RU2809824C1 - Аллостерический фармакологический шаперон, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы - Google Patents
Аллостерический фармакологический шаперон, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2809824C1 RU2809824C1 RU2023123457A RU2023123457A RU2809824C1 RU 2809824 C1 RU2809824 C1 RU 2809824C1 RU 2023123457 A RU2023123457 A RU 2023123457A RU 2023123457 A RU2023123457 A RU 2023123457A RU 2809824 C1 RU2809824 C1 RU 2809824C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gcase
- cells
- compound
- glucocerebrosidase
- allosteric
- Prior art date
Links
- 102000004547 Glucosylceramidase Human genes 0.000 title claims abstract description 98
- 108010017544 Glucosylceramidase Proteins 0.000 title claims abstract description 98
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 title claims abstract description 20
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 title claims abstract description 15
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 150000002429 hydrazines Chemical class 0.000 claims abstract 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 53
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 abstract description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 230000008848 allosteric regulation Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 41
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 23
- HFVDMJQQAKLUSN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-iodoanilino)-2-oxoethoxy]-n-[2-(n-methylanilino)-2-oxoethyl]benzamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1N(C)C(=O)CNC(=O)C1=CC=CC=C1OCC(=O)NC1=CC=C(I)C=C1 HFVDMJQQAKLUSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 10
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 10
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 9
- 101150028412 GBA gene Proteins 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 8
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 description 7
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 7
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 NCGC607 compound Chemical class 0.000 description 6
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 5
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 5
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 5
- 229940058287 salicylic acid derivative anticestodals Drugs 0.000 description 5
- 150000003872 salicylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 4
- HHJTWTPUPVQKNA-JIAPQYILSA-N beta-D-glucosylsphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HHJTWTPUPVQKNA-JIAPQYILSA-N 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 4
- XSXYESVZDBAKKT-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzohydrazide Chemical class NNC(=O)C1=CC=CC=C1O XSXYESVZDBAKKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 description 3
- 108010009491 Lysosomal-Associated Membrane Protein 2 Proteins 0.000 description 3
- 102100038225 Lysosome-associated membrane glycoprotein 2 Human genes 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- APXRHPDHORGIEB-UHFFFAOYSA-N 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine Chemical class N1=CN=C2C=NNC2=C1 APXRHPDHORGIEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 101100010166 Mus musculus Dok3 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000012925 biological evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000003291 dopaminomimetic effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 150000002305 glucosylceramides Chemical class 0.000 description 2
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 2
- 238000000302 molecular modelling Methods 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- HHJTWTPUPVQKNA-PIIMIWFASA-N psychosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HHJTWTPUPVQKNA-PIIMIWFASA-N 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- WIUVQCIRRAAPAX-UHFFFAOYSA-N 2-chloro-n-(4-iodophenyl)acetamide Chemical compound ClCC(=O)NC1=CC=C(I)C=C1 WIUVQCIRRAAPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 4,4-diethylpiperidine Chemical compound CCC1(CC)CCNCC1 DGZSVBBLLGZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LTZCPNBPVMMGNY-UHFFFAOYSA-N 4-methylpyrrolo[1,2-a]pyrimidine-8-carboxamide Chemical class CC1=CC=NC=2N1C=CC=2C(=O)N LTZCPNBPVMMGNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035495 ADMET Effects 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 1
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 1
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 description 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000010535 acyclic diene metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- 102000003802 alpha-Synuclein Human genes 0.000 description 1
- 108090000185 alpha-Synuclein Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- XGZVNVFLUGNOJQ-UHFFFAOYSA-N n,n-dimethylformamide;ethyl acetate Chemical compound CN(C)C=O.CCOC(C)=O XGZVNVFLUGNOJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001050 pharmacotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N phenyl isocyanate Chemical compound O=C=NC1=CC=CC=C1 DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 1
- 229940083082 pyrimidine derivative acting on arteriolar smooth muscle Drugs 0.000 description 1
- JBDKAABFESSFMV-UHFFFAOYSA-N pyrrolo[1,2-a]pyrimidine Chemical class N1=CC=CN2C=CC=C21 JBDKAABFESSFMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к аллостерическому фармакологическому шаперону, восстанавливающему функцию глюкоцереброзидазы, из класса N,O-дизамещённых производных сацилилоил гидразина, общей формулы. Технический результат: создание нового соединения, восстанавливающего функцию глюкоцереброзидазы за счёт аллостерической регуляции, которое могут найти применение в медицине для лечения болезни Гоше и болезни Паркинсона. 5 ил.
Description
Изобретение относится к медицине, фармакотерапии, а именно, к веществам для лечения болезни Гоше (БГ) и Паркинсона (БП), ассоциированной с мутациями в гене глюкоцереброзидазы (GBA). Изобретение направлено на оценку эффективности новых аллостерических фармакологических шаперонов (ФШ) глюкоцереброзидазы (GCase), способных восстанавливать функцию фермента GCase и способствовать транспорту GCase в лизосому.
Мутации в гене GBA в гомозиготном/компаунд-гетерозиготном состоянии приводят к развитию БГ - наследственного заболевания, относящегося к классу лизосомных болезней накопления. В настоящее время считается, что мутации в гене GBA являются наиболее распространенным фактором повышенного риска развития БП.
В норме фермент GCase участвует в катаболизме лизосфинголипидов, а именно расщепляет свои субстраты: глюкозилцерамид и глюкозилсфингозин до глюкозы и церамида и сфингозина, соответственно. Дисфункция GCase ведет к нарушению метаболизма лизосфинголипидов с их последующим накоплением в лизосомах клеток, в первую очередь в макрофагах: Ferreira C.R., Gahl W.A. Lysosomal storage diseases: Transl. Sci. Rare Dis. 2017. Vol. 2, №1-2. P. 1 [1].
У пациентов с БГ и, в меньшей степени у пациентов с GBA-ассоциированной БП (GBA-БП), как в клетках мозга, так и периферической крови, наблюдается снижение ферментативной активности GCase, повышение уровня лизосфинголипида гексозилсфингозина (HexSph), а также дисфункция лизосом: Sidransky Е., Lopez G. The link between the GBA gene and parkinsonism: Lancet. Neurol. 2012. Vol. 11, №11. P. 986 [2]; Do J. et al. Glucocerebrosidase and its relevance to Parkinson disease: Mol. Neurodegener. 2019. Vol. 14, №1 [3].
Так как большинство мутаций в гене GBA находятся вне активного центра фермента, а приводят к нарушению пространственной структуры белка GCase, обсуждается использование ФШ для терапии как GBA-БП, так и БГ. ФШ - это химические соединения, которые способны связываться с мутантной формой GCase, стабилизировать ее пространственную структуру и способствовать транспорту GCase в лизосому, что в свою очередь приводит к повышению активности фермента, снижению концентрации субстрата в клетках, а также повышает функциональность лизосом. Это описано работах: [2]; Aflaki Е. et al. A characterization of Gaucher iPS-derived astrocytes: Potential implications for Parkinson's disease //Neurobiol. Dis. 2020. Vol. 134, №October 2019. P. 104647 [4]; Tran M.L. et al. Second-Generation Pharmacological Chaperones: Beyond Inhibitors // Mol. 2020, Vol. 25, Page 3145. Multidisciplinary Digital. 2020. Vol. 25, №14. P. 3145 [5].
ФШ, связывающиеся с активным центром белка (ингибирующего типа), обладают недостатками, которые препятствуют их использованию в клинической практике, а именно: низкая селективность и вероятность взаимодействия с другими ферментами лизосом; высокая константа связывания шаперона с активным центром, что в дальнейшем затрудняет протекание каталитической реакции расщепления глюкозилцерамида и глюкозилсфингозина [5].
Существуют ФШ GCase, способные связываться с аллостерическими сайтами на поверхности GCase; такие ФШ получили название аллостерические активаторы (т.е. ФШ неингибирующего типа).
Преимущества аллостерических активаторов GCase заключаются в том, что они обладают большей селективностью в отношении фермента GCase (по сравнению с ФШ ингибирующего типа), т.е. обладают таргетным воздействием только на фермент GCase. Это значит, что ФШ аллостерического типа могут использоваться для лечения БГ и БП, ассоциированной с мутациями в гене GBA для восстановления функции глюкоцереброзидазы, исключая побочное взаимодействие с другими ферментами лизосом, что свойственно ФШ ингибирующего типа. Это будет являться их преимуществом при внедрении их в клиническую практику.
На данный момент описано несколько ФШ аллостерического типа [3, 5].
Известен фармакологический шаперон неингибирующего типа, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы: патент WO2012078855 [6]: Patnaik S. et al. Discovery, SAR, and Biological evaluation of Non-Inhibitory Small Molecule Chaperones of Glucocerebrosidase // J. Med. Chem. 2012. Vol. 55, №12. P. 5734 [7].
В данных работах выявлены соединения, выступающие в качестве потенциальных ФШ GCase неингибирующего типа из класса пиразолопиримидинов и дигидропиразолопиримидинов, обладающие активностью в отношении фермента GCase, а также представлены варианты замещения радикальных групп выявленных соединений и способы их получения. Соединение NGC00188758 - работа [7] - повышает активность GCase и степень транслокации GCase в лизосомы в клетках фибробластов пациентов с БГ. Он обладает селективностью действию по отношению к GCase и не воздействует на другие лизосомные ферменты, что является важным параметром и отражает его специфичность. В этих работах механизм действия данного соединения и его производных не описан, также как и не описаны сайты связывания соединений с GCase. Поэтому нельзя с уверенностью отнести соединение NGC00188758 к ФШ аллостерического типа.
Известны шапероны неингибирующего типа из класса пиримидинов, восстанавливающие функцию глюкоцереброзидазы, описанные в патентах: US10751341 [8], US9802942 [9]. Здесь представлены варианты замещения радикальных групп пиролопиримидиновых соединений и способы их получения.
Известен фармакологический шаперон неингибирующего типа, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы, описанный в патенте US9464035 [10]. В отличие от аналогов, указанных выше, являющихся производными пиримидинов, в данном патенте представлены потенциальные ФШ неингибирующего типа, восстанавливающие активность GCase, которые относятся к производным салициловой кислоты.
В патенте охарактеризованы варианты замещения радикальных групп салициловой кислоты и способы их получения. Однако количество исследований по подтверждению влияния ФШ на активность GCase выполнены в недостаточном объеме для того, чтобы можно было с уверенностью сказать о повышение активности фермента GCase.
В качестве прототипа рассмотрена статья: Aflaki Е. et al. A New Glucocerebrosidase Chaperone Reduces α-Synuclein and Glycolipid Levels in iPSC-Derived Dopaminergic Neurons from Patients with Gaucher Disease and Parkinsonism // J. Neurosci. 2016. Vol. 36, №28. P. 7441-7452 [11].
Здесь описан ФШ GCase неингибирующего типа NCGC607, способный восстанавливать функцию GCase, из класса производных салициловой кислоты, структурной формулы:
Химическая формула соединения NCGC607 (2-(2-(4-иодофениламино)-2-оксоэтокси)-N-(2-(метил(фенил)амино)-2-оксоэтил)бензамид) [11]
Показана эффективность соединения NCGC607 (2-(2-(4-иодофениламино)-2-оксоэтокси)-N-(2-(метил(фенил)амино)-2-оксоэтил)бензамид) в повышении активности фермента GCase, снижении концентрации субстрата и повышении транспорта этого фермента в лизосому на пациент-специфичных клетках (макрофаги и дофаминергические (ДА) - нейроны, дифференцированные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК)), полученных от пациентов с БГ, а также БГ с проявлениями паркинсонизма. Соединение не оказывает ингибирующего действия на фермент GCase и при этом способно восстанавливать функцию GCase. По этим исследованиям нельзя однозначный сделать вывод об эффективности действия данного вещества на пациентов только с БП.
В прототипе не раскрыт механизм взаимодействия ФШ с GCase и не известны сайты связывания данного ФШ с GCase. Что не позволяет с уверенностью отнести соединение NCGC607 к аллостерическим ФШ GCase.
Это значит, что данный ФШ достоверно не обладает преимуществами, характерными для ФШ аллостерического типа.
Технический результат - расширение арсенала средств для лечения болезни Паркинсона и болезни Гоше.
Задачей данного изобретения является создание новых аллостерических шаперонов, способных восстанавливать функцию GCase, обладающих большей селективностью в отношении фермента GCase.
Технический результат достигается тем, что создан аллостерический ФШ (далее соединение N2), восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы, из класса N,O-дизамещенных производных салицилоил гидразина, общей формулы:
Соединение N2-(2-(2-(4-иодофениламино)-2-оксоэтокси)бензоил)-N-енилгидразинкарбоксамид).
Настоящее изобретение посвящено поиску ФШ GCase, восстанавливающих функцию данного фермента, способных связываться с аллостерическими сайтами на поверхности GCase.
С помощью методов молекулярного моделирования получено заявляемое вещество - N2, производное салицилоил гидразина, проведена оценка влияния заявляемого соединения на ферментативную активность GCase, относительный уровень белка GCase, количество субстрата и транспорт фермента в лизосому в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ, а также GBA-БП. Заявляемое соединение обладает более высоким показателем растворимости в полярных растворителях, таких как водные растворы в сравнении с прототипом, относящемуся также к классу производных салициловой кислоты.
На фиг. 1 представлены результаты по оценке эффективности заявляемого вещества в клетках первичной культуры макрофагов как пациентов с БГ, так и GBA-БП., где:
Фиг. 1, А - Результаты измерения активности GCase (в виде графиков бокс-плот) в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ, GBA-БП и лиц контрольной группы с добавлением соединения N2 и без него.
Фиг. 1, Б - Результаты измерения концентрации субстрата HexSph (в виде графиков бокс-плот) в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ, GBA-БП и лиц контрольной группы с добавлением соединения N2 и без него.
Фиг. 1, В - Результаты измерения активности GCase (в виде графиков бокс-плот) в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ, GBA-БП в зависимости от тяжести мутаций в гене GBA и лиц контрольной группы с добавлением соединения N2 и без него.
Фиг. 1, Г - Результаты измерения относительного уровня белка GCase (в виде графиков бокс-плот) в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ и лиц контрольной группы с добавлением соединения N2 и без него.
Фиг. 1, Д - Оценка степени колокализации белков GCase (красный) и лизосомного маркера LAMP2 (зеленый) в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ с добавлением соединения N2 и без него. Визуализация проводилась с помощью конфокальной микроскопии (х63). Для оценки степени колокализации GCase и LAMP2 рассчитывался коэффициент Пирсона (не менее 10 клеток в каждом состоянии). На бокс-плот графиках представлены результаты расчета коэффициента Пирсона в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ с добавлением соединения N2 и без него.
* р<0.05 относительно необработанных клеток.
Для получения заявляемого вещества с помощью методов молекулярного моделирования была построена атомарная модель мутантной формы GCase N370S, на поверхности которой описаны сайты связывания малых химических соединений. Методами молекулярного докинга и молекулярной динамики обнаружены возможные варианты связывания соединения NCGC607 - прототипа, в выявленных сайтах. В трех из шести сайтов GCase наблюдается стабильное связывание NCGC607, следовательно, соединение может действовать как аллостерический ФШ GCase. В заявляемом изобретении предложено провести модификации соединения NCGC607, введя две полярные аминогруппы в линкер между фенильными химическими группами. Было установлено, что соединение NCGC607 и заявляемое соединение обладают схожими свободными энергиями связывания в аллостерическом сайте GCase, расположенном вблизи активного центра фермента под петлей, состоящей из аминокислотных остатков 311-319. Свободную энергию связывания вычисляли методом MMGBSA на основе расчетов траектории молекулярной динамики комплекса GCase с соединениями NCGC607 и заявляемого вещества; она составила -49,94±6,21 и -44,15±5,02 ккал/моль соответственно). Величина LogBB, рассчитанная на онлайн сервере ADMET: Dyabina A.S. et al. Prediction of blood-brain barrier permeability of organic compounds // Dokl. Biochem. Biophys. 2016. Vol. 470, №1. P. 371-374 [12] составила -0.48 для NCGC607 и -0.62 для заявляемого соединения. Это указывает на снижение гидрофобности заявляемого соединения в сравнении с исходным, т.е. на увеличение его растворимости в полярных растворителях, таких как водные растворы. Растворимость соединений, предполагаемых к использованию в качестве лекарственных средств, в значительной степени влияет на их биодоступность и возможность применения в клинической практике.
Получение заявляемого соединения.
Заявляемое соединение было получено с помощью химического синтеза. 2-(2-гидроксибензоил)-N-фенилгидразинкарбоксамид
К раствору салицилоилгидразида (15.22 г, 100 ммоль) в диметилформамиде (50 мл) при перемешивании и охлаждении (0°С) по каплям за 15-20 минут прибавили фенилизоцианат (10.9 мл, 100 ммоль). Реакционную смесь выдерживали 2 часа при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровали, промыли изопропиловым спиртом и высушили на воздухе. Получили 15.2 г (56%) в виде бесцветных кристаллов. Дополнительное количество продукта может быть получено путем добавления 17-20 мл воды к нагретому (80°С) маточному раствору с последующим фильтрованием и промывкой изопропиловым спиртом. Общий выход 2-(2-гидроксибензоил)-N-фенилгидразинкарбоксамида в виде бесцветных кристаллов 22.5 г (83%).
2-(2-(2-(4-иодофениламино)-2-оксоэтокси)бензоил)-N-фенилгидразинкарбоксамид
К раствору 2-(2-гидроксибензоил)-N-фенилгидразинкарбоксамида (2.71 г, 10 ммоль), 2-хлоро-N-(4-иодофенил)ацетамида (2.96 г, 10 ммоль) и KI (83 мг, 0.5 ммоль) в диметилформамиде (20 мл) прибавили измельченный прокаленный карбонат калия (1.38 г, 10 ммоль) и полученную суспензию перемешивали 15 часов при комнатной температуре, после чего к реакционной смеси добавили равный объем воды, выпавший осадок отфильтровали, промыли водой и изопропиловым спиртом. Сырой продукт перекристаллизовали из смеси диметилформамид-этилацетат. Выход бесцветного кристаллического продукта 3.98 г (75%).
Заявляемое соединение было охарактеризовано с использованием ядерно-магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектрометрии.
Масс-спектры высокого разрешения (HRMS) снимали на спектрометре Bruker micrOTOF 10223 (ESI). Масс-спектр: m/z вычислено для C22H19IN4O4 [М-Н+]: 529.0367; найдено: 529.0362.
Спектры ЯМР регистрировали с помощью спектрометра Bruker Avance 400 (400,13 МГц для 14 и 100,61 МГц для 13С). Результаты ЯМР анализа для соединения N2: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ, 4.95 (с, 2Н, СН2), 7.00 (т, 1Н,7 Гц, Саром), 7.18 (т, 1H, 7 Гц, Саром), 7.24 (т, 3Н, 8 Гц, Саром), 7.42 (д, 2Н, 8 Гц, Саром), 7.49 (д, 2Н, 8 Гц, Саром), 7.54-7.62 (м, 3Н, Саром), 7.90-7.95 (м 1H, Саром), 8.88 (с, 1H, NH), 10.26 (с, 1Н, NH), 10.43 (с, 1H, NH), 10.70 (с, 1Н, NH).
В данном изобретении - разработано и синтезировано химическое соединение N2 (2-(2-(4-иодофениламино)-2-оксоэтокси)бензоил)-N-фенилгидразинкарбоксамид), относящееся к производным салициловой кислоты, в качестве нового аллостерического ФШ GCase и показана его эффективность в восстановление функции GCase в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ, а также GBA-БП.
Оценка эффективности заявленного соединения по восстановлению функции GCase проводилась в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ (N=9, средний возраст 37.3±4.0 лет, 44% мужчин) и GBA-БП (N=5, средний возраст 55.5±3.5 лет, 17% мужчин) и лиц контрольной группы (N=7, средний возраст 41.3±4.2 лет, 42% мужчин) с последующей оценкой в них ферментативной активности GCase, концентрации ее субстрата - гексозилсфингозин (HexSph, который представляет собой смесь двух стереоизомеров глюкозилсфингозин (GlcSph) и галактозилсфингозин (GalSph)), относительного уровня белка GCase и степени транслокации GCase в лизосомы.
Клетки первичной культуры макрофагов являются оптимальной моделью для изучения молекулярных механизмов при дисфункции GCase. Ранее было показано, что клетки первичной культуры макрофагов отражают изменение ферментативной активности GCase и накопление ее субстрата и могут быть использованы как in vitro модель не только при БГ, но и GBA-БП: Николаев М.А. и соавт. Макрофаги периферической крови человека как модель изучения дисфункции глюкоцереброзидазы // Цитология. 2018. Vol. 12, №60. Р. 1022-1028 [13].
Используя методы компьютерного моделирования - молекулярная динамика и молекулярный докинг, выявлены сайты связывания заявляемого соединения на поверхности GCase, что позволяет отнести заявляемое соединение к аллостерическим ФШ GCase. В клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ заявляемое соединение не оказывало положительного эффекта на активность GCase, в то время как у пациентов с GBA-БП (в общей группе) заявляемое соединение N2 повышает активность GCase в 1,5-раза (р=0.012), а в группе пациентов с GBA-БП, носителей легкой мутации в гене GBA (N370S), использование заявляемого соединения приводило к увеличению ферментативной активность GCase в 2,8-раза (р=0.050) по сравнению с клетками без добавления заявляемого соединения (фиг. 1, А, В). Одним из важных параметров оценки эффективности ФШ, направленных на повышение функции GCase, является их способность снижать концентрацию субстрата. Заявляемое соединение в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ и GBA-БП приводило к снижению концентрации субстрата в 4,3- и 14,5-раза по сравнению с клетками без добавления заявляемого соединения (р=0.005 и р=0.012, соответственно) (фиг. 1, Б). Кроме того заявляемое соединение повышает относительный уровень белка GCase в 1,2-раза в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ по сравнению с клетками без добавления заявляемого соединения (р<0.05) (фиг. 1, Г). Заявляемое соединение повышает степень транслокации GCase в лизосому в клетках первичной культуры макрофагов пациентов с БГ по сравнению с клетками без добавления заявляемого соединения (р<0.0001) (фиг. 1, Д).
Проверка работоспособности заявляемого соединения
Забор крови у пациентов проводят из вены в 3 пробирки объемом 9 мл с ЭДТА. Получение мононуклеарной фракции производят из 24 мл методом градиентного центрифугирования в растворе фиколла (р=1.077, ПанЭко, Россия) при 1600 об/мин в течение 40 минут, с последующем промыванием полученной клеточной суспензии в растворе натрий-фосфатного буфера (PBS) и центрифугированием при 3000 об/мин в течение 10 минут. Полученные мононуклеарные клетки ресуспензируют в культуральной среде (RPMI-1640, ПанЭко, Россия) с добавлением 10% эмбриональной сыворотки крови крупного рогатого скота (БиолоТ, Россия) и 1% гентамицина (БиолоТ, Россия) с добавлением колоние-стимулирующего фактора макрофагов М-КСФ (Biolegend, США) в конечной концентрации 10 нг/мл. Клетки культивируют течение 8 дней в 5% СО2-инкубаторе при +37°С: [13]. На 4ый день к клеткам добавляют соединение N2 в конечной концентрации 4 мкМ и культивируют еще 4 дня без ежедневной замены среды в 5% CO2-инкубаторе при +37°С. После культивирования клетки дважды отмывают в PBS и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут. Созревание макрофагов периферической крови подтверждают с помощью световой микроскопии, а также проточной цитометрии с использованием специфических антител CD14+ и CD68+. Для оценки активности фермента GCase и концентрации HexSph суспензию полученных макрофагов наносят на специальные круги на фильтровальных карточках (Whatman 903 Sample Collection Cards, Germany) в концентрации 2*106 кл/мл. Далее фильтровальные карточки, с нанесенными на них исследуемыми образцами, высушивают в течение 2 часов при комнатной температуре и хранят при +4°С до дальнейшего использования не более одного месяца. Оценка ферментативной активности GCase и концентрации HexSph проводится методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и тандемной масс-спектрометрии (ВЭЖХ-МС/МС) по протоколу, описанному ранее: [13] с модификациями, в частности измеряя ее в сухом пятне биоматериала.
Для дальнейших экспериментов часть клеток после культивирования дважды отмывают в PBS и центрифугируют при 1500 об/мин в течение 5 минут, затем отбирают супернатант полностью и клетки замораживают при -80°С.
Для определения относительного уровня GCase методом вестерн в первичной культуре макрофагов клетки лизируют с помощью Total Protein Extraction Kit (Chemicon (Millipore), США). Определение общего белка в лизатах проводят методом с использованием набора Pierce ВСА Protein Assay kit (Thermo Scientific, США) на спекртофотометре SmartSpecTMPlus (BioRad, США). Затем лизаты в количестве 20 мкг белка наносят на 7,5% ПААГ гель и подвергают электрофоретическому разделению в 1X трис-глициновом буфере с добавлением SDS. Перенос белков с геля проводится на PVDF мембрану (Bio-Rad, USA). Мембрану инкубируют с первичными антителами (кроличье моноклональные антитела anti-GBA (1:1000, ab125065, Abcam, UK) и (поликлональные кроличьи антитела anti-GAPDH (1:10000, SAB2108266, Sigma, USA) при +4°С в течение ночи, с последующим инкубированием с вторичными антителами, коньюгированными с пероксидазой (козьи антитела anti-rabbit) (1:5000, ab6721, Abeam, UK) в течение 60 минут. Цифровые изображения получают с помощью хемилюминесцентной системы ChemiDoc (Bio-Rad, USA). Данные вестерн-блоттинга анализируют с помощью программы ImageJ (Версия 1.38а для Windows, http://rsb.info.nih.gov/ij/). Содержание белка GCase нормировали к содержанию GAPDH.
Оценка транслокации GCase в лизосомы (фиг. 1, Е) была проведена с помощью оценки степени колокализации белков GCase и маркера лизосом (LAMP2) методом иммунофлуоресцентного окрашивания и последующей визуализации с помощью конфокальной микроскопии. Для проведения данного эксперимента клетки культивировали согласно условиям, описанным выше. На 8ой день культивирования клетки фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 минут при комнатной температуре. После фиксации клетки трижды промывали в PBS в течение 5 минут. Пермеабилизацию клеток проводили с помощью 0,1% Тритон Х-100, растворенном в PBS, затем клетки были трижды промыты в PBS в течение 5 минут. Для блокировки неспецифического связывания клетки инкубировали в 1% БСА, растворенном в PBS, в течение 30 минут, затем инкубировали с первичными антителами против-GBA мыши (Sigma-Aldrich, США) и кроличьи против-LAMP2 (Sigma-Aldrich, США) в течение 60 минут при комнатной температуре, в конечной концентрации 7 мкг/мл и 1:500, соответственно. После промывки в PBS клетки инкубировали с вторичными антителами Alexa Fluore 488 против-мыши (Jackson ImmunoResearch Laboratories, США) и Су3 против-кролика (Jackson ImmunoResearch Laboratories, США), используемое разведение 1:400, в течение 60 минут в темноте при комнатной температуре. Затем клетки помещали в монтирующую среду с DAPI (Abcam, Великобритания). Изображения были получены с помощью лазерного конфокального микроскопа Leica TCS-SP5 (объектив х63) (Leica, Германия). Использовались следующие линии лазеров: аргоновый - 488 нм, HeNe - 543 нм и UV -405 нм). Толщина оптического среза 500 нм. Для определения уровня относительной флуоресценции изображений, полученных при помощи конфокального микроскопа, использовали программу LAS AF Lite. Оценка колокализации проводилась в программе Image J с использованием плагина, опубликованного ранее EzColocalization: Stauffer W., Sheng H, Lim H.N. EzColocalization: An ImageJ plugin for visualizing and measuring colocalization in cells and organisms // Sci. Reports 2018. Vol. 8, №1. P. 1-13 [14]. Расчет коэффициента Пирсона производился для каждого образца в отдельности (не менее 3х полей зрения, не менее 10 клеток в одном поле зрения).
Полученные результаты подтверждают возможность использования заявленного соединения в качестве аллостерического ФШ, восстанавливающего функцию GCase. По этим исследованиям можно сделать вывод об эффективности действия данного соединения у пациентов с БГ, а также у пациентов с БП, ассоциированной с мутациями в гене глюкоцереброзидазы (GBA) для восстановления функции глюкоцереброзидазы, исключая побочного взаимодействия с другими ферментами лизосом
Работа частично выполнена в рамках Программы стратегического академического лидерства «Приоритет 2030».
Список используемой литературы
1. Ferreira C.R., Gahl W.A. Lysosomal storage diseases // Transl. Sci. Rare Dis. 2017. Vol. 2, №1-2. P. 1.
2. Sidransky E., Lopez G. The link between the GBA gene and parkinsonism // Lancet. Neurol. 2012. Vol. 11, №11. P. 986.
3. Do J. et al. Glucocerebrosidase and its relevance to Parkinson disease // Mol. Neurodegener. 2019. Vol. 14, №1.
4. Aflaki E. et al. A characterization of Gaucher iPS-derived astrocytes: Potential implications for Parkinson's disease //Neurobiol. Dis. 2020. Vol. 134, №October 2019. P. 104647.
5. Tran M.L. et al. Second-Generation Pharmacological Chaperones: Beyond Inhibitors // Mol. 2020, Vol.25, Page 3145. Multidisciplinary Digital. 2020. Vol. 25, №14. P. 3145.
6. Патент WO2012078855. Substituted pyrazolopyrimidines as glucocerebrosidase activators.
7. Patnaik S. et al. Discovery, SAR, and Biological evaluation of Non-Inhibitory Small Molecule Chaperones of Glucocerebrosidase // J. Med. Chem. 2012. Vol. 55, №12. P. 5734.
8. Патент US10751341. Substituted pyrrolo[1,2-a]pyrimidines and their use in the treatment of medical disorders.
9. Патент US9802942. Substituted 4-methyl-pyrrolo[1,2-a]pyrimidine-8-carboxamide compounds and uses thereof for modulating glucocerebrosidase activity.
10. Патент US9464035. Salicylic acid derivatives useful as glucocerebrosidase activators.
11. Aflaki E. et al. A New Glucocerebrosidase Chaperone Reduces a-Synuclein and Glycolipid Levels in iPSC-Derived Dopaminergic Neurons from Patients with Gaucher Disease and Parkinsonism // J. Neurosci. 2016. Vol. 36, №28. P. 7441-7452.
12. Dyabina A.S. et al. Prediction of blood-brain barrier permeability of organic compounds // Dokl. Biochem. Biophys. 2016. Vol. 470, №1. P. 371-374.
13. Николаев M.A. и соавт. Макрофаги периферической крови человека как модель изучения дисфункции глюкоцереброзидазы // Цитология. 2018. Vol. 12, №60. Р. 1022-1028.
14. Stauffer W., Sheng Н., Lim H.N. EzColocalization: An ImageJ plugin for visualizing and measuring colocalization in cells and organisms // Sci. Reports 2018. Vol. 8, №1. P. 1-13.
Claims (2)
- Аллостерический фармакологический шаперон, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы, из класса N,O-дизамещённых производных сацилилоил гидразина, общей формулы:
-
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2809824C1 true RU2809824C1 (ru) | 2023-12-19 |
Family
ID=
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9464035B2 (en) * | 2012-03-28 | 2016-10-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Salicylic acid derivatives useful as glucocerebrosidase activators |
| RU2603637C2 (ru) * | 2010-12-08 | 2016-11-27 | Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретэри, Департмент Оф Хелс Энд Хьюмэн Сервисис | Замещённые пиразолопиримидины как активаторы глюкоцереброзидазы |
| US9802942B2 (en) * | 2015-07-01 | 2017-10-31 | Northwestern University | Substituted 4-methyl-pyrrolo[1,2-A]pyrimidine-8-carboxamide compounds and uses thereof for modulating glucocerebrosidase activity |
| US10751341B2 (en) * | 2014-11-06 | 2020-08-25 | Lysosomal Therapeutics Inc. | Substituted pyrrolo[1,2-a]pyrimidines and their use in the treatment of medical disorders |
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2603637C2 (ru) * | 2010-12-08 | 2016-11-27 | Дзе Юнайтед Стейтс Оф Америка, Эз Репрезентед Бай Дзе Секретэри, Департмент Оф Хелс Энд Хьюмэн Сервисис | Замещённые пиразолопиримидины как активаторы глюкоцереброзидазы |
| US9464035B2 (en) * | 2012-03-28 | 2016-10-11 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Salicylic acid derivatives useful as glucocerebrosidase activators |
| US10751341B2 (en) * | 2014-11-06 | 2020-08-25 | Lysosomal Therapeutics Inc. | Substituted pyrrolo[1,2-a]pyrimidines and their use in the treatment of medical disorders |
| US9802942B2 (en) * | 2015-07-01 | 2017-10-31 | Northwestern University | Substituted 4-methyl-pyrrolo[1,2-A]pyrimidine-8-carboxamide compounds and uses thereof for modulating glucocerebrosidase activity |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| AFLAKI E. ET AL. A new glucocerebrosidase chaperone reduces α-synuclein and glycolipid levels in iPSC-derived dopaminergic neurons from patients with Gaucher disease and parkinsonism. Journal of Neuroscience, 2016, vol. 36, no. 28, pp. 7441-7452. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20220160690A1 (en) | Methods for Treatment of Fabry Disease | |
| CN106822153B (zh) | 用于抑制肌萎缩的方法 | |
| JP6959650B2 (ja) | アルデヒドコンジュゲートおよびその使用 | |
| Garcia et al. | A role for thrombospondin-1 deficits in astrocyte-mediated spine and synaptic pathology in Down's syndrome | |
| JP6410878B2 (ja) | アシル補酵素ａ：リゾカルジオリピン・アシル基転移酵素１（ａｌｃａｔ１）の調節物質およびその使用方法 | |
| US20080248513A1 (en) | Methods for detection of lysosomal storage disease | |
| US20090068634A1 (en) | Substrates and internal standards for mass spectrometry detection | |
| MX2007015602A (es) | Tratamiento de trastornos del sistema nervioso central asociados con mutaciones en genes que codifican las enzimas lisosomicas. | |
| Zhong et al. | Loss of CLN3, the gene mutated in juvenile neuronal ceroid lipofuscinosis, leads to metabolic impairment and autophagy induction in retinal pigment epithelium | |
| MX2010009875A (es) | Ensayos para diagnosticar y evaluar opciones de tratamiento para enfermedad de pompe. | |
| Karkucinska-Wieckowska et al. | Increased reactive oxygen species (ROS) production and low catalase level in fibroblasts of a girl with MEGDEL association (Leigh syndrome, deafness, 3-methylglutaconic aciduria) | |
| JP2015514966A5 (ru) | ||
| JP2024037770A (ja) | Ｓａｒｍ１阻害剤 | |
| JP2019088294A (ja) | ライソゾーム病の検査に関する化合物および方法 | |
| RU2809824C1 (ru) | Аллостерический фармакологический шаперон, восстанавливающий функцию глюкоцереброзидазы | |
| Martins et al. | Atypical juvenile presentation of GM2 gangliosidosis AB in a patient compound-heterozygote for c. 259G> T and c. 164C> T mutations in the GM2A gene | |
| US9575064B2 (en) | Methods relating to testing for lysosomal storage disorders | |
| US20220288071A1 (en) | A small molecule therapeutic for parkinson's disease paired with a biomarker of therapeutic activity | |
| EP2647386B1 (en) | Lissencephaly therapeutic agent | |
| EP3845229A1 (en) | Isoquinoline derivatives for use in treating glut1 deficiency syndrome | |
| KR20220118484A (ko) | Oga 억제제 화합물 | |
| Feitosa et al. | Post‐ovulatory aging is associated with altered patterns for small ubiquitin‐like modifier (SUMO) proteins and SUMO‐specific proteases | |
| US20180209989A1 (en) | Methods for assaying palmitoyl protein thioesterase 1 and tripeptidyl peptidase activity in dried blood spots for detection of neuronal ceroid lipofuscinoses in newborns | |
| EP2064545B1 (en) | Method for identifying compounds that act as insulin-sensitizers | |
| Kelly | Lysosomal storage disease phenotypes in induced pluripotent stem cell models of Huntington’s disease |