RU2815386C2 - Лечение и профилактика аллергии на клещей домашней пыли - Google Patents

Лечение и профилактика аллергии на клещей домашней пыли Download PDF

Info

Publication number
RU2815386C2
RU2815386C2 RU2020141729A RU2020141729A RU2815386C2 RU 2815386 C2 RU2815386 C2 RU 2815386C2 RU 2020141729 A RU2020141729 A RU 2020141729A RU 2020141729 A RU2020141729 A RU 2020141729A RU 2815386 C2 RU2815386 C2 RU 2815386C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ala
glu
ser
ile
lys
Prior art date
Application number
RU2020141729A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2020141729A (ru
Inventor
Рудольф Валента
Мирела КУРИН
Куань-Вэй ЧЭНЬ
Зузанне ВРТАЛА
Original Assignee
Ворг Фармасьютикалз (Чжэцзян) Кo., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ворг Фармасьютикалз (Чжэцзян) Кo., Лтд. filed Critical Ворг Фармасьютикалз (Чжэцзян) Кo., Лтд.
Publication of RU2020141729A publication Critical patent/RU2020141729A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2815386C2 publication Critical patent/RU2815386C2/ru

Links

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению слитых белков на основе аллергенов клещей домашней пыли, и может быть использовано в медицине в иммунотерапии пациентов, страдающих аллергией на клещей домашней пыли. Предложен слитый белок формулы (I): X1-Y-X2 (I), где X1 и X2 каждый содержит четыре-восемь фрагментов аллергенов, слитых друг с другом, где указанные фрагменты аллергенов получены по меньшей мере из двух аллергенов клещей Dermatophagoides pteronyssinus, выбранных из группы, состоящей из Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23, и где Y представляет собой поверхностный полипептид вируса семейства гепаднавирусов или фрагмент поверхностного полипептида, использующийся в качестве белка-носителя. Изобретение обеспечивает индукцию образования in vivo антител, направленных по меньшей мере на два аллергена клещей рода Dermatophagoides и ингибирующих взаимодействие аллергенспецифических IgE с их соответствующим аллергеном, что позволяет уменьшить или даже предупредить аллергические реакции, приводящие к необходимости лечения аллергии, вызванной аллергенами клещей рода Dermatophagoides. 6 н. и 6 з.п. ф-лы, 9 ил., 3 табл., 6 пр.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
[0001] Настоящее изобретение относится к области иммунотерапии пациентов, страдающих аллергией, в частности аллергией на клещей домашней пыли.
Уровень техники
[0002] Более 25% населения промышленно развитых стран страдают IgE-опосредованной аллергией. Пациенты с аллергией характеризуются повышенной продукцией IgE-антител против безвредных как таковых антигенов (т.е. аллергенов). Непосредственные симптомы аллергии I типа (аллергический риноконъюнктивит, астма, дерматит, анафилактический шок) обусловлены индуцированным аллергеном перекрестным сшиванием связанных с тучными клетками IgE-антител и высвобождением биологически активных медиаторов (например, гистамина, лейкотриенов).
[0003] В WO 2012/168487 описано применение поверхностного полипептида вируса семейства hepadnaviridae (например, вируса гепатита B) в качестве белка-носителя для фрагментов аллергена.
[0004] В Banerjee S. et al. (J. Immunol., 192 (2014): 4867-4875) описаны белки, содержащие два или четыре идентичных фрагмента аллергена Der p 23, слитых с N- и C-концом PreS. Согласно данным Banerjee S. et al. слитый белок, содержащий два идентичных фрагмента Der p 23 на С-конце PreS и два других идентичных фрагмента Der p 23 на N-конце PreS, индуцировал образование Der p 23-специфических антител, демонстрирующих значительное ингибирование IgE по сравнению со слитыми белками содержащие одинаковые фрагменты Der p 23 на обоих концах PreS.
[0005] Curin М. et al. (Allergy, 73 (2018): 1653-1661) раскрывают фрагменты Der p 5 и Der p 21, которые можно использовать для дальнейшей разработки вакцин.
[0006] В ЕР 2727934 описаны результаты испытания фрагментов нескольких аллергенов Der p, не обладающих IgE-реактивностью и проявляющих Т-клеточную реактивность.
[0007] Huey-Jy H. et al. (J. Immunol., 196 (2016): Suppl 1 192, 5) описывают полипептиды, содержащие, среди прочего, фрагменты Der p 1, Der p 2, Der p 7 и Der p 8.
[0008] В Bussières L. et al. (Int. Arch. Allergy Immunol., 153 (2010): 141-151), а также в EP 1908776 описаны слитые белки, содержащие зрелые Der p 1 и Der p 2.
[0009] В WO 2009/118642 раскрыты слитые полипептиды, которые содержат фрагменты Der p 1 и Der p 2, имеющие длину по меньшей мере 50 аминокислотных остатков.
[0010] В Chen A. et al. (Mol. Immunol., 45 (2008): 2486-2498), Casset A. et al. (Int. Arch. Allergy Immunol., 159 (253-262), WO 2015/070925 и Chen K-W. et al. (Allergy, 67 (2012): 609-621) раскрыты фрагменты аллергена Der p. Некоторые из данных фрагментов могут быть связаны с белками-носителями.
[0011] Клещи домашней пыли (HDM) представляют собой один из наиболее заметных источников аллергенов во всем мире. Почти 10% населения и более 50% субъектов, страдающих аллергией, сенсибилизированы к аллергенам клещей. HDM Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) и Dermatophagoides farina (Der f) широко распространены во всем мире. Аллергены Der p и Der f включают более 30 белков или гликопротеинов, большинство из которых на данный момент охарактеризовано. Аллергены группы 1, 2 и 23 (Der p 1, Der p 2 и Der p 23, а также Der f 1 и Der f 2 и Der f 23) представляют собой очень важные аллергены HDM, и именно на эти аллергены HDM сенсибилизировано более 80% пациентов. Однако недавно было показано, что другие аллергены HDM (например, Der p 5, Der p 7 и Der p 21, а также Der f 5, Der f 7 и Der f 21) представляют собой важные аллергены HDM и вызывают сенсибилизацию и аллергические симптомы у 15% до более чем 40% пациентов с аллергией на HDM (Posa et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2017 Feb; 139 (2): 541-549.e8). В этом контексте было обнаружено, что современные вакцины против HDM на основе экстракта аллергенов не индуцируют достаточный титр защитных IgG-антител против Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23, и не обеспечивают лечения многих пациентов с аллергией на HDM (Selection of house dust mite-allergic patients by molecular diagnosis may enhance success of specific immunotherapy. Chen K.W., Zieglmayer P., Zieglmayer R., Lemell P., Horak F., Bunu C.P., Valenta R., Vrtala S., J. Allergy Clin. Immunol., 2019 Mar;143(3):1248-1252.e12. doi: 10.1016/j.jaci.2018.10.048. Epub 2018 Nov 14). Следовательно, важной задачей является открытие и разработка вакцины для иммунотерапии аллергии на клещей домашней пыли, которая обеспечивает полную защиту пациентов с аллергией на HDM посредством индукции блокирующих антител к Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23, а также к соответствующим аллергенам Der f.
Сущность изобретения
[0012] В настоящее время апробированные для применения иммунотерапевтические продукты для лечения аллергии на клещей домашней пыли основаны на экстрактах тел и фекальных частиц HDM. Эти продукты содержат различные концентрации Der p 1, Der p 2, Der f 1 и Der f 2. Они не содержат всех важных аллергенов HDM, и, в частности, концентрации Der p 23 и Der f 23 являются очень низкими. Следовательно, они обеспечивают только неполное решение вопроса лечения или профилактики аллергии на клещей домашней пыли у пациентов (Casset et al., Int. Arch. Allergy Immunol., 2013; 161 (3): 287-288). Например, сублингвальные таблетки производства компании ALK Abelló, обеспечивают лишь умеренное снижение симптомов аллергии на 18% по сравнению с плацебо (Demoly et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2016; 137: 444-451). За счет относительно большого количества различных аллергенов клещей домашней пыли для потенциальной иммунотерапии требуется введение многих различных белков и полипептидов, чтобы охватить, по меньшей мере, наиболее важные аллергены клещей домашней пыли.
[0013] Таким образом, целью настоящего изобретения является получение вакцины и соответствующих компонентов, входящих в ее состав, которые можно использовать для лечения и/или профилактики аллергии на клещей домашней пыли, вызываемой всеми шестью основными аллергенами.
[0014] Эта цель решается с помощью одного или более слитых белков формулы (I).
X1-Y-X2 (I),
где X1 и X2 каждый содержит четыре-восемь фрагментов аллергенов или их вариантов, слитых друг с другом, где указанные фрагменты аллергенов получены по меньшей мере из двух аллергенов клещей рода Dermatophagoides, и где Y представляет белок-носитель.
[0015] Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическому препарату, содержащему по меньшей мере один слитый белок, описанный выше.
[0016] Еще один аспект настоящего изобретения относится к слитому белку или фармацевтическому препарату по настоящему изобретению для применения в лечении или профилактике аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли.
[0017] Еще один аспект настоящего изобретения относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок по настоящему изобретению.
[0018] Еще один аспект настоящего изобретения относится к вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению.
[0019] Еще один аспект настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты или вектор по настоящему изобретению.
Краткое описание фигур
[0020] На фиг. 1 приведено схематическое представление конструкций Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой). PreS обозначает поверхностный антиген PreS вируса гепатита B. «P» обозначает пептиды, полученные из аллергена клещей домашней пыли Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23, как указано в таблице I.
[0021] На фиг. 2 показаны очищенные слитые белки PreS по данным анализа электрофореза SDS-PAGE.
[0022] На фиг. 3 приведены результаты анализа IgE-реактивности Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой), определенной иммуноблоттингом.
[0023] На фиг. 4 приведены результаты теста активации базофилов, показывающие, что Der p 1-2 C3 не обладает аллергенной активностью.
[0024] На фиг. 5 приведены результаты теста активации базофилов, показывающие, что Der p 5 7 21 23_P6 не обладает аллергенной активностью.
[0025] На фиг. 6 показано ингибирование связывания IgE от пациентов с Der p 1 и Der p 2 с помощью антисывороток, специфичных для Der p 1-2 C3.
[0026] На фиг. 7 показано ингибирование связывания IgE от пациентов с Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23 с помощью антисывороток, специфичных для Der p 5 7 21 23_P6.
[0027] На фиг. 8A-8F показаны сывороточные титры IgG, специфически связывающегося с аллергенами клещей домашней пыли Der p 1 (фиг. 8A), Der p 2 (фиг. 8B), Der p 5 (фиг. 8C), Der p 7 (фиг. 8D), Der p 21 (фиг. 8E) и Der p 23 (фиг. 8F), определенные с помощью ELISA из сыворотки кроликов, иммунизированных 20 мкг BM35 («BM35 20»), 40 мкг BM35 («BM35 40»), 80 мкг BM35 («BM35 80»), Tyro-SIT («Bencard»), Alutard SQ 503 («ALK D.pter»), Alutard SQ 510 («ALK Dp/Df»), ACAROID («Allergoph.»), PURETHAL Milbenmischung («HAL»), суспензией для инъекций CLUSTOID Milben («Roxal») и nDer p1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21 и rDer p 23. Образцы были получены на сутки 38 и 66 после первой инъекции.
[0028] На фиг. 9A-9F показаны сывороточные титры IgG, специфически связывающегося с аллергенами клещей домашней пыли Der p 1 (фиг. 9A), Der p 2 (фиг. 9B), Der p 5 (фиг. 9C), Der p 7 (фиг. 9D), Der p 21 (фиг.9E) и Der p 23 (фиг.9F), определенные с помощью ELISA из сыворотки кроликов, иммунизированных 20 мкг BM35 («BM35 20»), 40 мкг BM35 («BM35 40») и 80 мкг BM35 («BM35 80») сывороток, полученных до первой инъекции указанных иммуногенов и на сутки 38 и 66 после первой инъекции. В качестве контроля определяли сывороточные титры IgG на соответствующие аллергены в образцах сыворотки кроликов, вакцинированных аллергенами nDer p 1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21 и rDer p 23.
Описание вариантов осуществления
[0029] Настоящее изобретение относится к одному или более слитым белкам формулы (I):
X1-Y-X2 (I),
где X1 и X2 каждый содержит четыре-восемь фрагментов аллергенов или их вариантов, слитых друг с другом, где указанные фрагменты аллергенов получены по меньшей мере из двух аллергенов клещей рода Dermatophagoides, и где Y представляет собой белок-носитель.
[0030] Неожиданно оказалось, что слитый белок, имеющий «архитектуру», определенную формулой (I), индуцирует образование in vivo антител, направленных по меньшей мере на два аллергена клещей рода Dermatophagoides. В частности, наличие от четырех до восьми фрагментов аллергенов на C- и N-концах белка-носителя оказывает положительный эффект в отношении индукции антител, ингибирующих взаимодействие аллергенспецифических IgE с их соответствующим аллергеном. Образование таких антител позволяет уменьшить или даже предупредить аллергические реакции, приводящие к необходимости лечения аллергии, вызванной аллергенами клещей рода Dermatophagoides.
[0031] В рамках изобретения, термин «слитый белок» относится к белку или полипептиду, полученному соединением двух или более полипептидов и/или пептидов друг с другом. Слитые белки можно получить с помощью технологии рекомбинантных ДНК или посредством химической ковалентной конъюгации.
[0032] В рамках изобретения, термин «фрагмент аллергена» относится к участку пептида или полипептида, полученному из аллергена фрагментацией.
[0033] От четырех до восьми, предпочтительно от четырех до шести фрагментов аллергенов, которые слиты друг с другом, происходят по меньшей мере из двух, предпочтительно, по меньшей мере трех, более предпочтительно, по меньшей мере четырех, в частности, из одного, двух, трех или четырех аллергенов одного или более клещей домашней пыли рода Dermatophagoides. Эти фрагменты аллергенов состоят от 8 до 100, предпочтительно от 8 до 80, более предпочтительно от 8 до 60, более предпочтительно от 10 до 60, более предпочтительно от 10 до 50, более предпочтительно от 15 до 50, более предпочтительно от 20 до 50, более предпочтительно от 25 до 50, последовательных аминокислотных остатков указанного аллергена.
[0034] Слитый белок по настоящему изобретению может содержать более одного фрагмента, полученного из одного и того же аллергена. В этом случае фрагменты могут происходить из разных (т. е. несмежных) областей или из смежных областей одного и того же аллергена. В последнем случае порядок фрагментов может отличаться от порядка в аллергене, из которого эти фрагменты получены.
[0035] Слитый белок по настоящему изобретению также может содержать один или более фрагментов аллергенов, имеющих одинаковую или по существу одинаковую аминокислотную последовательность. В рамках изобретения, термин «по существу одинаковые» означает, что две или более последовательностей, происходящих из одного и того же аллергена, имеют по меньшей мере 80%, предпочтительно, по меньшей мере 85%, более предпочтительно, по меньшей мере 90%, более предпочтительно, по меньшей мере 95% идентичность последовательностей.
[0036] Степень идентичности первой аминокислотной последовательности со второй аминокислотной последовательностью можно определить прямым сравнением обеих аминокислотных последовательностей с использованием определенных алгоритмов. Такие алгоритмы, например, включены в различные компьютерные программы или веб-сайты (например, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) (например, «BLAST 2 SEQUENCES (blastp)» (Tatusova et al. (1999) FEMS Microbiol. Lett., 174: 247-25; Corpet F., Nucl. Acids Res. (1988) 16: 10881-10890) со следующими параметрами: матрица BLOSUM62; штрафы за открытие гэпа 11 и штраф за удлинение гэпа 1; гэп х пропуск (x_dropoff50); ожидание 10,0; размер слова 3; фильтр: нет.
[0037] Слитый белок по настоящему изобретению может также включать варианты фрагментов аллергенов. Особо предпочтительные варианты фрагментов аллергенов содержат по меньшей мере один, предпочтительно, по меньшей мере два, более предпочтительно, по меньшей мере три аминокислотные замены по сравнению с фрагментом аллергенов. Особенно предпочтительной является замена по меньшей мере одного, предпочтительно, по меньшей мере двух, более предпочтительно, по меньшей мере трех, в частности, всех остатков цистеина, встречающихся в природе во фрагменте аллергена, на другие аминокислотные остатки, предпочтительно на остатки серина, треонина, глицина, аланина или лейцина. Таким образом, вариант фрагмента аллергена по настоящему изобретению предпочтительно не содержит остатков цистеина.
[0038] Фрагменты аллергенов в составе слитого белка по настоящему изобретению могут быть непосредственно слиты друг с другом или могут быть разделены одним аминокислотным остатком или линкерным пептидом, состоящим от 2 до 30, предпочтительно от 2 до 20, более предпочтительно от 2 до 10, более предпочтительно от 2 до 5 аминокислотных остатков. Также X1/X2 и белок-носитель Y могут быть разделены одним аминокислотным остатком или линкерным пептидом, как определено выше.
[0039] Слитый белок по настоящему изобретению можно получить рекомбинантно в любой экспрессионной системе, известной в данной области. Особенно предпочтительные экспрессионные системы включают бактерии (например, E. coli), дрожжевые клетки (например, Pichia pastoris) или клетки насекомых, такие как клетки S2 из Drosophila melanogaster, клетки Sf9 или Sf21 из Spodoptera frugiperda или клетки TNi из Trichoplusia ni.
[0040] Фрагменты аллергенов слитого белка по настоящему изобретению могут быть получены из любого клеща домашней пыли. Однако особенно предпочтительно использовать аллергены клещей домашней пыли, которые вызывают аллергические реакции у большинства людей. Следовательно, предпочтительно, чтобы фрагменты аллергена происходили из аллергенов клещей Dermatophagoides pteronyssinus и/или Dermatophagoides farinae.
[0041] Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, по меньшей мере два аллергена происходят из клещей Dermatophagoides pteronyssinus и выбраны из группы, состоящей из Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p. 23.
[0042] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, по меньшей мере два аллергена происходят из клещей Dermatophagoides farinae и выбраны из группы, состоящей из Der f 1, Der f 2, Der f 5, Der f 7, Der f 21 и Der f 23.
[0043] Люди с аллергией по-разному реагируют на аллергены, происходящие из одного и того же источника. Люди, страдающие аллергией на клещей домашней пыли, вызванной Dermatophagoides pteronyssinus и/или Dermatophagoides farinae, реагируют на аллергены Der p 1 и Der p 2, а также на Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23 и на аллергены Der f 1 и Der f 2, а также Der f 5, Der f 7, Der f 21 и Der f 23 соответственно. Следовательно, особенно предпочтительно обеспечить слитый белок, содержащий фрагменты аллергенов одного или более из данных аллергенов.
[0044] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, аллергенные фрагменты по меньшей мере двух аллергенов состоят из от 25 до 50 аминокислотных остатков, предпочтительно от 28 до 48 аминокислотных остатков, более предпочтительно от 30 до 45 аминокислотных остатков.
[0045] Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, по меньшей мере один, предпочтительно, по меньшей мере два, более предпочтительно, по меньшей мере три, в частности, все остатки цистеина фрагментов аллергенов заменены серином, треонином, глицином, аланином или лейцином.
[0046] Некоторые или все остатки цистеина фрагментов аллергенов, используемых в слитом белке по настоящему изобретению, могут быть заменены другими аминокислотными остатками. Замена одного или более остатков цистеина может уменьшить количество дисульфидных связей, потенциально образующихся во время рекомбинантной экспрессии слитых белков по настоящему изобретению или во время его обработки (например, очистки слитого белка из телец включения, производства вакцинного состава). Кроме того, замена остатков цистеина во фрагментах аллергенов приводит к уменьшению или полному удалению свободных серусодержащих групп в слитом белке, тем самым предупреждая взаимодействие таких групп с другими соединениями.
[0047] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, фрагмент аллергена Der p 1 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: TNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA (SEQ ID NO: 1), ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 2), HNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISN (SEQ ID NO: 3), VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL (SEQ ID NO: 4), TNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVA (SEQ ID NO: 5), ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 6) и HNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISN (SEQ ID NO: 7).
[0048] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der p 2 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: CHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK (SEQ ID NO: 8, EVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 9), HGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK (SEQ ID NO: 10) и EVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 11).
[0049] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der p 5 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: DYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ (SEQ ID NO: 12) и EQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV (SEQ ID NO: 13).
[0050] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der p 7 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности DPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFD (SEQ ID NO: 14).
[0051] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der p 21 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYY (SEQ ID NO: 15).
[0052] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der p 23 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCT (SEQ ID NO: 16) и GYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETST (SEQ ID NO: 17).
[0053] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 1 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: TSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA (SEQ ID NO: 38), ATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 39), QNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISN (SEQ ID NO: 40) и VRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM (SEQ ID NO: 41).
[0054] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 2 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: HGSDPCIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAK (SEQ ID NO: 42) и EVDVPGIDTNACHYIKCPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 43).
[0055] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 5 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: DYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQ (SEQ ID NO: 44) и ERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEV (SEQ ID NO: 45).
[0056] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 7 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности DPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETID (SEQ ID NO: 46).
[0057] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 21 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности YNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDD (SEQ ID NO: 47).
[0058] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент аллергена Der f 23 состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной аминокислотной последовательности GYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCT (SEQ ID NO: 48).
[0059] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения X1 содержит четыре фрагмента аллергена Der p 1 и два фрагмента Der p 2 или три фрагмента Der p 21 и три фрагмента Der p23.
[0060] Неожиданно оказалось, что X1, содержащий или состоящий из данных фрагментов аллергенов в любом порядке, слитый с N-концом белка-носителя, приводит к образованию антител, способных ингибировать связывание соответствующего природного аллергена с аллергенспецифическим IgE. Это позволяет использовать такой слитый белок в качестве вакцины для лечения или профилактики аллергических реакций, вызванных соответствующими аллергенами.
[0061] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, X2 содержит от двух до четырех фрагментов аллергена Der p 1 и два фрагмента Der p 2 или четыре фрагмента Der p 5, два фрагмента Der p 7.
[0062] Х2, слитый с С-концом белка-носителя, может включать или состоять из вышеуказанных фрагментов аллергенов в любом порядке. Оказалось, что такие фрагменты аллергенов на С-конце белка-носителя приводят к образованию слитого белка, индуцирующего образование антител, способных ингибировать связывание соответствующего природного аллергена с аллергенспецифическим IgE. Это позволяет использовать такой слитый белок в качестве вакцины для лечения или профилактики аллергических реакций, вызванных соответствующими аллергенами.
[0063] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения слитый белок содержит по меньшей мере один полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 и/или SEQ ID NO: 25.
[0064] Полипептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 18 и 19, содержат фрагменты аллергенов Der p 1 и Der p 2:
[0065] SEQ ID NO: 18:
VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISN
[0066] SEQ ID NO: 19:
EVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSG
[0067] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 18, может представлять X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X1 в формуле (I).
[0068] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 19, может представлять X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X2 в формуле (I).
[0069] Полипептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 20 и 21, содержат фрагменты аллергенов Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23:
[0070] SEQ ID NO: 20:
YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETSTGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETSTGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETST
[0071] SEQ ID NO: 21:
DYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
[0072] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 20, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X1 в формуле (I).
[0073] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 21, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X2 в формуле (I).
[0074] Полипептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 22 и 23, содержат фрагменты аллергенов Der f 1 и Der f 2:
[0075] SEQ ID NO: 22:
VRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIMQNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISNHGSDPCIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAKHGSDPCIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAKVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIMQNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISN
[0076] SEQ ID NO: 23:
EVDVPGIDTNACHYIKCPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSENEVDVPGIDTNACHYIKCPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSENATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQTSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQTSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA
[0077] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 22, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X1 в формуле (I).
[0078] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 23, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X2 в формуле (I).
[0079] Полипептиды, состоящие из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 24 и 25, содержат фрагменты аллергенов Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23:
[0080] SEQ ID NO: 24:
YNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDYNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDYNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDGYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCTGYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCTGYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCT
[0081] SEQ ID NO: 25:
DYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQDYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQDPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDDPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEVERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEV
[0082] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 24, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X1 в формуле (I).
[0083] Полипептид, состоящий из SEQ ID NO: 25, может представлять собой X1 или X2 в формуле (I), где в наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения указанный полипептид представляет собой X2 в формуле (I).
[0084] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения белок-носитель представляет собой поверхностный полипептид вируса семейства hepadnaviridae или фрагмент поверхностного полипептида.
[0085] Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения вирус семейства hepadnaviridae представляет собой вирус гепатита B.
[0086] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения поверхностный полипептид вируса семейства hepadnaviridae представляет собой PreS.
[0087] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения фрагмент поверхностного полипептида представляет собой PreS1 вируса гепатита B или PreS2 вируса гепатита B.
[0088] Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения белок-носитель содержит аминокислотную последовательность, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной последовательности SEQ ID NO: 26.
[0089] Белок-носитель, используемый в настоящем изобретении, может содержать или состоять из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 (GenBank идентификационный номер AAT28678.1):
GGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTN
[0090] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения слитый белок содержит или состоит из аминокислотной последовательности, которая является по меньшей мере на 90%, предпочтительно, по меньшей мере на 92%, более предпочтительно, по меньшей мере на 95%, более предпочтительно, по меньшей мере на 97%, в частности, на 100% идентичной последовательностям SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33.
[0091] Слитые белки по настоящему изобретению могут содержать PreS в качестве белка-носителя Y и фрагменты различных аллергенов, образующих два полипептида X1 и X2, соответственно, которые расположены смежно с белком-носителем (см. формулу (I)). Особенно предпочтительные слитые белки содержат фрагменты аллергенов Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23. Такие слитые белки могут состоять из следующих аминокислотных последовательностей.
[0092] SEQ ID NO: 27 («Der p 1-2 C3»):
VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSG
[0093] SEQ ID NO: 28 (“Der p 572123_P6 (большой)”)
YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETSTGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETSTGYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETSTGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
[0094] SEQ ID NO: 29 (“Der p 1-2 C1”)
VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSG
[0095] SEQ ID NO: 30 (“Der p 1-2 C2”)
VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVILHNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISNHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKHGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVAEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENEVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSG
[0096] SEQ ID NO: 31 (“Der p 5.7.21.23_P4P5”)
YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYGYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTGYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCTKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCTDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
[0097] SEQ ID NO: 32 (“Der p 5_7_21 C1”)
YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
[0098] SEQ ID NO: 33 (“Der p 5_7_21 C2”)
YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYYNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYYDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDDPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEVEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
[0099] SEQ ID NO: 36 (“Der f 1/2 C3”)
VRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIMQNGVVEERSYPYVAREQQSRRPNSQHYGISNHGSDPSIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAKHGSDPSIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAKVRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIMQNGVVEERSYPYVAREQQSRRPNSQHYGISNGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNEVDVPGIDTNASHYIKSPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSENEVDVPGIDTNASHYIKSPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSENATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTSASRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQTSASRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGSGSSWAFSG
[0100] SEQ ID NO: 37 (“Der f 5 7 21 23_P6”)
YNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDYNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDYNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDDGYFADPKDPSKFYISSNWEAIHKSSPGNTRWNEKELTSTGYFADPKDPSKFYISSNWEAIHKSSPGNTRWNEKELTSTGYFADPKDPSKFYISSNWEAIHKSSPGNTRWNEKELTSTGGWSSKPRKGMGTNLSVPNPLGFFPDHQLDPAFGANSNNPDWDFNPIKDHWPAANQVGVGAFGPGLTPPHGGILGWSPQAQGILTTVSTIPPPASTNRQSGRQPTPISPPLRDSHPQAMQWNSTAFHQALQDPRVRGLYFPAGGSSSGTVNPAPNIASHISSISARTGDPVTNDYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQDYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQDPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDDPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETIDERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEVERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEV
[0101] Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтическому препарату (т. е. вакцинному составу), содержащему, по меньшей мере один слитый белок по настоящему изобретению.
[0102] Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения препарат включает слитый белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и слитый белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
[0103] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения указанный препарат содержит от 10 нг до 1 г, предпочтительно от 100 нг до 10 мг, в частности, от 0,5 мкг до 200 мкг слитого белка по настоящему изобретению или молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный слитый белок, или вектор, содержащий указанную молекулу нуклеиновой кислоты.
[0104] Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения слитый белок по настоящему изобретению вводят субъекту по меньшей мере один раз в количестве от 0,01 пг/кг массы тела до 5 мг/кг массы тела, предпочтительно 0,1 пг/кг массы тела до 2 мг/кг массы тела.
[0105] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения слитый белок вводят пациенту в количестве от 5 до 100 мкг, предпочтительно от 10 до 80 мкг, более предпочтительно от 10 до 40 мкг, независимо от массы тела (т.е. доза может составлять 15, 20, 25, 30 или 80 мкг) или на кг массы тела.
[0106] Количество слитого белка, которое может быть объединено с эксципиентами для получения разовой лекарственной формы, будет варьировать в зависимости от пациента, которого лечат, и конкретного способа введения. Доза полипептидной конструкции может варьировать в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и масса тела субъекта, а также способности индуцировать желаемую ответную выработку антител у субъекта. Схема дозирования может быть скорректирована для обеспечения оптимального терапевтического ответа. Например, можно вводить несколько разделенных доз ежедневно, или доза может быть пропорционально уменьшена в зависимости от необходимости терапевтической ситуации. Доза полипептидной конструкции также может варьироваться для обеспечения оптимального профилактического ответа на дозу в зависимости от обстоятельств. Например, слитый белок по настоящему изобретению можно вводить субъекту с интервалами в несколько суток, одну, две недели или даже месяцы, всегда в зависимости от уровня индукции аллергенспецифического IgG.
[0107] В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения слитый белок и фармацевтический препарат по настоящему изобретению применяют от 2 до 10, предпочтительно от 2 до 7, еще более предпочтительно до 5 раз. В еще одном предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения однократное применение бустер-дозы назначают в период между 3 месяцами и 5 годами после первой схемы дозирования. Такое применение бустер-дозы можно повторять от 2 до 10 раз, предпочтительно от 2 до 5 раз и наиболее предпочтительно 2 или 3 раза. В особенно предпочтительном варианте осуществления временной интервал между последующими вакцинациями выбирается от 2 недель до 5 лет, предпочтительно от 3 недель до 3 лет, более предпочтительно от 3 недель до 1 года. Повторное введение слитого белка по настоящему изобретению может обеспечить максимальный конечный эффект лечения.
[0108] В особенно предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения слитый белок и/или фармацевтический препарат по настоящему изобретению можно применять с использованием от 3 до 6, предпочтительно 5, ежемесячных инъекций с последующими бустер-инъекциями, как указано выше, один раз в 1-6 месяцев, предпочтительно 3-4 месяцев, по меньшей мере в 1, предпочтительно, по меньшей мере 2, более предпочтительно 2-6, более предпочтительно 3-5 лет.
[0109] Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения указанный препарат дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или консервант.
[0110] Слитый белок и фармацевтический препарат по настоящему изобретению можно вводить подкожно, внутримышечно, внутривенно, трансмукозально и т.д. В зависимости от лекарственной формы и пути введения полипептидная конструкция по настоящему изобретению может быть объединена с эксципиентами, разбавителями, адъювантами и/или носителями. Предпочтительным адъювантом является гидроксид алюминия. Подходящие протоколы приготовления вакцинных составов известны специалистам в данной области, и их можно найти, например, в руководстве «Vaccine Protocols» (A. Robinson, M. P. Cranage, M. Hudson; Humana Press Inc., U.S.; 2nd edition 2003).
[0111] Слитый белок по настоящему изобретению может быть составлен также с другими адъювантами, постоянно используемыми в вакцинах. Например, подходящими адъювантами могут быть MF59, фосфат алюминия, фосфат кальция, цитокины (например, IL-2, IL-12, GM-CSF), сапонины (например, QS21), производные MDP, CpG- олигонуклеотиды, LPS, MPL, полифосфазены, эмульсии (например, адъювант Фрейнда, SAF), липосомы, виросомы, искомы, кохлеаты, микрочастицы PLG, частицы полоксамера, вирусоподобные частицы, термолабильный энтеротоксин (LT), холерный токсин (CT), мутантные токсины (например, LTK63 и LTR72), микрочастицы и/или полимеризованные липосомы. Подходящие адъюванты являются коммерчески доступными, например, такие как ASO1B (MPL и QS21 в липосомном составе), ASO2A, AS15, AS-2, AS-03 и их производные (GlaxoSmithKline, США); CWS (каркас клеточной стенки), TDM (трегалоза-6,6'-димиколат), LeIF (фактор инициации элонгации Leishmania), соли алюминия, такие как гель гидроксида алюминия (квасцы) или фосфат алюминия; соли кальция, железа или цинка; нерастворимая суспензия ацилированного тирозина; ацилированные сахара; катионные или анионные производные полисахаридов; полифосфазены; биоразлагаемые микросферы; монофосфориллипид A и квил A. Цитокины, такие как GM-CSF или интерлейкин-2, -7 или -12, также могут быть использованы в качестве адъювантов. Предпочтительные адъюванты для использования в индукции ответа преимущественно Th1-типа включают, например, комбинацию монофосфориллипида A, предпочтительно 3-0-деацилированного монофосфориллипида A (3D-MPL), необязательно с солью алюминия. Водные составы, содержащие монофосфориллипид А и поверхностно-активное вещество, описаны в WO 98/43670.
[0112] Еще одним предпочтительным адъювантом является сапонин или миметик сапонина или его производные, предпочтительно QS21 (Aquila Biopharmaceuticals Inc.), которые можно использовать отдельно или в комбинации с другими адъювантами. Например, улучшенная система включает комбинацию монофосфориллипида A и производного сапонина, такая как комбинация QS21 и 3D-MPL. Другие предпочтительные составы включают эмульсию «масло-в-воде» и токоферол. Особенно эффективный адъювант представляет собой QS21, 3D-MPL и токоферол в эмульсии «масло-в-воде». Дополнительные адъюванты на основе сапонина для применения в настоящем изобретении включают QS7 (описанный в WO 96/33739 и WO 96/11711) и QS17 (описанный в патенте США № 5057540 и EP 0362279 B1).
[0113] Фармацевтический препарат по настоящему изобретению наиболее предпочтительно включает гидроксид алюминия в качестве адъюванта.
[0114] Еще один аспект настоящего изобретения относится к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок по настоящему изобретению. Молекула нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению может представлять собой молекулу РНК или ДНК. Молекула нуклеиновой кислоты может быть частью вектора (например, вектора экспрессии белка, вектора интеграции, вектора клонирования), который может быть трансфектирован или введен в любой вид биологической клетки. Предпочтительные клетки включают бактериальные клетки, такие как Escherichia coli, дрожжевые клетки, такие как Pichia pastoris или Saccharomyces cerevisiae, клетки растений, клетки млекопитающих и клетки насекомых. Средства и способы получения таких молекул нуклеиновых кислот, векторов и клеток хорошо известны специалистам в данной области.
[0115] Молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую слитый белок по настоящему изобретению, также можно использовать непосредственно для вакцинации субъектов, нуждающихся в этом. Эти молекулы нуклеиновой кислоты могут быть молекулами РНК и/или ДНК.
[0116] Еще один аспект настоящего изобретения относится к вектору, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты по настоящему изобретению.
[0117] Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения, указанный вектор представляет экспрессионный вектор или клонирующий вектор. Вектор может быть вектором из бактерий, грибов, насекомых, вирусов или млекопитающих.
[0118] Вектор по настоящему изобретению предпочтительно может использоваться для целей клонирования и экспрессии в различных хозяевах, таких как бактерии, дрожжи, нитчатые грибы, клетки млекопитающих, клетки насекомых, клетки растений или любые другие прокариотические или эукариотические клетки. Следовательно, указанный вектор включает помимо нуклеиновой кислоты, кодирующей слитый белок по настоящему изобретению, специфические регуляторные последовательности хозяина.
[0119] Еще один аспект настоящего изобретения относится к клетке-хозяину, содержащей молекулу нуклеиновой кислоты или вектор по настоящему изобретению.
[0120] Еще один аспект настоящего изобретения относится к слитому белку или фармацевтическому препарату по настоящему изобретению для применения в лечении или профилактике аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли, в частности, вызванной Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 или Der p 23.
[0121] Термины «профилактика» и «предупреждение» в контексте настоящего изобретения относятся к профилактике или подавлению рецидива, начала и развития аллергии или ее симптома у субъекта в результате введения слитого белка или фармацевтического препарата по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления «профилактика» и «предупреждение» относятся к снижению риска развития аллергии на конкретные аллергены. Термин «профилактика» охватывает меры не только по предупреждению возникновения аллергии, но также по остановке ее развития и уменьшению ее последствий после выявления.
[0122] Термины «лечение» и «проводить лечение» в контексте настоящего изобретения относятся к уменьшению или подавлению прогрессирования и продолжительности аллергии, уменьшению или облегчению тяжести аллергии и облегчению одного или более ее симптомов. «Лечение» также включает ослабление и/или устранение симптомов аллергии или аллергических реакций. Слитый белок, который вызывает ослабление любого параметра, ассоциированного с аллергией, может быть идентифицирован как терапевтический слитый белок или конъюгат. Термин «лечение» относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим мерам. Например, субъекты, кому может быть полезно лечение композициями и способами по настоящему изобретению, включают субъектов, которые уже страдают аллергией, а также субъектов, у которых аллергию следует профилактировать.
[0123] Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируется следующими примерами, но без ограничения ими.
Примеры
[0124] Пример 1: конструирование фрагментов аллергенов для применения в слитых белках по настоящему изобретению
[0125] Пептиды, охватывающие последовательность аллергена, представляющего интерес, были идентифицированы на основе прогноза поверхностного обнажения аминокислот, определенного с помощью инструмента биоинформатики ProtScale с сервера ExPASY (http://web.expasy.org/protscale/). Если пептиды не содержали остатков цистеина в своей последовательности, то цистеины добавляли к их N- или C-концу для обеспечения возможности соединения с гемоцианином лимфы улитки (KLH). Пептиды синтезировали с использованием пептидного синтезатора Applied Biosystems Model 433A (Foster City, США), и затем очищали препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией (HPLC) (Dionex, Thermofischer Scientific, США) (Focke et al., FASEB J., 2001; 15 (11): 2042-4). Размер и идентичность пептидов подтверждали масс-спектрометрией (Bruker, Австрия).
[0126] В таблице I приведены фрагменты аллергенов, полученные из аллергенов клещей домашней пыли:
Der p 1
(TNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL; SEQ ID NO: 34),
Der p 2
(DQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAKIEIKASIEGLEVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSENVVVTVKVMetGDNGVLACAIATHAKIRD; SEQ ID NO: 35), Der p 5 (GenBank идентификационный номер: X17699), Der p 7 (GenBank идентификационный номер: U37044), Der p 21 (GenBank идентификационный номер: DQ354124) и Der p 23 (GenBank идентификационный номер: EU414751.1), которые тестировали в отношении IgE-реактивности, активации базофилов, иммуногенности и блокирования аллергенспецифических молекул IgE.
Таблица I
Фрагменты аллергенов
пептиды Положение в аллергене SEQ ID No. Аминокислотная последовательность
Der p 1
Der p 1 P1 1-41 1 TNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA
Der p 1 P1 1-41 5 TNA S SINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGG S GS S WAFSGVA
Der p 1 P2 42-84 2 ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ
Der p 1 P2 42-84 6 ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVD S ASQHG S HGDTIPRGIEYIQ
Der p 1 P3 85-115 3 HNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISN
Der p 1 P3 85-115 7 HNGVVQESYYRYVAREQS S RRPNAQRFGISN
Der p 1 P4 99-135 49 REQSCRRPNAQRFGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTH
Der p 1 P5 145-175 50 KDLDAFRHYDGRTIIQRDNGYQPNYHAVNIV
Der p 1 P6 155-187 51 GRTIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWI
Der p 1 P7 175-208 52 VGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAANI
Der p 1 P8 188-222 4 VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL
Der p 2
Der p 2 P1 1-33 53 DQVDVKDCANHEIKKVLVPGCHGSEPCIIHRGK
Der p 2 P2 21-51 8 CHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK
Der p 2 P2a 22-51 10 HGSEP S IIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK
Der p 2 P3 42-73 54 EANQNSKTAKIEIKASIEGLEVDVPGIDPNAC
Der p 2 P4 62-103 9 EVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN
Der p 2 P4a 62-103 11 EVDVPGIDPNA S HYMK S PLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN
Der p 2 P5 98-129 55 APKSENVVVTVKVMGDNGVLACAIATHAKIRD
Der p 5
Der p 5 P1 1-34 56 EDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ
Der p 5 P2 24-59 57 KKGELALFYLQEQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTI
Der p 5 P3 64-94 58 DGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYNLEMAKKSG
Der p 5 P4 78-113 59 DLDIFEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
Der p 5 P1-1 1-29 60 EDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELA
Der p 5 P1-2 6-34 12 DYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ
Der p 5 P4-1 78-108 61 DLDIFEQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARV
Der p 5 P4-2 83-113 13 EQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV
Der p 21
Der p 21 P1 1-34 62 FIVGDKKEDEWRMAFDRLMMEELETKIDQVEKGL
Der p 21 P2 35-71 63 LHLSEQYKELEKTKSKELKEQILRELTIGENFMKGAL
Der p 21 P3 67-95 64 MKGALKFFEMEAKRTDLNMFERYNYEFAL
Der p 21 P4 89-121 15 YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYY
Der p 7
Der p 7 P1 1-30 14 DPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFD
Der p 7 P2 20-50 65 VAAIEKSETFDPMKVPDHSDKFERHIGIIDL
Der p 7 P3 50-80 66 LKGELDMRNIQVRGLKQMKRVGDANVKSEDG
Der p 7 P4 90-125 67 VHDDVVSMEYDLAYKLGDLHPNTHVISDIQDFVVEL
Der p 7 P5 123-148 68 VELSLEVSEEGNMTLTSFEVRQFANV
Der p 7 P6 149-176 69 VNHIGGLSILDPIFAVLSDVLTAIFQDT
Der p 7 P7 170-198 70 TAIFQDTVRAEMTKVLAPAFKKELERNNQ
Der p 23
Der p 23 P1 1-32 71 MANDNDDDPTTTVHPTTTEQPDDKFECPSRFG
Der p 23 P2 15-48 72 PTTTEQPDDKFECPSRFGYFADPKDPHKFYICSN
Der p 23 P3 32-70 16 GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCT
Der p 23 P3a 32-70 73 GYFADPKDPHKF A ICSNW A AVHK A CPGNTRWN AAAA TCT
Der p 23 P3b 32-37 74 GYFADPKDPH A FYICSNWEAV AA DCPGNTRWNEDEETCT
Der p 23 P4 32-60 75 GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNT
Der p 23 P4a 32-60 76 GYFADPKDPHKFYI S SNWEAVHKD S PGNT
Der p 23 P5 42-70 77 KFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCT
Der p 23 P5a 42-70 78 KFYI S SNWEAVHKD S PGNTRWNEDEET S T
Der p 23 P5b 47-70 79 SNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCT
Der p 23 P6 32-70 17 GYFADPKDPHKFYI S SNWEAVHKD S PGNTRWNEDEET S T
Der p 23 P7 32-64 80 GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNE
Der p 23 P8 32-68 81 GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEET
Der f 1
Der f 1 P1 38 TSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA
Der f 1 P2 39 ATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ
Der f 1 P3 40 QNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISN
Der f 1 P8 41 VRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM
Der f 2
Der f 2 P2a 42 HGSDPCIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAK
Der f 2 P4a 43 EVDVPGIDTNACHYIKCPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSEN
Der f 5
Der f 5 P1-2 44 DYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQ
Der f 5 P4-2 45 ERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEV
Der f 7
Der f 7 P1 46 DPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETID
Der f 21
Der f 21 P4 47 YNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDD
Der f 23
Der f 23 P6 48 GYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCT
[0127] IgE-реактивность пептидов определяли с помощью дот-блоттинга. Для этого аликвотные порции по 0,5 мкг каждого пептида соответствующего аллергена и сывороточного альбумина человека (HSA), который использовали в качестве контроля, наносили в виде точек на нитроцеллюлозную мембрану Whatman Protran (GE healthcare, Little Chalfont, UK). После трехкратного блокирования в течение 20 мин буфером gold (50 мМ фосфат натрия [pH 7,4], 0,5% [об./ об.] Твина-20, 0,5% [мас./об.] BSA и 0,05% [мас./об.] азида натрия), мембраны инкубировали с сывороткой пациентов с аллергией на HDM (разведение 1:10 в буфере gold) или с сывороткой субъекта, не страдающего аллергией (в разведении 1:10 в буфере gold), в течение ночи при 4°C. Связанные IgE-антитела детектировали с помощью I125-меченных Ab против человеческого IgE в разведении 1:10 (Demeditec Diagnostics, Киль, Германия) и визуализировали с использованием авторадиографии (пленка Kodak XOMAT).
[0128] Для определения иммуногенности пептидов кроликов иммунизировали три раза (первая бустер-инъекция через 4 недели и вторая бустер-инъекция через 7 недель) каждым из пептидов, конъюгированных с KLH (200 мкг/инъекцию), и в качестве контроля соответствующим аллергеном (200 мкг/инъекцию) с использованием один раз полного адъюванта Фрейнда и дважды неполного адъюванта Фрейнда (Charles River, Chatillon sur Chalaronnne, Франция) и/или Al(OH)3 (Serva). Иммунные ответные реакции кроликов анализировали титрованием с помощью ELISA. Для измерения специфических кроличьих IgG-антител планшеты для ELISA покрывали в течение ночи соответствующим аллергеном. После блокирования планшеты инкубировали в течение ночи с серийными разведениями соответствующей кроличьей антисыворотки или сыворотки от неиммунизированного кролика (1:500, 1:2000, 1:10000 и 1:20000). Связанные кроличьи IgG-антитела детектировали с помощью меченной пероксидазой хрена ослиной антисыворотки против кроличьего IgG в разведении 1:1000 (Amersham Biosciences, Little Chalfont, UK).
[0129] Для определения блокирующей способности пептидов IgG планшеты для ELISA (Nunc, Roskilde, Дания), покрытые в течение ночи 1 мкг/мл соответствующего аллергена, предварительно инкубировали в течение 24 ч с каждой из антисывороток против пептида, антисывороток против аллергена или сывороткой от неиммунизированного кролика, которую использовали в качестве контроля (все в разведении 1:50), и затем промывали. После инкубации в течение ночи с сывороткой от пациентов с аллергией на HDM (разведение 1:10) связанные IgE-антитела детектировали с помощью меченных пероксидазой хрена козьих антител против IgE человека (KPL, Gaithersburg, MD). Процент снижения связывания IgE, достигаемый предварительной инкубацией с кроличьей антисывороткой, рассчитывали следующим образом: 100-(ODI/ODP) × 100). Показатели ODI и ODP представляют значения оптической плотности после предварительной инкубации с кроличьей иммунной сывороткой или нормальной кроличьей сывороткой соответственно.
[0130] Для тестирования аллергенной активности пептидов, клетки базофильного лейкоза крыс (RBL), экспрессирующие высокоаффинный рецептор IgE человека FcεRI (1×105 на лунку), в течение ночи нагружали сыворотку от пациентов с аллергией на HDM и сыворотку от одного субъекта без аллергии, которую использовали в качестве контроля, в разведении 1:10. Клетки трижды промывали буфером Тироде (Sigma, Австрия) и подвергали взаимодействию с серийными разведениями аллергена и пептидами в течение 1 ч. Супернатанты анализировали на β-гексозаминидазную активность, как описано ранее. Эксперименты проводили в трех повторностях, и результаты представлены в виде средних процентных значений от общей β-гексозаминидазы, высвобожденной после добавления 1% Тритона X-100 в виде +/- SE среднего значения (SEM).
Таблица II
пептиды IgE реактивность
(дот-блот) 		активация базофилов иммуногенность блокирование IgE
Der p 1
Der p 1 P1 - - да 52% CFA
Der p 1 P2 - - да 51% CFA
Der p 1 P3 - - да 19% CFA
Der p 1 P4 - - да 25% CFA
Der p 1 P5 - - да 18% CFA
Der p 1 P6 - - да 4% CFA
Der p 1 P7 - - да 35% CFA
Der p 1 P8 - - да 45% CFA
Der p 2
Der p 2 P1 - - да 41% CFA
Der p 2 P2 - - да 70% CFA
Der p 2 P3 - - да 78% CFA
Der p 2 P4 - - да 73% CFA
Der p 2 P5 - - слабая 3% CFA
Der p 5
Der p 5 P1 + не делали да 35% AlOH, 53% CFA
Der p 5 P2 - - да 23% AlOH, 37% CFA
Der p 5 P3 + - да 31% AlOH, 69% CFA
Der p 5 P4 + не делали да 42% AlOH, 83% CFA
Der p 5 P1-1 + не делали не делали не делали
Der p 5 P1-2 - - да 45% AlOH, 69% CFA
Der p 5 P4-1 + не делали не делали не делали
Der p 5 P4-2 - не делали да 45% AlOH, 78% CFA
Der p 21
Der p 21 P1 + - да 54% AlOH, 55% CFA
Der p 21 P2 + - да 14% AlOH, 39% CFA
Der p 21 P3 + - слабая <10%
Der p 21 P4 - - да 64% AlOH, 81% CFA
Der p 7
Der p 7 P1 - - да 66% AlOH, 65% CFA
Der p 7 P2 - - да 26% AlOH, 62% CFA
Der p 7 P3 - - да 26% AlOH, 33% CFA
Der p 7 P4 - - да 15% AlOH, 46% CFA
Der p 7 P5 - - слабая 0% AlOH, 0% CFA
Der p 7 P6 - - слабая 5% AlOH, 9% CFA
Der p 7 P7 - - да 22% AlOH, 52% CFA
Der p 23
Der p 23 P1 - - слабая не делали
Der p 23 P2 - - да 19%
Der p 23 P3 + не делали да не делали
Der p 23 P3a + не делали слабая не делали
Der p 23 P3b + не делали нет не делали
Der p 23 P4 - - да 33%
Der p 23 P4a * * * *
Der p 23 P5 + - да 39%
Der p 23 P5a * * * *
Der p 23 P5b * * * *
Der p 23 P6 - не делали да 70%
Der p 23 P7 - не делали да 5%
Der p 23 P8 - не делали да 6%
nd: не делали; выделенные жирным шрифтом и подчеркнутые буквы: остатки цистеина, замененные остатками серина и аланина; + указывает на наличие IgE-реактивности; - указывает на отсутствие IgE-реактивности или активации базофилов
[0131] Пример 2: рекомбинантное получение белков
[0132] Синтезировали гены (кодон-оптимизированные для экспрессии в Escherichia coli), кодирующие слитые белки Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (ATG: biosynthetics, Merzhausen, Германия и GenScript, Piscataway, США) и вставляли в сайты NdeI/XhoI pET-27b (Novagen, Германия). Рекомбинантные белки экспрессировали в штамме E.coli BL21-Gold (DE3). Экспрессию Der p 1-2 C3 (см. фиг. 1; SEQ ID NO: 27) индуцировали при OD600=0,4 добавлением 0,5 мМ IPTG к бактериальным культурам и инкубированием в течение 3 ч при 37°C. Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (см. фиг. 1; SEQ ID NO: 28) индуцировали при OD600=0,6 добавлением 1 мМ IPTG и инкубированием культур в течение 2,5 ч при 37°C.
[0133] После сбора и добавления ингибиторов протеаз проводили подготовку телец включения для удаления растворимых бактериальных белков. Осадки, содержащие частично очищенные белки Der p 1-2 C3, растворяли в 6 М мочевине, 10 мМ Трис pH 8, 4% и изопропаноле, и очистку продолжали анионообменной хроматографией с использованием колонки HiTrap DEAE Sepharose FF (GE healthcare). Элюирование белка с колонки достигалось при линейном увеличении концентрации NaCl. Элюированные фракции высокой чистоты объединяли, и проводили ступенчатый диализ для удаления мочевины и солей, и для обеспечения возможности рефолдинга белков без агрегации. Затем белок Der p 1-2 C3 инкубировали в течение минимум 4-5 ч при 4°C в следующих растворах: 1) 6 М мочевины, 154 мМ NaCl, 10 мМ Трис pH 8, 4% изопропанола, 2) 4 М мочевины, 103 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 8, 3) 2 мМ мочевины, 50,2 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 8, 4) 1 M мочевины, 25 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 8, 5) 0,5 М мочевины, 12,5 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 8, 6) 2 мМ Hepes, pH 8.
[0134] Клеточный лизат, содержащий Der p 5 7 21 23_P6 (большой), растворяли в растворе из 6 М мочевины, 10 мМ Трис pH 7,5, 4% изопропанола, наносили на колонку HiTrap DEAE Sepharose FF (GE healthcare) и элюирование белка с колонки достигалось при линейном увеличении концентрации NaCl. Чистые фракции объединяли и подвергали диализу следующим образом. Условия ступенчатого диализа Der p 5 7 21 23_P6 (большой): инкубирование белка в течение минимум 4-5 ч при 4°C, затем в следующих растворах: 1) 6 M мочевины, 100 мМ NaCl, 10 мМ Трис pH 7,5, 4% изопропанола, 2) 4 M мочевины, 100 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 3) 2 мМ мочевины, 100 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 4) 1 М мочевины, 100 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 5) 0,5 М мочевины, 100 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 6) 100 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 7) 50 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 8) 25 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 9) 12,5 мМ NaCl, 2 мМ Hepes, pH 7,5, 10) 2 мм Hepes, pH 7,5.
[0135] Чистоту белков определяли электрофорезом SDS-PAGE и окрашиванием Кумаси (см. фиг. 2). Эксклюзионную хроматографию использовали для подтверждения отсутствия олигомеризации подвергшихся рефолдингу белков.
[0136] Пример 3: определение IgE-реактивности
[0137] IgE-реактивность конструкций из примера 2 определяли иммуноблоттингом (Curin M. et al., Sci Rep., 22 (2017): 12135). Аликвотные порции, содержащие 0,5 мкг очищенного nDer p 1 (природный изолят; идентификационный номер: PDB: 3RVW_A; ссылка на методы: Hales B.J. et al., Clin. Exp. Allergy., 30 (2000): 934-943), rDer p 2 (рекомбинантно полученный Der p 2; последовательность опубликована в работе Chen K.W. et al., Allergy, 67 (2012): 609-21; ссылка на методы: Chen K. et al., Mol. Immunol., 45 (2008): 2486-2498), rDer p 5 (GeneBank: X17699; эталонные методы: Weghofer M. et al., Int. Arch. Allergy Immunol., 147 (2008): 101-9), rDer p 7 (GeneBank идентификационный номер: U37044; ссылка на методы: Resch Y. et al., Clin. Exp. Allergy, 41 (2011): 1468-77), rDer p 21 (GeneBank идентификационный номер: DQ354124; эталонные методы: Weghofer M. et al., Allergy, 63 (2008): 758-67), rDer p 23 (GeneBank идентификационный номер: EU414751.1; эталонные методы: Weghofer M. et al., J. Immunol., 190 (2013): 3059-67), Der p 1-2 C3 (см. пример 2), Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (см. пример 2), и для контроля BSA наносили в виде точек на нитроцеллюлозные мембраны (Schleicher & Schuell, Германия). Мембраны блокировали буфером gold (50 мМ фосфата натрия [pH 7,4], 0,5% [об./об.] Твина-20, 0,5% [мас./об.] BSA и 0,05% [мас./об.] азида натрия) трижды в течение 20 мин, и затем инкубировали с сывороткой пациентов с аллергией на клещей домашней пыли (разведенной 1:10 в буфере gold) и с сывороткой от субъекта, не страдающего аллергией (1:10 в буфере gold), в течение ночи при 4°C. Связанный IgE детектировали с использованием 125I-меченных Ab против человеческого IgE в разведении 1:10 (Demeditec Diagnostics, Киль, Германия) и визуализировали с использованием авторадиографии (пленка Kodak XOMAT), как описано ранее (Curin et al., Sci. Rep., 22 (2017): 12135).
[0138] IgE-реактивность Der p 1-2 C3 сравнивали с данным показателем Der p 1 и Der p 2 у 20 сенсибилизированных к HDM пациентов с помощью дот-блоттинга (фиг. 3A). В то время как пациенты с аллергией реагировали с Der p 1 и Der p 2, ни один из пациентов не показал соответствующей IgE-реактивности с Der p 1-2 C3. Какой-либо реактивности не наблюдали с сывороткой от субъекта без аллергии (NA), и контрольный белок BSA также не проявил IgE-реактивности (фиг. 3A). В следующих экспериментах IgE-реактивность Der p 5 7 21 23_P6 (большой) сравнивали с IgE-реактивностью для Der p 5, Der p 7, Der p21 и Der p 23. 18 HDM-сенсибилизированных пациентов давали реакцию с Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23 в зависимости от пациента, но ни один из тестированных пациентов не реагировал в варианте с Der p 5 7 21 23_P6 (большой) или с контрольным белком BSA (фиг. 3B).
[0139] Пример 4: конкурентный анализ IgE
[0140] Информация о способности пептидов индуцировать блокирующие антитела важна, поскольку было показано, что блокирующие антитела играют существенную роль в иммунотерапии аллергии.
[0141] Для исследования способности иммуноглобулинов (в частности, IgG), индуцированных введением млекопитающим Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой), ингибировать связывание IgE от пациентов с аллергией на клещей домашней пыли на аллергены клещей домашней пыли проводили конкурентным анализом ELISA.
[0142] Конкурентный анализ IgE ELISA проводили для оценки ингибирования связывания человеческого IgE с nDer p 1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21, rDer p 23 под действием анти-Der p 1-2 C3 и анти-Der p 5 7 21 23_P6 (большой) кроличьего IgG. Вкратце, планшеты для ELISA (Nunc, Дания), покрытые в течение ночи 1 мкг/мл соответствующего аллергена, предварительно инкубировали в течение 24 ч с антисывороткой против Der p 1-2 C3, против Der p 5 7 21 23_P6 (большой), соответствующей антисывороткой против аллергенов для сравнения (антисыворотка: против nDer p 1, против rDer p 2, против rDer p 5, против rDer p 7, против rDer p 21 или против rDer p 23) или для контроля использовали сыворотку от неиммунизированного кролика (все в разведении 1:3), и затем планшеты промывали. После инкубации в течение ночи с сывороткой от пациентов с аллергией на HDM (разведение 1:10) связанные IgE-антитела детектировали с использованием меченных пероксидазой хрена козьих антител против человеческого IgE (KPL, Gaithersburg, MD). Процентное снижение связывания IgE, достигаемое предварительной инкубацией с кроличьей антисывороткой, рассчитывали следующим образом: 100 - (ODI/ODP) × 100) (см. фиг. 6 и 7). Показатели ODI и ODP представляют значения оптической плотности после предварительной инкубации с кроличьей иммунной сывороткой или нормальной кроличьей сывороткой соответственно (см. Curin M. et al., Sci. Rep., 22 (2017): 12135).
[0143] Анти-Der p 1-2 C3 и анти-Der p 5 7 21 23_P6 (большой)-специфический кроличий IgG, использованный в данном примере, получали следующим образом. Кроликов (Charles River, Франция) иммунизировали трижды (первая бустер-инъекция через 4 недели и вторая бустер-инъекция через 7 недель) с использованием Der p 1-2 C3 или Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (200 мкг/инъекцию). Al(OH)3 (Serva) использовали в качестве адъюванта. Иммунизировали по 2 кроликов на каждый белок. Иммунные ответы кроликов анализировали титрованием с помощью ELISA.
[0144] Ингибирование связывания IgE от пациентов с nDer p 1, достигнутое с помощью анти-Der p 1-2 C3-антител, было несколько ниже, но близким (53% и 58% среднее ингибирование) по сравнению с ингибированием анти-nDer p 1-антителами (78% среднее ингибирование). Ингибирование связывания IgE с rDer p 2, достигнутое с помощью кроличьих антител против Der p 1-2 C3 (среднее значение 89% и 85%), было сравнимо с ингибированием, полученным с кроличьими антителами против Der p 2 (среднее значение 84%) (фиг. 6). Ингибирование связывания IgE от пациентов с Der p 5, достигнутое с помощью анти-Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (среднее ингибирование 76% и 85%), было сравнимо с ингибированием с помощью анти-Der p 5 (среднее ингибирование 88%), тогда как ингибирование связывания с Der p 21 было несколько ниже для Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (среднее ингибирование 58% и 58%), чем для анти-Der p 21 (среднее ингибирование 87%). Ингибирование связывания с Der p 7 и Der p 23 было выше у Der p 5 7 21 23_P6 (большой) (74% для обоих кроликов для Der p 7 и 47% и 42% для Der p 23), чем для анти-Der p 7 (58%) и анти-Der p 23 (7%) (фиг. 7).
[0145] Пример 5: аллергенная активность, определенная с помощью теста активации базофилов
[0146] Для тестирования аллергенной активности конструкций по настоящему изобретению, в частности Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой), клетки базофильного лейкоза крыс (RBL), экспрессирующие высокоаффинный рецептор IgE человека FcεRI (1 × 105 на лунку) в течение ночи нагружали сывороткой от пациентов с аллергией на клещей домашней пыли в разведении 1:10. Клетки трижды промывали буфером Тироде (Sigma, Австрия) и подвергали взаимодействию с серийным разведениям аллергена (100 нг/мл, 10 нг/мл и 1 нг/мл nDer p 1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21, rDer p 23, Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой) соответственно) в течение 1 ч. Сыворотку без аллергена или аллерген без сыворотки использовали в качестве отрицательного контроля. Супернатанты анализировали на β-гексозаминидазную активность, как описано ранее (Hartl et al., Allergy 59 (2004): 65-73). Опыты проводили в трех повторностях, и результаты представлены в виде средних процентов от общей β-гексозаминидазы, высвобожденной после добавления 1% Тритона Х-100 в виде +/- SE среднего (SEM) (см. фиг. 4 и 5).
[0147] Было обнаружено, что Der p 1 и Der p 2 индуцировали высвобождение β-гексозаминидазы из базофилов, нагруженных сывороточным IgE от пациентов с аллергией на HDM, тогда как Der p 1-2 C3 не активировал базофилы (фиг. 4). Результаты следующей серии экспериментов показали, что Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23 индуцировали высвобождение β-гексозаминидазы из базофилов, нагруженных сывороточным IgE, зависимым от пациента образом, тогда как Der p 5 7 21 23_P6 (большой) не индуцировал высвобождения базофилов с сыворотками от тех же пациентов (фиг. 5). Полученные данные указывают на то, что конструкции Der p 1-2 C3 и Der p 5 7 21 23_P6 (большой) не проявляют аллергенной активности.
[0148] Пример 6: образование аллергенспецифического IgG, индуцированного BM35, по сравнению с коммерческими вакцинами против HDM
[0149] Группы из двух новозеландских белых кроликов иммунизировали подкожно различными дозами BM35 (препарат, включающий слитые белки, содержащие аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 27 и 28 в массовом соотношении 1: 1), и коммерческими препаратами согласно указаниям производителя (см. таблицу III). Контрольных кроликов иммунизировали аллергенами nDer p1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21 и rDer p 23.
Таблица III
Продукт Компания Схема введения
Tyro-SIT Bencard Allergie GmbH неделя 1:0,1 мл
неделя 2:0,3 мл
неделя 3:0,5 мл
неделя 4:0,1 мл
неделя 5:0,3 мл
неделя 6:0,5 мл
неделя 9:0,5 мл
неделя 13:0,5 мл
неделя 17:0,5 мл
Alutard SQ 503 и 510 ALK-Abelló неделя 1:0,2 мл
неделя 2:0,4 мл
неделя 3:0,8 мл
неделя 4:0,2 мл
неделя 5:0,4 мл
неделя 6:0,8 мл
неделя 7:0,2 мл
неделя 8:0,4 мл
неделя 9: 0,8 мл
неделя 10:0,2 мл
неделя 11:0,4 мл
неделя 12:0,6 мл
неделя 13:0,8 мл
неделя 14:1 мл
неделя 18:1 мл
ACAROID Allergopharma неделя 1:0,1 мл
неделя 2:0,2 мл
неделя 3:0,4 мл
неделя 4:0,6 мл
неделя 5:0,1 мл
неделя 6:0,2 мл
неделя 7: 0,4 мл
неделя 8:0,6 мл
неделя 10:0,6 мл
неделя 13:0,6 мл
неделя 17:0,6 мл
PURETHAL Milbenmischung HAL Allergy неделя 1:0,05 мл
неделя 2:0,1 мл
неделя 3:0,2 мл
неделя 4:0,3 мл
неделя 5:0,4 мл
неделя 6:0,5 мл
неделя 8:0,5 мл
неделя 10:0,5 мл
неделя 12:0,5 мл
неделя 15:0,5 мл
неделя 19:0,5 мл
CLUSTOID Milben суспензия для инъекций Roxall Medizin GmbH неделя 1:0,2 мл (через 15 мин 0,5 мл)
неделя 4:0,5 мл
неделя 8:0,5 мл
неделя 12:0,5 мл
неделя 16:0,5 мл
[0150] У кроликов отбирали образцы крови и готовили сыворотки в день первой иммунизации и на сутки 38 и 66 после первой иммунизации для мониторинга образования IgG, специфически связывающегося с аллергенами клещей домашней пыли nDer p 1, rDer p 2, rDer p 5, rDer p 7, rDer p 21 и rDer p 23, для определения аллергенспецифической ответной продукции антител на аллергены клещей домашней пыли. Аллергенспецифическую ответную продукцию IgG у кроликов измеряли разведением сывороток 1:500 и с использованием ELISA. Связанный кроличий IgG детектировали с помощью конъюгированных с пероксидазой хрена ослиных антител против кроличьего IgG в разведении 1:2000 (NA 934; GE Healthcare UK Limited, Chalfont St Giles, United Kingdom). Развитие окраски проводили с помощью 2,2’-азино-бис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты). Сыворотки, полученные после иммунизации аллергенами клещей домашней пыли дикого типа, служили в качестве положительного контроля.
[0151] Результаты, приведенные на фиг. 8 и 9, четко показывают, что BM35 способен индуцировать образование существенно более высокого титра аллергенспецифических IgG-антител по сравнению с коммерческими продуктами. Особенно удивительно то, что BM35 индуцировал образование антител, направленных против всех 6 аллергенов клещей домашней пыли, тогда как коммерческие продукты приводили к существенно более низкому титру аллергенспецифического IgG и только к отдельным аллергенам. Таким образом, все коммерческие продукты показали более слабую индукцию IgG-антител, специфически связывающихся с очень ограниченным числом аллергенов, по сравнению с BM35.
--->
Список последовательностей
<110> Biomay AG
<120> ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА АЛЛЕРГИИ НА КЛЕЩЕЙ ДОМАШНЕЙ ПЫЛИ
<130> 25108-WO
<150> EP 18173258.7
<151> 2018-05-18
<160> 81
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 41
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 1
Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
1 5 10 15
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Cys Gly
20 25 30
Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala
35 40
<210> 2
<211> 43
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 2
Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp Leu
1 5 10 15
Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gln His Gly Cys His Gly
20 25 30
Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
35 40
<210> 3
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 3
His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg Glu
1 5 10 15
Gln Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile Ser Asn
20 25 30
<210> 4
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 4
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Leu
35
<210> 5
<211> 41
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 5
Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
1 5 10 15
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly
20 25 30
Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala
35 40
<210> 6
<211> 43
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 6
Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp Leu
1 5 10 15
Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His Gly Ser His Gly
20 25 30
Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
35 40
<210> 7
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 7
His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg Glu
1 5 10 15
Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile Ser Asn
20 25 30
<210> 8
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 8
Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gln
1 5 10 15
Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
20 25 30
<210> 9
<211> 42
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 9
Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met Lys
1 5 10 15
Cys Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile
20 25 30
Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn
35 40
<210> 10
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 10
His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gln Leu
1 5 10 15
Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
20 25 30
<210> 11
<211> 42
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 11
Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys
1 5 10 15
Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile
20 25 30
Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn
35 40
<210> 12
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 12
Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His Glu
1 5 10 15
Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln
20 25
<210> 13
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 13
Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile Leu Glu
1 5 10 15
Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu Val
20 25 30
<210> 14
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 14
Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val
1 5 10 15
Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 15
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 15
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr
<210> 16
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 16
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu Asp Glu Glu Thr Cys Thr
35
<210> 17
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 17
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr
35
<210> 18
<211> 192
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 18
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile
50 55 60
Ser Asn His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
65 70 75 80
Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
85 90 95
His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gln Leu
100 105 110
Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys Val Arg
115 120 125
Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala
130 135 140
Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val Val Ile
145 150 155 160
Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg
165 170 175
Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile Ser Asn
180 185 190
<210> 19
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 19
Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys
1 5 10 15
Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile
20 25 30
Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro Gly
35 40 45
Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu Val Lys Gly
50 55 60
Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys Ile Ala Pro
65 70 75 80
Lys Ser Glu Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln
85 90 95
Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His
100 105 110
Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr
115 120 125
Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg
130 135 140
Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Ser Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala
165 170 175
Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser
180 185 190
Ala Ser Gln His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu
195 200 205
Tyr Ile Gln Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu
210 215 220
Ile Asp Leu Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly
225 230 235 240
Gly Ser Gly Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly
245 250
<210> 20
<211> 216
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 20
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys
35 40 45
Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu
50 55 60
Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile
65 70 75 80
Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp
85 90 95
Glu Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr
100 105 110
Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr
115 120 125
Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro
130 135 140
Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Val His
145 150 155 160
Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser
165 170 175
Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser
180 185 190
Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp
195 200 205
Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr
210 215
<210> 21
<211> 180
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 21
Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His Glu
1 5 10 15
Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp Tyr Gln
20 25 30
Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys
35 40 45
Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp Pro Ile His Tyr Asp
50 55 60
Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala
65 70 75 80
Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile
85 90 95
Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu
100 105 110
Lys Ser Glu Thr Phe Asp Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys
115 120 125
Ser Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val
130 135 140
Lys Lys Ile Glu Val Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser
145 150 155 160
Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys
165 170 175
Lys Ile Glu Val
180
<210> 22
<211> 192
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 22
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Gln Ala Gly Asn Asn Leu Met Met Ile Glu Gln Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Met Gln Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Gln Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gln His Tyr Gly Ile
50 55 60
Ser Asn His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
65 70 75 80
Asn Leu Glu Ala Ile Phe Asp Ala Asn Gln Asn Thr Lys Thr Ala Lys
85 90 95
His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Asn Leu
100 105 110
Glu Ala Ile Phe Asp Ala Asn Gln Asn Thr Lys Thr Ala Lys Val Arg
115 120 125
Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gln
130 135 140
Ala Gly Asn Asn Leu Met Met Ile Glu Gln Tyr Pro Tyr Val Val Ile
145 150 155 160
Met Gln Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg
165 170 175
Glu Gln Gln Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gln His Tyr Gly Ile Ser Asn
180 185 190
<210> 23
<211> 254
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 23
Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Tyr Ile Lys
1 5 10 15
Cys Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn
20 25 30
Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro Gly
35 40 45
Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Tyr Ile Lys Cys Pro Leu Val Lys Gly
50 55 60
Gln Gln Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro
65 70 75 80
Lys Ser Glu Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr
85 90 95
Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gln His
100 105 110
Gly Cys His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr
115 120 125
Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp Leu
130 135 140
Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Cys Gly
145 150 155 160
Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu
165 170 175
Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp
180 185 190
Cys Ala Ser Gln His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile
195 200 205
Glu Tyr Ile Gln Thr Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro
210 215 220
Ser Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met
225 230 235 240
Gln Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala
245 250
<210> 24
<211> 210
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 24
Tyr Asn Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp
1 5 10 15
Leu Ala Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Tyr
20 25 30
Asn Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp Leu
35 40 45
Ala Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Tyr Asn
50 55 60
Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp Leu Ala
65 70 75 80
Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Gly Tyr Phe
85 90 95
Ala Asp Pro Lys Asp Pro Cys Lys Phe Tyr Ile Cys Ser Asn Trp Glu
100 105 110
Ala Ile His Lys Ser Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu
115 120 125
Leu Thr Cys Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro Cys Lys Phe
130 135 140
Tyr Ile Cys Ser Asn Trp Glu Ala Ile His Lys Ser Cys Pro Gly Asn
145 150 155 160
Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu Leu Thr Cys Thr Gly Tyr Phe Ala Asp
165 170 175
Pro Lys Asp Pro Cys Lys Phe Tyr Ile Cys Ser Asn Trp Glu Ala Ile
180 185 190
His Lys Ser Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu Leu Thr
195 200 205
Cys Thr
210
<210> 25
<211> 180
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 25
Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Gln Arg Ile His Glu
1 5 10 15
Gln Met Arg Lys Gly Glu Glu Ala Leu Leu His Leu Gln Asp Tyr Gln
20 25 30
Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Gln Arg Ile His Glu Gln Met Arg
35 40 45
Lys Gly Glu Glu Ala Leu Leu His Leu Gln Asp Pro Ile His Tyr Asp
50 55 60
Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Ile Asp Asp Ala Ile Ala Ala
65 70 75 80
Ile Glu Gln Ser Glu Thr Ile Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile
85 90 95
Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Ile Asp Asp Ala Ile Ala Ala Ile Glu
100 105 110
Gln Ser Glu Thr Ile Asp Glu Arg Tyr Asn Val Glu Ile Ala Leu Lys
115 120 125
Ser Asn Glu Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Gln Arg Val
130 135 140
Lys Lys Ile Glu Val Glu Arg Tyr Asn Val Glu Ile Ala Leu Lys Ser
145 150 155 160
Asn Glu Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Gln Arg Val Lys
165 170 175
Lys Ile Glu Val
180
<210> 26
<211> 173
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> белок-носитель PreS
<400> 26
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
1 5 10 15
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
20 25 30
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
35 40 45
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
50 55 60
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
65 70 75 80
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
85 90 95
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
100 105 110
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
115 120 125
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
130 135 140
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
145 150 155 160
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn
165 170
<210> 27
<211> 615
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 27
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile
50 55 60
Ser Asn His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
65 70 75 80
Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
85 90 95
His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Gln Leu
100 105 110
Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys Val Arg
115 120 125
Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala
130 135 140
Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val Val Ile
145 150 155 160
Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val Ala Arg
165 170 175
Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile Ser Asn
180 185 190
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
195 200 205
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
210 215 220
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
260 265 270
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
290 295 300
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
325 330 335
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
340 345 350
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Glu Val Asp
355 360 365
Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu
370 375 380
Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys
385 390 395 400
Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro
405 410 415
Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr
420 425 430
Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu
435 440 445
Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp
450 455 460
Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His Gly Ser His
465 470 475 480
Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr Asn Ala Ser
485 490 495
Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg Gln Met Arg
500 505 510
Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly Ser Ser Trp Ala
515 520 525
Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn
530 535 540
Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln
545 550 555 560
His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
565 570 575
Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
580 585 590
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly
610 615
<210> 28
<211> 569
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 28
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys
35 40 45
Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu
50 55 60
Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile
65 70 75 80
Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp
85 90 95
Glu Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr
100 105 110
Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr
115 120 125
Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro
130 135 140
Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Val His
145 150 155 160
Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser
165 170 175
Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser
180 185 190
Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp
195 200 205
Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg
210 215 220
Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe
225 230 235 240
Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro
245 250 255
Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln
260 265 270
Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly
275 280 285
Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser
290 295 300
Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro
305 310 315 320
Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln
325 330 335
Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg
340 345 350
Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro
355 360 365
Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly
370 375 380
Asp Pro Val Thr Asn Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met
385 390 395 400
Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr
405 410 415
Leu Gln Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile
420 425 430
His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp
435 440 445
Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp
450 455 460
Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile
465 470 475 480
His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala
485 490 495
Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Glu Gln Tyr Asn Leu
500 505 510
Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys
515 520 525
Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu Val Glu Gln Tyr Asn Leu Glu
530 535 540
Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu
545 550 555 560
Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu Val
565
<210> 29
<211> 615
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 29
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile
50 55 60
Ser Asn Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr
65 70 75 80
Gly Tyr Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro
85 90 95
Tyr Val Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg
100 105 110
Tyr Val Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe
115 120 125
Gly Ile Ser Asn His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys
130 135 140
Pro Phe Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr
145 150 155 160
Ala Lys His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
165 170 175
Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
180 185 190
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
195 200 205
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
210 215 220
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
260 265 270
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
290 295 300
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
325 330 335
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
340 345 350
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Glu Val Asp
355 360 365
Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu
370 375 380
Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys
385 390 395 400
Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro
405 410 415
Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr
420 425 430
Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu
435 440 445
Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp
450 455 460
Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His Gly Ser His
465 470 475 480
Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr Asn Ala Ser
485 490 495
Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg Gln Met Arg
500 505 510
Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly Ser Ser Trp Ala
515 520 525
Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn
530 535 540
Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln
545 550 555 560
His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
565 570 575
Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
580 585 590
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly
610 615
<210> 30
<211> 615
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 30
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile
50 55 60
Ser Asn Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr
65 70 75 80
Gly Tyr Phe Ala Ala Asn Ile Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro
85 90 95
Tyr Val Val Ile Leu His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg
100 105 110
Tyr Val Ala Arg Glu Gln Ser Ser Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe
115 120 125
Gly Ile Ser Asn His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys
130 135 140
Pro Phe Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr
145 150 155 160
Ala Lys His Gly Ser Glu Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
165 170 175
Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys
180 185 190
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
195 200 205
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
210 215 220
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
260 265 270
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
290 295 300
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
325 330 335
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
340 345 350
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Ala Thr Glu
355 360 365
Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln
370 375 380
Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile
385 390 395 400
Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly
405 410 415
Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro
420 425 430
Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly Val
435 440 445
Ala Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met
450 455 460
Lys Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp
465 470 475 480
Ile Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro
485 490 495
Gly Ile Asp Pro Asn Ala Ser His Tyr Met Lys Ser Pro Leu Val Lys
500 505 510
Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys Ile Ala
515 520 525
Pro Lys Ser Glu Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn
530 535 540
Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln
545 550 555 560
His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
565 570 575
Thr Asn Ala Ser Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
580 585 590
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly
595 600 605
Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly
610 615
<210> 31
<211> 568
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 31
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys
35 40 45
Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu
50 55 60
Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile
65 70 75 80
Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp
85 90 95
Glu Tyr Tyr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr
100 105 110
Ile Cys Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr
115 120 125
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
130 135 140
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Gly Gly Trp
145 150 155 160
Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro Asn
165 170 175
Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Gly Ala
180 185 190
Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys Asp His Trp
195 200 205
Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro Gly Leu Thr
210 215 220
Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala Gln Gly Ile
225 230 235 240
Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr Asn Arg Gln
245 250 255
Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg Asp Ser His
260 265 270
Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln Ala Leu Gln
275 280 285
Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly Ser Ser Ser
290 295 300
Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile Ser Ser Ile
305 310 315 320
Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
325 330 335
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
340 345 350
Glu Asp Glu Glu Thr Cys Thr Lys Phe Tyr Ile Cys Ser Asn Trp Glu
355 360 365
Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Asp Glu
370 375 380
Glu Thr Cys Thr Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu
385 390 395 400
Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu
405 410 415
Gln Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His
420 425 430
Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp Pro
435 440 445
Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu
450 455 460
Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His
465 470 475 480
Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val
485 490 495
Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Glu Gln Tyr Asn Leu Glu
500 505 510
Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu
515 520 525
Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu Val Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met
530 535 540
Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu
545 550 555 560
Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu Val
565
<210> 32
<211> 545
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 32
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys
35 40 45
Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu
50 55 60
Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile
65 70 75 80
Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp
85 90 95
Glu Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu
100 105 110
Ile Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro
115 120 125
Asp Glu Tyr Tyr Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile
130 135 140
Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr
145 150 155 160
Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys
165 170 175
Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp
180 185 190
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
195 200 205
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
210 215 220
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
260 265 270
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
290 295 300
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
325 330 335
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
340 345 350
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Asp Tyr Gln
355 360 365
Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys
370 375 380
Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp Tyr Gln Asn Glu Phe
385 390 395 400
Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu
405 410 415
Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr
420 425 430
Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys
435 440 445
Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu
450 455 460
Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu
465 470 475 480
Thr Phe Asp Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp
485 490 495
Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile
500 505 510
Glu Val Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile
515 520 525
Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu
530 535 540
Val
545
<210> 33
<211> 545
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 33
Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys Lys
1 5 10 15
Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu Tyr
20 25 30
Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile Lys
35 40 45
Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp Glu
50 55 60
Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu Ile
65 70 75 80
Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro Asp
85 90 95
Glu Tyr Tyr Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu Glu Ser Ile Lys Leu Leu
100 105 110
Ile Lys Lys Leu Asp Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Asn Pro
115 120 125
Asp Glu Tyr Tyr Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu
130 135 140
Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu
145 150 155 160
Gln Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Glu Arg Ile His
165 170 175
Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Gly Gly
180 185 190
Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser Val Pro
195 200 205
Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala Phe Gly
210 215 220
Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys Asp His
225 230 235 240
Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro Gly Leu
245 250 255
Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala Gln Gly
260 265 270
Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr Asn Arg
275 280 285
Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg Asp Ser
290 295 300
His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln Ala Leu
305 310 315 320
Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly Ser Ser
325 330 335
Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile Ser Ser
340 345 350
Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Asp Pro Ile His Tyr
355 360 365
Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala
370 375 380
Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys
385 390 395 400
Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile
405 410 415
Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr
420 425 430
Glu Glu Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys
435 440 445
Ser Glu Thr Phe Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu
450 455 460
Ile Asn Lys Ala Val Asp Glu Ala Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu
465 470 475 480
Thr Phe Asp Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp
485 490 495
Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile
500 505 510
Glu Val Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly Asp Ile
515 520 525
Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys Lys Ile Glu
530 535 540
Val
545
<210> 34
<211> 222
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 34
Thr Asn Ala Cys Ser Ile Asn Gly Asn Ala Pro Ala Glu Ile Asp Leu
1 5 10 15
Arg Gln Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Cys Gly
20 25 30
Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu
35 40 45
Ala Tyr Arg Asn Gln Ser Leu Asp Leu Ala Glu Gln Glu Leu Val Asp
50 55 60
Cys Ala Ser Gln His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile
65 70 75 80
Glu Tyr Ile Gln His Asn Gly Val Val Gln Glu Ser Tyr Tyr Arg Tyr
85 90 95
Val Ala Arg Glu Gln Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly
100 105 110
Ile Ser Asn Tyr Cys Gln Ile Tyr Pro Pro Asn Val Asn Lys Ile Arg
115 120 125
Glu Ala Leu Ala Gln Thr His Ser Ala Ile Ala Val Ile Ile Gly Ile
130 135 140
Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg Thr Ile Ile Gln
145 150 155 160
Arg Asp Asn Gly Tyr Gln Pro Asn Tyr His Ala Val Asn Ile Val Gly
165 170 175
Tyr Ser Asn Ala Gln Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val Arg Asn Ser Trp
180 185 190
Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala Ala Asn Ile
195 200 205
Asp Leu Met Met Ile Glu Glu Tyr Pro Tyr Val Val Ile Leu
210 215 220
<210> 35
<211> 131
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 35
Asp Gln Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val
1 5 10 15
Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly
20 25 30
Lys Pro Phe Gln Leu Glu Ala Val Phe Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys
35 40 45
Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser Ile Glu Gly Leu Glu Val Asp
50 55 60
Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys His Tyr Met Lys Cys Pro Leu
65 70 75 80
Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ile Lys Tyr Thr Trp Ile Val Pro Lys
85 90 95
Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Glu
100 105 110
Thr Gly Asp Asn Gly Val Leu Ala Cys Ala Ile Ala Thr His Ala Lys
115 120 125
Ile Arg Asp
130
<210> 36
<211> 617
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 36
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Gln Ala Gly Asn Asn Leu Met Met Ile Glu Gln Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Met Gln Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val
35 40 45
Ala Arg Glu Gln Gln Ser Arg Arg Pro Asn Ser Gln His Tyr Gly Ile
50 55 60
Ser Asn His Gly Ser Asp Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe
65 70 75 80
Asn Leu Glu Ala Ile Phe Asp Ala Asn Gln Asn Thr Lys Thr Ala Lys
85 90 95
His Gly Ser Asp Pro Ser Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Asn Leu
100 105 110
Glu Ala Ile Phe Asp Ala Asn Gln Asn Thr Lys Thr Ala Lys Val Arg
115 120 125
Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr Phe Gln
130 135 140
Ala Gly Asn Asn Leu Met Met Ile Glu Gln Tyr Pro Tyr Val Val Ile
145 150 155 160
Met Gln Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg
165 170 175
Glu Gln Gln Ser Arg Arg Pro Asn Ser Gln His Tyr Gly Ile Ser Asn
180 185 190
Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn Leu Ser
195 200 205
Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp Pro Ala
210 215 220
Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro Ile Lys
225 230 235 240
Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe Gly Pro
245 250 255
Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro Gln Ala
260 265 270
Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala Ser Thr
275 280 285
Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro Leu Arg
290 295 300
Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe His Gln
305 310 315 320
Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala Gly Gly
325 330 335
Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser His Ile
340 345 350
Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Glu Val Asp
355 360 365
Val Pro Gly Ile Asp Thr Asn Ala Ser His Tyr Ile Lys Ser Pro Leu
370 375 380
Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys
385 390 395 400
Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr
405 410 415
Asn Ala Ser His Tyr Ile Lys Ser Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr
420 425 430
Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu
435 440 445
Asn Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu Asp
450 455 460
Leu Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser Gln His Gly Ser His
465 470 475 480
Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln Thr Ser Ala Ser
485 490 495
Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu
500 505 510
Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Ser Gly Ser Ser Trp
515 520 525
Ala Phe Ser Gly Val Ala Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg
530 535 540
Asn Thr Ser Leu Asp Leu Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp Ser Ala Ser
545 550 555 560
Gln His Gly Ser His Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile
565 570 575
Gln Thr Ser Ala Ser Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu
580 585 590
Asp Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly
595 600 605
Ser Gly Ser Ser Trp Ala Phe Ser Gly
610 615
<210> 37
<211> 563
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> слитый белок
<400> 37
Tyr Asn Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp
1 5 10 15
Leu Ala Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Tyr
20 25 30
Asn Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp Leu
35 40 45
Ala Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Tyr Asn
50 55 60
Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp Leu Ala
65 70 75 80
Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp Gly Tyr Phe
85 90 95
Ala Asp Pro Lys Asp Pro Ser Lys Phe Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu
100 105 110
Ala Ile His Lys Ser Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu
115 120 125
Leu Thr Ser Thr Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro Ser Lys Phe
130 135 140
Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Ile His Lys Ser Ser Pro Gly Asn
145 150 155 160
Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu Leu Thr Ser Thr Gly Tyr Phe Ala Asp
165 170 175
Pro Lys Asp Pro Ser Lys Phe Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Ile
180 185 190
His Lys Ser Ser Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Lys Glu Leu Thr
195 200 205
Ser Thr Gly Gly Trp Ser Ser Lys Pro Arg Lys Gly Met Gly Thr Asn
210 215 220
Leu Ser Val Pro Asn Pro Leu Gly Phe Phe Pro Asp His Gln Leu Asp
225 230 235 240
Pro Ala Phe Gly Ala Asn Ser Asn Asn Pro Asp Trp Asp Phe Asn Pro
245 250 255
Ile Lys Asp His Trp Pro Ala Ala Asn Gln Val Gly Val Gly Ala Phe
260 265 270
Gly Pro Gly Leu Thr Pro Pro His Gly Gly Ile Leu Gly Trp Ser Pro
275 280 285
Gln Ala Gln Gly Ile Leu Thr Thr Val Ser Thr Ile Pro Pro Pro Ala
290 295 300
Ser Thr Asn Arg Gln Ser Gly Arg Gln Pro Thr Pro Ile Ser Pro Pro
305 310 315 320
Leu Arg Asp Ser His Pro Gln Ala Met Gln Trp Asn Ser Thr Ala Phe
325 330 335
His Gln Ala Leu Gln Asp Pro Arg Val Arg Gly Leu Tyr Phe Pro Ala
340 345 350
Gly Gly Ser Ser Ser Gly Thr Val Asn Pro Ala Pro Asn Ile Ala Ser
355 360 365
His Ile Ser Ser Ile Ser Ala Arg Thr Gly Asp Pro Val Thr Asn Asp
370 375 380
Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Gln Arg Ile His Glu Gln
385 390 395 400
Met Arg Lys Gly Glu Glu Ala Leu Leu His Leu Gln Asp Tyr Gln Asn
405 410 415
Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Gln Arg Ile His Glu Gln Met Arg Lys
420 425 430
Gly Glu Glu Ala Leu Leu His Leu Gln Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys
435 440 445
Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Ile Asp Asp Ala Ile Ala Ala Ile
450 455 460
Glu Gln Ser Glu Thr Ile Asp Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr
465 470 475 480
Glu Glu Ile Asn Lys Ala Ile Asp Asp Ala Ile Ala Ala Ile Glu Gln
485 490 495
Ser Glu Thr Ile Asp Glu Arg Tyr Asn Val Glu Ile Ala Leu Lys Ser
500 505 510
Asn Glu Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Gln Arg Val Lys
515 520 525
Lys Ile Glu Val Glu Arg Tyr Asn Val Glu Ile Ala Leu Lys Ser Asn
530 535 540
Glu Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Gln Arg Val Lys Lys
545 550 555 560
Ile Glu Val
<210> 38
<211> 42
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 38
Thr Ser Ala Cys Arg Ile Asn Ser Val Asn Val Pro Ser Glu Leu Asp
1 5 10 15
Leu Arg Ser Leu Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gln Gly Gly Cys
20 25 30
Gly Ser Cys Trp Ala Phe Ser Gly Val Ala
35 40
<210> 39
<211> 43
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 39
Ala Thr Glu Ser Ala Tyr Leu Ala Tyr Arg Asn Thr Ser Leu Asp Leu
1 5 10 15
Ser Glu Gln Glu Leu Val Asp Cys Ala Ser Gln His Gly Cys His Gly
20 25 30
Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr Ile Gln
35 40
<210> 40
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 40
Gln Asn Gly Val Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala Arg Glu
1 5 10 15
Gln Gln Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gln His Tyr Gly Ile Ser Asn
20 25 30
<210> 41
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 41
Val Arg Asn Ser Trp Asp Thr Thr Trp Gly Asp Ser Gly Tyr Gly Tyr
1 5 10 15
Phe Gln Ala Gly Asn Asn Leu Met Met Ile Glu Gln Tyr Pro Tyr Val
20 25 30
Val Ile Met
35
<210> 42
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 42
His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe Asn Leu
1 5 10 15
Glu Ala Ile Phe Asp Ala Asn Gln Asn Thr Lys Thr Ala Lys
20 25 30
<210> 43
<211> 42
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 43
Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Thr Asn Ala Cys His Tyr Ile Lys
1 5 10 15
Cys Pro Leu Val Lys Gly Gln Gln Tyr Asp Ala Lys Tyr Thr Trp Asn
20 25 30
Val Pro Lys Ile Ala Pro Lys Ser Glu Asn
35 40
<210> 44
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 44
Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met Gln Arg Ile His Glu
1 5 10 15
Gln Met Arg Lys Gly Glu Glu Ala Leu Leu His Leu Gln
20 25
<210> 45
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 45
Glu Arg Tyr Asn Val Glu Ile Ala Leu Lys Ser Asn Glu Ile Leu Glu
1 5 10 15
Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Gln Arg Val Lys Lys Ile Glu Val
20 25 30
<210> 46
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 46
Asp Pro Ile His Tyr Asp Lys Ile Thr Glu Glu Ile Asn Lys Ala Ile
1 5 10 15
Asp Asp Ala Ile Ala Ala Ile Glu Gln Ser Glu Thr Ile Asp
20 25 30
<210> 47
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 47
Tyr Asn Phe Glu Thr Ala Val Ser Thr Ile Glu Ile Leu Val Lys Asp
1 5 10 15
Leu Ala Glu Leu Ala Lys Lys Val Lys Ala Val Lys Ser Asp Asp
20 25 30
<210> 48
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 48
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro Cys Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Ile His Lys Ser Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu Lys Glu Leu Thr Cys Thr
35
<210> 49
<211> 37
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 49
Arg Glu Gln Ser Cys Arg Arg Pro Asn Ala Gln Arg Phe Gly Ile Ser
1 5 10 15
Asn Tyr Cys Gln Ile Tyr Pro Pro Asn Val Asn Lys Ile Arg Glu Ala
20 25 30
Leu Ala Gln Thr His
35
<210> 50
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 50
Lys Asp Leu Asp Ala Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg Thr Ile Ile Gln
1 5 10 15
Arg Asp Asn Gly Tyr Gln Pro Asn Tyr His Ala Val Asn Ile Val
20 25 30
<210> 51
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 51
Gly Arg Thr Ile Ile Gln Arg Asp Asn Gly Tyr Gln Pro Asn Tyr His
1 5 10 15
Ala Val Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gln Gly Val Asp Tyr Trp
20 25 30
Ile
<210> 52
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 52
Val Gly Tyr Ser Asn Ala Gln Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val Arg Asn
1 5 10 15
Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr Gly Tyr Phe Ala Ala
20 25 30
Asn Ile
<210> 53
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 53
Asp Gln Val Asp Val Lys Asp Cys Ala Asn His Glu Ile Lys Lys Val
1 5 10 15
Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro Cys Ile Ile His Arg Gly
20 25 30
Lys
<210> 54
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 54
Glu Ala Asn Gln Asn Ser Lys Thr Ala Lys Ile Glu Ile Lys Ala Ser
1 5 10 15
Ile Glu Gly Leu Glu Val Asp Val Pro Gly Ile Asp Pro Asn Ala Cys
20 25 30
<210> 55
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 55
Ala Pro Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly Asp
1 5 10 15
Asn Gly Val Leu Ala Cys Ala Ile Ala Thr His Ala Lys Ile Arg Asp
20 25 30
<210> 56
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 56
Glu Asp Lys Lys His Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met
1 5 10 15
Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr
20 25 30
Leu Gln
<210> 57
<211> 36
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 57
Lys Lys Gly Glu Leu Ala Leu Phe Tyr Leu Gln Glu Gln Ile Asn His
1 5 10 15
Phe Glu Glu Lys Pro Thr Lys Glu Met Lys Asp Lys Ile Val Ala Glu
20 25 30
Met Asp Thr Ile
35
<210> 58
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 58
Asp Gly Val Arg Gly Val Leu Asp Arg Leu Met Gln Arg Lys Asp Leu
1 5 10 15
Asp Ile Phe Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser Gly
20 25 30
<210> 59
<211> 36
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 59
Asp Leu Asp Ile Phe Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser
1 5 10 15
Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val Lys
20 25 30
Lys Ile Glu Val
35
<210> 60
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 60
Glu Asp Lys Lys His Asp Tyr Gln Asn Glu Phe Asp Phe Leu Leu Met
1 5 10 15
Glu Arg Ile His Glu Gln Ile Lys Lys Gly Glu Leu Ala
20 25
<210> 61
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 61
Asp Leu Asp Ile Phe Glu Gln Tyr Asn Leu Glu Met Ala Lys Lys Ser
1 5 10 15
Gly Asp Ile Leu Glu Arg Asp Leu Lys Lys Glu Glu Ala Arg Val
20 25 30
<210> 62
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 62
Phe Ile Val Gly Asp Lys Lys Glu Asp Glu Trp Arg Met Ala Phe Asp
1 5 10 15
Arg Leu Met Met Glu Glu Leu Glu Thr Lys Ile Asp Gln Val Glu Lys
20 25 30
Gly Leu
<210> 63
<211> 37
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 63
Leu His Leu Ser Glu Gln Tyr Lys Glu Leu Glu Lys Thr Lys Ser Lys
1 5 10 15
Glu Leu Lys Glu Gln Ile Leu Arg Glu Leu Thr Ile Gly Glu Asn Phe
20 25 30
Met Lys Gly Ala Leu
35
<210> 64
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 64
Met Lys Gly Ala Leu Lys Phe Phe Glu Met Glu Ala Lys Arg Thr Asp
1 5 10 15
Leu Asn Met Phe Glu Arg Tyr Asn Tyr Glu Phe Ala Leu
20 25
<210> 65
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 65
Val Ala Ala Ile Glu Lys Ser Glu Thr Phe Asp Pro Met Lys Val Pro
1 5 10 15
Asp His Ser Asp Lys Phe Glu Arg His Ile Gly Ile Ile Asp Leu
20 25 30
<210> 66
<211> 31
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 66
Leu Lys Gly Glu Leu Asp Met Arg Asn Ile Gln Val Arg Gly Leu Lys
1 5 10 15
Gln Met Lys Arg Val Gly Asp Ala Asn Val Lys Ser Glu Asp Gly
20 25 30
<210> 67
<211> 36
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 67
Val His Asp Asp Val Val Ser Met Glu Tyr Asp Leu Ala Tyr Lys Leu
1 5 10 15
Gly Asp Leu His Pro Asn Thr His Val Ile Ser Asp Ile Gln Asp Phe
20 25 30
Val Val Glu Leu
35
<210> 68
<211> 26
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 68
Val Glu Leu Ser Leu Glu Val Ser Glu Glu Gly Asn Met Thr Leu Thr
1 5 10 15
Ser Phe Glu Val Arg Gln Phe Ala Asn Val
20 25
<210> 69
<211> 28
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 69
Val Asn His Ile Gly Gly Leu Ser Ile Leu Asp Pro Ile Phe Ala Val
1 5 10 15
Leu Ser Asp Val Leu Thr Ala Ile Phe Gln Asp Thr
20 25
<210> 70
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 70
Thr Ala Ile Phe Gln Asp Thr Val Arg Ala Glu Met Thr Lys Val Leu
1 5 10 15
Ala Pro Ala Phe Lys Lys Glu Leu Glu Arg Asn Asn Gln
20 25
<210> 71
<211> 32
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 71
Met Ala Asn Asp Asn Asp Asp Asp Pro Thr Thr Thr Val His Pro Thr
1 5 10 15
Thr Thr Glu Gln Pro Asp Asp Lys Phe Glu Cys Pro Ser Arg Phe Gly
20 25 30
<210> 72
<211> 34
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 72
Pro Thr Thr Thr Glu Gln Pro Asp Asp Lys Phe Glu Cys Pro Ser Arg
1 5 10 15
Phe Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys
20 25 30
Ser Asn
<210> 73
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 73
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Ala Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Ala Ala Val His Lys Ala Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Thr Cys Thr
35
<210> 74
<211> 39
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 74
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Ala Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val Ala Ala Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu Asp Glu Glu Thr Cys Thr
35
<210> 75
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 75
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr
20 25
<210> 76
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 76
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Ser Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro Gly Asn Thr
20 25
<210> 77
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 77
Lys Phe Tyr Ile Cys Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro
1 5 10 15
Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Cys Thr
20 25
<210> 78
<211> 29
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 78
Lys Phe Tyr Ile Ser Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Ser Pro
1 5 10 15
Gly Asn Thr Arg Trp Asn Glu Asp Glu Glu Thr Ser Thr
20 25
<210> 79
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 79
Ser Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp
1 5 10 15
Asn Glu Asp Glu Glu Thr Cys Thr
20
<210> 80
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 80
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu
<210> 81
<211> 37
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> фрагмент аллергена
<400> 81
Gly Tyr Phe Ala Asp Pro Lys Asp Pro His Lys Phe Tyr Ile Cys Ser
1 5 10 15
Asn Trp Glu Ala Val His Lys Asp Cys Pro Gly Asn Thr Arg Trp Asn
20 25 30
Glu Asp Glu Glu Thr
35
<---

Claims (26)

1. Слитый белок для лечения или профилактики аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли, имеющий формулу (I):
X1-Y-X2 (I),
где X1 и X2 каждый содержит четыре-восемь фрагментов аллергенов, слитых друг с другом, где указанные фрагменты аллергенов получены по меньшей мере из двух аллергенов клещей Dermatophagoides pteronyssinus , выбранных из группы, состоящей из Der p 1, Der p 2, Der p 5, Der p 7, Der p 21 и Der p 23, и где Y представляет собой белок-носитель, где белок-носитель представляет собой поверхностный полипептид вируса семейства гепаднавирусов или фрагмент поверхностного полипептида; причем слитый белок содержит по меньшей мере один полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID No. 18, SEQ ID No. 19, SEQ ID No. 20, SEQ ID No. 21, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. 22, SEQ ID No. ID No. 23, SEQ ID No. 24 и/или SEQ ID No. 25, причем
а) фрагмент аллергена Der p 1 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: TNACSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA (SEQ ID NO: 1), ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 2), HNGVVQESYYRYVAREQSCRRPNAQRFGISN (SEQ ID NO: 3), VRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEEYPYVVIL (SEQ ID NO: 4), TNASSINGNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGSGSSWAFSGVA (SEQ ID NO: 5), ATESAYLAYRNQSLDLAEQELVDSASQHGSHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 6) и HNGVVQESYYRYVAREQSSRRPNAQRFGISN (SEQ ID NO: 7), и/или
b) фрагмент аллергена Der p 2 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: CHGSEPCIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK (SEQ ID NO: 8), EVDVPGIDPNACHYMKCPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 9), HGSEPSIIHRGKPFQLEAVFEANQNSKTAK (SEQ ID NO: 10) и EVDVPGIDPNASHYMKSPLVKGQQYDIKYTWIVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 11),
c) фрагмент аллергена Der p 5 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из: DYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ (SEQ ID NO: 12) и EQYNLEMAKKSGDILERDLKKEEARVKKIEV (SEQ ID NO: 13), и/или
d) фрагмент аллергена Der p 7 состоит из аминокислотной последовательности DPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFD (SEQ ID NO: 14), и/или
e) фрагмент аллергена Der p 21 состоит из аминокислотной последовательности YNYEFALESIKLLIKKLDELAKKVKAVNPDEYY (SEQ ID No. 15), и/или
f) фрагмент аллергена Der p 23 состоит из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из GYFADPKDPHKFYICSNWEAVHKDCPGNTRWNEDEETCT (SEQ ID NO: 16) и GYFADPKDPHKFYISSNWEAVHKDSPGNTRWNEDEETST (SEQ ID NO: 17);
g) фрагмент аллергена Der f 1, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из TSACRINSVNVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVA (SEQ ID NO: 38), ATESAYLAYRNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQ (SEQ ID NO: 39), QNGVVEERSYPYVAREQQCRRPNSQHYGISN (SEQ ID NO: 40) и VRNSWDTTWGDSGYGYFQAGNNLMMIEQYPYVVIM (SEQ ID NO: 41), и/или
h) фрагмент аллергена Der f 2, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из HGSDPCIIHRGKPFNLEAIFDANQNTKTAK (SEQ ID NO: 42) и EVDVPGIDTNACHYIKCPLVKGQQYDAKYTWNVPKIAPKSEN (SEQ ID NO: 43), и/ или
i) фрагмент аллергена Der f 5, состоящий из аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из DYQNEFDFLLMQRIHEQMRKGEEALLHLQ (SEQ ID NO: 44) и ERYNVEIALKSNEILERDLKKEEQRVKKIEV (SEQ ID NO: 45), и/или
j) фрагмент аллергена Der f 7, состоящий из аминокислотной последовательности DPIHYDKITEEINKAIDDAIAAIEQSETID (SEQ ID NO: 46), и/или
k) фрагмент аллергена Der f 21, состоящий из аминокислотной последовательности YNFETAVSTIEILVKDLAELAKKVKAVKSDD (SEQ ID NO: 47), и/или
l) фрагмент аллергена Der f 23, состоящий из аминокислотной последовательности GYFADPKDPCKFYICSNWEAIHKSCPGNTRWNEKELTCT (SEQ ID NO: 48).
2. Слитый белок по п.1, где белок-носитель представляет собой PreS.
3. Слитый белок по любому из пп.1-2, где слитый белок содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
4. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок по любому из пп.1-3.
5. Вектор для лечения или профилактики аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.4.
6. Клетка-хозяин для лечения или профилактики аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.4 или вектор по п.5.
7. Фармацевтический препарат для лечения или профилактики аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли, содержащий эффективное количество по меньшей мере одного слитого белка по любому из пп.1-3.
8. Фармацевтический препарат по п.7, где, когда в препарате содержатся два слитых белка, два слитых белка имеют массовое соотношение от 1:10 до 10:1.
9. Фармацевтический препарат по п.7, где, когда в препарате содержатся два слитых белка, два слитых белка имеют массовое соотношение от 1:5 до 5:1.
10. Фармацевтический препарат по п.7, где, когда в препарате содержатся два слитых белка, два слитых белка имеют массовое соотношение от 2:1 до 1:2.
11. Фармацевтический препарат по любому из пп.7-10, где указанный препарат содержит слитый белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и/или слитый белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
12. Применение слитого белка по любому из пп.1-3 для получения фармацевтического препарата для лечения или профилактики аллергии, вызванной аллергеном клеща домашней пыли.
RU2020141729A 2018-05-18 2019-05-17 Лечение и профилактика аллергии на клещей домашней пыли RU2815386C2 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP18173258.7 2018-05-18

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2020141729A RU2020141729A (ru) 2022-06-20
RU2815386C2 true RU2815386C2 (ru) 2024-03-14

Family

ID=

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2486206C2 (ru) * 2006-06-09 2013-06-27 Биомей Аг Гипоаллергенный слитый белок, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая его, вектор экспрессии, клетка-хозяин, вакцинная композиция и его применение
EP2727934A1 (en) * 2012-09-20 2014-05-07 Universidad de Cartagena Fusion proteins with representation of different allergens: vaccine proposal for mite allergies
RU2630652C2 (ru) * 2011-06-09 2017-09-11 Биомей Аг Гибридные белки-носители пептидов в качестве вакцин от аллергии

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2486206C2 (ru) * 2006-06-09 2013-06-27 Биомей Аг Гипоаллергенный слитый белок, молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая его, вектор экспрессии, клетка-хозяин, вакцинная композиция и его применение
RU2630652C2 (ru) * 2011-06-09 2017-09-11 Биомей Аг Гибридные белки-носители пептидов в качестве вакцин от аллергии
EP2727934A1 (en) * 2012-09-20 2014-05-07 Universidad de Cartagena Fusion proteins with representation of different allergens: vaccine proposal for mite allergies

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HUANG HUEY-JY. et al., Towards a non-allergenic peptide mix containing the T cell epitopes of the clinically most relevant house dust mite allergens for tolerance induction, THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 2016, v. 196, n. suppl. 1 192.5, найдено в интернет [28.10.2022] по адресу: https://www.jimmunol.org/content/196/1_Supplement/192.5. BANERJEE S. et al., Conversion of Der p 23, a New Major House Dust Mite Allergen, into a Hypoallergenic Vaccine, THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 2014, v. 192, n. 10, p.4867-4875. *
РОЙТ и др., Иммунология, пер. с англ.- М.: Мир, 2000, стр. 10, 149, 150, 151, 153, 158. TAKAI T. et al., Determination of the N- and C-terminal sequenses required to bind human IgE of the major house dust mite allergen Der f 2 and epitope mapping for monoclonal antibodies, Molecular Immunology, V.34, N. 3. 1997, p. 255-261. BURKS. et al., Modification of a Major Peanut Allergen Leads to Loss of IgE Binding, Int. Arch. Allergy Immunol.,1999 v.118, p.313-314;. TAKAI Т. et al., Effects of proline mutations in the major house dust mite allergen Der f 2 on IgE-binding and histamine-releasing activity, Eur. J. Biochem., 2000, v. 267, n.22, p.6650-6656. MULLER S. et al., Spliceosomal peptide P140 for immunotherapy of systemic lupus erythematosus: results of an early phase II clinical trial, Arthritis & Rheumatism: Official Journal of the American College of Rheumatology, 2008, v. 58, n. 12, p.3873-3883. VIOLA J.R. et al., Non-viral nanovectors for gene delivery: factors that govern successful *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK2924047T3 (en) vaccine carrier
JP6987744B2 (ja) 虫刺され過敏症の治療
KR20110036809A (ko) 파킨슨병과 관련된 증상을 치료하기 위한 화합물
DK2121012T3 (en) Peptides derived from the major allergen OF Ambrosia artemisiifolia () AND USES THEREOF
HUE028583T2 (en) PCSK9 vaccine
US11771760B2 (en) Treatment and prevention of house dust mite allergies
RU2008146920A (ru) Клещевой аллерген домашней пыли
US7485305B2 (en) Allergen from house-dust mites
EP4313138A1 (en) Sars-cov-2 subunit vaccine
JP2010535504A5 (ru)
KR20180038557A (ko) 타겟 폴리펩티드를 제시하기 위한 폴리펩티드 캐리어 및 이의 용도
RU2815386C2 (ru) Лечение и профилактика аллергии на клещей домашней пыли
US20090098167A1 (en) PHL P 1 Allergen Derivative
US20090162369A1 (en) Synthetic chimeric peptides
AU2017329865B2 (en) Polypeptide construct comprising fragments of allergens
PT1434793E (pt) Alérgenos recombinantes com ligação a ige reduzida, mas com antigenicidade de células t não diminuída
US20160257723A1 (en) Antigenic polypeptides of trichinella and uses thereof
EP2281836B9 (en) Hybrid proteins from Parietaria judaica major allergens and uses thereof