RU2821995C1 - Способ диагностики Desulfovibrio spp. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта - Google Patents
Способ диагностики Desulfovibrio spp. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта Download PDFInfo
- Publication number
- RU2821995C1 RU2821995C1 RU2023134913A RU2023134913A RU2821995C1 RU 2821995 C1 RU2821995 C1 RU 2821995C1 RU 2023134913 A RU2023134913 A RU 2023134913A RU 2023134913 A RU2023134913 A RU 2023134913A RU 2821995 C1 RU2821995 C1 RU 2821995C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacteria
- biological material
- vitamin
- nutrient medium
- desulfovibrio spp
- Prior art date
Links
- 241000605716 Desulfovibrio Species 0.000 title claims abstract description 59
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 title abstract description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 65
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 53
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims abstract description 16
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims abstract 2
- 238000009331 sowing Methods 0.000 claims abstract 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims abstract 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 23
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 21
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 20
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 14
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 11
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 10
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 7
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 7
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 claims description 7
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 claims description 7
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 claims description 7
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims description 5
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 5
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims description 5
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 claims description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 4
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 claims description 4
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims description 4
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003537 Vitamin B3 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003571 Vitamin B5 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003756 Vitamin B7 Natural products 0.000 claims description 4
- 229930003761 Vitamin B9 Natural products 0.000 claims description 4
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 4
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 claims description 4
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 claims description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 claims description 4
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 claims description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 4
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N nicotinic acid amide Natural products NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 claims description 4
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 claims description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 4
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 claims description 4
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 claims description 4
- 235000019160 vitamin B3 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011708 vitamin B3 Substances 0.000 claims description 4
- 235000009492 vitamin B5 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011675 vitamin B5 Substances 0.000 claims description 4
- 235000011912 vitamin B7 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011735 vitamin B7 Substances 0.000 claims description 4
- 235000019159 vitamin B9 Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011727 vitamin B9 Substances 0.000 claims description 4
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 claims description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 3
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 55
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 9
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 9
- 241000605739 Desulfovibrio desulfuricans Species 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 7
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 7
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 6
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 5
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000012552 review Methods 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 5
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 4
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 4
- 208000036649 Dysbacteriosis Diseases 0.000 description 4
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 4
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 4
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 239000006161 blood agar Substances 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 4
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 4
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 4
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 4
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000001269 time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 208000015710 Iron-Deficiency Anemia Diseases 0.000 description 3
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000029560 autism spectrum disease Diseases 0.000 description 3
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- IMBKASBLAKCLEM-UHFFFAOYSA-L ferrous ammonium sulfate (anhydrous) Chemical compound [NH4+].[NH4+].[Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O IMBKASBLAKCLEM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000605786 Desulfovibrio sp. Species 0.000 description 2
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 2
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058040 Abdominal sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010053555 Arthritis bacterial Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010007027 Calculus urinary Diseases 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 208000031531 Desulfovibrionaceae Infections Diseases 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910016876 Fe(NH4)2(SO4)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910005390 FeSO4-7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910005444 FeSO4—7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 208000036209 Intraabdominal Infections Diseases 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010037596 Pyelonephritis Diseases 0.000 description 1
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- ZLXPLDLEBORRPT-UHFFFAOYSA-M [NH4+].[Fe+].[O-]S([O-])(=O)=O Chemical compound [NH4+].[Fe+].[O-]S([O-])(=O)=O ZLXPLDLEBORRPT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000037849 arterial hypertension Diseases 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001527 calcium lactate Substances 0.000 description 1
- 235000011086 calcium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002401 calcium lactate Drugs 0.000 description 1
- PASHVRUKOFIRIK-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate dihydrate Chemical compound O.O.[Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O PASHVRUKOFIRIK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 208000002551 irritable bowel syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 238000011369 optimal treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 201000001223 septic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 235000015424 sodium Nutrition 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000008281 urolithiasis Diseases 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области микробиологии. Предложен способ диагностики Desulfovibrio spр. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта. Способ включает отбор образца биологического материала, приготовление питательной среды для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp., приготовление суспензии биологического материала 1 г, приготовление десятикратных разведений суспензии биологического материала, высев по 100 мкл разведений суспензии в питательную среду для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp., инкубирование полученной смеси в анаэробных условиях в течение 120-170 часов при 37°С. Визуальную оценку роста культуры бактерий рода Desulfovibrio spp. производят по наличию или отсутствию почернения питательной среды, где наличие почернения свидетельствует о присутствии в образце биологического материала бактерий рода Desulfovibrio spр., а при отсутствии почернения питательной среды регистрируют результат как не содержащий бактерий рода Desulfovibrio spр. Изобретение обеспечивает повышение качества диагностики у больных с нарушениями микробиоценоза желудочно-кишечного тракта при снижении временных и трудовых затрат, в том числе в условиях полимикробного сообщества. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 6 пр.
Description
Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано в практической и научно-исследовательской работе для диагностики и изучения условно-патогенных микроорганизмов рода Desulfovibrio, а именно для диагностики Desulfovibrio spp. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта.
Бактериальная флора желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) оказывает локальное действие, и в многочисленных исследованиях продемонстрирована патогенетическая связь состояния кишечного микробиоценоза не только с заболеваниями ЖКТ, но и с болезнями сердечно-сосудистой системы (атеросклероз, артериальная гипертензия), мочевыделительной системы (мочекаменная болезнь, пиелонефрит), патологией гепатобилиарной системы (гепатиты, гепатозы, желчнокаменная болезнь). Нормальная микрофлора, являясь симбионтной, выполняет ряд значимых функций, имеющих важное значение для поддержания гомеостаза и жизнедеятельности макроорганизма [Тарасова Л.В., Трухан Д.И. Болезни кишечника. Клиника, диагностика и лечение. СПб.: СпецЛит; 2013; Ардатская М.Д., Бельмер С.В., Добрица В.П. и др. Дисбиоз (дисбактериоз) кишечника: современное состояние проблемы, комплексная диагностика и лечебная коррекция. Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. 2015;5:13-50].
В результате различных неблагоприятных воздействий на человека и развития разнообразных патологических состояний часто происходят количественные и качественные изменения нормальной микрофлоры кишечника. Это состояние, при котором нарушается подвижное равновесие кишечной микрофлоры, заселяющей в норме нестерильные полости и кожные покровы, и возникают качественные и количественные изменения кишечного микробиоценоза.
В соответствии с отраслевым стандартом ОСТ 91500.11.0004-2003 клинико-лабораторный синдром, возникающий при ряде заболеваний и клинических ситуаций, характеризующийся изменением качественного и/или количественного состава нормальной микрофлоры, метаболическими и иммунными нарушениями, сопровождающимися у части больных клиническими проявлениями, рассматривается как дисбактериоз кишечника [«ОСТ 91500.11.0004-2003. Отраслевой стандарт. Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника», утв. Приказом Минздрава России от 09.06.2003 №231)].
В настоящее время методика исследования кала на дисбактериоз не включает в себя посев исследуемого материала на питательную среду для сульфатредуцирующих бактерий. В нее входят посев на следующие питательные среды: агары для изоляции бактерий семейства Enterobacterales, желточно-солевой агар - для бактерий семейства Staphylococcaceae, энтерококковый агар - для культур рода Enterococcus spp., среда МРС с сорбиновой кислотой - для лактобактерий, Бифидум-среда - для бифидобактерий, среда Шедлера для выделения основной группы анаэробных бактерий и 5% кровяной агар - для бактерий рода Streptococcus spp., Clostridium spp., а также для других видов микроорганизмов, нуждающихся для своего роста в крови или гемолизирующих ее [Бочков И.А., Юрко Л.П., Шуралева С.А., Юдицкая Н.М., Лавренова Э.С., Плахтий И.В., Славнов Н.Н., Коновалова Т.А. Особенности микробной экологии толстой кишки у детей до 2 лет - 5, Эпидемиология и инфекционные болезни, стр. 29-33.].
С целью повышения эффективности выделения клостридий используют этаноловый шок [Borriello SP, Honour P. Simplified procedure for the routine isolation of Clostridium difficile from faeces. J Clin Pathol. 1981 Oct; 34(10): 1124-7. doi: 10.1136/jcp.34.10.1124. PMID: 7031097; PMCID: РМС494377]. Анаэробные бактерии культивируются в специальных системах типа ГазПак производства фирмы «Oxoid» (Thermo Fisher Scientific, США), работающих на принципе химической адсорбции кислорода. Идентификацию выделенных штаммов бактерий осуществляют традиционными методами, при необходимости используют метод матрично-активированной лазерной ионизации-времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) с применением системы Microflex LT и программного обеспечения MALDI Biotyper Compass v.4.1.80 (Bruker Daltonics, Германия). Интерпретация полученных результатов проводится согласно ОСТ 91500.11.0004-2003 «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника».
Недостатком данной методики является то, что при ее применении, бактерии рода Desulfovibrio не получают достаточно питательных веществ и не учитываются условия для их роста, они не диагностируются, хотя являются фактором риска для развития таких патологических состояний у человека, как железодефицитная анемия и когнитивные нарушения со стороны нервной системы.
Бактерии рода Desulfovibrio - это анаэробные грамотрицательные спиральные или изогнутые подвижные палочки, продуцирующие в процессе своей жизнедеятельности сероводород (H2S) и десульфовиридин, который при УФ-излучении флуоресцирует красным при щелочном рН и зеленым при кислотном рН [Machaca М, Bodean ML, Montaña S, García SD, Stecher D, Vay CA, Almuzara MN. Descripción de un caso de sepsis abdominal por Desulfovibrio desulfuricans [Description of a case of abdominal sepsis due to Desulfovibrio desulfuricans]. Rev Argent Microbiol. 2022 Jun 7:S0325-7541(22)00028-1. Spanish. doi: 10.1016/j.ram.2022.05.002. Epub ahead of print. PMID: 35688718; Hagiya H, Kimura K, Nishi I, Yamamoto N, Yoshida H, Akeda Y, Tomono K. Desulfovibrio desulfuricans bacteremia: A case report and literature review. Anaerobe. 2018 Feb;49:112-115. doi: 10.1016/j.anaerobe.2017.12.013. Epub 2018 Jan 4. PMID: 29305996; Goldstein EJ, Citron DM, Peraino VA, Cross SA. Desulfovibrio desulfuricans bacteremia and review of human Desulfovibrio infections. J Clin Microbiol. 2003 Jun;41(6):2752-4. doi: 10.1128/JCM.41.6.2752-2754.2003. PMID: 12791922; PMCID: РМС156571]. Бактерии рода Desulfovibrio spp.являются преобладающими представителями сульфатредуцирующих бактерий (СРБ), в том числе в кишечном микробиоценозе человека.
Согласно опубликованным данным, сульфатредуцирующие бактерии колонизируют придонные отложения солоноватых озер, а также желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) млекопитающих, в том числе человека [Marquis TJ, Williams VJ, Banach DB. Septic arthritis caused by Desulfovibrio desulfuricans: A case report and review of the literature. Anaerobe. 2021 Aug;70:102407. doi: 10.1016/j.anaerobe.2021.102407. Epub 2021 Jun 18. PMID: 34153468; Hagiya H, Kimura K, Nishi I, Yamamoto N, Yoshida H, Akeda Y, Tomono K. Desulfovibrio desulfuricans bacteremia: A case report and literature review. Anaerobe. 2018 Feb;49:112-115. doi: 10.1016/j.anaerobe.2017.12.013. Epub 2018 Jan 4. PMID: 29305996; Carli T, Diker KS, Eyigor A. Sulphate-reducing bacteria in bovine faeces. Lett Appl Microbiol. 1995 Oct;21(4):228-9. doi: 10.1111/j.l472-765x.l995.tb01047.x. PMID: 7576512; Nasreddine R, Argudin MA, Herpol M, Miendje Deyi VY, Dauby N. First case of Desulfovibrio desulfuricans bacteraemia successfully identified using MALDI-TOF MS. New Microbes New Infect. 2019 Oct 23;32:100614. doi: 10.1016/j.nmni.2019.100614. PMID: 31763046; PMCID: РМС6859274].
СРБ присутствуют в организме бессимптомно и могут быть условно-патогенными микроорганизмами, приводящими к интраабдоминальным инфекциям, а также вызывать обострение воспалительных болезней желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) (болезнь Крона, язвенный колит, сидром разраженного кишечника), психических и когнитивных заболеваний (болезнь Паркинсона, расстройство аутистического спектра (РАС) и т.д.). В большинстве случаев при острой инфекции бактерии Desulfovibrio spp. вызывают абсцессы внутренних органов и бактериемию. Согласно модельному эксперименту на грызунах бактерии рода Desulfovibrio могут выступать одним из этиологических факторов развития железодефицитной анемии (ЖДА).
Патогенетические эффекты бактерий рода Desulfovibrio spp. на данный момент мало изучены и оптимальные алгоритмы лечения инфекций, вызванных Desulfovibrio spp., в настоящее время не определены. Многие лаборатории не проводят рутинное исследование по выявлению бактерий Desulfovibrio spp. в биоматериале из-за медленной скорости их роста (4-7 дней, в некоторых случаях 14 дней) и сложности в идентификации, особенно когда культура является частью полимикробного сообщества.
Согласно известным данным для жизнедеятельности бактерий рода Desulfovibrio необходимы 3 группы компонентов: доноры и акцепторы электронов, факторы роста. В группу доноров электронов относятся крахмал, сукцинат натрия, мальтоза, маннитол и ацетат натрия. В группу акцепторов электронов сульфат марганца, сульфат железа и тиогликонат натрия. Факторами роста считаются кровь (5%), гемин, Tween 80 и витамины В6, В12 и С [Chen YR, Zhou LZ, Fang ST, Long HY, Chen JY, Zhang GX. Isolation of Desulfovibrio spp.from human gut microbiota using a next-generation sequencing directed culture method. Lett Appl Microbiol. 2019 Jun; 68(6):553-561. doi: 10.1111/lam.l3149. Epub 2019 Apr 3. PMID: 30835854; Liu F, Li J, Wu F, Zheng H, Peng Q, Zhou H. Altered composition and function of intestinal microbiota in autism spectrum disorders: a systematic review. Transl Psychiatry. 2019 Jan 29; 9(1):43. doi: 10.1038/s41398-019-0389-6. PMID: 30696816; PMCID: РМС6351640].
Известны среды общего назначения, используемые для выращивания СРБ: Среда Sulphate API Agar w/o Sodium Lactate (API) [https://exodocientifica.com.br/_technical-data/M309.pdf], следующего состава:
дрожжевой экстракт - 1,000 г/л;
магния сульфат - 0,200 г/л;
аскорбиновая кислота - 0,100 г/л;
дикалийфосфат - 0,010 г/л;
железа аммония сульфат - 0,100 г/л;
натрия хлорид - 10,000 г/л;
агар - 14,000 г/л;
конечный рН - 7,4±0,2,
где необходимо растворить 25,41 смеси в 1000 мл дистиллированной воды, добавить 4 мл лактата натрия, далее нагреть до полного растворения ингредиентов, не доводя до кипения, среду разлить в пробирки и простерилизовать.
Известна питательная среда для Desulfovibrio с 1% NaCl [Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук - Обособленное подразделение Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Федеральный исследовательский центр «Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук»; Всероссийская коллекция микроорганизмов - ВКМ; Дополнительная информация; Питательные среды; №54; https://www.vkm.ru/rus/Catalogue.htm; Файл описания Питательных сред], содержащая:
K2HPO4 - 0,01 г;
NaCl - 10,0 г;
MgSO4 - 0,2 г;
лактат Na(40%) - 4,0 мл;
раствор соли Мора - 1,0 мл;
дрожжевой экстракт - 1,0 г;
аскорбиновая кислота - 0,1 г;
агар - 6,0 г;
дистиллированная вода - 1000,0 мл, при этом раствор соли Мора содержит:
Fe(NH4)2(SO4)2 × 6 H2O - 1,0 г
дистиллированная вода - 5,0 мл.
Стерилизуют растворы отдельно автоклавированием при 121°С 15 мин.
Также известна питательная среда для Desulfovibrio с лактатом [Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук - Обособленное подразделение Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Федеральный исследовательский центр «Пущинский научный центр биологических исследований Российской академии наук»; Всероссийская коллекция микроорганизмов ВКМ; Дополнительная информация; Питательные среды; №92; https://www.vkm.ru/rus/Catalogue.htm; Файл описания Питательных сред], содержащая:
Раствор 1:
K2HPO4 - 0,5 г;
NH4Cl - 1,0 г;
CaCl2×6Н2О - 0,1 г;
MgSO4×7H2O - 2,0 г;
Na2SO4 - 1,0 г;
лактат Na - 5,0 г;
дрожжевой экстракт - 1,0 г;
резазурин - 0,0 1 г;
цистеин - 0.5 г;
дистиллированная вода 950,0 мл.
Раствор 2:
NaHCO3 - 4,0 г;
дистиллированная вода - 40,0 мл.
Раствор 3:
Na2S×9 H2O - 300,0 мг;
дистиллированная вода 6,0 мл.
Раствор 4:
FeSO4×7Н2О - 0,4 г;
дистиллированная вода - 10,0 мл. рН 6,8
Для приготовления среды все растворы стерилизуют отдельно автоклавированием при 121°С 15 мин. Раствор 1 перед стерилизацией доводят до кипения, продувая газовой смесью из 97% N2 и 3% Н2 и стерилизуют в атмосфере этой газовой смеси. Раствор 3 стерилизуют в атмосфере N2.
Для получения накопительной культуры сульфатредуцирующих бактерий применяют среды Таусона или Постгейта [https://www.bibliotekar.ru/2-7-78-biologiya-pochv/65.htm], имеющие следующий состав:
Среда Таусона (г/л): (NH4)2SO4 - 4,0, K2HPO4 - 0,5, MgS04X Х7Н20 - 1,0, соль Мора - 0,5, лактат кальция - 5,0. Иногда к среде добавляют дрожжевую воду (1 мл/100 мл среды).
Среда Постгейта (г/л): KH2PO4 - 0,5, NH4Cl - 1,0, CaSO4-2H2O - 1,0, MgS04-7H20 - 2,0, лактат натрия - 3,5, дрожжевой экстракт - 1,0, FeSO4-7H2O - 0,5, тиогликолят натрия-1,0, или аскорбиновая кислота - 1,0.
Приготовление питательных сред ВКМ и среды Постгейта подразумевает отдельное приготовление нескольких растворов среды и последующее их смешивание. Также вышеупомянутые среды отличает общий недостаток, который выражается в медленной скорости роста целевой бактерии, что усложняет их применение в рутинной работе.
В виду того, что существующие методы определения бактерий рода Desulfovibrio в биологических материалах для диагностических целей малоэффективны и трудозатратны, в основу изобретения положена задача создания способа первичной диагностики Desulfovibrio spp. у больных с нарушениями микробиоценоза желудочно-кишечного тракта, позволяющего повысить качество микробиологических исследований, сократить их время проведения при снижении затрат, что, в свою очередь, приведет к снижению процента неадекватной антибактериальной терапии и повысит качество оказываемой медицинской помощи больным с нарушениями микробиоценоза ЖКТ.
Поставленная задача достигается за счет оптимизации порядка проведения микробиологического исследования образцов биологического материала, предпочтительно кала, на наличие бактерий рода Desulfovibrio spp., в том числе за счет применения в способе питательной среды, обеспечивающей достаточный рост бактерий и их накопление для проведения исследования.
Для реализации заявляемого способа отбирают образцы биологического материала, предпочтительно кал, готовят питательную среду для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp., готовят суспензию биологического материала 1 г, который эмульгируется в 0,9% растворе хлорида натрия. Затем готовят ряд последовательных десятикратных разведений суспензии 101, 102,103,104, производят высев в упомянутую питательную среду по 100 мкл из разведений суспензии. После чего культуру инкубируют: создают анаэробные условия при помощи анаэростата и СО2 инкубатора (CO2 6%), при температуре 37°С в течение 120-170 часов. Рост культуры оценивают по почернению питательной среды черному осадку в жидкой питательной среде или росту колоний в толще агара на вторые или третьи сутки (48-72 часа). Идентификацию бактерий проводят следующими способами:
- просвечивют образцы при УФ, доводя рН среды до щелочной или кислотной;
- готовят мазки и окрашивают по Граму с последующим использованием метода световой микроскопии.
При этом, упомянутую питательную среду получают следующим способом: смешивают лактат натрия - 3,00 мл/л; гидролизат казеина - 0,01 г/л; кукурузный крахмал - 0,01 г/л; дегидратированный говяжий бульон - 0,15 г/л; витамин В1 - 0,10 г/л; витамин В2 - 0,15 г/л; витамин В6 - 0,30 г/л; витамин В3 - 0,75 г/л; витамин В9 - 0,05 г/л; витамин В5 - 0,35 г/л; витамин В7 - 0,19 г/л; витамин В12 - 0,10 г/л; сульфат магния - 1,00 г/л; глюкозу - 1,00 г/л; натрия хлорид - 0,10 г/л; гидрофосфат калия - 0,50 г/л; аммоний хлористый - 1,00 г/л; пиросульфит натрия - 0,50 г/л. Для получения питательной среды в твердой фазе (агаровой питательной среды) к указанным компонентам дополнительно добавляют агар - 9,0 г/л. Затем доводят общий объем полученной смеси до 1000 мл путем добавления дистиллированной воды, устанавливают рН 7,3±0,2 посредством добавления 0,1 н. раствора соляной кислоты либо 0,1 н. раствора гидроксида натрия, растворяют компоненты смеси посредством доведения ее до кипения. Затем полученную смесь остужают, смешивают с аскорбиновой кислотой - 0,10 г/л и железом сернокислым закисным - 0,50 г/л, стерилизуют в стеклянных стерилизованных бутылках автоклавированием под давлением 1,0 атм. при температуре 120,6°С в течение 15-30 мин.
Применение в заявленном способе упомянутой питательной среды обеспечивает достаточный рост бактерий рода Desulfovibrio spp., необходимый для микробиологического исследования образцов биологического материала и принятия диагностических решений при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта.
Заявляемое решение получено в ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора в рамках выполнения темы НИР «Клинико-патогенетическое обоснование и совершенствование терапевтических программ сохранения и восстановления микробиома человека при широко распространенных инфекционных заболеваний».
Сущность заявляемого решения поясняется следующими примерами: Пример №1. Получение питательной среды для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp. в жидкой фазе.
Для приготовления используемой в заявляемом способе питательной среды на аналитических весах произвели навеску сухих компонентов в количестве, указанном в Таблице 1.
После чего смешали лактат натрия, гидролизат казеина, кукурузный крахмал, дегидратированный говяжий бульон, витамин В1, витамин В2, витамин В6, витамин В3, витамин В9, витамин В5, витамин В7, витамин В12, сульфат магния, глюкозу, натрия хлорид, гидрофосфат калия, аммоний хлористый, пиросульфит натрия. Затем добавили дистиллированную воду 1000 мл, установили рН 7,3 посредством добавления 0,1н раствора соляной кислоты.
Компоненты полученной смеси растворили, доведя ее до кипения, после чего в остывшую смесь добавили аскорбиновую кислоту, железо сернокислое закисное и перемешали.
Затем получившийся раствор разлили в стерильные стеклянные бутылки для стерилизации и провели автоклавирование под давлением 1,0 атм. при температуре 120,6°С в течение 15 мин. Полученная указанным способом питательная среда прозрачная, имела желтоватый цвет. Готовая питательная среда хранилась в холодильнике при температуре + 4-8°С 30 дней и использовалась по мере необходимости.
Пример 2. Получение питательной среды для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp. в твердой фазе (агаровой питательной среды).
Для приготовления заявляемой питательной среды на аналитических весах произвели навеску сухих компонентов в количестве, указанном в Таблице 1.
После чего смешали лактат натрия, гидролизат казеина, кукурузный крахмал, дегидратированный говяжий бульон, витамин В1, витамин В2, витамин В6, витамин В3, витамин В9, витамин В5, витамин В7, витамин В12, сульфат магния, глюкозу, натрия хлорид, гидрофосфат калия, аммоний хлористый, пиросульфит натрия. К полученной смеси добавили агар - 9,0 г/л. Затем добавили дистиллированную воду 1000 мл, установили рН 7,4 посредством добавления 0,1 н. раствора гидроксида натрия.
Компоненты полученной смеси растворили, доведя ее до кипения, после чего в остывшую среду добавили аскорбиновую кислоту и железо сернокислое закисное и перемешали.
Затем получившийся раствор разлили в стерильные стеклянные бутылки для стерилизации и провели автоклавирование под давлением 1,0 атм. при температуре 120,6°С в течение 30 мин. Полученная указанным способом питательная среда имеет желтоватый цвет, слегка опалесцировала, Готовая питательная среда хранилась в холодильнике при температуре + 4-8°С в течение 30 дней и использовалась по мере необходимости.
Пример 3. Оценка роста целевой бактерии в питательной среде для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp.
Ростовые свойства питательной среды для культивирования сульфатредуцирующих бактерий рода Desulfovibrio spp, приготовленной согласно заявляемому способу, выявляли на коллекционном штамме, в качестве которого был использован типовой штамм рода Desulfovibrio sp.из Всероссийской коллекции микроорганизмов (Пущино): Desulfovibrio desulfuricans sp.desulfuricans VKM В-1799 т.
Питательную среду, полученную способами, описанными в примерах 1 и 2 засевали коллекционным штаммом Desulfovibrio desulfuricans VKM В-1799 т, создавали анаэробные условия при помощи анаэростата, пакетов типа Газпак производства фирмы «Oxoid» (Thermo Fisher Scientific, США) и ставили в термостат при 37°С (СО2 6%). Рост бактерий рода Desulfovibrio sp., находящихся в исследуемом материале, получили уже на вторые и третьи сутки (через 48-72 часа роста).
Рост культуры оценивали по почернению среды черному осадку в жидкой питательной среде или росту колоний в толще агара. Идентификацию бактерий проводили следующими способами:
- просвечивали образцы при УФ, доводя рН среды до щелочной или кислотной;
- готовили мазки и окрашивали по Граму с последующим использованием метода световой микроскопии.
Полученные результаты позволили идентифицировать культуру как Desulfovibrio spp.
Пример 4. Определение Desulfovibrio spp.в образце биологического материала.
С целью диагностики Desulfovibrio spp.в образце биологического материала -фекалии, отобранного у больного с подтвержденным нарушением микробиоценоза ЖКТ, приготовили суспензию биологического материала 1 г, эмульгировали в 0,9% растворе хлорида натрия. Из приготовленной суспензии готовили ряд последовательных десятикратных разведений - 101, 102, 103, 104. Данными разведениями, по 100 мкл, засевали на чашки Петри с питательными средами:
a) питательная среда, полученная способом, описанным в примере 1 - для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp.;
b) агар Эндо и Плоскирева - для изоляции бактерий семейства Enterobacterales;
c) желточно-солевой агар - для бактерий семейства Staphylococcaceae;
d) энтерококковый агар - для культур рода Enterococcus spp.;
e) среда МРС с сорбиновой кислотой - для лактобактерий;
f) Бифидум-среда - для бифидобактерий;
g) среда Шедлера для выделения основной группы анаэробных бактерий;
h) 5% кровяной агар - для бактерий рода Streptococcus spp., Clostridium spp., а также для других видов микроорганизмов, нуждающихся для своего роста в крови или гемолизирующих ее.
Питательные среды b-h применяли согласно инструкции производителя, с целью повышения эффективности выделения клостридий использовали этаноловый шок. Идентификацию выделенных штаммов бактерий осуществляют традиционными методами, при необходимости используют метод матрично-активированной лазерной ионизации времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) с применением системы Microflex LT и программного обеспечения MALDI Biotyper Compass v. 4.1.80 (Bruker Daltonics, Германия). Интерпретация полученных результатов проводится согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
Для роста культур бактерий рода Desulfovibrio spp.пробирки, содержащие питательную среду, полученную способом, описанным в примере 1, с разведениями суспензии поместили в анаэробные условия. Культуру инкубировали в течение 120 часов при 37°С в анаэробных условиях при помощи анаэростата, пакетов типа Газпак производства фирмы «Oxoid» (Thermo Fisher Scientific, США). Рост культуры бактерий рода Desulfovibrio spp.оценивали на вторые сутки (48 часов), результат регистрировали по почернению питательной среды. Идентификацию бактерий проводили следующими способами:
- просвечивали образцы при УФ, доводя рН среды до щелочной или кислотной;
- готовили мазки и окрашивают по Граму с последующим использованием метода световой микроскопии.
После определения вида микроорганизма производили пересчет количества его колоний на 1 г фекалий (КОЕ/г). Учет результатов проводили согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
При оценке результатов посева кала на дисбактериоз у данного пациента выявлено: отсутствие - бифидобактерий, лактобактерий, энтерококков, наличие кишечной палочки в титре 107, наличие бактерий рода Desulfovibrio spp.в титре 103. Наличие бактерий рода Desulfovibrio spp. в образце биологического материала пациента подтверждено ПЦР исследованием.
Пример 5. Определение Desulfovibrio spp. в образце биологического материала.
С целью диагностики Desulfovibrio spp.в образце биологического материала -фекалии, отобранного у больного с подтвержденным нарушением микробиоценоза ЖКТ, приготовили суспензию биологического материала 1 г, эмульгировали в 0,9% растворе хлорида натрия. Из приготовленной суспензии готовили ряд последовательных десятикратных разведений - 101, 102, 103, 104. Данными разведениями по 100 мкл засевали на чашки Петри с питательными средами:
a) питательная среда, полученная способом, описанным в примере 2 - для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp.;
b) агар Эндо и Плоскирева - для изоляции бактерий семейства Enterobacterales;
c) желточно-солевой агар - для бактерий семейства Staphylococcaceae;
d) энтерококковый агар - для культур рода Enterococcus spp.;
e) среда МРС с сорбиновой кислотой - для лактобактерий;
f) Бифидум-среда - для бифидобактерий;
g) среда Шедлера для выделения основной группы анаэробных бактерий;
h) 5% кровяной агар - для бактерий рода Streptococcus spp., Clostridium spp., а также для других видов микроорганизмов, нуждающихся для своего роста в крови или гемолизирующих ее.
Питательные среды b-h применяли согласно инструкции производителя, с целью повышения эффективности выделения клостридий использовали этаноловый шок. Идентификацию выделенных штаммов бактерий осуществляют традиционными методами, при необходимости используют метод матрично-активированной лазерной ионизации времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) с применением системы Microflex LT и программного обеспечения MALDI Biotyper Compass v. 4.1.80 (Bruker Daltonics, Германия). Интерпретация полученных результатов проводится согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
Для роста культур бактерий рода Desulfovibrio spp.чашки Петри, содержащие питательную среду, полученную способом, описанным в примере 2, с разведениями суспензии поместили в анаэробные условия. Культуру инкубировали в течение 170 часов при 37°С в анаэробных условиях при помощи анаэростата, пакетов типа Газпак производства фирмы «Oxoid» (Thermo Fisher Scientific, США). Рост культуры бактерий рода Desulfovibrio spp. оценивали на третьи сутки (72 часа), результат регистрировали по почернению питательной среды. Идентификацию бактерий проводили следующими способами:
- просвечивали образцы при УФ, доводя рН среды до щелочной или кислотной;
- готовили мазки и окрашивают по Граму с последующим использованием метода световой микроскопии.
После определения вида микроорганизма производили пересчет количества его колоний на 1 г фекалий (КОЕ/г). Учет результатов проводили согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
При оценке результатов посева кала на дисбактериоз у данного пациента выявлено наличие бифидобактерий в титре 109, лактобактерий титре 107, энтерококков в титре 105, кишечной палочки в титре 108, наличие бактерий рода Desulfovibrio spp.в титре 104. Наличие бактерий рода Desulfovibrio spp.в образце биологического материала пациента подтверждено ПЦР исследованием.
Пример 6. Определение Desulfovibrio spp.в образце биологического материала.
С целью диагностики Desulfovibrio spp.в образце биологического материала -фекалии, отобранного у больного с подтвержденным нарушением микробиоценоза ЖКТ, приготовили суспензию биологического материала 1 г, эмульгировали в 0,9% растворе хлорида натрия. Из приготовленной суспензии готовили ряд последовательных десятикратных разведений - 101, 102, 103, 104. Данными разведениями по 100 мкл засевали на чашки Петри с питательными средами:
a) питательная среда, полученная способом, описанным в примере 1 - для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp.;
b) агар Эндо и Плоскирева - для изоляции бактерий семейства Enterobacterales;
c) желточно-солевой агар - для бактерий семейства Staphylococcaceae;
d) энтерококковый агар - для культур рода Enterococcus spp.;
e) среда МРС с сорбиновой кислотой - для лактобактерий;
f) Бифидум-среда - для бифидобактерий;
g) среда Шедлера для выделения основной группы анаэробных бактерий;
h) 5% кровяной агар - для бактерий рода Streptococcus spp., Clostridium spp., а также для других видов микроорганизмов, нуждающихся для своего роста в крови или гемолизирующих ее.
Питательные среды b-h применяли согласно инструкции производителя, с целью повышения эффективности выделения клостридий использовали этаноловый шок. Идентификацию выделенных штаммов бактерий осуществляют традиционными методами, при необходимости используют метод матрично-активированной лазерной ионизации времяпролетной масс-спектрометрии (MALDI-TOF MS) с применением системы Microflex LT и программного обеспечения MALDI Biotyper Compass v. 4.1.80 (Bruker Daltonics, Германия). Интерпретация полученных результатов проводится согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
Для роста культур бактерий рода Desulfovibrio spp.пробирки, содержащие питательную среду, полученную способом, описанным в примере 1, с разведениями суспензии поместили в анаэробные условия. Культуру инкубировали в течение 170 часов при 37°С в анаэробных условиях при помощи анаэростата, пакетов типа Газпак производства фирмы «Oxoid» (Thermo Fisher Scientific, США). Рост культуры бактерий рода Desulfovibrio spp.оценивали на вторые и третьи сутки (48 часов и 72 часа), результат регистрировали по почернению питательной среды. Идентификацию бактерий проводили следующими способами:
- просвечивали образцы при УФ, доводя рН среды до щелочной или кислотной;
- готовили мазки и окрашивают по Граму с последующим использованием метода световой микроскопии.
После определения вида микроорганизма производили пересчет количества его колоний на 1 г фекалий (КОЕ/г). Учет результатов проводили согласно ОСТ 91500.11.0004-2003.
При оценке результатов посева кала на дисбактериоз у данного пациента выявлено наличие бифидобактерий в титре 109, лактобактерий титре 108, энтерококков в титре 105, кишечной палочки в титре 107. Бактерии рода Desulfovibrio spp. в данном образце биологического материала отсутствовали. Их отсутствие подтверждено ПЦР исследованием.
Таким образом, заявляемый способ позволяет повысить качество диагностики Desulfovibrio spp. у больных с нарушениями микробиоценоза желудочно-кишечного тракта при снижении временных и трудовых затрат, в том числе в условиях полимикробного сообщества.
Claims (10)
1. Способ диагностики Desulfovibrio spp. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта, включающий отбор образца биологического материала, приготовление питательной среды для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp., приготовление суспензии биологического материала 1 г, приготовление десятикратных разведений суспензии биологического материала, высев по 100 мкл разведений суспензии в питательную среду для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp., инкубирование полученной смеси в анаэробных условиях в течение 120-170 часов при 37°С, визуальную оценку роста культуры бактерий рода Desulfovibrio spp. через 48-72 часов по наличию или отсутствию почернения питательной среды, где наличие почернения свидетельствует о присутствии в образце биологического материала бактерий рода Desulfovibrio spp., а при отсутствии почернения питательной среды регистрируют результат как не содержащий бактерий рода Desulfovibrio spp., при этом упомянутую питательную среду получают посредством последовательного проведения следующих этапов:
(i) смешивание лактата натрия - 3,00 мл/л; гидролизата казеина - 0,01 г/л; кукурузного крахмала - 0,01 г/л; дегидратированного говяжьего бульона - 0,15 г/л; витамина В1 - 0,10 г/л; витамина В2 - 0,15 г/л; витамина В6 - 0,30 г/л; витамина В3 - 0,75 г/л; витамина В9 - 0,05 г/л; витамина В5 - 0,35 г/л; витамина В7 - 0,19 г/л; витамина В12 - 0,10 г/л; сульфата магния - 1,00 г/л; глюкозы - 1,00 г/л; натрия хлорида - 0,10 г/л; гидрофосфата калия - 0,50 г/л; аммония хлористого - 1,00 г/л; пиросульфита натрия - 0,50 г/л;
(ii) доведение общего объема полученной на этапе (i) смеси до 1000 мл путем добавления дистиллированной воды;
(iii) установление рН 7,3±0,2 посредством добавления в смесь, полученную на стадии (ii), 0,1 н. раствора соляной кислоты либо 0,1 н. раствора гидроксида натрия;
(iv) растворение компонентов полученной на этапе (iii) смеси посредством доведения ее до кипения;
(v) смешивание остывшей смеси, полученной на этапе (iv), с аскорбиновой кислотой - 0,10 г/л и железом сернокислым закисным - 0,50 г/л в;
(vi) стерилизация полученной на этапе (v) смеси в стеклянных стерилизованных бутылках путем автоклавирования под давлением 1.0 атм. при температуре 120,6°С в течение 15-30 мин.
2. Способ по п. 1, при котором для получения питательной среды для культивирования бактерий рода Desulfovibrio spp. в твердой фазе на этапе приготовления (i) дополнительно добавляют агар - 9,0 г/л.
3. Способ но п. 1, где для приготовления суспензии биологического материала образец такого биологического материала эмульгируют в 0,9% растворе хлорида натрия.
4. Способ по п. 1, при котором десятикратные разведения суспензии биологического материала готовят в концентрациях 101, 102, 103, 104.
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2821995C1 true RU2821995C1 (ru) | 2024-06-28 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2264467C2 (ru) * | 2003-12-08 | 2005-11-20 | ГУ Волгоградский научно-исследовательский технологический институт мясо-молочного скотоводства и переработки продукции животноводства РАСХН | Способ обнаружения бактерий группы кишечных палочек |
| WO2020029112A1 (zh) * | 2018-08-08 | 2020-02-13 | 中国石油大学(北京) | 脱硫化弧菌属菌测试组合物及其制备方法与应用 |
| CN111549147A (zh) * | 2014-12-11 | 2020-08-18 | 中国科学院上海营养与健康研究所 | 细菌快速检测方法及试剂 |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2264467C2 (ru) * | 2003-12-08 | 2005-11-20 | ГУ Волгоградский научно-исследовательский технологический институт мясо-молочного скотоводства и переработки продукции животноводства РАСХН | Способ обнаружения бактерий группы кишечных палочек |
| CN111549147A (zh) * | 2014-12-11 | 2020-08-18 | 中国科学院上海营养与健康研究所 | 细菌快速检测方法及试剂 |
| WO2020029112A1 (zh) * | 2018-08-08 | 2020-02-13 | 中国石油大学(北京) | 脱硫化弧菌属菌测试组合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Васильев Д.А. и др., РАЗРАБОТКА ПАРАМЕТРОВ ПЦР ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ DESULFOVIBRIO DESULFURICANS, БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ, Вестник ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, 2021, с.45-49. * |
| Куликова Н.Г. и др., Анаэробные инфекции, вызванные культурами рода Desulfovibrio (обзор литературы), Оригинальная статья опубликована на сайте РМЖ (Русский медицинский журнал) 21.12.2022, весь текст, ttps://www.rmj.ru/articles/gastroenterologiya/Anaerobnye_infekcii_vyzvannye_kulyturami_roda_Desulfovibrio_obzor_literatury/#ixzz8aqkDIJzL * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH09512438A (ja) | 微生物学的培地 | |
| Ottaviani et al. | Occurrence and characterization of Aeromonas spp. in mussels from the Adriatic Sea | |
| CN101970682B (zh) | 检测和/或鉴别艰难梭状芽孢杆菌的方法 | |
| Lopes et al. | Discriminating typical and atypical cystic fibrosis‐related bacteria by multiplex PNA‐FISH | |
| JP2017108721A (ja) | 偏性嫌気性菌または微好気性菌を好気環境下で培養するための長期保存性培地および同培地を用いた偏性嫌気性菌または微好気性菌の検出方法 | |
| RU2821995C1 (ru) | Способ диагностики Desulfovibrio spp. при нарушениях микробиоценоза желудочно-кишечного тракта | |
| Nedenskov-Sørensen et al. | Sampling efficiency in the diagnosis of Helicobacter pylori infection and chronic active gastritis | |
| Digranes et al. | Characterization of Micrococcaceae from the urinary tract | |
| Justesen et al. | Anaerobic infections in chronic prostatitis and chronic urethritis | |
| RU2820701C1 (ru) | Питательная среда для культивирования сульфатредуцирующих бактерий рода Desulfovibrio spp. и способ ее получения | |
| CN112680499B (zh) | 一种厌氧微生物的体外检测试剂盒 | |
| RU2759831C1 (ru) | Питательная среда для культивирования микроорганизмов из Burkholderia cepacia complex | |
| US5759799A (en) | Marker for revealing contaminants and application method for performing an antibiogram carried out directly on a sample | |
| Suegara et al. | Ecological determinants in microbial colonization of the murine gastrointestinal tract: adherence of Torulopsis pintolopesii to epithelial surfaces | |
| CN112831539A (zh) | 一种需氧微生物的体外检测试剂盒 | |
| Henrichsen et al. | An evaluation of the effects of a high concentration of sucrose in blood culture media | |
| RU2821994C1 (ru) | Способ определения показателя антибиотикорезистентности бактерий рода Desulfovibrio spp. | |
| Gupta et al. | Isolation, identification, speciation, and antibiogram of enterococcus species by conventional methods and assessment of the prevalence of vana genotype among VRE | |
| CN112899341A (zh) | 小肠结肠炎耶尔森氏菌选择性增菌培养基及其制备方法 | |
| JP2000116395A (ja) | サルモネラ分離用培地 | |
| Shah et al. | Isolation, ıdentification, speciation, and antibiogram of enterococcus species by conventional methods and assessment of the prevalence of vana genotype among VRE | |
| Mohan et al. | The world of microbes and its medical significance | |
| Artemeva et al. | Long-term storage of C-141 reference strain of melioidosis agent (Burkholderia pseudomallei) | |
| CN114196768B (zh) | 用于鉴别铜绿假单胞菌血清群的特异性分子靶标及其快速检测方法 | |
| US5380652A (en) | Device and procedure for identifying pathogenic microorganisms |