RU2800877C2 - Агонист tlr8 - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к соединению, представленному формулой (I), его изомеру или его фармацевтически приемлемой соли, где атом углерода со знаком «*» может представлять собой хиральный атом углерода, присутствующий в форме одного (R) или (S) энантиомера или в форме, обогащенной одним энантиомером; X представляет собой СН; R₁ представляет собой Н; R₂ представляет собой С_1-6-алкил. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8, на основе соединения формулы (I). Технический результат – получено новое соединение и фармацевтическая композиция на его основе, которые могут найти применение в медицине для лечения вирусной инфекции, вызванной вирусом гепатита В. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 1 пр.

Description

Для настоящей заявки испрашивается преимущество и приоритет заявки на выдачу патента Китая № 201811094969.4, поданной в Национальное управление интеллектуальной собственности КНР 19 сентября 2018 года, содержание которой во всей своей полноте включено в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящая заявка относится к новому агонисту Toll-подобного рецептора 8 (TLR8) и, в частности, относится к соединению с формулой (I), его изомеру или его фармацевтически приемлемой соли; к фармацевтической композиции, содержащей данное соединение или его фармацевтически приемлемую соль; и к применению соединения с формулой (I) или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтической композиции для лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8.

Предпосылки изобретения

Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой важный класс белковых молекул, участвующих в неспецифическом иммунитете (врожденном иммунитете), а также являются мостом, связывающим неспецифический иммунитет и специфический иммунитет. TLR представляют собой одиночные трансмембранные некаталитические белки, которые экспрессируются преимущественно у ряда иммуноцитов, таких как дендритные клетки, макрофаги, моноциты, Т-клетки, В-клетки и NK-клетки. TLR способны распознавать молекулы с консервативными структурами, происходящими от микроорганизмов. Они могут распознавать микроорганизмы и активировать организм, запуская клеточные иммунные ответы, при прорыве микроорганизмами таких физических барьеров организма, как кожа и слизистые оболочки. Например, TLR1, TLR2, TLR4, TLR5 и TLR6 в основном распознают такие внеклеточные стимулы, как липополисахарид, липопептид и флагеллин бактерий, тогда как TLR3, TLR7, TLR8 и TLR9 реализуют свою функцию в клеточных эндосомах, такую как связывание со своими лигандами после фагоцитоза и растворение оболочки, а также распознавание нуклеиновых кислот микроорганизмов.

Среди различных подтипов TLR TLR8 обладает уникальными функциями: TLR8 экспрессируется в основном в моноцитах, макрофагах и миелоидных дендритных клетках. Сигнальный путь TLR8 может быть активирован бактериальными одноцепочечными РНК, низкомолекулярными агонистами и микроРНК. Активация TLR8 приводит к выработке полярных цитокинов Th1, таких как IL-12, IL-18, TNF-α и IFN-γ, и различных костимулирующих факторов, таких как CD80 и CD86. Эти цитокины могут активировать и усиливать врожденные и адаптивные иммунные ответы и обеспечивать благоприятный режим лечения заболеваний, в том числе направленный против вирусных, инфекционных, аутоиммунных, опухолевых и других заболеваний. Например, что касается гепатита B, активация TLR8 на антигенпрезентирующих клетках и других иммуноцитах в печени может активировать цитокины, такие как IL-12, который, в свою очередь, активирует специфические Т-клетки и NK-клетки, количество которых подавляется вирусом, тем самым восстанавливая противовирусный иммунитет в печени.

Селективный агонист TLR8 под названием VTX-2337 от компании VentiRX Pharmaceuticals впервые использован в клинической практике для оценки различных опухолей, а способом введения VTX-2337 является подкожная инъекция. Gilead Sciences сообщила о пероральном агонисте TLR8 для лечения хронической инфекции гепатита B, данный агонист в настоящее время находится на II фазе клинических испытаний. Однако его структура пока еще не раскрыта.

В патентной публикации WO2016141092 компании Gilead Sciences сообщается о ряде агонистов TLR8, таких как агонисты с формулой 1 и с AC₅₀ 0,02 мкМ, оказывающих агонистическое действие на TLR8, индуцируя выработку специфического цитокина IL-12p40 (данные приведены из таблицы 1 документа WO2016141092), где AC₅₀ представляет собой концентрацию соединения, соответствующую полумаксимальному агонистическому эффекту. В патентном документе WO2016141092 также сообщается о соединениях, содержащих пятичленные азот-содержащие гетероциклы, такие как соединения с формулой 2 и формулой 3. Однако соединения с формулой 2 и формулой 3 обладают низкой активностью в том, что касается агонистического действия в отношении TLR8 для индукции выработки специфического цитокина IL-12p40, при этом AC₅₀ составляет 21,5 мкМ и 3,4 мкМ соответственно (данные приведены из таблицы 1 WO2016141092). Формула 1, формула 2 и формула 3 являются соответственно Примерами 61, 55 и 56, которые раскрыты в WO2016141092.

Краткое описание изобретения

Настоящей заявкой предусмотрено соединение, представленное формулой (I), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль,

где

атом углерода со знаком «*» может представлять собой хиральный атом углерода, присутствующий в форме одного (R) или (S) энантиомера или в форме, обогащенной одним энантиомером;

X выбран из группы, состоящей из N и CH;

R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CN, C_1-6-алкила, C_3-6-циклоалкила, -N(R_a)(R_b) и -O(R_c), при этом C_1-6-алкил и C_3-6-циклоалкил необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_d;

R₂ представляет собой C_1-6-алкил, при этом C_1-6-алкил необязательно замещен посредством 1, 2 или 3 R_e;

каждый из R_a, R_b, R_c, R_d и R_e независимо выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂, CH₃, при этом CH₃, необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R; и

каждый R независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂,

Настоящей заявкой предусмотрено соединение, представленное формулой (I'), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль,

где

X выбран из группы, состоящей из N и CH;

R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CN, C_1-6-алкила, C_3-6-циклоалкила, -N(R_a)(R_b) и -O(R_c), при этом C_1-6-алкил и C_3-6-циклоалкил необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_d;

R₂ представляет собой C_1-6-алкил, при этом C_1-6-алкил необязательно замещен посредством 1, 2 или 3 R_e;

каждый из R_a, R_b, R_c, R_d и R_e независимо выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂, CH₃, при этом CH₃, необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R; и

каждый R независимо выбран из группы, состоящей из F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂,

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, каждый из R_a, R_b, R_c, R_d и R_e независимо выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂, CH₃,

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CN, CH₃, циклопентила, циклобутила, при этом CH₃, циклопентил и циклобутил необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_d.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CH₃ и

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₂ выбран из группы, состоящей из состоящей из при этом необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_e.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения, R₂ представляет собой

Настоящей заявкой также предусмотрено соединение, представленное показанной ниже формулой, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль,

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, предусмотрено соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль, выбранные из

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, каждый из R_a, R_b, R_c, R_d и R_e независимо выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, OH, CN, NH₂, CH₃, остальные переменные являются такими, как определено выше.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CN, CH₃, циклопентила, циклобутила, при этом CH₃, циклопентил и циклобутил необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_d.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₁ выбран из группы, состоящей из H, F, Cl, Br, I, CH₃ и остальные переменные являются такими, как определено выше.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, R₂ выбран из группы, состоящей из при этом необязательно замещены посредством 1, 2 или 3 R_e; остальные переменные являются такими, как определено выше.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления настоящего изобретения, R₂ представляет собой остальные переменные являются такими, как определено выше.

Некоторые другие варианты осуществления настоящей заявки можно получить путем взятия произвольной комбинации вышеуказанных переменных.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая раскрываемые в настоящем документе соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемую соль. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления, раскрываемая в настоящем документе фармацевтическая композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрен способ агонистического воздействия на TLR8, предусматривающий введение нуждающемуся в том субъекту (предпочтительно человеку) терапевтически эффективного количества раскрываемого в настоящем документе соединения, его изомера, его фармацевтически приемлемой соли или содержащей его фармацевтической композиции.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрен способ лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8, предусматривающий введение нуждающемуся в том субъекту (предпочтительно человеку) терапевтически эффективного количества раскрываемого в настоящем документе соединения, его изомера, его фармацевтически приемлемой соли или содержащей его фармацевтической композиции.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрено применение раскрываемого в настоящем документе соединения, его изомера, его фармацевтически приемлемой соли или содержащей его фармацевтической композиции при получении лекарственного препарата для лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрено применение раскрываемого в настоящем документе соединения, его изомера, его фармацевтически приемлемой соли или содержащей его фармацевтической композиции при лечении или предупреждении развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8.

Согласно другому аспекту, настоящей заявкой предусмотрено раскрываемое в настоящем документе соединение, его изомер, его фармацевтически приемлемая соль или содержащая его фармацевтическая композиция для применения при лечении или предупреждении развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, заболевание, поддающееся лечению посредством агонизма TLR8, представляет собой вирусную инфекцию.

В соответствии с некоторыми вариантами осуществления по настоящей заявке, вирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызываемую вирусом гепатита B (HBV).

Технические результаты

Раскрываемое в настоящем документе соединение обладает значительной агонистической активностью в отношении TLR8. Раскрываемое в настоящем документе соединение характеризуется требуемой агонистической активностью и специфической селективностью в отношении TLR8. Раскрываемое в настоящем документе соединение характеризуется требуемой активностью для индукции выработки цитокинов, специфичных для пути TLR8 (IL-12p40, IFN-γ). По результатам фармакокинетического исследования на мышах было видно, что раскрываемое в настоящем документе соединение характеризуется умеренной пероральной биодоступностью и умеренным лекарственным воздействием, и поэтому возможно пероральное введение. Агонист TLR8 является иммуномодулятором, и его чрезмерное воздействие может привести к иммунной гиперактивации организма, что приведет к непредсказуемым побочным эффектам.

Определения и описание

Если не указано иное, приведенные далее термины и фразы, применяемые в настоящем документе, имеют приведенные далее значения. Конкретный термин или конкретную фразу, если явно не определено иное, не следует истолковывать как неопределенные или неясные, а следует толковать в соответствии с их общим значением. При упоминания торгового наименования подразумевают отсылку к соответствующему коммерческому продукту или его действующему ингредиенту.

В контексте настоящего документа термин «фармацевтически приемлемый» применяют в отношении тех соединений, материалов, композиций и/или лекарственных форм, которые, с медицинской точки зрения, подходят для применения в контакте с тканями людей и животных, не вызывают чрезмерную токсичность, раздражение, аллергический ответ или другие проблемы или осложнения и соответствуют разумному соотношению польза/риск.

Термин «фармацевтически приемлемая соль» относится к соли раскрываемого в настоящем документе соединения, которая получена из соединения, содержащего определенные заместители, раскрываемые в настоящем документе, и относительно нетоксичной кислоты или относительно нетоксичного основания. Если раскрываемое в настоящем документе соединение содержит относительно кислую функциональную группу, то соль присоединения основания можно получить путем приведения нейтральной формы такого соединения в контакт с достаточным количеством основания в чистом растворе или подходящем инертном растворителе. Если раскрываемое в настоящем документе соединение содержит относительно основную функциональную группу, то соль присоединения кислоты можно получить путем приведения нейтральной формы такого соединения в контакт с достаточным количеством кислоты в чистом растворе или подходящем инертном растворителе. Примеры фармацевтически приемлемой соли присоединения кислоты включают соли неорганических или соли органических кислот.

Раскрываемые в настоящем документе фармацевтически приемлемые соли можно синтезировать из исходного соединения, имеющего кислотную или основную группу, с помощью традиционных химических способов. Как правило, такую соль можно получить в результате проведения реакции соединений в свободной кислотной или основной форме со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или органическом растворителе либо их смеси.

Термины «необязательный» или «необязательно» означают, что описанное далее событие или обстоятельство может иметь место, но не всегда. Настоящее описание включает случаи, когда событие или обстоятельство имеет место, и случаи, когда нет. Например, если этил необязательно замещен галогеном, это означает, что этил может быть незамещенным (CH₂CH₃), монозамещенным (например, CH₂CH₂F), полизамещенным (например, CHFCH₂F, CH₂CHF₂ и т. п.) или полностью замещенным (CF₂CF₃). Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что для любых групп, содержащих один или несколько заместителей, не включены любые заместители или схемы замещения, которые не могут существовать или не могут быть синтезированы в пространственном отношении. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что при замещении группы множеством заместителей количество заместителей может составлять 2, 3, 4, 5 или более, вплоть до того, что все участки, где может происходить замещение, являются замещенными. Например, если этил замещен несколькими атомами F, количество атомов F может составлять 2, 3, 4 или 5.

В контексте настоящего документа «C_m-n» означает, что данная часть имеет целое число атомов углерода в заданном диапазоне. Например, «C_1-6» означает, что группа может иметь 1 атом углерода, 2 атома углерода, 3 атома углерода, 4 атома углерода, 5 атомов углерода или 6 атомов углерода.

Раскрываемые в настоящем документе соединения могут иметь определенную геометрическую или стереоизомерную форму. В настоящем документе предусмотрены все такие соединения, включая цис- и транс-изомеры, (-)- и (+)- энантиомеры, (R)- и (S)-энантиомеры, диастереоизомеры, (D)-изомеры, (L)-изомеры и их рацемические смеси, а также другие их смеси, такие как обогащенная энантиомерами или диастереоизомерами смесь, все из которых входят в объем настоящей заявки. Такие заместители, как алкил, могут иметь дополнительный асимметричный атом углерода. Все такие изомеры и их смеси входят в объем настоящей заявки.

Если не указано иное, термин «энантиомер» или «оптический изомер» относится к стереоизомерам, которые являются зеркальными отображениями друг друга.

Если не указано иное, термин «цис-транс-изомер» или «геометрический изомер» описывает следствие неспособности свободно вращаться одинарной связи кольцевого атома углерода или двойной связи.

Если не указанно иное, термин «диастереоизомер» относится к стереоизомерам, каждая молекула которых имеет два или более хиральных центров, и которые не являются зеркальным отображением друг друга.

Если не указанно иное, «(D)» или «(+)» обозначает правостороннее вращение, «(L)» или «(-)» обозначает левостороннее вращение, а «(DL)» или «(±)» обозначают рацемизацию.

Если не указанно иное, абсолютная конфигурация стереогенного центра представлена клиновидной сплошной связью () и клиновидной пунктирной связью (), а относительная конфигурация стереогенного центра представлена прямой сплошной связью () и прямой пунктирной связью (). Волнистая линия () обозначает клиновидную сплошную связь () или клиновидную пунктирную связь (), или же волнистая линия () обозначает прямую сплошную связь () и прямую пунктирную связь ().

Раскрываемые в настоящем документе соединения могут присутствовать в конкретной форме. Если не указано иное, термин «таутомер» или «таутомерная форма» означает, что различные функциональные изомеры находятся в динамическом равновесии при комнатной температуре и могут легко превращаться друг в друга. Если возможны таутомеры (например, в растворе), то может быть достигнуто химическое равновесие таутомеров. Например, протонный таутомер, также известный как прототропный таутомер, включает взаимное превращение за счет переноса протона, такое как кето-енольная изомеризация и имин-енаминовая изомеризация. Валентный изомер включает взаимное превращение путем перегруппировки некоторых участвующих в формировании связи электронов. Конкретным примером кето-енольной таутомерии является взаимопревращение между пентан-2,4-дионом и 4-гидроксипент-3-ен-2-оном.

Описываемый в настоящем документе термин «изомер» охватывает стереоизомеры, цис-транс-изомеры и таутомеры.

Если не указано иное, термин «быть обогащенным по одному изомеру», «обогащенный по изомеру», «быть обогащенным по одному энантиомеру» или «обогащенный по энантиомеру» означает, что содержание одного из изомеров или энантиомеров составляет менее 100% и более или равно 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5%, 99,6%, 99,7%, 99,8% или 99,9%.

Если не указанно иное, термин «изомерный избыток» или «энантиомерный избыток» относится к разнице между относительным процентным содержанием двух изомеров или энантиомеров. Например, если содержание одного изомера или энантиомера составляет 90%, а содержание другого изомера или энантиомера составляет 10%, изомерный или энантиомерный избыток (значение «ee») составляет 80%.

Оптически активные (R)- и (S)-изомеры или D- и L-изомеры можно получить с помощью хирального синтеза или хиральных реагентов либо другими общепринятыми методиками. Если необходимо получить один вид энантиомера определенного соединения, описываемого в настоящем документе, искомый чистый энантиомер можно получить с помощью асимметричного синтеза или дериватизации с применением хирального вспомогательного элемента, при этом разделяют полученную смесь диастереоизомеров и отщепляют вспомогательную группу. Альтернативно, если молекула содержит основную функциональную группу (такую как аминогруппа) или кислотную функциональную группу (такую как карбоксильная группа), соединение вступает в реакцию с соответствующей оптически активной кислотой или соответствующим оптически активным основанием с образованием соли диастереоизомера, которую затем подвергают диастереоизомерному разделению посредством общеизвестных в настоящей области техники способов с получением чистого энантиомера. При этом, как правило, энантиомер и диастереоизомер выделяют с помощью хроматографии с использованием хиральной неподвижной фазы, необязательно в сочетании с химической дериватизацией (например, получением карбамата из амина).

Раскрываемое в настоящем документе соединение может содержать неестественную долю атомного изотопа по одному или нескольким атомам, входящим в состав соединения. Например, соединение можно пометить радиоизотопом, таким как тритий (³H), йод-125 (¹²⁵I) или C-14 (¹⁴C). В другом примере водород можно заместить дейтерием с образованием дейтерированного лекарственного средства, и связь, образованная дейтерием и углеродом, будет более прочной, чем связь, образованная обычным водородом и углеродом. По сравнению с недейтерированным лекарственным средством дейтерированное лекарственное средство обладает рядом преимуществ, которые заключаются в снижении побочного токсического действия, повышении стабильности, повышении эффективности, увеличении биологического периода полувыведения и др. Объемом настоящей заявки охватываются все изотопные варианты описываемого в настоящем документе соединения, независимо от того, радиоактивны они или нет. «Необязательный» или «необязательно» означает, что описанное далее событие или обстоятельство может иметь место, но не всегда, и описание включает случаи, когда такое событие или обстоятельство имеет место, и случаи, когда нет.

Термин «замещенный» означает, что один или несколько атомов водорода на конкретном атоме замещены заместителем(-ями), куда можно отнести варианты с дейтерием и водородом, при условии, что валентность конкретного атома является нормальной, а соединение с заместителями является стабильным. Если заместителем является кислород (т. е. =O), это означает, что замещены два атома водорода. В ароматических группах замещение кислородом не происходит. Термин «необязательно замещенный» означает, что атом может быть замещен заместителем или не быть им замещен. Если не указано иное, тип и количество заместителя могут быть произвольными, если это химически достижимо.

При появлении в составе или структуре соединения любой переменной (например, R) более одного раза, определение такой переменной в каждом случае является независимым. Таким образом, например, если группа имеет 0-2 заместителя R, группа может быть необязательно замещена максимум двумя R, а определение R в каждом случае является независимым. Кроме того, сочетание заместителя и/или его варианта допустимо лишь в том случае, если такое сочетание может привести к получению стабильного соединения.

Если не указано иное, термин «C_1-6-алкил» относится к линейной или разветвленной насыщенной углеводородной группе, содержащей 1-6 атомов углерода. К C_1-6-алкилу относится C_1-4-, C_1-3-, C_1-2-, C_2-6-, C_2-4-, C₆, C₅-алкил и тому подобное, и он может быть одновалентным (например, метилом), двухвалентным (например, метиленом) или поливалентным (например, метенилом). Примеры C_1-6-алкила включают без ограничения метил (Me), этил (Et), пропил (в том числе н-пропил и изопропил), бутил (в том числе н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил), пентил (в том числе н-пентил, изопентил и неопентил), гексил и тому подобное.

Если не указано иное, «C_3-6-циклоалкил» относится к насыщенной циклической углеводородной группе, состоящей из 3-6 атомов углерода, включая моноциклические и бициклические кольцевые системы. К C_3-6-циклоалкилу относятся C_3-5-циклоалкил, C_4-5-циклоалкил, _5-6-циклоалкил и тому подобное, и он может быть одновалентным, двухвалентным или поливалентным. Примеры C_3-6-циклоалкила включают без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и тому подобное.

Термин «фармацевтическая композиция» относится к смеси, состоящей из одного или нескольких раскрываемых в настоящем документе соединений или их фармацевтически приемлемых солей и фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества. Фармацевтическая композиция предназначена для облегчения введения соединения органическому объекту.

Термин «фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества» относится к веществам, которые не оказывают значительного раздражающего действия на органический объект и не ухудшают биологическую активность и свойства действующего соединения. Специалистам в настоящей области техники хорошо известны подходящие вспомогательные вещества, такие как углеводы, воск, водорастворимые и/или набухающие в воде полимеры, гидрофильный или гидрофобный материал, желатин, жидкое масло, растворитель и вода.

Термин «лечение» означает введение описываемого в настоящем документе соединения или состава для ослабления или устранения заболевания или одного или нескольких связанных с данным заболеванием симптомов и включает:

(i) подавление заболевания или болезненного состояния, т. е. остановку его развития; и

(ii) облегчение заболевания или болезненного состояния, т. е. индукцию его регресса.

Термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству раскрываемого в настоящем документе соединения для (i) лечения конкретного заболевания, патологического состояния или нарушения или (ii) облегчения, ослабления или устранения одного или нескольких симптомов конкретного заболевания, патологического состояния или нарушения. Количество раскрываемого в настоящем документе соединения, составляющее «терапевтически эффективное количество», варьирует в зависимости от соединения, болезненного состояния и его тяжести, схемы приема и возраста подлежащего лечению млекопитающего, но специалисты в настоящей области техники без труда смогут определить его, руководствуясь своими знаниями и настоящим раскрытием.

Термин «предупреждение» означает введение описываемого в настоящем документе соединения или состава для предупреждения заболевания или одного или нескольких связанных с данным заболеванием симптомов и включает предупреждение возникновения заболевания или болезненного состояния у млекопитающего, особенно когда такое млекопитающее предрасположено к развитию данного заболевания, но оно все еще не было диагностировано у него.

В настоящей заявке используют следующие сокращения:

Pd/C	Катализатор Pd/C, содержащий 10 масс. % палладия
DCM	Дихлорметан
THF	Тетрагидрофуран
Boc	Трет-бутилоксикарбонил, защитная группа для аминогруппы
Cbz	Бензилоксикарбонил, защитная группа для аминогруппы
DMF	N,N-диметилформамид
TFA	Трифторуксусная кислота
PE	Простой петролейный эфир
DMSO	Диметилсульфоксид
EtOH	Этиловый спирт
MeOH	Метанол
HOAc	Уксусная кислота
Trt	Трифенилметил
CbzCl	Бензилхлорформиат
DIPEA	Диизопропилэтиламин
SiO2	Порошок силикагеля, 100-200 меш, для колоночной хроматографии
psi	Сила в фунтах на квадратный дюйм, единица давления
p-HPLC	Препаративная высокоэффективная жидкостная хроматография для очистки соединений

Применяемые в контексте настоящего документа растворители коммерчески доступны и не требуют дополнительной очистки. Реакцию обычно проводят в безводном растворителе в условиях атмосферы азота. Данные протонного ядерного магнитного резонанса зарегистрированы на спектрометре Bruker Avance III 400 (400 МГц), а химические сдвиги зарегистрированы в ppm в слабом поле от тетраметилсилана. Масс-спектры определены на приборе Agilent 1200 series plus 6110 (&1956A). LC/MS или Shimadzu MS включает DAD: SPD-M20A (LC) и детектор Shimadzu Micromass 2020. Масс-спектрометр оснащен источником ионов с электрораспылением (ESI), работающим в положительном или отрицательном режиме.

Систему Shimadzu LC20AB, оснащенную автоматическим пробоотборником Shimadzu SIL-20A и детектором Shimadzu DAD: SPD-M20A, использовали для анализа высокоэффективной жидкостной хроматографией с хроматографической колонкой Xtimate C18 (3 мкм наполнитель, спецификация: 2,1 × 300 мм).

Конкретные варианты осуществления

Настоящая заявка ниже более подробно описана с помощью примеров. Тем не менее, это никоим образом не подразумевает приносящее ущерб ограничение для объема настоящей заявки. Несмотря на то, что в настоящем документе была подробно описана настоящая заявка, а также были раскрыты конкретные примеры, специалистам в настоящей области техники будет очевидно, что в данные конкретные варианты осуществления можно внести различные изменения и модификации без отступления от сущности и объема настоящей заявки.

Пример 1

Получение промежуточного соединения 1-10:

Стадия A: соединение 1-1 (50 г, 412,54 ммоль) и тетраэтилтитанат (94,10 г, 412,54 ммоль, 85,55 мл) растворяли в THF (500 мл) при 20-30°C и к раствору добавляли 2-гексанон (41,32 г, 412,54 ммоль, 51,01 мл). Реакционную смесь подогревали до 65°C и перемешивали в течение 48 часов и полученную реакционную смесь использовали непосредственно на следующей стадии.

Стадия B: реакционную смесь, полученную на стадии A, охлаждали до комнатной температуры, добавляли THF (1000 мл), затем добавляли аллилбромид (196,33 г, 1,62 моль) и порционно медленно добавляли порошок цинка (53,06 г, 811,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 20-30°C в течение 12 часов в условиях атмосферы азота. Реакционную смесь фильтровали через диатомит и к фильтрату добавляли насыщенный солевой раствор (100 мл), перемешивали и подвергали фильтрации через диатомит. Полученный в результате фильтрат сушили на роторном испарителе. Остаток подвергали экстракции этилацетатом (100 мл). Отделенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (300 мл × 1), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, PE/EtOAc = 15/1 - 5/1) с получением соединения 1-3. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 5,96 - 5,75 (m, 1H), 5,23-5,08 (m, 2H), 3,20 (s, 1H), 2,39-2,20 (m, 2H), 1,74 (br s, 1H), 1,56-1,42 (m, 2H), 1,40-1,15 (m, 14H), 0,96-0,86 (m, 3H).

Стадия C: соединение 1-3 (15 г, 61,12 ммоль) растворяли в метаноле (150 мл), а раствор охлаждали до 0°C и в него медленно добавляли диоксановый раствор соляной кислоты (4 M, 91,68 мл) при 0-20°С. Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 2 часов. Реакционную смесью немедленно концентрировали в условиях пониженного давления с получением соединения 1-4.

Стадия D: соединение 1-4 (гидрохлорид, 13 г, 73,15 ммоль) и бикарбонат натрия (55,31 г, 658,36 ммоль) растворяли в диоксане (90 мл) и H₂O (60 мл) и раствор охлаждали до 0°C, а затем медленно по каплям добавляли CbzCl (74,87 г, 438,91 ммоль, 62,40 мл). Реакционную смесь нагревали до 20-30°C, перемешивали в течение 2 часов и подвергали экстракции этилацетатом (100 м × 2). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (150 мл × 1), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, PE/EtOAc = от 1/0 до 100/1) с получением соединения 1-5. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,30-7,26 (m, 5H), 5,76-5,62 (m, 1H), 5,08-4,91 (m, 4H), 2,47-2,34 (m, 1H), 2,32-2,20 (m, 1H), 1,72-1,57 (m, 1H), 1,50-1,42 (m, 1H), 1,30-1,10 (m, 7H), 0,76-0,76 (m, 1H), 0,76-0,76 (m, 1H), 0,82 (t, J = 7,0 Гц, 2H).

Стадия E: соединение 1-5 (20,8 г, 75,53 ммоль) растворяли в ацетонитриле (100 мл), H₂O (150 мл) и тетрахлорметане (100 мл), раствор охлаждали до 0°C и в него медленно добавляли периодат натрия (64,62 г, 302,12 ммоль) с последующим добавлением тригидрата трихлорида рутения (394,99 мг, 1,51 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 25°C и перемешивали в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали, а фильтрат подвергали экстракции с помощью DCM (200 мл × 1). Органическую фазу последовательно промывали насыщенным водным раствором сульфита натрия (200 мл × 1) и насыщенным солевым раствором (200 мл × 1), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 1-6, которое непосредственно использовали на следующей стадии. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,40-7,35 (m, 5H), 5,19 (s, 1H), 5,08 (s, 2H), 2,89 (br d, J = 14,5 Гц, 1H), 2,69 (br d, J = 14,4 Гц, 1H), 1,90-1,77 (m, 1H), 1,74-1,62 (m, 1H), 1,43-1,20 (m, 7H), 0,90 (t, J = 6,9 Гц, 3H).

Стадия F: соединение 1-6 (20 г, 68,18 ммоль) и триэтиламин (10,35 г, 102,26 ммоль, 14,23 мл) растворяли в THF (250 мл) и к раствору по каплям добавляли изобутилхлорформиат (9,78 г, 71,59 ммоль, 9,40 мл) при -10°C в условиях атмосферы азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при температуре от -10-0°C. К реакционной смеси медленно добавляли водный раствор аммиака (63,70 г, 454,41 ммоль, 70 мл, 25%) и перемешивали при 0-5°C в течение 30 минут. Реакционную смесь концентрировали в условиях пониженного давления и подвергали экстракции этилацетатом (200 мл × 1). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (100 мл × 2), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, PE/EtOAc = 10/1 - 1/1) с получением соединения 1-7. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,41-7,28 (m, 5H), 5,62 (br s, 1H), 5,30-5,12 (m, 2H), 5,11-5,01 (m, 2H), 2,76 (d, J = 13,2 Гц, 1H), 2,44 (d, J = 13,3 Гц, 1H), 1,85-1,74 (m, 1H), 1,73-1,62 (m, 3H), 1,39-1,29 (m, 5H), 0,90 (t, J = 7,0 Гц, 3H). LCMS (ESI) m/z: 293,3 [M+H]⁺.

Стадия G: соединение 1-7 (15,34 г, 52,47 ммоль) и диметилацеталь N,N-диметилформамида (134,55 г, 1,13 моль, 150 мл) перемешивали при 120°C в течение 2 часов, концентрировали при пониженном давлении и растворяли в уксусной кислоте (250 мл) и к раствору медленно добавляли гидрат гидразина (25,75 г, 504,09 ммоль, 25 мл, 98%). Реакционную смесь перемешивали при 90°C в течение 2 часов в условиях атмосферы азота. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, добавляли H₂O (400 мл) и подвергали экстракции с помощью DCM (200 мл × 2). Органические фазы объединяли, промывали насыщенным солевым раствором (200 мл × 2), сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного соединения 1-8. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,95 (s, 1H), 7,43-7,29 (m, 5H), 5,08 (s, 2H), 4,90 (br s, 1H), 3,42 (br d, J = 13,9 Гц, 1H), 3,12 (d, J = 14,3 Гц, 1H), 1,87-1,77 (m, 1H), 1,68-1,58 (m, 1H), 1,41-1,17 (m, 7H), 0,90 (br t, J = 6,5 Гц, 3H). LCMS (ESI) m/z: 317,2 [M+H]⁺.

Стадия H: соединение 1-8 (15,20 г, 48,04 ммоль) и DIPEA (12,42 г, 96,08 ммоль, 16,74 мл) растворяли в DCM (160 мл) и к раствору медленно добавляли трифенилхлорметан (20,09 г, 72,06 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 2 часов. К реакционной смеси добавляли H₂O (100 мл), добавляли 2 н. разбавленную соляную кислоту для корректировки pH (7-8) и подвергали экстракции с помощью DCM (100 мл × 1). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (100 мл × 2), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (SiO₂, PE/EtOAc = 20/1 - 5/1) с получением соединения 1-9. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,89 (s, 1H), 7,37-7,27 (m, 14H), 7,18-7,07 (m, 6H), 5,72 (br s, 1H), 5,16-4,93 (m, 2H), 3,07 (d, J = 14,2 Гц, 1H), 2,90 (d, J = 14,2 Гц, 1H), 1,80-1,61 (m, 4H), 1,33 (s, 3H), 0,90-0,84 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 559,3 [M+H]⁺.

Стадия I: соединение 1-9 (12,75 г, 22,82 ммоль) растворяли в изопропаноле (300 мл) и к раствору добавляли Pd/C (6 г) в условиях атмосферы азота. Суспензию дегазировали под вакуумом и трижды продували водородом, а затем перемешивали при 25°C в течение 16 часов в условиях атмосферы водорода (15 psi). Реакционную смесь фильтровали через диатомит и промывали с помощью DCM (300 мл), а фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 1-10. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ7,91 (s, 1H), 7,37-7,28 (m, 9H), 7,17-7,11 (m, 6H), 2,87 (s, 2H), 1,45-1,24 (m, 6H), 1,12 (s, 3H), 0,92-0,84 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 425,2 [M+H]⁺.

Синтез Примера 1:

Стадия A: соединение 1-10 (1,91 г, 4,50 ммоль) и соединение 1-11 (900 мг, 4,50 ммоль) растворяли в THF (9 мл) и к раствору добавляли DIPEA (9,00 ммоль, 1,57 мл). Реакционную смесь перемешивали при 70°C в течение 3 часов в условиях атмосферы азота. Реакционную смесь концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного соединения 1-12. LCMS (ESI) m/z: 588,42 [M+H]⁺.

Стадия B: неочищенное соединение 1-12 (3,60 г, 6,12 ммоль) и 2,4-диметоксибензиламин (3,01 мг, 18,00 ммоль, 2,71 мл) растворяли в 1,4-диоксане (30 мл) и к раствору добавляли DIPEA (8,99 ммоль, 1,57 мл) в условиях атмосферы азота. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 12 часов. Для разделения жидкостей к реакционной смеси добавляли воду (20 мл) и этилацетат (50 мл). Органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в условиях пониженного давления с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (SiO₂, PE/MeOH = 100/1 - 15/1) с получением соединения 1-13. LCMS (ESI) m/z: 719,7 [M+H]⁺.

Стадия C: соединение 1-13 (2,00 г, 2,78 ммоль) и триэтилсилан (970,50 мг, 8,35 ммоль, 1,33 мл) растворяли в TFA (41,81 мл) и раствор перемешивали при 28°C в течение 12 часов. Реакционную смесь немедленно концентрировали в условиях пониженного давления и подвергали очистке с помощью p-HPLC (колонка: Phenomenex luna C18 250×50мм×10мкм; текучесть: [вода (0,05% HCl)-ацетонитрил]; % ацетонитрила: 10-40%, 28 минут, 50% мин.) с получением гидрохлорида Примера 1. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ9,15 (s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,59 (d, J = 5,6 Гц, 1H), 8,26 (d, J = 5,5 Гц, 1H), 4,11 (d, J = 14,8 Гц, 1H), 3,53 (d, J = 14,9 Гц, 1H), 2,60 (dt, J = 4,1, 12,8 Гц, 1H), 1,79 (dt, J = 4,2, 12,8 Гц, 1H), 1,58 (s, 3H), 1,52-1,19 (m, 4H), 0,92 (t, J =7,2 Гц, 3H). LCMS (ESI) m/z: 327,1 [M+H]⁺.

Экспериментальный пример 1. Скрининг in vitro рецептор-связывающей активности человеческого Toll-подобного рецептора 7 (TLR7) и человеческого Toll-подобного рецептора 8 (TLR8)

Клеточные линии HEK-Blue™ hTLR7 (каталожный № hkb-htlr7) и HEK-Blue™ hTLR8 (каталожный № hkb-htlr8), использованные в данном эксперименте, были приобретены у InvivoGen. Создавали две клеточные линии путем стабильной совместной трансфекции линии клеток эмбриональной почки человека 293 посредством hTLR7 или hTLR8 и путем индукции экспрессии репортерного гена секретируемой щелочной фосфатазы (SEAP), при этом репортерный ген SEAP находился под регуляцией промотора IFN-β. Промотор был слит с сайтами связывания NF-κB и AP-1. Агонист hTLR7 или hTLR8 может активировать NF-κB и AP-1 и индуцировать экспрессию и секрецию SEAP. Агонистическую активность соединения в отношении рецепторов hTLR7 и hTLR8 выявляли путем измерения уровня экспрессии SEAP с использованием реагента QUANTI-Blue™.

Процедуры проведения эксперимента были следующими:

1. Соединение добавляли в планшет для клеток в 3-кратном градиенте с конечными концентрациями, составлявшими 5000 нМ, 1667 нМ, 556 нМ, 185 нМ, 62 нМ, 21 нМ, 6,9 нМ, 2,3 нМ, 0,76 нМ и 0,25 нМ соответственно, и в случае каждой концентрации брали две дублирующиеся лунки. В каждую лунку с отрицательным контролем добавляли 1 мкл DMSO.

2. Клетки, культивированные в колбе Т150, извлекали из CO₂ термостата и удаляли супернатант клеточной культуры. Полученные в результате клетки промывали один раз фосфатно-солевым буферным раствором Дульбекко (DPBS). В колбу добавляли приблизительно 10 мл культуральной среды и постукивали для отделения клеток. Полученную в результате клеточную массу аккуратно перемешивали пипетированием до однородного состояния. Подсчитывали количество клеток и с помощью культуральной среды суспензию клеток доводили до 500000 клеток/мл. Затем в каждую лунку 96-луночного планшета, содержащую соединение, добавляли 100 мкл разведенных клеток (50000 клеток/лунка).

3. Соединение и клетки инкубировали в термостате при 37°C, 5% CO₂ в течение 24 часов.

4. Анализ активности соединения: 20 мкл индуцированного клеточного супернатанта из каждой лунки добавляли в планшет для культивирования клеток, содержащий 180 мкл реагента QUANTI-Blue™, и после инкубации при 37°C в течение 1 часа для каждой лунки с помощью многофункционального микропланшетного ридера анализировали оптическую плотность поглощения с длиной волны 650 нм (OD₆₅₀).

5. Анализ активности на клетках: люциферазный сигнал (RLU) детектировали с помощью многофункционального микропланшетного ридера в соответствии со способом, описанным в инструкциях ATPlite 1Step.

6. Анализ данных: активность соединения: значения OD₆₅₀ анализировали с помощью программного обеспечения GraphPad Prism и экстраполировали кривые зависимости «доза-эффект» соединения для расчета значений EC₅₀ (полумаксимальной эффективной концентрации) у данного соединения.

Результаты экспериментов: результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1

Тестируемое соединение	EC50 TLR8 человека (мкМ)	EC50 TLR7 человека (мкМ)
Гидрохлорид примера 1	0,003	33,33

Вывод: раскрываемое в настоящем документе соединение характеризуется требуемой агонистической активностью в отношении TLR8 и в том, что касается TLR8 и TLR7, обладает специфической селективностью в отношении TLR8.

Экспериментальный пример 2. Процедура эксперимента для мононуклеаров периферической крови

TLR8 является рецептором системы врожденного иммунитета, воспринимающим экзогенные патогены, и может распознавать экзогенную вирусную одноцепочечную РНК и вызывать высвобождение ряда цитокинов, таких как TNF-α, IL-12, IFN-γ, индуцируя противовирусный иммунный ответ; TLR7 является еще одним рецептором системы врожденного иммунитета, воспринимающим экзогенные патогены, и при активации вызывает выработку прежде всего таких противовирусных цитокинов, как IFN-α. В этом эксперименте потенциальное соединение агониста TLR8 применяли для стимуляции мононуклеаров периферической крови (hPBMC) и измеряли уровни TNF-α, IL-12p40, IFN-γ и IFN-α, отражающие активацию соединением рецептора TLR8 и его селективность в отношении TLR8/TLR7.

Процедуры проведения эксперимента были следующими:

1. У здоровых добровольцев производили забор свежей крови и подвергали антикоагуляции с помощью антикоагулянтной пробирки с EDTA-K2 (каталожный № BD-8516542);

2. Клетки hPBMC в слое с мутностью по типу облаков среднего яруса отделяли после центрифугирования в градиенте плотности фиколла и дважды промывали посредством RPMI1640 (источник: Gibco, каталожный № 224400-089), содержащей 10% сыворотки, и ресуспендировали культуральную среду до 10 мл. После подсчета количества клеток с помощью счетчика клеток Vi-cell концентрацию клеточной суспензии доводили до 2×10⁶/мл;

3. Соединение растворяли в DMSO до 100 мМ и разводили посредством DMSO до 50 мМ и 2 мМ, которые служили начальными концентрациями. Затем каждый раствор последовательно разводили в 3-кратном градиенте (образец с предыдущей концентрацией (5 мкл) + DMSO (10 мкл)) с получением 8 градиентов. Полученные в результате растворы соответственно подвергали 500-кратному разведению культуральной средой с получением рабочих растворов соединения;

4. 100 мкл суспензии hPBMC и 100 мкл рабочего раствора соединения добавляли в каждую лунку 96-луночного планшета с U-образным дном, где конечные концентрации составляли 2000 нМ, 666,7 нМ, 222,2 нМ, 74,1 нМ, 24,7 нМ, 8,2 нМ, 2,7 нМ и 0,9 нМ соответственно, и инкубировали в течение 24 часов. Затем собирали супернатанты и подвергали их криоконсервации при -20°C для детекции цитокинов TNF-α, IFN-γ и IL-12p40. Другую группу образцов соединений, где конечные концентрации составляли 50 мкМ, 16,7 мкМ, 5,6 мкМ, 1,9 мкМ, 0,6 мкМ, 0,2 мкМ, 0,1 мкМ и 0,02 мкМ соответственно, инкубировали в течение 24 часов. Собирали супернатанты и подвергали их криоконсервации при -20°C для детекции цитокинов IFN-α;

5. IL-12p40, TNF-α и IFN-γ в супернатанте детектировали с помощью проточно-цитометрического анализа с использованием микроносителей (CBA); IFN-α в клеточном супернатанте детектировали с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

6. Анализ данных: активность соединения: значения EC₅₀ (полумаксимальной эффективной концентрации) анализировали с помощью программного обеспечения GraphPad Prism и экстраполировали кривые зависимости «доза-эффект» соединения для расчета значений EC₅₀ у данного соединения.

Результаты экспериментов: результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2

Тестируемое соединение	IL-12p40 EC50 (нМ)	IFN-γ EC50 (нМ)	TNF-α EC50 (нМ)	IFN-α EC50 (нМ)
Гидрохлорид примера 1	26	29	105	2800

Вывод: раскрываемое в настоящем документе соединение обладает требуемой индукционной активностью в отношении специфических для пути TLR8 цитокинов IL-12p40, TNF-α и IFN-γ и относительно низкой индукционной активностью в отношении специфического для пути TLR7 цитокина IFN-α, что свидетельствует о требуемой специфической селективности в отношении активации пути TLR8.

Экспериментальный пример 3. Фармакокинетическое исследование на мышах

Данный эксперимент был предназначен для оценки фармакокинетических свойств соединения после однократной внутривенной инъекции или внутрижелудочного введения мышам. Внутривенная инъекция: тестируемое соединение готовили в виде прозрачного раствора 0,5 мг/мл при помощи среды, представлявшей собой 5% DMSO/5% гидроксистеарата полиэтиленгликоля-15/90% воды; внутрижелудочное введение: тестируемое соединение готовили в виде суспензии 2 мг/мл, где среда представляла собой 0,5% карбоксиметилцеллюлозы натрия/0,2% твина 80/99,3% воды.

Концентрацию тестируемого соединения в плазме определяли с помощью тандемной масс-спектрометрии с высокоэффективной жидкостной хроматографией (LC-MS/MS). Время удержания соединения и внутреннего стандарта, получение хроматограмм и интегралы хроматограмм обрабатывали с помощью программного обеспечения Analyst (Applied Biosystems), а статистические данные обрабатывали с помощью программного обеспечения Watson LIMS (Thermo Fisher Scientific) или Analyst (Applied Biosystems).

Значения концентрации в плазме обрабатывали с помощью некомпартментной модели из WinNonlin™ версии 6.3 (Pharsight, Маунтин-Вью, Калифорния), фармакокинетического программного обеспечения, а фармакокинетические параметры рассчитывали с помощью линейно-логарифмического метода трапеций.

Соответствующие фармакокинетические параметры у мышей при внутривенной инъекции 1 мг/кг и пероральном внутрижелудочном введении 5 мг/кг гидрохлорида Примера 1 представлены в приведенной ниже таблице 3.

Таблица 3. Соответствующие фармакокинетические параметры у мышей

Внутривенная инъекция (1 мг/кг)	Cl (мл/мин/кг)	90,2
	Vdss (л/кг)	1,75
	t1/2 (час)	0,25
	AUC0-last (нМ. ч)	450
Пероральное внутрижелудочное введение (5 мг/кг)	Tmax (час)	0,5
	Cmax (нМ)	421
	AUC0-last (нМ. ч)	624
Биодоступность (F%)		27,7

Claims (20)

1. Соединение, представленное формулой (I), его изомер или его фармацевтически приемлемая соль

где

атом углерода со знаком «*» может представлять собой хиральный атом углерода, присутствующий в форме одного (R) или (S) энантиомера или в форме, обогащенной одним энантиомером;

X представляет собой СН;

R₁ представляет собой Н;

R₂ представляет собой С_1-6-алкил.

2. Соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где R₂ выбран из группы, состоящей из

3. Соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 2, где R₂ представляет собой

4. Соединение, представленное указанной ниже формулой, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль

5. Соединение, его изомер или его фармацевтически приемлемая соль по п. 4, выбранные из

6. Фармацевтическая композиция для лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8, содержащая эффективное количество соединения, его изомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5.

7. Способ агонистического воздействия на TLR8, предусматривающий введение нуждающемуся в том субъекту терапевтически эффективного количества соединения, его изомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5 или фармацевтической композиции по п. 6.

8. Фармацевтическая композиция по п. 6, где заболевание, поддающееся лечению посредством агонизма TLR8, представляет собой вирусную инфекцию.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где вирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызываемую вирусом гепатита В.

10. Применение соединения, его изомера или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-5 при получении лекарственного препарата для лечения или предупреждения развития заболевания, поддающегося лечению посредством агонизма TLR8.

11. Применение по п. 10, где заболевание, поддающееся лечению посредством агонизма TLR8, представляет собой вирусную инфекцию.

12. Применение по п. 11, где вирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызываемую вирусом гепатита В.