RU2814887C2 - Высокопроизводительный способ определения эффективности предотвращения образования и удаления налета на зубах - Google Patents

Abstract

Группа изобретений относится к высокопроизводительному анализу для выявления молекул, которые предотвращают образование и/или удаляют наружный налет на зубах. Группу изобретений образуют способы определения эффективности предотвращения образования и/или удаления налета на зубах. Способы включают стадию обеспечения покрытых пленкой частиц гидроксиапатита и стадию обеспечения контакта частиц с первым раствором и вторым раствором. Первый раствор представляет собой либо испытуемый раствор, либо окрашивающий раствор. Второй раствор представляет собой другой испытуемый раствор или окрашивающий раствор. Чтобы определить количество окрашивающего состава в жидкости включена стадия отделения от полученных частиц жидкости, содержащей окрашивающий состав, который вводят на стадии обеспечения контакта и измерения поглощения в УФ- и видимом диапазоне отделенной жидкости. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил.

Description

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к высокопроизводительному анализу для выявления молекул, которые предотвращают образование и/или удаляют наружный налет на зубах.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Образование налета на зубах может происходить по многим причинам. К ним относятся регулярное потребление продуктов, содержащих образующие налет химические вещества или окрашивающие компоненты, например, продуктов питания, напитков (кофе, чай, кола, вино), или употребление табака. В других случаях образование налета может быть результатом воздействия лекарственных средств, заболеваний или низкого уровня гигиены полости рта. Образование налета влияет на эстетический внешний вид зубов, а также может быть фактором, способствующим разрушению и потере зубов.

Существует множество составов продуктов, разработанных для предотвращения образования или удаления налета на зубах. К ним относятся отбеливатели или окислители или составы, не содержащие окислителей. В процессе разработки таких составов необходимо проводить масштабное исследование, чтобы продемонстрировать эффективность такого состава.

Для ряда разработанных процедур исследования эффективности используют зубы коровы или человека, или керамические диски, или порошковые образцы. В ходе таких процедур используют зубной спектрофотометр для оценки цвета образцов как до, так и после погружения в окрашивающие растворы (например, чай). Регистрируют показатели цветового пространства L*a*b*, установленные Международной комиссией по освещению (CIE), и рассчитывают изменение цвета (ΔE*). Нанесение налета проводится либо до, либо после обработки образцов составом для предотвращения образования или удаления налета. При исследовании удаления налета образцы погружают в окрашивающий раствор до обработки образцов составом для удаления налета. При исследовании предотвращения образования налета образцы погружают в окрашивающий раствор после обработки образцов составом для предотвращения образования налета.

В ходе другой процедуры исследования керамический порошок помещают в окрашивающий раствор либо до (исследование удаления), либо после (исследование предотвращения образования) применения обрабатывающего раствора. Впоследствии порошок растворяют при добавлении кислоты и измеряют изменение цвета в отделяемой жидкости.

Указанные выше способы являются трудоемкими и, следовательно, не могут считаться высокопроизводительными способами скрининга для определения эффективности испытываемых составов для предотвращения образования или удаления налета на зубах.

Существует потребность в разработке высокопроизводительных способов определения эффективности предотвращения образования или удаления налета на зубах.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В соответствии с одним аспектом в настоящем изобретении предложены способы определения эффективности предотвращения образования и/или удаления налета на зубах, включающие стадии обеспечения покрытых пленкой частиц гидроксиапатита, обеспечения контакта частиц с первым раствором и затем вторым раствором, при этом первый раствор представляет собой либо испытуемый раствор, либо окрашивающий раствор, а второй раствор представляет собой другой указанный испытуемый раствор или окрашивающий раствор, отделения от полученных частиц жидкости, содержащей окрашивающий состав, вводимый на стадии обеспечения контакта b), и измерения поглощения (A) в УФ- (AU) и видимом диапазоне отделенной жидкости, чтобы определить количество окрашивающего состава в жидкости.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На ФИГ. 1 представлены значения поглощения окрашивающего состава с окрашенных кофе покрытых пленкой частиц гидроксиапатита после воздействия последовательности растворов полифосфата в течение 1 или 2 минут обработки, и

на ФИГ. 2 представлены значения поглощения окрашивающего состава, удаленного с поверхности частиц гидроксиапатита после предварительной обработки для предотвращения образования налета.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В настоящем документе описан новый высокопроизводительный способ выявления молекул, которые предотвращают образование и/или удаляют налет на зубах.

Способы настоящего изобретения включают стадию обеспечения покрытых пленкой частиц гидроксиапатита для применения в данном способе. В соответствии с настоящим изобретением можно использовать любые приемлемые покрытые пленкой частицы гидроксиапатита, как приобретенные из коммерческих источников, так и полученные в соответствии с описанием в настоящем документе.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления покрытые пленкой частицы гидроксиапатита получают покрытием частиц гидроксиапатита (HAp) слюной для образования пленки (белкового покрытия). Способ предпочтительно включает смешивание частиц гидроксиапатита с составом слюны и инкубирование суспензии HAp/слюна в течение времени, достаточного для образования пленочного покрытия на частицах гидроксиапатита.

Можно использовать любые приемлемые частицы гидроксиапатита и слюну. Приемлемые частицы гидроксиапатита могут иметь размер (диаметр) в диапазоне от более около 3 мкм до около 200 мкм или от 10 мкм до около 50 мкм или около 20 мкм. В продаже доступны различные частицы гидроксиапатита, например частицы гидроксиапатита, предлагаемые компанией Bio-Rad. Слюну можно получить искусственным или естественным путем. Например, приемлемую искусственную слюну можно приобрести в компании Northeast Laboratories (г. Берлин, штат Коннектикут) T0300).

Покрытые пленкой HAp можно получить с использованием любых приемлемых количеств HAp и слюны. В некоторых вариантах осуществления диапазон концентраций HAp в слюне составляет от около 0,1 до около 250 миллиграмм/миллилитр, в том числе от около 0,5 до около 200, от около 1 до около 150, от около 10 до около 150, от около 50 до около 150 и около 100 миллиграмм/миллилитр HAp в слюне. Смесь HAp/слюна можно инкубировать в течение любого достаточного времени, предпочтительно по меньшей мере 5 минут, в том числе по меньшей мере 10 минут или по меньшей мере 15 минут, и при любой достаточной температуре, в том числе от около 20 до около 60 °C, в том числе от около 30 до около 50, от около 30 до около 40 и около 37°C.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления суспензию покрытые пленкой частицы HAp/слюна, полученную после инкубирования, фильтруют, причем надосадочную жидкость слюны направляют в отходы. Впоследствии суспензию покрытые пленкой частицы HAp/слюна можно перенести в большой фильтрующий контейнер для периодического фильтрования. Размер пор фильтрующего контейнера должен быть меньше размера частиц HAp. Фильтрующий контейнер позволяет легко отделять твердые частицы HAp от надосадочной жидкости с помощью центрифугирования или вакуумного фильтрования. В одном варианте осуществления фильтрующий контейнер может представлять собой систему фильтрования с использованием микроцентрифужных пробирок, которая отделяет надосадочную жидкость от частиц посредством центрифугирования через относительно инертную мембрану с размером пор всего лишь 0,22 мкм и вплоть до 5 мкм. В одном варианте осуществления фильтрующий контейнер может представлять фильтрующий 96-луночный планшет, который отделяет надосадочную жидкость от частиц посредством вакуумного фильтрования через относительно инертную мембрану с размером пор всего лишь 0,22 мкм и вплоть до 5 мкм.

Полученные покрытые пленкой частицы HAp обрабатывают последовательно первым раствором и вторым раствором, при этом первый раствор представляет собой либо испытуемый раствор, либо окрашивающий раствор, а второй раствор представляет собой другой испытуемый раствор или окрашивающий раствор. Будет очевидно, что в способах, предназначенных для оценки эффективности испытуемого раствора при удалении налета, покрытые пленкой частицы HAp вначале вступают в контакт с окрашивающим раствором для окрашивания частиц, а впоследствии вступают в контакт с испытуемым раствором для определения способности удаления такого налета с поверхности частиц. В способе определения способности испытуемого раствора предотвращать окрашивание частицы сначала контактируют с испытуемым раствором, а затем вступают в контакт с окрашивающим раствором.

Удаление налета

В соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами осуществления стадия обеспечения контакта в способах определения эффективности удаления налета может включать стадии обеспечения контакта покрытых пленкой HAp с первым раствором, представляющим собой окрашивающий раствор. В результате, получают суспензия покрытых пленкой частиц HAp и окрашивающего раствора. Различные окрашивающие растворы можно приобрести или приготовить перед стадией окрашивания, например кофе, чай, вино, колу, полифенолы, железосодержащие растворы, смеси из двух или более перечисленных выше и т. п. Концентрация окрашивающего компонента в окрашивающем растворе может меняться в зависимости от характера налета. Например, для растворимого кофе характерный диапазон составляет от около 0,1 до около 20% мас./об. Для чая характерный диапазон составляет от около 0,1 до около 10% мас./об. Вино можно использовать на уровне 100% или можно разбавляться водой. Диапазон концентрации частиц HAp в окрашивающем растворе составляет от около 0,1 до около 10 миллиграмм/миллилитр или около 1 миллиграмм/миллилитр. Суспензию частицы/окрашивающий раствор инкубируют, чтобы получить окрашенные частицы. Смесь частиц HAp и окрашивающего раствора должна инкубироваться по меньшей мере в течение 1 минуты, или около 15 минут, или около 30 минут при температуре от около 20°C до около 60°C, или от около 30°C до около 50°C или около 37°C.

Раствор окрашенных частиц HAp фильтруют, причем надосадочную жидкость окрашивающего раствора предпочтительно направляют в отходы. В одном варианте осуществления окрашенные частицы HAp в окрашивающем растворе впоследствии переносят в большой фильтрующий контейнер для периодического фильтрования. Как указано выше, размер пор фильтрующего контейнера должен быть меньше размера частиц HAp. Отделение твердых частиц HAp от надосадочной жидкости может осуществляться посредством центрифугирования или вакуумного фильтрования. Окрашенные частицы могут промываться водой предпочтительно до тех пор, пока в отделяемой жидкости перестанут обнаруживаться слабо связанные компоненты окрашивающего раствора. Остаток на фильтрующем контейнере предпочтительно представляет собой покрытые пленкой окрашенные частицы HAp.

В некоторых вариантах осуществления покрытые пленкой окрашенные частицы HAp обрабатывают испытуемым раствором, чтобы определить эффективность испытуемого раствора для удаления налета. В некоторых вариантах осуществления покрытые пленкой окрашенные частицы HAp перед обработкой испытуемым раствором ресуспендируют в деионизированной воде до концентрации от около 0,1 до около 250 миллиграмм/миллилитр или от около 10 до около 150 миллиграмм/миллилитр или около 100 миллиграмм/миллилитр. В некоторых вариантах осуществления суспендированные HAp обрабатывают испытуемым раствором в течение короткого периода времени, тогда как в других вариантах осуществления суспензию можно хранить в контейнере, например в конической пробирке объемом 50 миллилитров, до тех пор, пока она не потребуется для проведения исследования удаления налета.

Стадия обеспечения контакта дополнительно включает обеспечение контакта покрытых пленкой окрашенных частиц HAp с испытуемым раствором, содержащим состав или раствор для удаления налета. Концентрация раствора для удаления налета зависит от состава для удаления налета и используемого (-ых) ингредиента (-ов) для удаления налета. Объем для обработки, используемый для каждого образца, составляет от около 50 микролитров до около 300 микролитров, или от около 100 микролитров до около 250 микролитров или около 200 микролитров. Частицы HAp суспендируют в растворе для удаления налета, предпочтительно при перемешивании во время обработки, чтобы получить суспензию частицы HAp/состав для удаления налета. Время обработки должно составлять по меньшей мере 10 секунд, или около более 30 секунд, или около более одной минуты, или около более 2 минут. Температура инкубирования составляет от около 20°C до около 60°C или около 25°C.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления стадия отделения включает отделение использованной испытуемой текучей среды и любого содержащегося в ней удаленного с поверхности частиц окрашивающего состава для проведения измерений. В некоторых вариантах осуществления суспензию частиц HAp и испытуемого раствора/текучей среды для удаления налета, полученную на приведенной выше стадии, фильтруют, чтобы отделить такую жидкость от частиц и собрать ее для дальнейшего анализа. Как будет очевидно специалисту в данной области, количество окрашивающего состава в отделяемой текучей среде соответствует количеству окрашивающего состава, удаленному с поверхности частицы с налетом при воздействии испытуемого раствора.

Измерения поглощения в УФ- и видимом диапазоне в соответствии со стадией измерения проводят для текучей среды, отделенной на стадии отделения. Можно использовать любое приемлемое устройство и оборудование для исследования УФ- и видимого поглощения. Например, для сканирования поглощения в диапазоне длин волн от 230 до 1000 нм можно использовать многорежимное устройство считывания для планшетов. При анализе удаленных компонентов более высокое значение поглощения на 450 нм указывает на более полное удаление налета, тогда как низкое поглощение на 450 нм свидетельствует о минимальном удалении налета или об отсутствии такого удаления.

Предотвращение образования налета

В соответствии с некоторыми предпочтительными вариантами осуществления стадия обеспечения контакта в способах для определения эффективности предотвращения образования налета может включать стадии обеспечения контакта покрытых пленкой HAp с первым раствором, представляющим собой испытуемый/предотвращающий образование налета раствор. Концентрация раствора для предотвращения образования налета зависит от состава для предотвращения образования налета и используемого (-ых) ингредиента (-ов) для предотвращения налета. Объем для обработки, используемый для каждого образца, например, может составлять от около 50 микролитров до около 300 микролитров или от около 100 микролитров до около 250 микролитров или около 200 микролитров. Частицы HAp суспендируют в растворе для предотвращения образования налета предпочтительно при перемешивании во время обработки, чтобы получить суспензию частицы HAp/состав для предотвращения образования налета. Время обработки должно составлять по меньшей мере 10 секунд, или около более 30 секунд, или около более двух минут, или около более 10 минут. Температура инкубирования составляет от около 20 °C до около 60 °C или от около 20 °C до около 40 °C или около 25 °C.

Затем обработанную покрытую пленкой суспензию частицы HAp/слюна фильтруют для удаления надосадочной жидкости раствора обработки. Как указано выше, удаление твердых частиц HAp из надосадочной жидкости может осуществляться посредством центрифугирования или вакуумного фильтрования. Обработанные частицы можно промывать водой до тех пор, пока остаток в фильтрующем контейнере не будет представлять собой предварительно обработанные покрытые пленкой частицы HAp.

Затем предварительно обработанные покрытые пленкой частицы HAp вступают в контакт со вторым раствором, содержащим окрашивающий состав. В результате, получают суспензию обработанных покрытых пленкой частиц HAp и окрашивающего раствора. Для нанесения налета на частицы на стадии обеспечения контакта можно использовать любые из описанных выше для удаления налета различных окрашивающих составов и условий окрашивания/инкубирования. Раствор окрашенных частиц HAp предпочтительно фильтруют для отделения надосадочной жидкости окрашивающей текучей среды от частиц, и при этом любой слабо связанный налет смывается с поверхности предварительно обработанных покрытых пленкой частиц Нар для получения окрашенных предварительно обработанных покрытых пленкой частиц HAp.

В соответствии с вариантами осуществления по предотвращению образования налета стадия отделения текучей среды, содержащей окрашивающий состав, для дальнейшего анализа включает элюирование налета с поверхности окрашенных покрытых пленкой предварительно обработанных частиц HAp и сбор элюированной жидкости, содержащей окрашивающий состав, для проведения анализа. Налет, остающийся на частицах после стадии обеспечения контакта и фильтрования, элюируют любой приемлемой элюирующей текучей средой, в том числе, например, раствором полифосфатов высокой концентрации. К примерам полифосфатов относятся пирофосфат, триполифосфат, фитиновая кислота, триметафосфат, гексаметафосфат. В некоторых вариантах осуществления используют пирофосфаты, растворенные в воде. Элюирующий раствор смешивают с окрашенными предварительно обработанными покрытыми пленкой частицами HAp, чтобы получить суспензию частицы HAp/полифосфат. Диапазон концентраций может составлять от 1 до 10% мас./об. или 5% мас./об. полифосфата в воде. pH раствора может находиться в диапазоне pH от 6 до 13, например около 12. Диапазон объемов, которые можно использовать для смыва налета, составляет от 50 микролитров до 300 микролитров или 200 микролитров. Время инкубирования раствора элюента составляет по меньшей мере около 30 секунд, или около одной минуты, или около пяти минут, или около десяти 10 минут.

Затем суспензию покрытые пленкой окрашенные частицы HAp/полифосфат фильтруют, как описано выше, с одним изменением, которое заключается в том, что смытую надосадочную жидкость собирают для дальнейшего анализа.

Наконец, проводят измерения поглощения в УФ- и видимом диапазоне смытой надосадочной жидкости. Для сканирования поглощения в диапазоне длин волн от 230 до 1000 нм можно использовать многорежимное устройство считывания для планшетов. При анализе предотвращения образования налета низкое значение поглощения на 450 нм указывает на более высокий уровень предотвращения образования налета, а высокое поглощение на 450 нм свидетельствует о минимальном предотвращении образования налета или об отсутствии такого предотвращения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Исследование удаления налета

Использовали следующую общую процедуру, которая более подробно описана ниже.

Процедура проведения исследования удаления налета

1. Обеспечение покрытых пленкой частиц гидроксиапатита (HAp) при смешении частиц со слюной и с инкубированием смеси.

2. Перенос суспензии частицы HAp/слюна в большой фильтрующий контейнер для периодического фильтрования.

3. Фильтрование надосадочной жидкости слюны, которую направляют в отходы.

4. Окрашивание частиц при добавлении окрашивающего раствора непосредственно в фильтрующий контейнер с последующим инкубированием.

5. Перенос суспензии окрашенных покрытых пленкой частиц HAp в фильтрующий контейнер.

6. Фильтрование окрашенных покрытых пленкой частиц HAp, при этом надосадочную жидкость направляют в отходы.

7. Ресуспендирование окрашенных покрытых пленкой частиц HAp в воде, полученную суспензию необязательно сохраняют для последующего исследования.

8. Обеспечение окрашенных покрытых пленкой частиц HAp для обработки.

9. Обработка окрашенных частиц HAp.

10. Фильтрование и сбор надосадочной жидкости.

11. Измерения поглощения в УФ- и видимом диапазоне для собранной надосадочной жидкости.

Навеску в 1 грамм порошка гидроксиапатита (Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния, № по кат. 1570020) суспендировали в искусственной слюне (Northeast Laboratories, г. Уинслоу, штат Мэн, № по кат. T0300) в концентрации 10 миллиграмм/100 миллилитров и инкубировали в течение 15 минут при 37 °C для формирования пленочного покрытия. Надосадочную жидкость отделяли от частиц посредством фильтрования. Частицы ресуспендировали в растворе для окрашивания, содержащем 10% растворимого кофе в концентрации 10 миллиграмм/100 микролитров, и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Раствор кофе отделяли фильтрованием и с частиц смывали все остатки слабо связанного налета. Затем окрашенные кофе покрытые пленкой частицы гидроксиапатита суспендировали в воде в концентрации 10 миллиграмм/100 микролитров. Аликвоту 100 микролитров для каждого образца отбирали в соответствующие фильтрующие емкости (96-луночный фильтрующий планшет или фильтрующая пробирка) и надосадочную жидкость отделяли от частиц (n=3 на образец). Готовили растворы для обработки в диапазоне от 0 до 2% раствора полифосфата в воде. Маточный раствор 2% мас./об. последовательно разбавляли водой 1 : 1, чтобы получить концентрации полифосфатов для обработки 1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,0625% и 0,03125% мас./об. В качестве контрольного раствора 0% использовали воду. Затем к окрашенным частицам гидроксиапатита добавляли 200 микролитров соответствующего раствора для обработки в течение 1 или 2 минут при комнатной температуре с перемешиванием (120 об/мин). Концентрация полифосфатных растворов для обработки менялась в диапазоне от 0,031 до 2% мас./об. Для сравнения с полифосфатными растворами для обработки исследовали отрицательный контроль с использованием дистиллированной воды в качестве раствора для обработки. После завершения обработки налет, переведенный в раствор, отделяли от частиц и собирали в 96-луночный планшет. Затем измеряли поглощение (Tecan, Infinite M200 Pro) в диапазоне от 230 до 1000 нм с инкрементом увеличения 10 нм между измерениями. Поглощение при 450 нм использовали в качестве показателя удаления налета, при этом более высокие значения поглощения указывали на более эффективное удаление налета с частиц гидроксиапатита.

На ФИГ. 1 представлены значения поглощения на 450 нм налета, удаленного с окрашенных кофе покрытых пленкой частиц гидроксиапатита в зависимости от концентрации полифосфатных растворов для обработки в течение 1 и 2 минут. На фигуре продемонстрирована очевидная зависимость от дозы для растворов полифосфата. По мере повышения концентрации полифосфатных растворов от 0,031 до 0,500% наблюдалось более эффективное удаление налета. Уровень удаления налета оставался неизменным с 0,500 до 2,00%. На фигуре также не отмечается заметной разницы между обработкой в течение 1 или 2 минут.

Пример 2. Исследование предотвращения образования налета

Используют следующую общую процедуру, которая более подробно описана ниже.

Процедура проведения исследования предотвращения образования налета

1. Обеспечение покрытых пленкой частиц гидроксиапатита (HAp) при смешении частиц со слюной и с инкубированием смеси.

2. Перенос суспензии частицы HAp/слюна в большой фильтрующий контейнер для периодического фильтрования.

3. Фильтрование надосадочной жидкости слюны, которую направляют в отходы.

4. Обработка покрытых пленкой частиц HAp, при этом надосадочную жидкость направляют в отходы.

5. Фильтрование обработанных покрытых пленкой частиц HAp, при этом надосадочную жидкость направляют в отходы.

6. Окрашивание предварительно обработанных покрытых пленкой частиц HAp при добавлении окрашивающего раствора непосредственно в фильтрующий контейнер с последующим инкубированием.

7. Отмывка какого-либо слабо связанного налета с поверхности предварительно обработанных покрытых пленкой частиц HAp.

8. Элюирование налета с поверхности окрашенных предварительно обработанных покрытых пленкой частиц HAp с помощью 5% раствора PPi.

9. Фильтрование и сбор надосадочной жидкости.

10. Измерения поглощения в УФ- и видимом диапазоне для собранной надосадочной жидкости.

Навеску в 1 грамм частиц гидроксиапатита (Bio-Rad, г. Геркулес, штат Калифорния, № по кат. 1570020) суспендировали в искусственной слюне в концентрации 10 миллиграмм/100 миллилитров и инкубировали в течение 15 минут при 37°C для формирования пленочного покрытия. Аликвоту 100 микролитров для каждого образца отбирали в соответствующие фильтрующие емкости (96-луночный фильтрующий планшет или фильтрующая пробирка) и надосадочную жидкость отделяли от частиц (n=3 на образец обработки). Готовили растворы для обработки в диапазоне от 0 до 2% раствора полифосфата в воде. Маточный раствор 2% мас./об. последовательно разбавляли водой 1 : 1, чтобы получить концентрации полифосфатов для обработки 1%, 0,5%, 0,25%, 0,125%, 0,0625% и 0,03125% мас./об. В качестве контрольного раствора 0% использовали воду. Затем к покрытым пленкой частицам гидроксиапатита добавляли 200 микролитров обрабатывающего раствора полифосфата в течение 1 минуты при комнатной температуре с перемешиванием (120 об/мин). Обработанную смесь разделяли фильтрованием и частицы обрабатывали 100 микролитрами раствора для окрашивания 10% растворимого кофе и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Кофе отделяли фильтрованием и смывали с частиц все остатки слабо связанного налета. Остаточный налет на частицах смывали 200 микролитрами щелочного раствора 5% пирофосфата при инкубировании при комнатной температуре в течение 10 минут. Смытый налет собирали в 96-луночном планшете и измерения поглощения проводили (Tecan, Infinite M200 Pro) в диапазоне от 230 до 1000 нм с инкрементом увеличения 10 нм между измерениями. Поглощение при 450 нм использовали в качестве показателя предотвращения образования налета, при этом низкие значения поглощения указывали на более эффективное предотвращение образования налета на частицах гидроксиапатита.

На ФИГ. 2 представлены значения поглощения на 450 нм налета, смытого с окрашенных кофе покрытых пленкой частиц гидроксиапатита, в зависимости от концентрации полифосфатных растворов для предварительной обработки в течение 1, 2 и 10 минут для предотвращения образования налета. На фигуре продемонстрирована очевидная зависимость от дозы для растворов полифосфата. По мере повышения концентрации полифосфатных растворов от 0,031 до 0,500% наблюдалось более эффективное предотвращение образования налета. Уровень удаления налета оставался неизменным с 0,500 до 2,00%. На фигуре также не отмечается заметных различий предварительной обработки для предотвращения образования налета в течение 1, 2 и 10 минут.

Claims (27)

1. Способ определения эффективности предотвращения образования налета на зубах, включающий стадии:

a) обеспечения покрытых пленкой частиц гидроксиапатита, имеющих размер в диапазоне от 3 мкм до 200 мкм, в 96-луночном фильтрующем контейнере,

b) обеспечения контакта указанных частиц с первым раствором и затем вторым раствором в указанном фильтрующем контейнере, при этом указанный первый раствор представляет собой либо испытуемый раствор, либо окрашивающий раствор, а второй раствор представляет собой другой указанный испытуемый раствор или окрашивающий раствор,

c) отделения указанных частиц от указанного раствора, содержащего окрашивающий состав, вводимый на стадии обеспечения контакта b), и

d) измерения поглощения в диапазоне от 230 до 1000 нм устройством считывания отделенного раствора на стадии с), чтобы определить количество окрашивающего состава в таком растворе, причем низкое значение поглощения на 450 нм указывает на более высокий уровень предотвращения образования налета, а высокое поглощение на 450 нм свидетельствует о минимальном предотвращении образования налета или об отсутствии такого предотвращения.

2. Способ определения эффективности удаления налета на зубах, включающий стадии:

a) обеспечения покрытых пленкой частиц гидроксиапатита, имеющих размер в диапазоне от 3 мкм до 200 мкм, в 96-луночном фильтрующем контейнере,

b) обеспечения контакта указанных частиц с первым раствором и затем вторым раствором в указанном фильтрующем контейнере, при этом указанный первый раствор представляет собой либо испытуемый раствор, либо окрашивающий раствор, а второй раствор представляет собой другой указанный испытуемый раствор или окрашивающий раствор,

c) отделения указанных частиц от указанного раствора, содержащего окрашивающий состав, вводимый на стадии обеспечения контакта b), и

d) измерения поглощения в диапазоне от 230 до 1000 нм устройством считывания отделенного раствора на стадии с), чтобы определить количество окрашивающего состава в таком растворе, причем более высокое значение поглощения на 450 нм указывает на более полное удаление налета, тогда как низкое поглощение на 450 нм свидетельствует о минимальном удалении налета или об отсутствии такого удаления.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором указанная стадия обеспечения а) включает смешивание указанных частиц гидроксиапатита со слюной и инкубирование смеси с образованием покрытых пленкой частиц гидроксиапатита.

4. Способ по п. 2, который заключается в определении эффективности удаления налета испытуемым раствором, причем указанная стадия обеспечения контакта b) включает обеспечение контакта указанных частиц с окрашивающим раствором с образованием окрашенных частиц с последующим контактом указанных окрашенных частиц с указанным испытуемым раствором.

5. Способ по п. 4, в котором стадия отделения включает отделение от указанных окрашенных частиц указанного испытуемого раствора, используемого при обеспечении контакта указанных частиц на стадии b), а указанная стадия измерения включает измерение поглощения в диапазоне от 230 до 1000 нм отделенной испытуемой текучей среды, чтобы определить количество окрашивающего состава в указанном испытуемом растворе, отделенном от окрашенных частиц.

6. Способ по п. 2, включающий стадии:

a) обеспечения указанных покрытых пленкой частиц гидроксиапатита,

b) обеспечения контакта указанных частиц с окрашивающим раствором с образованием суспензии окрашенных покрытых пленкой частиц гидроксиапатита (НАр) и окрашивающего раствора; фильтрования окрашенных покрытых пленкой частиц НАр из раствора для окрашивания; и обеспечения контакта указанных окрашенных покрытых пленкой частиц НАр с испытуемым раствором для удаления налета;

c) отделения указанного испытуемого раствора, содержащего окрашивающий состав, от указанных окрашенных покрытых пленкой частиц НАр; и

d) измерения поглощения в диапазоне от 230 до 1000 нм испытуемого раствора, отделенного на стадии с), чтобы определить количество окрашивающего состава в таком растворе.

7. Способ по п. 1, который заключается в определении эффективности предотвращения образования налета испытуемым раствором, причем указанная стадия обеспечения контакта b) включает обеспечение контакта указанных частиц с испытуемым раствором с образованием предварительно обработанных частиц с последующим контактом указанных предварительно обработанных частиц с окрашивающим раствором.

8. Способ по п. 7, дополнительно включающий стадию удаления окрашивающего раствора из смеси, а также промывание частиц, полученных на стадии b), для отделения окрашенных предварительно обработанных частиц.

9. Способ по п. 8, в котором указанная стадия отделения включает элюирование окрашивающего состава с поверхности указанных окрашенных предварительно обработанных частиц и сбор раствора элюента, содержащего окрашивающий состав, для анализа.

10. Способ по п. 1 или 2, включающий стадии:

a) обеспечения указанных покрытых пленкой частиц гидроксиапатита,

b) обеспечения контакта указанных частиц с испытуемым раствором для образования предварительно обработанных частиц; фильтрования предварительно обработанных частиц; и впоследствии обеспечения контакта указанных отфильтрованных предварительно обработанных частиц с окрашивающим раствором для окрашивания отфильтрованных предварительно обработанных частиц с образованием окрашенных предварительно обработанных частиц;

c) элюирования налета с поверхности окрашенных предварительно обработанных частиц;

d) фильтрования и сбора раствора элюента; и

e) измерения поглощения в диапазоне от 230 до 1000 нм собранного раствора элюента.