RU2805786C2 - Способ лечения бактериального вагиноза - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и дерматовенерологии, и может быть использовано в условиях женских консультаций и поликлиник для лечения бактериального вагиноза. Одновременно применяют антимикробный препарат для лечения бактериального вагиноза и пробиотик. При этом применяют предварительно подобранный пробиотик для вагинального применения, который способен максимaльно повышать уровень продукции аденозинтрифосфорной кислоты микроорганизмами, ассоциированными с бактериальным вагинозом - Gardnerella vaginalis, Mobiluncus spp. и Prevotella bivia. Для этого до начала терапии бактериального вагиноза от пациентки получают образец цервико-вагинального содержимого; из полученного образца бактериологическими методами выделяют культуры микроорганизмов, ассоциированных с бактериальным вагинозом; к выделенным культурам последовательно добавляют предварительно полученные метаболиты 4-х пробиотических штаммов: 3 штамма Lactobacillus acidophilus, выделенных из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и одного штамма Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь. Затем оценивают изменение уровня продукции аденозинтрифосфорной кислоты. Изобретение обеспечивает высокоэффективное лечение бактериального вагиноза. 2 табл., 3 пр.

Description

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и дерматовенерологии, и может быть использовано в условиях женских консультаций и поликлиник для лечения бактериального вагиноза (БВ).

Способ основан на одновременном применении антимикробных веществ и пробиотика, который способен повышать уровень продукции аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) микроорганизмами, ассоциированными с БВ.

БВ представляет собой форму дисбиоза влагалища, при которой на фоне снижения обсемененности влагалища лактобактериями происходит резкое увеличение обсемененности влагалища анаэробными микроорганизмами.

Актуальность разработанного способа определяется высокой распространенностью БВ (Kenyon C., Colebunders R., Crucitti T. The global epidemiology of bacterial vaginosis: a systematic review //American journal of obstetrics and gynecology. - 2013. - Т. 209. - №6. - С. 505-523), а также тем, что наличие БВ ассоциировано с возникновением воспалительных заболеваний органов малого таза, рака и предраковых заболеваний шейки матки, бесплодием, преждевременными родами, воспалительными заболеваниями послеродового и неонатального периодов (Mokwele R. N., Ndzamba B. S., Schellack N. Bacterial vaginosis: An overview //South African Pharmaceutical Journal. - 2019. - Т. 86. - №2. - С. 13-16). Другим аспектом актуальности разработки данного способа является сложность терапии и склонность БВ к рецидивированию (Тихомиров А. Л. Бактериальный вагиноз // Доктор.Ру. 2019. №4 (159); Coudray M. S., Madhivanan P. Bacterial vaginosis-A brief synopsis of the literature // European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. - 2020. - Т. 245. - С. 143-148).

Известны способы лечения БВ, основанные на вагинальном или системном применении различных антимикробных препаратов (патент РФ №2261715 C1, опубликован 10.10.2005; патент РФ №2445964 C2, опубликован 27.03.2012). Одним из недостатков этих способов является направленность только на элиминацию микроорганизмов, ассоциированных с БВ, без учета восстановления нормальной микрофлоры. Другим недостатком является то, что антимикробные вещества способны уничтожать метаболически активные микроорганизмы, но не влияют на покоящиеся формы, то есть не способны полностью уничтожать БВ-ассоциированные микроорганизмы.

Известны способы лечения БВ, основанные на одновременном оральном и вагинальном применении водного настоя сбора, содержащего цветки ромашки, почки сосны, почки березы, траву чистотела, плоды черемухи, кору дуба и соплодия ольхи (патент РФ №2393870 C1, опубликован 10.07.2010). Недостатком данного способа является сложный неконтролируемый состав настоя с недоказанным механизмом действия, кроме того он может быть потенциальным аллергеном и непредсказуемо влиять на нормальную микрофлору влагалища.

Существует способ лечения БВ, заключающийся в том, что интравагинально вводят препарат, содержащий микробную массу живых лактобацилл и один или несколько родов эубиотических бактерий, выбранных из группы: бифидобактерии, стрептококки и лактококки, (патент РФ №2248212 C2, опубликован 20.03.2005). Недостатком указанного способа является то, что антагонистическая активность микроорганизмов, содержащихся в препарате, может быть ограниченной в отношении БВ-ассоциированных микроорганизмов, при этом может быть направлена на собственные вагинальные лактобациллы.

Известен способ лечения БВ путем перорального и вагинального применения 2-3 суточного кумыса, основанный на комплексном воздействии компонентов кумыса: микроорганизмов, обладающих антагонистической активностью, кислой протеиназы, способствующей разрушению белков биопленки и витаминов, необходимых для процессов репарации (патент РФ №2354392 C1, опубликован 10.05.2009). Недостатком указанного способа является то, что антагонистическая активность микроорганизмов кумыса может быть направлена не только на БВ-ассоциированные микроорганизмы, но и на собственные вагинальные лактобациллы.

Существуют способы лечения БВ, основанные на вагинальном применении композиции, содержащей молочную кислоту и ее олигомеры (патент РФ №2459620 C2, опубликован 27.08.2012; патент РФ №2627470 C2, опубликован 08.08.2017) или штаммов лактобацилл, отличающихся высокой продукцией молочной кислоты (патент РФ №2758109 C2, опубликован 26.10.2021). Недостатком указанных способов является неспецифичность действия молочной кислоты, избыток которой может разрушать эпителиоциты влагалища и оказывать угнетающее действие на собственные вагинальные лактобациллы.

На современном этапе сформулирована и обоснована этапность в лечении БВ: I этап - санация влагалища, II - восстановление микробиоценоза влагалища (Радзинский В. Е. и др. Двухэтапная терапия вагинальных инфекций // Акушерство и гинекология. - 2011. - №5. - С. 78-81).

Известен двухэтапный способ лечения БВ, основанный на последовательном применении антимикробных препаратов и грязей и рапы озера Эльтон (патент РФ №2603720 C1, опубликован 27.11.2016). Первый этап направлен на уничтожение БВ-ассоциированных микроорганизмов, второй - на создания оптимальных условий для роста собственных лактобацилл. Недостатком данного способа является то, что антимикробные препараты не способны уничтожить метаболически не активные формы БВ-ассоциированных микроорганизмов. Другим недостатком является создание путем применения рапы гиперосмолярных условий, что неблагоприятно для вагинальных эпителиоцитов и для вагинальных лактобацилл.

Известны способы лечения БВ, основанные на последовательном применении антимикробных препаратов и пробиотиков или аутоштаммов вагинальных лактобацилл (Кира Е.Ф. Бактериальный вагиноз. - Санкт-Петербург, 2002. - 363 с.; патент РФ №2217155 C2, опубликован 27.11.2003). Недостатком этих способов является то, что несмотря на действия, направленные на восстановление нормальной микрофлоры, они не позволяют уничтожать метаболически неактивные микроорганизмы, ассоциированные с БВ.

В качестве прототипа был выбран способ лечения БВ путем одновременного применения антибиотика и пробиотика (Манухин И. Б. и др. Новые возможности терапии бактериального вагиноза: опыт одновременного применения антибиотика и пробиотика // Акушерство и гинекология. - 2020. - №6. - С. 105-114). Указанный способ позволяет, помимо уничтожения БВ, создавать условия, необходимые для восстановления собственной микрофлоры. Несмотря на то, что эффективность клинического выздоровления при использовании этого способа выше, чем при последовательном применении антимикробных препаратов и пробиотиков, возникновение рецидивов при его использовании все еще достаточно часто, что связано с неполным уничтожением метаболически неактивных БВ-ассоциированных микробов.

Целью, на достижение которой направлено заявляемое изобретение, является создание высокоэффективного способа лечения бактериального вагиноза.

Для достижения этой цели было выполнено исследование, в котором приняли участие 30 пациенток, страдающих рецидивирующим БВ. Диагноз устанавливался общепринятыми методами на основании критериев Амсела. У всех пациенток до проведения терапии получали образец цервико-вагинального содержимого для выделения культур БВ-ассоциированных микроорганизмов. Выделенные микроорганизмы были идентифицированы на основании морфологических, культуральных и биохимических характеристик. У выделенных БВ-ассоциированных микроорганизмов определяли изменение уровня продукции АТФ под влиянием метаболитов пробиотических штаммов.

В работе использовали 4 пробиотических штамма: 3 штамма Lactobacillus acidophilus, выделенные из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и один штамм Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенный из препарата Лактожиналь. Для получения метаболитов пробиотических штаммов, указанные штаммы выращивали в соответствующей жидкой питательной среде, затем клетки осаждали центрифугированием, а надосадочную жидкость стерилизовали фильтрованием.

Уровень продукции АТФ оценивали с помощью люциферин-люциферазной системы. Биолюминесценцию регистрировали на люминометре. Концентрацию АТФ выражали в мкмоль/мг белка.

На первом этапе исследования мы оценивали эффективность терапии БВ путем вагинального применения клиндамицина одновременно с пробиотиком в зависимости от способности пробиотика усиливать продукцию БВ-ассоциированными микроорганизмами АТФ. Все пациентки получали одинаковую терапию: клиндамицин и пробиотик вагинально в течение 7 суток и затем 7 суток только пробиотик. До проведения терапии от всех пациенток получали образец цервико-вагинального содержимого для выделения культур БВ-ассоциированных микроорганизмов, для которых определяли изменение продукции АТФ под влиянием пробиотика, применяемого в терапии. Эффективность терапии оценивали по наличию клинического и лабораторного выздоровления через 7 дней после завершения терапии. Наличие рецидивов БВ оценивали в течение 3 месяцев наблюдения.

В результате было установлено, что полное клиническое и лабораторное выздоровление через неделю после завершения терапии наблюдалось у 24 из 30 пациенток. У 4 из 24 пациенток, имевших признаки полного клинического и лабораторного выздоровления, в течение 3 месяцев возник рецидив БВ (табл. 1). Эффективность лечения составила 80%, частота рецидивов в течение 3 месяцев - 16,7%. Таким образом, эффективность лечения рецидивирующего БВ с учетом рецидивов на первом этапе составила 70%.

Во втором этапе исследования приняли участие пациентки, у которых на первом этапе не удалось излечить БВ, и те, у которых в течение 3 месяцев возник рецидив БВ.

Таблица 1

Пациентки, получающие терапию без учета влияния на продукцию АТФ пробиотика	Средние значения кратности изменения продукции АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмами под влиянием пробиотика	Клиническое и лабораторное выздоровление через 7 дней после завершения терапии	Наличие рецидива в течение 3 месяцев после завершения терапии
BV-1	4,2	да	нет
BV-2	2,7	да	нет
BV-3	3,2	да	нет
BV-4	1,3	нет	-
BV-5	3,5	да	нет
BV-6	2,7	да	нет
BV-7	1,6	да	да
BV-8	5,1	да	нет
BV-9	3,3	да	нет
BV-10	2,1	да	да
BV-11	2,5	да	нет
BV-12	2,9	да	нет
BV-13	1,1	нет	-
BV-14	1,0	нет	-
BV-15	2,8	да	нет
BV-16	3,2	да	нет
BV-17	1,4	нет	-
BV-18	2,9	да	нет
BV-19	3,1	да	нет
BV-20	1,5	да	да
BV-21	2,8	да	нет
BV-22	1,1	нет	-
BV-23	1,4	да	да
BV-24	2,9	да	нет
BV-25	3,5	да	нет
BV-26	2,3	да	нет
BV-27	2,1	да	нет
BV-28	3,0	да	нет
BV-29	1,1	нет	-
BV-30	2,7	да	нет

На втором этапе исследования мы оценивали эффективность терапии БВ путем вагинального применения клиндамицина одновременно с тем предварительно подобранным пробиотиком, который максимально усиливал продукцию АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмами, выделенными от конкретной пациентки. Эффективность терапии и наличие рецидивов оценивали аналогично первому этапу.

В результате второго этапа было установлено, что полное клиническое и лабораторное выздоровление через неделю после завершения терапии наблюдалось у всех десяти пациенток. У 1 из 10 пациенток, имевших признаки полного клинического и лабораторного выздоровления, в течение 3 месяцев возник рецидив БВ (табл. 2). Эффективность лечения БВ составила 100%, частота рецидивов в течение 3 месяцев - 10%. То есть эффективность лечения рецидивирующего БВ с учетом рецидивов на первом этапе составила 90%.

Таблица 2

Пациентки, получающие терапию с учетом влияния на продукцию АТФ пробиотика	Средние значения кратности изменения продукции АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмами под влиянием пробиотика	Клиническое и лабораторное выздоровление через 7 дней после завершения терапии	Наличие рецидива в течение 3 месяцев после завершения терапии
BV-4	2,8	да	нет
BV-7	2,8	да	нет
BV-10	3,4	да	нет
BV-13	3,1	да	нет
BV-14	3,9	да	нет
BV-17	2,2	да	нет
BV-20	1,6	да	да
BV-22	2,4	да	нет
BV-23	3,1	да	нет
BV-29	2,5	да	нет

Таким образом, предварительный подбор для терапии БВ пробиотика по его способности повышать продукцию АТФ у БВ-ассоциированных микроорганизмов позволил значительно повысить эффективность терапии и снизить число рецидивов БВ.

Сущность изобретения состоит в том, что для эффективного терапии БВ одновременного с антимикробными веществами вагинально применяют тот пробиотик, метаболиты которого максимально повышают уровень продукции АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмами, полученными от конкретной пациентки.

Способ осуществляется следующим образом.

До начала терапии БВ от конкретной пациентки получают образец цервико-вагинального содержимого.

Из полученного образца рутинными бактериологическими методами выделяют культуры БВ-ассоциированных микроорганизмов.

Метаболиты пробиотических штаммов, разрешенных к вагинальному применению, получают следующим образом: штаммы пробиотиков выращивают в соответствующей жидкой питательной среде, клетки осаждают центрифугированием, а надосадочную жидкость, содержащую метаболиты, стерилизуют фильтрованием.

Добавляя метаболиты разных пробиотических штаммов к культурам БВ-ассоциированных микроорганизмов конкретной пациентки, оценивают их влияние на продукцию АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмами.

Для терапии БВ выбирают тот пробиотик, метаболиты которого максимально усиливают продукцию АТФ БВ-ассоциированными микроорганизмам конкретной пациентки.

Примеры конкретного выполнения

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение. Примеры не должны рассматриваться как ограничивающие формулу изобретения каким бы ни было образом.

Пример №1

Пациентка В., страдает рецидивирующим БВ. В анамнезе три неудачных курса терапии БВ.

До начала терапии БВ от пациентки получили образец цервико-вагинального содержимого. Из полученного образца рутинными бактериологическими методами выделили в клинически значимом количестве культуры БВ-ассоциированных микроорганизмов: Gardnerella vaginalis и Mobiluncus spp.. К выделенным культурам добавили предварительно полученные метаболиты 4 пробиотических штаммов: 3 штаммов Lactobacillus acidophilus, выделенных из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и одного штамма Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь и оценили изменение уровня продукции АТФ Gardnerella vaginalis и Mobiluncus spp. Установили, что штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Лактонорм повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 1,3 раза, Mobiluncus spp в 1,9 раза; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Экофимин повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,1 раза, Mobiluncus spp в 2,5 раза; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Гинофлора повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 3,6 раза, Mobiluncus spp в 1,3 раза; штамм Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,0 раза, Mobiluncus spp в 1,9 раза. На основе полученных результатов для терапии БВ у пациентки В. был выбран препарат Экофемин, который максимально увеличивал продукцию АТФ и Gardnerella vaginalis и Mobiluncus spp..

Пациентка получила терапию препаратами клиндамицин и пробиотиком Экофемин вагинально в течение 7 суток и затем 7 суток только пробиотиком Экофемин. Через 7 дней после завершения терапии было зафиксировано полное клиническое и лабораторное выздоровление. Наблюдение в течение 3 месяцев пациентки В. рецидивов БВ не выявило.

Пример №2

Пациентка Х., страдает рецидивирующим БВ более 3 лет. В анамнезе многочисленные курсы терапии БВ.

До начала терапии БВ от пациентки получили образец цервико-вагинального содержимого. Из полученного образца рутинными бактериологическими методами выделили в клинически значимом количестве культуру Gardnerella vaginalis. К выделенной культуре добавили предварительно полученные метаболиты 4 пробиотических штаммов: 3 штаммов Lactobacillus acidophilus, выделенных из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и одного штамма Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь и оценили изменение уровня продукции АТФ Gardnerella vaginalis. Установили, что штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Лактонорм не повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Экофимин повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,4 раза; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Гинофлора повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 3,1 раза; штамм Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,5 раза. На основе полученных результатов для терапии БВ у пациентки Х. был выбран препарат Гинофлор, который максимально увеличивал продукцию АТФ Gardnerella vaginalis.

Пациентка получила терапию препаратами клиндамицин и пробиотиком Гинофлор вагинально в течение 7 суток и затем 7 суток только пробиотиком Гинофлор. Через 7 дней после завершения терапии было зафиксировано полное клиническое и лабораторное выздоровление. Наблюдение в течение 3 месяцев пациентки Х. рецидивов БВ не выявило.

Пример №3

Пациентка К., страдает БВ. В анамнезе один курс терапии метронидазолом.

До начала терапии БВ от пациентки получили образец цервико-вагинального содержимого. Из полученного образца рутинными бактериологическими методами выделили в клинически значимом количестве культуры БВ-ассоциированных микроорганизмов: Gardnerella vaginalis и Prevotella bivia. К выделенным культурам добавили предварительно полученные метаболиты 4 пробиотических штаммов: 3 штаммов Lactobacillus acidophilus, выделенных из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и одного штамма Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь и оценили изменение уровня продукции АТФ Gardnerella vaginalis и Prevotella bivia. Установили, что штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Лактонорм повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,3 раза, Prevotella bivia в 1,1 раза; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Экофимин повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 1,6 раза, Prevotella bivia в 1,8 раза; штамм Lactobacillus acidophilus из препарата Гинофлора повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 1,2 раза, Prevotella bivia в 1,0 раза; штамм Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь повышал уровень продукции АТФ Gardnerella vaginalis в 2,9 раза, Prevotella bivia в 3,1 раза. На основе полученных результатов для терапии БВ у пациентки К. был выбран препарат Лактожиналь, который максимально увеличивал продукцию АТФ и Gardnerella vaginalis и Prevotella bivia.

Пациентке К. была рекомендована терапия препаратами метранидазол и пробиотиком Лактожиналь вагинально в течение 7 суток и затем 7 суток только пробиотиком Лактожиналь. Однако по совету провизора пациентка заменила препарат Лактожиналь на Гинофлор, который значимо не влиял на продукцию АТФ ни Gardnerella vaginalis, ни Prevotella bivia. Через 7 дней после завершения терапии было зафиксировано полное клиническое и лабораторное выздоровление. Через 2 недели после завершения терапии у пациентки вновь возникли проявления БВ, что было подтверждено критериями Амсела. Повторный курс терапии был проведен с использованием ранее рекомендованного препарата Лактожиналь. Через 7 дней после завершения терапии было зафиксировано полное клиническое и лабораторное выздоровление. Наблюдение в течение 3 месяцев пациентки К. рецидивов БВ не выявило.

Claims (1)

1. Способ лечения бактериального вагиноза, заключающийся в том, что одновременно применяют антимикробный препарат для лечения бактериального вагиноза и пробиотик, отличающийся тем, что применяют предварительно подобранный пробиотик для вагинального применения, который способен максимально повышать уровень продукции аденозинтрифосфорной кислоты микроорганизмами, ассоциированными с бактериальным вагинозом - Gardnerella vaginalis, Mobiluncus spp. и Prevotella bivia, для чего до начала терапии бактериального вагиноза от пациентки получают образец цервико-вагинального содержимого; из полученного образца бактериологическими методами выделяют культуры микроорганизмов, ассоциированных с бактериальным вагинозом; к выделенным культурам последовательно добавляют предварительно полученные метаболиты 4-х пробиотических штаммов: 3 штамма Lactobacillus acidophilus, выделенных из препаратов Лактонорм, Экофемин, Гинофлор, и одного штамма Lactobacillus casei subsp. rhamnosus Lcr35, выделенного из препарата Лактожиналь, и оценивают изменение уровня продукции аденозинтрифосфорной кислоты.