RU98100448A - Фактор стимулирования костной ткани - Google Patents

Claims (27)

1. Полипептид, содержащий до 30 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 4, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или полипептид, содержащий до 25 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 5, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или полипептид, содержащий до 20 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 6, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или полипептид, содержащий до 15 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 7, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или полипептид, содержащий до 14 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 8, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или полипептид, содержащий до 10 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 9, и обладающий активностью стимуляции костной ткани; или функционально эквивалентный гомолог любого из указанных выше полипептидов.

2. Полипептид по п.1, отличающийся тем, что является синтетическим, и аминокислотная последовательность имеет молекулярную массу в интервале примерно от 1000 до 4000.

3. Первый полипептид, обладающий активностью стимуляции костной ткани, содержащий а) до 30 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему последовательность из 30 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 4, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гидридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или содержащий б) до 25 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему до 25 последовательно расположенных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной, как последовательность 5, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или содержащий в) до 20 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему 20 последовательно расположенных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 6, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или содержащий г) до 15 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему 15 последовательно расположенных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 7, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или содержащий д) до 14 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему 14 последовательно расположенных аминокислот из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 8, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или содержащий е) до 10 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду, имеющему 10 последовательно расположенных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 9, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид.

4. Консервативно замещенный вариант полипептида по любому из пп. 1-3.

5. Химерный фактор стимулирования костной ткани, содержащий полипептид по любому из пп. 1-4.

6. Синтетический полипептид, обладающий активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 19% консервативна и консервативна до 83% относительно аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1; или синтетический полипептид, обладающий активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 22% консервативна и консервативна до 69% относительно аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1; или синтетический полипептид, обладающий активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 25% консервативна и консервативна до 56% относительно аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1; или синтетический полипептид, обладающий активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 28% консервативна и консервативна до 42% относительно аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1; или функционально эквивалентный гомолог любого из указанных выше полипептидов.

7. Полипептид по п.6, имеющий по меньшей мере шесть аминокислот, удаленных из указанной последовательности, или имеющий по меньшей мере одиннадцать аминокислот, удаленных из указанной последовательности, или имеющий по меньшей мере шестнадцать аминокислот, удаленных из указанной последовательности, или имеющий по меньшей мере двадцать одну аминокислоту, удаленную из указанной последовательности, или имеющий по меньшей мере двадцать шесть аминокислот, удаленных из указанной последовательности.

8. Первый полипептид, содержащий до 30 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду обладающему активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, и который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 19% консервативна и консервативна до 83% по отношению к аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1, или его функционально эквивалентный гомолог, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или первый полипептид, содержащий до 25 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, обладающему активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, и который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 22% консервативна и консервативна до 69% по отношению к аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1, или его функционально эквивалентный гомолог, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или первый полипептид, содержащий до 20 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, обладающему активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, и который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 25% консервативна и консервативна до 56% по отношению к аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1, или его функционально эквивалентный гомолог, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид; или первый полипептид, содержащий до 15 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, обладающему активностью стимуляции костной ткани in vivo у млекопитающих, и который увеличивает содержание минеральных веществ в костях млекопитающих, с аминокислотной последовательностью, которая по меньшей мере на 28% консервативна и консервативна до 42% по отношению к аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 1, или его функционально эквивалентный гомолог, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид.

9. Химерный фактор стимулирования костной ткани, содержащий аминокислотную последовательность по пп. 6, 7 или 8.

10. Полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 30 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 4, последовательность 5, последовательность 6, последовательность 7, последовательность 8 или последовательность 9, его аналоги, в которых аминокислоты в последовательности могут быть замещены, удалены или добавлены, до тех пор, пока сохраняется активность стимуляции костной ткани, обусловленная трехмерной структурой последовательности, и конъюгаты каждого из полипептидов или их аналоги.

11. Полипептид по п. 10, отличающийся тем, что является, по существу, чистым, а аминокислотная последовательность имеет молекулярную массу в интервале примерно 1000 - 4000.

12. Первый полипептид, который содержит до 30 последовательных аминокислот, достаточно дупликативный второму полипептиду, соответствующему полипептиду по п. 10 или 11, или его функционально эквивалентный гомолог, так что первый полипептид кодируется ДНК, которая в строгих условиях гибридизируется с ДНК, кодирующей второй полипептид.

13. Химерный фактор стимулирования костной ткани, содержащий аминокислотную последовательность по пп. 10, 11 или 12.

14. Полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 30 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 4; или полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 25 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 5; или полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 20 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 6; или полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 15 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 7; или полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 14 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 8; или полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, причем указанный полипептид содержит до 10 последовательных аминокислот из последовательности, идентифицированной как последовательность 9; и консервативно замещенные варианты любого из вышеуказанных полипептидов.

15. Выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 4; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 5; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 6; выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 7; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 8; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 9, и консервативно замещенные варианты любого из вышеуказанных полипептидов.

16. Выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани, у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 4; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 5; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 6; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 7; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 8; или выделенный полипептид, обнаруживающий активность стимуляции костной ткани у млекопитающих, состоящий, по существу, из аминокислотной последовательности, идентифицированной как последовательность 9.

17. Средство для применения при предупреждении и лечении заболевания, связанного с костной редукцией, содержащее полипептид по любому из пп. 1-16 в качестве активного ингредиента.

18. Фармацевтическая композиция для промотирования роста костей, содержащая терапевтически эффективное количество полипептида по любому из пп. 1-16.

19. Способ повышения роста костей у млекопитающего посредством введения терапевтически эффективного количества полипептида с аминокислотой последовательностью полипептида по любому из пп. 1-16.

20. Применение полипептида по любому из пп. 1-16 для лечения остеопороза.

21. Применение полипептида по любому из пп. 1-16 для промотирования роста костей у млекопитающего.

22. Применение полипептида с последовательностью по любому из пп. 1-16 при получения лекарственного средства для применения при промотировании роста костей или лечении остеопороза.

23. Диагностический набор для определения присутствия полипептида по любому из пп. 1-16, содержащий антитело к указанному полипептиду, связанное с репортерной системой, которая продуцирует обнаруживаемый ответ при связывании предварительно установленного количества полипептида с антителом.

24. Антитело, связывающееся с полипептидом по любому из пп. 1-16, синтезированное с использованием одного из указанных полипептидов.

25. Выделенный ДНК-фрагмент, который кодирует экспрессию любого из полипептидов по пп. 1-16, и ДНК, которая отличается от фрагмента вследствие вырождения генетического кода.

26. Вектор, содержащий ДНК-последовательность, которая кодирует экспрессию любого из полипептидов по пп. 1-16.

27. Способ получения полипептида по любому из пп. 1-17, включающий а) получение ДНК-фрагмента, содержащего нуклеотидную последовательность, которая кодирует указанный полипептид, б) включение указанного ДНК-фрагмента в экспрессирующий вектор для получения рекомбинантного ДНК-фрагмента, который содержит указанный ДНК-фрагмент и способен претерпевать репликацию, в) трансформацию клетки-хозяина указанным рекомбинантным ДНК-фрагментом для выделения трансформанта, который может экспрессировать указанный полипептид, и г) культивирование указанного трансформанта, чтобы позволить указанному трансформанту продуцировать указанный полипептид, и извлечение указанного полипептида из полученной в результате культуральной смеси.