Claims (14)
1. Способ получения с помощью хроматографических методов вирусно-инактивированной фракции, содержащей фактор VIII, в котором исходя из криоосадка или плазмы крови и, при необходимости, с последующей обработкой гидроокисью алюминия, после растворения криоосадка посредством обработки фракции ди- или триалкилфосфатом и неионным поверхностно-активным веществом происходит вирусная инактивация, после чего с помощью мембранной хроматографии, исключая афинные мембранные системы, состоящие из полых волокон, проводится, по меньшей мере, одна операция разделения.1. The method of obtaining, using chromatographic methods, a viral-inactivated fraction containing factor VIII, in which, based on cryo-precipitate or blood plasma and, if necessary, followed by treatment with aluminum hydroxide, after dissolving the cryo-precipitate by treating the fraction with di- or trialkylphosphate and non-ionic surface the active substance is viral inactivation, after which at least one operation is carried out using membrane chromatography, excluding affinity membrane systems consisting of hollow fibers tion separation.
2. Способ по п. 1, в котором названная операция разделения происходит на размещенном в мембране или на ней ионообменном материале, в частности, на анионообменном материале. 2. A method according to claim 1, wherein said separation operation takes place on an ion-exchange material placed in or on the membrane, in particular, on an anion-exchange material.
3. Способ по п. 1 и/или 2, в котором вирусная инактивация осуществляется через технологическую операцию пастеризации, при необходимости за ней следует дополнительная операция разделения с помощью мембранной хроматографии. 3. The method according to claim 1 and / or 2, in which the viral inactivation is carried out through a technological operation of pasteurization, if necessary, it is followed by an additional separation operation using membrane chromatography.
4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором мембранная хроматография осуществляется на материале, который обладает высокой степенью сродства к фактору VIII. 4. Method according to any one of claims. 1-3, in which membrane chromatography is carried out on a material that has a high degree of affinity for factor VIII.
5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором материал, обладающий высокой степенью сродства к фактору VIII, модифицирован лигандами с высокими и/или низкими молекулярными весами. 5. A method according to any one of claims. 1-4, in which material having a high degree of affinity for factor VIII, modified with ligands with high and / or low molecular weights.
6. Способ по п. 5, в котором названный материал модифицирован антителами, ориентированными против фактора VIII. 6. The method according to claim 5, in which the named material is modified with antibodies oriented against factor VIII.
7. Способ по любому из пп. 4-6, в котором названный модифицированный материал, имеющий высокую степень сродства к фактору VIII, имеет иммобилизованные лиганды с высоким сродством к фактору VIII. 7. A method according to any one of claims. 4-6, in which the named modified material having a high degree of affinity for factor VIII, has immobilized ligands with high affinity for factor VIII.
8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором хроматографический материал позволяет осуществлять гидрофобное взаимодействие с отделяемым фактором VIII или же имеет соответствующие лиганды, которые передают гидрофобное взаимодействие. 8. A method according to any one of claims. 1-7, in which the chromatographic material allows the hydrophobic interaction with the detachable factor VIII or has the corresponding ligands that transmit the hydrophobic interaction.
9. Способ по любому из пп. 1-5 и/или 7, в котором очищаемая проба наносится на мембрану, содержащую ионообменный материал ионной силы и соответственно 0-150 ммоль хлорида натрия, при необходимости промывается водной системой более высокой ионной силы, и соответственно 200-400 ммоль раствора хлорида натрия, а затем элюируется водной системой высокой ионной силы, соответственно 500-1000 ммоль раствора хлорида натрия, причем поддерживается значение рН от 4 до 9. 9. The method according to any one of paragraphs. 1-5 and / or 7, in which the sample to be cleaned is applied to a membrane containing ion exchange material of ionic strength and, respectively, 0-150 mmol of sodium chloride, if necessary, washed with a water system of higher ionic strength, and accordingly 200-400 mmol of sodium chloride solution, and then eluted with a high ionic strength aqueous system, respectively, 500-1000 mmol of sodium chloride solution, while maintaining the pH from 4 to 9.
10. Способ по любому из пп. 1, 3-8, в котором названную очищаемую пробу наносят из раствора, который позволяет осуществлять связывание фактора VIII с антителами по отношению к фактору VIII, при необходимости, афинная мембрана с адсорбированным на ней фактором VIII промывается, а затем элюируется хаотропными реагентами в концентрации соответственно, к примеру, 1-6 М мочевины или в соответствии с солевым раствором, имеющим более высокую концентрацию. 10. A method according to any one of claims. 1, 3-8, in which the sample to be purified is applied from a solution that allows the binding of factor VIII to antibodies against factor VIII, if necessary, the affinity membrane with factor VIII adsorbed on it is washed and then eluted with chaotropic reagents at a concentration of For example, 1-6 M urea or in accordance with a saline solution having a higher concentration.
11. Способ по любому из пп. 1, 3-8, в котором
очищаемую пробу наносят из раствора очень высокой ионной силы на мембрану, которая имеет на своей поверхности гидрофобные лиганды и элюируется системами растворителей малой ионной силы.11. A method according to any one of claims. 1, 3-8, in which
The sample being cleaned is applied from a solution of very high ionic strength to the membrane, which has hydrophobic ligands on its surface and is eluted by solvent systems of low ionic strength.
12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором элюированная фракция, содержащая фактор VIII, концентрируется, расфасовывается и/или лиофилизуется. 12. A method according to any one of claims. 1-11, in which the eluted fraction containing factor VIII is concentrated, packaged and / or lyophilized.
13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором вирусная активация осуществляется путем обработки детергентом в количестве до 15 вес.%. 13. A method according to any one of claims. 1-12, in which viral activation is carried out by treatment with a detergent in an amount up to 15 wt.%.
14. Фракция, содержащая фактор VIII, получаемая путем применения способа, по любому из пп. 1-13. 14. The fraction containing factor VIII, obtained by applying the method according to any one of paragraphs. 1-13.