Claims (22)
1. Способ получения сахара 1,5-D-ангидрофруктозы, включающий обработку альфа-1,4-глюкана ферментом альфа-1,4-глюканлиазой, отличающийся тем, что фермент используют практически в чистом виде.1. The method of producing sugar 1,5-D-anhydrofructose, comprising treating alpha-1,4-glucan with alpha-1,4-glucanlase enzyme, characterized in that the enzyme is used in almost pure form.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что если глюкан содержит связи, отличные от и дополнительно к альфа-1,4-связям, то альфа-1,4-глюканлиазу используют в сочетании с подходящим реагентом, способным расщеплять другие связи. 2. The method according to claim 1, characterized in that if glucan contains bonds other than and in addition to alpha-1,4 bonds, then alpha-1,4-glucanlyase is used in combination with a suitable reagent capable of cleaving other bonds.
3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что глюкан представляет собой крахмал, а гидролазу, предпочтительно глюканогидролазу, используют в сочетании с альфа-1,4-глюканлиазой. 3. The method according to p. 2, characterized in that the glucan is starch, and a hydrolase, preferably glucanohydrolase, is used in combination with alpha-1,4-glucanliase.
4. Способ по п. 2 или 3, отличающийся тем, что гидролазой является по крайней мере одна из пулланаз или изоамилаз. 4. The method according to p. 2 or 3, characterized in that the hydrolase is at least one of pullanases or isoamylases.
5. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что альфа-1,4-глюканлиазу связывают с носителем или, что более предпочтительно, используют в чистом виде. 5. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that alpha-1,4-glucanliase is associated with a carrier or, more preferably, is used in pure form.
6. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что фермент выделяют либо из грибков, преимущественно Morchella costata или Morchella vulgaris, либо из инфицированных грибками водорослей, преимущественно из Jracilariopsis lemaneiformis, либо из самих водорослей, преимущественно Jracilariopsis lemaneiformis. 6. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the enzyme is isolated either from fungi, mainly Morchella costata or Morchella vulgaris, or from algae infected with fungi, mainly from Jracilariopsis lemaneiformis, or from algae themselves, mainly Jracilariopsis lemaneiformis.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что фермент выделяют и/или далее очищают из грибков, либо из инфицированных грибками водорослей, либо из самих водорослей с использованием геля, который не разлагается под действием фермента. 7. The method according to p. 6, characterized in that the enzyme is isolated and / or further purified from fungi, or from algae infected with fungi, or from the algae themselves using a gel that does not decompose by the enzyme.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что основу геля составляет декстрин или его производные, предпочтительно гель на основе циклодекстрина, более предпочтительно бетациклодекстрина. 8. The method according to claim 7, characterized in that the gel is based on dextrin or its derivatives, preferably a gel based on cyclodextrin, more preferably betacyclodextrin.
9. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что фермент предпочтительно включает последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 1, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 2, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 5, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 6, или любую их разновидность. 9. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the enzyme preferably comprises a sequence of amino acid residues with identification number 1, or a sequence of amino acid residues with identification number 2, or a sequence of amino acid residues with identification number 5, or a sequence of amino acid residues with identification number 6 , or any variation thereof.
10. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что фермент преимущественно получают путем экспрессии нуклеотидной последовательности, кодирующей фермент. 10. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the enzyme is predominantly obtained by expression of the nucleotide sequence encoding the enzyme.
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что нуклеотидная последовательность преимущественно является ДНК последовательностью. 11. The method according to claim 10, characterized in that the nucleotide sequence is preferably a DNA sequence.
12. Способ по п.11, отличающийся тем, что ДНК последовательность предпочтительно включает последовательность, которая совпадает, или комплементарна, или в значительной степени гомологична, или содержит любые подходящие замещения в кодоне любой из следующих последовательностей: последовательности с номером идентификации 3, или последовательности с номером идентификации 4, или последовательности с номером идентификации 7, или последовательности с номером идентификации 8. 12. The method according to claim 11, characterized in that the DNA sequence preferably includes a sequence that matches, or is complementary, or substantially homologous, or contains any suitable substitution in the codon of any of the following sequences: sequences with identification number 3, or sequences with identification number 4, or a sequence with identification number 7, or a sequence with identification number 8.
13. Способ по п. 3 или любого зависимого от него пункта, отличающийся тем, что крахмал применяют в больших концентрациях, таких как, приблизительно, до 25%, в растворе. 13. The method according to p. 3 or any item dependent on it, characterized in that the starch is used in high concentrations, such as up to about 25%, in solution.
14. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что субстрат подвергают воздействию фермента в присутствии буферного раствора. 14. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the substrate is exposed to the enzyme in the presence of a buffer solution.
15. Способ по любому из пп.1 - 13, отличающийся тем, что субстрат подвергают воздействию фермента в присутствии практически чистой воды. 15. The method according to any one of claims 1 to 13, characterized in that the substrate is exposed to the enzyme in the presence of substantially pure water.
16. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что субстрат подвергают воздействию фермента в отсутствии кофактора. 16. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the substrate is exposed to the enzyme in the absence of a cofactor.
17. Способ по любому из предшествующих пунктов, отличающийся тем, что фермент используют в сочетании с амилопектином или декстрином. 17. The method according to any one of the preceding paragraphs, characterized in that the enzyme is used in combination with amylopectin or dextrin.
18. Способ получения сахара 1,5-D-ангидрофруктозы, включающий обработку альфа-1,4-глюкана ферментом альфа-1,4-глюканлиазой, отличающийся тем, что фермент содержит последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 1, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 2, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 5, или последовательность аминокислотных остатков с номером идентификации 6, или любые их разновидности. 18. A method for producing 1,5-D-anhydrofructose sugar, comprising treating alpha-1,4-glucan with alpha 1,4-glucanlase enzyme, characterized in that the enzyme contains a sequence of amino acid residues with identification number 1, or a sequence of amino acid residues with identification number 2, or a sequence of amino acid residues with identification number 5, or a sequence of amino acid residues with identification number 6, or any variations thereof.
19. Сахар 1,5-D-ангидрофруктоза, полученный в соответствии со способом по настоящему изобретению. 19. Sugar 1,5-D-anhydrofructose obtained in accordance with the method of the present invention.
20. Использование реагента, который способен увеличивать гидрофобность реакционной среды, для увеличения устойчивости и активности фермента альфа-1,4-глюканлиазы. 20. The use of a reagent that is able to increase the hydrophobicity of the reaction medium to increase the stability and activity of the alpha-1,4-glucan lyase enzyme.
21. Использование 1,5-D-ангидрофруктозы в качестве антиоксиданта. 21. The use of 1,5-D-anhydrofructose as an antioxidant.
22. Использование 1,5-D-ангидрофруктозы в качестве подслащивателя. 22. The use of 1,5-D-anhydrofructose as a sweetener.