RU2811435C2 - Рекомбинантные модифицированные факторы роста фибробластов и их терапевтическое применение - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к модифицированным полипептидам фактора роста фибробластов 1 (FGF-1), и может быть использовано в медицине для лечения или предотвращения заболевания, нарушения или состояния роговицы у млекопитающего, включая герпетическую кератопатию, нейротрофическую кератопатию, эндотелиальную дистрофию роговицы или вызванное химическим или нарывным веществом повреждение. Предложен рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий мутации в последовательности FGF-1 дикого типа, а именно полипептид содержит три замены Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val и метионин, присоединенный к N-концу SEQ ID NO: 1. Изобретение обеспечивает получение полипептида FGF-1 с повышенной способностью к индукции пролиферации клеток по сравнению с FGF-1 дикого типа, представленным в SEQ ID NO: 1. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 12 ил., 16 пр.

Description

Ссылка

[0001] По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на патент США №62/502529, поданной 5 мая 2017 г., предварительной заявкой на патент США №62/502540, поданной 05 мая 2017 г., и предварительной заявкой на патент США №62/584624, поданной 10 ноября 2017 г., каждая из которых полностью включена в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники настоящего изобретения

[0002] В настоящем документе описаны модифицированные полипептиды фактора роста фибробластов (FGF), фармацевтические композиции и лекарственные средства, которые включают в себя такие модифицированные полипептиды FGF, и способы применения таких модифицированных полипептидов FGF для лечения или профилактики состояний, на которые оказывает эффект введение FGF.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

[0003] FGF представляют собой крупные полипептиды, широко экспрессируемые в развивающихся и взрослых тканях (Baird et al., Cancer Cells, 3:239-243, 1991), и играют роль во множественных физиологических функциях (McKeehan et al., Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59:135-176, 1998; Burgess, W.H. et al., Annu Rev. Biochem. 58:575-606 (1989). Семейство FGF включает в себя по меньшей мере двадцать два представителя (Reuss et al., Cell Tissue Res. 313:139-157(2003)).

Краткое раскрытие настоящего изобретения

[0004] В настоящем варианте осуществления представлен рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем полипептид содержит N-концевой остаток метионина, расположенный выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептид дополнительно содержит удлиняющий пептид, расположенный между N-концевым остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления удлиняющий пептид содержит один или более аминокислотных остатков SEQ ID NO: 3. Согласно некоторым вариантам осуществления удлиняющий пептид содержит любую одну из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 4-8. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14-18.

[0005] Согласно одному варианту осуществления предусмотрен рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем полипептид дополнительно содержит удлиняющий пептид, расположенный выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления удлиняющий пептид содержит одну или более аминокислот SEQ ID NO: 3. Согласно некоторым вариантам осуществления удлиняющий пептид содержит любую одну из последовательностей, как указано в SEQ ID NOS. 4-8. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 24-28.

[0006] Один вариант осуществления предусматривает рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем полипептид дополнительно содержит усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1 и причем полипептид содержит удлиняющий пептид на N-конце полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 93-117. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептид дополнительно содержит остаток метионина, который является N-концевым по отношению к удлиняющему пептиду. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 118-141. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 136 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит по меньшей мере 141 аминокислоту в своей зрелой форме.

[0007] Один из вариантов осуществления предусматривает рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий мутацию в положении 67 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептид дополнительно содержит усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 146-149. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептид дополнительно содержит удлиняющий пептид. Согласно некоторым вариантам осуществления удлиняющий пептид содержит один или более аминокислотных остатков SEQ ID NO: 3. Согласно некоторым вариантам осуществления фрагмент удлиняющего пептида содержит любую одну из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 4-8. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 174-204.

[0008] Согласно одному варианту осуществления предусмотрен рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO. 2. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из: Cys16Ser, Ala66CysHCys117Val.

[0009] Один вариант осуществления предусматривает рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, причем модифицированный FGF-1 содержит одну или более мутаций SEQ ID NO: 1, причем указанная мутация выбрана из группы, состоящей из: Lys12Val, Cys16Ser, Ala66Cys, Cys117Val и Pro134Val, и причем модифицированный полипептид FGF-1 дополнительно содержит по меньшей мере один остаток пептида ALTEK.

[0010] Согласно одному варианту осуществления предусмотрен рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1, содержащий следующие мутации в SEQ ID NO: 1: Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, причем модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток метионина, расположенный выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1, и по меньшей мере один остаток пептида ALTEK, расположенный между N-концевым метионином и положением 1 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 не экспрессируется с помощью удлиняющего пептида и производится способом, который не предусматривает стадию удаления удлиняющего пептида.

[0011] Согласно одному варианту осуществления предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантный полипептид по любому из описанных выше вариантов осуществления. Согласно некоторым вариантам осуществления фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или разбавитель. Согласно некоторым вариантам осуществления фармацевтическая композиция представляет собой жидкую офтальмологическую композицию. Согласно некоторым вариантам осуществления фармацевтическую композицию вводят местно, микроиглами в роговицу или внутрикамерно.

[0012] В настоящем изобретении предложен способ получения рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1, предусматривающий: экспрессию модифицированного полипептида FGF-1 в клетке-хозяине и созревание экспрессированного полипептида в цитоплазме клетки-хозяина, причем модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с помощью N-концевого остатка метионина, расположенного выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1.

[0013] В настоящем изобретении предложен способ получения рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1, предусматривающий: экспрессию модифицированного полипептида FGF-1 в клетке-хозяине и созревание экспрессированного полипептида в цитоплазме клетки-хозяина, причем модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций SEQ ID NO: 1, удлиняющий пептид между N-концевым остатком и положением 1 в SEQ ID NO: 1, и экспрессируется с N-концевым остатком метионина.

[0014] Согласно одному варианту осуществления в настоящем изобретении предложен способ производства рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1, предусматривающий: экспрессию модифицированного полипептида FGF-1 в клетке-хозяине и созревание экспрессированного полипептида в цитоплазме клетки-хозяина, причем модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций SEQ ID NO: 1, фрагмент удлиняющего пептида, усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, и причем полипептид экспрессируется с N-концевым остатком метионина, расположенным выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления N-концевой остаток метионина сохраняется во время созревания полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления N-концевой остаток метионина отщепляется от полипептида ферментом расщепления во время созревания полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления фермент расщепления представляет собой метионинаминопептидазу (metAP). Согласно некоторым вариантам осуществления metAP представляет собой бактериальную metAP, дрожжевую metAP или человеческую metAP. Согласно некоторым вариантам осуществления фермент расщепления представляет собой бактериальную metAP. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает экспрессию модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14 или SEQ ID NO: 16. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает экспрессию модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. Согласно некоторым вариантам осуществления SEQ ID NO: 2 представляет собой последовательность полипептида после созревания в цитоплазме клетки-хозяина.

[0015] Согласно одному варианту осуществления предложен способ получения рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1, предусматривающий: экспрессию модифицированного полипептида FGF-1 в клетке-хозяине и созревание экспрессированного полипептида в цитоплазме клетки-хозяина, причем модифицированный полипептид FGF-1 содержит мутацию в положении 67 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 дополнительно содержит фрагмент удлиняющего пептида и усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, и причем полипептид экспрессируется с помощью N-концевого остатка метионина, расположенного выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает расщепление N-концевого остатка метионина с использованием бромистого цианогена.

[0016] Согласно одному варианту осуществления предложен способ получения рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с любым из описанных выше вариантов осуществления, предусматривающий: экспрессию модифицированного полипептида FGF-1 в клетке-хозяине, связывание экспрессированного полипептида с аффиным материалом с помощью аффинной метки; отщепление аффинной метки для высвобождения полипептида и элюирование полипептида из аффинного материала с использованием средства. Согласно некоторым вариантам осуществления аффинная метка содержит полигистидин, полилизин, полиаспарагиновую кислоту или полиглутаминовую кислоту. Согласно некоторым вариантам осуществления средство содержит метанол, 2-пропанол или другой спирт, диметилсульфоксид (ДМСО), диметилформамид (ДМФА), ацетон или другой органический растворитель. Согласно некоторым вариантам осуществления аффинный материал представляет собой каркас из смолы. Согласно некоторым вариантам осуществления аффинный материал представляет собой ионообменную смолу. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептид экспрессируется в цитоплазме клетки-хозяина и не секретируется в периплазматическое пространство. Согласно некоторым вариантам осуществления клетка-хозяин является микробной. Согласно некоторым вариантам осуществления микробная система экспрессии выбрана из группы, состоящей из системы экспрессии E.coli, системы экспрессии Caulobacter crescent и системы экспрессии Proteus mirabilis. Согласно некоторым вариантам осуществления микробная система экспрессии представляет собой систему экспрессии E.coli.

[0017] Согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения или предотвращения заболевания, нарушения или состояния глаз у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему модифицированного FGF-1 согласно настоящему раскрытию или фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние роговицы или глазной поверхности. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние эндотелия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние эндотелия роговицы представляет собой дистрофию Фукса, буллезную кератопатию, врожденную наследственную эндотелиальную дистрофию 1, врожденную наследственную эндотелиальную дистрофию 2, заднюю полиморфную дистрофию роговицы или синдром сухого глаза. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой дистрофию Фукса. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние эпителия роговицы представляет собой синдром сухого глаза или повреждение эпителия роговицы в результате хирургии или трансплантации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления хирургия роговицы представляет собой фоторефрактивную кератотомию (PRK) или лазерный кератомилез in situ (LASIK). Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние стромы роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления заболевание, нарушение или состояние стромы роговицы представляет собой кератоконус, дистрофию роговицы Бибера-Хааса-Диммера, зернистую дистрофию роговицы, пятнистую дистрофию роговицы, кристаллическую дистрофию роговицы Шнайдера, врожденную стромальную дистрофию роговицы или крапчатую дистрофию роговицы.

[0018] Согласно одному варианту осуществления предложен способ трансплантации клеток роговицы млекопитающему или повышения успеха трансплантации клеток, предусматривающий обработку клеток роговицы, подлежащих трансплантации, модифицированным FGF-1 в соответствии с любым из описанных выше вариантов осуществления до, во время или после трансплантации клеток роговицы млекопитающему. Один вариант осуществления представляет способ предотвращения образования рубцов во время регенерации ткани, предусматривающий введение модифицированного FGF-1 в соответствии с любым из вышеописанных вариантов осуществления. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 вводят млекопитающему после прохождения трабекулэктомии.

[0019] Согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения или предотвращения вызванного химическим или нарывным веществом повреждения у пациента, предусматривающий введение пациенту модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с любым из описанных выше вариантов осуществления. Согласно некоторым вариантам осуществления вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой повреждение глаз или повреждение кожи. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение глаз представляет собой повреждение роговицы.

[0020] Согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения повреждения роговицы у пациента, предусматривающий введение модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с настоящим раскрытием или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием, причем повреждение роговицы вызвано химическим или нарывным веществом, и причем введение модифицированного FGF-1 способствует регенерации роговицы, предотвращает дегенерацию роговицы и предотвращает отдаленные последствия химического повреждения. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 вводят в течение периода от приблизительно 7 дней до приблизительно 40 лет для предотвращения дегенерации ткани роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления ткань роговицы содержит эпителий роговицы, строму, эндотелий роговицы или иннервацию роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение стромы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение стромы включает в себя рубцевание стромы и непрозрачность роговицы.

[0021] Согласно одному варианту осуществления предложен способ предотвращения долгосрочного повреждения роговицы у пациента, предусматривающий введение модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с настоящим раскрытием или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием, причем повреждение роговицы вызвано химическим или нарывным средством. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение эндотелия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 усиливает функцию эндотелиальных клеток роговицы и предотвращает или уменьшает длительную дегенерацию роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 предотвращает отек роговицы и вторичные передние кератопатии. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 предотвращает потерю эндотелиальных клеток роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение стромы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение стромы включает в себя рубцевание стромы и непрозрачность роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления травма роговицы представляет собой вызванную ипритом кератопатию (MGK). Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к улучшению связанных с MGK гистопатологических состояний. Согласно некоторым вариантам осуществления гистопатологические состояния включают в себя гиперплазию эпителиального слоя роговицы и разделение эпителиально-стромальных клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к уменьшению отека и устранению эрозий роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления эрозия роговицы характеризуется деэпителизацией роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 снижает степень деэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к более быстрой реэпителизации роговицы.

[0022] Согласно одному варианту осуществления предложен способ регенерации эпителия поверхности глаза у пациента, подвергшегося воздействию химического или нарывного вещества, причем способ предусматривает введение в глаза модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с любым из описанных выше вариантов осуществления. Согласно некоторым вариантам осуществления эпителий поверхности глаза представляет собой эпителий роговицы.

[0023] Согласно одному варианту осуществления предложен способ предотвращения повреждения глазного эпителия у пациента, подвергшегося воздействию химического или нарывного вещества, причем способ предусматривает введение в глаза модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с любым одним из описанных выше вариантов осуществления. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение глаз представляет собой повреждение роговицы, вызванное воздействием нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой отслоение эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к уменьшению степени отслоения эпителия роговицы после воздействия нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к уменьшению отека и устранению эрозий роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления эрозия роговицы характеризуется деэпителизацией роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 снижает степень деэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к более быстрой реэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 вводят в течение периода до двух недель или до полной регенерации эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления первую дозу модифицированного полипептида FGF-1 вводят в течение 48 часов после воздействия нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления введение химического вещества включает в себя газообразный хлор, фосген, щелочь или кислоту. Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество включает в себя сернистый иприт (SM), азотистый иприт (NM), люизит или полугорчицу (2-хлорэтилэтилсульфид (CEES)). Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество представляет собой NM. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 подавляет вызванную NM активацию ADAM17. Согласно некоторым вариантам осуществления вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой химический ожог. Согласно некоторым вариантам осуществления химический ожог вызван газообразным хлором, фосгеном, щелочью или кислотой. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 включает в себя мутации положений 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления мутации представляют собой Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 менее чувствителен к окислению при воздействии нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество представляет собой NM.

[0024] Один вариант осуществления относится к способу лечения герпетической кератопатии, предусматривающему введение млекопитающему модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с любыми вариантами осуществления настоящего раскрытия или фармацевтической композиции в соответствии с настоящим раскрытием. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия вызвана первичной инфекцией вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия представляет собой хроническую герпетическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия, которая является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса, включает в себя нейротрофическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 согласно настоящему раскрытию или фармацевтическую композицию согласно настоящему раскрытию вводят два раза в день. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 согласно настоящему раскрытию или фармацевтическую композицию согласно настоящему раскрытию вводят в течение 30 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 согласно любому из настоящего раскрытия или фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию приводит к заживлению язвы роговицы, уменьшению продолжительности боли и воспаления, уменьшению боли и воспаления, уменьшению непрозрачности, помутнения, рубцевания роговицы или любым их комбинациям. Согласно некоторым вариантам осуществления язва роговицы включает в себя герпетическую язву роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления млекопитающее представляет собой человека.

[0025] Согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения или предотвращения повреждения химическим или нарывным веществом у пациента, предусматривающий введение пациенту модифицированного FGF-1, содержащего одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой повреждение глаз или повреждение кожи. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение глаз представляет собой повреждение роговицы.

[0026] Согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения повреждения роговицы у пациента, предусматривающий введение пациенту модифицированного полипептида FGF-1, содержащего одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID. NO: 1, причем повреждение роговицы вызвано химическим или нарывным веществом и причем введение модифицированного FGF-1 способствует регенерации роговицы, предотвращает дегенерацию роговицы и предотвращает долговременные последствия химического повреждения. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 вводят в течение периода от приблизительно 7 дней до приблизительно 40 лет для предотвращения дегенерации ткани роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления ткань роговицы содержит эпителий роговицы, строму, эндотелий роговицы или иннервацию роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение стромы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение стромы включает в себя рубцевание стромы и непрозрачность роговицы.

[0027] Согласно одному варианту осуществления предложен способ предотвращения длительного повреждения роговицы у пациента, предусматривающий введение пациенту модифицированного полипептида FGF-1, содержащего одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, причем повреждение роговицы вызвано химическим или нарывным веществом. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение эндотелия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 усиливает функцию эндотелиальных клеток роговицы и предотвращает или уменьшает длительную дегенерацию роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 предотвращает отек роговицы и вторичные передние кератопатии. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 предотвращает потерю эндотелиальных клеток роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой повреждение стромы. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение стромы включает в себя рубцевание стромы и непрозрачность роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления травма роговицы представляет собой вызванную ипритом кератопатию (MGK). Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к улучшению гистопатологических состояний, связанных с MGK. Согласно некоторым вариантам осуществления гистопатологические состояния включают в себя гиперплазию эпителиального слоя роговицы и разделение эпителиально-стромальных клеток. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к уменьшению отека и устранению эрозий роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления эрозия роговицы характеризуется деэпителизацией роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 снижает степень деэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к более быстрой реэпителизации роговицы.

[0028] Согласно одному варианту осуществления предложен способ регенерации поверхностного эпителия глаза у пациента, подвергшегося воздействию химического или нарывного вещества, причем способ предусматривает введение в глаз модифицированного полипептида FGF-1, содержащего одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления эпителий поверхности глаза представляет собой эпителий роговицы.

[0029] Согласно одному варианту осуществления предложен способ предотвращения повреждения глазного эпителия у пациента, подвергшегося воздействию химического или нарывного вещества, причем способ предусматривает введение в глаз модифицированного полипептида FGF-1, содержащего одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117. и 134 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение глаза представляет собой повреждение роговицы, вызванное воздействием нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления повреждение роговицы представляет собой отслоение эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к снижению степени отслоения эпителия роговицы после воздействия нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к уменьшению отека и устранению эрозий роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления эрозия роговицы характеризуется деэпителизацией роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 снижает степень деэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 приводит к более быстрой реэпителизации роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 вводят в течение периода до двух недель или до полной регенерации эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления первую дозу модифицированного полипептида FGF-1 вводят в течение 48 часов после воздействия нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления химическое вещество включает в себя газообразный хлор, фосген, щелочь или кислоту. Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество включает в себя сернистый иприт (SM), азотистый иприт (NM), люизит или полугорчицу (2-хлорэтилэтилсульфид (CEES)). Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество представляет собой NM. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1 подавляет вызванную NM активацию ADAM17. Согласно некоторым вариантам осуществления вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой химический ожог. Согласно некоторым вариантам осуществления химический ожог вызывается газообразным хлором, фосгеном, щелочью или кислотой. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит мутации положений 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления мутации представляют собой Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 менее чувствителен к окислению при воздействии нарывного вещества. Согласно некоторым вариантам осуществления нарывное вещество представляет собой NM. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-206. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-204. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 205 и 206. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 205. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 206.

[0030] Один вариант осуществления относится к способу лечения герпетической кератопатии, предусматривающему введение млекопитающему модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 205 и 206, или содержащей его фармацевтической композиции. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия вызвана первичной инфекцией вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия представляет собой хроническую герпетическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия, которая является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса, включает в себя нейротрофическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 205 и 206, или содержащую его фармацевтическую композицию вводят два раза в день. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 205 и 206, или содержащую его фармацевтическую композицию вводят в течение 30 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 205 и 206, или содержащей его фармацевтической композиции приводит к заживлению язвы роговицы, уменьшению продолжительности боли и воспаления, уменьшению боли и воспаления, уменьшению непрозрачности, помутнения, рубцевания роговицы или любым их комбинациям. Согласно некоторым вариантам осуществления язва роговицы включает в себя герпетическую язву роговицы.

[0031] Один вариант осуществления относится к способу лечения герпетической кератопатии, предусматривающему введение млекопитающему модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-204, или содержащей его фармацевтической композиции. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия вызвана первичной инфекцией вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия представляет собой хроническую герпетическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Согласно некоторым вариантам осуществления герпетическая кератопатия, которая является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса, включает в себя нейротрофическую кератопатию. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-204, или содержащую его фармацевтическую композицию вводят два раза в день. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-204, или содержащую его фармацевтическую композицию вводят в течение 30 дней. Согласно некоторым вариантам осуществления введение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 2 и 9-204, или содержащей его фармацевтической композиции приводит к заживлению язвы роговицы, сокращению продолжительности боли и воспаления, уменьшению боли и воспаления, уменьшению непрозрачности, помутнения, рубцевания роговицы или любым их комбинациям. Согласно некоторым вариантам осуществления язва роговицы включает в себя герпетическую язву роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления млекопитающее представляет собой человека.

Включение по ссылке

[0032] Все публикации и заявки на патенты, указанные в настоящем описании, полностью включены в настоящий документ посредством ссылки в той же степени, как если бы каждая отдельная публикация или заявка на патент была конкретно и индивидуально указана для включения посредством ссылки.

Краткое описание графических материалов

[0033] На фиг. 1 показана реакция иприта с цистеином.

[0034] На фиг. 2 показано влияние иллюстративных модифицированных полипептидов FGF-1 (ТТНХ1114 и ТТНХ1001) в соответствии с настоящим изобретением на пролиферацию in vitro человеческих эндотелиальных клеток роговицы. Точечная пунктирная линия соответствует ТТНХ1114, а пунктирная линия соответствует ТТНХ1001.

[0035] На фиг. 3 показана иллюстративная модельная система органной культуры роговицы кролика.

[0036] На фиг. 4 показан временной график повреждения роговицы нарывным веществом.

[0037] На фиг. 5 показан эффект лечения иллюстративным модифицированным полипептидом FGF-1 (ТТНХ114) после вызванного нарывным веществом повреждения, оцениваемого гистопатологическим окрашиванием.

[0038] На фиг. 6 показана иллюстративная схема гистопатологической классификации для оценки эффектов повреждения роговицы нарывным веществом.

[0039] На фиг. 7 показана гистопатологическая классификация повреждения роговицы и стромы при воздействии нарывным веществом. Сплошная линия соответствует «Эпителию», а пунктирная линия соответствует «Строме».

[0040] На фиг. 8 показано снижение гистопатологической оценки везикулярного повреждения в клетках роговицы, обработанных иллюстративным модифицированным полипептидом FGF-1 (ТТНХ1114). Пунктирная линия соответствует «NM», а точечная пунктирная линия соответствует «NM+ТТНХ».

[0041] На фиг. 9 показано содержание FGF-1 в роговице после воздействия нарывным веществом.

[0042] На фиг. 10 показано подавление активации ADAM 17 в клетках роговицы, обработанных иллюстративным модифицированным полипептидом FGF-1 (ТТНХ1114) после воздействия нарывным веществом. На фиг. 10А показан срез роговицы, который не подвергался воздействию NM, а на фиг. 10В показано сравнение подвергнутой воздействию роговицы с обработкой (нижняя панель) иллюстративным полипептидом (ТТНХ1114) или без нее (верхняя панель).

[0043] На фиг. 11 показана пролиферация эпителиальных клеток роговицы, подвергшихся воздействию нарывного вещества и обработанных иллюстративным модифицированным полипептидом FGF-1 (ТТНХ1114), измеренная путем включения EdU. Пунктирная линия соответствует «NM», а сплошная линия - «NM+ТТНХ».

[0044] На фиг. 12 показаны структуры иллюстративных нарывных веществ.

Подробное описание настоящего изобретения

[0045] Заболевания и повреждения глаз могут быть изнурительно тяжелыми и встречаться в самых разных формах. Одним из классов заболеваний глаз является вызванная ипритом кератопатия. Иприт представляет собой нарывной ядовитый газ, который был впервые выпущен немецкой армией на поле битвы в Ипре в апреле 1915 г. во время Первой мировой войны. Воздействие ипритом может привести к долгосрочным осложнениям, которые развиваются на протяжении многих лет. Роговица становится рубцовой и нерегулярной, а холестерин и кальций откладываются в ее тканях, что приводит к прогрессирующему ухудшению зрения. Исследование с помощью щелевой лампы показывает, что эписклеральные ткани имеют характерное помутнение. Внешний вид белого фарфора и необычные сосудистые аномалии являются общими. Они выглядят как увеличенные, искаженные сосуды, иногда с ампулообразным контуром, сопровождающимся варикозным расширением вен и сосискообразными сосудами. С течением времени происходит плотное помутнение роговицы, которое наиболее заметно в центральной и нижней частях, так как верхняя часть защищена нависающим веком. Преобладающие гистопатологические особенности MGK включают в себя, например, нерегулярную толщину эпителия, дегенеративные изменения, утолщенную эпителиальную базальную мембрану, потерю кератоцитов и разрушенный слой Боумана. (Kanavi et al., Chronic and delayed mustard gas keratopathy: a histopathologic and immunohistochemical study, Eur. J Ophthalmol. 2010 Sep-Oct; 20(5):839-43). Как правило, в течение одного дня после воздействия нарывного вещества на роговицу эпителий роговицы (СЕ) отторгается от базальной мембраны (ВМ), развивается отек роговицы в денудированной строме, и в краях раны проявляется кератоцитоз полной толщины. К пятому дню восстанавливается эпителиальный колпачок, и отек роговицы начинает стихать. Через одну неделю после воздействия СЕ частично стратифицируется с зачаточными гемидесмосомальными прикреплениями. Несмотря на это очевидное улучшение, у роговицы появляются клинические признаки хронического повреждения уже через три недели после воздействия, включая в себя постоянно повышенный отек роговицы, повторяющиеся эрозии роговицы и неоваскуляризацию. К восьми неделям зона базальной мембраны претерпевает серьезную дегенерацию. Кроме того, пораженные MGK роговицы, по-видимому, обнаруживают замедленное заживление ран.

[0046] В настоящем документе представлены модифицированные полипептиды FGF-1, фармацевтические композиции и лекарственные средства, которые включают в себя такие модифицированные пептиды, и способы применения таких модифицированных полипептидов FGF-1 для лечения различных состояний, таких как заболевания, нарушения и состояния глаз (например, дистрофия Фукса), вызванные нарывным средством эпителиальных и эндотелиальных повреждений роговицы (например, вызванная ипритом кератопатия (MGK)), заживление ран, сердечно-сосудистые заболевания (например, ишемия) и неврологические состояния (например, боковой амилотрофический склероз (ALS)).

[0047] В настоящем документе также предложен способ лечения вызванного химическим или нарывным веществом повреждения путем введения полипептидов модифицированных факторов роста фибробластов (FGF-1) или фармацевтической композиции или лекарственных средств, которые включают в себя такие модифицированные пептиды. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает лечение вызванной ипритом кератопатии (MGK), вызванной химическим повреждением, например, химическим ожогом, путем введения описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления этот способ предусматривает лечение вызванной ипритом кератопатии (MGK), индуцированной нарывным веществом, например, азотистым ипритом (NM), путем введения описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает лечение химического или термического повреждения, вызванного химическим боевым средством, например, фосгеном.

[0048] Согласно некоторым описанных в настоящем документе вариантам осуществления, в которых модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с N-концевым остатком метионина (N-Met), полипептид впоследствии очищают без стадии, требующей протеолитического расщепления для удаления N-концевого пептида. Соответственно, согласно некоторым вариантам осуществления настоящее раскрытие относится к модифицированному полипептиду FGF-1, который производят способом быстрой очистки, без участия стадии протеолитического расщепления для удаления N-концевого пептида. Это особенно выгодно для производства модифицированных полипептидов FGF-1 в соответствии с рекомендациями надлежащей производственной практики (GMP). Преимущества включают в себя отсутствие стадии расщепления, в том числе устранение необходимости последующей очистки расщепленного продукта и удаления реагентов, используемых для расщепления. Дополнительным преимуществом этого является увеличение выхода из-за уменьшения обработки и уменьшения необходимости проверки остаточных реагентов для расщепления и загрязнений, введенных для расщепления и последующего отделения отщепленного от нерасщепленного материала.

[0049] Описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 могут характеризоваться повышенной стабильностью (например, термостабильностью), уменьшенным количеством скрытых свободных тиолов и/или повышенной эффективной аффинностью к гепарансульфатпротеогликану (HSPG).

[0050] Несколько других преимуществ связано с использованием модифицированных полипептидов FGF-1 в описанных в настоящем документе способах. Например, описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 можно вводить без гепарина в их фармацевтической композиции или составе (например, офтальмологическом составе), избегая потенциальных проблем безопасности, связанных с их биологическим происхождением. Кроме того, отказ от применения гепарина позволяет использовать более высокие дозы модифицированных полипептидов FGF-1 без осложнений, возникающих в результате вызванных гепарином местных побочных эффектов или ранее существовавших антител к гепарину. Кроме того, в отсутствие гепарина немедленное связывание модифицированного FGF с тканью максимизируется, а системное распределение значительно снижается. Описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 также являются преимуществом, заключающимся в улучшении локальной секвестрации и уменьшенной кинетике перераспределения, таким образом увеличивая период полувыведения и среднее время пребывания (MRT) в месте доставки, и позволяя снизить частоту дозирования. Это может быть результатом описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1, которые обладают повышенной стабильностью (например, термостабильностью), уменьшенным количеством погруженных свободных тиолов и/или повышенной эффективной аффинностью гепарансульфатпротеогликана (HSPG).

[0051] Полипептиды FGF-1 по настоящему изобретению содержат, согласно различным вариантам осуществления, модификации на N-конце полипептида, такие как добавление, усечение или комбинация добавлений и усечений. Согласно некоторым вариантам осуществления модификация представляет собой добавление одного N-концевого остатка метионина. Согласно некоторым вариантам осуществления модификация представляет собой добавление удлиняющего пептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модификация представляет собой усечение одного или более из первых пяти остатков полипептида FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления полипептиды FGF-1 содержат последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями в дополнение к N-концевой модификации.

[0052] Несколько примеров модифицированных полипептидов FGF-1, раскрытых в настоящем документе, содержат остаток N-концевого метионина (N-Met) в зрелой форме полипептида. Сохранение биологической активности при добавлении аминокислот к N-концу белка непредсказуемо. Некоторые белки толерантны к этому, а некоторые нет, а сохранение биологической активности и потенциал изменения стабильности определяются только опытным путем. Настоящее раскрытие идентифицирует, что добавление N-концевых остатков Met допускается с сохранением биологической активности и стабильности.

Определенная терминология

[0053] Следует понимать, что вышеприведенное общее описание и последующее подробное описание являются только иллюстративными и пояснительными и не ограничивают любой заявленный предмет. В настоящей заявке использование единственного числа включает в себя множественное число, если специально не указано иное. Следует отметить, что, используемые в настоящем описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают в себя множественные ссылки, если контекст явно не предписывает иное. В настоящей заявке использование «или» означает «и/или», если не указано иное. Кроме того, использование термина «включающий в себя», а также других форм, таких как «включает в себя» и «включенный», не является ограничивающим.

[0054] Используемые в настоящем документе заголовки разделов предназначены только для организационных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объект изобретения. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, характеризуются тем же значением, что и общепринятое, к которому относится заявленный объект изобретения. В случае, когда в настоящем документе существует множество определений, преобладают те, что в этом разделе. Все патенты, патентные заявки, публикации и опубликованные нуклеотидные и аминокислотные последовательности (например, последовательности, доступные в GenBank или других базах данных), упомянутые в настоящем документе, включены посредством ссылки. Когда делается ссылка на URL или другой такой идентификатор или адрес, подразумевается, что такие идентификаторы могут изменяться, и конкретная информация в сети Интернет может приходить и уходить, но эквивалентная информация может быть найдена путем поиска в сети Интернет. Ссылка на них свидетельствует о наличии и публичном распространении такой информации.

[0055] Используемый в настоящем документе термин «процент (%) идентичности аминокислотной последовательности» по отношению к последовательности определяется как процент аминокислотных остатков в последовательности-кандидате, которые идентичны аминокислотным остаткам в конкретной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения пропусков, если необходимо, для достижения максимального процента идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть достигнуто различными способами, которые известны специалисту в настоящей области техники, например, с использованием общедоступных компьютерных программ, таких как программное обеспечение EMBOSS MATCHER, EMBOSS WATER, EMBOSS STRETCHER, EMBOSS NEEDLE, EMBOSS LALIGN, BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в настоящей области могут определить соответствующие параметры для измерения выравнивания, включая в себя любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

[0056] Определение стандартных терминов химии можно найти в справочных работах, включая в себя, помимо прочего, Carey and Sundberg "Advanced Organic Chemistry 4^th Ed." Vols. A (2000) и В (2001), Plenum Press, New York. Если не указано иное, применяются общепринятые способы масс-спектроскопии, ЯМР, ВЭЖХ, белковая химия, биохимия, способы рекомбинантной ДНК и фармакология.

[0057] Если не даны конкретные определения, номенклатура, используемая в связи с описанными в настоящем документе лабораторными процедурами и технологиями аналитической химии, синтетической органической химии, а также медицинской и фармацевтической химии, признана в настоящей области техники. Стандартные способы могут быть использованы для химического синтеза, химического анализа, фармацевтической подготовки, составления и доставки и лечения пациентов. Стандартные технологии могут быть использованы для рекомбинантной ДНК, синтеза олигонуклеотидов, а также для культуры и трансформации ткани (например, электропорация, липофекция). Реакции и технологии очистки могут быть выполнены, например, с использованием наборов спецификаций производителя или как обычно выполняется в настоящей области техники или как описано в настоящем документе. Вышеприведенные способы и процедуры могут быть в основном выполнены обычными способами и описаны в различных общих и более конкретных ссылках, которые цитируются и обсуждаются в настоящем описании.

[0058] Следует понимать, что способы и композиции, описанные в настоящем документе, не ограничены конкретной методологией, протоколами, клеточными линиями, конструкциями и реагентами, описанными в настоящем документе, и, как таковые, могут варьировать. Также следует понимать, что используемая в настоящем документе терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предназначена для ограничения объема способов, соединений, композиций, описанных в настоящем документе.

[0059] Термины «лечить» или «лечение» включают в себя смягчение, ослабление или уменьшение интенсивности симптомов заболевания, нарушения или состояния, предотвращение дополнительных симптомов, улучшение или предотвращение основных метаболических причин симптомов, ингибирование заболевания, нарушения или состояния, например, остановка развития заболевания, нарушения или состояния, ослабление заболевания, нарушения или состояния, вызывание регресса заболевания, нарушения или состояния, ослабление состояния, вызванного заболеванием, нарушением или состоянием, или прекращение симптомов заболевания, нарушения или состояния. Термины «лечить» или «лечение» включают в себя, без ограничения, профилактическое и/или терапевтическое лечение.

[0060] Термин «приемлемый» или «фармацевтически приемлемый» в отношении состава, композиции или ингредиента относится к тому, что он не оказывает постоянного вредного воздействия на общее состояние здоровья подвергаемого лечению субъекта или не отменяет биологическую активность или свойства модифицированного FGF, описанного в настоящем документе, и является относительно нетоксичным.

[0061] Термин «улучшение» симптомов конкретного заболевания, нарушения или состояния путем введения определенного модифицированного FGF или фармацевтической композиции относится к любому снижению тяжести, задержке начала, замедлению прогрессирования или сокращению продолжительности, будь то постоянное или временное, длительное или кратковременное, которое можно отнести или связать с введением модифицированного FGF или фармацевтической композиции.

[0062] Используемый в настоящем документе термин «комбинация» или «фармацевтическая комбинация» означает продукт, который получается в результате смешивания или объединения более чем одного активного ингредиента и включает в себя как фиксированные, так и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин «фиксированная комбинация» означает, что один активный ингредиент (например, модифицированный FGF) и сопутствующее средство вводят пациенту одновременно в форме единого объекта или дозы. Термин «нефиксированная комбинация» означает, что один активный ингредиент (например, модифицированный FGF) и совместное средство вводят пациенту как отдельные объекты либо одновременно, параллельно или последовательно, без конкретных временных интервалов времени, причем такое введение обеспечивает эффективное содержание двух совместных средств в организме пациента. Последнее также относится к коктейльной терапии, например, к введению трех или более активных ингредиентов.

[0063] Используемый в настоящем документе термин «фармацевтическая композиция» относится к одному или более модифицированным полипептидам FGF-1 с одним или более другими химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие средства, суспендирующие средства, загустители и/или вспомогательные вещества. Фармацевтическая композиция облегчает введение в организм модифицированных полипептидов FGF-1. В настоящей области техники существует множество способов введения модифицированного полипептида FGF-1, включая в себя, но не ограничиваясь указанными: местное, офтальмологическое, внутриглазное, периокулярное, внутривенное, пероральное, аэрозольное и парентеральное введение.

[0064] Используемый в настоящем документе термин «носитель» относится к относительно нетоксичным химическим соединениям или средствам, которые облегчают включение представляющего интерес средства (например, модифицированного FGF) в клетки или ткани.

[0065] Термин «разбавитель» относится к химическим соединениям, которые используются для разбавления представляющего интерес средства (например, модифицированного FGF) перед доставкой. Разбавители также можно использовать для стабилизации средств, поскольку они могут обеспечить более стабильную среду. Соли, растворенные в забуференных растворах (которые также могут обеспечивать контроль или поддержание рН), используются в качестве разбавителей в настоящей области техники, включая в себя, без ограничения, забуференный фосфатом солевой раствор.

[0066] Термины «совместное введение» или тому подобное предназначены для охвата введения выбранных средств (например, модифицированного FGF или его композиции и совместного средства) одному пациенту и предназначены для включения схем лечения, в которых средства вводятся тем же или другим путем введения или в то же или в другое время.

[0067] Термины «эффективное количество» или «терапевтически эффективное количество» относятся к достаточному количеству вводимого модифицированного полипептида FGF-1, средства, комбинации или фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, которое в некоторой степени ослабит один или более симптомов подвергаемого лечению заболевания, нарушения или состояния. Результатом может быть уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания или любое другое желаемое изменение биологической системы. Например, «эффективное количество» для терапевтического применения представляет собой количество модифицированного FGF, средства, комбинации или фармацевтической композиции, необходимое для обеспечения желаемого фармакологического эффекта, терапевтического улучшения или клинически значимого уменьшения симптомов заболевания без чрезмерных побочных эффектов. Подходящее «эффективное количество» в любом отдельном случае может быть определено с использованием таких способов, как исследование по повышению дозы. Термин «терапевтически эффективное количество» включает в себя, например, профилактически эффективное количество. Понятно, что «величина эффекта» может варьировать от субъекта к субъекту вследствие изменения метаболизма модифицированного FGF, комбинации или фармацевтической композиции, возраста, массы, общего состояния субъекта, подлежащего лечению состояния, тяжести подлежащего лечению состояния и решение лечащего врача. Только в качестве примера, терапевтически эффективные количества могут быть определены обычными экспериментами, включая в себя, без ограничения, клиническое исследование с повышением дозы.

[0068] Термин «профилактически эффективное количество» относится к тому количеству модифицированного FGF, соединения, средства, комбинации или фармацевтической композиции, которое описано в настоящем документе, применяемого к пациенту, которое в некоторой степени ослабит один или более симптомов подлежащего лечению заболевания, состояния или нарушения. В таких профилактических применениях такие количества могут зависеть от состояния здоровья пациента, его массы и т.п. Считается, что специалист в настоящей области техники может определить такие профилактически эффективные количества путем рутинных экспериментов, включая в себя, без ограничения, клиническое испытание с повышением дозы.

[0069] Используемый в настоящем документе термин «субъект» или «пациент» относится к животному, которое является объектом лечения, наблюдения или эксперимента. Только в качестве примера, субъект может представлять собой, без ограничения, млекопитающее, включая в себя, без ограничения, человека.

[0070] Термины «усиливать» или «усиление» означают увеличение или продление действия или продолжительности желаемого эффекта. Например, «усиление» эффекта терапевтических средств отдельно или в комбинации относится к способности увеличивать или продлевать, по эффективности, продолжительности и/или величине, действие средств на лечение заболевания, нарушения или состояния. При использовании у пациента количества, эффективные для этого применения, будут зависеть от тяжести и течения заболевания, нарушения или состояния, предшествующей терапии, состояния здоровья пациента и реакции на лекарственные средства, а также от решения лечащего врача.

[0071] Термин «модулировать» означает прямое или косвенное взаимодействие с мишенью (например, рецептором FGF), чтобы изменить активность мишени, включая в себя, только в качестве примера, для усиления активности мишени, для ингибирования или противодействия активности мишени, ограничения активности мишени или продления активности мишени. Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции могут модулировать активность одной или более соответствующих мишеней (например, одного или более рецепторов FGF). Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 модулируют (например, увеличивают) активность одного или более рецепторов FGF в клетке (например, эндотелиальной клетке роговицы), что приводит, например, к миграции клеток и/или пролиферации клеток.

[0072] Используемый в настоящем документе термин «мишень» относится к биологической молекуле (например, целевому белку или белковому комплексу), такой как рецептор FGF, или части биологической молекулы, способной к связыванию посредством селективного связывающего средства (например, модифицированного FGF) или описанной в настоящем документе фармацевтической композиции. Используемый в настоящем документе термин «немишень» относится к биологической молекуле или части биологической молекулы, которая не селективно связана с селективным связывающим средством или описанной в настоящем документе фармацевтической композицией.

[0073] Термин «целевая активность» или «клеточный ответ» относится к биологической активности, способной модулироваться модифицированным FGF или любым клеточным ответом, который возникает в результате связывания модифицированного FGF с рецептором FGF. Некоторые иллюстративные целевые активности и клеточные ответы включают в себя, без ограничения, аффинность связывания, сигнальную трансдукцию, экспрессию генов, миграцию клеток, пролиферацию клеток, дифференцировку клеток и улучшение одного или более симптомов, связанных с заболеванием, нарушением или состоянием глаз.

[0074] Термины «герпетический кератит», «простой герпетический кератит», «HSK», «герпетическая кератопатия», «простой герпес роговицы» и «герпетический кератоконъюнктивит» относятся к заболеванию, нарушению или состоянию глаз, которое обычно вызывается вирусом простого герпеса (HSV).

Экспрессированные и зрелые формы модифицированных полипептидов FGF-1

[0075] FGF стимулируют семейство семи изоформ рецепторов FGF, и каждый FGF стимулирует различную структуру рецепторов для достижения своего специфического эффекта. Смотрите, например, Ornitz et al. (1996) The Journal of biological chemistry, 1996, 271(25): 15292-7; Zhang et al. (2006) The Journal of biological chemistry, 2006, 281(23): 15694-700). Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 является предпочтительным, поскольку он связывается и стимулирует все семь изоформ рецептора FGF. Смотрите Ornitz et al. (1996) The Journal of biological chemistry, 1996, 271(25): 15292-7.

[0076] Раскрытые в настоящем документе варианты осуществления относятся к модифицированному полипептиду FGF-1 или фармацевтической композиции (например, офтальмологической композиции), содержащей модифицированный полипептид FGF-1. Раскрытые в настоящем документе варианты осуществления также относятся к способу лечения повреждения химическим или нарывным веществом путем введения модифицированного полипептида FGF-1 или фармацевтической композиции (например, офтальмологической композиции), содержащей модифицированный полипептид FGF-1. Используемый в настоящем документе модифицированный полипептид FGF относится к рекомбинантному FGF, который содержит замену или мутацию одного или более различных аминокислотных остатков и/или одну или более делеций одного или более аминокислотных остатков, и/или одно или более добавлений одного или более аминокислотных остатков SEQ ID NO: 1.

[0077] В настоящем документе согласно первому варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем модифицированный полипептид дополнительно содержит остаток метионина выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий остаток N-концевого метионина (N-Met), представляет собой зрелую форму полипептида. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 в соответствии с первым вариантом осуществления содержит одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 полипептид экспрессируется в клетке-хозяине с остатком метионина выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 не подвергается N-концевой обработке для удаления остатка N-Met во время созревания. Таким образом, согласно некоторым вариантам осуществления зрелая форма модифицированного FGF-1 содержит остаток N-Met и одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Иллюстративная модифицированная последовательность FGF-1, содержащая остаток N-Met, раскрыта в виде SEQ ID NO: 2.

[0078] Настоящее раскрытие идентифицирует, что модифицированный FGF-1, как описано в настоящем документе, содержащий остаток N-Met в своей зрелой форме, обладает биологической активностью, аналогичной версии без остатка N-Met. Удаление или вырезание N-концевого метионина представляет собой котрансляционный процесс, который происходит, как только полипептид выходит из рибосомы. Удаление N-концевого метионина включает в себя специфические особенности субстрата фермента расщепления, метионинаминопептидазы (metAP), который распознает остаток метионина, за которым следует аминокислотный остаток с небольшой боковой цепью, такой как аланин, глицин, пролин, серин, треонин или валин. Из-за этой специфичности субстратной последовательности модифицированный FGF-1, согласно первому варианту осуществления, который содержит остаток N-Met, за которым следует фенилаланин, смотрите положение 1 в SEQ ID NO: 1, не обрабатывается metAP. Таким образом, экспрессируя модифицированный FGF-1 с остатком метионина непосредственно выше относительно SEQ ID NO: 1, можно получить зрелый модифицированный FGF-1, содержащий метионин в качестве его N-концевого остатка. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 в соответствии с первым вариантом осуществления не экспрессируется с N-концевым пептидом и, следовательно, не подвергается протеолитическому расщеплению для его удаления во время последующей очистки.

[0079] В настоящем документе согласно второму варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем модифицированный полипептид дополнительно содержит остаток метионина выше относительно первого остатка в SEQ ID NO: 1, и одну или более аминокислот пептида, обозначенного как SEQ ID NO: 3. Пептид, содержащий один или более остатков SEQ ID NO: 3, в настоящем документе называется «удлиняющим пептидом». Таким образом, модифицированный FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления содержит последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, остатком метионина выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1 и удлиняющим пептидом, расположенным между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий N-концевой метионин и удлиняющий пептид, расположенный между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1, представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, причем этот полипептид экспрессируется в клетке-хозяине с остатком метионина выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1 и, кроме того, удлиняющий пептид, расположенный между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления экспрессируется с удлиняющим пептидом, содержащим пять остатков SEQ ID NO: 3, расположенным между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления экспрессируется с четырьмя остатками SEQ ID NO 3, расположенными между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления экспрессируется с тремя остатками SEQ ID NO: 3, расположенными между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 согласно второму варианту осуществления экспрессируется с двумя остатками SEQ ID NO: 3, расположенными между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF-1 полипептид согласно второму варианту осуществления экспрессируется с одним остатком SEQ ID NO: 3, расположенным между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1. Иллюстративные последовательности удлиняющего пептида включают в себя SEQ ID NOS: 4-8.

[0080] В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 по второму варианту осуществления, содержащий удлиняющий пептид и N-концевой остаток метионина, не подвергается N-концевой обработке для удаления остатка метионина, тогда как в некоторых случаях метионин вырезается ферментом расщепления. Как правило, фермент расщепления представляет собой метионинаминопептидазу (metAP). Таким образом, в некоторых примерах зрелая форма модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления содержит остаток N-Met, за которым следует удлиняющий пептид, как описано в настоящем документе. Иллюстративные последовательности зрелых форм модифицированных полипептидов FGF-1 согласно второму варианту осуществления, содержащие N-концевой метионин и один или более остатков удлиняющего пептида, расположенное между остатком метионина и первым остатком SEQ ID NO: 1, представлены в виде SEQ ID NO: 9-13, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные иллюстративные последовательности зрелых модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих N-концевой метионин и удлиняющий пептид, представлены в виде SEQ ID NO: 14-18. В некоторых других примерах зрелая форма модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления не содержит остаток N-Met, но содержит только удлиняющий пептид. Иллюстративные последовательности зрелых форм модифицированных полипептидов FGF-1 в соответствии со вторым вариантом осуществления, содержащие удлиняющий пептид, расположенный выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1, представлены в виде SEQ ID NOS: 19-23, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные иллюстративные последовательности зрелых модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих один или более остатков удлиняющего пептида, представлены в виде SEQ ID NO: 24-28. Согласно некоторым вариантам осуществления остаток метионина расщепляется с помощью metAP, когда удлиняющий пептид начинается с аланина (как в SEQ ID NO: 4) или с треонина (как в SEQ ID NO: 5). В этом случае зрелый полипептид FGF-1 не содержит N-концевой остаток метионина, например, SEQ ID NO: 19, 21, 24 и 26.

[0081] В настоящем документе согласно третьему варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем модифицированный полипептид дополнительно содержит удлиняющий пептид, расположенный выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий удлиняющий пептид, представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, причем этот полипептид экспрессируется в клетке-хозяине с одним или более аминокислотными остатками удлиняющего пептида, расположенного выше относительно первого остатка SEQ ID NO: 1. Иллюстративные последовательности модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих удлиняющий пептид, экспрессируемый без N-концевого остатка метионина, представлены в виде SEQ ID NO: 19-23, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные иллюстративные последовательности зрелых модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих один или более остатков удлиняющего пептида, и экспрессируемые без остатка N-концевого метионина представлены в виде SEQ ID NO: 24-28.

[0082] В настоящем документе согласно четвертому варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, с одной или более мутациями, причем модифицированный полипептид дополнительно содержит усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1, содержащий усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, представляет собой зрелую форму полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, причем один или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1 удален. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1, содержащий усечения, экспрессируется с N-концевым остатком метионина. Например, модифицированный полипептид FGF-1 согласно четвертому варианту осуществления может содержать последовательность, в которой за остатком N-Met следует второй остаток, аспарагин, в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-Met, за которым следует третий остаток, лейцин, в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-Met, за которым следует четвертый остаток, пролин, в SEQ ID NO: 1. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-Met, за которым следует пятый остаток, пролин, в SEQ ID NO: 1. Удлиняющий пептид может быть расположен между остатком N-Met и первым, вторым, третьим, четвертым или пятым остатком SEQ ID NO: 1. Примеры зрелой формы модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с четвертым вариантом осуществления, в котором за остатком N-Met следует второй, третий, четвертый или пятый остаток SEQ ID NO: 1, показаны в SEQ ID NO: 37-40, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положения 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные примеры модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих усечения и остаток N-Met, представлены в SEQ ID NO: 41-44.

[0083] Настоящее раскрытие также относится к модифицированным полипептидам FGF-1, содержащим одну или более мутаций SEQ ID NO: 1, причем полипептиды экспрессируются с остатком N-Met, за которым следует удлиняющий пептид, а за удлиняющим пептидом следует усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, причем полипептид экспрессируется с остатком N-Met, за которым следует удлиняющий пептид, а за удлиняющим пептидом следует усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1. Примеры таких последовательностей, экспрессируемых с остатком N-Met, за которым следует удлиняющий пептид, причем за удлиняющим пептидом следует усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, раскрыты в виде SEQ ID NO: 45-68, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций у аминокислот, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. В некоторых примерах N-концевой метионин отщепляется N-концевой обработкой, и, соответственно, зрелая форма модифицированного полипептида FGF-1 содержит только один или более остатков лидерного фрагмента, за которым следует усечение одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, как показано в SEQ ID NO: 69-92, причем иллюстративные последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные примеры последовательностей без остатка N-Met, но включающих в себя удлиняющий пептид и усечения N-концевых остатков, представлены в SEQ ID NO: 93-117.

[0084] В некоторых примерах остаток N-Met сохраняется в зрелой модифицированной полипептидной последовательности FGF-1, и, соответственно, зрелые формы содержат последовательности, приведенные в качестве примера в SEQ ID NO: 45-68, дополнительно содержащие одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. Дополнительные примеры последовательностей, содержащих остаток N-Met, удлиняющий пептид и усечения N-концевых остатков, представлены в SEQ ID NO: 118-141.

[0085] Усеченные версии модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, согласно пятому варианту осуществления экспрессируются без N-концевого остатка метионина и, дополнительно, без удлиняющего пептида. В некоторых примерах зрелые модифицированные полипептиды FGF-1 в соответствии с пятым вариантом осуществления содержат последовательность, представленную в SEQ ID NO: 29-32, причем последовательности дополнительно содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. В некоторых примерах модифицированные полипептиды FGF-1 в соответствии с пятым вариантом осуществления содержат последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33-36.

[0086] В тех случаях, когда модифицированный полипептид FGF-1 или его усеченная версия, содержащая одну или более мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, экспрессируется с N-концевым метионином, за которым следует удлиняющий пептид, остаток метионина либо остается, либо отщепляется от N-конца во время созревания полипептида после экспрессии. В некоторых примерах, где модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с аланином рядом с остатком N-Met, например, SEQ ID NO: 14, метионин расщепляется, чтобы получить зрелый полипептид FGF-1, который не содержит остаток N-Met, например, SEQ ID NO: 19. В некоторых примерах, где модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с треонином рядом с остатком N-Met, например, SEQ ID NO: 16, метионин расщепляется, чтобы получить зрелый полипептид FGF-1, который не содержит остаток N-Met, например, SEQ ID NO: 20. В некоторых примерах, где модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с глутаминовой кислотой рядом с остатком N-Met, например, SEQ ID NO: 17, метионин не расщепляется, чтобы получить зрелый FGF-1, который содержит N-концевой метионин и характеризуется той же последовательностью, что и экспрессированная форма.

[0087] В настоящем документе согласно шестому варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 1, содержащую мутацию в положении 67. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит мутацию в положении 67 в SEQ ID NO: 1, одну или более дополнительных мутаций в положениях 12, 16, 66, 117 и 134 и экспрессируется с остатком N-Met. Внутренний метионин в положении 67 может быть заменен, например, остатком аланина. В отсутствие внутреннего метионина в положении 67 N-концевой метионин модифицированного полипептида FGF-1 может быть расщеплен после экспрессии; используя бромистый цианоген (CNBr), средство, которое специфически расщепляет амидную связь после остатков метионина. В некоторых случаях модифицированные полипептиды FGF-1 в соответствии с шестым вариантом осуществления экспрессируются с удлиняющим пептидом. В некоторых других случаях модифицированные полипептиды FGF-1 в соответствии с шестым вариантом осуществления экспрессируются в форме, содержащей усечения одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, как показано в SEQ ID NO: 142-149, причем последовательности также содержат одну или более мутаций в аминокислотах, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1. В еще других примерах модифицированные полипептиды FGF-1 в соответствии с шестым вариантом осуществления экспрессируются в форме, содержащей удлиняющий пептид и усечения одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, как показано в SEQ ID NO: 151-175. Дополнительные примеры модифицированных полипептидов FGF-1 в соответствии с шестым вариантом осуществления в их зрелых формах приведены в SEQ ID NO: 174-204. Среди модифицированных полипептидов FGF-1, экспрессируемых в форме, которая содержит внутреннюю мутацию метионина, в случаях, когда полипептид экспрессируется с N-концевым метионином, за которым следует остаток аланина или треонина из удлиняющего пептида, например, SEQ ID NO: 175 и SEQ ID NO: 177, соответственно, N-концевой метионин может быть отщеплен во время созревания полипептида либо с помощью metAP, либо с использованием CNBr.

[0088] В настоящем документе согласно седьмому варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 205, для применения в способе, как описано в настоящем документе. В настоящем документе согласно восьмому варианту осуществления представлен модифицированный полипептид FGF-1, содержащий последовательность, представленную в виде SEQ ID NO: 206, для применения в способе, как описано в настоящем документе.

[0089] Настоящее изобретение дополнительно относится к модифицированным полипептидам FGF-1, содержащим любую комбинацию из делеции, вставки и замены SEQ ID NO: 1, при условии, что указанный модифицированный полипептид содержит одну или более мутаций SEQ ID NO: 1. В модифицированный полипептид FGF-1 могут быть введены аминокислотные замены, и продукты подвергнуты скринингу на желаемую активность, например, сохраненную/улучшенную эффективность при лечении нарушений глаз, повышенную активность при улучшении дистрофии Фукса, улучшенное лечение вызванной ипритом кератопатии. Аминокислотные замены также могут быть введены в модифицированный полипептид FGF-1, и продукты подвергнуты скринингу на желаемые физико-химические свойства, например, меньшую склонность к агрегации, улучшенную растворимость, длительный период полужизни, простоту составления в качестве офтальмологического лекарственного средства, повышенную стабильность, улучшенный срок годности. Предполагаются как консервативные, так и неконсервативные аминокислотные замены.

[0090] Модифицированный полипептид FGF-1, как согласно любому из приведенных выше вариантов осуществления, экспрессируется в форме, которая содержит по меньшей мере 136 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 137 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 138 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 139 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 140 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 141 аминокислоту. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 142 аминокислоты. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 143 аминокислоты. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 144 аминокислоты. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 145 аминокислот. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется в форме, которая содержит 146 аминокислот.

[0091] Модифицированный полипептид FGF-1, как согласно любому из вышеуказанных вариантов осуществления, содержит по меньшей мере 136 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 137 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 138 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 139 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 140 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 141 аминокислоту в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 142 аминокислоты в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 143 аминокислоты в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 144 аминокислоты в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 145 аминокислот в зрелой форме. В некоторых примерах модифицированный полипептид FGF-1 содержит 146 аминокислот в зрелой форме.

[0092] Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в зрелой форме полипептида. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 9-13, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме, а полипептид содержит одну или более мутаций в аминокислотных положениях, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 14-18, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 19-23, при условии, что указанный полипептид не содержит остатка N-Met в своей зрелой форме, а полипептид содержит одну или более мутаций в аминокислотных положениях, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 24-28, при условии, что указанный полипептид не содержит остатка N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 19-23, при условии, что указанный полипептид не содержит остатка N-Met в своей зрелой форме, и полипептид содержит одну или более мутаций в аминокислотных положениях, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 37-40, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме, и полипептид содержит одну или более мутаций в положениях аминокислот, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 41-44, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 45-68, при условии, что указанный полипептид содержит одну или более мутаций в положениях аминокислот, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1, и указанный полипептид не содержит остатка N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 69-92, содержит одну или более мутаций в положениях аминокислот, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 в SEQ ID NO: 1, и указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 93-117, при условии, что указанный полипептид не содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 118-141, при условии, что указанный полипептид содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 29-32, при условии, что указанный полипептид содержит одну или более мутаций в положениях аминокислот, соответствующих положениям 12, 16, 66, 117 и 134 последовательности SEQ ID NO: 1. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 33-36.

[0093] Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к любой из последовательностей, выбранных из SEQ ID NO: 142-204.

[0094] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в положении 12, например, с мутацией Lys12Val, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит N-концевой метионин в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 12 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Lys12Val, и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-Met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 12 в SEQ ID NO: 1, например, мутацию Lys12Val, с удлиняющим пептидом и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положении 12 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Lys12Val, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[0095] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в положении 16, например, с мутацией Cys16Ser, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 16 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Cys16Ser, и с усечением одного или более из первых пяти остатков в SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 16 SEQ ID NO: 16, например, мутацией Cys16Ser, с удлиняющим пептидом и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положении 16 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Cys16Ser, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[0096] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированный в положении 66, например, с мутацией Ala66Cys, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит N-концевой метионин в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 66 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Ala66Cys, и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 66 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Ala66Cys, с удлиняющим пептидом и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с остатком N-Met. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положении 66 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Ala66Cys, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1. и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[0097] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в положении 117, например, с мутацией Cys117Val, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 117 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Cys117Val, и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 117 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Cys117Val, с удлиняющим пептидом и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положении 117 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Cys117Val, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[0098] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в положении 134, например, с мутацией Pro134Val, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит N-концевой метионин в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 134 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Pro134Val, и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутацией в положении 134 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Pro134Val, с удлиняющим пептидом и с укорочением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положении 134 в SEQ ID NO: 1, например, мутацией Pro134Val, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[0099] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в положениях 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1, например, с мутацией Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, и причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положениях 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1, например, с мутацией Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val и с усечением одного или больше из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met в своей зрелой форме. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положениях 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1, например, с мутацией Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, с удлиняющим пептидом и с усечением одного или более из первых пяти остатков SEQ ID NO: 1, причем указанный модифицированный полипептид FGF-1 содержит остаток N-met. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность с мутациями в положениях 16, 66 и 117 в SEQ ID NO: 1, например, с мутацией Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, причем полипептид дополнительно содержит мутацию метионина в положении 67 в SEQ ID NO: 1 и экспрессируется с метионином на N-конце, причем метионин отщепляется от полипептида в его зрелой форме.

[00100] Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 2 и 9-204. Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного полипептида FGF-1 характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 205 или 206.

[00101] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 является термостабильным. Используемый в настоящем документе термостабильный FGF (например, термостабильный FGF-1) относится к FGF, характеризующемуся модифицированной аминокислотной последовательностью по отношению к SEQ ID NO: 1, которая также является более стабильной, чем полипептид SEQ ID NO: 1 при тех же условиях. Примеры мутаций, способных придавать термостабильность FGF (например, FGF-1), и способы оценки термостабильности описаны, например, в патентах США №7790682; 7595296; 7696171; 7776825; 7659379; 8119776; 8153770; 8153771 и 8461111; публикации патентных заявок США №2011/0224404 и 2013/0130983 и в Xia et al. PloS one. (2012) 7(11):е48210. Согласно некоторым вариантам осуществления положения 12 и/или 134 мутируют в FGF-1, чтобы произвести модифицированный FGF-1, который является термостабильным.

[00102] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 включает в себя одну или более модификаций, которые уменьшают количество реакционноспособных тиолов (например, свободных цистеинов). Примеры таких модификаций в FGF-1 описаны, например, в патентах США №7790682; 7595296; 7696171; 7776825; 7659379; 8119776; 8153770; 8153771 и 8461111; публикации патентных заявок США №2011/0224404 и 2013/0130983 и в Xia et al. PloS one. (2012) 7(11):е48210. Согласно некоторым вариантам осуществления положения 83 и/или 117 мутируют в SEQ ID NO: 1, чтобы произвести модифицированный FGF-1, который уменьшает количество реакционноспособных тиолов.

[00103] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF включает в себя одну или более модификаций, которые делают возможным образование внутренней дисульфидной связи. Согласно некоторым вариантам осуществления положение 66 мутировано в SEQ ID NO: 1 для производства модифицированного FGF-1, который содержит внутреннюю дисульфидную связь.

[00104] Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 можно вводить без экзогенного гепарина в составе для стабильности, их можно составлять и наносить без гепарина и, таким образом, они более способны связываться с тканевыми гепаранами. Такие модифицированные полипептиды FGF-1 обладают высоким сродством к тканевым гепаранам, которые подвергаются воздействию в хирургических, травматических или дистрофических условиях и патологических состояниях и, таким образом, связываются с патологической тканью при применении. Кроме того, модифицированные полипептиды FGF-1, являющиеся более термически стабильными, подходят для приготовления и хранения при комнатной температуре. Стабильность модифицированных полипептидов FGF-1 также делает их пригодными для введения как в растворах (например, с немедленным высвобождением), так и в составах с замедленным высвобождением.

[00105] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1, которая была модифицирована в одном или более положениях 12, 16, 66, 117 и 134. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF представляет собой последовательность SEQ ID NO: 1, которая была модифицирована в положениях 16, 66 и 117. Аминокислотные положения могут быть замещены, например, Ser, Cys, Val или другими аминокислотами, чтобы создать дисульфидные связи между модифицированными аминокислотами и аминокислотами дикого типа. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, также называемую N-Met ТНХ1114. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит одну или более мутаций, выбранных из группы, состоящей из следующего: Lys12Val, Pro134Val, Ala66Cys, Cys117Val и Prol134Val. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 содержит последовательность SEQ ID NO: 2.

[00106] Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 или композиции могут быть получены в виде пролекарств. «Пролекарство» относится к средству, которое превращается в исходное лекарственное средство in vivo. Пролекарства часто применимы, потому что в некоторых ситуациях их легче вводить, чем исходное лекарственное средство. Они могут, например, быть биодоступными при пероральном введении, тогда как исходное вещество - нет. Пролекарство может также характеризоваться улучшенной растворимостью в фармацевтических композициях по сравнению с исходным лекарственным средством.

[00107] Описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 могут быть помечены изотопно (например, радиоизотопом) или другими способами, включая в себя, без ограничения, использование хромофоров или флуоресцентных фрагментов, биолюминесцентных меток, фотоактивируемых или хемилюминесцентных меток.

[00108] Настоящее раскрытие дополнительно относится к модифицированным полипептидам FGF, содержащим N-концевую модификацию(и), причем модифицированный полипептид FGF может представлять собой любого представителя семейства FGF, включая в себя FGF-1 (SEQ ID NO: 1), FGF-2, FGF-3, FGF-4, FGF-5, FGF-6, FGF-7, FGF-8, FGF-9, FGF-10, FGF-11, FGF-12, FGF-13, FGF-14, FGF -15, FGF-16, FGF-17, FGF-18, FGF-19, FGF-20, FGF-21, FGF-22 и FGF-23, и FGF-24.

[00109] Согласно некоторым вариантам осуществления синтез модифицированных полипептидов FGF-1, как описано в настоящем документе, осуществляют с использованием средств, описанных в настоящей области техники, с использованием описанных в настоящем документе способов или с помощью их комбинации.

[00110] Согласно некоторым вариантам осуществления последовательность модифицированного FGF характеризуется идентичностью последовательности, составляющей 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100%, по отношению к SEQ ID NO: 1, мутированной в одном или более положениях 16, 66, и 117, например, с мутациями Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF содержит последовательность человеческого FGF-1 дикого типа с мутацией в положениях 16, 66 и 117, например, мутациями Cysl6Ser, Ala66Cys и Cys117Val.

Рекомбинантные технологии получения модифицированных полипептидов FGF-1

[00111] Для получения представленных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1 можно использовать множество экспрессирующих векторных систем-хозяев. Такие экспрессирующие системы-хозяева представляют собой носители, с помощью которых модифицированные полипептиды FGF-1 могут быть получены и впоследствии очищены, но также представляют собой клетки, которые могут, когда трансформированы или трансфицированы соответствующими нуклеотидными кодирующими последовательностями, демонстрировать модифицированный генный продукт in situ. Примеры экспрессионных систем-хозяев включают в себя, без ограничения, бактерии, насекомые, растения, млекопитающие, включая в себя человеческие системы-хозяева, такие как, без ограничения, системы клеток насекомых, инфицированные экспрессирующими векторами рекомбинантного вируса (например, бакуловируса), содержащими нуклеотидные последовательности, кодирующие модифицированные полипептиды FGF-1; системы растительных клеток, инфицированные экспрессирующими векторами рекомбинантных вирусов (например, вирусом мозаики цветной капусты, CaMV; вирусом табачной мозаики, TMV) или трансформированные экспрессирующими векторами рекомбинантных плазмид (например, плазмидой Ti), содержащими кодирующие последовательности для модифицированных полипептидов FGF-1; или системы клеток млекопитающих, включая в себя системы клеток человека, например, НТ1080, COS, СНО, ВНК, 293, 3Т3, содержащие рекомбинантные экспрессирующие конструкции, содержащие промоторы, полученные из генома клеток млекопитающих, например, промотор металлотионеина, или из вирусов млекопитающих, например, поздний промотор аденовируса; промотор 7.5К вируса коровьей оспы или из полученных из дрожжей плазмид, например, pSH19 и pSH15, или из бактериофагов, таких как лямбда-фаза, и их производных. Примеры бактериальных экспрессирующих систем включают в себя, без ограничения, плазмиды, происходящие из Escherichia coli (например, pBR322, pBR325, pUC12, pUC13 и pET-3); плазмиды, происходящие из Bacillus subtilis (например, PUB110, pTP5 и рС194).

[00112] Согласно некоторым вариантам осуществления штамм клетки-хозяина выбирается таким образом, чтобы он модулировал экспрессию вставленных последовательностей или модифицировал и процессировал генный продукт определенным желаемым образом. Такие модификации и процессинг белковых продуктов могут быть важны для функции белка. Различные клетки-хозяева характеризуются специфическими механизмами для посттрансляционного процессинга и модификации белков и генных продуктов. Подходящие клеточные линии или системы-хозяева могут быть выбраны для обеспечения правильной модификации и процессинга экспрессированного чужеродного белка. С этой целью могут быть использованы эукариотические клетки-хозяева, которые обладают клеточным механизмом для правильного процессинга первичного транскрипта, гликозилирования и фосфорилирования генного продукта. Такие клетки-хозяева млекопитающих, включая в себя клетки-хозяева человека, включают в себя, без ограничения, НТ1080, СНО, VERO, ВНК, HeLa, COS, MDCK, 293, 3Т3 и WI38.

[00113] Для длительного получения рекомбинантных пептидов с высоким выходом желательна стабильная экспрессия. Например, могут быть сконструированы клеточные линии, которые стабильно экспрессируют рекомбинантные модифицированные полипептиды FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления вместо использования векторов экспрессии, которые содержат вирусные точки начала репликации, клетки-хозяева могут быть трансформированы ДНК, контролируемой соответствующими элементами контроля экспрессии, например, промотором, энхансером, последовательностями, терминаторами транскрипции, сайтами полиаденилирования и т.п., и селектируемым маркером. После введения чужеродной ДНК сконструированные клетки могут расти в течение 1-2 дней в обогащенной среде, а затем переключаются на селективную среду. Селектируемый маркер в рекомбинантной плазмиде придает устойчивость к селекции и позволяет клеткам стабильно интегрировать плазмиду в их хромосомы и расти, образуя очаги, которые, в свою очередь, могут быть клонированы и размножены в клеточные линии. В некоторых примерах этот способ может преимущественно использоваться для конструирования клеточных линий, которые экспрессируют модифицированный полипептидный продукт FGF-1. Такие сконструированные клеточные линии могут быть особенно применимы при скрининге и оценке соединений, которые влияют на биологический продукт гена.

Образование дисульфидной связи в модифицированных полипептидах FGF-1

[00114] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему изобретению содержит следующие мутации в SEQ ID NO: 1 - Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, причем полипептид включает в себя внутреннюю дисульфидную связь между остатками цистеина в положениях 66 и 83. Для многих рекомбинантных белков образование правильных дисульфидных связей жизненно важно для достижения их биологически активной трехмерной конформации. Образование ошибочных дисульфидных связей может привести к неправильному сворачиванию и агрегации белка в тельцах включения. В E.coli окисление цистеина, как правило, происходит в периплазме, где дисульфидные связи образуются в реакциях дисульфидного обмена, катализируемых множеством ферментов, главным образом из семейства Dsb (Rosano, G.L., & Ceccarelli, E.A. (2014). Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges. Frontiers in Microbiology, 5, 172). Напротив, образование дисульфидной связи в цитоплазме встречается редко. Эта ситуация влияет на производство рекомбинантных белков с дисульфидными связями, которые производятся в цитоплазме, таких как модифицированный полипептид FGF-1, содержащий внутреннюю дисульфидную связь между Cys66 и Cys83. Соответственно, в некоторых примерах в качестве клетки-хозяина выбран сконструированный штамм Е. coli, который обладает окислительной цитоплазматической средой, которая способствует образованию дисульфидной связи, для экспрессии модифицированных полипептидов FGF-1 (Rosano, G.L., & Ceccarelli, Е.А. (2014). Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges. Frontiers in Microbiology, 5, 172). Примеры таких штаммов включают в себя, без ограничения, Origami (Novagen), который имеет генотип trxB-gor в фоне K-12, и штамм SHuffle® Т7 Express (NEB), который имеет генотип trxB-gor в фоне BL21 (DE3) и конститутивно экспрессирует хромосомную копию изомеразы дисульфидной связи DsbC. Было показано, что DsbC способствует коррекции неправильно окисленных белков в их правильную форму, а также является шапероном, который может помочь в сворачивании белков, которые не требуют дисульфидных связей. Без привязки к конкретной теории предполагается, что благодаря действию DsbC, меньше целевого белка, такого как модифицированный полипептид FGF-1, содержащий внутреннюю дисульфидную связь между Cys66 и Cys83, агрегирует в тельца включения. Таким образом, согласно определенным вариантам осуществления настоящее раскрытие идентифицирует улучшенный способ цитоплазматического производства модифицированного полипептида FGF-1, предусматривающий внутреннюю дисульфидную связь между Cys16 и Cys83.

[00115] Согласно некоторым вариантам осуществления, где модифицированный полипептид FGF-1 экспрессируется с остатком N-Met, полипептид впоследствии очищают без стадии, требующей протеолитического расщепления для удаления N-концевого пептида. Соответственно, согласно некоторым вариантам осуществления в настоящем раскрытии предложен способ быстрой очистки описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1 без участия стадии протеолитического расщепления для удаления N-концевого пептида. Это особенно выгодно для производства модифицированных полипептидов FGF-1 в соответствии с рекомендациями надлежащей производственной практики (GMP). Преимущества включают в себя отсутствие стадии расщепления, в том числе устранение необходимости последующей очистки расщепленного продукта и удаления реагентов, используемых для расщепления. Дополнительным преимуществом этого является увеличение выхода из-за уменьшения обработки и уменьшения необходимости проверки остаточных реагентов для расщепления и загрязнений, введенных для расщепления и последующего отделения отщепленного от нерасщепленного материала.

Способы применения

[00116] В настоящем изобретении согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения заболевания, нарушения или состояния глаз у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему модифицированного полипептида FGF-1, как описано в приведенных выше вариантах осуществления. В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 для применения в описанных в настоящем документе способах содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2 и 9-204. В настоящем изобретении согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения заболевания, нарушения или состояния глаз у млекопитающего, предусматривающий введение млекопитающему модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность, представленную в SEQ ID NO: 205 или 206.

[00117] Согласно некоторым вариантам осуществления подлежащее лечению заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние эндотелиального слоя роговицы. Заболевания, нарушения или состояния эндотелиального слоя роговицы включают в себя, без ограничения, дистрофию Фукса, буллезную кератопатию, врожденную наследственную эндотелиальную дистрофию 1, врожденную наследственную эндотелиальную дистрофию 2, заднюю полиморфную дистрофию роговицы и синдромы сухого глаза.

[00118] Без ограничения какой-либо теорией полагают, что раствор модифицированного полипептида FGF-1, введенный внутрикамерно в водянистую влагу глаза, связывается с поверхностью эндотелия и особенно с любыми участками роговицы, которые не покрыты здоровым эндотелиальным слоем. Модифицированный FGF стимулирует рост и миграцию эндотелиальных клеток. Это уменьшает отек роговицы, связанный с эндотелиальной дистрофией, и снижает вероятность необходимости пересадки роговицы или эндотелия. Действие модифицированного FGF может происходить в месте, отличном от места наибольшей дистрофии (как правило, в центре роговицы), а также приводит к стимуляции эндотелиальных клеток на периферии роговицы и пулам эндотелиальных предшественников в трабекулярной сети (ТМ).

[00119] Согласно некоторым вариантам осуществления подлежащее лечению заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние эпителия роговицы. Заболевания, нарушения или состояния эпителия роговицы включают в себя, без ограничения, синдромы сухого глаза, воспалительные состояния, такие как синдром Стивенса-Джонсона, и дефекты эпителия роговицы.

[00120] Согласно некоторым вариантам осуществления подлежащее лечению заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой герпетическую кератопатию. Герпетическая кератопатия, как правило, представляет собой инфекцию роговицы, вызванную вирусом простого герпеса (HSV). Первичная инфекция может представлять собой результат прямого воздействия на слизистые оболочки хозяина инфекционного HSV. После первичной инфекции и установления латентности в сенсорных ганглиях вирус можно стимулировать для входа в инфекционный цикл, из которого он возвращается в роговицу. Оказавшись там, эта рецидивирующая инфекция может вызвать различные осложнения, в частности воспалительный ответ, который, если он достаточно сильный, может нарушить целостность роговицы, приводя к язве роговицы, непрозрачности, помутнению, образованию рубцов и, в тяжелых случаях, к слепоте. Вторичным после герпетической инфекции может быть развитие хронической герпетической кератопатии, нейротрофической кератопатии или и того и другого. Например, стромальные инфекции, которые являются иммуноопосредованными и представляют собой основную причину слепоты роговицы в развитых странах, возникают в результате хронической вирусной реактивации и приводят к нейротрофической кератопатии, дегенеративному состоянию. Нормальная роговица плотно иннервируется, но ей не хватает кровеносных сосудов. Последующие эпизоды после первичной вирусной инфекции могут не только повредить нервы, что приводит к снижению чувствительности роговицы (гипестезия роговицы), но также привести к ангиогенезу и неоваскуляризации.

[00121] Согласно дополнительным вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 можно применять для лечения дистрофии эпителиальной базальной мембраны, ювенильной эпителиальной дистрофии роговицы Месманна, желатинозной каплевидной дистрофии роговицы, эпителиальной дистрофии роговицы Лиша, субэпителиальной муцинозной дистрофии роговицы, дистрофии роговицы Рейс-Бюклерса или дистрофии Тиля-Бенке, и рецидивирующих эрозий роговицы.

[00122] Согласно некоторым вариантам осуществления состояние глаз включает в себя повреждение роговицы (например, поверхности роговицы или эндотелиального слоя на границе раздела роговицы и водянистой влаги) или хирургическое нарушение, вызванное операциями на роговице, включая в себя PRK, LASIK и любую проникающую хирургию роговицы или кератопластику.

[00123] Также в настоящем документе предложен способ лечения повреждения, вызванного химическим или нарывным средством, путем введения модифицированных полипептидов факторов роста фибробластов (FGF-1) или фармацевтической композиции или лекарственных средств, которые включают в себя такие модифицированные пептиды.

[00124] Также в настоящем документе согласно одному варианту осуществления предложен способ лечения повреждения химическим или нарывным веществом путем введения описанного в настоящем документе модифицированного полипептида FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает лечение повреждения кожи или повреждения глаза, вызванного химическим или нарывным средством. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает лечение кератопатии от иприта, вызванной нарывным веществом, например, азотистым ипритом (NM), путем введения модифицированного FGF-1 в виде описанных в настоящем документе полипептидов. Лечение MGK модифицированным полипептидом FGF-1, как описано в настоящем документе, согласно некоторым вариантам осуществления приводит к улучшению гистопатологических состояний, связанных с MGK, таких как гиперплазия эпителиального слоя роговицы, отек эпителиально-стромальных клеток, эрозия роговицы. Введение модифицированного FGF-1 по настоящему раскрытию согласно определенным вариантам осуществления приводит к уменьшению отека и устранению эрозий роговицы. Эрозия роговицы, как правило, характеризуется деэпителизацией роговицы и в некоторых примерах введение модифицированного FGF-1 приводит к более быстрой реэпителизации роговицы или уменьшает тяжесть деэпителизации роговицы. Согласно одному варианту осуществления описан способ регенерации эпителия поверхности глаза у пациента, подвергшегося воздействию химического или нарывного вещества, путем введения описанного в настоящем документе модифицированного FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления способ способствует регенерации роговицы, предотвращает дегенерацию роговицы и предотвращает долговременные последствия химического повреждения. В некоторых примерах способ предусматривает лечение повреждения эндотелия роговицы, повреждения эпителия роговицы или повреждения стромы роговицы. В случаях, когда данный способ лечит повреждения эндотелия роговицы, введение описанного в настоящем документе модифицированного FGF-1 усиливает функцию клеток эндотелия роговицы и предотвращает длительную дегенерацию роговицы. В некоторых случаях, когда данный способ лечит повреждения эндотелия роговицы, введение описанного в настоящем документе модифицированного FGF-1 предотвращает отек роговицы и вторичные передние кератопатии. В некоторых случаях, когда данный способ лечит повреждения эндотелия роговицы, введение описанного в настоящем документе модифицированного FGF-1 предотвращает потерю клеток эндотелия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления способ приводит к снижению степени отслоения эпителия роговицы. Согласно некоторым вариантам осуществления способ предусматривает лечение стромального повреждения, такого как рубцевание стромы и непрозрачность роговицы.

[00125] Согласно некоторым вариантам осуществления состояние глаз включает в себя случайную травму или химическое или термическое повреждение роговицы. В некоторых примерах химическое или термическое повреждение представляет собой химический ожог. В некоторых примерах химическое или термическое повреждение вызвано нарывным веществом. В некоторых примерах химическое или термическое повреждение вызвано химическим боевым средством.

[00126] Множество бытовых и профессиональных соединений могут вызывать химические ожоги глаз и кожи. Без оперативного вмешательства может преобладать необратимая потеря зрения и уродство. Предполагается, что средства, которые быстро нейтрализуют как кислотные, так и щелочные средства без выделения тепла и ограничивают диффузию, эффективны при лечении химических повреждений. Иллюстративные химические повреждения включают в себя, без ограничения, повреждения щелочами, повреждения кислотами. Обычные источники химических ожогов включают в себя серную кислоту (H₂SO₄), соляную кислоту (HCl), гидроксид натрия (NaOH), известь (СаО), нитрат серебра (AgNO₃), перекись водорода (Н₂О₂), газообразный хлор и любой сильный окислитель.

[00127] Иллюстративное химическое боевое средство, которое может вызвать описанное в настоящем документе химическое или термическое повреждение, представляет собой фосген, отравляющее вещество крапивного действия или отравляющее вещество раздражающего действия. Фосген представляет собой высокотоксичный бесцветный газ при комнатной температуре и стандартном давлении, который конденсируется при температуре 0°С в дымящуюся жидкость. Молекулярная формула COCl₂. Фосген чрезвычайно токсичен при остром (кратковременном) вдыхании. У людей были зарегистрированы серьезные респираторные эффекты, в том числе отек легких, эмфизема легких и смерть. Сильное раздражение глаз и кожные ожоги могут возникнуть в результате воздействия на глаза или кожу. Хроническое (длительное) вдыхание фосгена может также вызвать необратимые легочные изменения, такие как эмфизема и фиброз. Его воздействие может привести к широко распространенным и разрушительным последствиям, включая в себя высокую смертность, благодаря его быстрому проникновению и способности вызывать немедленные тяжелые кожные повреждения. Результаты недавнего исследования показывают, что местное воздействие на кожу паров фосгена вызывает побледнение открытой кожи в виде эритематозного кольца, некроз, отек, легкую крапивницу и эритему в течение нескольких минут после воздействия до 8 часов после воздействия на модели мыши. Эти клинические проявления на коже сопровождаются увеличением толщины кожи, гибелью апоптотических клеток, дегрануляцией тучных клеток, активностью миелопероксидазы, указывающей на инфильтрацию нейтрофилов, фосфорилированием и накоплением р53, а также повышением содержания СОХ-2 и TNFα. Местное воздействие фосгеном также приводило к расширению периферических сосудов с резким увеличением эритроцитов в сосудах печени, селезенки, почек, легких и тканей сердца. Предполагается, что эти события могут вызвать снижение артериального давления, что приведет к шоку, гипоксии и смерти. Смотрите Tewari-Singh N, Goswami DG, Kant R, Croutch CR, Casillas RP, Orlicky DJ, Agarwal R, Cutaneous exposure to vesicant phosgene oxime: Acute effects on the skin and systemic toxicity, Toxicol Appl Pharmacol. 2017 Feb 15; 317:25-32.

[00128] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 можно использовать в способе лечения, предотвращения или ослабления различных повреждений кожи, вызванных воздействием нарывного вещества.

[00129] Нарывные вещества или кожно-нарывные средства представляют собой токсичные соединения, которые вызывают повреждения кожи, сходные с вызванными ожогами повреждениями. Эти средства при вдыхании воздействуют на верхние дыхательные пути и легкие, вызывая отек легких. Смотрите, например, Ganesan, K., S.K. Raza, and R. Vijayaraghavan (2010) Chemical Warfare Agents, Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences 2.3: 166-178. Эти средства также могут вызвать серьезные повреждения глаз. Есть две формы нарывных веществ: иприты и мышьяк. Наиболее важным веществом в этом классе химических боевых средств является сернистый иприт. Другие представители включают в себя азотистые иприты (HN1, HN2 и HN3) и содержащие мышьяк нарывные вещества, такие как люизиты (L1, L2 и L3), этилдихлоарсин, метилдихлоарсин, фенилдихлориарсин. На фиг. 12 показаны некоторые примеры структур нарывных средств. Конкретные примеры нарывных средств включают в себя, без ограничения, сернистый иприт (SM), бис-(2-хлорэтил)сульфид, хлорэтилэтилсульфид (CEES), люизит и 2-хлор-N-(2-хлорэтил)-N-метилэтанамина гидрохлорид, представитель семейства азотистого иприта (NM). Используемые в настоящем документе термины нарывное вещество, средство нарывного действия или химическое вещество, нарывное средство и т.п., означают нарывные вещества, которые конкретно перечислены в настоящем документе, и другие соединения, такие как токсины и/или химические боевые средства. Сернистый иприт представляет собой нарывное вещество с самым высоким военным значением с момента его применения в Первой мировой войне. Азотистые иприты были синтезированы в 1930-х годах, но не были произведены в больших количествах для военных действий. Мехлорэтамин (HN2, мустарген) нашел более мирное применение в качестве химиотерапевтического средства против рака и оставался стандартным соединением для этой цели в течение многих лет. Люизит (L) был синтезирован в 1918 г. для военных целей из-за его негорючих свойств и токсичности, подобной иприту, но, вероятно, не использовался на поле боя. Иприт является радиомиметиком и чрезвычайно токсичен для делящихся клеток. Иприты липофильны и легко проникают в кожу, большинство тканей и резины. После прохождения через клеточную мембрану сернистый иприт превращается в высокореактивный ион сульфония. Он необратимо алкилирует ДНК, РНК и белок, вызывая гибель клеток; самой важной мишенью является ДНК. Иприт алкилирует пуриновые основания ДНК и повреждает их. Люизит поглощается кожей намного быстрее, вызывает немедленную боль и раздражение в пораженном органе и вызывает более систематические симптомы. Он напрямую связывается с сульфгидрильными группами и инактивирует их.

[00130] Применение сернистого иприта (SM) и других газообразующих средств в химической войне известно давно. Совсем недавно, в августе 2015 г., SM использовался ИГИЛ для нападения на курдские силы в Ираке, а также для нападения в Сирии. Ипритные средства повреждают глаза, кожу и легкие, причем глаза являются наиболее чувствительными. Поскольку симптомы проявляются не ранее, чем через 2-4 часа после воздействия, люди, подвергшиеся воздействию, не сразу узнают, что они подвержены воздействию иприта. Эта задержка приводила к замешательству и панике, когда наконец появлялись симптомы воздействия. Для глаз это блефароспазм, слезотечение, раздражение, боль и светобоязнь. Повреждения роговицы, вызванные воздействием паров сернистого иприта (СМ) на глаза, являются наиболее распространенными химическими травмами. Воздействия на глаза демонстрируют три различные, дозозависимые клинические траектории: полное разрешение травмы, немедленный переход к хронической травме или очевидное выздоровление с последующим развитием постоянных глазных проявлений. Эти последние две траектории включают в себя совокупность симптомов роговицы, которые в совокупности известны как вызванная ипритом кератопатия (MGK). Тканеспецифическое повреждение во время острого повреждения может уменьшить регенеративные способности эндотелия роговицы и лимбальных стволовых клеток, тем самым предрасполагая роговицу к хроническим или отсроченным формам MGK.

[00131] У некоторых пациентов MGK возникает через несколько недель после воздействия; у других потребовались годы, чтобы проявиться. Эта кератопатия характеризуется конъюнктивализацией роговицы и дефицитом лимбальных стволовых клеток. Было показано, что в эндотелии роговицы человека промежутки из-за потери СЕС, как правило, заполняются распространением проксимальных СЕС. Эти морфологические изменения компенсируют потерю эндотелия до тех пор, пока барьер между роговицей и водянистой влагой больше не может поддерживаться, что приводит к постоянному отеку роговицы и вторичным передним кератопатиям. Поскольку СЕС взрослого человека не размножаются in vivo, любая потеря СЕС, таким образом, потенциально представляет собой постоянное снижение эндотелиальной способности. Таким образом, хотя эндотелиальная функция может быть восстановлена после легкого повреждения в результате распространения СЕС, более серьезные повреждения могут превысить восстановительную способность человеческого эндотелия. Кролики отличаются от людей тем, что они могут подвергаться ограниченной пролиферации СЕС, что дает им улучшенную способность восстанавливаться после потери СЕС. Однако, как и у людей, достаточно серьезное повреждение эндотелия кролика также приводит к необратимой декомпенсации роговицы и вторичным кератопатиям.

[00132] На основании вышеупомянутых исследований было выдвинуто предположение, что вызванная нарывным веществом эндотелиальная недостаточность может быть причинным механизмом, лежащим в основе патогенеза MGK. Эта гипотеза согласуется с дозовой зависимостью между SM и развитием MGK, которая наблюдалась у людей и кроликов, а также с различными клиническими траекториями (разрешенная хроническая MGK и MGK с отсроченным началом), которые были зарегистрированы при человеческих жертвах. Согласно этой гипотезе, воздействие на роговицу низкими дозами нарывного вещества может привести к острому поражению эпителия с минимальной эндотелиальной токсичностью, и роговица восстанавливается без долгосрочных осложнений. Альтернативно, воздействие доз нарывного вещества, которые вызывают непоправимое повреждение эндотелия роговицы, может привести к нарушению эндотелиального барьера, вызывая постоянный отек с вторичными передними кератопатиями. После тяжелого повреждения может отсутствовать явная задержка между острым повреждением и началом MGK. Следовательно, композиция и способ минимизации или предотвращения повреждения, вызванного сернистым ипритом и химическими токсическими веществами аналогичного действия, в частности химическими боевыми средствами, являются важной задачей ученых, работающих в министерстве обороны США. Недавние исследования показали, что в качестве нарывных средств соединения иприта приводят к потере эпителиально-стромального прикрепления. В роговице образуются микробуллы, и после того, как их накопилось достаточно, эпителий роговицы не может быстро удерживаться на базальной мембране, вызывая выпадение эпителиальной ткани. Таким образом, эффективная терапия после воздействия SM желательна для повышения способности эпителия роговицы оставаться прикрепленным к строме. Без привязки к какой-либо теории предполагается, что способность эпителия роговицы оставаться прикрепленным к строме может дать возможность некоторым базальным эпителиям восстанавливаться in situ, поддерживая их связи с базальной мембраной и стромой. Также было выдвинуто предположение, что одним из ключевых игроков в целостности эпителия и стромы является коллаген XVII (т.е., BP180), трансмембранный компонент гемидесмосомы. Расщепление коллагена XVII семейством белков ADAM («дезинтегрин и металлопротеиназа»), включая в себя ADAM9, ADAM10 и/или ADAM17, после повреждения высвобождает эпителиальные клетки из их базальной мембраны, и это расщепление позволяет им мигрировать.

[00133] ADAM17, также известный как TNF-превращающий фермент или ТАСЕ, представляет собой общий ответ на повреждение, а также «шеддазу» для высвобождения коллагена XVII. Было высказано предположение, что микроблистерность роговицы, вызванная воздействием нарывного средства, частично обусловлена активацией ADAM17, который способен расщеплять коллаген XVII. Экспериментальные данные подтвердили индукцию экспрессии ADAM17 в зоне базальной мембраны роговицы, подвергнутой действию нарывного средства NM. Таким образом, предполагается, что средства, которые способны ингибировать активацию экспрессии ADAM17 после воздействия, являются применимыми для ослабления повреждений роговицы, вызванных нарывными средствами.

[00134] В настоящем раскрытии предусмотрены модифицированные полипептиды FGF-1, которые лечат, уменьшают неблагоприятные эффекты или иным образом способствуют заживлению воздействия нарывных средств, таких как SM и NM. Раскрытые в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 способны предотвращать сверхэкспрессию ADAM17 после воздействия нарывного средства, такого как SM и/или NM.

[00135] В настоящем раскрытии также предложен способ лечения, предотвращения, уменьшения неблагоприятных эффектов и иного содействия заживлению вызванного химическим или нарывным средством повреждения путем введения модифицированного полипептида FGF-1. Согласно некоторым вариантам осуществления раскрытые в настоящем документе способы дополнительно предотвращают сверхэкспрессию ADAM17 после воздействия нарывного средства, такого как SM и/или NM.

[00136] Белки FGF-1 дикого типа, например, SEQ ID NO: 1, которые содержат непарные остатки цистеина, чувствительны к окислению и алкилированию. Смотрите фиг. 1. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения, где модифицированные полипептиды FGF-1 не содержат непарных остатков цистеина, такие модифицированные полипептиды FGF-1 менее чувствительны к окислению и/или алкилированию нарывными средствами. Экспериментальные данные также указывают на снижение содержания FGF-1 и его мРНК, что известно, что является результатом воздействия ипритных средств, и предполагается, что эта потеря может играть роль в медленном заживлении вызванных ипритом поражений в роговице. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения модифицированные полипептиды FGF-1, которые не содержат свободных остатков цистеина и, соответственно, менее чувствительны или не чувствительны к модификации цистеина, эффективны для ускорения заживления поражений ипритом роговицы.

[00137] Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего изобретения способ предусматривает введение модифицированного полипептида FGF-1, который не содержит непарных остатков цистеина, причем модифицированные полипептиды FGF-1 менее чувствительны к окислению и/или алкилированию нарывными средствами. Согласно некоторым вариантам осуществления настоящего раскрытия способ предусматривает введение модифицированных полипептидов FGF-1, которые не содержат свободных остатков цистеина и, соответственно, менее чувствительны или не чувствительны к модификации цистеина. Согласно некоторым вариантам осуществления раскрытый в настоящем документе способ эффективен для ускорения заживления связанных с MGK повреждений роговицы.

[00138] Воздействие нарывных средств, таких как сернистый иприт (SM) и азотистый иприт (NM), может вызвать серьезное повреждение кожи с задержкой образования волдырей. В зависимости от дозы и времени их воздействия отек и эритема могут потенциально перерасти в волдыри, язвы, некрозы, шелушение и изменения пигментации, которые сохраняются в течение недель и даже лет после воздействия. Смотрите, например, Tewari-Singh N, Agarwal R, Mustard vesicating agent-induced toxicity in the skin tissue and silibinin as a potential countermeasure, Ann N Y Acad Sci. 2016 Jun; 1374(1): 184-92. Другое иллюстративное нарывное средство оксим фосгена (СХ), отравляющее вещество крапивного действия или отравляющее вещество раздражающего действия, также является потенциальным химическим военным и террористическим оружием.

[00139] Согласно некоторым вариантам осуществления подлежащее лечению заболевание, нарушение или состояние глаз представляет собой заболевание, нарушение или состояние стромы роговицы. Заболевания, нарушения или состояния стромы роговицы включают в себя, без ограничения, кератоконус, дистрофию Бибера-Хааба-Диммера, зернистую дистрофию роговицы, пятнистую дистрофию роговицы, кристаллическую дистрофию роговицы Шнайдера, врожденную стромальную дистрофию роговицы, крапчатую дистрофию роговицы, травму или химическое или температурное повреждение роговицы или повреждение, вторичное по отношению к инфекциям, таким как трахома.

[00140] Согласно другим вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 можно применять до, во время или после процедур трансплантации роговицы (например, трансплантации роговицы или процедур, включающих в себя десцеметову оболочку), которые включают в себя разрушение роговицы (например, эндотелиальной структуры роговицы), где ускорение заживления клеток поверхности роговицы или глаз и/или улучшение клеточного ответа (например, путем увеличения жизнеспособности и/или долговечности трансплантированных клеток) на повреждение может привести к терапевтическому эффекту.

[00141] Согласно дополнительным вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 могут применяться для повышения жизнеспособности и здоровья клеток роговицы или предшественников роговицы, готовящихся к трансплантации. Модифицированные полипептиды FGF-1, добавленные в среду для культивирования органов для донорской роговицы или другой донорской ткани роговицы, стимулируют клетки роговицы и увеличивают время хранения роговицы до трансплантации, а также увеличивают вероятность того, что роговица будет содержать достаточное количество здоровых клеток, которые будут применимы для трансплантации. Кроме того, модифицированные полипептиды FGF-1 можно использовать в культуральных средах при культивировании клеток-предшественников роговицы для стимуляции роста этих клеток.

[00142] Дополнительные варианты осуществления относятся к способам модуляции активности одного или более рецепторов фактора роста фибробластов (FGFR) в эндотелиальной клетке роговицы, предусматривающим контактирование указанной эндотелиальной клетки роговицы с модифицированным FGF (например, модифицированным FGF-1, таким как фактор, содержащий последовательность SEQ ID NO: 2). Такие способы можно применять для увеличения или стимуляции активности одного или более FGFR, что может привести к усилению миграции клеток и/или пролиферации клеток.

[00143] Согласно дополнительным вариантам осуществления описаны способы лечения метаболического заболевания путем введения модифицированного полипептида FGF-1 в соответствии с настоящим изобретением. Иллюстративные метаболические заболевания, которые можно лечить раскрытыми модифицированными полипептидами FGF-1, включают в себя, без ограничения: (1) нарушения утилизации глюкозы и связанные с ними последствия, включая в себя сахарный диабет (тип I и тип-2), гестационный сахарный диабет, гипергликемию, резистентность к инсулину, нарушение метаболизма глюкозы, «преддиабет» (нарушенная гликемия натощак (IFG) или нарушение толерантности к глюкозе (IGT)) и другие физиологические нарушения, связанные с гипергликемическим состоянием или связанные с ним, в том числе, например, гистопатологические изменения, такие как разрушение β-клеток поджелудочной железы; (2) дислипидемии и их последствия, такие как, например, атеросклероз, заболевание коронарной артерии, цереброваскулярные нарушения и т.п.; (3) другие состояния, которые могут быть связаны с метаболическим синдромом, такие как ожирение и повышенная масса тела (включая в себя их сопутствующие заболевания, такие как, помимо прочего, неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD), неалкогольный стеатогепатит (NASH) и синдром поликистозных яичников (PCOS), а также включает в себя тромбозы, гиперкоагуляционные и протромботические состояния (артериальные и венозные), гипертонию, сердечно-сосудистые заболевания, инсульт и сердечную недостаточность; (4) нарушения или состояния, в которых участвуют воспалительные реакции, включая в себя атеросклероз, хронические воспалительные заболевания кишечника (например, болезнь Крона и язвенный колит), бронхиальную астму, красную волчанку, артрит или другие воспалительные ревматические нарушения; (5) нарушения клеточного цикла или процессы дифференцировки клеток, такие как опухоли жировой клетки, липоматозные карциномы, включая в себя, например, липосаркомы, солидные опухоли и новообразования; (6) нейродегенеративные заболевания и/или демиелинизирующие нарушения центральной и периферической нервной системы и/или неврологические заболевания, включающие в себя нейровоспалительные процессы и/или другие периферические невропатии, включая в себя болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, болезнь Паркинсона, прогрессирующую мультифокальную лейкознцефалопатию и синдром Гийена-Барре; (7) кожные и дерматологические нарушения и/или нарушения процессов заживления ран, включая в себя эритематозно-плоскоклеточные дерматозы; и (8) другие нарушения, такие как синдром X, остеоартрит и острый респираторный дистресс-синдром. Также описаны способы снижения содержания глюкозы в крови после еды и натощак, улучшения чувствительности к инсулину и толерантности к глюкозе, уменьшения хронического системного воспаления, уменьшения стеатоза печени у млекопитающего, снижения потребления пищи или их комбинаций путем введения терапевтически эффективного количества раскрытого модифицированного полипептида FGF-1 (или кодирующих его молекул нуклеиновой кислоты).

[00144] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированные полипептиды FGF-1 вводят для заживления ран. Примеры ран включают в себя, без ограничения, ссадины, авульсии, подсасывающие раны (например, открытый пневмоторакс), ожоговые раны, ушибы, огнестрельные раны, резаные раны, открытые раны, проникающие раны, перфорирующие раны, колотые раны, свищевые раны, колотые раны, хирургические раны, подкожные раны, диабетические поражения или касательные ранения. Дополнительные примеры ран, которые можно лечить с помощью описанных в настоящем документе соединений и композиций, включают в себя острые состояния или раны, такие как термические ожоги, химические ожоги, радиационные ожоги, ожоги, вызванные чрезмерным воздействием ультрафиолетового излучения (например, солнечные ожоги); повреждение тканей организма, таких как промежность, в результате родов; травмы, полученные во время медицинских процедур, такие как эпизиотомия; поражения, вызванные травмами, включая в себя порезы, разрезы, ссадины; травмы, полученные в результате несчастных случаев; послеоперационные травмы, а также хронические состояния, такие как намины, пролежни, состояния, связанные с сахарным диабетом и плохой циркуляцией, и все виды акне. Кроме того, рана может включать в себя дерматит, такой как импетиго, опрелость, фолликулит и экзема, раны после стоматологической операции; парадантоз; раны после травмы и связанные с опухолью раны. Еще другие примеры ран включают в себя укусы животных, артериальные заболевания, жаление и укусы насекомых, инфекции костей, пораженные кожные/мышечные трансплантаты, гангрену, трещины или разрывы кожи, старение кожи, хирургические разрезы, включая медленные или незаживающие хирургические раны, внутримозговое кровоизлияние, аневризму, кожную астению и послеоперационные инфекции.

[00145] Терапевтический пептид по настоящему изобретению также можно применять для лечения внешних ран, представляющих собой, без ограничения, царапины, порезы, рваные раны, укушенные раны, пулевые раны, колотые раны, ожоговые раны, вызванные солнечными ожогами, химическими ожогами, хирургические раны, пролежни, лучевые повреждения, всевозможные острые и хронические раны, раны или поражения, созданные косметическими процедурами на коже. Пептид также может быть использован для уменьшения последствий старения кожи. Пептид может ускорять заживление ран на наружной ране и/или улучшать косметический вид раненых участков или кожи, подверженной старению и заболеваниям. Пептид может быть использован для лечения внутренних повреждений, вызванных, без ограничения, заболеваниями, хирургическими операциями, выстрелами, уколами, несчастными случаями, инфарктами, ишемическими повреждениями органов и тканей, включая в себя, без ограничения, сердце, кости, головной мозг, спинной мозг, сетчатку, периферические нервы и другие ткани и органы, как правило, подверженные острым и хроническим травмам, заболеваниям, врожденным нарушениям умственного развития и порокам развития и процессам старения.

[00146] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированные полипептиды FGF-1 вводят для лечения ожогового повреждения. Иллюстративные ожоговые раны включают в себя, без ограничения, «ожоговые язвы», включая в себя, например, изъязвления, возникающие в результате ожогового поврждения, включая в себя ожог первой степени (т.е. поверхностную, покрасневшую область кожи); ожог второй степени (пузырчатая травма, которая может самопроизвольно заживать после удаления блистерной жидкости); ожог третьей степени (прожженная вся кожа и, как правило, требует хирургического вмешательства для заживления ран); ошпаривание (может произойти от ожогов горячей водой, смазкой или радиаторной жидкостью); термический ожог (может возникать от пламени, как правило, глубокие ожоги); химический ожог (может быть вызван кислотой и щелочью, как правило, глубокие ожоги); электрический ожог (либо низкое напряжение дома, либо высокое напряжение на работе); вспышка взрыва (как правило, поверхностные травмы) и контактные ожоги (как правило, глубокие и могут возникать от выхлопных труб глушителя, горячих утюгов и печей). Как используется в настоящем документе, отсроченная или трудно заживающая рана может включать в себя, например, рану, которая характеризуется, по меньшей мере частично, 1) длительной воспалительной фазой, 2) медленно образующимся внеклеточным матриксом (ЕСМ) и 3) уменьшенной скоростью эпителизации. Было показано, что факторы роста, например, FGF-1, играют важную роль в регенерации нерва и его заживлении. FGF-1 был предложен для применения в регенерации тканей нервной системы после повреждения или травмы спинного мозга, таких как повреждение плечевого сплетения, нейроиммунологические нарушения, такие как острый или идиопатический поперечный миелит (ТМ), или любого другого заболевания или состояния, при котором регенерация и/или защита нейронов или нервной ткани является желательной, поскольку полагают, что FGF-1 стимулирует пролиферацию и рост нейронов и может быть нейрозащитным. Смотрите, например, Cheng, Н. et al., "Spinal Cord Repair with Acidic Fibroblast Growth Factor as a Treatment for a Patient with Chronic Paraplegia," SPINE 29(14):E284-E288 (2004) и Lin, P-H., "Functional recovery of chronic complete idiopathic transverse myelitis after administration of neurotrophic factors," Spinal Cord 44:254-257 (2006). Известно, что FGF-1 обладает нейротрофической активностью, способствует росту аксонов и оказывает благоприятное воздействие на модели повреждения спинного мозга и регенерации аксонов. Соответственно, согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему раскрытию способствует регенерации нервной системы и может использоваться в способах лечения состояний, на которые оказывает эффект регенерация нервной системы. В некоторых примерах способов неврологическим состоянием является боковой амиотрофический склероз (ALS). В некоторых примерах способов неврологическим состоянием является острый или идиопатический поперечный миелит (ТМ). В некоторых случаях модифицированный полипептид FGF-1 можно вводить в сочетании с другими факторами роста, а также с другими фармацевтически активными компонентами, для лечения состояний, на которые оказывает эффект невральная регенерация.

Фармацевтические композиции, способы введения и дозирование.

[00147] Фармацевтические композиции, содержащие описанный в настоящем документе модифицированный полипептид FGF, могут быть приготовлены обычным способом с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей, включая в себя вспомогательные вещества и вспомогательные средства, которые облегчают переработку активных соединений в препараты, которые можно использовать в фармацевтических целях. Правильный состав зависит от выбранного пути введения. Дополнительные подробности о подходящих вспомогательных веществах для фармацевтических композиций, описанных в настоящем документе, могут быть найдены, например, в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980 и Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkinsl999), включенных в настоящий документ посредством ссылки для такого раскрытия.

[00148] Используемая в настоящем документе фармацевтическая композиция относится к смеси модифицированного FGF с другими химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие средства, суспендирующие средства, загустители и/или вспомогательные вещества, и, необязательно, другие терапевтические и/или профилактические ингредиенты. Фармацевтическая композиция облегчает введение в организм модифицированного FGF. При осуществлении предусмотренных в настоящем документе способов лечения или применения терапевтически эффективные количества описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1 вводят в фармацевтической композиции млекопитающему, имеющему подлежащее лечению заболевание, нарушение или состояние глаз. Согласно некоторым вариантам осуществления млекопитающее представляет собой человека. Терапевтически эффективное количество может широко варьировать в зависимости от тяжести заболевания, возраста и относительного состояния здоровья субъекта, активности используемого соединения и других факторов. Фармацевтически приемлемая или подходящая композиция включает в себя офтальмологически подходящую или приемлемую композицию.

[00149] Фармацевтическая композиция (например, для доставки инъекцией или для применения в виде глазной капли) может быть в форме жидкости или твердого вещества. Жидкая фармацевтическая композиция может включать в себя, например, один или более из следующих компонентов: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, солевой раствор, предпочтительно физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия, жирные масла, которые могут служить растворителем или суспендирующей средой, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные средства; антиоксиданты; хелатирующие средства; буферы и средства для регулирования тонуса, такие как хлорид натрия или декстроза. Парентеральный препарат может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или флаконы для многократных доз, изготовленные из стекла или пластика. Физиологический солевой раствор, как правило, используется в качестве вспомогательного вещества, и фармацевтическая композиция для инъекций или композиция, которая доставляется глазным путем (например, в виде глазных капель), предпочтительно является стерильной.

[00150] Описанный в настоящем документе модифицированный FGF-полипептид или фармацевтическая композиция могут доставляться субъекту любыми подходящими способами, включая в себя, например, местно, внутриглазно, внутрикамерно, перорально, парентерально, внутривенно, внутрибрюшинно, интраназально (или другими способами доставки в слизистые оболочки, например, носа, горла и бронхов), или путем местного введения в глаз, или с помощью внутриглазного или периокулярного устройства. Режимы местного введения могут включать в себя, например, местное применение, глазные капли, внутриглазную инъекцию или периокулярную инъекцию. Периокулярная инъекция, как правило, включает в себя инъекцию соединения под конъюнктиву или в пространство Теннона (под фиброзной тканью, покрывающей глаз). Внутриглазная инъекция, как правило, включает в себя инъекцию модифицированного FGF или фармацевтической композиции в стекловидное тело. Согласно определенным вариантам осуществления введение является неинвазивным, например, путем местного применения или глазных капель. Согласно некоторым вариантам осуществления введение осуществляется комбинацией местного и внутрикамерного способа.

[00151] Описанный в настоящем документе модифицированный FGF или фармацевтическая композиция может быть составлена для введения с использованием фармацевтически приемлемых (подходящих) носителей или наполнителей, а также технологий, как правило, используемых в настоящей области техники. Фармацевтически приемлемый или подходящий носитель включает в себя офтальмологически подходящий или приемлемый носитель. Носитель выбирается в соответствии с растворимостью конкретного модифицированного FGF. Подходящие офтальмологические композиции и составы включают в себя те, которые вводятся локально в глаз, такие как глазные капли, инъекция или т.п. В случае глазных капель композиция также может необязательно включать в себя, например, офтальмологически совместимые средства, такие как изотонизирующие средства, такие как хлорид натрия, концентрированный глицерин и т.п.; буферные средства, такие как фосфат натрия, ацетат натрия и т.п.; поверхностно-активные вещества, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат (также называемый полисорбат 80), полиоксилстеарат 40, полиоксиэтилен гидрогенизированное касторовое масло и т.п.; стабилизирующие средства, такие как цитрат натрия, эдентат натрия и т.п.; консерванты, такие как хлорид бензалкония, парабены и т.п., и другие ингредиенты. Консерванты могут применяться, например, на уровне от приблизительно 0,001 до приблизительно 1,0 мас. %/объем. рН состава, как правило, находится в диапазоне, приемлемом для офтальмологических составов, например, в диапазоне рН от 4 до 8.

[00152] Для инъекций модифицированный FGF или фармацевтическая композиция может быть предусмотрена в солевом растворе для инъекций, в форме инъецируемого липосомного раствора, полимерной системы с медленным высвобождением или т.п. Интраокулярные и периокулярные инъекции известны специалистам в настоящей области техники и описаны в многочисленных публикациях, включая в себя, например, Spaeth, Ed., Ophthalmic Surgery: Principles of Practice, W.B. Sanders Co., Philadelphia, Pa., 85-87, 1990.

[00153] Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF или фармацевтическую композицию (например, офтальмологическую композицию) вводят через микроиглы в роговицу (Jiang et al. (2007). Invest Ophthalmol Vis Sci 48(9): 4038-4043). Массив микроигл покрывают модифицированным FGF или фармацевтической композицией и прижимают к роговице так, чтобы микроиглы проникали в строму роговицы, но не проникали через всю роговицу. Затем он удаляется, и модифицированный FGF или фармацевтическая композиция остается в строме роговицы. Этот модифицированный FGF или фармацевтическая композиция может стимулировать пролиферацию и миграцию клеток роговицы и подавлять реакцию рубцевания, которой, как правило, характеризуются стромальные клетки.

[00154] Для доставки композиции, содержащей по меньшей мере один из описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1 через слизистую оболочку, которая предусматривает доставку в носовые проходы, горло и дыхательные пути, композицию можно доставлять в форме аэрозоля. Соединение может быть в жидкой или порошковой форме для доставки через слизистую оболочку. Например, композиция может быть доставлена через аэрозольный баллон под давлением с подходящим пропеллентом, таким как углеводородный пропеллент (например, пропан, бутан, изобутен). Композиция может быть доставлена через систему доставки без давления, такую как небулайзер или распылитель.

[00155] Подходящие пероральные лекарственные формы включают в себя, например, таблетки, пилюли, саше или капсулы из твердого или мягкого желатина, метилцеллюлозы или другого подходящего материала, легко растворяющегося в пищеварительном тракте. Можно использовать подходящие нетоксичные твердые носители, которые включают в себя, например, маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, тальк, целлюлозу, глюкозу, сахарозу, карбонат магния и т.п. фармацевтической степени чистоты. (Смотрите, например, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (Gennaro, 21^st Ed. Mack Pub. Co., Easton, PA (2005)).

[00156] Описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 или фармацевтические композиции могут быть составлены для пролонгированного или замедленного высвобождения. Такие композиции, как правило, могут быть получены с использованием хорошо известной технологии и вводиться, например, периокулярной, внутриглазной, ректальной, оральной или подкожной имплантацией, или имплантацией в желаемом месте-мишени, или местным применением. Композиции с пролонгированным высвобождением могут содержать средство, диспергированное в матрице носителя и/или содержащееся в резервуаре, окруженном регулирующей скорость мембраной. Вспомогательные вещества для применения в таких составах являются биосовместимыми, а также могут быть биоразлагаемыми; предпочтительно композиция обеспечивает относительно постоянный уровень высвобождения активного компонента. Количество активного соединения, содержащегося в составе с пролонгированным высвобождением, зависит от места имплантации, скорости и ожидаемой продолжительности высвобождения, а также от характера состояния, подлежащего лечению или предотвращению.

[00157] Системная абсорбция лекарственного средства или композиции, вводимой внутриглазным путем, известна специалистам в настоящей области техники (смотрите, например, Lee et al., Int. J. Pharm. 233:1-18 (2002)). Согласно одному варианту осуществления описанное в настоящем документе соединение доставляется с помощью местного способа доставки в глаза (смотрите, например, Curr. Drug Metab. 4:213-22 (2003)). Композиция может быть в форме глазных капель, крема или мази или т.п., таких как водные глазные капли, водные глазные суспензии, неводные глазные капли и неводные глазные суспензии, гели, глазные мази и т.д. Для приготовления геля могут быть использованы, например, карбоксивиниловый полимер, метилцеллюлоза, альгинат натрия, гидроксипропилцеллюлоза, полимер этиленмалеинового ангидрида и т.п.

[00158] Согласно другому варианту осуществления модифицированный раствор FGF или фармацевтическая композиция (например, офтальмологическая композиция) содержит гиалуроновую кислоту, карбоксиметилцеллюлозу или другие полисахариды, которые обеспечивают повышенную переносимость для глаз, вязкость и осмоляльность для получения удобного глазного раствора.

[00159] Доза модифицированного FGF или фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере один из описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1, может отличаться в зависимости от состояния пациента (например, человека), т.е. стадии заболевания, нарушения или состояния глаз, общего состояния здоровья, возраста и других факторов, которые специалист в области медицины будет использовать для определения дозы. Когда композицию используют в качестве глазных капель, например, от одной до нескольких капель на стандартную дозу, предпочтительно 1 или 2 капли (приблизительно 50 мкл на 1 каплю) можно применять приблизительно от 1 до приблизительно 6 раз в день.

[00160] Фармацевтические композиции можно вводить способом, подходящим для заболевания, нарушения или состояния, которое нужно лечить (или предотвращать), как определено специалистами в области медицины. Подходящая доза и подходящая продолжительность и частота введения будут определяться такими факторами, как состояние пациента, тип и тяжесть заболевания, нарушения или состояния пациента, конкретная форма активного ингредиента и способ введения. Как правило, подходящая доза и схема лечения обеспечивают композицию(и) в количестве, достаточном для обеспечения терапевтического и/или профилактического эффекта (например, улучшенного клинического результата, такого как более частые полные или частичные ремиссии или более длительное отсутствие заболеваний или уменьшение тяжести симптомов). Для профилактического применения доза должна быть достаточной для предотвращения, задержки начала или уменьшения тяжести заболевания, нарушения или состояния глаз. Оптимальные дозы, как правило, могут быть определены с использованием экспериментальных моделей и/или клинических испытаний. Оптимальная доза может зависеть от массы тела, массы или объема крови пациента.

[00161] Согласно различным вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему раскрытию можно вводить субъекту в виде суточной дозы в течение периода времени. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему раскрытию можно вводить хронически или длительно. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему раскрытию можно вводить в течение нескольких дней, недель, месяцев, лет или продолжающейся терапии в течение жизни субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный полипептид FGF-1 по настоящему раскрытию можно вводить в течение периода приблизительно 7 дней, 15 дней, приблизительно 21 дня, приблизительно 30 дней, приблизительно 3 месяцев, приблизительно 6 месяцев, приблизительно 12 месяцев, приблизительно 18 месяцев, приблизительно 2 лет, приблизительно 5 лет, приблизительно 7 лет, приблизительно 10 лет, приблизительно 15 лет, приблизительно 20 лет, приблизительно 25 лет, приблизительно 30 лет, приблизительно 35 лет или приблизительно 40 лет. Согласно некоторым вариантам осуществления схема лечения может быть определена для индивидуального субъекта в зависимости от различных факторов. В некоторых примерах схема лечения зависит от уровня воздействия соединения, вызывающего химическое или термическое повреждение, такого как соединение нарывного действия. Согласно некоторым вариантам осуществления схема лечения составляет приблизительно 2 недели для острого воздействия и от нескольких месяцев до года для длительного воздействия. Согласно некоторым вариантам осуществления схема лечения является хронической. В некоторых примерах фактор может включать в себя, без ограничения, определение изменения степени дегенерации ткани роговицы в ответ на введение модифицированного полипептида FGF-1 по настоящему раскрытию. В некоторых примерах фактор может включать в себя, без ограничения, улучшение последствий MGK в ответ на введение модифицированного полипептида FGF-1 по настоящему раскрытию. В некоторых примерах фактор может включать в себя, без ограничения, заживление эндотелиальных поражений роговицы в ответ на введение модифицированного полипептида FGF-1 по настоящему раскрытию. В некоторых примерах фактор может включать в себя, без ограничения, пролиферацию эпителиальных клеток роговицы в ответ на введение модифицированного полипептида FGF-1 по настоящему раскрытию. В некоторых примерах фактор может включать в себя, без ограничения, уменьшение симптомов, связанных с дистрофией Фукса, в ответ на введение модифицированного полипептида FGF-1 по настоящему раскрытию. Согласно вариантам осуществления субъект, проявляющий немедленный ответ на композицию, например немедленное уменьшение симптомов, связанных с дистрофией Фукса, может требовать менее частых доз, чем субъект, проявляющий ответ на композицию в более позднее время или после нескольких доз.

[00162] Дозы модифицированных полипептидов FGF-1 или фармацевтических композиций могут быть подходящим образом выбраны в зависимости от клинического статуса, состояния и возраста субъекта, лекарственной формы и т.п. В случае глазных капель описанный в настоящем документе модифицированный FGF можно вводить, например, от приблизительно 10 мкг/мл до приблизительно 100 мг/мл модифицированного FGF от одного до семи раз в неделю.

[00163] Также предложены способы получения описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1 и фармацевтических композиций. Композиция, содержащая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество или носитель и по меньшей мере один из описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1, может быть получена путем синтеза модифицированного FGF в соответствии с любым из способов, описанных в настоящем документе или применяемых в настоящей области техники, и последующего составления соединения с фармацевтически приемлемым носителем. Состав композиции будет подходящим и зависит от нескольких факторов, включая в себя, без ограничения, путь доставки, дозу и стабильность соединения.

[00164] По меньшей мере один описанный в настоящем документе модифицированный FGF можно вводить людям или другим отличным от человека позвоночным животным. Согласно некоторым вариантам осуществления модифицированный FGF является по существу чистым в том смысле, что он содержит менее чем приблизительно 5% или менее чем приблизительно 1%, или менее чем приблизительно 0,1% других органических молекул, таких как загрязняющие промежуточные продукты или побочные продукты, которые образуются, например, на одной или более стадиях способа синтеза. Согласно другим вариантам осуществления можно вводить комбинацию одного или более описанных в настоящем документе модифицированных полипептидов FGF-1.

[00165] Описанные в настоящем документе композиции можно вводить для профилактического и/или терапевтического лечения. В терапевтических применениях композиции вводят пациенту, уже страдающему от заболевания или состояния, в количестве, достаточном для излечения или по меньшей мере частичного купирования симптомов заболевания или состояния. Количества, эффективные для этого применения, будут зависеть от тяжести и течения заболевания или состояния, предшествующей терапии, состояния здоровья пациента, массы и реакции на лекарственные средства, а также от мнения лечащего врача.

[00166] В профилактических применениях описанные в настоящем документе композиции вводят пациенту, подверженному риску развития конкретного заболевания, нарушения или состояния. Такое количество определяется как «профилактически эффективное количество или доза». При таком применении точные количества также зависят от состояния здоровья пациента, его массы и т.п.

[00167] В случае, когда состояние пациента не улучшается, по усмотрению врача введение композиций может осуществляться хронически, т.е. в течение длительного периода времени, в том числе на протяжении всей жизни пациента, для улучшения состояния или иным образом контроля или ограничения симптомов заболевания или состояния пациента.

[00168] В случае, когда состояние пациента действительно улучшается, по усмотрению врача введение композиций может осуществляться непрерывно; альтернативно, вводимая доза лекарственного средства может быть временно уменьшена или временно приостановлена на определенный промежуток времени (т.е. «лекарственные каникулы»).

[00169] После улучшения состояния пациента, если необходимо, вводят поддерживающую дозу. Впоследствии дозировка или частота введения или и то и другое могут быть уменьшены, в зависимости от симптомов, до уровня, при котором сохраняется улучшенное заболевание, нарушение или состояние. Пациентам, однако, может потребоваться прерывистое лечение на долгосрочной основе при любом повторении симптомов.

[00170] Необходимую дозу удобно представлять в виде одной дозы или в виде разделенных доз, вводимых одновременно (или в течение короткого периода времени) или через соответствующие интервалы, например, в виде двух, трех, четырех или более поддоз в день.

[00171] Описанная в настоящем документе фармацевтическая композиция может быть в стандартных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных дозировок. В стандартной лекарственной форме состав разделен на стандартные дозы, содержащие подходящие количества одного или более модифицированных полипептидов FGF-1. Стандартная доза может быть в форме упаковки, содержащей отдельные количества состава. Неограничивающими примерами являются упакованные таблетки или капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Водные суспензионные композиции могут быть упакованы в одноразовые неперекрываемые контейнеры. Альтернативно, можно использовать многоразовые повторно закрывающиеся контейнеры, и в этом случае, как правило, включают в композицию консервант. Только в качестве примера, составы для парентерального введения могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, которая включает в себя, без ограничения, ампулы, или в контейнерах с множеством доз, с добавленным консервантом.

[00172] Токсичность и терапевтическая эффективность таких схем лечения могут быть определены стандартными фармацевтическими процедурами на клеточных культурах или экспериментальных животных, включая в себя, без ограничения, определение LD₅₀ (дозы, смертельной для 50% популяции) и ED₅₀ (дозы, терапевтически эффективной у 50% популяции). Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектами является терапевтическим показателем, и оно может быть выражено как соотношение между LD₅₀ и ED₅₀. Соединения, демонстрирующие высокие терапевтические показатели, являются предпочтительными. Данные, полученные из анализов клеточных культур и исследований на животных, могут быть использованы при составлении диапазона дозировок для применения у человека. Дозировка таких соединений предпочтительно находится в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают в себя ED₅₀ с минимальной токсичностью. Дозировка может варьировать в этом диапазоне в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения.

Комбинированные способы лечения

[00173] Модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции также можно использовать в комбинации с другими терапевтическими средствами, которые выбраны по их терапевтической ценности для подлежащего лечению состояния. Модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции также можно использовать в комбинации с другими терапевтическими средствами, которые выбраны по их терапевтической ценности для лечения повреждения нарывным веществом. Такие средства не должны вводиться в одной и той же фармацевтической композиции и могут из-за различных физических и химических характеристик вводиться разными путями. Определение способа введения и целесообразности введения, где это возможно, в одной и той же фармацевтической композиции хорошо известно врачу. Первоначальное введение может быть выполнено в соответствии с установленными протоколами, признанными в настоящей области техники, и затем, на основании наблюдаемых эффектов, врач может изменить дозировку, способы введения и время введения.

[00174] Конкретный выбор этих необязательных дополнительных используемых средств будет зависеть от диагноза лечащих врачей и их оценки состояния пациента и соответствующего протокола лечения. Средства могут вводиться одновременно (например, одновременно, по существу одновременно или в рамках одного и того же протокола лечения) или последовательно, в зависимости от характера заболевания, нарушения или состояния, состояния пациента и фактического выбора используемых средств. Определение порядка введения и количества повторений введения каждого терапевтического средства во время протокола лечения хорошо известно врачу после оценки подлежащего лечению заболевания и состояния пациента.

[00175] Фармацевтические средства, которые составляют раскрытую в настоящем документе комбинированную терапию, могут представлять собой комбинированную лекарственную форму или отдельные лекарственные формы, предназначенные для по существу одновременного введения. Фармацевтические средства, которые составляют комбинированную терапию, также можно вводить последовательно, причем любое терапевтическое соединение вводят по схеме, требующей двухэтапного введения. Двухэтапная схема введения может предусматривать последовательное введение активных средств или раздельное введение отдельных активных средств. Период времени между этапами многократного введения может варьировать от нескольких минут до нескольких часов, в зависимости от свойств каждого фармацевтического средства, таких как активность, растворимость, биодоступность, период полураспада в плазме и кинетический профиль фармацевтического средства. Циркадное изменение концентрации целевой молекулы также может определять оптимальный интервал доз.

[00176] Терапевтически эффективные дозировки могут варьировать, когда лекарственные средства используются в комбинациях лечения. Способы экспериментального определения терапевтически эффективных дозировок лекарственных средств и других средств для применения в схемах комбинированного лечения описаны в литературе. Например, применение метрономного дозирования, т.е. обеспечение более частых, более низких доз для минимизации токсических побочных эффектов, широко описано в литературе. Комбинированное лечение дополнительно предусматривает периодическое лечение, которое начинается и прекращается в разное время для оказания помощи в клиническом ведении пациента.

[00177] Например, модифицированные могут быть включены в составы, которые содержат другие активные ингредиенты, такие как стероиды, антибиотики, противовоспалительные средства, цитокины, такие как IL-1 или аналоги IL-1, или антагонисты цитокинов, такие как ингибиторы IL-17.

[00178] Другие иллюстративные цитокины включают в себя, без ограничения, интерлейкины (например, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, IL-1α, IL-1β и IL-1 RA), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF), гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), онкостатин М, эритропоэтин, фактор, ингибирующий лейкоз (LIF), интерфероны, В7.1 (также известный как CD80), В7.2 (также известный как В70, CD86), представителей семейства TNF (TNF-α, TNF-β, LT-β, лиганд CD40, лиганд Fas, лиганд CD27, лиганд CD30, 4-1BBL, Trail) и фактор ингибирования миграции MIF.

[00179] Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе комбинации или фармацевтические композиции вводят в иммуносупрессивной терапии для снижения, ингибирования или предотвращения активности иммунной системы. Иммуносупрессивная терапия клинически используется для: предотвращения отторжения трансплантированных органов и тканей; лечения аутоиммунных заболеваний или заболеваний, которые наиболее вероятно характеризуются аутоиммунным происхождением; и лечения некоторых других неаутоиммунных воспалительных заболеваний.

[00180] Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции вводят с одним или более противовоспалительными средствами, включая в себя, без ограничения, нестероидные противовоспалительные лекарственные средства (NSAID) и кортикостероиды (глюкокортикоиды).

[00181] NSAID включают в себя, без ограничения: аспирин, салициловую кислоту, гентизиновую кислоту, салицилат холина-магния, салицилат холина, салицилат холина-магния, салицилат холина, салицилат магния, салицилат натрия, дифлунизал, карпрофен, фенопрофен, фенопрофен кальция, фторобипрофен, ибупрофен, кетопрофен, набутон, кеторолак, кеторолак трометамин, напроксен, оксапрозин, диклофенак, этодолак, индометацин, сулиндак, толметин, меклофенамат, меклофенамат натрия, мефенамовую кислоту, пироксикам, мелоксикам и специфические ингибиторы СОХ-2 (такие как, без ограничения, целекоксиб, рофекоксиб, вальдекоксиб, парекоксиб, эторикоксиб, люмиракоксиб, CS-502, JTE-522, L-745,337 и NS398).

[00182] Кортикостероиды включают в себя, без ограничения: бетаметазон, преднизолон, алклометазон, альдостерон, амцинонид, беклометазон, бетаметазон, будезонид, циклесонид, клобетазол, клобетазон, клокортолон, клопреднол, кортизон, кортивазол, дефлазакорт, дезоксикортикостерон, дезонид, дзоксиметазон, дезоксикортон, дексаметазон, дифлоразон, дифлукортолон, дифлупреднат, фторхлорон, флудрокортизон, флудроксикортид, флуметазон, флунизолид, флуоцинолон ацетонид, флуоцинонид, флуокортин, флуокортолон, фторметолон, флуперолон, флупредниден, флутиказон, формокортал, галцинонид, галометазон, гидрокортизон/кортизол, гидрокортизона ацепонат, гидрокортизона бутепрат, гидрокортизона бутират, лотепреднол, медризон, мепреднизон, метилпреднизолон, метилпреднизолона ацепонат, мометазона фуроат, параметазон, предникарбат, преднизон/преднизолон, римексолон, тиксокортол, триамцинолон и улобетазол.

[00183] Другие средства, используемые в качестве противовоспалительных средств, включают в себя средства, раскрытые в патентной публикации США 2005/0227929, включенной в настоящий документ посредством ссылки.

[00184] Некоторые коммерчески доступные противовоспалительные средства включают в себя, без ограничения: Arthrotec^® (диклофенак и мизопростол), Asacol^® (5-аминосалициклическая кислота), Salofalk® (5-аминосалициклическая кислота), Auralgan^® (антипирин и бензокаин), Azulndine^® (сульфасалазин), Daypro^® (оксапрозин), Lodine^® (этодолак), Ponstan^® (мефенамовая кислота), Solumedrol^® (метилпреднизолон), Bayer^® (аспирин), Bufferin^® (аспирин), Indocin^® (индометацин), Vioxx^® (рофекоксиб), Celebrex^® (целекоксиб), Bextra^® (вальдекоксиб), Arcoxia^® (эторикоксиб), Prexige^® (люмиракоксиб), Advil^®, Motrin^® (ибупрофен), Voltaren^® (диклофенак), Orudis^® (кетопрофен), Mobic^® (мелоксикам), Relafen^® (набуметон), Aleve^®, Naprosyn^® (напроксен), Feldene^® (пироксикам).

[00185] Согласно одному варианту осуществления описанные в настоящем документе композиции вводят с антагонистами лейкотриеновых рецепторов, включая в себя, без ограничения, BAY u9773 (смотрите ЕР 00791576; опубликованный 27 августа 1997 г.), DUO-LT (Tsuji et al, Org. Biomol. Chem., 1, 3139-3141, 2003), зафирлукаст (Accolate®), монтелукаст (Singulair®), пранкуласт (Onon®) и их производные или аналоги.

[00186] Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции вводят с одним или более ингибиторами Rho-киназы. Согласно некоторым вариантам осуществления описанные в настоящем документе модифицированные полипептиды FGF-1 и фармацевтические композиции вводят с одним или более дополнительными факторами роста, включая в себя, без ограничения, эпидермальный фактор роста (EGF) и фактор роста нервов (NGF). Смотрите, например, Joyce et al. (2009) Invest Ophthalmol. Vis Sci. 50:2116-2122, фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), трансформирующий фактор роста альфа и бета (TGF-альфа и TFG-бета), эндотелиальный фактор роста тромбоцитов (PD-ECGF), фактор роста тромбоцитов (PDGF), фактор некроза опухолей альфа (TNF-альфа), фактор роста гепатоцитов (HGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF), эритропоэтин, колониестимулирующий фактор (CSF), макрофагальный CSF (M-CSF), гранулоцитарный/макрофагальный CSF (GM-CSF) и синтаза оксида азота (NOS).

Наборы/изделия

[00187] Для использования в описанных в настоящем документе терапевтических применениях в настоящем документе также предусмотрены наборы и изделия. Такие наборы могут включать в себя носитель, упаковку или контейнер, который разделен на части для приема одного или более контейнеров, таких как флаконы, пробирки и т.п., каждый из которых содержит один или более отдельных элементов, которые будут использоваться в описанном в настоящем документе способе. Подходящие контейнеры включают в себя, например, бутылки, флаконы, шприцы и пробирки. Контейнеры могут быть изготовлены из различных материалов, таких как стекло или пластик.

[00188] Представленные в настоящем документе изделия содержат упаковочные материалы. Упаковочные материалы для использования в упаковке фармацевтических продуктов включают в себя, например, патенты США №5323907, 5052558 и 5033252. Примеры фармацевтических упаковочных материалов включают в себя, без ограничения, блистерные упаковки, бутылки, пробирки, ингаляторы, насосы, пакеты, флаконы, контейнеры, шприцы, бутылки и любой упаковочный материал, подходящий для выбранного состава и предполагаемого способа введения и лечения. Предусматривается широкий спектр офтальмологических составов модифицированных полипептидов FGF-1 и фармацевтических композиций, представленных в настоящем документе, а также различные способы лечения любого заболевания, нарушения или состояния глаз, которые могут быть применимы при введении описанного в настоящем документе модифицированного FGF или фармацевтической композиции.

[00189] Например, контейнер(ы) может включать в себя модифицированный FGF, такой как модифицированный FGF-1, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2. Контейнер(ы) может иметь порт стерильного доступа. Такие наборы, необязательно, содержат соединения с идентифицирующими описаниями или этикетками или инструкциями, относящимися к их применению в описанных в настоящем документе способах.

[00190] Набор, как правило, может содержать один или более дополнительных контейнеров, каждый из которых содержит один или более различных материалов (таких как реагенты, необязательно в концентрированной форме, и/или устройства), желательных с коммерческой и пользовательской точек зрения для применения описанного в настоящем документе модифицированного FGF. Неограничивающие примеры таких материалов включают в себя, без ограничения, буферы, разбавители, фильтры, иглы, шприцы; этикетки на носителе, упаковке, контейнере, флаконе и/или пробирке с указанием содержимого и/или инструкций по применению, а также вкладышей в упаковку с инструкциями по применению. Набор инструкций, как правило, также будет включен.

[00191] Этикетка может находиться на контейнере или быть связана с ним. Этикетка может быть на контейнере, когда буквы, цифры или другие символы, образующие этикетку, прикреплены, отлиты или выгравированы в самом контейнере; этикетка может быть связана с контейнером, когда она присутствует внутри емкости или носителя, который также удерживает контейнер, например, как вкладыш в упаковку. Этикетка может использоваться для указания того, что содержимое должно применяться для конкретного терапевтического применения. Этикетка также может указывать направления использования содержимого, например, в описанных в настоящем документе способах.

[00192] Согласно определенным вариантам осуществления модифицированная фармацевтическая композиция FGF может быть представлена в упаковке или дозирующем устройстве, которое может содержать одну или более стандартных лекарственных форм, содержащих представленное в настоящем документе соединение. Упаковка может, например, содержать металлическую или пластиковую фольгу, такую как блистерная упаковка. Упаковка или дозирующее устройство могут сопровождаться инструкциями по применению. Упаковка или дозатор также могут сопровождаться уведомлением, связанным с контейнером, в форме, предписанной государственным органом, регулирующим производство, использование или продажу фармацевтических препаратов, причем это уведомление отражает одобрение органом формы лекарственного средства для введения людям или животным. Например, таким уведомлением может быть маркировка, одобренная Управлением по контролю за продуктами и лекарственными средствами США для отпускаемых по рецепту лекарственных средств, или утвержденный вкладыш продукта. Композиции, содержащие модифицированный представленный в настоящем документе FGF, составленные в совместимом фармацевтическом носителе, также могут быть приготовлены, помещены в соответствующий контейнер и помечены для лечения указанного состояния.

ПРИМЕРЫ

[00193] Эти примеры приведены только для иллюстративных целей, а не для ограничения объема формулы изобретения, представленной в настоящем документе. Используемые в описанных в настоящем документе примерах исходные материалы и реагенты могут быть синтезированы или могут быть получены из коммерческих источников.

Пример 1. Иллюстративный модифицированный полипептида FGF-1 с N-концевым метионином (N-Met) обладает активностью, аналогичной версии без N-Met.

[00194] Настоящее исследование направлено на модифицированные полипептиды FGF-1, содержащие последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (TTHX1001). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00195] Экспериментальные способы и результаты

[00196] Биологическую активность исследуемых полипептидов оценивают в анализе пролиферации клеток NIH-3T3. Результаты указывают на отсутствие различий между модифицированными полипептидами FGF-1 SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 205 с точки зрения эффективности в индукции пролиферации клеток фибробластов.

Пример 2: Влияние модифицированных полипептидов FGF-1 на пролиферацию эндотелиальных клеток роговицы человека (НСЕС)

[00197] Настоящее исследование направлено на модифицированные полипептиды FGF-1, содержащие последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (TTHX1001). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00198] Экспериментальные способы и результаты

[00199] Первичные культуры (пассаж 1) эндотелиальных клеток роговицы человека от здорового донора высевают на 24-луночные планшеты в присутствии фетальной бычьей сыворотки (FBS, 8%) и спустя 24 часа обрабатывают различными концентрациями N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205) или wt-FGF-1 (SEQ ID NO: 1) в средах с низким (0,8%) FBS. Группа 8% FBS служит положительным контролем. Результаты показывают, что N-Met-TTHX1114 является более эффективным, чем ТТНХ1001 или wt-FGF-1, в стимуляции пролиферации эпителиальных клеток роговицы человека и характеризуется зависимостью от дозы. ЕС₅₀ N-Met-TTHX1114 приблизительно в 100 раз ниже, чем wt-FGF-1 или другого исследуемого модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1001; SEQ ID NO: 205).

Пример 3: Вызванное азотистым ипритом повреждение роговицы

[00200] Исследование направлено на влияние модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114), на лечение повреждения роговицы, вызванного азотистым ипритом (NM). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00201] Экспериментальные способы

[00202] Модельную систему культивирования органов роговицы кролика использовали для оценки заживления после воздействия NM. Получают глаза кролика (8-12 недель), и роговицы с 2-миллиметровыми склеральными ободками отрезают от глаз, укладывают эпителиальной стороной вниз в пластину с лунками, а вогнутости заполняют расплавленным агаром 55°С (0,75%) в модифицированной Дюльбекко среде Игла (DMEM). Неограничивающий пример установки показан на фиг. 3. Как только раствор превращается в гель, роговицы переворачивают так, чтобы эпителиальный слой был доступен. Культуры помещают в чашки для культивирования тканей из пирекса диаметром 60 мм. Готовят DMEM с высоким содержанием глюкозы, содержащий 13MEM-NEAA (минимальное количество незаменимых аминокислот в незаменимой среде), 13 витаминных растворов RMPI 1640, 13 антибиотиков/противогрибковых средств, аскорбиновую кислоту (0,45 мМ) и ципрофлоксацин (10 мкг/мл). DMEM с высоким содержанием глюкозы добавляют к ободкам склеры, оставляя роговицы открытыми для воздуха. Чашки помещают в увлажненный инкубатор при температуре 37°С с 5% СО₂. Эпителий каждой культуры увлажняют 500 мкл среды, добавляемой по каплям на центральную роговицу каждые 7-9 часов. Нарывное средство NM добавляют по каплям к центральной роговице. Образцы роговицы (очищенные от их агаровой подложки) либо помещают эпителиальной стороной вниз в формочки cryomold, содержащие соединение с оптимальной температурой резания (OCT, Tissue-Tek; Sakura, Torrance, СА, USA), и быстро замораживают для гистологии и иммунофлюоресценции, либо сразу замораживают для дальнейших анализов белка, включая в себя вестерн-блот и анализы активности ADAM17 (набор для анализа активности InnoZyme ТАСЕ; Calbiochem, Billerica, MA, USA).

[00203] NM используют для индукции повреждения роговицы. NM, в порошкообразной твердой форме (каталожный №122564; Sigma-Aldrich) сначала растворяют в PBS до 100 мМ, а затем разбавляют средой до 10 мМ. Десять микролитров наносят для доставки 100 нмоль нарывного средства в роговицу. После нанесения NM на центральные роговицы культуры возвращают в инкубатор при температуре 37°С на 2 часа без удаления нарывного средства. После этой инкубации загрязненную среду удаляют, и свежую среду добавляют к центральной роговице, пока уровень в чашке не достигнет верха склерального края. Контрольные не подвергнутые воздействию и открытые роговицы затем возвращают в температуру 37°С для 22-часовой инкубации, удаляя только на три коротких периода, чтобы добавить 20 мкл среды к подвергнутым воздействию образцам, не получающим терапию N-Met-TTHX1114, или добавить 20 мкл N-Met-ТТНХ1114 в качестве терапии к центральной роговице. Первое приложение -met-ТТНХ1114 остается включенным на 8 часов, второе на 9 часов, а третье на 5 часов. Таким образом, продолжительность 2-часового воздействия и последующей обработки составляет в общей сложности 24 часа.

[00204] Для экспериментов, анализирующих, как быстро воздействие NM вызывало ADAM17, культуры устанавливают, как описано. В течение кратчайшего времени воздействия раствор NM наносят на роговицу, затем немедленно смывают и образец помещают в буфер для выделения белка. Это повторяется с двумя другими роговицами, чтобы собрать три 0-минутных воздействия. Для 5- и 10-минутного воздействия NM добавляют к наборам из трех роговиц, соответственно, гарантируя, что ни один не будет случайно подвергнут недостаточному воздействию или излишнему воздействию NM. Все роговицы извлекают и обрабатывают для анализов активности ADAM17.

[00205] Набор InnoZyme ADAM 17/ТАСЕ Activity Kit (Calbiochem) используют для количественной оценки активности фермента из экстрактов роговицы в соответствии с предоставленным поставщиком протоколом. Вкратце, 400 мкл промывочного буфера (из набора InnoZyme) вносят в 96-луночные планшеты, предварительно покрытые антителом к человеческому ADAM17, после чего проводят две промывки. Тройные образцы экстрактов роговицы и стандарты набора InnoZyme (100 мкл) каждый добавляют в три набора лунок. Планшеты герметично закрывают и выдерживают 1 час при осторожном встряхивании при комнатной температуре. Затем планшеты промывают 400 мкл промывочного буфера пять раз. Субстрат ADAM17, поставляемый в наборе (100 мкл), добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 5 часов при температуре 37°С. Флуоресценцию измеряют при длине волны возбуждения 324 нм и длине волны излучения 405 нм и указывают в виде относительных единиц флуоресценции на графиках. Для иммунодетекции ADAM 17 погруженные в ОСТ срезы на предметных стеклах сначала фиксируют в метаноле при температуре 20°С в течение 10 минут. Неспецифическое связывание блокируется в течение 1 часа с 5% нормальной козьей сывороткой (NGS) в PBS с 0,05% Tween-20 (PBST). Моноклональное антитело мыши против эктодомена (аминокислоты 18-671) человеческого ADAM 17 (5 мкг/мл в 1,5% NGS, МАВ9304; R&D Systems, Minneapolis, MN, США), которое обнаруживает только активный фермент иммунофлуоресценции, наносят на предметные стекла для 1-часовой инкубации при комнатной температуре, затем предметные стекла трижды промывают в течение 10 минут в PBST. Для стекол с отрицательным контролем на срезы наносят тот же объем PBST, что и с первичным антителом, используемым на исследуемых срезах, после чего следует тот же промывочный объем. Козье антитело к мышиному IgG, конъюгированное с AlexaFluor488 (1: 1000; Invitrogen, Carlsbad, СА, США), в 1,5% NGS применяют в течение 1 часа при комнатной температуре при инкубации. После промывки PBST три раза в течение 5 минут, 0,4 мг/мл DAPI наносят на срезы в течение 5 минут для противодействия окрашиванию ядер. Prolong Gold используют в накрывании покровных стекол.

[00206] Результаты

[00207] Гистопатология вызванного NM повреждения в органных культурах роговицы

[00208] Повреждение, наносимое NM, включает в себя следующее: (а) гиперплазия эпителиального слоя, которая проявляется в увеличении количества и глубины эпителиальных клеток, проталкивающихся вниз в строму. Это называется опускающейся гиперплазией. Не подвергнутая воздействию (интактная) роговица демонстрирует некоторую опускающуюся гиперплазию, но она не столь обширна, как роговица, подвергнутая воздействию NM; (b) ядра базальных клеток, поднимающиеся к вершине базальных эпителиальных клеток; и (с) эпителиально-стромальное разделение. Гистопатологические эффекты видны уже через четыре дня после воздействия. Иллюстративная гистопатологическая классификация для оценки эффектов вызванного NM повреждения роговицы показана на фиг. 6. Гистопатологическая классификация улучшается при лечении N-Met-TTHX1114. Обработанные N-Met-TTHX1114 срезы роговицы имеют более низкий балл (свидетельствует о меньшем повреждении) по сравнению со срезами необработанной роговицы.

[00209] Обработка подвергнутых воздействию NM клеток роговицы N-Met-TTHX1114 защищает от повреждения

[00210] Обработка подвергнутой воздействию NMT роговицы с помощью ТТНХ1114 защищает роговицу от гистопатологического повреждения, вызванного NM. После воздействия NM обработанная N-Met-TTHX1114 роговица не проявляет опускающуюся гиперплазию. Кроме того, эпителиально-стромальное разделение не видно в роговицах, обработанных N-Met-TTHX1114.

[00211] Воздействие NM снижает содержание FGF-1 в роговице кролика

[00212] Срезы роговицы кролика, подвергнутые воздействию NM, инкубируют с антителами к FGF-1. В открытых роговицах наблюдается снижение содержания FGF-1, как показано на фиг. 9. Срезы роговицы подвергаются воздействию NM, через 1 день (верхняя панель на фиг. 9) и 3 дня (нижняя панель на фиг. 9) после воздействия показано усиление подавления FGF-1 по сравнению с интактными срезами роговицы.

[00213] Воздействия NM вызывают активацию ADAM17 в роговице кролика

[00214] В роговицах, подвергшихся воздействию NM, интенсивный флуоресцентный сигнал наблюдают в зоне базальной мембраны, где фермент ADAM17 должен был быть расположен для разрушения коллагена XVII. ADAM17 заметно не обнаруживается в не подвергнутых воздействию роговицах.

[00215] Обработка N-Met-TTHX1114 снижает вызванную NM активацию ADAM17 в роговице кролика

[00216] После обработки роговицы ТТН1114 флуоресцентный сигнал ADAM17 ослабляется в периферической и центральной роговице. Ослабление или отсутствие флуоресцентного сигнала ADAM17 соответствует лучшему гистологическому проявлению эпителиально-стромального соединения роговицы.

[00217] Обработка N-Met-TTHX1114 улучшает вызванное NM подавление пролиферации эпителия роговицы.

Стимуляция периферического эпителиального слоя роговицы оценивают посредством включения EdU в эпителиальные клетки роговицы (СЕС). Первичные культуры кроличьих СЕС устанавливают с использованием стандартных процедур, например, процедуры, описанной Kay с соавт. (Kay et al. Investigative ophthalmology & visual science. 1993; 34(3):663-72; Lee et al., Investigative ophthalmology & visual science. 2009; 50(5):2067-76). Клетки подвергают воздействию NM в течение двух часов. Анализы пролиферации проводят в 12-луночных планшетах с использованием, например, набора для анализа Click-IT (Life Technologies). Включение EdU в эпителиальные клетки роговицы является показателем пролиферации эпителия. Процент эпителиальных клеток роговицы, включающих EdU, ниже при обработке N-Met-TTHX1114 после воздействия NM, по сравнению с необработанными контролями.

Пример 4: Вызванное сернистым ипритом повреждение эндотелиальных клеток роговицы

[00218] Настоящее исследование направлено на воздействие модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114), на лечение повреждения роговицы, вызванного сернистым ипритом (SM). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00219] Экспериментальные способы

[00220] Кроликов подвергают воздействию сернистого иприта в группах от 8 до 16 животных в течение 4-месячного периода. За один день до воздействия область 4 дюйма² на спине каждого кролика выстригают, и перед лопаткой помещают пластырь фентанила (25 мкг/ч). В день воздействия кроликов анестезируют с помощью внутримышечного введения 15 мг/кг кетамина и 7 мг/кг ксилазина и регистрируют физиологические параметры. Роговицы анестезированных кроликов подвергаются воздействию пара SM в течение 2,5 мин. Через две минуты после воздействия подвергнутые воздействию глаза осторожно промывают 10 мл стерильного физиологического раствора, чтобы смыть остаточное средство.

[00221] Первую группу кроликов умерщвляют через 24 часа после воздействия. Через пять минут после умерщвления 20 мл раствора 0,1 мг/мл AlexaFluor 488 (Life Technologies, Carlsbad, CA), растворенного в PBS (pH 7,4), вводят в переднюю камеру через иглу 30-го калибра с использованием стеклянного шприца Hamilton объемом 100 мкл (компания Hamilton, Рено, NV). Через 10 минут роговицы иссекают и трижды промывают в течение 1 минуты в 10 мл PBS. Роговицы переносят в круглодонные пробирки объемом 14 мл (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) с 100 мкл PBS и инкубируют на льду в темноте при осторожном перемешивании. Через 30 минут супернатант разбавляют 1:5 в PBS и анализируют на флуоресценцию на флуорофотометре Synergy MX (Biotek, Winooski, VT), используя длину волны возбуждения 488±10 нм, длину волны излучения 524±10 нм и усиление 50. Репрезентативные роговицы получают с помощью синего диода и набора фильтров FITC в Versadoc MP 4000 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).

[00222] Оставшихся кроликов дополнительно разделяют на исследуемую группу, которой вводят N-Met-TTHX1114 в различных дозах, и получающую плацебо контрольную группу, которой вводили контрольный наполнитель. Процедуры проводят в течение приблизительно двух недель. Кролики возвращаются в клетки и обеспечиваются пищей и водой ad libitum. Пластыри фентанила заменяют через каждые 72 часа, чтобы устранить дискомфорт через 6 дней после воздействия, и затем наносят обильно по мере необходимости. Ежедневно за животными наблюдают для обнаружения признаков боли и дистресса. Повреждения роговицы клинически оцениваются на регулярной основе с использованием пахиметрии, анализов исключения флуоресцеина и оценки щелевой лампой.

[00223] Результаты

[00224] Воздействие сернистого иприта (SM) вызывает повреждение эндотелия роговицы

[00225] Роговицы, визуализированные при 370 нм с помощью сканирующей электронной микроскопии (SEM) через 24 часа после воздействия SM, обнаруживают центростремительное повреждение с обширной потерей эндотелиальных клеток роговицы (СЕС) в центральной роговице и повышенным удерживанием по краям воздействия. Чтобы получить более полный обзор вызванных SM изменений в эндотелии роговицы, тонкую структуру задней части роговицы оценивают с помощью электронной микроскопии. Сканирующая электронная микрофотография не подвергнутых воздействию роговиц обнаруживает сплошной слой многоугольных клеток правильной формы и размера с сомкнутыми краями, апикальными микроворсинками и редкими ресничками. В течение 24 часов после воздействия все эндотелии роговицы обнаруживают признаки острого поражения с обширной центральной потерей СЕС и более диффузным образованием волдырей в ишемической полутени воздействия. СЕС в пределах области воздействия обнаруживают две общие морфологии, а именно: увеличенные (сильно ослабленные) полиморфные клетки и округлые или веретенообразные клетки. Большинство СЕС обладают атипичной морфологией апикальных мембран и не имеют межклеточного взаимодействия. В областях везикуляции СЕС оголенная десцеметова оболочка (DM) покрыта сложной древовидной структурой ламеллоподий и филоподий СЕС. ТЕМ-визуализация поперечных срезов роговицы подтвердила характер центростремительного повреждения, при этом морфология СЕС постепенно нормализуется к краю повреждения. Обнаженная DM возле центрального очага инфильтрируется обширными клеточными процессами. В более дистальных областях часто встречаются перекрывающиеся клеточные процессы с потерей соединительных комплексов, что наводит на мысль о подвижной популяции. Округлая популяция СЕС, наблюдаемая с помощью SEM, обнаруживается исключительно на поверхностях полиморфного эндотелия и характеризуется признаками некроза или апоптоза.

[00226] Лечение N-Met-TTHX1114 устраняет повреждения эндотелия роговицы

[00227] Через восемь недель после воздействия сравнивают морфологию и структуру эндотелиальных клеток между исследуемой группой (также называемой как «исправленные глаза») и получавшей плацебо контрольной группой (у которой впоследствии развивается MGK). Группа «исправленные глаза» отличается отсутствием характерных осложнений MGK во время клинических исследований, таких как эрозия роговицы, неоваскуляризация или помутнение роговицы, и толщина роговицы, которые статистически неотличимы от получавших плацебо контролей к 6 неделям. Обнаружено, что микроснимки «исправленных глаз» при лицевом сканировании поразительно похожи на получавшие плацебо контроли с хорошо организованным монослоем многоугольных клеток. Средний размер СЕС увеличен в «исправленных глазах» по сравнению с контрольной роговицей; в противном случае «исправленные» роговицы не проявляют значительной изменчивости по всей задней поверхности. В противоположность этому, кролики контрольной группы, подвергаемые лечению плацебо, с эндотелией MGK, обнаруживают обширную вариабельность формы и размера клеток у животных, что указывает на динамический процесс повреждения. Фокусная изменчивость в эндотелиальной морфологии, как правило, наблюдается в отдельных роговицах, с некоторыми областями, показывающими увеличенные, но мозаичные СЕС, и другими областями, демонстрирующими значительную дезорганизацию, с переменными степенями апикального блеббинга, областями, показывающими оголенную DM, и отсутствующими четко очерченными клеточными границами. Эти явления не наблюдаются в «исправленном» эндотелии, обработанном N-Met-TTHX1114. Изображения с трансмиссионного электронного микроскопа обработанных N-Met-TTHX1114 роговиц очень похожи на интактный эндотелий. Напротив, контрольный эндотелий, обработанный плацебо, с патологией MGK обнаруживает диффузное утолщение задней DM, что согласуется с отеком и/или отложением ретрокорнеальной фиброзной мембраны. Роговицы MGK также демонстрируют обширные маркеры стресса или повреждения СЕС, включая в себя цитоплазматическое разрежение, чрезмерную вакуолизацию и опухшие эндоплазматические сети. Существует высокая частота перекрывающихся клеточных процессов, аналогичных 24-часовым изображениям, что наводит на мысль о продолжающейся попытке заселения недавно обнаженной DM.

Пример 5: Модифицированный FGF-1 (N-Met-TTHX1114) эффективен при заживлении ран

[00228] Настоящее исследование направлено на влияние модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114), на скорость заживления ран.

[00229] Экспериментальные способы

[00230] Самок мышей с сахарным диабетом C57BL/Ks-db/db в возрасте 11 недель получают из Jackson Laboratories и помещают в стерильные боксы-микроизоляторы со стерильной водой и подстилкой и содержат в полубарьерном карантинном помещении.

[00231] Культура органов кожи

[00232] Образцы биопсии кожи от мышей с нарушенным заживлением культивируют в подходящей культуральной среде. Вкратце, образцы ткани инкубируют при температуре 37°С в среде DMEM (Gibco) с добавлением 0,25% инактивированной нагреванием бычьей сыворотки (Gibco). Образцы кожи обрабатывают ежедневно в течение 2 дней или 3 дней с помощью 0, 1, 10 и 100 мкг/мл N-Met-TTHX1114. Затем образцы ткани метят в течение 24 часов 4 мкКи [метил-³H]тимидина (из исходного раствора, содержащего 20 Ки/ммоль; New England Biolabs). После мечения тимидином образцы кожи промывают, растворяют и анализируют на радиоактивность.

[00233] Модель закрытия раны

[00234] Мышей анестезируют с помощью внутрибрюшинных инъекций 110 мг кетамина и 9 мг ксилазина на кг массы тела. Среднюю часть спины и грудную кожу бреют и дезинфицируют с помощью 2% хлоргексидинового хирургического скраба, а затем 70% этанола.

[00235] Шаблон диаметром 1,6 см используют для маркировки окружности 2,0 см² в средней дорсальной области, и одну тупую рану на всю толщину кожи создают тупым иссечением стерильными изогнутыми ножницами для радужной оболочки. Области раны, как правило, увеличиваются приблизительно до 2,3 см² вскоре после травмы, предположительно из-за сокращения дермы по периметру раны. Все хирургические и последующие процедуры анализа заживления выполняют в ламинарном потоке с использованием полной асептической техники. Факторы роста, стерилизованные фильтрацией, в различных дозах и соответствующие контрольные растворы наполнителя применяют местно, в дни 0, 3 и 7 после травмы. Раны покрывают полупрозрачной повязкой Bioclusive для защиты, поддержания влажной среды и предотвращения образования корки. Образцы раневой жидкости отбирают на 10-й день после травмы и культивируют на наличие аэробных и анаэробных микроорганизмов. Животные из культур, которые имеют более 50 колоний на рану, исключаются из анализа исследования. Предотвращение даже легкой или субклинической инфекции приводит к постоянному максимальному ухудшению заживления, обеспечивая тем самым большое окно заживления ран для оценки эффектов лечения.

[00236] Анализ заживления

[00237] Появления ран регистрируют фотографически, а их периметры прослеживают на стерильных стеклянных предметных стеклах, наносимых непосредственно на открытые поверхности раны после предварительного смачивания каплей стерильного физиологического солевого раствора.

[00238] Измерения производят сразу после ранения и два раза в неделю после этого, пока раны не будут полностью закрыты. Области раны и периметры определяются по трассировке предметного стекла с использованием подходящего компьютерного анализа изображения (например, с использованием Presage С V-6; Advanced Imaging Concepts, Princeton, NJ). Статистические значения различий между группами оценивают с использованием непарного двустороннего критерия Стьюдента. Заживление, выраженное в процентах уменьшения начальной площади, преобразуется в линейное врастание от краев раны путем деления разницы в раневых областях на средние периметры раны через последовательные интервалы времени. Общее врастание за определенное время представляет собой сумму расстояний врастания до этого времени. Это преобразование линеаризует замыкание как функцию времени, тем самым позволяя выражать заживление в виде кинетических скоростей, которые являются постоянными во времени. Раны считаются полностью зажившими, когда влажная грануляционная ткань больше не видна, что указывает на функциональный барьер для водной проницаемости эпидермиса.

[00239] Результаты

[00240] Образцы биопсии кожи от мышей с нарушенным заживлением включают [метил-³Н]тимидин в ответ на суточные дозы N-Met-TTHX1114. Клетки в коже реагируют митогенно на N-Met-TTHX1114 зависимым от дозы образом. Таким образом, N-Met-TTHX1114 вызывает синтез ДНК в органных культурах кожи.

[00241] Кроме того, кожные эксцизионные раны на всю толщину толщины, диаметром приблизительно 1,6 см, закрываются существенно быстрее в ответ на дозы N-Met-TTHX1114, применяемые в течение первой недели после начала раны, по сравнению с обработкой контрольным наполнителем. Таким образом, N-Met-TTHX1114 ускоряет закрытие раны.

[00242] Кроме того, общий внешний вид и средний размер ран, обработанных наполнителем и N-Met-TTHX1114, значительно различаются. Раны, обработанные N-Met-TTHX1114, обнаруживают признаки неоваскуляризации, такие как видимое покраснение и утечка серозных жидкостей, уже через 3 дня после обработки. В отличие от этого, раны, получающие контрольный наполнитель, содержат мало или не содержат видимых серозных жидкостей и существенно меньше явных признаков неоангиогенеза.

[00243] Пример 6: Лечение герпетической кератопатии с использованием модифицированных полипептидов FGF-1 (N-Met-TTHX1114 или ТТНХ-1114)

[00244] Настоящее исследование направлено на использование модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (TTHX1001), для лечения герпетической кератопатии.

[00245] Способы

[00246] Для этого исследования выбирают группу пациентов с герпетической кератопатией. Пациентов делят на три подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) N-met TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам в третьей подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит N-Met-ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 2) или ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), но в остальном идентичен тому, который вводят в первой и второй подгруппе. Для всех трех подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой, второй и третьей подгруппы два раза в день на срок до 30 дней.

[00247] Результаты

[00248] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2) и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), приводят к заживлению герпетической язвы роговицы в течение приблизительно 14 дней у большинства пациентов, относящихся к первой и второй подгруппам, наряду с уменьшением продолжительности боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой и второй подгруппах, получавших соответственно офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов в третьей подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00249] Пример 7. Лечение хронической герпетической кератопатии с использованием модифицированных полипептидов FGF-1 (N-Met-TTHX1114 или ТТНХ-1001)

[00250] Настоящее исследование направлено на применение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (ТТНХ1001), для лечения хронической герпетической кератопатии.

[00251] Способы

[00252] Для этого исследования выбирают группу пациентов с хронической герпетической кератопатией. Пациентов делят на три подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) N-met TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам в третьей подгруппе вводят в глаз офтальмологический состав-плацебо, который не содержит N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2) или ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), но в остальном идентичен тому, который вводят в первой и второй подгруппе. Для всех трех подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой, второй и третьей подгруппы два раза в день на срок до 30 дней.

[00253] Результаты

[00254] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), приводят к заживлению язвы роговицы у большинства пациентов, принадлежащих к первой и второй подгруппе, наряду с уменьшением боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой и второй подгруппах, получавших соответственно офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов в третьей подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00255] Пример 8: Лечение нейротрофической кератопатии с использованием модифицированных полипептидов FGF-1 (N-Met-TTHX1114 или ТТНХ-1001)

[00256] Настоящее исследование направлено на применение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (ТТНХ1001), для лечения нейротрофической кератопатии, вторичной по отношению к герпетической инфекции.

[00257] Способы

[00258] Для этого исследования выбирают группу пациентов с нейротрофической кератопатией. Пациентов делят на три подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) N-met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам в третьей подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит N-Met-ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 2) или ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), но в остальном идентичен тому, который вводят в первой и второй подгруппе. Для всех трех подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой, второй и третьей подгруппы два раза в день на срок до 30 дней.

[00259] Результаты

[00260] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), приводят к заживлению язвы роговицы у большинства пациентов, принадлежащих к первой и второй подгруппе, наряду с уменьшением боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой и второй подгруппах, получавших соответственно офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов в третьей подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00261] Пример 9: Лечение рецидивирующей герпетической кератопатии и подавление реактивации латентного вируса с использованием модифицированных полипептидов FGF-1 (N-met-TTHX1114 или ТТНХ1001)

[00262] Настоящее исследование направлено на применение модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 2 (N-Met-TTHX1114) или SEQ ID NO: 205 (ТТНХ1001), для лечения нейротрофической кератопатии, вторичной по отношению к герпетической инфекции.

[00263] Способы

[00264] Для этого исследования выбирают группу пациентов с рецидивирующей кератопатией. Пациенты испытали по меньшей мере один эпизод герпетической кератопатии. Для лечения рецидивирующей герпетической кератопатии и подавления реактивации латентного вируса пациентов делят на три подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие от приблизительно 50 пг/мл до приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащие от приблизительно 50 пг/мл до приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам в третьей подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2) или ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), но в остальном идентичен тому, который вводят в первой и второй подгруппе. Для всех трех подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой, второй и третьей подгруппы, два раза в день на срок до 30 дней.

[00265] Результаты

Наблюдается, что офтальмологические составы, содержащие N-Met-TTHX1114 (SEQ ID NO: 2), и офтальмологические составы, содержащие ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205), увеличивают интервал между заболеваниями и уменьшают тяжесть реактивированных вирусных поражений у пациентов, получавших модифицированный FGF-1, с более длительным периодом без рецидивов заболевания, чем у пациентов в третьей подгруппе, которые получают плацебо.

[00266] Пример 10. Влияние модифицированных полипептидов FGF-1 на пролиферацию эндотелиальных клеток роговицы человека (НСЕС).

[00267] Настоящее исследование направлено на модифицированные полипептиды FGF-1, содержащие последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114) или SEQ ID NO: 205 (ТТНХ1001). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00268] Экспериментальные способы и результаты

[00269] Первичные культуры (пассаж 1) эндотелиальных клеток роговицы человека от здорового донора высевают на 24-луночные планшеты в присутствии фетальной бычьей сыворотки (FBS, 8%) и спустя 24 часа обрабатывают различными концентрациями ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), ТТНХ1001 (SEQ ID NO: 205) или wt-FGF-1 (SEQ ID NO: 1) в средах с низким (0,8%) FBS. Группа с 8% FBS служит положительным контролем. Результаты показали, что ТТНХ1114 был более эффективным, чем ТТНХ1001 или wt-FGF-1, в стимуляции пролиферации эпителиальных клеток роговицы человека и был чувствительным к дозе. ЕС₅₀ ТТНХ1114 была приблизительно в 100 раз ниже, чем wt-FGF-1 или другого исследованного модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1001; SEQ ID NO: 205), как показано на фиг. 2.

Пример 11: Вызванное азотистым ипритом повреждение роговицы

[00270] Настоящее исследование направлено на влияние модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114), на лечение повреждения роговицы, вызванного азотистым ипритом (NM). Модифицированные полипептиды FGF-1 получали с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00271] Экспериментальные способы

[00272] Для оценки заживления после воздействия NM использовали модельную систему органной культуры роговицы кролика. Получали глаза кролика (8-12 недель), и роговицы с 2-мм склеральными ободками отделяли от глаз, помещали эпителиальной стороной вниз в пластинку с лунками, и вогнутости заполняли расплавленным агаром 55°С (0,75%) в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM). Неограничивающий пример осаждения показан на фиг. 3. Как только раствор загустевал, роговицы переворачивали так, чтобы эпителиальный слой был доступен. Культуры помещали в чашки для культивирования тканей из пирекса диаметром 60 мм. Готовили DMEM с высоким содержанием глюкозы с содержанием 13MEM-NEAA (минимально необходимая среда, незаменимые аминокислоты), 13 витаминных растворов RMPI 1640, 13 антибиотиков/антигрибковых средств, аскорбиновой кислоты (0,45 мМ) и ципрофлоксацина (10 мкг/мл). DMEM с высоким содержанием глюкозы добавляли к ободкам склеры, оставляя роговицы открытыми для воздуха. Чашки помещали в увлажненный инкубатор при температуре 37°C с 5% CO₂. Эпителий каждой культуры увлажняли средой 500 мкл, добавляемой по каплям на центральную роговицу каждые 7-9 часов. Нарывное средство NM добавляли по каплям к центральной роговице. Образцы роговицы (очищенные от их агаровой подложки) либо помещали эпителиальной стороной вниз в формочки cryomold, содержащие соединение с оптимальной температурой резания (ОСТ, Tissue-Tek; Sakura, Torrance, CA, USA), и быстро замораживали для гистологии и иммунофлуоресценции, либо непосредственно замораживали для дальнейших анализов белка, включая в себя вестерн-блот и анализы активности ADAM 17 (набор для анализа активности InnoZyme TACE; Calbiochem, Billerica, MA, USA).

[00273] NM использовали для индукции повреждения роговицы. NM, в порошкообразной твердой форме (каталожный №122564; Sigma-Aldrich) сначала растворяли в PBS до 100 мМ, а затем разбавляли средой до 10 мМ. Десять микролитров применяли для доставки 100 нмоль нарывного средства в роговицу. После нанесения NM на центральные роговицы культуры возвращали в инкубатор при температуре 37°С на 2 часа без удаления нарывного средства. После этой инкубации загрязненную среду удаляли и свежую среду добавляли в центральную роговицу до тех пор, пока уровень в чашке не достигал верха склерального края. Контрольные не подвергнутые воздействию и подвергнутые воздействию роговицы затем возвращали к температуре 37°С для 22-часовой инкубации, удаляя только в течение трех коротких периодов, чтобы добавить 20 мкл среды к подвергнутым воздействию образцам, не получающим терапию ТТНХ1114, или добавить 20 мкл ТТНХ1114 в качестве терапии к центральной роговице. Первое приложение ТТНХ1114 оставалось включенным на 8 часов, второе на 9 часов, а третье на 5 часов. Таким образом, продолжительность 2-часового воздействия и последующей обработки составляла в общей сложности 24 часа.

[00274] Для экспериментов, анализирующих, как быстро воздействие NM вызывало ADAM17, культуры устанавливали, как описано. В течение кратчайшего времени воздействия раствор NM наносили на роговицу, затем немедленно промывали и образец помещали в экстракционный буфер для выделения белка. Это повторяли с двумя другими роговицами, чтобы собрать три 0-минутных воздействия. Для 5- и 10-минутного воздействия NM добавляли в наборы из трех роговиц, соответственно, гарантируя, что никто не подвергался недостаточному или излишнему воздействию NM. Все роговицы извлекали и обрабатывали для анализов активности ADAM17.

[00275] Набор InnoZyme ADAM17/TACE Activity Kit (Calbiochem) использовали для количественной оценки активности фермента из экстрактов роговицы в соответствии с предоставленным поставщиком протоколом. Вкратце, 400 мкл промывочного буфера (из набора InnoZyme) вносили в 96-луночные планшеты, предварительно покрытые антителом к человеческому ADAM17, после чего проводили две промывки. Тройные образцы экстрактов роговицы и стандарты набора InnoZyme (100 мкл) каждый добавляли в три набора лунок. Планшеты герметично закрывали и выдерживали 1 час при осторожном встряхивании при комнатной температуре. Затем планшеты промывали 400 мкл промывочного буфера пять раз. Субстрат ADAM17, поставляемый в наборе (100 мкл), добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 5 часов при температуре 37°С. Флуоресценцию измеряли при длине волны возбуждения 324 нм и длине волны излучения 405 нм и указывали в виде относительных единиц флуоресценции на графиках. Для иммунодетекции ADAM17 погруженные в ОСТ срезы на предметных стеклах сначала фиксировали в метаноле при температуре 20°С в течение 10 минут. Неспецифическое связывание блокировали в течение 1 часа с 5% нормальной козьей сывороткой (NGS) в PBS с 0,05% Tween-20 (PBST). Моноклональное антитело мыши к эктодомену (аминокислоты 18-671) человеческого ADAM 17 (5 мкг/мл в 1,5% NGS, MAB9304; R&D Systems, Minneapolis, MN, США), которое обнаруживало только активный фермент иммунофлуоресценции, наносили на предметные стекла для 1-часовой инкубации при комнатной температуре, затем предметные стекла трижды промывали в течение 10 минут в PBST. Для стекол с отрицательным контролем на срезы наносили тот же объем PBST, что и с первичным антителом, используемым на исследуемых срезах, после чего следовал тот же промывочный объем. Козье антитело к мышиному IgG, конъюгированное с AlexaFluor488 (1: 1000; Invitrogen, Carlsbad, CA, США), в 1,5% NGS применяли в течение 1 часа при инкубации при комнатной температуре. После промывки PBST три раза в течение 5 минут, 0,4 мг/мл DAPI наносили на срезы в течение 5 минут для противодействия окрашиванию ядер. Prolong Gold использовали в накрывании покровных стекол.

[00276] Результаты

[00277] Гистопатология вызванного NM повреждения в органных культурах роговицы

[00278] Повреждение, наносимое NM, включает в себя следующее: (а) гиперплазия эпителиального слоя, которая проявляется в увеличении количества и глубины эпителиальных клеток, проталкивающихся вниз в строму. Это называется опускающейся гиперплазией. Не подвергнутая воздействию (интактная) роговица (фиг. 4, нижняя панель) демонстрирует некоторую опускающуюся гиперплазию, но она не столь обширна, как роговица, подвергнутая воздействию NM (фиг. 4, верхняя панель); (b) ядра базальных клеток, поднимающиеся к вершине базальных эпителиальных клеток; и (с) эпителиально-стромальное разделение. Гистопатологические эффекты видны уже через четыре дня после воздействия.

[00279] Иллюстративная гистопатологическая классификация для оценки эффектов вызванного NM повреждения роговицы показана на фиг. 6, а вызванная NM гистопатологическая классификация повреждений роговицы и стромы также показана на графике фиг. 7.

[00280] Обработка подвергнутых воздействию NM клеток роговицы ТТНХ1114 защищает от повреждения

[00281] Обработка подвергшейся воздействию NM роговицы ТТНХ1114 защищала роговицу от гистопатологического повреждения, вызванного NM. Как видно на фиг. 5, на 4-й день после воздействия NM на роговице, обработанной ТТНХ1114, опускающаяся гиперплазия не обнаруживалась (сравните верхнюю и нижнюю панели на фиг. 5). Кроме того, эпителиально-стромальное разделение, как видно на верхней панели фиг. 4, не было видно на роговицах, обработанных ТТНХ1114 (день 6, нижняя панель, фиг. 5).

[00282] Также было обнаружено, что гистопатологическая классификация вызванного NM повреждения снижена в роговицах, обработанных ТТНХ1114. Результаты показаны на фиг. 8.

[00283] ТТНХ1114 защищает вызванное воздействием NM снижение содержания FGF-1 в роговице кролика

[00284] Срезы роговицы кроликов, подвергнутые воздействию NM, инкубировали с антителами к FGF-1. В подвергнутых воздействию роговицах наблюдалось снижение содержания FGF-1, как показано на фиг. 9. Подвергнутые воздействию NM срезы роговицы, 1 день (верхняя панель на фиг. 9) и 3 дня (нижняя панель на фиг. 9) после воздействия, продемонстрировали усиление подавления FGF-1 по сравнению с интактными срезами роговицы.

[00285] Воздействие NM вызывает активацию ADAM17 в роговице кролика

[00286] В подвергнутых воздействию NM роговицах интенсивный флуоресцентный сигнал наблюдался в зоне базальной мембраны, где фермент ADAM 17 должен был быть расположен для разрушения коллагена XVII (верхняя панель на фиг. 10В, показывающая результаты иммунофлуоресценции ADAM17 в дни 1, 4, и 6 после воздействия). ADAM17 не был заметно обнаружен в не подвергнутых воздействию роговицах (фиг. 10А).

[00287] Обработка ТТНХ1114 уменьшает вызванную воздействием NM активацию ADAM17 в роговице кролика

[00288] После обработки роговиц ТТН1114 флуоресцентный сигнал ADAM17 ослаблялся в периферической и центральной роговице (нижняя панель, фиг. 10В). Ослабление или отсутствие флуоресцентного сигнала ADAM17 соответствовало лучшему гистологическому проявлению эпителиально-стромального соединения роговицы.

[00289] Обработка ТТНХ1114 улучшает вызванное воздействием NM подавление пролиферации эпителия роговицы

[00290] Стимуляция периферического эпителиального слоя роговицы оценивали путем включения EdU в эпителиальные клетки роговицы (СЕС). Первичные культуры кроличьих СЕС создавали с использованием стандартных процедур, например, процедуры, описанной Kay с соавт. (Kay et al. Investigative ophthalmology & visual science. 1993;34(3):663-72; Lee et al., Investigative ophthalmology & visual science. 2009;50(5):2067-76). Клетки подвергают воздействию NM в течение двух часов. Анализы пролиферации проводят в 12-луночных планшетах с использованием, например, набора для анализа Click-IT (Life Technologies). Включение EdU в эпителиальные клетки роговицы оценивали как показатель пролиферации эпителия. Процент эпителиальных клеток роговицы, включающих EdU, ниже при с ТТНХ1114 после воздействия NM, как видно на фиг. 11.

Пример 12: Вызванное сернистым ипритом повреждение эндотелиальных клеток роговицы

[00291] Исследование направлено на влияние модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114), на лечение повреждения роговицы, вызванного сернистым ипритом (SM). Модифицированные полипептиды FGF-1 получают с использованием способов, описанных выше в разделе «Рекомбинантные технологии».

[00292] Экспериментальные способы

[00293] Кроликов подвергают воздействию в группах от 8 до 16 животных в течение 4-месячного периода. За один день до воздействия область 4 дюйма² на спине каждого кролика выстригают, и перед лопаткой помещают пластырь фентанила (25 мкг/ч). В день воздействия кроликов анестезируют с помощью внутримышечного введения 15 мг/кг кетамина и 7 мг/кг ксилазина и регистрируют физиологические параметры. Роговицы анестезированных кроликов подвергаются воздействию пара SM в течение 2,5 мин с использованием системы доставки паровой чаши. Через две минуты после воздействия подвергнутые воздействию глаза осторожно промывают 10 мл стерильного физиологического раствора, чтобы смыть остаточное средство.

[00294] Первую группу кроликов умерщвляют через 24 часа после воздействия. Через пять минут после умерщвления 20 мл раствора 0,1 мг/мл AlexaFluor 488 (Life Technologies, Carlsbad, CA), растворенного в PBS (pH 7,4), вводят в переднюю камеру через иглу 30-го калибра с использованием стеклянного шприца Hamilton объемом 100 мкл (Hamilton Company, Reno, NV). Через 10 минут роговицы иссекают и трижды промывают в течение 1 минуты в 10 мл PBS. Роговицы переносят в круглодонные пробирки объемом 14 мл (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) с 100 мкл PBS и инкубируют на льду в темноте при осторожном перемешивании. Через 30 минут супернатант разбавляют 1:5 в PBS и анализируют на флуоресценцию на флуорофотометре Synergy MX (Biotek, Winooski, VT), используя длину волны возбуждения 488±10 нм, длину волны излучения 524±10 нм и усиление 50. Репрезентативные роговицы получают с помощью синего диода и набора фильтров FITC в Versadoc MP 4000 (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA).

[00295] Оставшихся кроликов дополнительно разделяют на исследуемую группу, которой вводят ТТНХ1114 в различных дозах, и получающую плацебо контрольную группу, которой вводят контрольный наполнитель. Процедуры проводят в течение приблизительно двух недель. Кролики возвращаются в клетки и обеспечиваются пищей и водой ad libitum. Пластыри фентанила заменяют через каждые 72 часа, чтобы устранить дискомфорт через 6 дней после воздействия, и затем наносят обильно по мере необходимости. Ежедневно за животными наблюдают для обнаружения признаков боли и дистресса. Повреждения роговицы клинически оцениваются на регулярной основе с использованием пахиметрии, анализов исключения флуоресцеина и оценки щелевой лампой.

[00296] Результаты

[00297] Воздействие сернистого иприта (SM) вызывает повреждение эндотелия роговицы

[00298] Роговицы, визуализированные при 370 нм с помощью SEM через 24 часа после воздействия SM, обнаруживают центростремительное повреждение с обширной потерей эндотелиальных клеток роговицы (СЕС) в центральной роговице и повышенным удерживанием по краям воздействия. Чтобы получить более полный обзор вызванных SM изменений в эндотелии роговицы, тонкую структуру задней части роговицы оценивают с помощью электронной микроскопии. Сканирующая электронная микрофотография не подвергнутых воздействию роговиц обнаруживает сплошной слой многоугольных клеток правильной формы и размера с сомкнутыми краями, апикальными микроворсинками и редкими ресничками. В течение 24 часов после воздействия все эндотелии роговицы обнаруживают признаки острого поражения с обширной центральной потерей СЕС и более диффузным образованием волдырей в ишемической полутени воздействия. СЕС в пределах области воздействия обнаруживают две общие морфологии, а именно: увеличенные (сильно ослабленные) полиморфные клетки и округлые или веретенообразные клетки. Большинство СЕС обладают атипичной морфологией апикальных мембран и не имеют межклеточного взаимодействия. В областях везикуляции СЕС оголенная десцеметова оболочка (DM) покрыта сложной древовидной структурой ламеллоподий и филоподий СЕС. ТЕМ-визуализация поперечных срезов роговицы подтвердила характер центростремительного повреждения, при этом морфология СЕС постепенно нормализуется к краю повреждения. Обнаженная DM возле центрального очага инфильтрируется обширными клеточными процессами. В более дистальных областях часто встречаются перекрывающиеся клеточные процессы с потерей соединительных комплексов, что наводит на мысль о подвижной популяции. Округлая популяция СЕС, наблюдаемая с помощью SEM, обнаруживается исключительно на поверхностях полиморфного эндотелия и характеризуется признаками некроза или апоптоза.

[00299] Обработка ТТНХ1114 устраняет повреждения эндотелия роговицы.

Через восемь недель после воздействия сравнивают морфологию и структуру эндотелиальных клеток между исследуемой группой (также называемой как «исправленные») и получавшей плацебо контрольной группой (у которой впоследствии развивается MGK). Группа «исправленные глаза» отличается отсутствием характерных осложнений MGK во время клинических исследований, таких как эрозия роговицы, неоваскуляризация или помутнение роговицы, и толщина роговицы, которые статистически неотличимы от получавших плацебо контролей к 6 неделям. Обнаружено, что микроснимки «исправленных глаз» при лицевом сканировании поразительно похожи на получавшие плацебо контроли с хорошо организованным монослоем многоугольных клеток. Средний размер СЕС увеличен в «исправленных глазах» по сравнению с контрольной роговицей; в противном случае «исправленные» роговицы не проявляют значительной изменчивости по всей задней поверхности. В противоположность этому, кролики контрольной группы с эндотелией MGK, подвергаемые лечению плацебо, обнаруживают обширную вариабельность формы и размера клеток у животных, что указывает на динамический процесс повреждения. Фокусная изменчивость в эндотелиальной морфологии, как правило, наблюдается в отдельных роговицах, с некоторыми областями, показывающими увеличенные, но мозаичные СЕС, и другими областями, демонстрирующими значительную дезорганизацию, с переменными степенями апикального блеббинга, областями, показывающими оголенную DM, и отсутствующими четко очерченными клеточными границами. Эти явления не наблюдаются в «исправленном» эндотелии, обработанном ТТНХ1114. Изображения с трансмиссионного электронного микроскопа обработанных ТТНХ1114 роговиц очень похожи на интактный эндотелий. Напротив, эндотелий, обработанный контролем плацебо, с патологией MGK обнаруживает диффузное утолщение задней DM, что согласуется с отеком и/или отложением ретрокорнеальной фиброзной мембраны. Роговицы MGK также демонстрируют обширные маркеры стресса или повреждения СЕС, включая в себя цитоплазматическое разрежение, чрезмерную вакуолизацию и опухшие эндоплазматические сети. Существует высокая частота перекрывающихся клеточных процессов, аналогичных 24-часовым изображениям, что наводит на мысль о продолжающейся попытке заселения недавно обнаженной DM.

[00300] Пример 13: Лечение герпетической кератопатии с использованием модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1114)

[00301] Настоящее исследование направлено на применение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114), для лечения герпетической кератопатии.

[00302] Способы

[00303] Для этого исследования выбирали группу пациентов с герпетической кератопатией. Пациентов делят на две подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащий приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), составленный в фосфатно-солевом буфере (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), но в остальном идентичен тому, что вводят в первой подгруппе. Для обеих подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой и второй подгруппы, два раза в день на срок до 30 дней.

[00304] Результаты

[00305] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), приводит к заживлению язвы роговицы в течение приблизительно 14 дней у большинства пациентов, принадлежащих к первой подгруппе, наряду с уменьшением продолжительности боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой подгруппе, получавших офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов во второй подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00306] Пример 14: Лечение хронической герпетической кератопатии с использованием модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1114)

[00307] Настоящее исследование направлено на применение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114)

[00308] Способы

[00309] Для этого исследования выбирали группу пациентов с хронической герпетической кератопатией. Пациентов делят на две подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащий приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), составленный в фосфатно-солевом буфере (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), но в остальном идентичен тому, что вводят в первой подгруппе. Для обеих подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой и второй подгруппы, два раза в день на срок до 30 дней.

[00310] Результаты

[00311] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), приводит к заживлению язвы роговицы у большинства пациентов, принадлежащих к первой подгруппе, наряду с уменьшением продолжительности боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой подгруппе, получавших офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов во второй подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00312] Пример 15: Лечение нейротрофической кератопатии с использованием модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1114)

[00313] Настоящее исследование направлено на применение модифицированного полипептида FGF-1, содержащего последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114), для лечения нейротрофической кератопатии, вторичной по отношению к герпетической инфекции.

[00314] Способы

[00315] Для этого исследования выбирали группу пациентов с нейротрофической кератопатией. Пациентов делят на две подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащий приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), составленный в фосфатно-солевом буфере (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав-плацебо, который не содержит ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), но в остальном идентичен тому, что вводят в первой подгруппе. Для обеих подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой и второй подгруппы, два раза в день на срок до 30 дней.

[00316] Результаты

[00317] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), приводит к заживлению язвы роговицы у большинства пациентов, принадлежащих к первой подгруппе, наряду с уменьшением продолжительности боли и воспаления. Кроме того, глаза пациентов в первой подгруппе, получавших офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), характеризуются меньшим помутнением и рубцеванием роговицы, чем у пациентов во второй подгруппе, которых лечили с помощью плацебо.

[00318] Пример 16: Лечение рецидивирующей герпетической кератопатии и подавление реактивации латентного вируса с использованием модифицированного полипептида FGF-1 (ТТНХ1114)

[00319] Настоящее исследование направлено на применение модифицированных полипептидов FGF-1, содержащих последовательность SEQ ID NO: 206 (ТТНХ1114), для лечения нейротрофической кератопатии, вторичной по отношению к герпетической инфекции.

[00320] Способы

[00321] Для этого исследования выбирают группу пациентов с рецидивирующей кератопатией. Пациенты испытали по меньшей мере один эпизод герпетической кератопатии. Для лечения рецидивирующей герпетической кератопатии и подавления реактивации латентного вируса пациентов делят на две подгруппы. Пациентам в первой подгруппе вводят в глаза офтальмологический состав, такой как глазные капли, содержащий от приблизительно 50 пг/мл до приблизительно 500 пг/мл (т.е. 5 мкг/мл) ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), составленного в забуференном фосфатом солевом растворе (при рН 7,2), 0,3% пропиленгликоля, 0,4% полиэтиленгликоля 400 и 0,05% гидроксипропилгуара. Пациентам во второй подгруппе вводят в глаз офтальмологический состав-плацебо, который не содержит ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206, но в остальном идентичен тому, который вводят в первой подгруппе. Для всех подгрупп глазные капли либо вводят пациенты самостоятельно, либо это осуществляет медсестра или попечитель. Офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), и офтальмологический состав-плацебо вводят соответственно пациентам первой и второй подгруппы, два раза в день на срок до 30 дней.

[00322] Результаты

[00323] Наблюдается, что офтальмологический состав, содержащий ТТНХ1114 (SEQ ID NO: 206), увеличивает интервал без заболевания и уменьшает тяжесть реактивированных вирусных поражений, причем пациенты, получающие модифицированный FGF-1, имеют более длительный период времени без рецидива заболевания, чем у пациентов второй подгруппы, которых лечат с помощью плацебо.

[00324] ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Трефойл терапьютикс, Инк.

<120> РЕКОМБИНАНТНЫЕ МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ФАКТОРЫ РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ И ИХ

ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ

<130> 45341-705.601

<140> PCT/US2018/031189

<141> 2018-05-04

<150> 62/584,624

<151> 2017-11-10

<150> 62/502,540

<151> 2017-05-05

<150> 62/502,529

<151> 2017-05-05

<160> 207

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 140

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 1

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 2

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 2

Met Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 3

<211> 15

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 3

Met Ala Glu Gly Glu Ile Thr Thr Phe Thr Ala Leu Thr Glu Lys

1 5 10 15

<210> 4

<211> 5

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 4

Ala Leu Thr Glu Lys

1 5

<210> 5

<211> 4

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 5

Leu Thr Glu Lys

1

<210> 6

<211> 3

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 6

Thr Glu Lys

1

<210> 7

<211> 2

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 7

Glu Lys

1

<210> 8

<211> 1

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

пептид

<400> 8

Lys

1

<210> 9

<211> 146

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 9

Met Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys

1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu

20 25 30

Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile

35 40 45

Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser

50 55 60

Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr

65 70 75 80

Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu

85 90 95

Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn

100 105 110

Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg

115 120 125

Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser

130 135 140

Ser Asp

145

<210> 10

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 10

Met Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 11

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 11

Met Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 12

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 12

Met Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 13

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 13

Met Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 14

<211> 146

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 14

Met Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys

1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu

20 25 30

Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile

35 40 45

Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser

50 55 60

Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr

65 70 75 80

Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu

85 90 95

Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn

100 105 110

Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg

115 120 125

Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser

130 135 140

Ser Asp

145

<210> 15

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 15

Met Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 16

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 16

Met Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 17

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 17

Met Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 18

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 18

Met Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 19

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 19

Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 20

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 20

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 21

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 21

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 22

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 22

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 23

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 23

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 24

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 24

Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 25

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 25

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 26

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 26

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 27

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 27

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 28

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 28

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 29

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 29

Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 30

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 30

Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 31

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 31

Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 32

<211> 136

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 32

Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly

1 5 10 15

His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp

20 25 30

Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly

35 40 45

Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp

50 55 60

Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu

65 70 75 80

Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys

85 90 95

Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser

100 105 110

Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe

115 120 125

Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 33

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 33

Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 34

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 34

Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 35

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 35

Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 36

<211> 136

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 36

Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly

1 5 10 15

His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp

20 25 30

Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly

35 40 45

Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp

50 55 60

Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu

65 70 75 80

Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys

85 90 95

Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser

100 105 110

Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe

115 120 125

Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 37

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 37

Met Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 38

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 38

Met Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 39

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 39

Met Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 40

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 40

Met Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 41

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 41

Met Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 42

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 42

Met Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 43

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 43

Met Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 44

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 44

Met Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 45

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 45

Met Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 46

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 46

Met Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 47

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 47

Met Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 48

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 48

Met Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 49

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 49

Met Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 50

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 50

Met Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 51

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 51

Met Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 52

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 52

Met Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 53

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 53

Met Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 54

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 54

Met Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 55

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 55

Met Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 56

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 56

Met Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 57

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 57

Met Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 58

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 58

Met Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 59

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 59

Met Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 60

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 60

Met Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 61

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 61

Met Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 62

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 62

Met Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 63

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 63

Met Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 64

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 64

Met Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 65

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 65

Met Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 66

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 66

Met Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 67

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 67

Met Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 68

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 68

Met Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 69

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 69

Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 70

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 70

Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 71

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 71

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 72

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 72

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 73

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 73

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 74

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 74

Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 75

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 75

Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 76

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 76

Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 77

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 77

Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 78

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 78

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 79

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 79

Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 80

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 80

Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 81

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 81

Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 82

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 82

Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 83

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 83

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 84

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 84

Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 85

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 85

Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 86

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 86

Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 87

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 87

Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 88

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 88

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 89

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 89

Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 90

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 90

Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 91

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 91

Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 92

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 92

Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 93

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 93

Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 94

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 94

Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 95

<400> 95

000

<210> 96

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 96

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 97

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 97

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 98

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 98

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 99

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 99

Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 100

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 100

Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 101

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 101

Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 102

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 102

Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 103

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 103

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 104

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 104

Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 105

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 105

Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 106

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 106

Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 107

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 107

Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 108

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 108

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 109

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 109

Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 110

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 110

Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 111

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 111

Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 112

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 112

Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 113

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 113

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 114

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 114

Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 115

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 115

Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 116

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 116

Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 117

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 117

Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 118

<211> 146

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 118

Met Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys

1 5 10 15

Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu

20 25 30

Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile

35 40 45

Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser

50 55 60

Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr

65 70 75 80

Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu

85 90 95

Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn

100 105 110

Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg

115 120 125

Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser

130 135 140

Ser Asp

145

<210> 119

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 119

Met Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 120

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 120

Met Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 121

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 121

Met Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 122

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 122

Met Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 123

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 123

Met Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 124

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 124

Met Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 125

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 125

Met Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 126

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 126

Met Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 127

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 127

Met Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 128

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 128

Met Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 129

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 129

Met Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 130

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 130

Met Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 131

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 131

Met Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 132

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 132

Met Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 133

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 133

Met Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 134

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 134

Met Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 135

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 135

Met Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 136

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 136

Met Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 137

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 137

Met Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 138

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 138

Met Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 139

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 139

Met Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 140

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 140

Met Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 141

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 141

Met Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 142

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Any amino acid

<400> 142

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 143

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 143

Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 144

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> Любая аминокислота

<400> 144

Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 145

<211> 136

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (63)..(63)

<223> Любая аминокислота

<400> 145

Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly

1 5 10 15

His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp

20 25 30

Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly

35 40 45

Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp

50 55 60

Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu

65 70 75 80

Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys

85 90 95

Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser

100 105 110

Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe

115 120 125

Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 146

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 146

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 147

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 147

Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 148

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> Любая аминокислота

<400> 148

Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 149

<211> 136

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (63)..(63)

<223> Любая аминокислота

<400> 149

Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly

1 5 10 15

His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp

20 25 30

Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly

35 40 45

Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp

50 55 60

Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu

65 70 75 80

Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys

85 90 95

Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser

100 105 110

Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe

115 120 125

Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 150

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (71)..(71)

<223> Любая аминокислота

<400> 150

Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 151

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 151

Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 152

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 152

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 153

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 153

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 154

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (71)..(71)

<223> Любая аминокислота

<400> 154

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 155

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 155

Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 156

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 156

Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 157

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 157

Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 158

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 158

Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 159

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 159

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 160

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 160

Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 161

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 161

Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 162

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 162

Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 163

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 163

Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 164

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 164

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 165

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 165

Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 166

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 166

Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 167

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 167

Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 168

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> Любая аминокислота

<400> 168

Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 169

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 169

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Cys Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 170

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 170

Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 171

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 171

Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Ala Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 172

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> Любая аминокислота

<400> 172

Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala

50 55 60

Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 173

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> Любая аминокислота

<400> 173

Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Ala Xaa

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Cys Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 174

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 174

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 175

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (72)..(72)

<223> Любая аминокислота

<400> 175

Ala Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<210> 176

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (71)..(71)

<223> Любая аминокислота

<400> 176

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 177

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 177

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 178

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 178

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 179

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 179

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 180

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 180

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 181

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (71)..(71)

<223> Любая аминокислота

<400> 181

Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 182

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 182

Ala Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 183

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 183

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 184

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 184

Ala Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 185

<211> 144

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (71)..(71)

<223> Любая аминокислота

<400> 185

Leu Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp

20 25 30

Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu

35 40 45

Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu

50 55 60

Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser

65 70 75 80

Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn

85 90 95

His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe

100 105 110

Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His

115 120 125

Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 186

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 186

Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 187

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 187

Leu Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 188

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 188

Leu Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 189

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 189

Leu Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 190

<211> 143

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (70)..(70)

<223> Любая аминокислота

<400> 190

Thr Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly

20 25 30

Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln

35 40 45

Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr

50 55 60

Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln

65 70 75 80

Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His

85 90 95

Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val

100 105 110

Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr

115 120 125

Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 191

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 191

Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 192

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 192

Thr Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 193

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 193

Thr Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 194

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 194

Thr Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 195

<211> 142

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (69)..(69)

<223> Любая аминокислота

<400> 195

Glu Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr

20 25 30

Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu

35 40 45

Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly

50 55 60

Gln Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr

65 70 75 80

Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr

85 90 95

Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly

100 105 110

Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly

115 120 125

Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 196

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 196

Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 197

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 197

Glu Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 198

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 198

Glu Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 199

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> Любая аминокислота

<400> 199

Glu Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 200

<211> 141

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (68)..(68)

<223> Любая аминокислота

<400> 200

Lys Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val

20 25 30

Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser

35 40 45

Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln

50 55 60

Tyr Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro

65 70 75 80

Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn

85 90 95

Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu

100 105 110

Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln

115 120 125

Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 201

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (67)..(67)

<223> Любая аминокислота

<400> 201

Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 202

<211> 139

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (66)..(66)

<223> Любая аминокислота

<400> 202

Lys Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser

1 5 10 15

Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly

20 25 30

Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu

35 40 45

Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu

50 55 60

Cys Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu

65 70 75 80

Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr

85 90 95

Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys

100 105 110

Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala

115 120 125

Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 203

<211> 138

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (65)..(65)

<223> Любая аминокислота

<400> 203

Lys Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn

1 5 10 15

Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr

20 25 30

Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser

35 40 45

Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys

50 55 60

Xaa Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu

65 70 75 80

Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile

85 90 95

Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn

100 105 110

Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile

115 120 125

Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 204

<211> 137

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<220>

<221> MOD_RES

<222> (64)..(64)

<223> Любая аминокислота

<400> 204

Lys Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly

1 5 10 15

Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg

20 25 30

Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val

35 40 45

Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Xaa

50 55 60

Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys

65 70 75 80

Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser

85 90 95

Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly

100 105 110

Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu

115 120 125

Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135

<210> 205

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 205

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Val Leu Leu Tyr Cys

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Ala Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Val Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 206

<211> 140

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 206

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Ser

1 5 10 15

Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro Asp Gly Thr Val Asp

20 25 30

Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln Leu Gln Leu Ser Ala

35 40 45

Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr Glu Thr Gly Gln Tyr

50 55 60

Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly Ser Gln Thr Pro Asn

65 70 75 80

Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu Asn His Tyr Asn Thr

85 90 95

Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp Phe Val Gly Leu Lys

100 105 110

Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr His Tyr Gly Gln Lys

115 120 125

Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp

130 135 140

<210> 207

<211> 145

<212> PRT

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический

полипептид

<400> 207

Met Ala Leu Thr Glu Lys Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro

1 5 10 15

Lys Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gly Gly His Phe Leu Arg Ile Leu Pro

20 25 30

Asp Gly Thr Val Asp Gly Thr Arg Asp Arg Ser Asp Gln His Ile Gln

35 40 45

Leu Gln Leu Ser Ala Glu Ser Val Gly Glu Val Tyr Ile Lys Ser Thr

50 55 60

Glu Thr Gly Gln Tyr Leu Cys Met Asp Thr Asp Gly Leu Leu Tyr Gly

65 70 75 80

Ser Gln Thr Pro Asn Glu Glu Cys Leu Phe Leu Glu Arg Leu Glu Glu

85 90 95

Asn His Tyr Asn Thr Tyr Ile Ser Lys Lys His Ala Glu Lys Asn Trp

100 105 110

Phe Val Gly Leu Lys Lys Asn Gly Ser Val Lys Arg Gly Pro Arg Thr

115 120 125

His Tyr Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser

130 135 140

Asp

145

<---

Claims (13)

1. Рекомбинантный модифицированный полипептид фактора роста фибробластов 1 (FGF-1), содержащий последовательность FGF-1 дикого типа, представленную в SEQ ID NO: 1, с мутациями, причем полипептид содержит метионин, присоединенный к N-концу SEQ ID NO: 1, причем указанные мутации в SEQ ID NO: 1 включают Cys16Ser, Ala66Cys и Cys117Val, и при этом полипептид имеет повышенную способность к индукции пролиферации клеток по сравнению с FGF-1 дикого типа, представленным в SEQ ID NO: 1.

2. Рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1 по п. 1, причем модифицированный полипептид FGF-1 представляет собой зрелую форму полипептида.

3. Рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1 по п. 1, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2.

4. Рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1 по п. 3, где модифицированный полипептид FGF-1 является зрелой формой полипептида.

5. Рекомбинантный модифицированный полипептид FGF-1 по п. 1, причем модифицированный полипептид FGF-1 не экспрессируется с удлиняющим пептидом и производится способом, который не предусматривает стадию удаления удлиняющего пептида.

6. Фармацевтическая композиция для лечения или предотвращения заболевания, нарушения или состояния роговицы, содержащая терапевтически эффективное количество рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1 по любому из пп. 1-5 и фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество или разбавитель, при этом заболевание, нарушение или состояние роговицы включает герпетическую кератопатию, нейротрофическую кератопатию, эндотелиальную дистрофию роговицы или вызванное химическим или нарывным веществом повреждение.

7. Фармацевтическая композиция по п. 6, в которой вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой химический ожог.

8. Фармацевтическая композиция по п. 6 или 7, в которой эндотелиальная дистрофия роговицы представляет дистрофию Фукса.

9. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 6-8, в которой герпетическая кератопатия: (a) вызвана первичной инфекцией вирусом простого герпеса; (b) представляет собой хроническую герпетическую кератопатию; или (c) является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса.

10. Способ лечения или предотвращения заболевания, нарушения или состояния роговицы у млекопитающего, включающий введение млекопитающему рекомбинантного модифицированного полипептида FGF-1 по любому из пп. 1-5 и фармацевтически приемлемого носителя, вспомогательного вещества или разбавителя, при этом заболевание, нарушение или состояние роговицы включает герпетическую кератопатию, нейротрофическую кератопатию, эндотелиальную дистрофию роговицы или вызванное химическим или нарывным веществом повреждение.

11. Способ по п. 10, в котором эндотелиальная дистрофия роговицы представляет собой дистрофию Фукса.

12. Способ по п. 10 или 11, в котором вызванное химическим или нарывным веществом повреждение представляет собой химический ожог.

13. Способ по любому из пп. 10-12, в котором герпетическая кератопатия: (a) вызвана первичной инфекцией вирусом простого герпеса; (b) представляет собой хроническую герпетическую кератопатию; или (c) является вторичной по отношению к инфекции, вызванной вирусом простого герпеса.