لها في نواتج التجانس من الرئة (الشكل رقم 35). ‎Mall‏ فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير يتكون من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ بصورة هامة من التاحية الإحصائية ‎lly‏ تقلل أحمال الرئة من الخنازير فيروس أنفلونزا ‎A‏ بعد خمسة أيام بعد الاختبار باستخدام سلالة فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113712 من الخنازير غير المتجانسة في الخنازير 0 الصغيرة على الترتيب. ونتيجة لذلك؛ فإن اللقاح كما تم وصفه هنا يكون فعالاً في مضادة فيروس
أنفلونزا م في الخنازير. علاوة على ذلك؛ فإن المصل الذي تم أخذه من حيوانات الدراسة عند يوم الدراسة 0 (قبل اللقاح الأول )» عند يوم الدراسة 21 (قبل مرة التلقيح الثانية)؛ وعند يوم الدراسة 35 (بعد أسبوعين من مرة التلقيح الثانية) قد تم تحليله بواسطة الاختبار المناعي المرتبط بالإنزيم الخاص بالجلويولين 5 المناعي من الخنازير 6 (الجلوبيولين المناعي جاما) الذي تم توجيهه في مقابل مولد الضد من فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113 من الخنازير الذي تم التعبير عنه بصورة ناتجة عن عودة الارتباط والذي
يكون متجانسا بالنسبة ل 113 الذي تم التعبير عنه بواسطة سلالة اللقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني 1 80011-58. ‎ley‏ الرغم من أن قيم ‎OD‏ المتوسطة من الأمصال من مجموعة عينة المقارنة السلبية تعطي فقط قيم منخفضة جداً أيام الدراسة 21 و35 والأمصال من مجموعات تم تلقيحها والتي توضح زيادة قوية من قيم ‎OD‏ بعد اثنين من التطبيقات بداخل العضلات (2* بداخل العضلات ؛ أيام الدراسة 35) ‎aay‏ الإعطاء في الأنف ويعد ذلك الإعطاء بداخل العضلات (بداخل الأنف + بداخل العضلات ؛ أيام الدراسة 35) وبعد اثنين من مرات الإعطاء بداخل العضلات (2 ‎x‏ بداخل الأنف؛ ‎abl‏ الدراسة 35)؛ الشكل رقم 37. وبالتالي فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير رباعي التكافؤ المتكون من فيروس الهريس ‎Wl‏ للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد 0 الجيني ‎RacH-SE_D‏ الذي يوضح الاستجابة المناعية المصلية في الخنازير الصغيرة في مضادة ‎dial)‏ الدموية من فيروس أنفلونزا ‎A‏ الخنزيري من 113 التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة اللقاح
فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ على الترتيب. بالإضافة إلى ذلك تمت تنقية الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي وتم أخذها من حيوان الدراسة عند يوم الدراسة 28. يتم إعادة تقدير للخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي مرة ثانية إما باستخدام 5 ملالة اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير من 113302 ل 452-14 عند المضاعفة على العدوى ب 1 ‎H3N2)‏ عند المضاعفة على العدوى ب 1) أو باستخدام مولد الضد فيروس أنفلونزا ‎A‏ 113 من الخنازير الذي تم التعبير عنه بصورة ناتجة عن عودة الارتباط والذي يكون مشابهاً ل 113 الذي تم التعبير عن بواسطة سلسلة لقاح فيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ ‏عند تركيز من 1 ميكرو جرام/مل (113: 1 ميكرو جرام/مل). وياستخدام الخلايا وحيدة النواة من 0 الدم المحيطي الذي تم إعادة تحفيزه فإن اختبار التبقيع الماص المناعي المرتبط بالإنزيم المحدد بجاماء قد تم إجراؤه؛ وتم الحصول على القيم بصورة طبيعية بالنسبة ل 10" خلية وتم الحساب لكل مجموعة على الترتيب (الشكل رقم 39). وعلى الرغم من إعادة التحفيز باستخدام الخلايا وحيدة النواة من الدم المحيطي من مجموعة المقارنة الخاصة بالاختبار ‎Al)‏ تم استخدامها في شكل مجموعة سلبية خاصة بالاختبار فإن الحيوانات لم يتم تلقيحها) وتظهر متوسط من البقع في كل 5 مجموعة أقل من 15 وبعد أي من ‎sale)‏ التحفيز وإعادة التقدير ‎WAN‏ وحيدة النواة من الدم المحيطي من حيوانات تم تلقيحها والتي تظهر بقع متوسطة لكل مجموعة من أعلى من 30 بعد
اثنين من الاستخدامات بداخل الخلايا أو أكثر من 55 نقطة بعد المعالجة الداخلية في الأنف وأكثر
من 65 بقعة بعد اثنين من التطبيقات (2 ‎x‏ بداخل الأنف)؛ بعد إما إعادة التحفيزات على الترتيب
(الشكل رقم 39). وبالتالي فإن التلقيح باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير رياعي التكافؤ
المتكون من فيروس ‎anal)‏ ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ و فيروس الهريس
ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SED‏ الذي يوضح الاستجابة المناعية الخلوية في
الخنازير لكل من ‎alll‏ الدموية ل 113 من فيروس أنفلونزا م التي تم التعبير عنها بواسطة سلالة
لقاح فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفي مقابل فيروس أنفلونزا
‎H3N2 8452-14 A‏ من الخنازير المستخدمة لعدوى فيروس الاختبار غير المتجانس؛ على الترتيب.
‏0 والتالي فإن تلقيح الخنازير باستخدام لقاح فيروس أنفلونزا ‎ely A‏ التكافؤ المتكون من فيروس الهربس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_B‏ وفيروس الهريس ألفا للخيول 1 معاد الاتحاد الجيني ‎RacH-SE_D‏ قد تم حثه في الأمصال القابل للكشف والاستجابة المناعية الخلوية في الخنازير والتي توضح الفعالية الخاصة باللقاح بواسطة أحمال فيروس أنفلونزا ‎A‏ من الخنازير التي تم تقليلها بشكل كبير وبصورة إحصائية في نواتج التشابه من الرئة لمدة خمسة أيام بعد
‏5 اختبار فيروس أنفلونزا ‎A‏ الخنزيري غير المتجانس. يمكن تحضير كل التركيبات وإجراء كل الطرق التي تم الكشف عنها والمطلوب حمايتها هنا بدون إجراء تجارب لا مبرر لها في ضوءٍ الكشف الحالي. وعلى الرغم من أنه قد تم وصف التركيبات والطرق الخاصة بالاختراع الحالي في سياق النماذج المفضلة؛ فسوف يكون من الواضح للماهرين
‏0 في المجال أن هناك العديد من الصور المتنوعة يمكن تنفيذها بالنسبة للتركيبات والطرق وذلك من خلال الخطوات أو في سلسلة من الخطوات الخاصة بالطريقة الموصوفة هنا بدون الخروج من فحوى ومجال الاختراع. وبصورة خاصة؛ سوف يكون من الواضح أن هناك عوامل معينة والتي تكون ذات صلة من الناحية الكيميائية والفسيولوجية مكونة للعوامل التي تم وصفها هنا بينما يمكن تحقيق نتائج مماثلة أو مشابهة. تكون كل من تلك المكونات والتعديلات واضحة لذوي المهارة في
‏5 المجال الذي يتعلق به مفهوم الاختراع الحالي وكما تم تحديده في عناصر الحماية التالية. المراجع.
تم تضمين المراجع التالية بحيث توفر التفاصيل الإجرائية أو التفاصيل المكملة الأخرى لتلك المراجع التي تم ذكرها في هذه الوثيقة وقد تم إدراجها بكاملها هنا كمراجع. 1. Allwinn R, Getler ‏ا‎ Berger A, Cinatl ‏ل‎ Doerr HW. 2010. Determination of serum antibodies against swine-origin influenza A virus HIN1/09 by immunofluorescence, haemagglutination inhibition, and by neutralization tests: 5 how is the prevalence rate of protecting antibodies in humans? ed Microbiol
Immunol. 199(2):117-21. doi: 10.1007/s00430-010-0143-4. Epub 2010 Feb 17. 2. Anonymous (2013). VMD authorizes SBV vaccine for use in the UK. The
Veterinary record 172, 543 3. Anonymous (2015). Schmallenberg virus vaccine. The Veterinary record 177, 321 10 4. Bilk S, Schulze C, Fischer M, Beer M, Hlinak A, Hoffmann B (2012). Organ distribution of Schmallenberg virus RNA in malformed newborns. Veterinary microbiology 159, 236-238 5. Boshart M, Weber F, Jahn G, Dorsch-Hisler K, Fleckenstein B, Schaffner W. 1985.
A very strong enhancer is located upstream of an immediate early gene of human 15 cytomegalovirus. Cell 41(2):521-30. 6. Bustin, S. 2000. Absolute quantification of mRNA using real-time reverse transcription polymerase chain reaction assays. Journal of Molecular
Endocrinology 25(2): 169-193. 7. Charoensawan, V., Wilson, D., Teichmann, S.A. 2010. Genomic repertoires of 20
DNA-binding transcription factors across the tree of life. Nucleic Acids Res. 38(21):7364-77 8. Colle, C.F. 3rd, O'Callaghan, D.J. 1995. Transcriptional analyses of the unique short segment of EHV-1 strain Kentucky A. Virus Genes;9(3):257-68. 9. Dorsch-Hisler, K., Keil, G.M., Weber, F., Jasin, M. Schaffner, W., and 25
Koszinowski, U.H. 1985. A long and complex enhancer activates transcription of the gene coding for the highly abundant immediate early mRNA in murine cytomegalovirus. PNAS Vol. 82: 8325-8329. 10. Drummer, H.E., Studdert, M.J., Crabb, B.S. 1998. Equine herpesvirus-4 glycoprotein G is secreted as a disulphide-linked homodimer and is present as two 30 homodimeric species in the virion. J. Gen. Virol. 79: 1205-1213 11. Fields, B, Knipe, D.M.; and Howley, P.M. 2013. Virology. 6" ed. Philadelphia;
Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams& Wilkins 12. Foecking, M.K., Hofstetter, H. 1986. Powerful and versatile enhancer-promoter unit for mammalian expression vectors. Gene 45(1):101-5. 35 13. Goodwin, E.C. & Rottman, 1.11. 1992. The 3 flanking sequence of the bovine growth hormone gene contains novel elements required for efficient and accurate polyadenylation. J.Biol.Chem. 267: 16330-16334. 14. Hiibert, P. H., Birkenmaier, S., Rziha, H.-J. and Osterrieder, N. (1996), Alterations in the Equine Herpesvirus Type-1 (EHV-1) Strain RacH During Attenuation. 40
Journal of Veterinary Medicine, Series B, 43: 1-14. doi:10.1111/5.1439- 0450.1996.tb00282.x
15. Kirber, G (1931) Beitrag zur kollektiven Behandlung pharmakologischer
Reihenversuche. Archiv 1 experiment Pathol u Pharmakol.;162:480-483 16. Kim, D.W., Uetsuki, T., Kaziro, Y., Yamaguchi, N., Sugano, 5. 1990. Use of the human elongation factor 1 alpha promoter as a versatile and efficient expression system. Gene 16;91(2):217-23. 5 17. Kraatz F, Wernike K, Hechinger S, Konig P, Granzow H, Reimann I, Beer, M (2015). Deletion mutants of Schmallenberg virus are avirulent and protect from virus challenge. J Virol 89, 1825-1837 18. Luke, GA and Ryan, MD. 2013. The protein coexpression problem in 10 biotechnology and biomedicine: virus 2A and 2A-like sequences provide a solution.Future Virology, Vol. 8, No. 10, Pages 983-996. 19. Ma, G., Eschbaumer, M., Said, A., Hoffmann, B., Beer, M., Osterrieder, N. 2012.
An equine herpesvirus type 1 (EHV-1) expressing VP2 and VPS of serotype 8 bluetongue virus (BTV-8) induces protection in a murine infection model. PLoS 15
One. 2012;7(4):e34425. doi: 10.1371/journal.pone.0034425. Epub 2012 Apr 12. 20. Ma, G., Azab, W., Osterrieder, N. 2013. Equine herpesviruses type 1 (EHV-1) and 4 (EHV-4)--masters of co-evolution and a constant threat to equids and beyond. Vet
Microbiol. 167(1-2):123-34. 21. Nolan, T. Rebecca E Hands, R.E., and Bustin S.A. 2006. Quantification of mRNA 20 using real-time RT-PCR Nature Protocols 1: 1559-1582 22. Osterrieder, N., Neubauer, ‏رط‎ Brandmiiller,C., Kaaden, O.R., and O’Callaghan,
D.J. 1996. The equine herpesvirus 1 IR6 protein influences virus growth at elevated temperature and is a major determinant of virulence. Virology 226:243-251. 23. Ptashne, M. 2014. The Chemistry of Regulation of Genes and Other Things The 25
Journal of Biological Chemistry Vol. 289, (9) 5417-5435. Reed, L.J., and Muench,
H. 1938. A simple method of estimating fifty percent endpoints. Am. J. Hyg. (27) 3; 493-497. 24. Reed LJ and Muench H (1938). A simple method estimating fifty percent endpoints. The American Journal of Hygiene 27(3) 493-497 30 25. Rosas, C.T., Konig, P., Beer, M., Dubovi, E.J., Tischer, B.K., Osterrieder, N., 2007a. Evaluation of the vaccine potential of an equine herpesvirus type 1 vector expressing bovine viral diarrhea virus structural proteins. J. Gen. Virol. 88 (3), 748-757. 26. Rosas, C.T., B.K. Tischer, G.A. Perkins, B. Wagner, L.B. Goodman, N. 35
Osterrieder. 2007b . Live-attenuated recombinant equine herpesvirus type 1 (EHV- 1) induces a neutralizing antibody response against West Nile virus (WNV) Virus
Research, 125 , pp. 69-78. 27. Rosas, C.T., Van de Walle, G.R., Metzger, S.M., Loelzer, K., Dubovi, E.J., Kim,
S.G., Parrish, C.R., Osterrieder, N., 2008. Evaluation of a vectored equine 40 herpesvirus type 1 (EHV-1) vaccine expressing H3 haemagglutinin in the protection of dogs against canine influenza. Vaccine 26 (19), 2335-3234.
28. Said, A., Elke Lange, E., Beer, M. Damiani, A., Osterrieder, N. 2013. Recombinant equine herpesvirus 1 (EHV-1) vaccine protects pigs against challenge with influenza A(HIN1)pmd09 Virus Research 173: 371-376 29. Sambrook J and Russell DW (2001). Molecular Cloning, 3rd ed. Cold Spring harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; ISBN 978-087969-577-4 5 30. Shaner, N.C., Campbell, R.E., Steinbach, P.A., Giepmans, B.N., Palmer, A.E.,
Tsien, R,Y. 2004. Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein. Nat Biotechnol.
Dec;22(12):1567-72. Epub 2004 Nov 21. 31. Tischer, B.K., von Einem, J., Kaufer, B., Osterrieder, N., 2006. Two-step red- 10 mediated recombination for versatile high-efficiency markerless DNA manipulation in Escherichia coli. Biotechnol. Tech. 40, 191-197. 32. Tischer, B.K., Kaufer, B.B., Sommer, M., Wussow, F., Arvin, A., and Osterrieder,
N. A Self-Excisable Infectious Bacterial Artificial Chromosome Clone of Varicella-
Zoster Virus Allows Analysis of the Essential Tegument Protein Encoded by 15
ORF9. J. Virol.81 (23), 2007, 13200-13208. 33. Tischer, B.K, Smith, G.A.,and Osterrieder, N. in: Jeff Braman (ed.), In Vitro
Mutagenesis Protocols: Third Edition, Methods in Molecular Biology, vol. 634,101 10.1007/978-1-60761-652-8_30, © Springer Science+Business Media,
LLC 2010, Chapter 30: En Passant Mutagenesis: A Two Step Markerless Red 20
Recombination System. 34. Thompson, S.R. 2012. Tricks an IRES uses to enslave ribosomes. Trends
Microbiol. Nov;20(11):558-66. 35. Trapp, S., von Einem, J., Hofmann, H., Kostler, J., Wild, J., Wagner, R., Beer, M.,
Osterrieder, N., 2005. Potential of equine herpesvirus 1 as a vector for 25 immunization. J. Virol. 79, 5445-5454. 36. Trombetta CM, Perini D, Mather S, Temperton N, Montomoli E. 2014.Overview of
Serological Techniques for Influenza Vaccine Evaluation: Past, Present and Future.
Vaccines (Basel) 13;2(4):707-34. doi: 10.3390/vaccines2040707. 37. Wellington, J.E., Allen, G.P., Gooley, A.A., Love, D.N., Packer, N.H., Yan, J.X_, 30
Whalley, J.M. 1996. The highly O-glycosylated glycoprotein gp2 of equine herpesvirus 1 is encoded by gene 71. J Virol. 70(11):8195-8. 38. Wernike K, Aebischer A, Roman-Sosa G, Beer M, (2017). The N-terminal domain of Schmallenberg virus envelope protein Ge is highly immunogenic and can provide protection from infection. Scientific reports.2017 Feb 13;7:42500. 35 39. Wernike K, Eschbaumer M, Breithaupt A, Hoffmann B, Beer M (2012).
Schmallenberg virus challenge models in cattle: infectious serum or culture-grown virus? Veterinary research 43, 84 40. Wernike K, Eschbaumer M, Schirrmeier H, Blohm U, Breithaupt A, Hoffmann B,
Beer M, (2013a). Oral exposure, reinfection and cellular immunity to 40
Schmallenberg virus in cattle. Veterinary microbiology 165, 155-159 41. Wernike K, Nikolin VM, Hechinger S, Hoffmann B, Beer M (2013b). Inactivated
Schmallenberg virus prototype vaccines. Vaccine 31, 3558-3563.
قائمة التتابع: ل جينوم ‎IWt EHV-‏ 485 'ب" زوج قاعدة ‎lorf ra‏ ‎2orf 5‏ ‎3orf ry‏ ‎"yg‏ سلالة لقاح لجينوم ‎RacH 1EHV-‏ از موضع ادراج 3/101 في ‎Rach‏ ‏اح جز الجانبية أ 0ط" ‎Cidade‏ ‏'ي' ‎TR‏ ‏"كك" ‎Us‏ ‎IR "J‏ ‎UL "a‏ ان" موضع ادراج محدد اول س" 2 / ‎A orfl‏ ‎orf71 (gpll) 2‏ ف" ‎orf70 (9G)‏ ‎"a‏ مناطق المعالجة بناتج عودة الارتباط ق' المتوالية المحذوفة ‎J‏ متواليات معزز ذاتية مفترضة "لش" ‎pU-mC70-BGH‏ ‏ات" ‎APR‏ ‏"اث" ‎Eco RI‏ ‎Xba | = 5‏ لذ 3' ‎69endORF‏
'ض'‎ m Cherry "1
BGH ‏بولي‎ A "ld
Bam HI "17" 70endORF '3 "19 5
Hn dll "1a"
ORI "1
Sall "1
Not | "12 kpn | "ML 10
Scel-1 "14
PA71 '1& kana "1J
T1K71-455-p70pU 14 aph ‏معزز‎ "ly 15 69orf ‏'س1'‎ ‎70A orf "1g" 70008 ‏موضع ادراج‎ "1 3/1008 ‏ص1" موضع ادراج‎ ‏الفيروسي الجينومية‎ DNA "1ق‎ 20 3-H455-70Rach-SE I1rEHV- "1 ‏'ر‎ ‎3H ‏'ش1” .الجسم المضاد احادي النسيلة من‎
BHA ‏مضاد مصل من الارانب ل‎ "1 (gpll 1(EHV- 7G2Mab ‏ث1" نظ‎ 5P 3-H455-p70Rach—SE- 1rEHV- ‏مصابة‎ Wa ‏لخ‎ 25 10P 3-H455-p70Rach-SE- 1rEHV- ‏مصابة‎ Wa "13
'ض1" خلايا مصابة ‎3-H455-p70Rach-SE- IrfEHV-‏ 150 2" خلايا مصابة ‎20P 3-H455-p70Rach-SE- 1rEHV-‏ ‎WA "24‏ مصابة ‎70Rach-mC 1rEHV-‏ ‎DE "2‏ غيرمصابة 255" متوسط عيارات فيروس الرئة للحيونات ‎ry‏ عيارات فيروس الرئة المتوسطة للمجموعات ‎Alll/50TCID "24‏ 27" سليم ‎X2‏ ‎X2EHV "2‏ ط2' ‎x1EHV‏ ‏ي2' ‎.chall.
Ctrl‏ ‎.neg. ctrl "2a‏ ‎aad 2‏ الاختبار ‎U2‏ يوم بعد الاختبار ‎Flank A "2 5‏ س2" ‎Flank B‏ لس ‎BGHpA‏ ‎avlH "2‏ ‎av-BGHKBGH1-H430-p3-1pU "2‏ ‎IAorf "25 0‏ رد ‎IFA‏ ‏28" تبقيع ويسترن 2" خلايا ‎vero‏ المصابة من ‎AVIH‏ ‏ث2" الصورة الزائفة ‎SE‏ ‏25 "2" الجسم المضاد احادي النسيلة ل 1026 من مضاد ‎1H‏ ‏لذ2' الجسم المضاد احادي النسيلة ل ‎34929PA-‏ من مضاد ‎1H‏
‎avl-H430-3/1RacH-SE lav=rEHC-1H "2 =‏ ‎SE=rEHV-RacH-SE‏ (عينة المقارنة) الخلايا غير المصابة (عنة المقارنة) = الصورة الذهنية 3 عينة المقارنة ‎sl BL 5‏ دالتون
‎gpll "3‏ ‎SE "3‏ ‎"3a‏ درجة حرارة مجموعة الجسم المتوسطة 34" عينة مقارنة سلبية
‏0 33" عينة مقارنة للاختبار ‎Ix EHV-1 "3"‏ ‎Ix EHV-2 "3k‏ 3" لكا تم قتلهم ‎.bef.
Ch "3a‏
‎1Ch.+ ‏ل3‎ 5 2Ch+ "3 3Ch.+ "3. ‏مجموعات الدرجات الخاصة بالرئة‎ "3 .chall.
Ctrl "3s"
‎x killed2 "3 0‏ ‎conc B1IL- "3‏ (بيكو جرام/مل) 33 ديسي بل رذ ‎BALF‏ من ااحخ5دااع-م 3.8" عيارات ‎SN‏ تبادلية من الحيونات
‏25 3" مجموعة المقارتة نا285 3" وحدات اشكيل البقعة / 10741 6 خلية
RPMI "3
HA ‏با‎ "33
HA CH ‏نض3"‎ ‎empty 1EHV- "47 3-HIEHV- ‏ب4"‎ 5 2N3H "dz"
MDCK "4
NP ‏"ها"‎ ‏وسائل حث‎ 4 28SD 1x EHV-2 '4y 10 28SD 1x EHV-1 "4" i—ceul "44 hulh "4 sca | "44 pdm1h 43 15 71k71pdm 1-H455-p70pU EN ule 70orf "4 ‏ان‎ ‎IVA ‏بالنسبة ل 501660100 من‎ hall ‏"س4" كثافات خاصة بالتعديل من امصال‎ ‏تخفيف المصل تبادلي‎ 4g” 1PatvViB—- '4فآ١‎ 0 2PatViB- ‏"ص4"‎ ‎3PatVviB- ‏'ق4"‎ ‎4PatViB- "4
SPatviB- ‏'اش4"‎ ‎lanvNIH ‏ت4"‎ 25 4680053 '4&f
‎4p‏ 405 لاعلى ذ "4‏ اشارة بيبتيد ‎SBV Gc "4."‏ ‎GS Li, 50‏ اب5٠! ‎TM-anchor‏ ‏'ج5' ‎455-70pU‏ 1©71471-5817/66 ‎"Sd‏ ايام بعد العدوى ‎"5a‏ عينة مقارنة غير معالجة بلقاح "و5" قيمة دورة تمت معالجتها بشكل كمي ‎(CA)‏ ‏0 ا 53" عدم وجود 0© ‎rEHV-SBV-Gc "Sz‏ ‎Sk‏ عدوى الكولاجين 6" اسابيع بعد اللقاح الاول 6" عيارات تعادل ‎(SOND)‏ ‏15 "6" غعيارات الرئة الفيروسية +1014 ‎x IM2 "6‏ ‎IN+IM "6a"‏ ‎xIN2 "6‏ 63 تسخ الرئة ‎/g50TCID‏ ‏20 "62" غعيارات الرئة الفيروسية +3011 'ط6" . عيارات الرئة الفيروسية +5011 'ي6" مستويات ‎IgG‏ خاصة ب ‎3H‏ ‎0SD "6‏ ‎ '6J‏ 2150 حي ‎358D‏ ‏أن6' 450 ‎OD‏ نانو متر من المصل غير المعالج يتخفيف 1:1000
28ELISpot SD IFNY ‏س6"‎ ‏خلية/بقع‎ [FNa "6g
IMOI 2N3H "6 3rh ‏ميكروجرام/مل‎ 1 "6" ‏جين انتقالي‎ 68 5 ‏اليوم‎ 6 43/4250 ‏'لش6"‎ ‎72 orf ‏لنواتج انتساخ‎ CT ‏قيم‎ "6 ct ‏"ث6" قيم‎ ‏"خ6" ماعة ل أ.0.‎ 0 ‏لذ6' الزمن‎
CMV-BGH-3/1 ‏'اض6'"‎ ‎-3/1IMCMV-BGH 7
BGH-455-3/1 "I<
BGH-70 "Iz" 5
BGH-430-3/1 "7
Ct ail ‏طبيعية‎ Mcherry ‏نزاتج انتساخ‎ "7a" ‏دلتا طبيعية‎ 0] "7 egGp-BGH-70 "Ty
PK/WRL ‏وخلايا‎ vero ‏"ح7" حركيات المحفز في خلايا‎ 20 2015AL-ST Wall ‏في‎ 200/8 VP ‏الخاص بالتعبير عن‎ IFA :19 ‏الشكل‎ "TL ‏الجديد‎ (Despl) 2CPV VP 43006 2CAV | ‏ي7"‎ ‎(rel ‏(تركيز الجين الانتقالي خلاف‎ 01/1/16 BRSV F 20/80/ "Td wall 2CPV VP 455MCP 2CAV "TJ wall (0.95 (Gen 2CPV Vp 4309G 2CAV ‏.2م77‎ 5 uv "7
70 خفيفة 2 مضاد ‎pAb-FITC 2CAV‏ 7" 2001/1/0 مضاد ‎mAb‏ ‏ص7" ‎(Rabg (n 455MCP 2CAV‏ جديد ‎(Rabg (n 455MCP 2CAV "73 5‏ اصلي ‎Light "7‏ ‎2CPV VP 43096 2CAV "TE‏ جبن انتقالي خلاف ‎rel‏ ‏7" الشكل 19: ‎IFA‏ الخاص بالتعبير عن ‎RabG‏ في الخلايا ‎2015AL-ST‏ ‏7 الشكل 19 ج: ‎IFA‏ خاص بالتعبير في خلايا ‎MDCK 2011BIVI‏ سلامة مزدوجة 0 خاصة ب86م8 و 75" مضاد ‎Rabg‏ مع ‎0-594AF‏ للفتران ماخوذ من الحمير 13" مضاد ‎-FITC2CAV‏ ‎455MCP "7 =‏

Claims (1)

عناصر الحماية
1. متوالية معززة ‎promoter sequence‏ تشمل متواليات لها نسبة تطابق متوالية ‎sequence identity‏ و/أو تجانس ‎homology‏ بمقدار 95 إلى 7100 مع متوالية بهوية رقم: 1 (86600م4)؛ متوالية بهوية رقم: 2 ‎«(4pMCP600)‏ متوالية بهوية رقم: 3 (0430؛ متوالية بهوية رقم: 4 (0455)؛ أو متواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منهاء حيث تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة تشغيلياً مع متوالية نوكليوتيد غير متجانسة ‎heterologous‏ ‎nucleotide sequence‏ محل أهمية؛ جين محل أهمية؛ و/أو متوالية تشفير مستضد ‎antigen‏ ‎encoding sequence‏ محل أهمية.
2. المتوالية المعززة ‎Lula promoter sequence‏ لعنصر الحماية 1؛ حيث يتم اختيار المتوالية 0 المعززة ‎promoter sequence‏ من المجموعة المتكونة من متوالية بهوية رقم: 3؛ متوالية بهوية رقم: 4 ومتواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منها.
3. كاسيت تعبير ‎expression cassette‏ يشمل متوالية معززة ‎promoter sequence‏ يتم اختيارها من المجموعة المتكونة من متواليات لها نسبة تطابق متوالية ‎sequence identity‏ و/أو تجانس ‎homology 5‏ بمقدار 95 إلى 72100 مع متوالية بهوية رقم: 1 (86600م4)؛ متوالية بهوية رقم: 2 (1400600م4)؛ متوالية بهوية رقم: 3 (0430)؛ متوالية بهوية رقم: 4 (455م)؛ أو متواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منهاء حيث تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة تشفغيلياً مع متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل أهمية؛ 0 حيث تودي المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية النوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل الأهمية؛ بذلك تكون المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة عبارة عن متوالية معززة غير متجانسة ‎<heterologous promoter sequence‏ و/أو متوالية معززة خارجية المنشاً ‎exogenous promoter‏
‎.sequence‏ ‏25
4 كاسيت التعبير ‎expression cassette‏ طبقاً لعنصر الحماية 3؛ حيث يتم اختيار المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ من المجموعة المتكونة من متوالية بهوية رقم: 3 متوالية بهوية رقم: 4 ومتوالييات النوكليوتيد التكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منها.
5. ناقل ‎vector‏ يشمل كاسيت التعبير ‎expression cassette‏ طبقاً لعنصر الحماية 3.
6. الناقل ‎vector‏ طبقاً لعنصر الحماية 5« حيث يكون الناقل ‎vector‏ المذكورة عبارة عن ناقل معاد الاتحاد ‎Ss «recombinant vector‏ ناقل غير متجانس ‎<heterologous vector‏ و/أو ناقل خارجي المنشاً ‎.exogenous vector‏
7. الناقل ‎vector‏ طبقاً لعنصر الحماية 5؛ حيث يكون الناقل ‎vector‏ المذكور عبارة عن ناقل فيروسي ‎vector‏ 7::81» يتم اختياره من المجموعة المتكونة من: فيروسات هريسية ‎«Herpesviridae‏ ‏فيروسات حماقية ‎(Varicelloviruses‏ فيروسات غدية ‎((AdV) Adenoviridae‏ فيروسات مرتبطة بالغدة ‎¢Adena-associated viridae‏ فيروسات بيكولو ‎(Baculoviridae‏ الفيروسات البطيئة ‎Lentiviridae 15‏
8. الناقل ‎vector‏ طبقاً لعنصر الحماية 7 بذلك يكون الناقل الفيروسي ‎viral vector‏ المذكور عضواً من عائلة الفيروسات الهريسية ‎family Herpesviridae‏ و/أو جنس فيروسات ألفا الهرسية ‎Ss «genus Alphaherpesvirinae‏ الجنس ‎ed)‏ من الفيروسات الحماقية ‎«subgenus Varicellovirus 0‏ و/أو فيروس ألفا الهريسي الفرسي 1 1 ‎Equid Alphaherpesvirus‏ ‎(EHV-1)‏
‏9. الناقل ‎vector‏ طبقاً لعنصر الحماية 5< حيث يشتمل الناقل ‎vector‏ المذكور على واحدة أو أكثر من المتواليات التنظيمية ‎regulatory sequences‏ الإضافية»؛ إشارة تذييل ببولي أدينيلات ‎¢polyadenylation signal 5‏ عنصر منظم لموقع دخول الريبوسوم الداخلي ‎internal ribosome‏
‎site (IRES) regulatory element‏ تحاص و/أو عنصر منظم لببتيد 2 ‎2a peptide regulatory‏
‎.element‏
‏0. خط خلية عائلة حقيقية النواة ‎eukaryotic host cell line‏ يشمل ناقل ‎vector‏ يشتمل على متوالية معززة ‎promoter sequence‏ يتم اختيارها من المتواليات التي لها نسبة تطابق متوالية ‎sequence identity‏ و/أو تجانس ‎homology‏ بمقدار 95 إلى 7100 مع متوالية بهوية رقم: 1 ‎«(4pgG600)‏ متوالية بهوية رقم: 2 ‎(4pMCP600)‏ متوالية بهوية رقم: 3 (0430؛ متوالية بهوية رقم: 4 ‎«(pd55)‏ ومتواليات النوكليوتيد التكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منهاء ‎Cua‏ تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ تشغيلياً مع متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎sequence 0‏ محل أهمية؛ مختارة من المجموعة المتكونة من: جين محل أهمية؛ متوالية غير متجانسة و/أو خارجية المنشاً محل أهمية؛ أو متوالية تشفر مستضد ‎antigen encoding sequence‏ محل ‎(dra‏ ‏حيث تؤدي المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية النوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل الأهمية؛ 5 بذلك تكون المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة عبارة عن متوالية معززة غير متجانسة ‎<heterologous promoter sequence‏ و/أو متوالية معززة خارجية المنشاً ‎exogenous promoter‏
‎.sequence‏ ‏حيث يكون خط الخلية العائلة ‎host cell line‏ المذكور عبارة عن خط خلية ثديية ‎mammalian‏ ‎cell line‏ أو خط خلية حشرية ‎cell line‏ )00860 يتم اختياره من المجموعة المتكونة من: خط خلية ‎(PK/WRL cell line 0‏ خط خلية ‎(RK13 cell line‏ خط خلية ‎(MDBK cell line‏ خط خلية ‎cell‏ ‎«ST line‏ خط خلية ‎¢AI-ST cell line‏ خط خلية ‎«VERO cell line‏ خط خلية ‎«Sf9 cell line‏ 1 خط خلية ‎cell line‏ زائد 57 خط خلية ‎Ss «MDCK cell line‏ مشتقات منهم.
1. مجموعة ‎kit‏ تشمل 5 أ خلية (خلايا) عائلة ‎<host cell(s)‏
ب. عامل كاشف (عوامل كاشفة) لنقل العدرى ‎«transfection reagent(s)‏
ج. وربقة بنية ‎«instruction leaflet‏ و
د. ناقل ‎vector‏ يشمل متوالية معززة ‎promoter sequence‏ يتم اختيارها من المجموعة المتكونة من المتواليات التي لها نسبة تطابق متوالية ‎sequence identity‏ و/أو تجانس ‎homology‏ بمقدار 95 إلى 7100 مع متوالية بهوية رقم: 1 (86600م4)؛ متوالية بهوية رقم: 2 ‎«(4pMCPO00)‏ متوالية بهوية رقم: 3 ‎«(p430)‏ متوالية بهوية رقم: 4 (0455؛ ومتواليات النوكليوتيد التكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منهاء ‏حيث تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ تشغيلياً مع متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎sequence‏ محل أهمية؛ مختارة من المجموعة المتكونة من: جين محل أهمية؛ متوالية غير متجانسة ‎heterologous sequence‏ و/أو متوالية خارجية المنتضاً ‎exogenous sequence‏ محل أهمية؛ أو متوالية تشفر مستضد ‎antigen encoding sequence‏ محل أهمية؛ ‏حيث تؤدي المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية النوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل الأهمية؛ ‏بذلك تكون المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة عبارة عن متوالية معززة غير متجانسة ‎exogenous promoter ‏و/أو متوالية معززة خارجية المنشاً‎ <heterologous promoter sequence .sequence 15
‏2. طريقة لإنتاج ناقل ‎evector‏ تشمل:
‏أ. توفير متوالية معززة ‎Jail promoter sequence‏ متوالية بهوية رقم: 1 ‎«(4pgG600)‏ متوالية ‏بهوية رقم: 2 ‎«(4pMCP600)‏ متوالية بهوية رقم: 3 (0430؛ متوالية بهوية رقم: 4 (0455)؛ أو 0 متواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منهاء حيث تؤدي المتوالية ‏المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل ‏أهمية؛ و/أو متوالية تشفر مستضد ‎antigen encoding sequence‏ محل أهمية؛
‏ب. دمج المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة من الخطوة أ) في أساس ناقل ‎vector‏ ‏مشتق من فيروس؛ الذي يتم اختياره من المجموعة المتكونة من: فيروسات هريسية ‎(Herpesviridae 5‏ فيروسات حماقية 721166110710566 فيروسات غدية ‎«(AdV) Adenoviridae‏ ‏فيروسات مرتبطة بالغدة تشضبه الفيروسات الصغيرة ‎Parvoviridae like Adena-associated‏
‎viruses‏ فيروسات باكولو ‎(Baculoviridae‏ الفيروسات القهقرية ‎«Retroviridae‏ الفيروسات الجدرية ‎-Poxviridae‏
‏3. طريقة لتحضير خلية عائلة ‎chost cell‏ تشمل: 1 إعداء خلية عائلة حقيقية النواة متحررة ‎permissive eukaryotic host cell line‏ مع ناقل ‎vector‏ ‎Jodi‏ متوالية معززة ‎promoter sequence‏ تشمل متوالية بهوية رقم: 1 (6600ع8م4)؛ متوالية بهوية رقم: 2 (1105600م40)؛ متوالية بهوية رقم: 3 ‎(pd30)‏ متوالية بهوية رقم: 4 ‎«(pd55)‏ ومتواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منها ومتواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ ووظيفية منهاء 0 حيث تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ تشغيلياً مع متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎sequence‏ محل أهمية؛ مختارة من المجموعة المتكونة من: جين محل أهمية؛ متوالية غير متجانسة ‎heterologous sequence‏ و/أو متوالية خارجية المنتضاً ‎exogenous sequence‏ محل أهمية؛ أو متوالية تشفر مستضد ‎antigen encoding sequence‏ محل أهمية؛ حيث تؤدي المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية النوكليوتيد ‎nucleotide sequence 5‏ محل الأهمية؛ بذلك تكون المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة عبارة عن متوالية معززة غير متجانسة ‎<heterologous promoter sequence‏ و/أو متوالية معززة خارجية المنشاً ‎«exogenous promoter sequence‏ ب) استنبات الخلايا المنقول إليها العدوى من 1( تحت ظروف مناسبة؛ و ‏ج) حصاد الخلية العائلة ‎host cell‏ المذكورة. ‏20
‏4. طريقة لتحضير تركيبة مناعية ‎immunogenic composition‏ أو لقاح ‎vaccine‏ لتقليل حدوث أو حدة واحدة أو أكثر من العلامات السريرية المرتبطة مع أو الناتجة عن عدوى؛ تشمل الخطوات التالية: ‏1 إعداء خلية عائلة حقيقية النواة متحررة ‎permissive eukaryotic host cell line‏ مع ناقل ‎vector‏ ‏5 يشمل متوالية معززة ‎promoter sequence‏ تشمل متوالية بهوية رقم: 1 (6600ع8م4)؛ متوالية بهوية رقم: 2 ‎(4pMCP600)‏ متوالية بهوية رقم: 3 ‎«(p430)‏ متوالية بهوية رقم: 4 ‎«(p455)‏ ومتواليات
نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ منها ومتواليات نوكليوتيد تكميلية ‎complementary nucleotide sequences‏ ووظيفية منهاء حيث تتصل المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ تشغيلياً مع متوالية نوكليوتيد ‎nucleotide‏ ‎sequence‏ محل أهمية؛ مختارة من المجموعة المتكونة من: جين محل أهمية؛ متوالية غير متجانسة ذ ‎heterologous sequence‏ و/أو متوالية خارجية المنتضاً ‎exogenous sequence‏ محل أهمية؛ أو متوالية تشفر مستضد ‎antigen encoding sequence‏ محل أهمية؛ حيث تؤدي المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة للتعبير عن متوالية النوكليوتيد ‎nucleotide sequence‏ محل الأهمية؛ بذلك تكون المتوالية المعززة ‎promoter sequence‏ المذكورة عبارة عن متوالية معززة غير متجانسة ‎<heterologous promoter sequence 0‏ و/أو متوالية معززة خارجية المنشاً ‎exogenous promoter‏ ‎«sequence‏ ‏ب) استنبات الخلايا المنقول إليها العدوى من أ) تحت ظروف مناسبة؛ ج) حصاد الخلايا المنقول إليها العدوى من ب) و/أو الناقل ‎vector‏ و/أو مكونات الفيروس؛ د) تنقية ما تم حصاده من الخطوة ج)؛ و ه) خلط ما تم حصاده المذكور مع مادة حاملة ‎carrier‏ مقبولة صيدلانياً.
ما« ني 2 ¥ تي 4“ ‎ox J‏ _ ‎Sh > 1‏ ‎Eas‏ 3د ل نييلت ب تت ‎i aL amet \‏ ‎i id ae 2‏ ف 7 ال . ب ‎gmt 0‏ ~ الا اماي ‎Na +‏ ‎em Won . ,‏ ‎mm “Cope 0‏ ‎rm ) 1‏ حملي د # ‎rat Fe‏ ب ‎perm‏ ‎ee T Wn \ 1‏ ‎rrr)‏ ا و اللاي ال ا سو 1 © ‎Tre‏ د ‎gr La FEAL Sn :‏ [ - - | ا الم الا 1 } ~ 1 1 ‎ET‏ ‎i Tr i‏ ‎i ‘ > f‏ ‎t‏ 1 ‎i‏ 2 ¢ 1 ‎i ! 1‏ 1 ‎i 1‏ 1 ‎i i +‏ « : | + 1 ‎“pa FT Oo‏ ب 0 = | فصل ‎t‏ ‏< ! « ‎i woh‏ و اي ‎yg mn‏ 2% 3 ‎oY‏ ‏“ ‏3 5 1 \
‎iv : ٍ‏ © ‎Te‏ يط م©لك<1)..' ي]_>__]لو-و/7_ ‎FUN‏ ‏مستي لت متت تب ‎NRT‏ ‎EE wT‏ شكل ‎LY‏ ال ‎Ts‏ ‏0
: i MC 1 ‏إ‎ ‏إٍْ‎ i +; Lig TE \ i ! ‏لبا‎ i 1 i dm ow . : : 7, ‏ا‎ | Hola? « fw an ay 1 ‏إٍْ‎ wy [= $ z hk) # : £ ir ‏شكل‎ ‏إٍْ‎ £4 7 1 ْ: J JR, fc ih Swe Gow a ‏إٍْ‎ ‎i Ty i ‏سبيت ميلا‎ 2 SE ‏دا لسر‎ i 1 i . ‏ل‎ - i : Som am . i ْ ‏الك‎ ig 1 “iE a ng vie ١ — PN” ‏نب‎ wife .- ‏قا‎ Sy” : ‏به 1032 لأست إٍْ‎ Ne” ‏سبلا‎ “Ya” : —
‏اا الا اا ااا‎ “a” ْ \ ‏إٍْ |( يسمي ا أت‎ { oo } 2 TTT gr ‏إْ‎ ‎TTT la ْ ‏سنس ل‎ aa = ْ ‏إْ‎ NUT ‏الا 8 الوق 2 اد مر‎ ْ TE ‏الوا ريرص‎ a Lh ol { RE wa ‏ا‎ a an §F Ea DELS Na i \ ‏يي‎ v7 ‏اجا «ه يب" | _' من‎ a ae Lay pr TY ‏سم مر‎ | a A lel - ْ ‏إْ ا ا | | | | أ © ا‎ ْ ‏ا اد ادا ل اا احج"‎ ‏إ‎ 1 or NS a LN NN NN ‏ل" ا ا ا 0 ص‎ 0 ‏ااا‎ LLL 0 LT { ‏ا ؟‎ EH EIN 2 SEAN SNE TEEN TNA SEN TEAR oa = i SEN Sa" < i od a dd dd J) ET \ : al Wo A ‏ب‎ 1 ‏ار بساك : ينا‎ yy» oa } , QV ‏قراوز‎ : 1 ‏كني"‎ wg» ‏“لك‎ ْ { = ‏"بالا ايع‎ : 1 a Cg” i 3 ‏يا و‎ i i = ’ \ ‏إْ‎ 4 Oo \ } 1/3- 1/3-[ 70- | 70- | 1/3 { ; Go TIT aad ig ‏اروم روطان‎ ٠" [Bon 21 ‏و‎ ْ : CMV[T\ "1485-145 ‏برحو 88 برو‎ lee] \ ن١ ‏و( و 71 وروا‎ | PY \ ‏8م جو1ا8‎ Vv) |v) |v) a LE AREA & Le] 00( Fr |) : ‏ا‎ v ‏اا‎ a ‏له‎ " vars] ‏ا‎ : ; 0 5] CS ¢ ‏شكل‎
[13 3 py { 3 } i / 4: ‏“فى ا‎ {* TRY} / 1 ‏ان‎ » WE ‏جا / | زجي‎ 7 ‏ا ب‎ “aT ‏يمسج‎ ~ 1 — xy ‏يي‎ » ™ ‏لكب‎ 0 TT 7 “NN TAY a * 3 i Cz {raavae vary 1 ‏ا‎ _-_ {rvraey o ‏بيت‎ > SC ) ‏ال تا‎ NN THEY AAT) ENE ‏اا‎ ‎Are {Herat ang ‏تن‎ % o Nu F A » RIES CUE \ ny Nr ren (Yes) " an { Ripon, Nw me \ ‏حا حل محص "ب"‎ ‘on 0 WN Zp £80 (ative) A TARY Fo mn heey wy ‏تي‎ [(BAVA} ‏ب‎ Sea BY ‏مك “بر‎ Hy Menai ks & = wl ¥Y oS Ev . & «y ‏راي‎ ‏تب‎ { PEAS.
EYAY } - > AE ‏تسا‎ tray ‏ا ف اح‎ 3 SH ‏ص تب‎ > Te AEE QV wom (£1AAY ‏سس‎ ‏ايد - نب‎ ae © ‏م‎ i yn A ‏تت‎ 2# WAVY end 5 ‏من اتعلين‎ a ‏بموضع‎ sat ‏ؤم التروسية الجنتومية‎ Salis 3 atl ‏الصحيطة بر ضع الإفراج مق‎ dn alt ‏رسيه‎ GARTNER, SR ‏الانتقاني كوقم‎ at ‏اتعيير اشانقاق المعزن الذي يعي عن‎ Ha U8 ‏من‎ Sag Fst ‏جين اتتقاني‎ Flips ESTE FEET RT Seed Srp ‏موطيع انشطان‎ ‏من ين مقارخ ا ا ع‎ DAN OR all BN ‏معز قلي اللي‎ patil Kans ‏لكانا ميسين‎ 3 Es ‏برج‎ ‎CE SBE ae Pa ‏من‎ Sled Rust HBr ‏الامييسيتين‎ Ag lis “ote 2 ‏شكل‎
‎a”‏ 4 & فقي ‎eee a Wy‏ 58 7 قا من 3 > ملم 3 ا ميل >< ااي ‎om 9‏ 3 كحت ‎v 1‏ = - ‎ta *‏ ‎wn \‏ ‎AY‏ - عي ِ ص ب" £7 ‎١‏ 1 ء ا ‎uw n oo $9 1‏ د & 7 خج 1 & ٍ هل 1 7 ‎i‏ ‏ج ‎TANTEI‏ 01 > ب م إل ‎TTT ON‏ ‎a‏ تقض لم اد رار ‎aS. ed AYE‏ ً ‎ey Si‏ ّ شكل +
و 1 ١٠ ‏ا ااا‎ bo a * EEN ‏ا‎ ‎a : ‏ا ا‎ ‏اله ا اا‎ ‏ا‎ ‏ل‎ ‏ااا اا‎ 11 4 wir م 1 ع 5 أ ب ‎Ty‏ ‎YE BSN‏ ؟ ‎١| ١٠‏ هه ‎LY vrs‏ # لا اب ‎ee | ee ee ee‏ ا ‎RR a :‏ : ل ‎REE‏ ا ‎E SRY‏ ‎a |‏ ند ا م الم ‎E‏ ‎Ea i‏ ا ‎SNE‏ ‎i‏ ا ا ‎Eww aE‏ ا ‎i‏ ا ا 5 ‎a‏ و وا ‎ee. a‏ امإ إ 9 9_9 9 9 ا ل ٍ ا إ ‎se‏ ل ل ا اا لاا ال ا الك إْ هر ‎a.‏ ‏إْ ا اام ‎Sma i‏ ا ‎Lo A |‏ ‎CSE sn mma Sm i‏ 1 ااا الا ا ال ‎Daa 8‏ ا ‎a‏ ‏2 ا ا ا ل ‎nb essen | SEER SS Se Te Mande‏ لس د د ل ‎A z 7‏ 85 : \
‎XY. 8 3 AY‏ + ; ‏ب‎ 3 C ‏ءءء‎ ‏و‎ { 3, a: [13 ¥ “ 1» = : 1 ¥ z ys A ‏شكل‎
ا \ 11 $5 : ‎Ya ْ‏ إْ ‎i 3‏ ‎i‏ 8 1 \ ‎i‏ 8 ا ا ‎i i 8 3‏ ‎i a . 8 i‏ ‎i i § 3} 3‏ ‎i « § 3} 3‏ ‎i‏ 8 ؟ة ‎i R‏ { { ‎iN NEN 0‏ } } 3 8 5 8 ل منبجء ‎i ١!‏ { ا ا ا اسان متحي تتح تن سيت سن ةلأ ‎A‏ { ‎i‏ 8 ؟: ‎yk 8 : RR‏ ‎VY 3 i 85 HEN }‏ ‎fe fl Besse ie flees‏ اده ا ‎NN ْ‏ 11 إٍْ إْ ‎HY \‏ 11 تس ْ 1 نمشنسشششسسسسسسسسسسس ‎i Yona oT ARE Eee BR BR‏ الل ‎aT ee‏ ‎aN | & 5‏ 1 1 ‎i { 885 0 8 i‏ ‎N SRN‏ ‎١ aes fd NEY Es NR 3 © {‏ { ؟ التهلتتتتس كت ماقتس |س/سس' اا ل اداه اه ةا ا 4 3 ‎art A HRY a‏ ْ ‎i i 58:5 8 8.25 8 § i‏ ‎HB FEY 8 Pd‏ ‎i i 58:5 8 8.25 8 § i‏ ‎i 3‏ خا ‎nosey‏ م + ‎Ls Woy‏ لاغ تخ ‎a ui 5 HY‏ { ‎KE ¥ ou «ar = Co i‏ : ف ‎i‏ ‎i 3‏ ‎i 3‏ ‎i 3‏ ‎i 5 » 3‏ ‎١ “gop |‏ ”ح" ‎i 3‏ ‎i i‏ ‎a‏ ‏» ‏1 3 أ ‎i‏ ‏3 ب ‎i‏ ‎i 3‏ ‎i 3‏ ‎i 3‏ \ ديع هيه ع يي ةع عي م ع ع ع ع ‎AN‏ يخ 3 ‎i i 3‏ ‎i i 3‏ ‎i i < 3‏ ‎Y 0 \‏ بجا ‎١٠٠١‏ ‏} 0 { { ‎i i 3‏ ‎i i 0 i‏ { 8 0 { { ‎i i = 1‏ اس١١“>'#“ه‏ “١٠ت‏ فلإ المستتتتسيى تتا الا ميري 2 ‎i‏ ب 0 { ‎i‏ ‏4 ‎Yn ْ 0 0 ْ‏ ‎i‏ 0 0 ا ‎١‏ ا 8 لجح ددجا لجح ججح لتحم & + ‎٠‏ . 8 ‎i |‏ اا مهدا ‎i i 0 0 i‏ ‎x i‏ ب 1 1 ْ تس ل ]متسستسسناً سا ا ‎er‏ ‎i i 3‏ ‎i i 0 N i‏ ‎i i a NN 3‏ ‎i i 3‏ ‎Lt TR J ْ‏ ‎NN NN‏ ْ ‎No‏ . . 0 . ‎i Vogt Fn AN ee NNW NN 1‏ ‎i ‘ih 3‏ ‎Ww 13 : £0 n 3‏ 3 } ا ل 33 ” 5 ‎wi otis BY‏ { ‎ay 3 “ 3 .‏ ; 5 صر باج ‎TY‏ لطلثى ‎Var REEL Ty py‏ ‎i 1 : 3‏ ‎i iS 3‏ ‎i : 3‏ ‎i 3‏ ‎i # 1 3‏ ‎wy in w i‏ \ = ¥ \ 3 { ب ‎i‏ ‎A a aaa aaa aaa aaa anal‏ 1111113 : -
1 A 1.» 1 3 } / ay & ¥ Tt) By ‏"ين‎ 61 1 / “3 z° {¥¥3} Te / et TL Ve" ‏الح‎ sth Ww Ya aren) QOD 4 NN {rvi-reyy N° I Ng SYP REY) 8 ‏قي و‎ )117( 8 8 ‏ا‎ 2, 5 \ Are" pave i 7 75 ‏"ص‎ A ‏“سن ل‎ 0 0 “) ١ع” ‏رمد‎ DE 1) 2147 ‏اح ا 8 ظ‎ ّ \ so ARYA is sy xr {ITAA 36 2 35-4 77[( 7 ~_ © Al ‏جروج‎ NX Ed Fy wiry uy. M 2 ( 4 ) ) A 5 & ! ‏و3‎ } a rE “ = { Je 0 ‏نب ا ا‎ SS 0 wot fTARASTY EY) Flank & PY ‏من‎ TD lip ‏الفيروسيه المحيطة‎ Ait lia ‏مترالية .5م03‎ Fankd ial ‏الأدراج من‎ el pt ‏الصحيطة‎ ee 3 GBR Bt hind 075 ‏استرالية‎ ‏الذن يعبر كن الجين الانثقاتني 4330م‎ ead FEES pad HIAY SRS A pat Sl ‏ين اتتتاتى‎ ation TEE EAE OR ‏تسل الانتضاج تناكل با ميد‎ Ape Le ‏جين مقاوم‎ ‏مضع‎ Sali, Moti, ‏انشطان إتدوكليان تتييد.‎ Bg ‏يوضع‎ ‎111 Bam ' ٠١ ‏لي‎ it ١ ‏"ص‎ “١ ‏ف‎ ‎ْ “yy a" £Y & “Ya” 2 Te i’ 7 ‏ع‎ I ١١ ‏شكل‎
ٍ ا د رن ل" يق ا ‎Ye‏ ‎EE‏ ‏= ا ل وق لتاق : ‎pe‏ ‏5 ا 0 ‎smn‏ ‎Sn EEE BERN EE Xs‏ ا ا ال ‎wenn EB‏ ا اا # ‎aa he‏ 0 ااا 0 الا الا ا ا ا ا رز 0 ; ‎i . SE‏ 8 0 يب ليج ٍ ا : 0 ا 8 0 = ‎sa vy‏ : : ا ‎Hy yy sy F »‏ ‎Hy oo”‏ صن شكل ‎VY‏ i 3 13 5 y PE ‏#ا صن‎ Ee meer] ! See LL ‏و‎ Le y 1 TN ‏“من لاج‎ 5 1 ‏ا لاسو . وو‎ Lan 1 ‏ا‎ 3 5 ١ £ : ¥ ‏ف‎ “a tT 3 a al \ i 8 4 ‏و‎ ok i nl + RS | 5 DED i 1 Pd & ARR ved SE eT ٠ Op saad = a = 4 3 wy & ‏بن‎ ’ ar 7 ‏ب‎ ‏ا‎ 1 ~~ » 7 " wi” ’ i ot =" 7 3 - 7 1 ‏م‎ 5 a § ‏ا !و‎
~~ [2 3 ‏”ين‎ +o er vr & “er Bi
: i, By Th pee ‏ال‎
= I» == x
Riana & 2 ‏اسان‎ BF ‏ااانا 1 7 ص‎ Hy eid ١؟ ‏شكل‎ ‎! ba
‏اسح أ اله‎ TT es ‏حِ‎ Po ‏إٍْ‎ z ‏“بي نب‎ ope jr Hy ow : og ‏ا صر دي "ب‎ | we" iy ‏ناا اص اد‎ iv : mm tees wma REE ‏الس‎ ‎Emm : i WEEE ENT ps is Yas BE a aS ca a, Ye ao Lh saws ‏ل ا تت ا وه ال‎ ‏ا‎ BLOTTER E EE a ENE ‏ا ع ات‎ - || © pve ‏ال ا ا‎ ‏ا أ از ااا ا‎ ‏ا اس ل اا‎ ‏ا الت« له ا‎ ‏جا ال 3 وا ا الل‎ EEE ‏ل ال ا‎ 0 aS ‏اليب‎ ‎Ss ‏ل‎ EE EE EEE Ea Ys fa ‏ااا ال‎ aN i ‏و‎ ‏ل ا ل‎ EY hn ‏ا م‎ Ve ‏شكل‎ ‏ا ااي راع‎ 0 CAY ‏حب متوسط‎ dala JY ! $a go ‏باج‎ Lg ‏بروتين‎ 2 CAMS Yio ‏اليا مغبرة كن‎ ‏ميديم‎ Sen VIZ CAV2 CWIVie BRS F CAV? CMVie CPV VP2 (Desp) CAV2 CMVie £PV VP2 (Gen0.95) AS oS \& ‏شكل‎ ‎{ SN Sm be gla . 3 as ‏حصلا | ليست | دصلا | ينيع اتسيف‎ | snes ‏الارتياط‎ 5d 9 ‏بروتين ناتج‎ ern ‏ل يروتين‎ San dive CAVZ CMVie BRSV F Boy [ews [oa cava gG430 CPV ‏دي‎ rere ‏ليم احج‎ save frien YE NY {Daspl) = 3 ‏جا‎ TA CAVZ gGA30 CPV ‏مي‎ verry wy ar | ‏يرمع كج‎ ears ‏مج‎ . {Gen 95) CAVE MCR4SS CPV ‏حي‎ YEATES vino ‏«جوجيييا‎ wo va raven 54 {Gen.
Bh} ‏ا‎ a EEE J opvvezamoas | coy vez papa ١١ ‏شكل‎
تخفيف ‎PBS‏ ‎in |‏ = يد »ا د ‎SS]‏ خا ل ا ع ‎a CAV-2 CMYieBRSV‏ ‎Saga‏ ‎SRE‏ ا . بي ‎EE ea bons‏ ناتج التختل. | ‎a 8 CAV-2 gGAZDCPY VP (Despl)‏ ا ‎Le‏ ‏دي ‎fe Eh {Hert‏ ال ‎Sh Naa ag‏ ‎gis )‏ التطل ) ‎PE (Send BS)‏ 617 2430و 00/2 ‎Se‏ ‏ا ا ا ا ل ا اا ) ناتع ‎Jia‏ ) (66005) لصحيل عار رت ‎BB‏ « # 1 ‎Thm‏ ا 0 التق شكل ‎NY‏ ‏المواد الطافية / ناتج التحلل من الخلايا المصابة بفيرومن ناتج عوذة الارتياط ‎cov‏ مي ل ‎v2 cae‏ ‎cpavie 8 g‏ فيروس ‎REC.‏ ‏مي | ‎RV VPZ | CPV VP2‏ ع ‎BRSV‏ ‎{Daspi} {Gen0.95) | (Gend.85)‏ ‎Te |‏ جه | ‎Tee‏ ‏مم | .د | ‎en‏ ‎ew eee]‏ ا ‎Fle‏ ‏| غيم | اج | جه | د ‎Foe‏ ‏| *+ت | / | ‎Toe To‏ م | د | 0 | د انض ا ل 7 | لض 3 شكل اب ‎ins Stan Ce‏ بزوثين . الخلتيا المجيرة ‎rabG‏ عاق على فبروس ناتج عودة الارتباط عن ‎rabG‏ }%{ المتوسط ‎(ei Rand‏ متوسط ‎CAV2 5430 CPV VP2 [Gerd 5]‏ ‎CAV2 614106 8406 )0( "8‏ الأصلي ‎CAVZ 1460455 RabG )0(‏ ا | سمس ا شكل ‎VA‏
13 viz» a ‏آي ب " ل ب‎ ‏ا لوا ل اا الجا ا لكي اا‎ WN RR 555 ‏اا‎ 7 = 8 Pe Eee FER a Na 0 ‏كوب‎ ‏ا‎ NN NE. i & SERA Tan . = pH 0 aE ‏ان‎ ‏اا‎ NN ao 0 ‏اا ا ا‎ X NN SURE TC ‏تق‎ ‎AR ARR: NERA N 8 RN RRR Sai ‏ا‎ Bed . . BE ‏الل حي‎ ‏ا ا‎ A ME yy ‏ل‎ yr ؟ ‏ا طم وصور‎ ‏مستت الي اا‎ R ‏ا ل ا‎ yo ‏ا ا ا ران 8 و ا ا‎ CaS 2 \ Bestar NN al a Hy ‏ل ال‎ TERRES NN HE SCR : ‏ا‎ © oo 0 hy i i cat Sulit 2 TOO; ——— NN ‏ل‎ a LL Elie La ‏ع ا ا‎ NN RR NN Re BR NNN ate ‏اا اد 0 الا د ب‎ RR LL Salta te NR Son ‏ا ل‎ ‏دجما ا تتا ا‎ ‏لاخدا‎ od No o ) wy ow > ~ ‏سل * الشكل 9 3 | ارس ايا‎ : ِ 3 ‏ب‎ a ES 3 fh _ | EE Sa on LF ‏ا الا‎ aa Ea a . NY NN ‏ا اا ا م ا ا‎ ‏ل اال ا‎ ND awe NES ‏أو‎ ١ ‏أ‎ ay EE Ned LL Ea A Na ‏أ اد ا‎ sey ‏ف ا ا ا ا ال‎ _ aa om HR SRE TE A ‏ب‎ . A y a 54a Nf, 2 2 = 2 41 ER ‏الشكل ؟أاب‎ Ye TT ET EE a Er ae = 8 - LE ‏تاي‎ ae . a Ee ‏ا ا‎ eae EE “Yaa a aha eh i a es. 1 Fes . = NN EE aE le EE . a PE Ee EE EE Lf 7 ‏سس‎ is 5 3 $8 v > 2% zis ‏الشكل‎
‏ال اي لاء م2‎ N or 5 t “xs a A NL ‏ا ارج‎ « UF 3 as 1X 1 ‏ل‎ air Irae a RD nk eg ‘oi "RR "8 " ْ ّ ‏يا ان‎ fh 3 wy a fog ‏م‎ ٍ ‏أ‎ ١ ‏شكل‎ ‎Cw ‎' 161 ‏التتتتسستستيسسس يس تسسص ييييتسسلاااا‎ 86 Yo 3 A} Mh HL ] ‏فو‎ ER I ْ ‏اس ا لاي — ات سأ يح إ‎ ٍْ RIN | - | ْ 1 EC fg : oo > ~~ BERR.
LF ْ ' ‏و سي‎ oo wT "v ‏”ع‎ 1 & Ye BEE RP ** ‏كي‎ “i” Ay me Sapo es en Sp Sy 0S YY ‏شكل‎ i 598 ‏إْ‎ ‏إْ ش؟ إْ‎ & 3 1 + ge NTT yen. \ > ‏إ]‎ ‎i * ss RX aT RT NTT } \ ; nn = XR ‏يا‎ i ‏ا مما‎ 0 A 1 ٍْ 0 ‏الإ‎ ‎\ 3 HN § VE eee NY SNE Sd 1 ٍ X FE nN 1 ‏ال ل‎ EN Wd
Cy. LN NA 3 Better ‏د نفزىطزفطحز5ز:ززطيطي يي‎ RR 0 SRR - ‏ال مج‎ : 1 ٍ 8 0 FN OR a i i 8 88 3 RN 8 ARN i i 8 TEN SA Nd \ | 8 NN NW = { ‏لا‎ eee N WN SN EN Co a aX oY - Cs iN BLN EY, I aN, i 3 3 1 1 i 0 ‏ا‎ os 1 ¥ 2 ve 3 T “la” ay ‏إْ‎ ‎YY ‏شكل‎ ‏د‎ n Yo ELLER # 5 Y ‏قا 3 قي‎ + ‏ل‎ T T 8 ‏و‎ re » : ‏إُ ملك‎ wy & ” wa a” sy A wy z 8 nn “ye s » wpe ‏ع‎ ky Si? } ‏ف‎ | 8 ْ ‏لمم‎ Yo ‏إٍْ‎ | ْ ً wa ‏ض‎ ‏إٍْ | بوط‎ | ْ
١ . | ١ ‏إْ‎ ‎i Cd ْ ] el eo veo {® ‏ل‎ 4 i IE 8 Vou # i 1 hee? ‏ممولم . .* ممهويييليبيية وو"‎ YY ‏شكل‎
١ or ‏رن‎ ‎Ava ‎Tax ‎[1 tv ‏رش‎ ‎fe ‎Yoo ‎Savogosst.... Hoe ‏لحا سينيد‎ NRA Donat ‏ينبي تبي‎ wy ‏ااي‎ wg ‏“صن و و‎ “g i 5 Gg bg We WW ¢ a 7 C = we no ‏ب‎ ‎“8 ‎= ‎Fn we ‏“و‎ ‎° ‎Tas ‎sy py ‏د‎ ‎0 ‏ري‎ ‏ب‎ 4 ‏ميب‎ £ Yous * : a
¥ . eo, ‏سي‎ ‎* ‏ا‎ 0 A A x ‏تي‎ Mra ‏ريح د ةا د الس‎ a ‏كد ضاي و سا‎ egg HEY aga 1 ‏"و‎ ‎Ye ‏شكل‎
EC wg z 0 ‏اام‎ ow ‏عق‎ 0 ‏و‎ £3 SL ‏و‎ ‏لا ؟‎ * XK <7 TTT o ‏ب‎ «* ad ‏ل‎ * * % San w + oe yd ’ & J *« 1 + * * * ogo 5 A > ‏ليك الا لطي‎ dn Pra Ta T Taya wp; Hogs mag in Bg OO 0 ny Tg “ga’ ‏خخ‎ a Vo” "6 ‏لبا‎ ix” ‏دء"‎ ‎££ i ‏أو‎ ‏كَ‎ ‎5" $ a 2» Hoax Se
4 ‏.ا‎ » * 8 51 ‏ب‎ 1, .ٍ © fox * BE ¢ + » - . 2 v . ¥ oa Bal = & ‏يرق‎ ¥ ¥ ‏ا‎ fod ¥ * 5 . ‏ا‎ &
& ‏.اه‎
‎. x . 2 a fe ‏سمس سس ممست سس سس ا تا ف‎ . gw ‏اول‎ 2 : 5 Si F 1 Tv a sige oa i ¢ { n i 5 od ‏م‎ § z 2, $ a" Ea ‏ل‎ 3 5
£54 ‏“يل‎ ‎fay Presa} ‏7ك‎ rey i & 3 2 via "> ‏يسا ا‎ NN © 9 Mf Pg ‏الل‎ ‏ن كرض # 083 8 1 ل“ ونس حجن “يا‎ Na MF TN ‏روعي ززل‎ OS NW 3 9 ‏ود‎ ‎¢ N NH 2 J ١ ‏اٍْ‎ ّْ TW wy a N Na 2 1:17 ‏ا‎ N “Ysa” SREY I (1504) © of 8 } \ LX Re 0 3 zany a Rw a ‏وب لدج«‎ ‏انه ألمت ماع ©؛‎ tw ‏ايه‎ ‎5 ‏ل ا ذا وز‎ kfviaA) ‏ب أي‎ 2 & 4 a ‏لخنم تن‎ Ta 8 £ Ja " =. . rd en {irr} 0 af Gg ‏نات‎ gravy Frank & ‏الإدراج من ا علي‎ ty iit Ron 3 ‏التيتومية الثم‎ TER ‏مشوانية‎ ‎Flank 8 ‏يموضع الإدراج من أسفل‎ Alt Fm i Se gat DRS, ‏متوالية‎ ‎pala ‏الذي يعي رز الجين الاتتقالس‎ 3 eal Joe: HEHE ‏راصةانعرية)‎ RR} ‏الانتقاني‎ a ‏معط‎ ada a ‏متوالية المعالجة‎ tered ‏تومي‎ dell ‏موظع‎ ‏المع‎ fC 1 ‏يع تقر هاس ب‎ ‏ل‎ cet as a aph Jae ‏أونية النواة التغيير ين ستارع الكاناميسين‎ Be prose Slain + Seat, Bool, Soil, Noth, ‏تيد‎ Se ‏ند ل اندو‎ fy : ‏ترح‎ ‏اميق ,لمر امسا‎ . Ehba Yo ‏شكل‎
1: ‏أ‎ 1 ¢ 8 3 63 {ITE ~ J = ‏ا‎ gr {1.1} > a od ‏وا‎ zh prey “EY ‏وفص ا لي وبع مح‎ YY 6 ‏با‎ { sy } : SO } 8 9 0 = N 5 ‏"ل‎ { CLARY VE j ~ a AN ‏اا‎ RB wy FL { SY } - Ng 0 DON Ya ‏ال ل‎ ‏ا‎ A 4 ¥ Ray 2 x VM ‏بلع‎ ‏م جح‎ \ “ga ‏ا ا‎ ١ z ”» 0 ‏مو‎ ١ ‏اح 0 ب ل‎ “z » { ee. 3 §oog ‏لح‎ \ he 3 oA {risarren} - 3 to ) « 1 3. { ‏فخ كر‎ } a.
A 0 3 0 A 5 { ied } “een RE J BET ‏يق‎ ANY re wir ‏آم رجي‎ Sey ra ~ { : ! 5 ina hein { ES we (£9AA) 8 ‏مام‎ = TUTE Arras) Fond BRAGS ‏الإدراج من فيس‎ ad ge Suds nk pal ‏متراتية :ةلثما سيد‎ Fendt BRFFG Sat ‏الإ زاج من‎ i pt Sao ‏الجيترمية‎ Se TIA Sg 855 Rag Cpt ‏من‎ eg ‏المعزر‎ SNEED eal ‏مما‎ ) ARN By pi ‏راسي‎ ER ‏جين‎ ‎Fipd hind od gay Samat ‏متراليت‎ ‎toca 1-53 feed ‏وضع‎ ‎promoter ‏من اجن مقايد جارد‎ Gell BED peal ‏محزّز كنيد وليه النواة‎ ‏لتتاميسين‎ ‎Kame ones ‏عقاوم لكانا‎ EeF Seal, Bool Sal, Now, Hint, ‏مراضع الشطان إلدركليان حتيدة‎ wd 8 ‏تمد‎ Bam, ‏اما‎ ‎YT ‏شكل‎
86 oy ty 0 Yi . ! + 1 ‏ب‎ ٍ orft1/3 ‏موضع اواج‎ orft70 go ‏موضع‎ ‎| Tee ~ ‏حي‎ ِ : ‏ااا ا‎ 5 1 1 ‏و نا‎ 5 ! Sha 2 1 wy on Bg i ed ‏د‎ ‎CoN in ‏ب و ا لمك‎ 1 QS ive uP hE = ‏ب‎ 1 ! Fo amet " ‏ب اج اياج ب‎ > ّ 4: ‏ب‎ 7 1 Y & Le - : ‏تي"‎ 1 rd - 1 2 7 1 - 2 7 4 ‏ب‎ 1 7 x ‏”م‎ ". t «? 1 . oe’ Pe 7 wg tm uw \ i x - 3, J ‏اي جح‎ ‏ا‎ ! LH fen . & , ‏تب‎ x 84 5 > - x hy ‏ا‎ _- TTT : #* 3 ‏“ل‎ ‎YV ‏شكل‎ ‎١1 4 i n oo r Y 3 he — SEE Rn 2 THREE < a Sod 3 “ee ‏نبا ب‎ i " ‏الو «أسجك كروك دي ايم‎ ame esr _ ol ATA 0" ‏ييحي‎ 0" TEER ‏ااا‎ ‏ل‎ VR SEE CR ad ‏نط‎ Ry TE a ‏ا‎ a a WR 00 eri - - - - ‏ات‎ an ‏لد‎ on ss SRE ONG a ‏جد‎ Wea Si a TON on ١ SE Bead So mS Lo i CE aaa 2a : 2 ‏وص ل‎ CE Ty : HERR TEIN ‏ا ل‎ EE CEI 0 ap ARE : Ch aE VON Ey : SEE ‏ل‎ ‏خا‎ wa Co ‏ب م ا‎ EEE EE SE : Si ‏شكلم ؟‎ wy om XA Ea ‏لحححح اح حا ا نت تا ات ل التست]‎ TTR ْ ser RARE RR a RARER RE ‏و‎ ‎} = ‏الي 0 .اال«‎ EE DE ‏إْ ]اج لد‎ ْ' CTY a ‏اخ حو لا 91 تنجو ل و‎ : ‏هي نما‎ PY ‏المي مما هق‎ Pm ‏كي كي مي جما‎ ow ‏إْ‎ ١ og 71 ١ $6 a 3 oO o iL \ n 1 » : 2 5 | C 3 J ‏ل ب > فكع‎ 0 ££ 3 yw ‏لي اب الي >" ل لج‎ ‏ا خخ‎ AON a a ag a” fem ‏؟©‎ = Sh sa im ‏درك‎ {TYE} a 0" ‏م‎ 1 T EF Se i WS ye wg ‏"ب‎ ‎0 >. “le i | Ri Wh : o® ‏ا‎ z 11 i : Kt » 0 "8 ١ og" i ‏ول انبا‎ Le fe a 4 Jr : a ‏رما‎ ‎5 ‏ل‎ ‎1 ‏ل"‎ 0" So SE ‏ا‎ 3 oO wy ‏“لي‎ ‎i, aR hr 1 Ce 0 ‏اللا‎ . 1 Vz og) FRR ‏يي‎ ~ i g ‏ص‎ ‎A ‏عد‎ ‎1 * ‏شكل‎
3} o A 7 Ye A ¥ fv Lo i 0) 0 ‏ا سر‎ ‏يأ تت ا و5‎ 5 2 7 ‏فا‎ ‎gd ‏ا‎ ‎¥a ‏لل ال‎ 3 0 7 1 3 1 ‏ف أ م ل‎ 8 f ‏ا ا‎ A ‏أ ؟] در لي‎ ¢ % / £3 ; J » 4 0 3 FL 8 1
« i. 0 ‏لاد الها اد ها لاد #إاسسب#مستبستسبس‎ ey ١ ١ ‏؟‎ » ts tv ‏ا قا‎ 11 a A” = i 13 Qo c Yo LES ' 2 ْ ‏من‎ i i noo dl > Cs yo SF \ !' ‏إٍْ ب م‎ A Y ‏إٍْ‎ ‎X 4X \ ; cl ¢ v- 0 rd ‏م‎ 5 \ x 3 A Se ‏أ ل‎ 8 5 he o ‏تحن ب‎ SN ES ِ 8 SS ‏لج ييا متت‎ 11 o 3” 2 3 X wv £ & 45 . V A q 3 ٠ £8 o 5” yy ‏شكل‎
‎a A 13‏ و ‎Yq ed 0‏ ‎Ad Ni‏ ‎FE i‏ إٍْ ‎i i HIN‏ ‎i : HR‏ ‎HE RN‏ ; ‎ed 1 0‏ ي[ 1 ‎i‏ م“ ا ‎RIN‏ ل ; ‎i‏ لب ‎i 1 HN BIER‏ ‎١ 1 1‏ ‎od 1 0‏ ¥ ‎i : 1 HIN‏ ‎HS‏ 11 : 1 ‎i 3 HS‏ : 1 ‎i HS HIN‏ } ‎١ 1 1‏ ‎ii HN 1‏ 1 % ‎i 0 iY‏ 0 ب ‎Bn‏ 3 0 ْ ‎i i 1% HE EEN‏ ‎١‏ ل هذه ْ ‎BN Lo‏ ل ل ب ‎i BR IR HE :‏ ‎BER BIR‏ الما ت_سننس1س مسف سسا <ة ‎Ag 3‏ ا ؟ ‎fs‏ مخ ‎YY‏ ‎i 3‏ ل ‎i‏ ‎pi‏ 2 5 44 ب 5 ‎Ad‏ ‎i“ 13 fo‏ : 0 لبأ 8 1 ‎EE‏ إ ‎of I‏ ¥ ‎i‏ 8 3 : ‎i‏ 3 3 ‎i 3 8 5‏ ‎i 3 8 5‏ ‎i 3 8 3‏ 3 3 3 : مو ‎Vo | A‏ ‎i “oy 1.7 § § i‏ ‎i‏ 3 3 ‎i‏ 3 3 § 3 3 : ‎i RX 8 3‏ ‎Coin‏ ¥ د ‎By Bi‏ أ 3 ات ل ل ا ‎٠‏ داج ‎RON RIE EEG Ses sans 1-22 Re 4 BS 0 SL 2 3‏ لطا ‎٠‏ 4 اه ا ‎fs ١.‏ م ‎YY‏ ‎“nt i 9‏ > i ‏ا‎ 2 1, ب" صم ‎١١‏ ل 3 ie 8 ١ : dy BN . ‏ل ا‎ Te 2 "0 8 /"ْ HIE 0 1 8 8 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 0 HE he 1 ih diy HE 3 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 2 8 8 of 8 8 8 of 8 ‏ا‎ 1 8 of 8 3 8 of 8 8 8 of 8 1 8 8 8 8 3 of 8 BIRR 0:11 ”" ‏ل “بي‎ Hh ‘ ٍ 0 Hh ’ AiR HE Yq Hin BE 3 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 A 3 8 8 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 8 8 of 8 EERE 0111 ‏ل ل ا‎ 8 i 8 od = 3 LIEN HE 3 8 "0 8 /"ْ 8 IER SHS 8 2 8 of 8 8 2 8 of 8 8 2 8 of 8 8 2 8 of 8 i$ 8 > 8 of 8 8 2 8 of 8 ‏َم‎ 8 1 8 a 8 8 2 8 of 8 8 2 8 of 8 8 1 8 of 8 ] 1 8 8 8 : 3 . 8 1 8 vg 8 > mons ‏اديع‎ Hy Hi Y ‏لاق‎ Bi Riis HH t 1
*. ‏ب‎ 1 Yo wm 9 \ TY ‏شكل‎
‏ان‎ ‏ج‎ ‎4 va x 1
٠. ‏و3‎ ‎) wy on "Yaw » " fm, yo fh 3” af TO vo a” »n 5 e “9 ‏"و‎ ‎"Yost .
4 . * " 8 Csi ‏د ا‎ FER AY ‏,“ها‎ " iy ‏”و‎ Ye 4 3 ‏لسسسسسة‎ ‏ا‎ xy ‏لمسسسسسسسما‎ ‏عل« هج‎ 1 eee FF ‏با م«‎ A
7ح ا ‎rex? «© 3‏ !0 اج ‎hy i.‏ فس = » , 2 ‎x A 4 -‏ ‎Vax ¥‏ ‎vy a”‏ ” "و ‎um‏ 3 4“ + : ‎Lent‏ ‏ض : وى ‎“a‏ لا ا وا شا ل و١‏ أ "وا لمسسسلستا و ما هع لمسسمسسسسسسا ‎PE 1+‏ = المسسسسسسما ‎verde‏ سج ‎nn‏ ‏شكل ‎V¢‏
‏ايان‎ 1. ١ A ‏ا‎ &5 23 ¥ 0 . 1 ‏و‎ ‎re ype» 8 0x = n J wo PR 1 J A ERE we A 7) Y& wx v 1) 93 Ye ‏د‎ * 1 5 Bux . naw “ov 3, £4 - 3 3 2 0 ‏ا حّ‎ 4” ه١‎ 8 Vs &= Boo Tr ‏ا‎ ‏امع‎ ely ger PR 8 o ‏شكل‎
‏نا‎ 23 NE & : — wy ‏“لي‎ ‎¢ ‏م‎ “J a ‏الخ‎ ‏قن ب‎
1 n ¥ : 1g 2 2 2 2 ١ : 5 % : 1 _ ‏د‎ : - 3 is 8 by fy g” ‏ب ان صو ا‎ 7 se ‏”و‎ ‎٠١ ‏شكل‎ ‎“3 21 5 2 ‏ح‎ se ‏«لى‎ ‎£ ma ie J" fi oO v 3 Be wn 3" 2 4 : F 5 | ty To align na NB HoH ‏قم‎ ‎ser wy ‏مره ”ها‎ TY ‏شكل‎
"+ ‏لس‎ ‎¥ ‏ن ا‎ ‏ابن‎ 2 Yoo ‏ؤ ض و‎ | ١ * 7 4 ‏اج‎ “1a” we a? we ‏”و‎ ‎+ 0 ‏تق لاض‎ = ala ua” YA ‏شكل‎ ‎| ‏"سن‎ ‎Yeo ‎8 ‎“1 a Aas & a “we int 3” ‏أن‎ AY sim rs i [R131] £3 ‏فأ‎ ‎(01 se a” vq ‏شكل‎
الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA519401361A 2016-09-20 2019-03-20 معززات جديدة SA519401361B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16189780 2016-09-20
PCT/EP2017/073481 WO2018054840A1 (en) 2016-09-20 2017-09-18 New promoters

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA519401361B1 true SA519401361B1 (ar) 2022-11-03

Family

ID=57046981

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA519401361A SA519401361B1 (ar) 2016-09-20 2019-03-20 معززات جديدة

Country Status (18)

Country Link
US (1) US11261464B2 (ar)
EP (1) EP3516064A1 (ar)
JP (1) JP7187448B2 (ar)
KR (1) KR102543774B1 (ar)
CN (1) CN109790550B (ar)
AR (1) AR109540A1 (ar)
AU (1) AU2017329672B2 (ar)
BR (1) BR112019005418A2 (ar)
CA (1) CA3036293A1 (ar)
CL (1) CL2019000705A1 (ar)
EA (1) EA201990719A1 (ar)
MX (1) MX2019003160A (ar)
NZ (1) NZ751966A (ar)
PH (1) PH12019500578A1 (ar)
SA (1) SA519401361B1 (ar)
TW (1) TWI780070B (ar)
UY (1) UY37407A (ar)
WO (1) WO2018054840A1 (ar)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3036386A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Canine adenovirus vectors
EP3516064A1 (en) 2016-09-20 2019-07-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH New promoters
NZ751014A (en) 2016-09-20 2023-03-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh New ehv insertion site orf70
AR109538A1 (es) 2016-09-20 2018-12-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Vacuna contra la gripe porcina

Family Cites Families (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US382425A (en) 1888-05-08 Brandt
US2909462A (en) 1955-12-08 1959-10-20 Bristol Myers Co Acrylic acid polymer laxative compositions
US3857423A (en) * 1971-12-27 1974-12-31 W Ronca Topical medicament kit with interlocking components
US4394448A (en) 1978-02-24 1983-07-19 Szoka Jr Francis C Method of inserting DNA into living cells
US4769331A (en) 1981-09-16 1988-09-06 University Patents, Inc. Recombinant methods and materials
US4769330A (en) 1981-12-24 1988-09-06 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus and methods for making and using the same
US5364773A (en) 1991-03-07 1994-11-15 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
US5338683A (en) 1981-12-24 1994-08-16 Health Research Incorporated Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins
US5833975A (en) 1989-03-08 1998-11-10 Virogenetics Corporation Canarypox virus expressing cytokine and/or tumor-associated antigen DNA sequence
US5505941A (en) 1981-12-24 1996-04-09 Health Research, Inc. Recombinant avipox virus and method to induce an immune response
US4722848A (en) 1982-12-08 1988-02-02 Health Research, Incorporated Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus
US5174993A (en) 1981-12-24 1992-12-29 Health Research Inc. Recombinant avipox virus and immunological use thereof
US4603112A (en) 1981-12-24 1986-07-29 Health Research, Incorporated Modified vaccinia virus
US4708871A (en) 1983-03-08 1987-11-24 Commonwealth Serum Laboratories Commission Antigenically active amino acid sequences
US4745051A (en) 1983-05-27 1988-05-17 The Texas A&M University System Method for producing a recombinant baculovirus expression vector
EP0173552B1 (en) 1984-08-24 1991-10-09 The Upjohn Company Recombinant dna compounds and the expression of polypeptides such as tpa
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
IL84154A0 (en) 1986-10-16 1988-03-31 Microgenesys Inc Polypeptides derived from the envelope gene of human immunodeficiency virus in recombinant baculovirus infected insect cells and vaccines against acquired immune deficiency syndrome containing the same
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
WO1990001543A1 (fr) 1988-07-29 1990-02-22 Intracel Corporation Procede d'expression genetique de proteines heterologues par des cellules transfectees in vivo
CA2003300A1 (en) 1988-11-21 1990-05-21 Franklin Volvovitz Skin test and test kit for aids
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
DE69032284T2 (de) 1989-03-21 1998-10-08 Vical Inc Expression von exogenen polynukleotidsequenzen in wirbeltieren
US5552143A (en) 1989-03-24 1996-09-03 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Recombinant cytomegalovirus vaccine
US5591439A (en) 1989-03-24 1997-01-07 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Recombinant cytomegalovirus vaccine
US5616326A (en) 1990-01-25 1997-04-01 The University Court Of The University Of Glasgow Recombinant canine adenovirus 2 (CAV-2)
GB9001766D0 (en) 1990-01-25 1990-03-28 Univ Court Of The University O Vaccines
CA2088246A1 (en) * 1990-08-01 1992-02-02 Dennis J. O'callaghan Gene encoding equine herpesvirus type i glycoprotein d, its gene product, antibodies and their uses
EP0575491B1 (en) 1991-03-07 2003-08-13 Virogenetics Corporation Genetically engineered vaccine strain
US5997878A (en) 1991-03-07 1999-12-07 Connaught Laboratories Recombinant poxvirus-cytomegalovirus, compositions and uses
DE4110962A1 (de) * 1991-04-05 1992-10-08 Bayer Ag Equine herpesviren (ehv), die fremd-dna enthalten, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in impfstoffen
US5643578A (en) 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
US6193983B1 (en) 1992-06-01 2001-02-27 The University Of Melbourne Equine herpesvirus glycoproteins
US5741696A (en) 1992-08-07 1998-04-21 Syntro Corporation Recombinant equine herpesviruses
US5801029A (en) 1993-02-16 1998-09-01 Onyx Pharmaceuticals, Inc. Cytopathic viruses for therapy and prophylaxis of neoplasia
IL108915A0 (en) 1993-03-18 1994-06-24 Merck & Co Inc Polynucleotide vaccine against influenza virus
FR2705361B1 (fr) 1993-05-18 1995-08-04 Centre Nat Rech Scient Vecteurs viraux et utilisation en thérapie génique.
DK0667912T3 (da) 1993-07-13 2008-11-10 Centelion Defekte adenovirusvektorer og anvendelse heraf i genterapi
FR2711670B1 (fr) 1993-10-22 1996-01-12 Pasteur Institut Vecteur nucléotidique, composition le contenant et vaccin pour l'immunisation à l'encontre d'une hépatite.
US5820868A (en) 1993-12-09 1998-10-13 Veterinary Infectious Disease Organization Recombinant protein production in bovine adenovirus expression vector system
ES2348013T3 (es) 1994-01-27 2010-11-26 University Of Massachusetts Medical Center Inmunización por inoculación de una unidad de transcripción de adn.
EP0758397B1 (en) 1994-04-29 2005-06-22 Baxter Healthcare S.A. Recombinant poxviruses with foreign polynucleotides in essential regions
FR2725726B1 (fr) 1994-10-17 1997-01-03 Centre Nat Rech Scient Vecteurs viraux et utilisation en therapie genique
FR2727689A1 (fr) 1994-12-01 1996-06-07 Transgene Sa Nouveau procede de preparation d'un vecteur viral
IL116816A (en) 1995-01-20 2003-05-29 Rhone Poulenc Rorer Sa Cell for the production of a defective recombinant adenovirus or an adeno-associated virus and the various uses thereof
FR2730504B1 (fr) 1995-02-13 1997-03-28 Rhone Poulenc Rorer Sa Procede de preparation de genomes d'adenovirus recombinants
FR2731710B1 (fr) 1995-03-14 1997-04-30 Rhone Poulenc Rorer Sa Virus recombinants exprimant la lecithine cholesterol acyltransferase et utilisations en therapie genique
JPH11502222A (ja) 1995-03-23 1999-02-23 キャンタブ ファーマシューティカルズ リサーチ リミティド 遺伝子供給用ベクター
FR2732357B1 (fr) 1995-03-31 1997-04-30 Rhone Poulenc Rorer Sa Vecteurs viraux et utilisation pour le traitement des desordres hyperproliferatifs, notamment de la restenose
FR2735789B1 (fr) 1995-06-23 1997-07-25 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants, leur utilisation pour preparer des aav, lignee cellulaire complementaire et compositions pharmaceutiques les contenant
US6090393A (en) 1996-07-03 2000-07-18 Merial Recombinant canine adenoviruses, method for making and uses thereof
US6156567A (en) 1996-07-03 2000-12-05 Merial Truncated transcriptionally active cytomegalovirus promoters
JP2002512501A (ja) 1996-07-03 2002-04-23 メリアル インコーポレイテッド 外来性ｄｎａを含む組換えイヌアデノウィルス（ｃａｖ）
US6183752B1 (en) 1997-02-05 2001-02-06 Pasteur Merieux Serums Et Vaccins Restenosis/atherosclerosis diagnosis, prophylaxis and therapy
DE19830141A1 (de) 1998-07-06 2000-01-13 Regine Heilbronn Rekombinante Herpesviren für die Erzeugung rekombinanter Adeno-Assoziierter-Viren
CA2337965C (en) 1998-07-31 2009-12-15 Akzo Nobel N.V. Attenuated equine herpesvirus
ES2300261T3 (es) 1999-04-08 2008-06-16 Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. Potenciacion de la respuesta inmune para aplicaciones de vacunas y terapia genetica.
WO2001042481A2 (en) 1999-12-07 2001-06-14 Genethon Iii Canine adenovirus vectors for the transfer of genes into target cells
EP1118670A1 (en) 1999-12-07 2001-07-25 Genethon III Canine adenovirus vectors for the transfer of genes in targeted cells
US20110091490A1 (en) 2000-06-30 2011-04-21 Nippon Zenyaku Kogyo Co., Ltd. Novel vaccine for dog
DE10233064A1 (de) 2002-07-19 2004-02-05 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh gM-negative EHV-Mutanten ohne heterologe Elemente
AR040601A1 (es) 2002-07-19 2005-04-13 Boehringer Ingelheim Vetmed Mutantes ehv negativos de gm sin elementos heterologos
FR2845395B1 (fr) 2002-10-08 2008-05-30 Agronomique Inst Nat Rech Vecteurs adenoviraux recombinants et leurs applications
WO2007081336A1 (en) 2006-01-13 2007-07-19 Five Prime Therapeutics, Inc. Mammalian vectors for high-level expression of recombinant proteins
EP3167900B1 (en) 2006-03-29 2018-11-21 Merial Limited Vaccine against streptococci
EP2097103B1 (en) 2006-11-30 2012-10-03 Variation Biotechnologies Inc. Influenza vaccine formulation
WO2009120339A2 (en) 2008-03-24 2009-10-01 President And Fellows Of Harvard College Vectors for delivering disease neutralizing agents
EP2310501B1 (en) 2008-07-23 2013-07-03 Boehringer Ingelheim Pharma GmbH & Co. KG Novel regulatory elements
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
NZ751014A (en) 2016-09-20 2023-03-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh New ehv insertion site orf70
AR109538A1 (es) 2016-09-20 2018-12-19 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Vacuna contra la gripe porcina
EP3516064A1 (en) 2016-09-20 2019-07-31 Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH New promoters
CA3036386A1 (en) 2016-09-20 2018-03-29 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Canine adenovirus vectors

Also Published As

Publication number Publication date
TW201823466A (zh) 2018-07-01
JP2019533438A (ja) 2019-11-21
MX2019003160A (es) 2019-05-27
AU2017329672A1 (en) 2019-04-18
EP3516064A1 (en) 2019-07-31
BR112019005418A2 (pt) 2019-10-01
WO2018054840A1 (en) 2018-03-29
US11261464B2 (en) 2022-03-01
AU2017329672B2 (en) 2023-07-27
JP7187448B2 (ja) 2022-12-12
PH12019500578A1 (en) 2020-01-20
NZ751966A (en) 2023-03-31
KR20190052705A (ko) 2019-05-16
CL2019000705A1 (es) 2019-06-21
AR109540A1 (es) 2018-12-19
TWI780070B (zh) 2022-10-11
KR102543774B1 (ko) 2023-06-19
US20180080047A1 (en) 2018-03-22
CN109790550B (zh) 2024-02-09
CA3036293A1 (en) 2018-03-29
UY37407A (es) 2018-03-23
EA201990719A1 (ru) 2019-10-31
CN109790550A (zh) 2019-05-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA519401361B1 (ar) معززات جديدة
Tian et al. Protection of chickens against hepatitis-hydropericardium syndrome and Newcastle disease with a recombinant Newcastle disease virus vaccine expressing the fowl adenovirus serotype 4 fiber-2 protein
JP6952112B2 (ja) 新規なｅｈｖ挿入部位ｏｒｆ７０
US10626414B2 (en) Swine influenza vaccine
KR20200002834A (ko) 이종 조류 병원체 항원을 암호화하는 재조합 갈리드 헤르페스바이러스 3형 백신
Qin et al. Identification of novel T-cell epitopes on infectious bronchitis virus N protein and development of a multi-epitope vaccine
Schädler et al. Virus-like particles in a new vaccination approach against infectious laryngotracheitis
Wernike et al. N-terminal domain of Schmallenberg virus envelope protein Gc delivered by recombinant equine herpesvirus type 1 and modified vaccinia virus Ankara: Immunogenicity and protective efficacy in cattle
Manoharan et al. Modified Newcastle Disease virus as an improved vaccine vector against Simian Immunodeficiency virus
Williams et al. A recombinant bovine herpesvirus-4 vectored vaccine delivered via intranasal nebulization elicits viral neutralizing antibody titers in cattle
CN117551677A (zh) 一种以5型腺病毒为载体的猴痘病毒特异性融合蛋白疫苗
Yan et al. Virus-like particles derived from a virulent strain of pest des petits ruminants virus elicit a more vigorous immune response in mice and small ruminants than those from a vaccine strain
CN115819522B (zh) 一种带状疱疹病毒疫苗、表达蛋白及重组腺病毒制备与应用
Chen et al. Optimized expression of duck Tembusu virus E gene delivered by a vectored duck enteritis virus in vitro
EP3768307A1 (en) New ehv with inactivated ul18 and/or ul8
Guo et al. gB co‐immunization with GP96 enhances pulmonary‐resident CD8 T cells and exerts a long‐term defence against MCMV pneumonitis
US11607449B2 (en) Synthetic plasmid DNA vaccine expressing a codon-optimized SARS-COV-2 spike protein
Goatley et al. ASFV antigens selected from genotype I immunised pigs are immunogenic, but do not protect against genotype II challenge
EA046215B1 (ru) Новый ehv сайт инсерции orf70
CN115990249A (zh) 一种登革四价dna疫苗及其应用
CN109295013A (zh) 一种免疫原性增强型小反刍兽疫n蛋白基因重组腺病毒的制备方法
Lin WenCheng et al. A bicistronic DNA vaccine against porcine circovirus and porcine parvovirus.
EA044935B1 (ru) Новая вакцина против гриппа свиней