RU2795146C2

RU2795146C2 - Лиганды цереблона и бифункциональные соединения, содержащие их

Info

Publication number: RU2795146C2
Application number: RU2019123462A
Authority: RU
Inventors: Эндрю П. КРЮ; Михаэль БЕРЛИН; Ханьцин Дун; Кейт Р. ХОРНБЕРГЕР; Иминь Цянь; Лоуренс Б. СНАЙДЕР; Цзин ВАН; Курт Циммерманн
Original assignee: Эрвинэс Оперейшнс, Инк.
Priority date: 2017-01-31
Filing date: 2018-01-31
Publication date: 2023-04-28

Abstract

Группа изобретений относится к области фармацевтической химии, а именно к соединению формулы CLM-L-PTM, его фармацевтически приемлемой соли, энантиомеру, стереоизомеру и конкретным соединениям, указанным в формуле изобретения, фармацевтическим композициям и применениям на их основе. В формуле CLM-L-PTM PTM представляет собой фрагмент, связывающийся с андрогеновым рецептором, и имеет структуру, выбранную из (ABM-b) и (ABM-d); CLM имеет химическую структуру, выбранную из (r), (e), (o), (p`), (bc), (bd), и представляет собой лиганд цереблона; L представляет собой химический линкерный фрагмент, ковалентно связывающий CLM и PTM; значения L и его заместителей, Q₁, Q₂, Q₃, Q₄, Q₅ и заместителей (ABM-b), (ABM-d), (r), (e), (o), (p`), (bc) и (bd) представлены в формуле изобретения. Технический результат: химерные соединения формулы CLM-L-PTM, индуцирующие разрушение целевого белка в клетке. 7 н. и 23 з.п. ф-лы, 1 ил., 6 табл.

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящее изобретение испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/452972, поданной 31 января 2017 года, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

[0002] Заявка на патент США с регистрационным №15/230354, поданная 5 августа 2016 года, опубликованная в виде публикации заявки на патент США №2017/0065719; и заявка на патент США с регистрационным №15/801243, поданная 1 ноября 2017 года; и заявка на патент США 15/206497, поданная 11 июля 2016 года; и заявка на патент США 15/209648, поданная 13 июля 2016 года; и заявка на патент США с регистрационным №15/730728, поданная 11 октября 2017 года; заявка на патент США с регистрационным №15/829541, поданная 1 декабря 2017 года; заявка на патент США с регистрационным №15/881318, поданная 26 января 2018 года; и заявка на патент США с регистрационным №14/686640, поданная 14 апреля 2015 года, опубликованная в виде публикации заявки на патент США №2015/0291562; и заявка на патент США с регистрационным №14/792414, поданная 6 июля 2015 года, опубликованная в виде публикации заявки на патент США №2016/0058872; и заявка на патент США с регистрационным №14/371956, поданная 11 июля 2014 года, опубликованная в виде публикации заявки на патент США №2014/0356322; и заявка на патент США с регистрационным №15/074820, поданная 18 марта 2016 года, опубликованная в виде публикации заявки на патент США №2016/0272639, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте. Кроме того, все источники, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0003] В данном описании представлены соединения на основе имида, предусматривающие содержащие его бифункциональные соединения, и связанные с ними способы применения. Бифункциональные соединения применяют в качестве модуляторов направленного убиквитинирования, в частности в отношении ряда полипептидов и других белков, которые разрушаются и/или иным образом ингибируются с помощью бифункциональных соединений в соответствии с настоящим изобретением.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0004] Большинство низкомолекулярных лекарственных средств связывают ферменты или рецепторы в плотных и четко определенных карманах. С другой стороны, общеизвестно, что осуществить нацеливание белок-белковых взаимодействий с применением малых молекул является сложным из-за их большой поверхности контакта и вовлечения мелких бороздок или плоских поверхностей соприкосновения. Е3-убиквитинлигазы (из которых сотни известны у людей) придают субстратную специфичность для убиквитинирования и, следовательно, являются более привлекательными терапевтическими мишенями, чем обычные ингибиторы протеасом из-за их специфичности в отношении определенных белковых субстратов. Разработка лигандов для Е3-лигаз оказалась сложной, частично из-за того факта, что они должны нарушать белок-белковые взаимодействия. Однако недавние разработки позволили получить специфические лиганды, которые связываются с такими лигазами. Например, с момента открытия нутлинов, первых низкомолекулярных ингибиторов Е3-лигазы, сообщалось о дополнительных соединениях, которые нацеливаются на Е3-лигазы, однако данная область остается недостаточно развитой.

[0005] Одна Е3-лигаза с терапевтическим потенциалом представляет собой онкосупрессор болезни Гиппеля-Линдау (VHL). VHL содержит субъединицу, осуществляющую распознавание субстрата/Е3-лигазный комплекс VCB, который предусматривает элонгины В и С, и комплекс, предусматривающий Cullin-2 и Rbx1. Основной субстрат VHL представляет собой фактор, индуцируемый гипоксией 1α (HIF-1α), фактор транскрипции, повышающий экспрессию генов, такой как проангиогенный фактор роста VEGF, и цитокин эритропоэтин, индуцирующий образование эритроцитов в ответ на низкие уровни кислорода. Авторами настоящего изобретения были получены первые низкомолекулярные лиганды белка Гиппеля-Линдау (VHL), связывающиеся с субъединицей, осуществляющей распознавание субстрата, Е3-лигазы, VCB, важной мишени при раке, хронической анемии и ишемии, и получены кристаллические структуры, подтверждающие, что соединение имитирует механизм связывания фактора транскрипции HIF-1α, основного субстрата VHL.

[0006] Цереблон представляет собой белок, который у людей кодируется геном CRBN. Ортологи CRBN являются высококонсервативными среди организмов, начиная от растений и заканчивая людьми, что подчеркивает его физиологическое значение. Цереблон входит в состав Е3-убиквитинлигазного комплекса со связывающимся с поврежденной ДНК белком 1 (DDB1), куллином-4А (CUL4A) и регулятором куллинов 1 (ROC1). Данный комплекс осуществляет убиквитинирование ряда других белков. С помощью механизма, который еще полностью не выяснен, убиквитинирование целевых белков с помощью цереблона приводит к повышенным уровням фактора роста фибробластов 8 (FGF8) и фактора роста фибробластов 10 (FGF10). FGF8, в свою очередь, регулирует ряд процессов развития, таких как образование конечностей и слухового пузырька. Конечный результат состоит в том, что данный комплекс убиквитинлигазы является важным для роста конечностей у эмбрионов. В отсутствие цереблона DDB1 образует комплекс с DDB2, который функционирует как белок, связывающийся с поврежденной ДНК.

[0007] Талидомид, который был одобрен для лечения ряда иммунологических показаний, также был одобрен для лечения некоторых неопластических заболеваний, в том числе множественной миеломы. В дополнение к множественной миеломе, талидомид и несколько его аналогов в настоящее время также проходят исследование в отношении применения в лечении различных других видов рака. Хотя конкретный механизм противоопухолевой активности талидомида еще не выяснен, известно, что он ингибирует ангиогенез. Новые литературные источники, в которых рассматривается биология имидов, включают Lu et al Science 343, 305 (2014) и

et al Science 343, 301 (2014).

[0008] Следует отметить, что талидомид и его аналоги, например помолинамиод и леналиномид, известны как связывающие цереблон. Такие средства связываются с цереблоном, изменяя специфичность комплекса, что индуцирует убиквитинирование и разрушение Ikaros (IKZF1) и Aiolos (IKZF3), факторов транскрипции, необходимых для роста множественной миеломы. Действительно, более высокую экспрессию цереблона связывали с увеличением эффективности лекарственных средств на основе имида в лечении множественной миеломы.

[0009] BRD4 привлек к себе значительное внимание как научных кругов, так и фармацевтической промышленности благодаря своему огромному потенциалу в качестве новой мишени при множестве заболеваний, в частности при раке. BRD4 принадлежит к семейству, предусматривающему бромодомен и экстратерминальный домен (BET), которое характеризуется двумя бромодоменами (BD-домен) на N-конце и эстратерминальным доменом (ЕТ-домен) на С-конце (J. Shi, et al. Molecular cell, 54 (2014) 728-736 и A.C. Belkina, et al., Nat. Rev. Cancer, 12 (2012) 465-477). Два BD-домена распознают и взаимодействуют с остатками ацетилированного лизина на N-концевом хвосте гистонового белка; ЕТ-домен еще не является полностью охарактеризованным, и в основном считается, что он выполняет поддерживающую функцию в привлечении различных регуляторов транскрипции. Таким образом, BRD4 играет ключевую роль в регулировании экспрессии генов посредством привлечения соответствующих модуляторов транскрипции в конкретные геномные локусы. В ходе нескольких исследований было установлено, что BRD4 преимущественно расположен в областях суперэнхансеров, которые зачастую предшествуют важным онкогенам, таким как с-MYC, Bcl-xL и BCL-6, и играют ключевую роль в регулировании их экспрессии (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334 и В. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790.). Благодаря своей ключевой роли в модуляции экспрессии основных онкогенов, BRD4 выступает в качестве перспективной терапевтической мишени при множестве видов рака, включая срединную карциному, AML, MM, BL и рак предстательной железы (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334; J. Zuber, et al., Nature, 478 (2011) 524-528; J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; A. Wyce, et al., Oncotarget, 4 (2013) 2419-2429; I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282 и C.A. French, et al., Oncogene, 27 (2008) 2237-2242). Выраженный высокий показатель занятия BRD4 геномных локусов, расположенных в непосредственной близости к специфическим онкогенам, предусматривает потенциальное терапевтическое окно, что обеспечит специфическое направленное воздействие на опухолевые клетки, при этом не оказывая влияние на нормальные ткани. В частности, BRD4 может выступать в качестве альтернативной стратегии направленного воздействия на c-MYC, который способствует развитию и поддержанию большинства форм рака человека, но остается не поддающимся воздействию лекарственных средств (J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237 и M. Gabay, et al., Cold Spring Harb Perspect Med. (2014) 4:a014241).

[0010] Разработка низкомолекулярных ингибиторов BRD4, таких как JQ1, iBET и ОТХ15, продемонстрировала перспективный терапевтический потенциал в доклинических моделях различных форм рака, включая BL (J. Loven, et al., Cell, 153 (2013) 320-334; В. Chapuy, et al., Cancer Cell, 24 (2013) 777-790; J.E. Delmore, et al., Cell, 146 (2011) 904-917; J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674; I.A. Asangani, et al., Nature, 510 (2014) 278-282; M.G. Baratta, et al., PNAS, 112 (2015) 232-237; M. Boi, et al., Clin. Cancer Res., (2015) 21(7):1628-38 и A. Puissant, et al., Cancer discovery, 3 (2013) 308-323). Действительно, ингибиторы BRD4 продемонстрировали различные противоопухолевые активности с хорошей переносимостью в различных мышиных моделях опухолей и, что неудивительно, высокая чувствительность к ингибиторам BRD4, таким как JQ1, была связана с высоким уровнем в равной степени c-MYC и N-MYC в различных типах опухолей, включая BL, вызванную c-MYC. Почти все случаи BL предусматривают транслокацию гена с-myc, которая ставит его под контроль суперэнхансера, который предшествует IgH, приводя, таким образом, к аномально высокому уровню экспрессии c-MYC, развитию и поддержанию опухоли (K. Klapproth, et al., British journal of haematology, 149 (2010) 484-497).

[0011] В настоящее время четыре ингибитора бромодомена BET находятся в фазе I клинических испытаний, при этом особое внимание сосредоточено на срединной карциноме и гемобластозах (CPI-0610, NCT01949883; GSK525762, NCT01587703; ОТХ015, NCT01713582; TEN-010, NCT01987362). Доклинические исследования с ингибиторами BRD4 демонстрируют их значимость в подавлении c-MYC и пролиферации в отношении клеточных линий BL, хотя значения IC₅₀ зачастую находятся в диапазоне от 100 нМ до 1 мкМ (J.A. Mertz, et al., PNAS, 108 (2011) 16669-16674 и M. Ceribelli, et al., PNAS, 111 (2014) 11365-11370). Таким образом, несмотря на быстрое развитие ингибиторов BRD4, эффект ингибирования BRD4 был обнадеживающим, но далеко не идеальным, поскольку эффект в основном является цитостатическим и требует относительно высокой концентрации ингибиторов.

[0012] В данной области существует постоянная потребность в эффективных способах лечения заболевания, в частности, видов гиперплазии и видов рака, таких как множественная миелома. Однако неспецифичное действие и невозможность нацеливаться на определенные классы белков и модулировать их в целом, например, факторы транскрипции, остаются препятствиями для разработки эффективных противораковых средств. Как таковые, низкомолекулярные терапевтические средства, которые улучшают или усиливают субстратную специфичность цереблона и, в то же время, являются «модифицируемыми» так, чтобы можно было нацеливаться на широкий диапазон классов белков и осуществлять их модуляцию со специфичностью, были бы особо применимы в качестве средства для терапии.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0013] В настоящем изобретении описаны бифункциональные соединения, функция которых состоит в привлечении эндогенных белков к Е3-убиквитинлигазе для разрушения, и способы их применения. В частности, настоящее изобретение предусматривает бифункциональные или химерные соединения, осуществляющие целенаправленное воздействие посредством протеолиза (PROTAC), которые находят применение в качестве модуляторов направленного убиквитинирования разнообразных полипептидов и других белков, которые затем разрушаются и/или другим образом ингибируются с помощью бифункциональных соединений, описанных в данном документе. Преимущество соединений, представленных в данном документе, состоит в том, что возможен широкий спектр фармакологических активностей, согласующийся с разрушением/ингибированием целевых полипептидов из практически любого класса или семейства белков. Кроме того, в описании представлены способы применения эффективного количества соединений, описанных в данном документе, для лечения или облегчения болезненного состояния, такого как рак, например, множественная миелома.

[0014] В связи с этим, в одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены новые соединения на основе имида, описанные в данном документе.

[0015] В дополнительном аспекте в настоящем изобретении предусмотрены бифункциональные соединения или соединения PROTAC, которые содержат фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу (т.е. лиганд для Е3-убиквитинлигазы или группа «ULM»), и фрагмент, который связывает целевой белок (т.е. лиганд, нацеливающийся на белок/полипептид, или группа «РТМ») так, что целевой белок/полипептид размещается в непосредственной близости от убиквитинлигазы для осуществления разрушения (и ингибирования) данного белка. В предпочтительном варианте осуществления ULM представляет собой фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса (т.е. «CLM»). Например, структура бифункционального соединения может быть изображена как:

[0016] Соответствующие положения фрагментов РТМ и CLM, а также их число, как проиллюстрировано в данном документе, представлено только в качестве примера и не предназначено для ограничения соединений каким-либо образом. Специалисту в данной области техники будет понятно, что бифункциональные соединения, описанные в данном документе, могут быть синтезированы так, что число и положение соответствующих функциональных фрагментов могут варьировать по необходимости.

[0017] В определенных вариантах осуществления бифункциональное соединение дополнительно содержит химический линкер («L»). В данном примере структура бифункционального соединения может быть изображена как:

где РТМ представляет собой фрагмент, нацеливающийся на белок/полипептид, L представляет собой линкер, и CLM представляет собой фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса.

[0018] В определенных предпочтительных вариантах осуществления Е3-убиквитинлигаза представляет собой цереблон. В связи с этим, в определенных дополнительных вариантах осуществления CLM бифункционального соединения содержит химические структуры, такие как фрагменты, полученные из имида, амида, тиоамида, тиоимида. В дополнительных вариантах осуществления CLM содержит фталимидогруппу или ее аналог или производное. В еще одних дополнительных вариантах осуществления CLM содержит фталимидоглутаримидную группу или ее аналог или производное. В еще одних вариантах осуществления CLM предусматривает представителя группы, состоящей из талидомида, леналидомида, помалидомида и их аналогов или производных.

[0019] В определенных вариантах осуществления соединения, описанные в данном документе, содержат несколько CLM, несколько РТМ, несколько химических линкеров или их комбинацию.

[0020] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, ULM (модулятор убиквитинлигазы) может представлять собой фрагмент, связывающийся с белком Гиппеля-Линдау (VHL) Е3-убиквитинлигазного комплекса (VLM), или фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса (CLM), или фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу, представляющую собой гомолог 2 double minute мыши (MDM2) (MLM), или фрагмент, связывающийся с IAP Е3-убиквитинлигазного комплекса (т.е. «ILM»). В любом аспекте или вариантах осуществления, описанных в данном документе, бифункциональное соединение включает по меньшей мере один дополнительный фрагмент, связывающий Е3-лигазу, выбранный из группы, состоящей из VLM, VLM', CLM, CLM', MLM, MLM', ILM, ILM' или их комбинации. Например, в нем может быть по меньшей мере 1, 2, 3, 4 или 5 дополнительных фрагментов, связывающих Е3-лигазу.

[0021] В дополнительном аспекте в описании представлены терапевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения, описанного в данном документе, или его солевой формы и фармацевтически приемлемый носитель. Терапевтические композиции модулируют разрушение белка у пациента или субъекта, например, у животного, как, например, у человека, и могут применяться для лечения или облегчения болезненных состояний или состояний, модулирование которых обеспечивается посредством разрушения белка. В определенных вариантах осуществления терапевтические композиции, описанные в данном документе, можно применять для обеспечения разрушения белков, представляющих интерес, для лечения или облегчения заболевания, например рака. В еще одном аспекте в настоящем изобретении предусмотрен способ обеспечения убиквитинирования/разрушения целевого белка в клетке. В определенных вариантах осуществления способ предусматривает введение бифункционального соединения, описанного в данном документе, содержащего CLM и РТМ, предпочтительно соединенные посредством линкерного фрагмента, описанного далее в данном документе, где CLM связан с РТМ, и при этом CLM распознает белок убиквитинового пути (например, убиквитинлигазу, предпочтительно Е3-убиквитинлигазу, такую как, например, цереблон), и РТМ распознает целевой белок так, что при размещении целевого белка в непосредственной близости от убиквитинлигазы будет происходить разрушение целевого белка, что, таким образом, приводит к разрушению целевого белка/подавлению его эффектов и контролю уровней белка. Контроль уровней белка, предоставляемый настоящим изобретением, обеспечивает лечение болезненного состояния или состояния, модулируемых за счет целевого белка путем снижения уровня данного белка в клетках пациента.

[0022] В дополнительном аспекте в описании представлен способ оценки (т.е. определения и/или измерения) аффинности связывания CLM'. В определенных вариантах осуществления способ предусматривает обеспечение представляющего интерес испытуемого средства или соединения, например, средства или соединения, содержащих имидный фрагмент, например, фталимидогруппу, фталимидоглутаримидную группу, дериватизированный талидомид, дериватизированный леналидомид или дериватизированный помалидомид, и сравнение аффинности связывания цереблона и/или ингибирующей активности испытуемого средства или соединения по сравнению со средством или соединением, известным для связывания и/или ингибирования активности цереблона.

[0023] В еще одном аспекте в описании представлены способы лечения или облегчения заболевания, нарушения или их симптома у субъекта или пациента, например, у животного, такого как человек, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей эффективное количество, например терапевтически эффективное количество, соединения, описанного в данном документе, или его солевой формы и фармацевтически приемлемый носитель, при этом композиция является эффективной для лечения или облегчения заболевания или нарушения или их симптома у субъекта.

[0024] В другом аспекте в описании предусмотрены способы идентификации эффектов разрушения белков, представляющих интерес, в биологической системе с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением.

[0025] Предшествующие общие области применения приведены только в качестве примера и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения и прилагаемой формулы изобретения. Дополнительные объекты и преимущества, ассоциированные с композициями, способами и процессами по настоящему изобретению будут понятны специалисту в данной области техники в свете данных формулы изобретения, описания и примеров. Например, различные аспекты и варианты осуществления настоящего изобретения можно применять в многочисленных комбинациях, все из которых явным образом предусмотрены настоящим описанием. Такие дополнительные преимущества, объекты и варианты осуществления явным образом включены в объем настоящего изобретения. Публикации и другие материалы, применяемые в данном документе для освещения уровня техники настоящего изобретения и, в конкретных случаях, для предоставления дополнительных подробностей в отношении его реализации, включены посредством ссылки.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0026] Сопутствующие графические материалы, которые включены в описание и образуют его часть, иллюстрируют несколько вариантов осуществления настоящего изобретения и вместе с описанием служат для объяснения идей настоящего изобретения. Графические материалы предназначены только для иллюстрации варианта осуществления настоящего изобретения и не должны толковаться как ограничивающие настоящее изобретение. Дополнительные объекты, признаки и преимущества настоящего изобретения станут очевидными из следующего подробного описания, рассматриваемого совместно с сопутствующими фигурами, показывающими иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения, в которых предусмотрено следующее.

[0027] Фигура 1А и 1В. Иллюстрация основного принципа функционирования PROTAC. (А) Иллюстративные PROTAC содержат фрагмент, нацеливающийся на белок (РТМ; заштрихованный прямоугольник темного цвета), фрагмент, связывающий убиквитинлигазу (ULM; заштрихованный треугольник светлого цвета), и необязательно линкерный фрагмент (L; черная линия), связывающий или присоединяющий РТМ к ULM. (В) Проиллюстрировано функциональное применение PROTAC, описанных в данном документе. Вкратце, ULM распознает и связывается со специфичной Е3-убиквитинлигазой, и РТМ связывается и рекрутирует целевой белок, приводя его в непосредственную близость к Е3-убиквитинлигазе. Как правило, Е3-убиквитинлигаза образует комплекс с Е2-убиквитинконъюгирующим белком и либо отдельно, либо с помощью белка Е2 катализирует присоединение убиквитина (темные круги) к лизину на целевом белке посредством изопептидной связи. На полиубиквитинированный белок (крайний справа) затем целенаправленно воздействуют с разрушением с помощью протеосомального механизма клетки.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0028] Следующее подробное описание представлено для оказания специалисту в данной области техники поддержки в отношении практического применения настоящего изобретения. Специалисты в данной области техники могут осуществлять модификации и изменения в вариантах осуществления, описанных в данном документе, без отступления от сущности или объема настоящего изобретения. Все публикации, заявки на патенты, патенты, фигуры и другие источники, упомянутые в данном документе, явным образом включены посредством ссылки во всей своей полноте.

[0029] В настоящем изобретении описаны композиции и способы, которые относятся к удивительному и неожиданному открытию того, что белок Е3-убиквитинлигазного комплекса, например, цереблон, убиквитинирует целевой белок как только его и целевой белок размещает в непосредственной близости друг от друга бифункциональная или химерная конструкция, которая связывает белок Е3-убиквитинлигазного комплекса и целевой белок. Соответственно, настоящее изобретение предусматривает такие соединения и композиции, содержащие фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу («ULM»), связанный с фрагментом, связывающим белок-мишень («РТМ»), что обеспечивает убиквитинирование выбранного целевого белка с обеспечением разрушения целевого белка протеасомой (см. фигуры 1А и 1В). Настоящее изобретение также предусматривает библиотеку композиций и ее применение.

[0030] В определенных аспектах в настоящем изобретении предусмотрены соединения, которые содержат лиганд, например, низкомолекулярный лиганд (т.е. характеризующийся молекулярной массой, составляющей менее 2000, 1000, 500 или 200 дальтон), который способен связываться с убиквитинлигазой, такой как IAP, VHL, MDM2 или цереблон. Соединения также содержат фрагмент, который способен связываться с целевым белком таким образом, что целевой белок размещается в непосредственной близости от убиквитинлигазы для осуществления разрушения (и/или ингибирования) данного белка. Низкомолекулярный может означать, в дополнение к вышеуказанному, что молекула не является пептидилом, т.е. обычно не считается пептидом, например, содержит менее 4, 3 или 2 аминокислот. В соответствии с настоящим описанием молекула РТМ, ULM или PROTAC может быть низкомолекулярной.

[0031] Если не указано иное, все технические и научные термины, применяемые в данном документе, имеют то же значение, обычно понятное специалисту в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. Терминология, применяемая в описании, предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления и не предполагается как ограничивающая настоящее изобретение.

[0032] Если представлен диапазон значений, подразумевается, что каждое промежуточное значение с точностью до десятой доли единицы нижнего предела, если из контекста явно не следует иное (как, например, в случае группы, содержащей определенное количество атомов углерода, в случае которой представлено количество каждого атома углерода, которое попадает в диапазон), между верхним и нижним пределом данного диапазона и любое другое указанное или промежуточное значение в данном указанном диапазоне охватываются настоящим изобретением. Верхние и нижние пределы таких меньших диапазонов, которые могут быть независимо включены в меньшие диапазоны, также охватываются настоящим изобретением, с учетом любого конкретно исключенного предела в указанном диапазоне. Если указанный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие оба из этих включенных пределов, также включены в настоящее изобретение.

[0033] Для описания настоящего изобретения применяют следующие термины. В случаях, если термин конкретно не определен в данном документе, то такой термин имеет значение, общепризнанное рядовыми специалистами в данной области техники, при использовании такого термина в контексте его применения в описании настоящего изобретения.

[0034] Формы единственного числа, используемые в данном документе и в прилагаемой формуле изобретения, используются в данном документе для обозначения одного или более одного (т.е. по меньшей мере одного) грамматических объектов данной формы единственного числа, если в контексте явно не указано иное. В качестве примера «элемент» означает один элемент или более одного элемента.

[0035] Фразу «и/или», используемую в данном документе в описании и в формуле изобретения, следует понимать как означающую «один или оба» из элементов, объединенных таким образом, т.е. элементы, которые в одних случаях присутствуют совместно, а в других случаях присутствуют раздельно. Несколько элементов, перечисленных с помощью «и/или», должны толковаться одинаково, т.е. «один или более» из элементов, объединенных таким образом. Могут необязательно присутствовать другие элементы, отличные от элементов, конкретно определенных выражением «и/или», независимо от того, связаны ли они или не связаны с данными конкретно определенными элементами. Таким образом, в качестве неограничивающего примера ссылка на «А и/или В», в случае применения совместно с открытой формулировкой, такой как «содержащий», может относиться в одном варианте осуществления только к А (необязательно включая элементы, отличные от В); в другом варианте осуществления только к В (необязательно включая элементы, отличные от А); в еще одном варианте осуществления как к А, так и к В (необязательно включая другие элементы) и т.д.

[0036] Как используется в данном документе в описании и в формуле изобретения, термин «или» следует понимать как имеющий такое же значение, как «и/или», как определено выше. Например, при разделении объектов в списке «или» или «и/или» следует понимать как включающие, т.е. включение по меньшей мере одного, но также включение более одного из числа или списка элементов и необязательно дополнительных не включенных в список объектов. Только термины, четко указывающие на противоположное, такие как «только один из», или «точно один из», или, если применяется в формуле изобретения, «состоящий из», будут относиться к включению точно одного элемента из числа или списка элементов. В целом, термин «или», используемый в данном документе, следует понимать только как указывающий на исключающие альтернативы (т.е. «один или другой, но не оба»), если ему предшествуют термины исключительности, такие как «либо», «один из», «только один из» или «точно один из».

[0037] В формуле изобретения, а также в вышеприведенном описании все переходные фразы, такие как «содержащий», «включающий», «несущий», «имеющий», «вмещающий», «предусматривающий», «удерживающий», «состоящий из» и т.п., следует понимать как открытые, т.е. означающие включающий без ограничения. Только переходные фразы «состоящий из» и «по сути состоящий из» должны быть закрытыми или полузакрытыми переходными фразами соответственно, как изложено в разделе 2111.03 руководства по процедурам патентной экспертизы патентного ведомства США.

[0038] Используемую в данном документе в описании и в формуле изобретения фразу «по меньшей мере один» по отношению к списку одного или более элементов следует понимать как означающую по меньшей мере один элемент, выбранный из любого одного или более элементов в списке элементов, но не обязательно включающую по меньшей мере один из абсолютно всех элементов, конкретно перечисленных в списке элементов, и не исключающую любые комбинации элементов из списка элементов. Данное определение также допускает то, что необязательно могут присутствовать элементы, отличные от элементов, конкретно идентифицированных в списке элементов, к которым относится фраза «по меньшей мере один», независимо от того, связаны ли они или не связаны с данными конкретно определенными элементами. Таким образом, в качестве неограничивающего примера «по меньшей мере один из А и В» (или эквивалентно «по меньшей мере один из А или В», или эквивалентно «по меньшей мере один из А и/или В») может относиться в одном варианте осуществления к по меньшей мере одному, необязательно включая более одного, А, без присутствия В (и необязательно включая элементы, отличные от В); в другом варианте осуществления к по меньшей мере одному, необязательно включая более одного, В, без присутствия А (и необязательно включая элементы, отличные от А); в еще одном варианте осуществления к по меньшей мере одному, необязательно включая более одного, А и по меньшей мере одному, необязательно включая более одного, В (и необязательно включая другие элементы) и т.д.

[0039] Также следует понимать, что в определенных способах, описанных в данном документе, которые включают более одной стадии или действия, порядок стадий или действий способа не обязательно ограничен порядком, в котором изложены стадии или действия способа, если в контексте не указано иное.

[0040] Термины «совместное введение» и «осуществление совместного введения» или «комбинированная терапия» относятся как к одновременному введению (введению двух или более терапевтических средств в одно и то же время), так и к разделенному во времени введению (введение одного или более терапевтических средств в момент времени, отличный от момента введения дополнительного терапевтического средства или средств), при условии, что терапевтические средства присутствуют у пациента до некоторой степени, предпочтительно в эффективных количествах, в одно и то же время. В определенных предпочтительных аспектах одно или более соединений по настоящему изобретению, описанных в данном документе, вводят совместно в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным биологически активным средством, в том числе, в частности, противораковым средством. В особенно предпочтительных аспектах совместное введение соединений приводит к синергетической активности и/или терапии, в том числе противораковой активности.

[0041] Термин «соединение», используемый в данном документе, если не указано иное, относится к любому конкретному химическому соединению, раскрытому в данном документе, и включает его таутомеры, региоизомеры, геометрические изомеры и, в применимых случаях, стереоизомеры, включая оптические изомеры (энантиомеры) и другие стереоизомеры (диастереомеры), а также его фармацевтически приемлемые соли и производные, в том числе пролекарство и/или их дейтерированные формы, в случае применимости в соответствующем контексте. Рассматриваемые дейтерированные малые молекулы представляют собой молекулы, в которых один или более атомов водорода, содержащихся в молекуле лекарственного средства, были заменены дейтерием.

[0042] При его использовании в соответствующем контексте термин соединение обычно относится к одному соединению, но он также может включать другие соединения, такие как стереоизомеры, региоизомеры и/или оптические изомеры (включая рацемические смеси), а также конкретные энантиомеры или энантиомерно обогащенные смеси раскрытых соединений. В соответствующем контексте данный термин также относится к формам пролекарства соединений, которые были модифицированы для облегчения введения и доставки соединений к месту осуществления активности. Следует отметить, что при описании соединений по настоящему изобретению среди прочего описаны многочисленные заместители и переменные, связанные с ними. Средние специалисты в данной области техники поймут, что молекулы, которые описаны в данном документе, представляют собой устойчивые соединения, как в общем описано в данном документе. Если показана связь, как двойная связь, так и одинарная связь представлены или понимаются в контексте показанного соединения и широко известных правил взаимодействия валентности.

[0043] Термин «убиквитинлигаза» относится к семейству белков, которые облегчают перенос убиквитина к конкретному субстратному белку, осуществляя направленное воздействие на субстратный белок с целью его разрушения. Например, цереблон является белком Е3-убиквитинлигазного комплекса, который в отдельности или в комбинации с Е2-убиквитинконъюгирующим ферментом обуславливает присоединение убиквитина к лизину на целевом белке и впоследствии осуществляет нацеливание конкретных белковых субстратов для разрушения с помощью протеасомы. Таким образом, Е3-убиквитинлигаза в отдельности или в комплексе с Е2-убиквитинконъюгирующим ферментом является ответственной за перенос убиквитина к целевым белкам. В целом, убиквитинлигаза вовлечена в полиубиквитинирование так, что второй убиквитин присоединяется к первому, третий присоединяется ко второму и т.д. С помощью полиубиквитинирования белки метятся для разрушения с помощью протеасомы. Однако существуют некоторые явления убиквитинирования, которые ограничены моноубиквитинированием, при котором к молекуле субстрата убиквитинлигазой добавляется только один убиквитин. Моноубиквитинированные белки не являются целевыми для протеасомы для разрушения, но вместо этого их расположение в клетке или функция могут быть изменены, например, посредством связывания других белков, которые содержат домены, которые могут связывать убиквитин. Дополнительно усложняет задачу то, что Е3 может осуществлять нацеливание на различные лизины на убиквитине с образованием цепей. Наиболее распространенный лизин представляет собой Lys48 в цепи убиквитина. Данный лизин используется для образования полиубиквитина, который распознается протеасомой.

[0044] Термин «пациент» или «субъект» используется по всему настоящему описанию для описания животного, предпочтительно человека или домашнего животного, которым предоставляется лечение, в том числе профилактическое лечение, с помощью композиций в соответствии с настоящим изобретением. Для лечения тех инфекций, состояний или болезненных состояний, которые являются специфическими для конкретного животного, как, например, для пациента-человека, термин пациент относится к данному конкретному животному, в том числе домашнему животному, такому как собака или кошка, или сельскохозяйственному животному, такому как лошадь, корова, овца и т.д. В целом, в настоящем изобретении термин пациент относится к пациенту-человеку, если иное не указано или не подразумевается из контекста применения данного термина.

[0045] Термин «эффективный» используется для описания количества соединения, композиции или компонента, которые при применении в контексте их предполагаемого применения оказывают предполагаемый результат. Термин «эффективный» включает все другие термины эффективного количества или эффективной концентрации, которые иным образом описаны или используются в настоящей заявке.

Соединения и композиции

[0046] В одном аспекте в описании представлены соединения, содержащие фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу («ULM»), который представляет собой фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса («CLM»). В одном варианте осуществления CLM связан с химическим линкером (L) в соответствии со структурой:

где L представляет собой химическую линкерную группу, и CLM представляет собой фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса. Число и/или относительные положения фрагментов в соединениях, проиллюстрированных в данном документе, представлены только в качестве примера. Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения, описанные в данном документе, можно синтезировать с любым необходимым числом и/или относительным положением соответствующих функциональных фрагментов.

[0047] Термины ULM и CLM применяют в их включительном смысле, если в контексте не указано иное. Например, термин ULM включает все ULM, в том числе те, которые связывают цереблон (т.е. CLM). Дополнительно термин CLM включает все возможные фрагменты, связывающиеся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса.

[0048] В другом аспекте в настоящем изобретении предусмотрены бифункциональные или мультифункциональные соединения PROTAC, пригодные для регулирования активности белка посредством индуцирования разрушения целевого белка. В определенных вариантах осуществления соединение содержит связанный CLM, например связанный ковалентно, непосредственно или опосредованно, с фрагментом, который связывает целевой белок (т.е. фрагментом, нацеливающимся на белок, или «РТМ»). В определенных вариантах осуществления CLM и РТМ соединены или связаны с помощью химического линкера (L). CLM распознает цереблон Е3-убиквитинлигазного комплекса, и РТМ распознает целевой белок, и при этом взаимодействие соответствующих фрагментов с их мишенями способствует разрушению целевого белка путем размещения целевого белка в непосредственной близости к белку убиквитинлигазного комплекса. Иллюстративное бифункциональное соединение может быть изображено как:

[0049] В определенных вариантах осуществления бифункциональное соединение дополнительно содержит химический линкер («L»). Например, бифункциональное соединение может быть изображено как:

где РТМ представляет собой фрагмент, нацеливающийся на белок/полипептид, L представляет собой линкер, и CLM представляет собой фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-лигазного комплекса.

[0050] В определенных вариантах осуществления соединения, описанные в данном документе, содержат множество РТМ (нацеливающихся на одинаковые или различные белки-мишени), множество CLM, один или более ULM (т.е. фрагментов, которые специфически связываются с другой Е3-убиквитинлигазой, например, VHL) или их комбинацию. В любом из аспектов вариантов осуществления, описанных в данном документе, РТМ, CLM и ULM могут быть непосредственно связаны или связаны с помощью одного или более химических линкеров или их комбинации. В дополнительных вариантах осуществления, если соединение содержит множество ULM, ULM могут относиться к одной и той же Е3-убиквитинлигазе, или каждый соответствующий ULM может специфически связываться с отличной Е3-убиквитинлигазой. В еще одних дополнительных вариантах осуществления, если соединение содержит множество РТМ, РТМ могут связываться с одним и тем же целевым белком или каждый соответствующий РТМ может специфически связываться с отличным целевым белком.

[0051] В другом варианте осуществления в описании представлено соединение, которое содержит ряд CLM, непосредственно связанных или связанных с помощью химического линкерного фрагмента (L). Например, соединение, содержащее два CLM, может быть изображено следующим образом:

[0052] В определенных вариантах осуществления, где соединение содержит множество CLM, CLM являются идентичными. В дополнительных вариантах осуществления соединение, содержащее ряд CLM, дополнительно содержит по меньшей мере один РТМ, непосредственно связанный с CLM, или связанный с помощью химического линкера (L), или как одного, так и другого. В определенных дополнительных вариантах осуществления соединение, содержащее ряд CLM, дополнительно содержит множество РТМ. В еще одних дополнительных вариантах осуществления РТМ являются одинаковыми или необязательно различными. В еще одних дополнительных вариантах осуществления, если РТМ являются различными, соответствующие РТМ могут связывать один и тот же белок-мишень или специфически связываться с различными белками-мишенями.

[0053] В дополнительных вариантах осуществления в описании представлено соединение, содержащее по меньшей мере два различных CLM, непосредственно связанных, или связанных с помощью химического линкерного фрагмента (L), или как одного, так и другого. Например, такое соединение, содержащее два различных CLM, может быть изображено следующим образом:

где CLM' указывает на фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса, который является отличным по структуре от CLM. В определенных вариантах осуществления соединение может содержать ряд CLM и/или ряд CLM'. В дополнительных вариантах осуществления соединение, содержащее по меньшей мере два различных CLM, ряд CLM и/или ряд CLM', дополнительно содержит по меньшей мере один РТМ, непосредственно связанный с CLM или CLM' или связанный с помощью химического линкерного фрагмента, или как одного, так и другого. В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, соединение, содержащее по меньшей мере два различных CLM, может дополнительно содержать несколько РТМ. В еще одних дополнительных вариантах осуществления РТМ являются одинаковыми или необязательно различными. В еще одних дополнительных вариантах осуществления, если РТМ являются различными, соответствующие РТМ могут связывать один и тот же белок-мишень или специфически связываться с различными белками-мишенями. В еще одних дополнительных вариантах осуществления РТМ как таковой представляет собой ULM или CLM (или ULM' или CLM').

[0054] В предпочтительном варианте осуществления CLM содержит фрагмент, который представляет собой лиганд цереблона Е3-убиквитинлигазного комплекса (CRBN). В определенных вариантах осуществления CLM предусматривает хемотип класса молекул «имид». В определенных дополнительных вариантах осуществления CLM содержит фталимидогруппу или ее аналог или производное. В еще одних дополнительных вариантах осуществления CLM содержит фталимидоглутаримидную группу или ее аналог или производное. В еще одних вариантах осуществления CLM предусматривает представителя группы, состоящей из талидомида, леналидомида, помалидомида и их аналогов или производных.

[0055] В дополнительных вариантах осуществления в описании представлены соединения, описанные в данном документе, в том числе их энантиомеры, диастереомеры, сольваты и полиморфы, в том числе их фармацевтически приемлемые солевые формы, например, солевые формы присоединения кислоты и основания.

[0056] Иллюстративные соединения, связывающие и/или ингибирующие цереблон

[0057] В одном аспекте в описании представлены соединения, пригодные для связывания и/или ингибирования фрагмента, связывающегося с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса. В определенных вариантах осуществления соединение характеризуется химической структурой, которая включает по меньшей мере одно из (например, соединение характеризуется химической структурой, выбранной из группы, состоящей из):

где

W независимо выбран из CH₂, CHR, С=O, SO₂, NH и N-алкила;

каждый из Q₁, Q₂, Q₃, Q₄, Q₅ независимо представляет собой атом углерода С или N, замещенный группой, независимо выбранной из R', N или N-оксида;

R¹ отсутствует или выбран из Н, ОН, CN, С1-С3алкила, С=O;

R² отсутствует или выбран из группы, состоящей из Н, ОН, CN, С1-С3алкила, CHF₂, CF₃, СНО, C(=O)NH₂;

R³ отсутствует или выбран из Н, алкила (например, С1-С6- или С1-С3алкила), замещенного алкила (например, замещенного С1-С6- или С1-С3алкила), алкокси (например, С1-С6- или С1-С3алкоксила), замещенного алкокси (например, замещенного С1-С6- или С1-С3алкоксила);

R⁴ выбран из Н, алкила, замещенного алкила;

каждый из R⁵ и R⁶ независимо представляет собой Н, галоген, C(=O)R'; CN, ОН, CF₃;

X представляет собой С, СН, С=O или N;

X₁ представляет собой С=O, N, СН или CH₂;

R' выбран из Н, галогена, амина, алкила (например, С1-С3алкила), замещенного алкила (например, замещенного С1-С3алкила), алкокси (например, С1-С3алкоксила), замещенного алкокси (например, замещенного С1-С3алкоксила), NR²R³, C(=O)OR², необязательно замещенного фенила;

n составляет 0-4; и

представляет собой одинарную или двойную связь.

[0058] Иллюстративные CLM

[0059] В любом из соединений, описанных в данном документе, CLM предусматривает химическую структуру, выбранную из группы:

где

R³ выбран из Н, алкила (например, С1-С6- или С1-С3алкила), замещенного алкила (например, замещенного С1-С6- или С1-С3алкила), алкокси (например, С1-С6- или С1-С3алкоксила), замещенного алкокси (например, замещенного С1-С6- или С1-С3алкоксила);

R⁴ выбран из Н, алкила, замещенного алкила;

каждый из R⁵ и R⁶ независимо представляет собой Н, галоген, C(=O)R', CN, ОН, CF₃;

X представляет собой С, СН, С=O или N;

X₁ представляет собой С=O, N, СН или CH₂;

n составляет 0-4;

представляет собой одинарную или двойную связь; и

CLM ковалентно связан с РТМ, химической линкерной группой (L), ULM, CLM (или CLM') или их комбинацией.

[0060] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM или CLM' ковалентно связаны с РТМ, химической линкерной группой (L), ULM, CLM, CLM' или их комбинацией с помощью R-группы (такой как R, R¹, R², R³, R⁴ или R'), W, X или Q-группы (такой как Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ или Q₅).

[0061] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, CLM или CLM' ковалентно связаны с РТМ, химической линкерной группой (L), ULM, CLM, CLM' или их комбинацией с помощью W, X, R, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R', Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Q₅.

[0062] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, W, X, R¹, R², R³, R⁴, R', Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Q₅ могут быть независимо ковалентно связаны с линкером и/или линкером, к которому присоединены одна или более групп РТМ, ULM, ULM', CLM или CLM'.

[0063] Термин «независимо» используется в данном документе для указания того, что переменная, которая применяется независимо, варьируется независимо от применения к применению.

[0064] Под термином «алкил» в его соответствующем контексте следует понимать линейный, разветвленный или циклический полностью насыщенный углеводородный радикал или алкильную группу, предпочтительно C₁-С₁₀, более предпочтительно C₁-С₆, в качестве альтернативы C₁-С₃алкильную группу, которая может быть необязательно замещена. Примеры алкильных групп представляют собой, среди прочих, метил, этил, н-бутил, втор-бутил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, изопропил, 2-метилпропил, циклопропил, циклопропилметил, циклобутил, циклопентил, циклопентилэтил, циклогексилэтил и циклогексил. В определенных вариантах осуществления алкильная группа имеет на конце галогенсодержащую группу (At, Br, Cl, F или I). В некоторых предпочтительных вариантах осуществления соединения в соответствии с настоящим изобретении могут применяться для ковалентного связывания с ферментами дегалогеназами. Данные соединения, как правило, содержат боковую цепь (зачастую соединенную с помощью полиэтиленгликолевой группы), которая заканчивается алкильной группой, которая содержит заместитель, представляющий собой атом галогена (зачастую хлор или бром), на своем дальнем конце, которая обеспечивает ковалентное связывание соединения, содержащего такой фрагмент, с белком.

[0065] Термин «алкокси» относится к алкильной группе, связанной при помощи одинарной связи с кислородом.

[0066] Термин «алкенил» относится к линейным, разветвленным или циклическим углеводородным радикалам С₂-С₁₀ (предпочтительно С₂-С₆), содержащим по меньшей мере одну связь С=С.

[0067] Термин «алкинил» относится к линейным, разветвленным или циклическим углеводородным радикалам С₂-С₁₀ (предпочтительно С₂-С₆), содержащим по меньшей мере одну связь С=С.

[0068] Термин «алкилен», если применяется, относится к группе -(СН₂)_n- (n представляет собой целое число, как правило, 0-6), которая может быть необязательно замещена. Если группа замещена, то алкиленовая группа предпочтительно замещена по одной или более метиленовым группам C₁-С₆алкильной группой (в том числе циклопропильной группой или трет-бутильной группой), но также может быть замещена одной или более галогенсодержащими группами, предпочтительно 1-3 галогенсодержащими группами, или одной или двумя гидроксильными группами, группами O-(С₁-С₆алкил) или аминокислотными боковыми цепями, как далее раскрыто в данном документе. В определенных вариантах осуществления алкиленовая группа может быть замещена уретаном или алкоксигруппой (или другой группой), которая дополнительно замещена полиэтиленгликолевой цепью (от 1 до 10, предпочтительно от 1 до 6, зачастую от 1 до 4 этиленгликолевых звеньев), которая замещена (предпочтительно, но не исключительно на дальнем конце полиэтиленгликолевой цепи) алкильной цепью, замещенной одной галогенсодержащей группой, предпочтительно хлорсодержащей группой. В других дополнительных вариантах осуществления алкиленовая (зачастую, метиленовая) группа может быть замещена группой в виде аминокислотной боковой цепи, такой как группа в виде боковой цепи, представляющей собой природную или неприродную аминокислоту, например, аланин, β-аланин, аргинин, аспарагин, аспарагиновая кислота, цистеин, цистин, глутаминовая кислота, глутамин, глицин, фенилаланин, гистидин, изолейцин, лизин, лейцин, метионин, пролин, серии, треонин, валин, триптофан или тирозин.

[0069] Под термином «незамещенный» следует понимать замещенный только атомами водорода. Диапазон атомов углерода, который включает С₀, означает, что углерод отсутствует и заменен на Н. Таким образом, диапазон атомов углерода, который представляет собой С₀-С₆, предусматривает 1, 2, 3, 4, 5 и 6 атомов углерода, а в случае С₀ вместо углерода находится Н.

[0070] Под термином «замещенный» или «необязательно замещенный» следует понимать независимо (т.е. если встречается более одного заместителя, каждый заместитель является независимым от другого заместителя) один или более заместителей (независимо не более пяти заместителей, предпочтительно не более трех заместителей, зачастую 1 или 2 заместителя на фрагменте в соединении в соответствии с настоящим изобретением, и может включать заместители, которые сами могут быть дополнительно замещены) в положении атома углерода (или азота) в любом месте в молекуле в соответствующем контексте, и под заместителями подразумеваются гидроксил, тиол, карбоксил, циано (C=N), нитро (NO₂), галоген (предпочтительно 1, 2 или 3 атома галогена, особенно на алкиле, особенно метильной группе, как, например, трифторметил), алкильная группа (предпочтительно C₁-С₁₀, более предпочтительно C₁-С₆), арил (особенно фенил и замещенный фенил, например, бензил или бензоил), алкокси-группа (предпочтительно C₁-С₆алкил или арил, в том числе фенил и замещенный фенил), простой тиоэфир (C₁-С₆алкил или арил), ацил (предпочтительно C₁-С₆ацил), сложный эфир или сложный тиоэфир (предпочтительно C₁-С₆алкил или арил), в том числе сложный алкиленовый эфир (так, что присоединение происходит по алкиленовой группе, а не по сложноэфирной функциональной группе, которая является предпочтительно замещенной C₁-С₆алкильной или арильной группой), предпочтительно C₁-С₆алкил или арил, галоген (предпочтительно F или Cl), амин (в том числе пяти- или шестичленный циклический алкиленовый амин, в том числе дополнительно C₁-С₆алкиламин или C₁-С₆диалкиламин, при этом алкильные группы могут быть замещены одной или двумя гидроксильными группами) или необязательно замещенная группа -N(С₀-С₆алкил)С(O)(O-С₁-С₆алкил) (которая может быть необязательно замещена полиэтиленгликолевой цепью, к которой дополнительно присоединена алкильная группа, содержащая один атом галогена, предпочтительно заместитель, представляющий собой атом хлора), гидразин, амидо, предпочтительно замещенный одной или двумя C₁-С₆алкильными группами (в том числе карбоксамид, который необязательно замещен одной или двумя C₁-С₆алкильными группами), алканол (предпочтительно C₁-С₆алкил или арил) или алкановая кислота (предпочтительно C₁-С₆алкил или арил). Заместители в соответствии с настоящим изобретением могут включать, например, группы -SiR_1subR_2subR_3sub, где каждый из R_1sub и R_2sub описан далее в данном документе, и R_3sub представляет собой Н или C₁-С₆алкильную группу, предпочтительно R_1sub, R_2sub, R_3sub в данном контексте представляет собой C₁-С₃алкильную группу (в том числе изопропильную или трет-бутильную группу). Каждая из вышеописанных групп может быть непосредственно связана с замещенным фрагментом, или альтернативно заместитель может быть соединен с замещенным фрагментом (предпочтительно в случае арильного или гетероарильного фрагмента) посредством необязательно замещенной группы -(СН₂)_m- или альтернативно необязательно замещенных групп -(ОСН₂)_m-, -(OCH₂CH₂)_m- или -(CH₂CH₂O)_m-, которые могут быть замещены любым одним или более из вышеописанных заместителей. Алкиленовые группы -(СН₂)_m-, или группы -(СН₂)_n-, или другие цепи, такие как этиленгликолевые цепи, определенные выше, могут быть замещены в любом месте на цепи. Предпочтительные заместители на алкиленовых группах включают галоген или C₁-С₆алкильные (предпочтительно C₁-С₃алкильные) группы, которые могут быть необязательно замещены одной или двумя гидроксильными группами, одной или двумя эфирными группами (группами O-C₁-С₆), не более чем тремя галогенсодержащими группами (предпочтительно F), или боковую цепь в виде аминокислоты, как далее описано в данном документе, и необязательно замещенный амид (предпочтительно карбоксамид, замещенный, как описано выше) или уретановые группы (зачастую с одним или двумя заместителями, представляющими собой С₀-С₆алкил, при этом группа(-ы) может(-гут) быть дополнительно замещена(-ы)). В определенных вариантах осуществления алкиленовая группа (зачастую одна метиленовая группа) замещена одной или двумя необязательно замещенными C₁-С₆алкильными группами, предпочтительно С₁-С₄алкильной группой, чаще всего метильной или О-метильной группами или боковой цепью аминокислоты, как далее описано в данном документе. В настоящем изобретении фрагмент в молекуле может быть необязательно замещен не более чем пятью заместителями, предпочтительно не более чем тремя заместителями. Чаще всего в настоящем изобретении фрагменты, которые являются замещенными, замещены одним или двумя заместителями.

[0071] Под термином «замещенный» (каждый заместитель является независимым от любого другого заместителя) в контексте его применения также следует понимать C₁-С₆алкил, C₁-С₆алкокси, галоген, амидо, карбоксамидо, сульфон, в том числе сульфонамид, кето, карбокси, сложный C₁-С₆эфир (сложный оксиэфир или сложный карбонильный эфир), C₁-С₆кето, уретан -O-C(O)-NR_1subR_2sub или -N(R_1sub)-C(O)-O-R_1sub, нитро, циано и амин (в том числе, в частности, C₁-С₆алкилен-NR_1subR_2sub, моно- или дизамещенные C₁-С₆алкилом амины, которые могут быть необязательно замещены одной или двумя гидроксильными группами). Каждая из данных групп содержит, если не указано иное, в соответствующем контексте от 1 до 6 атомов углерода. В определенных вариантах осуществления предпочтительные заместители будут включать, например, -NH-, -NHC(O)-, -О-, =O, -(CH₂)_m- (в данном контексте m и n равняются 1, 2, 3, 4, 5 или 6), -S-, -S(O)-, SO₂- или -NH-C(O)-NH-, -(СН₂)_nOH, -(CH₂)_nSH, -(CH₂)_nCOOH, C₁-С₆алкил, -(СН₂)_nO-(С₁-С₆алкил), -(СН₂)_nC(O)-(С₁-С₆алкил), -(СН₂)_nOC(O)-(С₁-С₆алкил), -(СН₂)_nC(O)O-(С₁-С₆алкил), -(CH₂)_nNHC(O)-R_1sub, -(CH₂)_nC(O)-NR_1subR_2sub, -(ОСН₂)_nOH, -(CH₂O)_nCOOH, C₁-С₆алкил, -(OCH₂)_nO-(C₁-С₆алкил), -(CH₂O)_nC(O)-(С₁-С₆алкил), -(OCH₂)_nNHC(O)-R_1sub, -(CH₂O)_nC(O)-NR_1subR_2sub, -S(O)₂-R_S, -S(O)-R_S (R_S представляет собой C₁-С₆алкил или группу -(CH₂)_m-NR_1subR_2sub), NO₂, CN или галоген (F, Cl, Br, I, предпочтительно F или Cl), в зависимости от контекста применения заместителя. Каждый из R_1sub и R_2sub в соответствующем контексте представляет собой Н или C₁-С₆алкильную группу (которая может быть необязательно замещена одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами, предпочтительно фтором). В химическом контексте определенного соединения и применяемого заместителя под термином «замещенный» также следует понимать необязательно замещенную арильную или гетероарильную группу или необязательно замещенную гетероциклическую группу, описанные далее в данном документе. Алкиленовые группы также могут быть замещены, как далее раскрыто в данном документе, предпочтительно необязательно замещенными C₁-С₆алкильными группами (метил, этил, или гидроксиметил, или гидроксиэтил являются предпочтительными, обеспечивая, таким образом, хиральный центр), группой, представляющей собой боковую цепь аминокислоты, как далее описано в данном документе, амидогруппой, как описано выше в данном документе, или уретановой группой, группой O-C(O)-NR_1subR_2sub, где R_1sub и R_2sub являются такими, как описано далее в данном документе, хотя в качестве заместителей также можно применять многочисленные другие группы. Различные необязательно замещенные фрагменты могут быть замещены 3 или более заместителями, предпочтительно не более чем 3 заместителями и предпочтительно 1 или 2 заместителями. Следует отметить, что в случаях, где в соединении в конкретном положении молекулы необходимо замещение (в основном, из-за валентности), но замещение не указано, то данный заместитель толкуют или понимают как Н, если контекст замещения не предполагает иного.

[0072] Термин «арил» или «ароматический» в соответствующем контексте относится к замещенному (как далее описано в данном документе) или незамещенному одновалентному ароматическому радикалу, имеющему одно кольцо (например, бензол, фенил, бензил) или конденсированные кольца (например, нафтил, антраценил, фенантренил и т.д.), и он может быть связан с соединением в соответствии с настоящим изобретением в любом доступном устойчивом положении на кольце(-ах), или в ином случае как указано в представленной химической структуре. Другие примеры арильных групп в соответствующем контексте могут включать, среди прочих, гетероциклические ароматические кольцевые системы, «гетероарильные» группы, содержащие один или более атомов азота, кислорода или серы в кольце (моноциклическом), такие как имидазол, фурил, пиррол, фуранил, тиен, тиазол, пиридин, пиримидин, пиразин, триазол, оксазол, или конденсированные кольцевые системы, такие как индол, хинолин, индолизин, азаиндолизин, бензофуразан и т.д., которые могут быть необязательно замещены, как описано выше. В число гетероарильных групп, которые могут быть упомянуты, включены, среди прочих, азотсодержащие гетероарильные группы, такие как пиррол, пиридин, пиридон, пиридазин, пиримидин, пиразин, пиразол, имидазол, триазол, триазин, тетразол, индол, изоиндол, индолизин, азаиндолизин, пурин, индазол, хинолин, дигидрохинолин, тетрагидрохинолин, изохинолин, дигидроизохинолин, тетрагидроизохинолин, хинолизин, фталазин, нафтиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, имидазопиридин, имидазотриазин, пиразинопиридазин, акридин, фенантридин, карбазол, карбазолин, пиримидин, фенантролин, фенацен, оксадиазол, бензимидазол, пирролопиридин, пирролопиримидин и пиридопиримидин; серосодержащие ароматические гетероциклы, такие как тиофен и бензотиофен; кислородсодержащие ароматические гетероциклы, такие как фуран, пиран, циклопентапиран, бензофуран и изобензофуран; а также ароматические гетероциклы, содержащие 2 или более гетероатомов, выбранных из азота, серы и кислорода, такие как тиазол, тиадизол, изотиазол, бензоксазол, бензотиазол, бензотиадиазол, фенотиазин, изоксазол, фуразан, феноксазин, пиразолоксазол, имидазотиазол, тиенофуран, фуропиррол, пиридоксазин, фуропиридин, фуропиримидин, тиенопиримидин и оксазол, все из которых могут быть необязательно замещены.

[0073] Термин «замещенный арил» относится к ароматической карбоциклической группе, состоящей из по меньшей мере одного ароматического кольца или нескольких конденсированных колец, по меньшей мере одно из которых является ароматическим, где кольцо(-а) является(являются) замещенным(-и) одним или более заместителями. Например, арильная группа может содержать заместитель(-ли), выбранный(-ые) из: -(СН₂)_nOH, -(СН₂)_n-O-(С₁-С₆)алкила, -(СН₂)_n-O-(СН₂)_n-(С₁-С₆)алкила, -(СН₂)_n-С(O)(С₀-С₆)алкила, -(СН₂)_n-С(O)O(С₀-С₆)алкила, -(СН₂)_n-ОС(O)(С₀-С₆)алкила, амина, моно- или ди-(С₁-С₆алкил)амина, где алкильная группа на амине необязательно замещена 1 или 2 гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами (предпочтительно F, Cl), ОН, СООН, C₁-С₆алкила, предпочтительно СН₃, CF₃, ОМе, OCF₃, NO₂ или группы CN (замещение каждой из которых может происходить в орто-, мета- и/или пара-положениях фенильного кольца, предпочтительно пара-), необязательно замещенной фенильной группы (фенильная группа как таковая предпочтительно замещена линкерной группой, присоединенной к группе РТМ, в том числе к группе ULM) и/или из по меньшей мере одного из F, Cl, ОН, СООН, СН₃, CF₃, ОМе, OCF₃, NO₂ или группы CN (в орто-, мета- и/или пара-положениях фенильного кольца, предпочтительно пара-), нафтильной группы, которая может быть необязательно замещена, необязательно замещенного гетероарила, предпочтительно необязательно замещенного изоксазола, в том числе метилзамещенного изоксазола, необязательно замещенного оксазола, в том числе метилзамещенного оксазола, необязательно замещенного тиазола, в том числе метилзамещенного тиазола, необязательно замещенного изотиазола, в том числе метилзамещенного изотиазола, необязательно замещенного пиррола, в том числе метилзамещенного пиррола, необязательно замещенного имидазола, в том числе метилимидазола, необязательно замещенного бензимидазола или метоксибензилимидазола, необязательно замещенного оксимидазола или метилоксимидазола, необязательно замещенной диазольной группы, в том числе метилдиазольной группы, необязательно замещенной триазольной группы, в том числе метилзамещенной триазольной группы, необязательно замещенной пиридиновой группы, в том числе галоген-предпочтительно, F) или метилзамещенной пиридиновой группы или оксапиридиновой группы (где пиридиновая группа соединена с фенильной группой с помощью атома кислорода), необязательно замещенного фурана, необязательно замещенного бензофурана, необязательно замещенного дигидробензофурана, необязательно замещенного индола, индолизина или азаиндолизина (2-, 3- или 4-азаиндолизина), необязательно замещенного хинолина и их комбинаций.

[0074] «Карбоксил» обозначает группу --C(O)OR, где R представляет собой водород, алкил, замещенный алкил, арил, замещенный арил, гетероарил или замещенный гетероарил, при этом такие типичные заместители имеют значения, которые идентичны определениям соответствующих групп, определенных в данном документе.

[0075] Термин «гетероарил» или «гетарил» может означать без ограничения необязательно замещенный хинолин (который может быть присоединен к фармакофору или замещен по любому атому углерода в хинолиновом кольце), необязательно замещенный индол (в том числе дигидроиндол), необязательно замещенный индолизин, необязательно замещенный азаиндолизин (2, 3 или 4-азаиндолизин), необязательно замещенный бензимидазол, бензодиазол, бензоксофуран, необязательно замещенный имидазол, необязательно замещенный изоксазол, необязательно замещенный оксазол (предпочтительно метилзамещенный), необязательно замещенный диазол, необязательно замещенный триазол, тетразол, необязательно замещенный бензофуран, необязательно замещенный тиофен, необязательно замещенный тиазол (предпочтительно метил- и/или тиолзамещенный), необязательно замещенный изотиазол, необязательно замещенный триазол (предпочтительно 1,2,3-триазол, замещенный метильной группой, триизопропилсилильной группой, необязательно замещенной -(CH₂)_m-O-C₁-С₆алкильной группой или необязательно замещенной -(СН₂)_m-С(O)-O-С₁-С₆алкильной группой), необязательно замещенный пиридин (2-, 3 или 4-пиридин) или группу в соответствии с химической структурой:

где

S^c представляет собой CHR^SS, NR^URE или О;

R^HET представляет собой Н, CN, NO₂, галоген (предпочтительно Cl или F), необязательно замещенный C₁-С₆алкил (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами (например, CF₃), необязательно замещенный O(С₁-С₆алкил) (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами) или необязательно замещенную ацетиленовую группу -C≡C-R_a, где R_a представляет собой Н или C₁-С₆алкильную группу (предпочтительно C₁-С₃алкил);

R^SS представляет собой Н, CN, NO₂, галоген (предпочтительно F или Cl), необязательно замещенный C₁-С₆алкил (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами), необязательно замещенный O-(С₁-С₆алкил) (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами) или необязательно замещенный -С(O)(С₁-С₆алкил) (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами);

R^URE представляет собой H, C₁-С₆алкил (предпочтительно Н или C₁-С₃алкил) или -С(O)(С₁-С₆алкил), каждая группа из которых необязательно замещена одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами, предпочтительно фтором, или необязательно замещенный гетероцикл, например, пиперидин, морфолин, пирролидин, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, пиперидин, пиперазин, каждый из которых необязательно замещен, и

Y^C представляет собой N или C-R^YC, где R^YC представляет собой Н, ОН, CN, NO₂, галоген (предпочтительно Cl или F), необязательно замещенный C₁-С₆алкил (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами (например, CF₃), необязательно замещенный O(С₁-С₆алкил) (предпочтительно замещенный одной или двумя гидроксильными группами или не более чем тремя галогенсодержащими группами) или необязательно замещенную ацетиленовую группу -C≡C-R_a, где R_a представляет собой Н или C₁-С₆алкильную группу (предпочтительно C₁-С₃алкил);

[0076] Термин «гетероцикл» относится к циклической группе, которая содержит по меньшей мере один гетероатом, например, N, О или S, и может быть ароматической (гетероарил) или неароматической. Таким образом, гетероарильные фрагменты включены в определение гетероцикла, в зависимости от контекста их применения. Иллюстративные гетероарильные группы описаны выше в данном документе.

[0077] Иллюстративные гетероциклические группы включают, среди прочих, азетидинил, бензимидазолил, 1,4-бензодиоксанил, 1,3-бензодиоксолил, бензоксазолил, бензотиазолил, бензотиенил, дигидроимидазолил, дигидропиранил, дигидрофуранил, диоксанил, диоксоланил, этиленмочевину, 1,3-диоксолан, 1,3-диоксан, 1,4-диоксан, фурил, гомопиперидинил, имидазолил, имидазолинил, имидазолидинил, индолинил, индолил, изохинолинил, изотиазолидинил, изотиазолил, изоксазолидинил, изоксазолил, морфолинил, нафтиридинил, оксазолидинил, оксазолил, пиридон, 2-пирролидон, пиридин, пиперазинил, N-метилпиперазинил, пиперидинил, фталимид, сукцинимид, пиразинил, пиразолинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, пирролил, хинолинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидрохинолин, тиазолидинил, тиазолил, тиенил, тетрагидротиофен, оксан, оксетанил, оксатиоланил, тиан.

[0078] Гетероциклические группы могут быть необязательно замещены членом, выбранным из группы, состоящей из алкокси, замещенного алкокси, циклоалкила, замещенного циклоалкила, циклоалкенила, замещенного циклоалкенила, ацила, ациламино, ацилокси, амино, замещенного амино, аминоацила, аминоацилокси, оксиаминоацила, азидо, циано, галогена, гидроксила, кето, тиокето, карбокси, карбоксиалкила, тиоарилокси, тиогетероарилокси, тиогетероциклоокси, тиола, тиоалкокси, замещенного тиоалкокси, арила, арилокси, гетероарила, гетероарилокси, гетероциклической группы, гетероциклоокси, гидроксиамино, алкоксиамино, нитро, -SO-алкила, -SO-замещенного алкила, -SO-арила, -SO-гетероарила, -SO2-алкила, -SO2-замещенного алкила, -SO2-арила, оксо (=O) и -SO2-гетероарила. Такие гетероциклические группы могут иметь одно кольцо или множество конденсированных колец. Примеры содержащих азот гетероциклов и гетероарилов включают без ограничения пиррол, имидазол, пиразол, пиридин, пиразин, пиримидин, пиридазин, индолизин, изоиндол, индол, индазол, пурин, хинолизин, изохинолин, хинолин, фталазин, нафтилпиридин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, птеридин, карбазол, карболин, фенантридин, акридин, фенантролин, изотиазол, феназин, изоксазол, феноксазин, фенотиазин, имидазолидин, имидазолин, пиперидин, пиперазин, индолин, морфолино, пиперидинил, тетрагидрофуранил и т.п., а также содержащие N-алкоксиазот гетероциклы. Термин «гетероциклическая группа» также включает бициклические группы, в которых любое из гетероциклических колец конденсировано с бензольным кольцом или циклогексановым кольцом или другим гетероциклическим кольцом (например, индолил, хинолил, изохинолил, тетрагидрохинолил и т.п.).

[0079] Термин «циклоалкил» может означать без ограничения одновалентные группы, полученные из моноциклических или полициклических алкильных групп или циклоалканов, определенных в данном документе, например, насыщенные моноциклические углеводородные группы, содержащие от трех до двадцати атомов углерода в кольце, в том числе без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и т.п. Термин «замещенный циклоалкил» может означать без ограничения моноциклическую или полициклическую алкильную группу и предусматривает замещение одним или более заместителями, например, амино, галогеном, алкилом, замещенным алкилом, карбилокси, карбилмеркапто, арилом, нитро, меркапто или сульфо, при этом такие типичные группы-заместители имеют значения, которые идентичны определениям соответствующих групп, определенных в данном обозначении.

[0080] Под термином «углеводородный радикал» следует понимать соединение, которое содержит атомы углерода и водорода и которое может быть полностью насыщенным, частично ненасыщенным или ароматическим, и он включает арильные группы, алкильные группы, алкенильные группы и алкинильные группы.

[0081] Термин «низший алкил» относится к метилу, этилу или пропилу.

[0082] Термин «низший алкокси» относится к метокси, этокси или пропокси.

[0083] Более конкретно, неограничивающие примеры CLM включают показанные ниже CLM, а также «гибридные» молекулы или соединения, которые образуются в результате комбинации 1 или более признаков следующих соединений:

где

W независимо выбран из группы, состоящей из CH₂, CHR, С=O, SO₂, NH и N-алкила;

R¹ отсутствует или выбран из группы, состоящей из Н, СН, CN, С1-С3алкила;

R² представляет собой Н или С1-С3алкил;

R³ выбран из Н, алкила, замещенного алкила, алкокси, замещенного алкокси;

R⁴ представляет собой метил или этил;

R⁵ представляет собой Н или галоген;

R⁶ представляет собой Н или галоген;

R в CLM представляет собой Н;

R' представляет собой Н или точку присоединения РТМ, РТМ', химической линкерной группы (L), ULM, CLM, CLM',

каждый из Q1 и Q2 независимо представляет собой С или N, замещенный группой, независимо выбранной из Н или С1-С3алкила;

Rn предусматривает функциональную группу или атом.

[0084] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, W, R¹, R², Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Rn могут быть независимо ковалентно связаны с линкером и/или линкером, к которому присоединены одна или более групп РТМ, ULM, ULM', CLM или CLM'.

[0085] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, R¹, R², Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Rn могут быть независимо ковалентно связаны с линкером и/или линкером, к которому присоединены одна или более групп РТМ, ULM, ULM', CLM или CLM'.

[0086] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Rn могут быть независимо ковалентно связаны с линкером и/или линкером, к которому присоединены одна или более групп РТМ, ULM, ULM', CLM или CLM'.

[0087] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, R_n модифицирован так, чтобы ковалентно связываться с линкерной группой (L), РТМ, ULM, вторым CLM, имеющим такую же химическую структуру, как CLM, CLM', вторым линкером или любым их множеством или комбинацией.

[0088] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM выбран из:

где R' представляет собой галоген, и R1 описан в любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе.

[0089] В определенных случаях «CLM» может представлять собой имиды, которые связываются с цереблоном Е3-лигазного комплекса. Такие имиды и точка присоединения линкера могут быть представлены без ограничения следующими структурами:

[0090] Иллюстративные линкеры

[0091] В определенных вариантах осуществления соединения, описанные в данном документе, содержат один или более CLM, химически соединенных или связанных с одним или более РТМ (например, РТМ и/или РТМ'), ULM (например, ULM, ULM' и/или CLM') посредством химического линкера (L). В определенных вариантах осуществления линкерная группа L представляет собой группу, содержащую одно или более ковалентно связанных структурных звеньев (например, -A^L _1…(A^L)_q- или -(A^L)_q-), где A₁ представляет собой группу, связанную с РТМ, и Aq представляет собой группу, связанную с по меньшей мере одним из ULM, ULM', CLM, CLM' или их комбинацией. В определенных вариантах осуществления A^L ₁ связывает CLM или CLM' непосредственно с другим ULM, РТМ или их комбинацией. В других вариантах осуществления A^L ₁ связывает CLM или CLM' опосредованно с другим ULM, РТМ или их комбинацией посредством A_q.

[0092] В определенных вариантах осуществления линкерная группа представляет собой -(A^L)_q-, где

(A^L)_q представляет собой группу, которая соединена с по меньшей мере одним из фрагмента ULM, фрагмента РТМ или их комбинации;

q в линкере представляет собой целое число, которое больше или равняется 1;

каждый A^L независимо выбран из группы, состоящей из связи, CR^L1R^L2, О, S, SO, SO₂, NR^L3, SO₂NR^L3, SONR^L3, CONR^L3, NR^L3CONR^L4, NR^L3SO₂NR^L4, CO, CR^L1=CR^L2, C≡C, SiR^L1R^L2, P(O)R^L1, P(O)OR^L1, NR^L3C(=NCN)NR^L4, NR^L3C(=NCN), NR^L3C(=CNO₂)NR^L4, С_3-11циклоалкила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, С_5-13спироциклоалкила, необязательно замещенного 0-9 группами R^L1 и/или R^L2, С_3-11гетероциклила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, С_5-13спирогетероциклоалкила, необязательно замещенного 0-8 группами R^L1 и/или R^L2, арила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, гетероарила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, где каждый из R^L1 или R^L2 независимо необязательно связан с другими группами с образованием циклоалкильного и/или гетероциклильного фрагмента, необязательно замещенного 0-4 группами R^L5; и

каждая из R^L1, R^L2, R^L3, R^L4 и R^L5 независимо представляет собой Н, галоген, С_1-8алкил, ОС_1-8алкил, SC_1-8алкил, NHC_1-8алкил, N(С_1-8алкил)₂, С_3-11циклоалкил, арил, гетероарил, С_3-11гетероциклил, ОС_1-8циклоалкил, SC_1-8циклоалкил, NHC_1-8циклоалкил, N(С_1-8циклоалкил)₂, N(С_1-8циклоалкил)(С_1-8алкил), ОН, NH₂, SH, SO₂C_1-8алкил, Р(O)(ОС_1-8алкил)(С_1-8алкил), Р(O)(ОС_1-8алкил)₂, СС-С_1-8алкил, ССН, CH=CH(C_1-8алкил), С(С_1-8алкил)=СН(С_1-8алкил), С(С_1-8алкил)=С(С_1-8алкил)₂, Si(OH)₃, Si(C_1-8алкил)₃, Si(OH)(C_1-8алкил)₂, СОС_1-8алкил, СО₂Н, галоген, CN, CF₃, CHF₂, CH₂F, NO₂, SF₅, SO₂NHC_1-8алкил, SO₂N(C_1-8алкил)₂, SONHC_1-8алкил, SON(C_1-8алкил)₂, CONHC_1-8алкил, CON(C_1-8алкил)₂, N(C_1-8алкил)CONH(C_1-8алкил), N(C_1-8алкил)CON(C_1-8алкил)₂, NHCONH(C_1-8алкил), NHCON(C_1-8алкил)₂, NHCONH₂, N(С_1-8алкил)SO₂NH(C_1-8алкил), N(C_1-8алкил)SO₂N(C_1-8алкил)₂, NHSO₂NH(C_1-8алкил), NHSO₂N(C_1-8алкил)₂, NHSO₂NH₂.

[0093] В определенных вариантах осуществления q в линкере представляет собой целое число, которое больше или равняется 0. В определенных вариантах осуществления q представляет собой целое число, которое больше или равняется 1.

[0094] Например, в определенных вариантах осуществления, если q составляет более 2, A^L _q представляет собой группу, которая соединена с фрагментом ULM или ULM' (таким как CLM или CLM'), и A^L ₁ и A^L _q соединены посредством структурных звеньев линкера (L).

[0095] Например, в определенных вариантах осуществления, если q в линкере равняется 2, A^L _q представляет собой группу, которая соединена с A^L ₁ и с фрагментом ULM или ULM' (таким как CLM или CLM').

[0096] Например, в определенных вариантах осуществления, если q в линкере равняется 1, структура линкерной группы L предусматривает -A^L ₁-, и A^L ₁ представляет собой группу, которая соединена с фрагментом ULM или ULM' (таким как CLM или CLM') и фрагментом РТМ.

[0097] В определенных вариантах осуществления линкер (L) предусматривает группу, представленную общей структурой, выбранной из группы, состоящей из:

-NR(СН₂)_n-(низший алкил)-, -NR(CH₂)_n-(низший алкоксил)-, -NR(CH₂)_n-(низший алкоксил)-ОСН₂-, -NR(СН₂)_n-(низший алкоксил)-(низший алкил)-ОСН₂-, -NR(CH₂)_n-(циклоалкил)-(низший алкил)-ОСН₂-, -NR(CH₂)_n-(гетороциклоалкил)-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(низший алкил)-O-СН₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(гетероциклоалкил)-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-арил-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(гетероарил)-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(циклоалкил)-O-(гетероарил)-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(циклоалкил)-O-арил-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(низший алкил)-NH-арил-O-CH₂-, -NR(CH₂CH₂O)_n-(низший алкил)-O-арил-CH₂, -NR(CH₂CH₂O)_n-циклоалкил-О-арил-, -NR(CH₂CH₂O)_n-циклоалкил-O-(гетероарил)-, -NR(СН₂СН₂)_n-(циклоалкил)-O-(гетероцикл)-СН₂, -NR(CH₂CH₂)_n-(гетероцикл)-(гетероцикл)-СН₂, -N(R1R2)-(гетороцикл)-CH₂; где

n в линкере может равняться 0-10;

R в линкере может представлять собой Н, низший алкил;

R1 и R2 в линкере могут образовывать кольцо с соединяющим N.

[0098] В определенных вариантах осуществления линкер (L) предусматривает группу, представленную общей структурой, выбранной из группы, состоящей из:

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-;

где

m, n, о, p, q и r в линкере независимо равняются 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20;

если число равняется нулю, то связь N-O или O-O отсутствует;

R в линкере представляет собой Н, метил и этил;

X в линкере представляет собой Н и F;

где m линкере может равняться 2, 3, 4, 5;

где каждый n и m в линкере независимо может равняться 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6.

[0099]

[0100] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

где каждый m и n независимо выбран из 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

[0101] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

где каждый из m, n, о, p, q и r независимо равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20.

[0102] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном

документе, L выбран из группы, состоящей из:

[0103] В дополнительных вариантах осуществления линкер (L) предусматривает структуру, выбранную без ограничения из структур, показанных ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения к фрагментам РТМ или ULM:

где

каждое из W^L1 и W^L2 независимо представляет собой 4-8-членное кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно замещенное R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, галоген, ОН, CN, CF₃, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), C₁-С₆алкокси (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 4-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-4 гетероатома;

каждый Y^L1 независимо представляет собой связь, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), и необязательно один или более атомов С заменены О; или C₁-С₆алкокси (линейный, разветвленный, необязательно замещенный);

n составляет 0-10; и

пунктирная линия указывает на точку присоединения к фрагментам РТМ или ULM.

[0104] В дополнительных вариантах осуществления линкер (L) предусматривает структуру, выбранную без ограничения из структур, показанных ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения к фрагментам РТМ или ULM:

где

каждое из W^L1 и W^L2 независимо представляет собой арил, гетероарил, циклическую группу, гетероциклическую группу, C₁-С₆алкил, бициклическую группу, биарил, бигетероарил или бигетероциклическую группу, при этом каждая необязательно замещена R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, галоген, ОН, CN, CF₃, гидроксил, нитро, С≡СН, С_2-6алкенил, C₂-С₆алкинил, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), C₁-С₆алкокси (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), OC_1-3алкил (необязательно замещенный 1 или более -F), ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2, CN, или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 4-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-4 гетероатома;

каждый Y^L1 независимо представляет собой связь, NR^YL1, О, S, NR^YL2, CR^YL1R^YL2, С=O, C=S, SO, SO₂, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), и необязательно один или более атомов С заменены О; C₁-С₆алкокси (линейный, разветвленный, необязательно замещенный);

Q^L представляет собой 3-6-членное алициклическое или ароматическое кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно содержащее мостиковую связь, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-С₆алкоксилом), или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый из R^YL1, R^YL2 независимо представляет собой Н, ОН, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-С₆алкоксилом), или R¹, R² вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

n составляет 0-10; и

[0105] В дополнительных вариантах осуществления линкерная группа представляет собой необязательно замещенный (поли)этиленгликоль, содержащий от 1 до приблизительно 100 этиленглико левых звеньев, от приблизительно 1 до приблизительно 50 этиленглико левых звеньев, от 1 до приблизительно 25 этиленглико левых звеньев, от приблизительно 1 до 10 этиленглико левых звеньев, от 1 до приблизительно 8 этиленгликолевых звеньев и от 1 до 6 этиленгликолевых звеньев, от 2 до 4 этиленгликолевых звеньев, или необязательно замещенные алкильные группы с вкраплениями необязательно замещенных атомов О, N, S, Р или Si. В определенных вариантах осуществления линкер замещен арильной, фенильной, бензильной, алкильной, алкиленовой или гетероциклической группой. В определенных вариантах осуществления линкер может являться асимметричным или симметричным.

[0106] В любом из вариантов осуществления соединений, описанных в данном документе, линкерная группа может представлять собой любой подходящий фрагмент, описанный в данном документе. В одном варианте осуществления линкер представляет собой замещенную или незамещенную полиэтиленгликолевую группу с размером в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 12 этиленгликолевых звеньев, от 1 до приблизительно 10 этиленгликолевых звеньев, приблизительно от 2 приблизительно до 6 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 2 до 5 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 2 до 4 этиленгликолевых звеньев.

[0107] В другом варианте осуществления настоящее изобретение направлено на соединение, которое содержит группу РТМ, которая связывается с целевым белком или полипептидом, которые убиквитинированы убиквитинлигазой и непосредственно химически соединены с группой ULM (такой как CLM) или посредством линкерного фрагмента L, или альтернативно РТМ представляет собой группу ULM' (такую как CLM'), которая также является фрагментом, связывающим убиквитинлигазу, который может быть идентичным или отличным от группы ULM, описанной выше, и непосредственно соединен с группой ULM непосредственно или посредством линкерного фрагмента; и при этом L представляет собой линкерный фрагмент, описанный выше, который может присутствовать или отсутствовать и который химически (ковалентно) связывает ULM с РТМ, или его фармацевтически приемлемую соль, энантиомер, стереоизомер, сольват или полиморф.

[0108] В определенных вариантах осуществления линкерная группа L представляет собой группу, содержащую одно или более ковалентно связанных структурных звеньев, независимо выбранных из группы, состоящей из:

X выбран из группы, состоящей из О, N, S, S(O) и SO₂; n представляет собой целое число от 1 до 5; R^L1 представляет собой водород или алкил,

представляет собой моно- или бициклический арил или гетероарил, необязательно замещенные 1-3 заместителями, выбранными из алкила, галогена, галогеналкила, гидрокси, алкокси или пиано;

представляет собой моно- или бициклический циклоалкил или гетероциклоалкил, необязательно замещенные 1-3 заместителями, выбранными из алкила, галогена, галогеналкила, гидрокси, алкокси или циано; и фрагмент фенильного кольца может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкила, галогена, галогеналкила, гидрокси, алкокси и циано. В одном варианте осуществления линкерная группа L содержит не более 10 ковалентно связанных структурных звеньев, описанных выше.

[0109] Хотя группа ULM и группа РТМ могут быть ковалентно связаны с линкерной группой посредством любой группы, которая является подходящей и устойчивой относительно химической природы линкера, в предпочтительных аспектах настоящего изобретения линкер независимо ковалентно связан с группой ULM и группой РТМ предпочтительно посредством амидной, сложноэфирной, сложнотиоэфирной групп, кетогруппы, карбаматной группы (уретановой группы), атома углерода или эфирной группы, каждая группа из которых может быть включена где-либо на группе ULM и группе РТМ с обеспечением максимального связывания группы ULM с убиквитинлигазой и группы РТМ с целевым белком, подлежащим разрушению. (Следует отметить, что в определенных аспектах, если группа РТМ представляет собой группу ULM, целевой белок, подлежащий разрушению, может сам по себе представлять убиквитинлигазу). В определенных предпочтительных аспектах линкер может быть соединен с необязательно замещенной алкильной, алкиленовой, алкеновой или алкиновой группой, арильной группой или гетероциклической группой на группах ULM и/или РТМ.

[0110] В дополнительных вариантах осуществления q представляет собой целое число от 1 до 100, от 1 до 90, от 1 до 80, от 1 до 70, от 1 до 60, от 1 до 50, от 1 до 40, от 1 до 30, от 1 до 20 или от 1 до 10.

[0111] В определенных вариантах осуществления линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

[0112] В дополнительных вариантах осуществления линкерная группа представляет собой необязательно замещенный (поли)этиленгликоль, содержащий от 1 до приблизительно 100 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 1 до приблизительно 50 этиленгликолевых звеньев, от 1 до приблизительно 25 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 1 до 10 этиленгликолевых звеньев, от 1 до приблизительно 8 этиленгликолевых звеньев и от 1 до 6 этиленгликолевых звеньев, от 2 до 4 этиленгликолевых звеньев, или необязательно замещенные алкильные группы с вкраплениями необязательно замещенных атомов О, N, S, Р или Si. В определенных вариантах осуществления линкер замещен арильной, фенильной, бензильной, алкильной, алкиленовой или гетероциклической группой. В определенных вариантах осуществления линкер может являться асимметричным или симметричным.

[0113] В любом из вариантов осуществления соединений, описанных в данном документе, линкерная группа может представлять собой любой подходящий фрагмент, описанный в данном документе. В одном варианте осуществления линкер представляет собой замещенную или незамещенную полиэтиленгликолевую группу с размером в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 12 этиленгликолевых звеньев, от 1 до приблизительно 10 этиленглико левых звеньев, приблизительно от 2 приблизительно до 6 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 2 до 5 этиленгликолевых звеньев, от приблизительно 2 до 4 этиленгликолевых звеньев.

[0114] Хотя группа CLM (или ULM) и группа РТМ могут быть ковалентно связаны с линкерной группой посредством любой группы, которая является подходящей и устойчивой относительно химической природы линкера, в предпочтительных аспектах настоящего изобретения линкер независимо ковалентно связан с группой CLM и группой РТМ предпочтительно посредством амидной, сложноэфирной, сложнотиоэфирной групп, кетогруппы, карбаматной группы (уретановой группы), атома углерода или эфирной группы, каждая группа из которых может быть включена где-либо на группе CLM и группе РТМ с обеспечением максимального связывания группы CLM с убиквитинлигазой и группы РТМ с целевым белком, подлежащим разрушению. (Следует отметить, что в определенных аспектах, если группа РТМ представляет собой группу ULM, целевой белок, подлежащий разрушению, может сам по себе представлять убиквитинлигазу). В определенных предпочтительных аспектах линкер может быть соединен с необязательно замещенной алкильной, алкиленовой, алкеновой или алкиновой группой, арильной группой или гетероциклической группой на группах CLM и/или РТМ.

[0115] В определенных вариантах осуществления «L» может представлять собой линейные цепи с 4-24 атомами в линейной цепи, при этом атом углерода в линейной цепи может быть замещен кислородом, азотом, амидом, фторированным углеродом и т.д., такие как следующие:

[0116] В определенных вариантах осуществления «L» может представлять собой нелинейные цепи и может представлять собой алифатические, или ароматические, или гетероароматические циклические фрагменты, некоторые примеры «L» включают без ограничения следующие:

где

«X» в вышеуказанных структурах может представлять собой линейную цепь с количеством атомов, находящимся в диапазоне от 2 до 14, и при этом указанная цепь может содержать гетероатомы, такие как кислород; и

«Y» в вышеуказанных структурах может представлять собой О, N, S(O)_n (n=0, 1, 2).

[0117] Иллюстративные РТМ

[0118] В предпочтительных аспектах настоящего изобретения группа РТМ представляет собой группу, которая связывается с целевыми белками. Мишени группы РТМ являются многочисленными по своей природе и выбраны из белков, которые экспрессируются в клетке так, что по меньшей мере часть последовательностей встречается в клетке и может связываться с группой РТМ. Термин «белок» включает олигопептиды и полипептидные последовательности достаточной длины для того, чтобы они могли связываться с группой РТМ в соответствии с настоящим изобретением. Любой белок в эукариотической системе или микробной системе, в том числе вирусе, бактерии или грибах, как описано далее в данном документе, являются мишенями убиквитинирования, опосредованного соединениями в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительно целевой белок представляет собой эукариотический белок. В определенных аспектах фрагмент, связывающий белок, представляет собой галогеналкан (предпочтительно C₁-С₁₀алкильную группу, которая замещена по меньшей мере одной галогенсодержащей группой, предпочтительно галогенсодержащей группой на удаленном конце алкильной группы, т.е. в стороне, удаленной от линкера или группы CLM), который может ковалентно связываться с ферментом дегалогеназой у пациента или субъекта или при диагностическом анализе.

[0119] Группы РТМ в соответствии с настоящим изобретением включают, например, включают любой фрагмент, который специфически связывается с белком (связывается с целевым белком), и включают следующие неограничивающие примеры низкомолекулярных фрагментов, нацеливающихся на белок: ингибиторы Hsp90, ингибиторы киназы, ингибиторы андрогеновых рецепторов, ингибиторы HDM2 и MDM2, соединения, направленно воздействующие на бромодоменсодержащие белки человека BET, ингибиторы HDAC, ингибиторы лизинметилтрансферазы человека, ингибиторы ангиогенеза, соединения, воздействующие на ядерные гормональные рецепторы, иммуносупрессорные соединения и соединения, направленно воздействующие на рецептор ароматических углеводородов (AHR), среди многочисленных других. В композициях, описанных ниже, проиллюстрированы некоторые из представителей данных девяти типов низкомолекулярных фрагментов, связывающих целевой белок. Такие низкомолекулярные фрагменты, связывающие целевой белок, также включают фармацевтически приемлемые соли, энантиомеры, сольваты и полиморфы таких композиций, а также другие малые молекулы, которые могут нацеливаться на белок, представляющий интерес. Такие связывающие фрагменты соединены с фрагментом, связывающим убиквитинлигазу, предпочтительно с помощью линкера с целью размещения целевого белка (с которым связан фрагмент, нацеливающийся на белок) в непосредственной близости от убиквитинлигазы для убиквитинирования и разрушения.

[0120] Любой белок, который может связываться с фрагментом, нацеливающимся на белок, или группой РТМ и может подвергаться действию убиквитинлигазы или разрушаться ею, является целевым белком в соответствии с настоящим изобретением. В целом, целевые белки могут включать, например, структурные белки, рецепторы, ферменты, белки поверхности клеток, белки, относящиеся к общему функционированию клетки, в том числе белки, вовлеченные в каталитическую активность, ароматазную активность, двигательную активность, хеликазную активность, метаболические процессы (анаболизм и катаболизм), антиоксидантную активность, протеолиз, биосинтез, белки с киназной активностью, оксидоредуктазной активностью, трансферазной активностью, гидролазной активностью, лиазной активностью, изомеразной активностью, лигазной активностью, активностью регуляторного фермента, активностью переносчика сигнала, активностью структурной молекулы, связывающей активностью (белок, липид, углевод), рецепторной активностью, вовлеченные в клеточную подвижность, мембранный синтез, клеточную коммуникацию, регуляцию биологических процессов, развитие, клеточную дифференциацию, ответ на стимул, ассоциированные с поведением клетки белки, ассоциированные с адгезией клеток белки, белки, вовлеченные в гибель клеток, белки, вовлеченные в транспорт (в том числе активность транспортера белков, ядерно-цитоплазматический транспорт, активность ионного транспортера, активность канала-транспортера, активность в отношении переноса, пермеазная активность, активность в отношении секреции, активность транспортера электронов, патогенез, активность регулятора шаперонов, активность в отношении связывания нуклеиновой кислоты, активность регулятора транскрипции, активность в отношении внеклеточной организации и биогенеза, активность регулятора трансляции). Белки, представляющие интерес, могут включать белки эукариотов и прокариотов, в том числе людей как мишени для терапии лекарственным средством, других животных, в том числе одомашненных животных, микроорганизмов для определения мишеней антибиотиков и других противомикробных средств и растений и даже вирусов, среди многочисленных других.

[0121] В еще одних вариантах осуществления группа РТМ представляет собой галогеналкильную группу, где указанная алкильная группа, как правило, варьирует по размеру в диапазоне от приблизительно 1 атома или 2 атомов углерода до приблизительно 12 атомов углерода в длину, зачастую от приблизительно 2 до 10 атомов углерода в длину, зачастую от приблизительно 3 атомов углерода до приблизительно 8 атомов углерода в длину, чаще от приблизительно 4 атомов углерода до приблизительно 6 атомов углерода в длину. Галогеналкильные группы представляют собой, как правило, линейные алкильные группы (хотя также можно применять алкильные группы с разветвленной цепью) и имеют на конце по меньшей мере одну галогенсодержащую группу, предпочтительно одну галогенсодержащую группу, часто одну хлорсодержащую группу. Галогеналкильные группы РТ для применения в настоящем изобретении предпочтительно представлены химической структурой -(CH₂)_v-галоген, где v представляет собой любой целое число от 2 до приблизительно 12, зачастую от приблизительно 3 до приблизительно 8, чаще от приблизительно 4 до приблизительно 6. Галоген может представлять собой любой галоген, но предпочтительно он представляет собой Cl или Br, чаще Cl.

[0122] В другом варианте осуществления настоящее изобретение предусматривает библиотеку соединений. Библиотека содержит более одного соединения, где каждая композиция характеризуется формулой А-В, где А представляет собой фрагмент, связывающий белок убиквитинового пути (предпочтительно фрагмент, представляющий собой Е3-убиквитинлигазу, раскрытый далее в данном документе), и В является связывающим белок представителем молекулярной библиотеки, где А связан (предпочтительно, посредством линкерного фрагмента) с В, и где фрагмент, связывающий белок убиквитинового пути распознает белок убиквитинового пути, в частности, Е3-убиквитинлигазу, такую как цереблон. В конкретном варианте осуществления библиотека содержит конкретный фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса, связанный с произвольными элементами, связывающими целевой белок (например, библиотека химических соединений). В связи с этим, целевой белок предварительно не определен, и способ можно применять для определения активности предполагаемого связывающего белок элемента и его фармакологического значения как мишени, подвергающейся разрушению посредством убиквитинлигазы.

[0123] Настоящее изобретение может применяться для лечения ряда болезненных состояний и/или состояний, в том числе любого болезненного состояния и/или состояния, при котором нарушена регуляция белков, и при котором пациент получит пользу от разрушения белков.

[0124] В дополнительном аспекте в описании представлены терапевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения, описанного в данном документе, или его солевой формы и фармацевтически приемлемый носитель, добавку или вспомогательное вещество и необязательно дополнительное биологически активное средство. Терапевтические композиции модулируют разрушение белка у пациента или субъекта, например, у животного, как, например, у человека, и могут применяться для лечения или облегчения болезненных состояний или состояний, модулирование которых обеспечивается посредством разрушения белка. В определенных вариантах осуществления терапевтические композиции, описанные в данном документе, можно применять для обеспечения разрушения белков, представляющих интерес, для лечения или облегчения заболевания, например, рака (такого как рак предстательной железы) и болезни Кеннеди. В определенных дополнительных вариантах осуществления заболевание представляет собой рак предстательной железы.

[0125] В альтернативных аспектах настоящее изобретение относится к способу лечения болезненного состояния или облегчения симптомов заболевания или состояния у субъекта, нуждающегося в этом, путем разрушения белка или полипептида, за счет которых модулируется болезненное состояние или состояние, включающему введение указанному пациенту или субъекту эффективного количества, например терапевтически эффективного количества, по меньшей мере одного соединения, описанного в данном документе выше, необязательно в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, добавкой или вспомогательным веществом и необязательно дополнительным биологически активным средством, при этом композиция является эффективной в лечении или облегчении заболевания или нарушения или их симптома у субъекта. Способ в соответствии с настоящим изобретением можно применять для лечения большого количества болезненных состояний или состояний, в том числе рака, посредством введения эффективного количества по меньшей мере одного соединения, описанного в данном документе. Болезненное состояние или состояние может представлять собой заболевание, вызванное микробным организмом или другим экзогенным организмом, таким как вирус, бактерия, гриб, простейшие или другой микроорганизм, или может представлять собой болезненное состояние, которое вызвано сверхэкспрессией белка, что приводит к болезненному состоянию и/или состоянию.

[0126] В другом аспекте в описании предусмотрены способы идентификации эффектов разрушения белков, представляющих интерес, в биологической системе с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением.

[0127] Термин «целевой белок» используется в данном документе для описания белка или полипептида, которые представляют собой мишень для связывания с соединением в соответствии с настоящим изобретением и разрушения посредством убиквитинлигазы. Такие низкомолекулярные фрагменты, связывающие целевой белок, также включают фармацевтически приемлемые соли, энантиомеры, сольваты и полиморфы таких композиций, а также другие малые молекулы, которые могут нацеливаться на белок, представляющий интерес. Такие связывающие фрагменты соединены с группами CLM или ULM посредством линкерных групп L.

[0128] Целевые белки, которые могут быть связаны с фрагментом, нацеливающимся на белок, и разрушены с помощью лигазы, с которой связан фрагмент, связывающий убиквитинлигазу, включают любые белок или пептид, в том числе их фрагменты, их аналоги и/или их гомологи. Целевые белки включают белки и пептиды, обладающие любой биологической функцией или активностью, в том числе структурной, регуляторной, гормональной, ферментативной, генетической, иммунологической, сократительной, в отношении хранения, транспорта и передачи сигнала. В определенных вариантах осуществления целевые белки включают структурные белки, рецепторы, ферменты, белки поверхности клеток, белки, относящиеся к общему функционированию клетки, в том числе белки, вовлеченные в каталитическую активность, ароматазную активность, двигательную активность, хеликазную активность, метаболические процессы (анаболизм и катаболизм), антиоксидантную активность, протеолиз, биосинтез, белки с киназной активностью, оксидоредуктазной активностью, трансферазной активностью, гидролазной активностью, лиазной активностью, изомеразной активностью, лигазной активностью, активностью регуляторного фермента, активностью переносчика сигнала, активностью структурной молекулы, связывающей активностью (белок, липид, углевод), рецепторной активностью, вовлеченные в клеточную подвижность, мембранный синтез, клеточную коммуникацию, регуляцию биологических процессов, развитие, клеточную дифференциацию, ответ на стимул, ассоциированные с поведением клетки белки, ассоциированные с адгезией клеток белки, белки, вовлеченные в гибель клеток, белки, вовлеченные в транспорт (в том числе активность транспортера белков, ядерно-цитоплазматический транспорт, активность ионного транспортера, активность канала-транспортера, активность в отношении переноса, пермеазная активность, активность в отношении секреции, активность транспортера электронов, патогенез, активность регулятора шаперонов, активность в отношении связывания нуклеиновой кислоты, активность регулятора транскрипции, активность в отношении внеклеточной организации и биогенеза, активность регулятора трансляции. Белки, представляющие интерес, могут включать белки эукариотов и прокариотов, в том числе микроорганизмов, вирусов, грибов и паразитов, в том числе людей, микроорганизмов, вирусов, грибов и паразитов, среди многочисленных других, как мишени для терапии лекарственным средством, других животных, в том числе домашних животных, микроорганизмов для определения мишеней антибиотиков и других противомикробных средств и растений и даже вирусов, среди многочисленных других.

[0129] Более конкретно, ряд мишеней лекарственного средства для терапии человека представляет собой белки-мишени, с которыми может связываться фрагмент, нацеливающийся на белок, и встраивать их в соединения в соответствии с настоящим изобретением. Они включают белки, которые можно применять для восстановления функции при многочисленных полигенных заболеваниях, в том числе, например, В7.1 и В7, TINFR1m, TNFR2, NADPH-оксидаза, BclIBax и другие партнеры в пути апоптоза, рецептор С5а, HMG-CoA-редуктаза, фосфодиэстераза типа PDE V, фосфодиэстераза типа 4 PDE IV, PDE I, PDEII, PDEIII, ингибитор скваленциклазы, CXCR1, CXCR2, синтаза оксида азота (NO), циклооксигеназа 1, циклооксигеназа 2, рецепторы 5НТ, дофаминовые рецепторы, G-белки, т.е. Gq, гистаминовые рецепторы, 5-липооксигеназа, триптаза, представляющая собой серинпротеазу, тимидилатсинтаза, пурин-нуклеозидфосфорилаза, GAPDH трипаносом, гликогенфосфорилаза, угольная ангидраза, хемокиновые рецепторы, JAW STAT, RXR и подобные, протеаза HIV 1, интеграза HIV 1, нейраминидаза вируса гриппа, обратная транскриптаза гепатита В, натриевый канал, белок множественной лекарственной устойчивости (MDR), Р-гликопротеин (и MRP), тирозинкиназы, CD23, CD124, тирозинкиназа р56 lck, CD4, CD5, рецептор IL-2, рецептор IL-1, TNF-aльфaR, ICAM1, каналы Cat+, VCAM, интегрин VLA-4, селектины, CD40/CD40L, невокинины и рецепторы, инозинмонофосфатдегидрогеназа, МАР-киназа р38, путь RaslRaflMEWERK, превращающий интерлейкин-1 фермент, каспаза, протеаза NS3 HCV, РНК-хеликаза NS3 HCV, глипинамид-рибонуклеотид-формилтрансфераза, протеаза риновируса 3С, протеаза вируса простого герпеса-1 (HSV-I), протеаза цитомегаловируса (CMV), поли(ADP-рибозо)полимераза, циклинзависимые киназы, фактор роста эндотелия сосудов, окситоциновый рецептор, ингибитор микросомального транспортного белка, ингибитор транспорта желчных кислот, ингибиторы 5-альфа-редуктазы, ангиотензин-11, глициновый рецептор, рецептор обратного захвата норадреналина, эндотелиновые рецепторы, нейропептид Y и рецептор, эстрогеновые рецепторы, андрогеновые рецепторы (AR), аденозиновые рецепторы, аденозинкиназа и АМР-дезаминаза, пуринергические рецепторы (P2Y1, P2Y2, P2Y4, P2Y6, Р2Х1-7), фарнезилтрансферазы, геранилгеранилтрансфераза, рецептор TrkA для NGF, бета-амилоид, тирозинкиназа Flk-IIKDR, рецептор витронектина, интегриновый рецептор, Her-21 neu, ингибитор теломеразы, питозольная фосфолипаза А2 и рецепторная тирозинкиназа EGF. Дополнительные белки-мишени включают, например, экдизон 20-монооксидазу, ионный канал, представляющий собой лигандзависимый хлоридный канал GABA, ацетилхолинэстеразу, белок, представляющий собой потенциалочувствительный натриевый канал, кальций, высвобождающий канал из клетки, и хлоридные каналы. Еще одни дополнительные целевые белки включают ацетил-СоА-карбоксилазу, аденилосукцинатсинтетазу, протопорфириногеноксидазу и енолпирувилшикиматфосфатсинтазу.

[0130] Ферменты галогеналкандегалогеназы представляют собой другую мишень для конкретных соединений в соответствии с настоящим изобретением. Соединения в соответствии с настоящим изобретением, которые содержат хлоралкановые пептид-связывающие фрагменты (С₁-С₁₂-, зачастую приблизительно С₂-С₁₀-алкильные галогенсодержащие группы), можно применять для ингибирования и/или разрушения ферментов галогеналкандегалогеназ, которые применяют в слитых белках или соответствующих белках, используемых при диагностическом анализе, как описано в PCT/US 2012/063401, поданной 6 декабря 2011 года и опубликованной в виде WO 2012/078559 14 июня 2012 года, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

[0131] Данные различные белки-мишени можно применять в скринингах по идентификации фрагментов соединения, которые связываются с белком, и посредством встраивания фрагмента в соединения в соответствии с настоящим изобретением уровень активности белка может быть изменен для достижения конечного терапевтического результата.

[0132] Термин «фрагмент, нацеливающийся на белок» или РТМ используется для описания малой молекулы, которая связывается с целевым белком или другим белком или полипептидом, представляющим интерес, и обеспечивает размещение/присутствие данного белка или полипептида в непосредственной близости от убиквитинлигазы таким образом, что может происходить разрушение белка или полипептида посредством убиквитинлигазы. Неограничивающие примеры низкомолекулярных фрагментов, связывающих целевой белок, включают ингибиторы Hsp90, ингибиторы киназы, ингибиторы MDM2, соединения, направленно воздействующие на бромодоменсодержащие белки BET человека, ингибиторы HDAC, ингибиторы лизинметилтрансферазы человека, ингибиторы ангиогенеза, иммуносупрессорные соединения и соединения, направленно воздействующие на рецептор ароматических углеводородов (AHR), среди многочисленных других. В композициях, описанных ниже, проиллюстрированы некоторые из представителей данных девяти типов низкомолекулярных целевых белков.

[0133] Иллюстративные фрагменты, направленно воздействующие на белок, в соответствии с настоящим изобретением включают, ингибиторы галогеналкангалогеназы, ингибиторы Hsp90, ингибиторы киназы, ингибиторы MDM2, соединения, направленно воздействующие на бромодоменсодержащие белки BET человека, ингибиторы HDAC, ингибиторы лизинметилтрансферазы человека, ингибиторы ангиогенеза, иммуносупрессорные соединения и соединения, направленно воздействующие на рецептор ароматических углеводородов (AHR).

[0134] В композициях, описанных ниже, проиллюстрированы некоторые из представителей данных типов низкомолекулярных фрагментов, связывающих целевой белок. Такие низкомолекулярные фрагменты, связывающие целевой белок, также включают фармацевтически приемлемые соли, энантиомеры, сольваты и полиморфы таких композиций, а также другие малые молекулы, которые могут нацеливаться на белок, представляющий интерес. Источники, цитируемые в данном документе ниже, включены в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

[0135] I. Ингибиторы белка теплового шока 90 (HSP90)

[0136] Ингибиторы HSP90, применяемые в данном документе, включают без ограничения следующие.

[0137] 1. Ингибиторы HSP90, идентифицированные в Vallee, et al., "Tricyclic Series of Heat Shock Protein 90 (HSP90) Inhibitors Part I: Discovery of Tricyclic Imidazo[4,5-C]Pyridines as Potent Inhibitors of the HSP90 Molecular Chaperone (2011) J. Med. Chem. 54: 7206, в том числе YKB (N-[4-(3Н-имидазо[4,5-С]пиридин-2-ил)-9Н-флуорен-9-ил]-сукцинамид):

[0138]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевой амидной группы.

[0139] 2. Ингибитор р54 HSP90 (модифицированный) (8-[(2,4-диметилфенил)сульфанил]-3]пент-4-ин-1-ил-3Н-пурин-6-амин):

[0140]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевой ацетиленовой группы.

[0141] 3. Ингибиторы HSP90 (модифицированные), идентифицированные в Brough, et al., "4,5-Diarylisoxazole HSP90 Chaperone Inhibitors: Potential Therapeutic Agents for the Treatment of Cancer", J. MED. CHEM. том 51, стр. 196 (2008), в том числе соединение 2GJ (5-[2,4-дигидрокси-5-(1-метилэтил)фенил]-н-этил-4-[4-(морфолин-4-илметил)фенил]изоксазол-3-карбоксамид), характеризующееся структурой:

[0142]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством амидной группы (при аминогруппе или при алкильной группе на амине).

[0143] 4. Ингибиторы HSP90 (модифицированные), идентифицированные в Wright, et al., Structure-Activity Relationships in Purine-Based Inhibitor Binding to HSP90 Isoforms, Chem Biol. 2004 Jun; 11(6):775-85, в том числе ингибитор PU3 HSP90, характеризующийся структурой:

[0144]

дериватизированный, где линкерная группа L или -(L-CLM) присоединены, например, посредством бутильной группы; и

[0145] 5. Ингибитор HSP90 гелданамицин ((4E,6Z,8S,9S,10E,12S,13R,14S,16R)-13-гидрокси-8,14,19-триметокси-4,10,12,16-тетраметил-3,20,22-триоксо-2-азабицикло[16.3.1] (дериватизированный) или любое из его производных (например, 17-алкиламино-17-десметоксигелданамицин («17-AAG») или 17-(2-диметиламиноэтил)амино-17-десметоксиге лданамицин («17-DMAG»)) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством амидной группы).

[0146] II. Ингибиторы киназы и фосфатазы

[0147] Ингибиторы киназы, применяемые в данном документе, включают без ограничения следующие.

[0148] 1. Ингибитор тирозинкиназы, представляющий собой производное эрлотиниба:

где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, посредством эфирной группы.

[0149] 2. Ингибитор киназы сунитиниб (дериватизированный):

[0150]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к пиррольному фрагменту.

[0151] 3. Ингибитор киназы сорафениб (дериватизированный):

[0152]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к амидному фрагменту.

[0153] 4. Ингибитор киназы дезатиниб (дериватизированный):

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или -(L-CLM), присоединенные, например, к пиримидину.

[0154] 5. Ингибитор киназы лапатиниб (дериватизированный):

[0155]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевого метила сульфонилметильной группы.

[0156] 6. Ингибитор киназы U09-CX-5279 (дериватизированный):

[0157]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством амина (анилина), карбоновой кислоты или альфа-амина к циклопропильной группе или циклопропильной группы

[0158] 7. Ингибиторы киназы, идентифицированные в Millan, et al., Design and Synthesis of Inhaled P38 Inhibitors for the Treatment of Chronic Obstructive Pulmonary Disease, J. MED. CHEM. том 54, стр. 7797 (2011), в том числе ингибиторы киназы Y1W и Y1X (дериватизированные), характеризующиеся структурами:

[0159]

[0160] YIX(1-этил-3-(2-{[3-(1-метилэтил)[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил]сульфанил}бензил)мочевина, дериватизированная, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством изопропильной группы;

[0161]

1-(3-трет-бутил-1-фенил-1Н-пиразол-5-ил)-3-(2-{[3-(1-метилэтил)[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиридин-6-ил]сульфанил}бензил)мочевина,

дериватизированная, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, предпочтительно посредством изопропильной группы или трет-бутильной группы.

[0162] 8. Ингибиторы киназы, идентифицированные в Schenkel, et al., Discovery of Potent and Highly Selective Thienopyridine Janus Kinase 2 Inhibitors J. Med. С hem., 2011, 54 (24), стр. 8440-8450, в том числе соединения 6ТР и OTP (дериватизированные), характеризующиеся структурами:

[0163]

4-амино-2-[4-(трет-бутилсульфамоил)фенил]-N-метилтиено[3,2-с]пиридин-7-карбоксамид

тиенопиридин 19,

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевой метильной группы, связанной с амидным фрагментом;

4-амино-N-метил-2-[4-(морфолин-4-ил)фенил]тиено[3,2-с]пиридин-7-карбоксамид

тиенопиридин 8,

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевой метильной группы, связанной с амидным фрагментом.

[0164] 9. Ингибиторы киназы, идентифицированные в Van Eis, et al., "2,6-Naphthyridines as potent and selective inhibitors of the novel protein kinase С isozymes", Biorg. Med. Chem. Lett. 2011 Dec 15; 21(24): 7367-72, в том числе ингибитор киназы 07U, характеризующийся структурой:

[0165]

2-метил-N~1~-[3-(пиридин-4-ил)-2,6-нафтиридин-1-ил]пропан-1,2-диамин, дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством группы вторичного амина или концевой аминогруппы.

[0166] 10. Ингибиторы киназы, идентифицированные в Lountos, et al., "Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy", J. STRUCT. BIOL, том 176, стр. 292 (2011), в том числе ингибитор киназы YCF, характеризующийся структурой:

[0167]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством любой из концевых гидроксильных групп.

[0168] 11. Ингибиторы киназы, идентифицированные в Lountos, et al., "Structural Characterization of Inhibitor Complexes with Checkpoint Kinase 2 (Chk2), a Drug Target for Cancer Therapy", J. STRUCT. BIOL, том 176, стр. 292 (2011), в том числе ингибиторы киназы XK9 и NXP (дериватизированные), характеризующиеся структурами:

[0169]

XK9

N-{4-[(1Е)-N-(N-гидроксикарбамимидоил)этангидразоноил]фенил}-7-нитро-1H-индол-2-карбоксамид;

[0170] NXP

N-{4-[(1Е)-N-КАРБАМИМИДОИЛЭТАНГИДРАЗОНОИЛ]ФЕНИЛ}-1Н-ИНДОЛ-3-КАРБОКСАМИД,

дериватизированные, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством концевой гидроксильной группы (XK9) или гидразоновой группы (NXP).

[0171] 12. Ингибитор киназы афатиниб (дериватизированный) (N-[4-[(3-хлор-4-фторфенил)амино]-7-[[(3S)-тетрагидро-3-фуранил]окси]-6-хиназолинил]-4(диметиламино)-2-бутенамид) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством алифатической аминогруппы).

[0172] 13. Ингибитор киназы фостаматиниб (дериватизированный) ([6-({5-фтор-2-[(3,4,5-триметоксифенил)амино]пиримидин-4-ил}амино)-2,2-диметил-3-оксо-2,3-дигидро-4Н-пиридо[3,2-b]-1,4-оксазин-4-ил]метилдинатрийфосфат гексагидрат) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством метоксигруппы).

[0173] 14. Ингибитор киназы гефитиниб (дериватизированный) (N-(3-хлор-4-фтор-фенил)-7-метокси-6-(3-морфолин-4-илпропокси)хиназолин-4-амин):

[0174]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством метоксигруппы или эфирной группы.

[0175] 15. Ингибитор киназы ленватиниб (дериватизированный) (4-[3-хлор-4-(циклопропилкарбамоиламино)фенокси]-7-метокси-хинолин-6-карбоксамид) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством циклопропильной группы).

[0176] 16. Ингибитор киназы вандетаниб (дериватизированный) (N-(4-бром-2-фторфенил)-6-метокси-7-[(1-метилпиперидин-4-ил)метокси]хиназолин-4-амин) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством метоксигруппы или гидроксильной группы).

[0177] 17. Ингибитор киназы вемурафениб (дериватизированный) ({3-[5-(4-хлорфенил)-1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-3-карбонил]-2,4-дифтор-фенил}-амид пропан-1-сульфоновой кислоты), дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством сульфонилпропильной группы.

[0178] 18. Ингибитор киназы Gleevec (дериватизированный):

[0179]

дериватизированный, где R в качестве линкерной группы L или группы -(L-CLM) присоединен, например, посредством амидной группы или посредством аминогруппы анилина.

[0180] 19. Ингибитор киназы пазопаниб (дериватизированный) (ингибитор VEGFR3):

[0181]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту или посредством аминогруппы анилина.

[0182] 20. Ингибитор киназы АТ-9283 (дериватизированный), ингибитор киназы Aurora:

[0183]

где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту).

[0184] 21. Ингибитор киназы ТАЕ684 (дериватизированный), ингибитор ALK:

[0185]

[0186] 22. Ингибитор киназы нилотаниб (дериватизированный), ингибитор Ab1:

[0187]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту или аминогруппе анилина.

[0188] 23. Ингибитор киназы NVP-BSK805 (дериватизированный), ингибитор JAK2:

[0189]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту или диазольной группе.

[0190] 24. Ингибитор киназы кризотиниб, дериватизированный ингибитор Alk:

[0191]

[0192] 25. Ингибитор киназы, ингибитор JNJ FMS (дериватизированный):

[0193]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту.

[0194] 26. Ингибитор киназы форетиниб (дериватизированный), ингибитор Met:

[0195]

дериватизированный, где R представляет собой линкерную группу L или группу -(L-CLM), присоединенные, например, к фенильному фрагменту или гидроксильной или эфирной группе на хинолиновом фрагменте.

[0196] 27. Аллостерический ингибитор протеинтирозинфосфатазы РТР1В (дериватизированный):

[0197]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, при R, как указано.

[0198] 28. Ингибитор домена SHP-2 тирозинфосфатазы (дериватизированный):

[0199]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, при R.

[0200] 29. Ингибитор (дериватизированный) BRAF (BRAF^V600E)/MEK:

[0201]

[0202] 30. Ингибитор (дериватизированный) тирозинкиназы ABL:

[0203]

[0204] 31. Ингибитор киназы OSI-027 (дериватизированный), ингибитор mTORC1/2:

[0205]

[0206] 32. Ингибитор киназы OSI-930 (дериватизированный) ингибитор c-Kit/KDR:

[0207]

дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, при R; и

[0208] 33. Ингибитор киназы OSI-906 (дериватизированный), ингибитор IGF1R/IR:

[0209]

[0210] При этом в любом из вариантов осуществления, описанных в разделах I-XVII, «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM) на пиперазиновом фрагменте.

[0211] III. Ингибиторы HDM2/MDM2

[0212] Ингибиторы HDM2/MDM2, применяемые в данном документе, включают без ограничения следующие.

[0213] 1. Ингибиторы HDM2/MDM2, идентифицированные в Vassilev, et al., In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2, SCIENCE vol: 303, pag: 844-848 (2004) и Schneekloth, et al., Targeted intracellular protein degradation induced by a small molecule: En route to chemical proteomics, Bioorg. Med. Chem. Lett. 18 (2008) 5904-5908, в том числе (или дополнительно) соединения нутлин-3, нутлин-2 и нутлин-1 (дериватизированный), описанные ниже, а также все их производные и аналоги:

(дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, при метоксигруппе или по гидроксильной группе);

(дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, при метоксигруппе или гидроксильной группе);

(дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством метоксигруппы или гидроксильной группы); и

[0214] 2. Транс-4-йод-4'-боранил-халькон

[0215] (дериватизированный, где линкерная группа L или линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством гидроксигруппы).

[0216] IV. Соединения, направленно воздействующие на бромодоменсодержащие белки BET человека

[0217] В определенных вариантах осуществления «РТМ» может представлять собой лиганды, связывающиеся с белками, содержащими бромодомен и экстратерминальный домен (BET): BRD2, BRD3 и BRD4. Соединения, направленно воздействующие на бромодоменсодержащие белки BET человека, включают без ограничения соединения, связанные с мишенями, описанными ниже, где «R» или «линкер» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM), например, следующие.

[0218] 1. JQ1, Filippakopoulos et al. Selective inhibition of BET bromodomains. Nature (2010):

[0219] 2. I-BET, Nicodeme et al. Supression of Inflammation by a Synthetic Histone Mimic. Nature (2010). Chung et al. Discovery and Characterization of Small Molecule Inhibitors of the BET Family Bromodomains. J. Med Chem. (2011):

[0220] 3. Соединения, описанные в Hewings et al. 3,5-Dimethylisoxazoles Act as Acetyl-lysine Bromodomain Ligands. J. Med. Chem. (2011) 54 6761-6770.

[0221] 4. I-BET151, Dawson et al. Inhibition of BET Recruitment to Chromatin as an Efective Treatment for MLL-fusion Leukemia. Nature (2011):

[0222] 5. Карбазольный тип (US 2015/0256700)

[0223]

[0224] 6. Пирролопиридоновый тип (US 2015/0148342)

[0225]

[0226] 7. Тетрагидрохинолиновый тип (WO 2015/074064)

[0227]

[0228] 8. Триазолопиразиновый тип (WO 2015/067770)

[0229]

[0230] 9. Пиридоновый тип (WO 2015/022332)

[0231]

[0232] 10. Хиназолиноновый тип (WO 2015/015318)

[0233]

[0234] 11. Дигидропиридопиразиноновый тип (WO 2015/011084)

[0235]

[0236] (где R, или L, или линкер в каждом случае обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0237] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, заявленная структура РТМ может состоять из трициклического диазепина или трициклического азепина в качестве лиганда BET7BRD4 (РТМ-а), где пунктирные линии указывают на путь присоединения линкера и определены три участка, к которым линкеры могут быть присоединены:

где

А и В независимо представляют собой ароматическое кольцо, гетероароматическое кольцо, 5-членное карбоциклическое, 6-членное карбоциклическое, 5-членное гетероциклическое, 6-членное гетероциклическое, тиофеновое, пиррольное, пиразольное, пиридиновое, пиримидиновое, пиразиновое, необязательно замещенные алкилом, алокси, галогеном, нитрилом, или другое ароматическое или гетероароматическое кольцо, где А конденсировано с центральным азепиновым (Y1=C) или диазепиновым (Y1=N) фрагментом;

Y1, Y2, и Y3, и Y4 могут представлять собой углерод, азот или кислород с образованием конденсированного 5-членного ароматического кольца в виде триазола или изоксазола; и

Z1 представляет собой метил или низшую алкильную группу.

[0238] Фрагмент РТМ-а в качестве лиганда BET/BRD4 описан в литературных источниках (WO 2016/069578; WO 2014/001356; WO 2016/050821; WO 2015/195863; WO 2014/128111).

[0239] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, предусматривающие структуру CLM-L-PTM-a РТМ-а могут быть представлены следующими общими структурами, где пунктирная линия указывает на возможную точку соединения линкера. В структуре РТМ-аа - PTM-ai паттерн замещения X и Y может представлять собой моно- или бис-замещение.

[0240] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, структуры РТМ-а включают в качестве лиганда BET/BRD4, при этом пунктирная линия указывает на точку соединения между лигандом BET/BRD4 и линкерами:

[0241] В определенных вариантах осуществления в описании предусмотрены без ограничения следующие иллюстративные BET PROTAC (соединения 1 или 2), в том числе их соли, пролекарства, полиморфы, аналоги, производные и дейтерированные формы:

[0242] V. Ингибиторы HDAC

[0243] Ингибиторы HDAC (дериватизированные) включают без ограничения следующие.

[0244] 1. Finnin, М. S. et al. Structures of Histone Deacetylase Homologue Bound to the TSA and SAHA Inhibitors. Nature 40, 188-193 (1999).

(Дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)); и

[0245] 2. Соединения, определенные формулой (I) согласно РСТ WO 0222577 («DEACETYLASE INHIBITORS))) (дериватизированные, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством гидроксильной группы).

[0246] VI. Ингибиторы лизинметилтрансферазы человека

[0247] Ингибиторы лизинметилтрансферазы человека включают без ограничения следующие.

[0248] 1. Chang et al. Structural Basis for G9a-Like protein Lysine Methyltransferase Inhibition by BIX-1294. Nat. Struct. Biol. (2009) 16(3) 312.

[0249]

[0250] (Дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0251] 2. Liu, F. et al Discovery of a 2,4-Diamino-7-aminoalkoxyquinazoline as a Potent and Selective Inhibitor of Histone Methyltransferase G9a. J. Med. Chem. (2009) 52(24) 7950.

[0252]

[0253] (Дериватизированные, где «R» обозначает возможный участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0254] 3. Азацитидин (дериватизированный) (4-амино-1-β-D-рибофуранозил-1,3,5-триазин-2(1H)-он) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством гидрокси- или аминогрупп); и

[0255] 4. Децитабин (дериватизированный) (4-амино-1-(2-дезокси-b-D-эритро-пентофуранозил)-1,3,5-триазин-2(1H)-он) (дериватизированный, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) присоединены, например, посредством любой из гидроксигрупп или посредством аминогруппы).

[0256] VII. Ингибиторы ангиогенеза

[0257] Ингибиторы ангиогенеза включают без ограничения следующие.

[0258] 1. GA-1 (дериватизированный) и его производные и аналоги, характеризующиеся структурой(структурами) и связывающиеся с линкерами, как описано в Sakamoto, et al., Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics 2003 Dec; 2(12): 1350-8.

[0259] 2. Эстрадиол (дериватизированный), который может быть связан с линкерной группой L или группой -(L-CLM), как в целом описано в Rodriguez-Gonzalez, et al., Targeting steroid hormone receptors for ubiquitination and degradation in breast and prostate cancer, Oncogene (2008) 27, 7201-7211.

[0260] 3. Эстрадиол, тестостерон (дериватизированный) и соответствующие производные, в том числе без ограничения DHT и его производные и аналоги, характеризующиеся структурой(структурами) и связывающиеся с линкерной группой L или группой -(L-CLM), как в целом описано в Sakamoto, et al, Development of Protacs to target cancer-promoting proteins for ubiquitination and degradation, Mol Cell Proteomics 2003 Dec; 2(12): 1350-8; и

[0261] 4. Овалицин, фумагиллин (дериватизированный) и их производные и аналоги, характеризующиеся структурой(структурами) и связывающиеся с линкерной группой L или группой -(L-CLM), как в целом описано в Sakamoto, et al., Protacs: chimeric molecules that target proteins to the Skp1-Cullin-F box complex for ubiquitination and degradation Proc Natl Acad Sci USA. 2001 Jul 17; 98(15): 8554-9 и патент США №7208157.

[0262] VIII. Иммуносупрессорные соединения

[0263] Иммуносупрессорные соединения включают без ограничения следующие.

[0264] 1. АР21998 (дериватизированный), характеризующийся структурой(структурами) и связывающийся с линкерной группой L или группой -(L-CLM), как в целом описано в Schneekloth, et al., Chemical Genetic Control of Protein Levels. Selective in Vivo Targeted Degradation, J. AM. CHEM. SOC. 2004, 126, 3748-3754.

[0265] 2. Глюкокортикоиды (например, гидрокортизон, преднизон, преднизолон и метилпреднизолон) (дериватизированные, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) связаны, например, с любым из гидроксилов) и беклометазона дипропионат (дериватизированный, где линкерная группа или -(L-CLM) связаны, например, с пропионатом).

[0266] 3. Метотрексат (дериватизированный, где линкерная группа или группа -(L-CLM) могут быть связаны, например, с любым из концевых гидроксилов).

[0267] 4. Циклоспорин (дериватизированный, где линкерная группа или группа -(L-CLM) могут быть связаны, например, при любой из бутильных групп).

[0268] 5. Такролимус (FK-506) и рапамицин (дериватизированные, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) могут быть связаны, например, при одной из метоксигрупп); и

[0269] 6. Актиномицины (дериватизированные, где линкерная группа L или группа -(L-CLM) могут быть связаны, например, при одной из изопропильных групп).

[0270] IX. Соединения, направленно воздействующие на рецептор ароматических углеводородов (AHR)

[0271] Соединения, направленно воздействующие на рецептор ароматических углеводородов (AHR), включают без ограничения следующие.

[0272] 1. Апигенин (дериватизированный способом, при котором он связывается с линкерной группой L или группой -(L-CLM), как в целом проиллюстрировано в Lee и соавт., Targeted Degradation of the Aryl Hydrocarbon Receptor by the PROTAC Approach: A Useful Chemical Genetic Tool, ChemBioChem том 8, выпуск 17, стр. 2058-2062, 23 ноября 2007 г.); и

[0273] 2. SR1 и LGC006 (дериватизированные так, что линкерная группа L или -(L-CLM) связаны), как описано в Boitano и соавт., Aryl Hydrocarbon Receptor Antagonists Promote the Expansion of Human Hematopoietic Stem Cells, Science 10 сентября 2010 г.: том 329 №5997 стр. 1345-1348.

[0274] X. Соединения, направленно воздействующие на рецептор RAF (киназы)

[0275] PLX4032

[0276] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0277] XI. Соединения, направленно воздействующие на FKBP

[0278]

[0279] (дериватизированные, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0280] XII. Соединения, направленно воздействующие на андрогеновый рецептор (AR)

[0281] 1. Лиганд RU 59063 (дериватизированный) андрогенового рецептора

[0282]

[0283] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0284] 2. Лиганд SARM (дериватизированный) андрогенового рецептора

[0285]

[0286] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0287] 3. Лиганд DHT андрогенового рецептора (дериватизированный)

[0288]

[0289] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения, например, линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0290] 4. Лиганд MDV3100 (дериватизированный)

[0291]

[0292] 5. Лиганд ARN-509 (дериватизированный)

[0293]

[0294] 6. Гексагидробензизоксазолы

[0295]

[0296] 7. Тетраметилциклобутаны

[0297]

[0298] 8. В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представляет собой химический фрагмент, который связывается с андрогеновым рецептором (AR) (АВМ). Различные соединения, связывающие андрогеновый рецептор, были описаны в литературе, в том числе различные андрогеновые производные, такие как тестостерон, дигидротестостерон и метриболон (также известный как метилтриенолон или R1881), и нестероидные соединения, такие как бикалутамид, энзалутамид, некоторые из которых описаны выше. Специалистам в данной области техники будет понятно, что такие соединения, связывающие андрогеновый рецептор, можно потенциально применять в качестве фрагмента АВМ в соединении PROTAC. Такие литературные источники включают без ограничения G.F. Allan et. al, Nuclear Receptor Signaling, 2003, 1, e009; R.H. Bradbury et. al, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2011 5442-5445; C. Guo et. al, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2012 2572-2578; P.K. Poutiainen et. al, J. Med. Chem. 2012, 55, 6316-6327 A. Pepe et. al, J. Med. Chem. 2013, 56, 8280-8297; M. E. Jung et al, J. Med. Chem. 2010, 53, 2779-2796, которые включены в данный документ посредством ссылки.

[0299] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, выбранную без ограничения из структур, показанных ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения линкерного фрагмента или ULM, такого как CLM:

где

W¹ представляет собой арил, гетероарил, бициклическую или бигетероциклическую группу, при этом каждое независимо замещено 1 или более из Н, галогена, гидроксила, нитро, CN, С≡СН, C_1-6алкила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного; например, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), C_1-6алкоксила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного; например, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена), С_2-6алкенила, С_2-6алкинила или CF₃;

каждый из Y¹, Y² независимо представляет собой NR^Y1, О, S;

каждый из Y³, Y⁴, Y⁵ независимо представляет собой связь, О, NR^Y2, CR^Y1R^Y2, С=O, C=S, SO, SO₂, гетероарил или арил;

Q представляет собой 3-6-членное кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный, например, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), галоген, C_1-6алкокси, или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый из R¹, R², R^a, R^b, R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный, например, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), галоген, C_1-6алкокси, циклическую группу, гетероциклическую группу, или R¹, R² вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

W² представляет собой связь, C_1-6алкил, C_1-6гетероалкил, О, арил, гетероарил, алициклическую группу, гетероциклическую группу, бигетероциклическую группу, биарил или бигетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1-10 R^W2;

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный; например, необязательно замещенный 1 или более F), -OR^W2A, С_3-6циклоалкил, С_4-6циклогетероалкил, C_1-6алициклическую группу (необязательно замещенную), гетероциклическую группу (необязательно замещенную), арил (необязательно замещенный) или гетероарил (необязательно замещенный), бициклический гетероарил или арил, OC_1-3алкил (необязательно замещенный), ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2, CN; и

R^W2A представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный) или C_1-6гетероалкил (линейный, разветвленный), каждый из которых необязательно замещен циклоалкилом, циклогетероалкилом, арилом, гетероциклической группой, гетероарилом, галогеном или OC_1-3алкилом.

[0300] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0301] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ представляет собой

где каждый R₂₂независимо представляет собой галоген, Н, необязательно замещенный алкил, галогеналкил, циано или нитро; и каждый R₂₃ независимо представляет собой Н, галоген, CF₃, необязательно замещенный алкил, алкокси, галогеналкил, циано или нитро.

[0302] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ выбран из группы, состоящей из:

[0303] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, выбранную из следующих структур, показанных ниже, где

указывает на точку присоединения линкера или ULM:

где

R^Q2 представляет собой Н, галоген, СН₃ или CF₃;

R^Q3 представляет собой Н, галоген, гидроксил, нитро, CN, С≡СН, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), C_1-6алкоксил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена), С_2-6алкенил, С_2-6алкинил или CF₃;

каждый из Y³, Y⁴, Y⁵ независимо представляет собой связь, О, NR^Y2, CR^Y1R^Y2, С=O, гетероарил или арил;

каждый из R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н или C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом, циклической или гетероциклической группой); и

каждая R^Q независимо представляет собой Н, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена или С₁-C₆алкоксилом), или два R^Q вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома.

[0304] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, каждая R^Q независимо представляет собой Н или СН₃. В другом варианте осуществления R^Q3 представляет собой CN.

[0305] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, выбранную из следующих структур, показанных ниже, где

где

R^Q2 представляет собой Н, галоген, CN, СН₃ или CF₃; и

каждый из Y³, Y⁴, Y⁵ независимо представляет собой связь, О, NR^Y2, CR^Y1R^Y2, С=O, гетероарил или арил; и

X представляет собой N или С.

[0306] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, R^Q3 представляет собой CN.

[0307] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, показанную ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения линкерного фрагмента, или ULM, или CLM:

где

W¹ представляет собой

каждый R₂₂ независимо представляет собой Н или -CN;

каждый R₂₃ независимо представляет собой Н, галоген, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), C₁-С₆алкокси или -CF₃;

Y³ представляет собой связь или О;

Y⁴ представляет собой связь или NH;

Y⁵ представляет собой связь, С=O, C₁-С₆гетероарил или C₁-С₆арил;

каждый из R¹, R² независимо представляет собой Н или C₁-С₆алкил (линейный или разветвленный, необязательно замещенный; например, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена или C_1-6алкоксилом);

W² представляет собой связь, C_1-6арил, C_1-6гетероарил, C_1-6алициклическую группу или C_1-6гетероциклическую группу, бигетероциклическую группу, биарил или бигетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1-10 R^W2; и

каждый R^W2 независимо представляет собой Н или галоген; и

представляет собой связь, которая может обеспечивать стереоспецифическую конфигурацию ((R) или (S)) или не обеспечивать стереоспецифическую конфигурацию.

[0308] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0309] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ выбран из группы, состоящей из:

[0310] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² выбран из группы, состоящей из:

[0311] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, выбранную без ограничения из структур, показанных ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения линкерного фрагмента или ULM:

где

W¹ представляет собой

каждый R₂₃ независимо представляет собой Н, галоген или -CF₃;

каждый из Y¹, Y² независимо представляет собой О или S;

каждый из R¹, R² независимо представляет собой Н или метильную группу;

W² представляет собой связь, C_1-6арил или гетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1, 2 или 3 R^W2; и

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C_1-6алкил (необязательно замещенный 1 или более F), OC_1-3алкил (необязательно замещенный 1 или более -F).

[0312] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0313] В определенных дополнительных вариантах осуществления W1 выбран из группы, состоящей из:

[0314] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W2 выбран из группы, состоящей из:

[0315] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ выбран из группы, состоящей из:

[0316] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру:

где

W¹ представляет собой арил или гетероарил, каждый из которых независимо замещен 1 или более из Н, галогена, гидроксила, нитро, CN, С≡СН, C_1-6алкила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), C_1-6алкоксила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена), С_2-6алкенила, С_2-6алкинила или CF₃;

Q представляет собой 4-членное алициклическое кольцо, содержащее 0-2 гетероатома, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, С_1-6алкоксилом);

W² представляет собой связь, C_1-6алкил, C_1-6гетероалкил, О, С_1-6алициклическую группу, гетероциклическую группу, арил, бигетероциклическую группу, биарил, или бигетероарил, или гетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1, 2 или 3 R^W2; и

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более F), C_1-6гетероалкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), -OR^W2A OC_1-3алкил (необязательно замещенный 1 или более -F), С_3-6циклоалкил, С_4-6циклогетероалкил (необязательно замещенный), C_1-6алкил (необязательно замещенный), C_1-6алициклическую группу (необязательно замещенную), гетероциклическую группу (необязательно замещенную), арил (необязательно замещенный), гетероарил (необязательно замещенный), бициклический гетероарил (необязательно замещенный), бициклический арил, ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2 или CN; и

RW^2A представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный) или C_1-6гетероалкил (линейный, разветвленный), каждый из которых необязательно замещен циклоалкилом, циклогетероалкилом, арилом, гетероциклической группой, гетероарилом, галогеном или OC_1-3алкилом.

[0317] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, в описании предусмотрено соединение, связывающие андрогеновый рецептор, характеризующееся структурой:

где

W¹ представляет собой арил, гетероарил, бициклическую или бигетероциклическую группу, при этом каждое независимо замещено 1 или более из Н, галогена, гидроксила, нитро, CN, С≡СН, C_1-6алкила (линейного разветвленного, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), С_1-6алкоксила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена), С_2-6алкенила, С_2-6алкинила или CF₃;

каждый из Y¹, Y² независимо представляет собой NR^Y1, О или S;

Q представляет собой 3-6-членное алициклическое или ароматическое кольцо, содержащее 0-4 гетероатома, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый из R¹, R², R^a, R^b, R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C_1-6алкоксилом), или R¹, R² вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

W² представляет собой связь, C_1-6алкил, C_1-6гетероалкил, О, C_1-6алициклическую группу, гетероциклическую группу, арил, бигетероциклическую группу, биарил, или бигетероарил, или гетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1, 2 или 3 R^W2;

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более F), C_1-6гетероалкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), -OR^W2A, OC_1-3алкил (необязательно замещенный 1 или более -F), С_3-6циклоалкил, С_4-6циклогетероалкил, C_1-6алкил (необязательно замещенный), C_1-6алициклическую группу (необязательно замещенную), гетероциклическую группу (необязательно замещенную), арил (необязательно замещенный), гетероарил (необязательно замещенный), бициклический гетероарил или арил, ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2, CN; и

[0318] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, фрагмент, связывающийся с андрогеновым рецептором, характеризуется структурой

где

W¹ представляет собой

Y³ представляет собой связь или О;

Q представляет собой 4-членное кольцо, необязательно замещенное 0-4 R^Q, при этом каждый R^Q независимо представляет собой Н или метил;

Y4 представляет собой связь или NH;

Y5 представляет собой связь, С=O или C=S; и

каждый W² независимо представляет собой связь, С1-6арил или -гетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1, 2 или 3 R^W2; каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, 6-членное алициклическое кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома, или 5-членное ароматическое кольцо, содержащее 1, или 2, или 3 гетероатома.

[0319] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² выбран из группы, состоящей из:

.

[0320] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0321] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W1 выбран из группы, состоящей из:

[0322] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, фрагмент, связывающийся с андрогеном, характеризуется структурой:

где

W¹ представляет собой арил, независимо замещенный 1 или более из атома галогена, CN;

каждый Y³ независимо представляет собой связь, NR^Y2, CR^Y1R^Y2, С=O;

Q представляет собой 5-членное ароматическое кольцо, содержащее 1 или 2 гетероатома;

каждый из R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н, C_1-6алкил (линейный, разветвленный);

W² представляет собой связь, арил или гетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1, 2 или 3 R^W2; и

[0323] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0324] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ представляет собой

где каждый R₂₂ независимо представляет собой галоген или CN; и

каждый R₂₃ независимо представляет собой Н или галоген.

[0325] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ выбран из группы, состоящей из:

[0326] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, Q представляет собой

[0327] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² представляет собой

[0328] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, (Y³)_0-5 представляет собой

[0329] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, выбранную без ограничения из структур, показанных ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения линкерного фрагмента или ULM, такого как CLM:

где

W¹ представляет собой

каждый из Y³, Y⁴, Y⁵ независимо представляет собой связь, О, NR^Y2, CR^Y1R^Y2, С=O, C=S, SO или SO₂;

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C_1-6алкил (необязательно замещенный 1 или более F), С_3-6циклоалкил, С_4-6циклогетероалкил, OC_1-3алкил (необязательно замещенный 1 или более -F).

[0330] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0331] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W¹ выбран из группы, состоящей из:

[0332] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, W2 выбран из группы, состоящей из:

[0333] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, АВМ предусматривает структуру, показанную ниже, где пунктирная линия указывает на точку присоединения линкерного фрагмента, или ULM, или CLM:

где

W¹ представляет собой

Y³ представляет собой связь или О;

Y⁴ представляет собой связь или NH;

каждый из R¹, R² независимо представляет собой Н или C₁-С₆алкил (линейный или разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена или C_1-6алкоксилом);

W² представляет собой связь, C_1-6арил, C_1-6гетероарил, C_1-6алициклическую группу или C_1-6гетероциклическую группу, при этом каждое из них необязательно замещено 1-10 R^W2; и

[0334]

[0335] В любом из вариантов осуществления, описанных в данном документе, W² ковалентно связан с одной или более группами ULM или CLM или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM или CLM, описанных в данном документе.

[0336] В определенных дополнительных вариантах осуществления W¹ выбран из группы, состоящей из:

[0337] В определенных дополнительных вариантах осуществления W² выбран из группы, состоящей из:

[0338] В определенных вариантах осуществления соединение на основе АВМ, связывающее андрогеновый рецептор, выбрано из группы, состоящей из:

транс-2-хлор-4-[3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси]бензонитрила;

цис-2-хлор-4-[3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси]бензонитрила;

транс-6-амино-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридазин-3-карбоксамида;

транс-трет-бутил-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]карбамата;

транс-4-амино-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

транс-5-амино-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиразин-2-карбоксамида;

транс-2-амино-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиримидин-5-карбоксамида;

4-метокси-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

транс-1-(2-гидроксиэтил)-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-1Н-пиразол-4-карбоксамида;

транс-6-амино-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

транс-4-[(5-гидроксипентил)амино]-N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил] бензамида, и

транс-трет-бутил-2-({5-[(4-{[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]карбамоил}фенил)аминопентил}окси)ацетата, и

N-((1r,3r)-3-(4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-метилбензамида.

[0339]

[0340] В определенных вариантах осуществления в описании предусмотрены без ограничения следующие иллюстративные молекулы PROTAC, направленно воздействующие на андрогеновый рецептор (PROTAC-3 - PROTAC-30), в том числе их соли, про лекарства, полиморфы, аналоги, производные и дейтерированные формы:

[0341] XIII. Соединения, направленно воздействующие на эстрогеновый рецептор (ER) ICI-182780

[0342] 1. Лиганд эстрогенового рецептора

[0343]

[0344] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0345] В любом варианте осуществления или аспекте, описанных в данном документе, РТМ может быть представлен формулой PTM-I,

где

Х_РТМ представляет собой О или С=O;

каждый из X_PTM1 и Х_РТМ2 независимо выбран из N или СН;

R_PTM1 независимо выбран из ОН, O(CO)R_PTM, низшего O-алкила, где R_PTM представляет собой алкильную или арильную группу в сложном эфире;

каждый из по меньшей мере одного R_PTM2 независимо выбран из Н, ОН, галогена, CN, CF₃, SO₂-алкила, низшего O-алкила;

каждый из по меньшей мере одного R_PTM3 независимо выбран из Н, галогена; и

пунктирная линия указывает на участок присоединения по меньшей мере одного из линкера, CLM, CLM', РТМ, РТМ' или их комбинации.

[0346] В любом варианте осуществления или аспекте, описанных в данном документе, РТМ может быть представлен формулой PTM-I,

где

X_PTM представляет собой О или С=O;

каждый R_PTM2 независимо выбран из Н, ОН, галогена, CN, CF₃, SO₂-алкила, низшего O-алкила;

каждый R_PTM3 независимо выбран из Н, галогена;

PTM-I содержит по меньшей мере один R_PTM2, по меньшей мере один P_PTM3 или их комбинацию при соответствующих кольцах; и

[0347] В любом варианте осуществления или аспекте, описанных в данном документе, PTM-I содержит по меньшей мере одно из: двух R_PTM2, двух R_PTM3 или их комбинации.

[0348] В любом варианте осуществления или аспекте, описанных в данном документе, РТМ может быть представлен формулой PTM-II,

где

X_PTM представляет собой О или С=O;

каждый из X_PTM1 и X_PTM2 независимо выбран из N или СН;

R_PTM2 и R_PTM4 независимо выбраны из Н, ОН, галогена, CN, CF₃, SO₂-алкила, низшего O-алкила;

R_PTM3 и R_PTM5 независимо выбраны из Н, галогена; и

[0349] В аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, O(CO)R_PTM функционирует как пролекарство для соответствующего фенола в формуле PTM-I или PTM-II.

[0350] В любом варианте осуществления или аспекте, описанных в данном документе, низший O-алкил в PTM-I или PTM-II представляет собой алкильную цепь с количеством атомов углерода от 1 до 3.

[0351] В аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, настоящее изобретение предусматривает соединение или РТМ формулы (I_PTM),

где

каждый X_PTM независимо представляет собой СН, N;

указывает на участок присоединения по меньшей мере одного из линкера, CLM, CLM', РТМ, РТМ' или их комбинации;

каждый R_PTM1 независимо представляет собой ОН, галоген, O(CO)R_PTM, где R_PTM представляет собой алкильную или циклоалкильную группу с 1-6 атомами углерода или арильные группы, при этом замещение может предусматривать моно-, ди- или тризамещение;

каждый R_PTM2 независимо представляет собой Н, галоген, CN, CF₃, алкокси, при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение; и

каждый R_PTM3 независимо представляет собой Н, галоген, при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение.

[0352] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен формулой (II_PTM),

где

X_PTM представляет собой СН, N;

каждый R_PTM1 независимо представляет собой ОН, галоген (например, F);

каждый R_PTM2 независимо представляет собой Н, галоген (например, F), CF₃, при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение; и

каждый R_PTM3 независимо представляет собой галоген (например, F), при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение.

[0353] В определенных вариантах осуществления выполнимо по меньшей мере одно из следующего:

X_PTM в формуле (II_PTM) представляет собой СН;

R_PTM1 в формуле (II_PTM) представляет собой ОН;

R_PTM2 в формуле (II_PTM) представляет собой Н;

каждый R_PTM3 в формуле (II_PTM) независимо представляет собой Н или F; или их комбинация.

[0354] XIV. Соединения, направленно воздействующие на рецептор тиреоидного гормона (TR)

[0355] 1. Лиганд рецептора тиреоидного гормона (дериватизированный)

[0356]

[0357] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM), и МОМО указывает на метоксиметоксигруппу).

[0358] XV. Соединения, направленно воздействующие на протеазу HIV

[0359] 1. Ингибитор протеазы HIV (дериватизированный)

[0360]

[0361] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)). См. J. Med. Chem. 2010, 53, 521-538.

[0362] 2. Ингибитор протеазы HIV

[0363]

[0364] (дериватизированный, где «R» обозначает возможный участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)). См. J. Med. Chem. 2010, 53, 521-538.

[0365] XVI. Соединения, направленно воздействующие на интегразу HIV

[0366] 1. Ингибитор интегразы HIV (дериватизированный)

[0367]

[0368] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)). См. J. Med. Chem. 2010, 53, 6466.

[0369] 2. Ингибитор интегразы HIV (дериватизированный)

[0370]

[0371] 3. Ингибитор интегразы HIV Isetntress (дериватизированный)

[0372]

[0373] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)). См. J. Med. Chem. 2010, 53, 6466.

[0374] XVII. Соединения, направленно воздействующие на протеазу HCV

[0375] 1. Ингибиторы протеазы HCV (дериватизированные)

[0376]

[0377] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)).

[0378] XVIII. Соединения, направленно воздействующие на ацилпротеинтиоэстеразу-1 и ацилпротеинтиоэстеразу-2 (АРТ1 и АРТ2)

[0379] 1. Ингибитор APT1 и АРТ2 (дериватизированный)

[0380]

[0381] (дериватизированный, где «R» обозначает участок присоединения линкерной группы L или группы -(L-CLM)). См. Angew. Chem. Int. Ed. 2011, 50, 9838-9842, где L представляет собой линкерную группу, описанную далее в данном документе, и указанная группа CLM является такой, как описано далее в данном документе, так что -(L-CLM) связывает группу CLM с группой РТМ, как далее описано в данном документе.

[0382] VIV. Соединение, направленно воздействующие на тау-белок

[0383] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ может включать фрагменты, связывающие тау-белок. Например, РТМ может быть представлен формулой I, формулой II, формулой III, формулой IV, формулой V, формулой VI, формулой VII, формулой VIII, формулой IX, формулой Х или формулой XI,

А, В, С, D, Е и F независимо выбраны из необязательно замещенного 5- или 6-членного арильного или гетероарильного кольца, необязательно замещенного 4-7-членного циклоалкила или гетероциклоалкила, где контакт между кругами указывает на конденсацию колец; и

L_PTM выбран из связи, алкила, алкенила или алкинила, необязательно прерванных одним или более кольцами (т.е. циклоалкилом, гетероциклоалкилом, арилом или гетероарилом) или одной или более функциональными группами, выбранными из групп -O-, -S-, -NR¹ _PTM- (где R¹ _PTM выбран из Н или алкила), -N=N-, -S(O)-, -SO₂-, -С(O)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -NHSO₂-, -NHC(O)NH-, -NHC(O)O- или -OC(O)NH-, где указанная функциональная группа необязательно расположена на любом конце линкера.

[0384] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, арильные и гетероарильные кольца А, В, С, D, Е и F в РТМ необязательно замещены 1-3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из алкила, алкенила, галогеналкила, галогена, гидроксила, алкокси, фторалкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, ациламино, трифторметила и циано, где указанные алкильные и алкенильные группы дополнительно необязательно замещены.

[0385] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, кольца по меньшей мере одного из А, В, С, F или их комбинации выбраны из необязательно замещенных 5- или 6-членных арильных или гетероарильных колец.

[0386] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ характеризуется химической структурой формулы I, где:

кольца А, В и С независимо представляют собой 5- или 6-членные конденсированные арильные или гетероарильные кольца;

L_PTM выбран из связи или алкила, и

D выбрано из 6-членного арила, гетероарила или гетероциклоалкила,

где А, В, С и D необязательно замещены алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино или циано.

[0387] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ характеризуется химической структурой формулы I, где:

А и С представляют собой фенильное или 6-членное гетероарильное кольцо;

В представляет собой 5-членное гетероарильное кольцо;

L_PTM представляет собой связь; и

D представляет собой 6-членное гетероарильное или 6-членное гетероциклоалкильное кольцо;

где каждое из А, В, С и D необязательно независимо замещено алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, диалкиламино или циано, и где атом азота в любом из колец А, В, С и D непосредственно не соединен с гетероатомом или с атомом углерода, к которому непосредственно присоединен другой гетероатом.

[0388] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ характеризуется химической структурой формулы III или IV, где А, В и С представляют собой 5- или 6-членные конденсированные арильные или гетероарильные кольца, L_PTM выбран из связи или алкила, и D и Е представляют собой 5- или 6-членные конденсированные арильные или гетероарильные кольца, где А, В, С, D и Е необязательно замещены алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино или циано.

[0389] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен следующей химической структурой:

где

R¹, R² и R³ независимо выбраны из Н, метила, этила, 2-фторэтила и 2,2,2-трифторэтила;

R⁴ и R⁵ независимо выбраны из Н, метила, этила и галогена; и

R⁶ представляет собой 1-2 заместителя, независимо выбранные из Н, метила, этила и галогена,

где РТМ связан с ULM посредством L.

[0390] В любом из аспектов или вариантов осуществления, описанных в данном документе, РТМ ковалентно связан с одной или более группами ULM (VLM или CLM) или линкером, к которому присоединены одна или более групп ULM (VLM или CLM), как описано в данном документе.

[0391] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен химической структурой:

где

R¹, R² и R³ независимо выбраны из Н, необязательно замещенного алкила, метила, этила, 2-фторэтила и 2,2,2-трифторэтила; и

R⁷, R⁸, R⁹ и R¹⁰ представляют собой 1-8 заместителей, независимо выбранных из Н, необязательно замещенного алкила, галогеналкила, галогена, гидроксила, алкокси, амино, диалкиламино, ацетиламино, трифторметила или циано, и где РТМ связан с ULM (VLM или CLM) посредством L.

[0392] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен химической структурой:

[0393] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, точка присоединения линкера к РТМ указана с помощью пунктирной линии:

[0394] Терапевтические композиции

[0395] Фармацевтические композиции, содержащие комбинации эффективного количества по меньшей мере одного бифункционального соединения, описанного в данном документе, и одно или более из соединений, описанных далее в данном документе, все в эффективных количествах, в комбинации с фармацевтически эффективным количеством носителя, добавки или вспомогательного вещества, представляют собой дополнительный аспект настоящего изобретения.

[0396] В настоящее изобретение включены в применимых случаях композиции, содержащие фармацевтически приемлемые соли, в частности, соли присоединения кислоты или основания соединений, описанных в данном документе. Кислоты, которые применяют для получения фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты вышеуказанных основных соединений, пригодных в соответствии с данным аспектом, представляют собой кислоты, которые образуют нетоксичные соли присоединения кислоты, т.е. соли, содержащие фармакологически приемлемые анионы, такие как, среди ряда других, гидрохлоридные, гидробромидные, гидройодидные, нитратные, сульфатные, бисульфатные, фосфатные, кислые фосфатные, ацетатные, лактатные, цитратные, кислые цитратные, тартратные, битартратные, сукцинатные, малеатные, фумаратные, глюконатные, сахаратные, бензоатные, метансульфонатные, этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные и памоатные [т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3 нафтоат)] соли.

[0397] Фармацевтически приемлемые соли присоединения основания также могут применяться для получения фармацевтически приемлемых форм солей соединений или производных в соответствии с настоящим изобретением. Химические основания, которые можно применять в качестве реагентов для получения фармацевтически приемлемых основных солей соединений по настоящему изобретению, которые имеют кислотную природу, представляют собой основания, которые образуют нетоксичные основные соли с такими соединениями. Такие нетоксичные основные соли включают, среди прочих, без ограничения соли, полученные из таких фармакологически приемлемых катионов, как катионы щелочных металлов (например, калия и натрия) и катионы щелочноземельных металлов (например, кальция, цинка и магния), аммониевые или водорастворимые соли присоединения амина, как, например, N-метилглюкаминовые (меглюминовые) и низшие алканоламмониевые, а также другие основные соли фармацевтически приемлемых органических аминов.

[0398] Соединения, описанные в данном документе, в соответствии с настоящим изобретением можно вводить одной дозой или разделенными дозами пероральным, парентеральным или местным путями. Введение активного соединения может варьироваться от непрерывного (внутривенное вливание) до нескольких пероральных введений в сутки (например, Q.I.D.) и может включать среди прочих путей введения пероральное, местное, парентеральное, внутримышечное, внутривенное, подкожное, трансдермальное (которое может включать средство, усиливающее проникновение), буккальное, подъязычное и суппозиторное введение. Таблетки для перорального применения, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, также можно применять для увеличения биодоступности соединений при пероральном пути введения. Наиболее эффективная лекарственная форма будет зависеть от фармакокинетических характеристик конкретного выбранного средства, а также тяжести заболевания у пациента. Также может использоваться введение соединений в соответствии с настоящим изобретением в виде спреев, туманов или аэрозолей для интраназального, интратрахеального или ингаляционного введения. Следовательно, настоящее изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения, описанного в данном документе, необязательно в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, добавкой или вспомогательным веществом. Соединения в соответствии с настоящим изобретением можно вводить в формах с немедленным высвобождением, с высвобождением через определенные промежутки времени или с замедленным или контролируемым высвобождением. Формы с замедленным или контролируемым высвобождением предпочтительно вводят перорально, но также в суппозиторной и трансдермальной или других формах для местного применения. Внутримышечные инъекции в липосомной форме также можно применять для контроля или замедления высвобождения соединения в месте инъекции.

[0399] Композиции, описанные в данном документе, можно составлять традиционным способом с применением одного или более фармацевтически приемлемых носителей, а также их можно вводить в виде составов с контролируемым высвобождением. Фармацевтически приемлемые носители, которые можно применять в данных фармацевтических композициях, включают без ограничения иониты, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота, сорбат калия, смеси неполных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как проламин сульфат, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, вещества на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилена и полиоксипропилена, полиэтиленгликоль и ланолин.

[0400] Композиции, описанные в данном документе, можно вводить перорально, парентерально, с помощью ингаляционного спрея, местно, ректально, назально, буккально, вагинально или посредством имплантированного резервуара. Термин «парентеральный», используемый в данном документе, включает методики подкожной, внутривенной, внутримышечной, внутрисуставной, интрасиновиальной, интрастернальной, интратекальной, внутрипеченочной, внутриочаговой и внутричерепной инъекции или инфузии. Композиции предпочтительно вводят перорально, внутрибрюшинно или внутривенно.

[0401] Стерильные инъекционные формы композиций, описанных в данном документе, могут представлять собой водную или маслянистую суспензию. Данные суспензии можно составлять в соответствии с методиками, известными из уровня техники, с применением подходящих диспергирующих или смачивающих средств и суспендирующих средств. Стерильный инъекционный препарат также может представлять собой стерильные инъекционные раствор или суспензию в нетоксичных разбавителе или растворителе, приемлемых для парентерального введения, например, в виде раствора в 1,3-бутандиоле. Приемлемыми средами-носителями и растворителями, которые можно применять, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные нелетучие масла традиционно применяют в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели можно применять любое легкое нелетучее масло, в том числе синтетические моно- или диглицериды. Жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, и их производные, представляющие собой глицериды, являются применимыми для получения инъекционных препаратов, также как и природные фармацевтически приемлемые масла, такие как оливковое масло или касторовое масло, особенно в их полиоксиэтилированных формах. Данные масляные растворы или суспензии также могут содержать разбавитель или диспергирующее средство, представляющее собой длинноцепочечный спирт, такой как указанный в фармакопеи Швейцарии или подобный спирт.

[0402] Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно вводить перорально в любой лекарственной форме, приемлемой для перорального введения, в том числе без ограничения в капсулах, таблетках, водных суспензиях или растворах. В случае таблеток для перорального применения общепринятые носители включают лактозу и кукурузный крахмал. Также, как правило, добавляют смазывающие средства, такие как стеарат магния. Для перорального введения в форме капсул применимые разбавители включают лактозу и высушенный кукурузный крахмал. Если для перорального применения требуются водные суспензии, то активный ингредиент объединяют с эмульгирующими и суспендирующими средствами. При необходимости также можно добавлять определенные подсластители, ароматизаторы или красящие вещества.

[0403] В качестве альтернативы, фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения. Их можно получить посредством смешивания средства с подходящим не вызывающим раздражения вспомогательным веществом, которое является твердым при комнатной температуре, но жидким при температуре в прямой кишке, и, следовательно, будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного средства. Такие материалы включают масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.

[0404] Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, также можно вводить местно. Подходящие составы для местного применения легко получить для каждой из таких областей или органов. Местное применение по отношению к нижнему отделу кишечника можно осуществлять с помощью состава, представляющего собой ректальный суппозиторий (см. выше), или подходящего состава для спринцевания. Также можно применять приемлемые для местного применения трансдермальные пластыри.

[0405] Для местных применений фармацевтические композиции можно составлять в форме подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или более носителях. Носители для местного введения соединений по настоящему изобретению включают без ограничения минеральное масло, вазелиновое масло, белый вазелин, соединение, представляющее собой пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгированный воск и воду. В определенных предпочтительных аспектах настоящего изобретения соединения можно наносить в виде покрытия на стент, который хирургическим путем имплантируют пациенту, с целью предотвращения окклюзии в стенте у пациента или снижения вероятности ее возникновения.

[0406] В качестве альтернативы, фармацевтические композиции можно составлять в форме подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или более фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают без ограничения минеральное масло, сорбитанмоностеарат, полисорбат 60, воск в виде сложных цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиновый спирт и воду.

[0407] Для офтальмологического применения фармацевтические композиции можно составлять в виде тонкодисперсных суспензий в изотоническом стерильном солевом растворе с отрегулированным значением рН или предпочтительно в виде растворов в изотоническом стерильном солевом растворе с отрегулированным значением рН с консервантом, таким как хлорид бензалкония, или без него. В качестве альтернативы, для офтальмологических применений фармацевтические композиции можно составлять в форме мази, как, например, с вазелином.

[0408] Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, также можно вводить с помощью назального аэрозоля или посредством ингаляции. Такие композиции получают в соответствии с методиками, хорошо известными в области фармацевтического составления, и их можно получать в виде растворов в солевом растворе с применением бензилового спирта или других подходящих консервантов, стимуляторов абсорбции для увеличения биодоступности, фторуглеродов и/или других традиционных солюбилизирующих или диспергирующих средств.

[0409] Количество соединения в фармацевтической композиции, описанной в данном документе, которое может быть объединено с материалами-носителями с получением единой лекарственной формы, будет изменяться в зависимости от организма и заболевания, подлежащих лечению, конкретного способа введения. Предпочтительно, композиции должны быть составлены таким образом, чтобы содержать от приблизительно 0,05 миллиграмм до приблизительно 750 миллиграмм или больше, более предпочтительно от приблизительно 1 миллиграмм до приблизительно 600 миллиграмм и еще более предпочтительно от приблизительно 10 миллиграмм до приблизительно 500 миллиграмм активного ингредиента в отдельности или в комбинации с по меньшей мере одним другим соединением в соответствии с настоящим изобретением.

[0410] Также следует понимать, что конкретный режим дозирования и схема лечения для любого конкретного пациента будут зависеть от ряда факторов, в том числе от активности конкретного применяемого соединения, возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола, рациона, времени введения, скорости экскреции, комбинации лекарственных средств и оценки лечащего врача, а также тяжести конкретного заболевания или состояния, подлежащих лечению.

[0411] Пациента или субъекта, нуждающихся в терапии с применением соединений в соответствии со способами, описанными в данном документе, можно лечить путем введения пациенту (субъекту) эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением, в том числе его фармацевтически приемлемых солей, сольватов или полиморфов, необязательно в фармацевтически приемлемом носителе или разбавителе, либо отдельно, либо в комбинации с другими известными средствами, усиливающими выработку эритропоэтина, которые определены далее в данном документе.

[0412] Данные соединения можно вводить любым подходящим путем, например, перорально, парентерально, внутривенно, внутрикожно, подкожно или местно, в том числе трансдермально, в форме жидкости, крема, геля или твердой форме или в форме аэрозоля.

[0413] Активное соединение включают в фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель в количестве, достаточном для доставки пациенту терапевтически эффективного количества для желаемого показания, не вызывая серьезных токсических эффектов у пациента, получающего лечение. Предпочтительная доза активного соединения для всех перечисленных в данном документе состояний находится в диапазоне от приблизительно 10 нг/кг до 300 мг/кг, предпочтительно от 0,1 до 100 мг/кг в сутки, в общем от 0,5 до приблизительно 25 мг на килограмм веса тела реципиента/пациента в сутки. Типичная доза для местного применения будет находиться в диапазоне от 0,01 до 5% вес/вес в подходящем носителе.

[0414] Соединение удобно вводить в любой подходящей стандартной лекарственной форме, в том числе без ограничения лекарственной форме, содержащей менее 1 мг, от 1 мг до 3000 мг, предпочтительно от 5 до 500 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму. Доза для перорального введения, составляющая приблизительно 25-250 мг, зачастую является подходящей.

[0415] Активный ингредиент предпочтительно вводят для достижения максимальных концентраций активного соединения в плазме крови, составляющих приблизительно 0,00001-30 мМ, предпочтительно приблизительно 0,1-30 мкМ. Этого можно достичь, например, посредством внутривенной инъекции раствора или состава активного ингредиента необязательно в солевом растворе или водной среде или введения активного ингредиента в виде болюса. Пероральное введение также является подходящим для достижения эффективных концентраций активного средства в плазме крови.

[0416] Концентрация активного соединения в составе лекарственного средства будет зависеть от скоростей абсорбции, распределения, инактивации и экскреции лекарственного средства, а также от других факторов, известных специалистам в данной области техники. Следует отметить, что величины дозы также будут варьировать в зависимости от тяжести состояния, подлежащего облегчению. Также следует понимать, что для любого конкретного субъекта конкретные режимы дозирования должны корректироваться с течением времени в соответствии с индивидуальной потребностью и профессиональным суждением специалиста, осуществляющего или контролирующего введение композиций, и что диапазоны концентраций, изложенные в данном документе, являются исключительно иллюстративными и не предназначены для ограничения объема или применения на практике заявляемой композиции. Активный ингредиент можно вводить за один раз или можно разделить на несколько меньших доз, подлежащих введению с различными интервалами времени.

[0417] Композиции для перорального применения обычно будут включать инертный разбавитель или съедобный носитель. Они могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. С целью перорального терапевтического введения активное соединение или его производное, представляющее собой пролекарство, можно объединять со вспомогательными веществами и применять в форме таблеток, пастилок или капсул. Фармацевтически совместимые связывающие вещества и/или вспомогательные материалы можно включать как часть композиции.

[0418] Таблетки, пилюли, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из следующих ингредиентов или соединения подобного происхождения: связующее, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; вспомогательное вещество, такое как крахмал или лактоза, диспергирующее вещество, такое как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; смазывающее вещество, такое как стеарат магния или Sterotes; вещество, способствующее скольжению, такое как коллоидный диоксид кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизирующее вещество, такое как ароматизатор с запахом мяты перечной, метилсалицилат или ароматизатор с запахом апельсина. Если стандартная лекарственная форма представляет собой капсулу, то она может содержать в дополнение к материалу вышеуказанного типа жидкий носитель, такой как жирное масло. Кроме того, стандартные лекарственные формы могут содержать другие различные материалы, которые изменяют физическую форму лекарственной формы, например, покрытия из сахара, шеллака или кишечнорастворимых средств.

[0419] Активное соединение или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в виде компонента настойки, суспензии, сиропа, облатки, жевательной резинки или т.п. Сироп может содержать в дополнение к активным соединениям сахарозу в качестве подсластителя и определенные консерванты, красители и красящие средства, а также вкусоароматические добавки.

[0420] Активное соединение или его фармацевтически приемлемые соли также можно смешивать с другими активными материалами, которые не влияют отрицательно на необходимое действие, или с материалами, которые дополняют необходимое действие, такими как средства, усиливающие выработку эритропоэтина, в том числе ЕРО и дарбэпоэтин альфа, среди прочих. В определенных предпочтительных аспектах настоящего изобретения одно или более соединений в соответствии с настоящим изобретением совместно вводят с другим биологически активным средством, таким как средство, усиливающее выработку эритропоэтина, или средство, способствующее заживлению ран, в том числе антибиотик, как далее описано в данном документе.

[0421] Растворы или суспензии, используемые для парентерального, внутрикожного, подкожного или местного применения, могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, солевой раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные средства, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие вещества, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и вещества для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Препарат для парентерального введения может содержаться в ампулах, одноразовых шприцах или многодозовых флаконах, изготовленных из стекла или пластика.

[0422] При введении внутривенно предпочтительные носители представляют собой физиологический солевой раствор или фосфатно-солевой буферный раствор (PBS).

[0423] В одном варианте осуществления активные соединения получают с носителями, которые будут защищать соединение от быстрого выведения из организма, как, например, состав с контролируемым высвобождением, в том числе имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Можно применять биологически разлагаемые биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевую кислоту, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочную кислоту. Способы получения таких составов будут очевидны специалистам в данной области техники.

[0424] Липосомные суспензии также могут представлять собой фармацевтически приемлемые носители. Их можно получить в соответствии со способами, известными специалистам в данной области техники, например, как описано в патенте США №4522811 (который включен в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Например, липосомные составы можно получить путем растворения подходящего(-их) липида(-ов) (таких как стеароилфосфатидилэтаноламин, стеароилфосфатидилхолин, арахадоилфосфатидилхолин и холестерин) в неорганическом растворителе, который затем выпаривают, оставляя тонкую пленку высушенного липида на поверхности контейнера. Затем водный раствор активного соединения вносят в контейнер. Затем контейнер вращают вручную для отделения липидного материала от стенок контейнера и диспергирования липидных агрегатов, за счет чего образуется липосомная суспензия.

[0425] Терапевтические способы

[0426] В дополнительном аспекте в описании представлены терапевтические композиции, содержащие эффективное количество соединения, описанного в данном документе, или его солевой формы и фармацевтически приемлемый носитель. Терапевтические композиции модулируют разрушение белка у пациента или субъекта, например, у животного, как, например, у человека, и могут применяться для лечения или облегчения болезненных состояний или состояний, модулирование которых обеспечивается посредством разрушения белка.

[0427] Термины «лечить», «осуществлять лечение» и «лечение» и т.д., используемые в данном документе, относятся к любому действию, обеспечивающему пользу для пациента, которому могут вводить соединения по настоящему изобретению, в том числе лечение любого болезненного состояния или состояния, модулируемых за счет белка, с которым связываются соединения по настоящему изобретению. Болезненные состояния или состояния, в том числе рак, которые можно лечить с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением, изложены в данном документе выше.

[0428] В описании представлены терапевтические композиции, описанные в данном документе, для обеспечения разрушения белков, представляющих интерес, для лечения или облегчения заболевания, например, рака. В определенных дополнительных вариантах осуществления заболевание представляет собой множественную миелому. В связи с этим, в другом аспекте в описании представлен способ обеспечения убиквитинирования/разрушения целевого белок в клетке. В определенных вариантах осуществления способ предусматривает введение бифункционального соединения, описанного в данном документе, содержащего, например, CLM и РТМ, предпочтительно соединенные посредством линкерного фрагмента, описанного далее в данном документе, где CLM связан с РТМ, и при этом CLM распознает белок убиквитинового пути (например, убиквитинлигазу, предпочтительно Е3-убиквитинлигазу, такую как, например, цереблон), и РТМ распознает целевой белок так, что при размещении целевого белка в непосредственной близости от убиквитинлигазы будет происходить разрушение целевого белка, что, таким образом, приводит к разрушению целевого белка/подавлению его эффектов и контролю уровней белка. Контроль уровней белка, предоставляемый настоящим изобретением, обеспечивает лечение болезненного состояния или состояния, модулируемых за счет целевого белка путем снижения уровня данного белка в клетке, например клетке пациента. В определенных вариантах осуществления способ предусматривает введение эффективного количества соединения, описанного в данном документе, необязательно включающего фармацевтически приемлемые вспомогательное вещество, носитель, вспомогательное средство, другое биологически активное средство или их комбинацию.

[0429] В дополнительных вариантах осуществления в описании представлены способы лечения или облегчения заболевания, нарушения или их симптома у субъекта или пациента, например, у животного, такого как человек, предусматривающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей эффективное количество, например терапевтически эффективное количество, соединения, описанного в данном документе, или его солевой формы и фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество, носитель, вспомогательное средство, другое биологически активное средство или их комбинацию, при этом композиция является эффективной для лечения или облегчения заболевания, или нарушения, или их симптома у субъекта.

[0430] В другом аспекте в описании предусмотрены способы идентификации эффектов разрушения белков, представляющих интерес, в биологической системе с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением.

[0431] В другом варианте осуществления настоящее изобретение направлено на способ лечения пациента-человека, нуждающегося в модулировании болезненного состояния или состояния за счет белка, где разрушение данного белка будет оказывать терапевтический эффект на данного пациента, при этом способ предусматривает введение нуждающемуся в этом пациенту эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением, необязательно в комбинации с другим биологически активным средством. Болезненное состояние или состояние могут представлять собой заболевание, вызванное микробным организмом или другим экзогенным организмом, таким как вирус, бактерия, гриб, простейшие или другой микроорганизм, или могут представлять собой болезненное состояние, которое вызвано сверхэкспрессией белка, что приводит к болезненному состоянию и/или состоянию.

[0432] Термин «болезненное состояние или состояние» используется для описания любого болезненного состояния или состояния, при котором происходит нарушение регуляции белка (т.е. количество белка, экспрессируемого у пациента, является повышенным), и при этом разрушение одного или более белков у пациента может обеспечивать благоприятную терапию или облегчение симптомов у пациента, нуждающегося в этом. В определенных случаях болезненное состояние или состояние можно излечить.

[0433] Болезненные состояния или состояния, которые можно лечить с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением включают, например, астму, аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз, различные виды рака, цилиопатии, расщепленное небо, диабет, заболевание сердечнососудистой системы, гипертонию, воспалительное заболевание кишечника, задержку в умственном развитии, расстройство настроения, ожирение, рефракционную аномалию, бесплодие, синдром Ангельмана, болезнь Канавана, целиакию, болезнь Шарко-Мари-Тута, муковисцидоз, мышечную дистрофию Дюшенна, гемохроматоз, гемофилию, синдром Клайнфелтера, нейрофиброматоз, фенилкетонурию, поликистозную болезнь почек, (PKD1) или 4 (PKD2), синдром Прадера-Вилли, серповидно-клеточное заболевание, болезнь Тея-Сакса, синдром Тернера.

[0434] Дополнительные болезненные состояния или состояния, которые можно лечить с помощью соединений в соответствии с настоящим изобретением, включают болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (болезнь Лу Герига), нервную анорексию, тревожный невроз, атеросклероз, синдром дефицита внимания и гиперактивности, аутизм, биполярное расстройство, синдром хронической усталости, хроническое обструктивное заболевание легких, болезнь Крона, ишемическую болезнь сердца, деменцию, депрессию, сахарный диабет 1 типа, сахарный диабет 2 типа, эпилепсию, синдром Гийена-Барре, синдром раздраженного кишечника, обыкновенную волчанку, метаболический синдром, рассеянный склероз, инфаркт миокарда, ожирение, обсессивно-компульсивное расстройство, паническое расстройство, болезнь Паркинсона, псориаз, ревматоидный артрит, саркоидоз, шизофрению, инсульт, облитерирующий тромбангиит, синдром Туретта, васкулит.

[0435] Некоторые дополнительные болезненные состояния или состояния, которые можно лечить с помощью соединений в соответствии с настоящим изобретением, включают, среди прочего, ацерулоплазминемию, ахондрогенез II типа, хондродистрофию, акроцефалию, болезнь Гоше 2 типа, острую интермиттирующую порфирию, болезнь Канавана, аденоматозный полипоз толстой кишки, дефицит ALA-дегидратазы, дефицит аденилосукцинатлиазы, адреногенитальный синдром, адренолейко дистрофию, порфирию ALA-D, дефицит ALA-дегидратазы, алкаптонурию, болезнь Александера, алкаптонурический охроноз, дефицит альфа-1-антитрипсина, ингибитор альфа-1-протеиназы, эмфизему, боковой амиотрофический склероз, синдром Альстрема, болезнь Александера, несовершенный амелогенез, дефицит ALA-дегидратазы, болезнь Андерсона-Фабри, синдром нечувствительности к андрогенам, анемию, диффузную ангиокератому туловища, ангиоматоз сетчатки (болезнь Гиппеля-Линдау) синдром Аперта, арахнодактилию (синдром Марфана), синдром Стиклера, врожденную множественную артрохалазию (синдром Элерса-Данлоса, артрохалазийного типа), атаксию-телеангиэктазию, синдром Ретта, первичную легочную гипертензию, болезнь Сандгоффа, нейрофиброматоз II типа, синдром сморщенных кожных покровов Бира-Стивенсона, средиземноморскую лихорадку, наследственный синдром Бенджамина, бета-талассемию, двусторонний нейрофиброматоз слухового нерва (нейрофиброматоз II типа), тромбофилию, обусловленную фактором V Лейдена, синдром Блоха-Сульцбергера (недержание пигмента), синдром Блума, сидеробластную анемию, связанную с Х-хромосомой, синдром Бонневи-Ульриха (синдром Тернера), болезнь Бурневилля (туберозный склероз), прионную болезнь, синдром Бирта-Хогга-Дюба, болезнь «хрустального человека» (несовершенный остеогенез), синдром широкого I пальца кистей и стоп (синдром Рубинштейна-Тейби), бронзовый диабет/пигментный цирроз (гемохроматоз), бульбоспинальную мышечную атрофию (болезнь Кеннеди), синдром Бюргера-Грютца (дефицит липопротеинлипазы), хроническую гранулематозную болезнь (CGD), кампомелическую дисплазию, биотинидазную недостаточность, кардиомиопатию (синдром Нунан), синдром кошачьего крика, CAVD (врожденное отсутствие семявыносящего протока), вело-кардио-фациальный синдром (CBAVD), СЕР (врожденную эритропоэтическую порфирию), муковисцидоз, врожденный гипотиреоз, хондродистрофический синдром (хондродистрофию), отоспондиломегаэпифизарную дисплазию, синдром Леша-Найхана, галактоземию, синдром Элерса-Данлоса, танатофорную дисплазию, синдром Коффина-Лоури, синдром Коккейна, (семейный аденоматозный полипоз), врожденную эритропоэтическую порфирию, врожденный порок сердца, метгемоглобинемию/врожденную метгемоглобинемию, хондродистрофию, сидеробластную анемию, связанную с Х-хромосомой, диффузную болезнь соединительной ткани, кардиофациальный синдром, анемию Кули (бета-талассемию), заболевание, связанное с нарушением метаболизма меди (болезнь Вильсона), заболевание, связанное с нарушением клеточного транспорта меди (болезнь Менкеса), наследственную копропорфирию, синдром Каудена, черепно-лицевой дизостоз (синдром Крузона), болезнь Крейтцфельда-Якоба (прионную болезнь), синдром Коккейна, синдром Каудена, синдром Куршманна-Баттена-Штейнерта (миотоническую дистрофию), синдром сморщенных кожных покровов Бира-Стивенсона, первичную гипероксалурию, спондилоэпиметафизарную дисплазию (типа Струдвика), мышечную дистрофию типов Дюшенна и Беккера (DBMD), синдром Ушера, дегенеративные заболевания нервной системы, в том числе синдром де Груши и синдром Дежерина-Сотта, разновидности инвалидности вследствие порока развития, дистальную спинальную мышечную атрофию V типа, синдром нечувствительности к андрогенам, диффузный склероз, характеризующийся наличием глобоидных клеток (болезнь Краббе), синдром Ди Джорджи, дефицит рецептора дигидротестостерона, синдром нечувствительности к андрогенам, синдром Дауна, карликовость, эритропоэтическую протопорфирию, обусловленную дефицитом 5-аминолевулинатсинтетазы в эритроидных клетках, эритропоэтическую порфирию, эритропоэтическую протопорфирию, эритропоэтическую уропорфирию, атаксию Фридрейха, семейный рецидивирующий полисерозит, позднюю кожную порфирию, наследственную компрессионную нейропатию, первичную легочную гипертензию (РРН), кистозный фиброз поджелудочной железы, синдром ломкой Х-хромосомы, галактоземию, наследственные заболевания головного мозга, врожденный гигантоклеточный гепатит (неонатальный гемохроматоз), синдром Гренблада-Страндберга (эластическую псевдоксантому), болезнь Гюнтера (врожденную эритропоэтическую порфирию), гемохроматоз, синдром Халлгрена, серповидно-клеточную анемию, гемофилию, гепатоэритропоэтическую порфирию (НЕР), цереброретинальный ангиоматоз (болезнь Гиппеля-Линдау), болезнь Гентингтона, синдром прогерии Хатчинсона-Гилфорда (прогерию), гиперандрогенизм, гипохондроплазию, гипохромную анемию, нарушения со стороны иммунной системы, в том числе тяжелый комбинированный иммунодефицит, связанный с Х-хромосомой, синдром Инсли-Эстли, синдром Кеннеди, синдром Джексона-Вейса, синдром Жубера, синдром Леша-Найхана, синдром Джексона-Вейса, заболевания почек, в том числе гипероксалурию, синдром Клайнфелтера, дисплазию Книста, лакунарную деменцию, ахондрогенез Лангера-Салдино, атаксию-телеангиэктазию, синдром Линча, дефицит лизилгидроксилазы, болезнь Мачадо-Джозефа, нарушения обмена веществ, в том числе дисплазию Книста, синдром Марфана, двигательные расстройства, синдром Моуат-Вильсона, муковисцидоз, синдром Мюнке, множественный нейрофиброматоз, синдром Нэнси-Инсли, хондродисплазию Нэнси-Суини, болезнь Ниманна-Пика, синдром Ноака (синдром Пфайффера), болезнь Ослера-Вебера-Рандю, синдром Пейтца-Егерса, поликистоз почек, полиоссальную фиброзную остеодисплазию (синдром МакКьюна-Олбрайта), синдром Пейтца-Егерса, синдром Прадера-Лабхарта-Вилли, гемохроматоз, первичную гиперурикемию (синдром Леша-Найхана), первичную легочную гипертензию, первичную сенильную дегенеративную деменцию, прионную болезнь, прогерию (синдром прогерии Хатчинсона-Гилфорда), прогрессирующую хроническую наследственную хорею (синдром Гентингтона) (болезнь Гентингтона), прогрессирующую мышечную атрофию, спинальную мышечную атрофию, пропионовую ацидемию, протопорфирию, проксимальную миотоническую дистрофию, легочную артериальную гипертензию, РХЕ (эластическую псевдоксантому), Rb (ретинобластому), болезнь Реклингхаузена (нейрофиброматоз I типа), рецидивирующий полисерозит, нарушения сетчатки, ретинобластому, синдром Ретта, RFALS 3 типа, синдром Рикера, синдром Райли-Дея, синдром Русси-Леви, тяжелую хондродистрофию с задержкой развития и черным акантозом (SADDAN), синдром Ли-Фраумени, синдром, включающий саркому, рак молочной железы, лейкоз и карциному надпочечника (SBLA), эпилойю (туберозный склероз), SDAT, врожденную SED (врожденную спондилоэпифизарную дисплазию), SED Струдвика (спондилоэпиметафизарную дисплазию типа Струдвика), SEDc (врожденную спондилоэпифизарную дисплазию), SEMD типа Струдвика (спондилоэпиметафизарную дисплазию типа Струдвика), синдром Шпринтцена, нарушения пигментации кожи, синдром Смита-Лемли-Опитца, наследственную порфирию южно-африканского типа (пеструю порфирию южно-африканского типа), возникающий в младенческом возрасте наследственный спастический паралич, расстройства речи и коммуникативных навыков, сфинголипидоз, болезнь Тея-Сакса, спинально-церебеллярную атаксию, синдром Стиклера, инсульт, синдром нечувствительности к андрогенам, дефицит тетрагидробиоптерина, бета-талассемию, заболевание щитовидной железы, томакулезную невропатию (наследственную компрессионную невропатию), синдром Тричера Коллинза, синдром Х-трисомии (синдром трисомии по Х-хромосоме), трисомию по хромосоме 21 (синдром Дауна), трисомию по Х-хромосоме, синдром VHL (болезнь Гиппеля-Линдау), нарушение зрения и слепота (синдром Альстрема), болезнь Вролика, синдром Ваарденбурга, синдром Варбурга-Сьо-Фледелиуса, синдром Вейссенбахера-Цвеймюллера, синдром Вольфа-Хиршхорна, периодическую болезнь Вольфа, синдром Вейссенбахера-Цвеймюллера и пигментную ксеродерму.

[0436] Термин «неоплазия» или «рак» применяют по всему описанию для описания патологического процесса, который приводит к образованию и росту ракового или злокачественного новообразования, т.е. аномальной ткани, которая растет посредством клеточной пролиферации, зачастую более быстро, чем нормальная ткань, и продолжает расти после прекращения стимула, который инициировал новый рост. Злокачественные новообразования демонстрируют частичное или полное отсутствие структурной организации и функциональной координации с нормальной ткани и большинство распространяется в окружающие ткани, метастазируют в несколько мест и вероятно вернутся вновь после попытки удаления и обусловят смерть пациент, если их недостаточно лечить. Применяемый в данном документе термин «неоплазия» применяют для описания всех раковых болезненных состояний, и он включает или охватывает патологический процесс, ассоциированный со злокачественными гематогенными, асцитическими и солидными опухолями. Иллюстративные виды рака, которые можно лечить с помощью соединений по настоящему изобретению либо в отдельности, либо в комбинации с по меньшей мере одним дополнительным противораковым средством, включают плоскоклеточную карциному, базальноклеточную карциному, аденокарциному, виды гепатоцеллюларной карциномы и виды почечноклеточной карциномы, рак мочевого пузыря, колоректальный рак, рак молочной железы, шейки матки, толстой кишки, пищевода, головы, почки, печени, легкого, шеи, яичника, поджелудочной железы, предстательной железы и желудка; виды лейкоза; виды доброкачественной и злокачественной лимфомы, в частности лимфома Беркитта и неходжкинская лимфома; виды доброкачественной и злокачественной меланомы; миелопролиферативные заболевания; виды саркомы, в том числе саркома Юинга, гемангиосаркому, саркому Капоши, липосаркому, виды миосаркомы, периферическую нейроэпителиому, синовиальную саркому, виды глиомы, виды астроцитомы, виды олигодендроглиомы, виды эпендимомы, виды глиобастомы, виды нейробластомы, виды ганглионевромы, виды ганглиоглиомы, виды медуллобластомы, опухоли клеток шишковидного тела, виды менингиомы, виды менингеальной саркомы, виды нейрофибромы и виды шванномы; колоректальный рак, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак шейки матки, рак матки, рак легкого, рак яичников, рак яичка, рак щитовидной железы, астроцитому, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак печени, рак толстой кишки, меланому; карциносаркому, болезнь Ходжкина, опухоль Вильмса и виды тератокарциномы. Дополнительные виды рака, которые можно лечить с применением соединений в соответствии с настоящим изобретением, включают, например, Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (T-ALL), Т-клеточную лимфобластную лимфому (T-LL), периферическую Т-клеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз у взрослых, ALL из пре-В-клеткок, виды лимфомы из пре-В-клеток, В-крупноклеточную лимфому, лимфому Беркитта, В-клеточный ALL, ALL, положительный по филадельфийской хромосоме, и CML, положительный по филадельфийской хромосоме.

[0437] Термин «биологически активное средство» используется для описания средства, отличного от соединения в соответствии с настоящим изобретением, которое применяют в комбинации с соединениями по настоящему изобретению в качестве средства с биологической активностью для содействия в осуществлении предполагаемой терапии, ингибирования и/или предупреждения/профилактики, для которых применяют соединения по настоящему изобретению. Предпочтительные биологически активные средства для применение в данном документе включают такие средства, которые обладают фармакологической активностью, подобную активности, для которой применяют или вводят соединения по настоящему изобретению, и включают, например, противораковые средства, противовирусные средства, особенно в том числе средства против HIV и средства против HCV, противомикробные средства, противогрибковые средства и т.д.

[0438] Термин «дополнительное противораковое средство» применяют для описания противоракового средства, которое можно объединять с соединениями в соответствии с настоящим изобретением для лечения рака. Такие средства включают, например, эверолимус, трабектедин, абраксан, TLK 286, AV-299, DN-101, пазопаниб, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, энзастаурин, вандетаниб, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, АТ-9263, ингибитор FLT-3, ингибитор VEGFR, ингибитор TK EGFR, ингибитор киназы Aurora, модулятор PIK-1, ингибитор Bcl-2, ингибитор HDAC, ингибитор с-МЕТ, ингибитор PARP, ингибитор Cdk, ингибитор TK EGFR, ингибитор IGFR-TK, антитело к HGF, ингибитор киназы PI3, ингибитор AKT, ингибитор mTORC1/2, ингибитор JAK/STAT, ингибитор контрольной точки 1 или 2, ингибитор киназы фокальной адгезии, ингибитор киназы Мар-киназы (mek), антитело к ловушке VEGF, пеметрексед, эрлотиниб, дазатаниб, нилотиниб, декатаниб, панитумумаб, амрубицин, ореговомаб, Lep-etu, нолатрексед, azd2171, батабулин, офатумумаб, занолимумаб, эдотекарин, тетрандрин, рубитекан, тесмилифен, облимерсен, тицилимумаб, ипилимумаб, госсипол, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, циленгитид, гиматекан, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR₁ KRX-0402, лукантон, LY317615, нейрадиаб, витеспан, Rta 744, Sdx 102, талампанель, атрасентан, Xr 311, ромидепсин, ADS-100380, сунитиниб, 5-фторурацил, вориностат, этопозид, гемцитабин, доксорубицин, липосомальный доксорубицин, 5'-дезокси-5-фторуридин, винкристин, темозоломид, ZK-304709, селициклиб; PD0325901, AZD-6244, капецитабин, L-глутаминовую кислоту, N-[4-[2-(2-амино-4,7-дигидро-4-оксо-1Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-ил)этил]бензоил]-, динатриевую соль, гептагидрат, камптотецин, PEG-меченный иринотекан, тамоксифен, торемифена цитрат, анастразол, эксеместан, летрозол, DES (диэтилстилбестрол), эстрадиол, эстроген, конъюгированный эстроген, бевацизумаб, IMC-1C11, CHIR-258); 3-[5-(метилсульфонилпиперадинметил)индолилхинолон, ваталаниб, AG-013736, AVE-0005, гозерелина ацетат, лейпролида ацетат, трипторелина памоат, медроксипрогестерона ацетат, гидроксипрогестерона капроат, мегестрола ацетат, ралоксифен, бикалутамид, флутамид, нилутамид, мегестрола ацетат, СР-724714; TAK-165, HKI-272, эрлотиниб, лапатаниб, канертиниб, антитело к ABX-EGF, эрбитукс, EKB-569, PKI-166, GW-572016, лонафарниб, BMS-214662, типифарниб; амифостин, NVP-LAQ824, субероиланилидгидроксамовую кислоту, вальпроевую кислоту, трихостатин A, FK-228, SU11248, сорафениб, KRN951, аминоглютетимид, арнсакрин, анагрелид, L-аспарагиназу, вакцину на основе бацилл Кальметта-Герена (BCG), адриамицин, блеомицин, бусерелин, бусульфан, карбоплатин, кармустин, хлорамбуцил, цисплатин, кладрибин, клодронат, ципротерон, цитарабин, дакарбазин, дактиномицин, даунорубицин, диэтилстилбестрол, эпирубицин, флударабин, флудрокортизон, флуоксиместерон, флутамид, гливек, гемцитабин, гидроксимочевину, идарубицин, ифосфамид, иматиниб, лейпролид, левамизол, ломустин, мехлоретамин, мелфалан, 6-меркаптопурин, месну, метотрексат, митомицин, митотан, митоксантрон, нилутамид, октреотид, оксалиплатин, памидронат, пентостатин, пликамицин, порфимер, прокарбазин, ралтитрексед, ритуксимаб, стрептозоцин, тенипозид, тестостерон, талидомид, тиогуанин, тиотепу, третиноин, виндезин, 13-цис-ретиноевую кислоту, фенилаланин мустард, урацил мустард, эстрамустин, алтретамин, флоксуридин, 5-дезоксиуридин, цитозинарабинозид, 6-мекаптопурин, дезоксикоформицин, кальцитриол, валрубицин, митрамицин, винбластин, винорелбин, топотекан, разоксин, маримастат, COL-3, неовастат, BMS-275291, скваламин, эндостатин, SU5416, SU6668, EMD121974, интерлейкин-12, IM862, ангиостатин, витаксин, дролоксифен, идоксифен, спиронолактон, финастерид, цимитидин, трастузумаб, денилейкин дифтитокс, гефитиниб, бортезимиб, паклитаксел, не содержащий кремофор паклитаксел, доцетаксел, эпитилон В, BMS-247550, BMS-310705, дролоксифен, 4-гидрокситамоксифен, пипендоксифен, ERA-923, арзоксифен, фулвестрант, аколбифен, лазофоксифен, идоксифен, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, топотекан, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, рапамицин, 40-O-(2-гидроксиэтил)рапамицин, темсиролимус, АР-23573, RAD001, АВТ-578, ВС-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, вортманнин, ZM336372, L-779,450, PEG-филграстим, дарбэпоэтин, эритропоэтин, гранулоцитарный колониестимулирующий фактор, золендронат, преднизон, цетуксимаб, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, гистрелин, пегилированный интерферон альфа-2а, интерферон альфа-2а, пегилированный интерферон альфа-2b, интерферон альфа-2b, азацитидин, PEG-L-аспарагиназа, леналидомид, гемтузумаб, гидрокортизон, интерлейкин-11, дексразоксан, алемтузумаб, полностью транс-ретиноевую кислоту, кетоконазол, интерлейкин-2, мегестрол, иммуноглобулин, азотистый иприт, метилпреднизолон, ибритгумомаб тиуксетан, андрогены, децитабин, гексаметилмеламин, бексаротен, тозитумомаб, триоксид мышьяка, кортизон, эдитронат, митотан, циклоспорин, липосомальный даунорубицин, аспарагиназа Edwina, стронций 89, касопитант, нетупитант, антагонист рецептора NK-1, палоносетрон, апрепитант, дифенгидрамин, гидроксизин, метоклопрамид, лоразепам, альпразолам, галоперидол, дроперидол, дронабинол, дексаметазон, метилпреднизолон, прохлорперазин, гранисетрон, ондансетрон, доласетрон, трописетрон, PEG-филграстим, эритропоэтин, эпоэтин альфа, дарбэпоэтин альфа и их смеси.

[0439] Термин «средство против HIV» или «дополнительное средство против HIV» включает, например, нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы (NRTI), другие отличные от нуклеозидных ингибиторов ингибиторы обратной транскриптазы (т.е. ингибиторы, которые являются иллюстративными для настоящего изобретения), ингибиторы протеазы, ингибиторы слияния, среди прочих, иллюстративные соединения, которые могут включать, например, 3ТС (ламивудин), AZT (зидовудин), (-)-FTC, ddI (диданозин), ddC (зальцитабин), абакавир (АВС), тенофовир (РМРА), D-D4FC (реверсет), D4T (ставудин), рацивир, L-FddC, L-FD4C, NVP (невирапин), DLV (делавирдин), EFV (эфавиренз), SQVM (саквинавира мезилат), RTV (ритонавир), IDV (индинавир), SQV (саквинавир), NFV (нелфинавир), APV (ампренавир), LPV (лопинавир), ингибиторы слияния, такие как Т20, среди прочих, фузеон и их смеси, в том числе соединения против HIV, находящиеся в настоящее время на клинических испытаниях или в разработке.

[0440] Другие средства против HIV, которые можно применять с совместным введением с соединениями в соответствии с настоящим изобретением, включают, например, другие NNRTI (т.е. отличные от NNRTI в соответствии с настоящим изобретением) и могут быть выбраны из группы, состоящей из невирапина (BI-R6-587), делавирдина (U-90152S/T), эфавиренза (DMP-266), UC-781 (N-[4-хлор-3-(3-метил-2-бутенилокси)фенил]-2-метил-3-фуранкарботиамид), этравина (ТМС125), тровидина (Ly300046.HCl), MKC-442 (эмивирин, коактинон), HI-236, HI-240, HI-280, HI-281, рилпивирина (ТМС-278), MSC-127, HBY 097, DMP266, байкалина (TJN-151) ADAM-II (метил-3',3'-дихлор-4',4''-диметокси-5',5''-бис(метоксикарбонил)-6,6-дифенилгексеноат), метил-3-бром-5-(1-5-бром-4-метокси-3-(метоксикарбонил)фенил)гепт-1-енил)-2-метоксибензоата (аналог алкенилдиарилметана, аналог Adam), (5-хлор-3-(фенилсульфинил)-2'-индолекарбоксамид), ААР-ВНАР (U-104489 или PNU-104489), каправирина (AG-1549, S-1153), атевирдина (U-87201E), ауринтрикарбоновой кислоты (SD-095345), 1-[(6-циано-2-индолил)карбонил]-4-[3-(изопропиламино)-2-пиридинил]пиперазина, 1-[5-[[N-(метил)метилсульфониламино]-2-индолилкарбонил-4-[3-(изопропиламино)-2-пиридинил]пиперазина, 1-[3-(этиламино)-2-[пиридинил]-4-[(5-гидрокси-2-индолил)карбонил]пиперазина, 1-[(6-формил-2-индолил)карбонил]-4-[3-(изопропиламино)-2-пиридинил]пиперазина, 1-[[5-(метилсульфонилокси)-2-индоил)карбонил]-4-[3-(изопропиламино)-2-пиридинил]пиперазина, U88204E, бис(2-нитрофенил)сульфона (NSC 633001), каланолида A (NSC675451), каланолида В, 6-бензил-5-метил-2-(циклогексилокси)пиримидин-4-она (DABO-546), DPC 961, E-EBU, E-EBU-dm, E-EPSeU, E-EPU, фоскарнета (фоскавир), НЕРТ (1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилтио)тимин), НЕРТ-М (1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(3-метилфенил)тио)тимин), HEPT-S (1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6-(фенилтио)-2-тиотимин), инофиллума Р, L-737,126, мишеламин A (NSC650898), мишеламина В (NSC649324), мишеламина F, 6-(3,5-диметилбензил)-1-[(2-гидроксиэтокси)метил]-5-изопропилурацила, 6-(3,5-диметилбензил)-1-(этиоксиметил)-5-изопропилурацила, NPPS, E-BPTU (NSC 648400), олтипраза (4-метил-5-(пиразинил)-3Н-1,2-дитиол-3-тиона), N-[-{2-(2-хлор-6-фторфенэтил]-N'-(2-тиазолил)тиомочевины (Cl, F производное РЕТТ), N-{2-(2,6-дифторфенэтил]-N'-[2-(5-бромпиридил)]тиомочевины (производное РЕТТ), N-{2-(2,6-дифторфенэтил]-N'-[2-(5-метилпиридил)]тиочевины (пиридилпроизводное РЕТТ), N-[2-(3-фторфуранил)этил]-N'-[2-(5-хлорпиридил)]тиомочевины, N-[2-(2-фтор-6-этоксифенэтил)]-N'-[2-(5-бромпиридил)]тиомочевины, N-(2-фенэтил)-N'-(2-тиазолил)тиомочевины (LY-73497), L-697,639, L-697,593, L-697,661, 3-[2-(4,7-дифторбензоксазол-2-ил)этил)-5-этил-6-метил(пипридин-2(1Н)-тиона (производное 2-пиридинона), 3-[[(2-метокси-5,6-диметил-3-пиридил)метил]амин]-5-этил-6-метил(пипридин-2(1Н)-тиона, R82150, R82913, R87232, R88703, R89439 (ловирид), R90385, S-2720, сурамина натрий, TBZ (тиазолобензимидазол, NSC 625487), тиазолоизоиндол-5-она, (+)(R)-9b-(3,5-диметилфенил-2,3-дигидротиазоло[2,3-а]изоиндол-5(9bH)-она, тивирапина (R86183), UC-38 и UC-84, среди прочих.

[0441] Термин «фармацевтически приемлемая соль» используется по всему описанию для описания в применимых случаях солевой формы одного или более из соединений, описанных в данном документе, которые присутствуют для увеличения растворимости соединения в желудочных соках желудочно-кишечного тракта пациента с целью способствовать растворению и биодоступности соединений. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, полученные из фармацевтически приемлемых неорганических или органических оснований и кислот в соответствующих случаях. Подходящие соли включают соли, полученные из щелочных металлов, такие как калиевые и натриевые соли, щелочноземельных металлов, такие как кальциевые, магниевые и аммониевые соли, среди ряда других кислот и оснований, хорошо известных в области фармацевтики. Натриевые и калиевые соли являются особенно предпочтительными как соли нейтрализации фосфатов в соответствии с настоящим изобретением.

[0442] Термин «фармацевтически приемлемое производное» используется по всему описанию для описания любой фармацевтически приемлемой формы пролекарства (такой как сложный эфир, амид, другая группа пролекарства), которая при введении пациенту предоставляет непосредственно или опосредованно соединение по настоящему изобретению или активный метаболит соединения по настоящему изобретению.

[0443] Общие подходы к синтезу

[0444] Для осуществления на практике синтеза и оптимизации бифункциональных молекул, описанных в данном документе, можно найти решение в постадийном или модульном способе. Например, идентификация соединений, которые связываются с целевыми молекулами, может предусматривать операции скрининга с высокой или средней пропускной способностью, если подходящие лиганды не являются непосредственно доступными. Не редки случаи, когда исходные лиганды требуют циклов итерационного проектирования и оптимизации для улучшения субоптимальных аспектов, идентифицированных с помощью данных из подходящих in vitro и фармакологических и/или ADMET анализов. Часть операции оптимизации/SAR будет заключаться в тестировании положений лиганда, которые допускают замещение и которые могут быть подходящими местами для присоединения химических групп линкера, ранее указанного в данном документе. Если доступны кристаллографические или ЯМР данные о структуре, их можно применять для фокусирования на таком синтетическом усилии.

[0445] Очень похожим образом можно идентифицировать и оптимизировать лиганды для Е3-лигазы, т.е. ULM/CLM.

[0446] Имея в своем распоряжении РТМ и ULM (например, CLM) специалист в данной области техники может применять известные способы синтеза для их комбинирования с линкерным фрагментом или без него. Линкерные фрагменты можно синтезировать в диапазоне составов, значений длины и эластичности и функционализированные так, что группы РТМ и ULM могут быть присоединены последовательно к дальним концам линкера. Таким образом, можно создать и профилировать библиотеку бифункциональных молекул в фармакологических исследованиях и ADMET/PK анализах in vitro и in vivo. Как и с группами РТМ и ULM, конечные бифункциональные молекулы можно подвергать циклам итерационного проектирования и оптимизации с целью определения молекул с необходимыми свойствами.

[0447] Иллюстративные соединения, описанные в данной заявке, могут быть синтезированы путем присоединения правовращающего ключевого фрагмента, полученного в соответствии со схемами 2-30, 2-31, 2-40, 2-41, 2-45 и 2-46. Подробное получение иллюстративных соединений, заявляемых в данной заявке, дополнительно описано на схемах 3-10, 3-56, 3-58 и 3-72.

[0448] А. Общие схемы синтеза иллюстративного лиганда цереблона

[0449] На схемах синтеза 2-30, 2-31, 2-40, 2-41, 2-45 и 2-46 описаны пути, применяемые при получении лигандов CRBN, а также лигандов CRBN с присоединенными частичными линкерными фрагментами.

[0450] Общая схема синтеза 2-30 для получения промежуточного соединения

[0451] Общая схема синтеза 2-31 для получения промежуточного соединения

[0452] Общая схема синтеза 2-40 для получения промежуточного соединения

[0453] Общая схема синтеза 2-41 для получения промежуточного соединения

[0454] Общая схема синтеза 2-45 для получения промежуточного соединения

[0455] Общая схема синтеза 2-46 для получения промежуточного соединения

[0456] В. Общие схемы синтеза иллюстративного PROTAC

[0457] На схемах синтеза 3-10, 3-56, 3-58 и 3-72 описаны пути, применяемые при получении иллюстративных химерных соединений, заявленных в данной заявке.

[0458] Общая схема синтеза 3-10 для получения заявленных соединений

[0459] Общая схема синтеза 3-56 для получения заявленных соединений

[0460] Общая схема синтеза 3-58 для получения заявленных соединений

[0461] Общая схема синтеза 3-72 для получения заявленных соединений

[0462] Синтез иллюстративного PROTAC 1

2-(4-(4-Хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)-N-(3-(3-((3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-ил)окси)пропокси)пропил)ацетамид

[0463] Схема синтеза:

К раствору (S)-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)уксусной кислоты (20,6 мг, 0,051 ммоль) и 1-(5-(3-(3-аминопропокси)пропокси)хинолин-3-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона гидрохлорида (21,6 мг, 0,053 ммоль) в DCM (1 мл) добавляли диизопропилэтиламин (0,022 мл, 0,128 ммоль), добавляли HATU (20,1 мг, 0,053 ммоль) и полученное перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь промывали с помощью раствора NaHCO3 и органический слой отделяли и высушивали. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на диоксиде кремния (10% MeOH/DCM) с получением 2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)-N-(3-(3-((3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-ил)окси)пропокси)пропил)ацетамида (25 мг,

[0466] Синтез иллюстративного PROTAC 29

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(6-((1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)окси)гексил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Часть 1 схемы синтеза. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида

[0468] Стадия 1. Синтез 6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты

[0469] 6-Хлорникотиновую кислоту (1,6 г, 10,0 ммоль) растворяли в N,N-диметилацетамиде (15 мл) и к полученному добавляли трет-бутилпиперазин-1-карбоксилат (1,9 г, 10,0 ммоль) и этилдиизопропиламин (2,6 г, 20 ммоль) с последующим перемешиванием при 130°C в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и к полученному остатку добавляли 1 М водный раствор NaOH (10 мл) с последующим промыванием с помощью CHCl₃ (50 мл). Регулировали рН водного слоя до приблизительно 6-7 путем добавления 1 М хлористоводородной кислоты с последующей экстракцией с помощью CHCl₃ (50 мл × 3). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (CH₂Cl₂/МеОН=10/1) с получением 6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты (2,0 г, выход 65%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 83,17%, Rt=1,312 мин.; MS рассч.: 307,15; MS найденное: 308,2 [М+Н]⁺.

[0471] Химическая формула: C₁₅H₂₁N₃O₄, молекулярная масса: 307,34.

[0472] Стадия 2. Синтезтрет-бутил-4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0473] Смесь 6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты (614 мг, 2,0 ммоль), 4-((1r,3r)-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрилгидрохлорида (630 мг, 2,0 ммоль), гексафторфосфата 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (1,1 г, 3,0 ммоль) и этилдиизопропиламина (516 мг, 4,0 ммоль) в дихлорметане (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (50 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 1/1) с получением трет-бутил-4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (977 мг, выход 86%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 88,26%, Rt=2,161 мин.; MS рассч.: 567,26; MS найденное: 568,3 [М+Н]⁺.

[0475] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,12 (6Н, s), 1,22 (6Н, s), 1,43 (9Н, s), 3,42-3,44 (4Н, m), 3,60-3,63 (4Н, m), 4,02-4,07 (1H, m), 4,31 (1H, s), 6,88 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,00 (1H, dd, J=8,4, 2,4 Гц), 7,21 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,65 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,91 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,99 (1H, dd, J=8,8, 2,4 Гц), 8,64 (1 Н, d, J=2,4 Гц).

[0476] Химическая формула: C₃₀H₃₈ClN₅O₄, молекулярная масса: 568,11.

[0477] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 38.

[0478] Стадия 3. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорида

[0479] Смесь трет-бутил-4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-карбоксилата (405 мг, 0,7 ммоль) в HCl/1,4-диоксане (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Растворитель удаляли в вакууме с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорида (353 мг, выход 100%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,791 мин.; MS рассч.: 467,21; MS найденное: 468,3 [М+Н]⁺.

[0481] Химическая формула: C₂₅H₃₁Cl₂N₅O₂, молекулярная масса: 504,45.

Часть 2 схемы синтеза

Стадия 4. Синтез4,5-дихлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-она

[0484] Смесь 4,5-дихлорпиридазин-3(2Н)-она (5,0 г, 30,5 ммоль), 1-(хлорметил)-4-метоксибензола (7,1 г, 45,7 ммоль) и карбоната калия (12,6 г, 91,5 ммоль) в N',N'-диметилформамиде (100 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Объединенную органическую фазу концентрировали in vacuo и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 3/1) с получением 4,5-дихлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-она (6,3 г, выход 73%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6110, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,5 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] до 0% [вода + 0,05% TFA] и 100% [CH₃CN+0,05% TFA] за 1,5 мин., затем при данных условиях - в течение 0,5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,1 мин.). Rt=1,220 мин.; MS рассч.: 284,0; MS найденное: 285,1 [М+Н]⁺.

[0486] Химическая формула: C₁₂H₁₀Cl₂N₂O₂, молекулярная масса: 285,13.

Стадия 5. Синтез 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-она

[0488] К раствору 6-(бензилокси)гексан-1-ола (1,04 г, 50 ммоль) в сухом THF (100 мл) добавляли 60% NaH (240 мг, 60 ммоль) при 0°C, затем полученное перемешивали в течение 30 минут, добавляли 4,5-дихлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-он (1,42 г, 50 ммоль), полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь гасили с помощью водного NH₄Cl и затем экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали, концентрировали in vacuo и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 10/1) с получением 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-она (1,59 г, выход 70%) в виде бесцветного геля.

Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,40-1,47 (4Н, m), 1,59-1,65 (2Н, m), 1,69-1,75 (2Н, m),

[0490] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 29.

Стадия 6. Синтез 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлорпиридазин-3(2Н)-она

[0492] К раствору 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлор-2-(4-метоксибензил)пиридазин-3(2Н)-она(450 мг, 1 ммоль) в CH₃CN (30 мл) при 0°C добавляли раствор CAN (1,37 г, 2,5 ммоль) в H₂O (10 мл), и обеспечивали нагревание раствора до комнатной температуры, и перемешивали в течение ночи. На данной стадии смесь разделяли между этилацетатом (30 мл) и полунасыщенным солевым раствором (20 мл). Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали этилацетатом (30 мл), затем с помощью CH₂Cl₂ (30 мл). Объединенные органические фазы высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 10/1) с получением 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлорпиридазин-3(2Н)-она (250 мг, выход 74%) в виде желтого геля.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6110, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,5 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] до 0% [вода + 0,05% TFA] и 100% [CH₃CN+0,05% TFA] за 1,5 мин., затем при данных условиях - в течение 0,5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,1 мин.). Rt=1,346 мин.; MS рассч.: 336,1; MS найденное: 337,3 [М+Н]⁺.

Химическая формула: C₁₇H₂₁ClN₂O₃, молекулярная масса: 336,81.

Стадия 7. Синтез 3-(4-(6-(бензилокси)гексилокси)-5-хлор-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[0496] Смесь 5-(6-(бензилокси)гексилокси)-4-хлорпиридазин-3(2Н)-она (250 мг, 0,74 ммоль), 3-бромпиперидин-2,6-диона (143 мг, 0,74 ммоль) и карбоната калия (205 мг, 1,48 ммоль) в ацетонитриле (40 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 3/2) с получением 3-(4-(6-(бензилокси)гексилокси)-5-хлор-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пилеридин-2,6-диона (180 мг, выход 54%) в виде светло-желтого геля.

[0497] ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,40-1,49 (4Н, m), 1,61-1,66 (2Н, m), 1,72-1,78 (2Н, m), 2,20-2,24 (1H, m), 2,65-2,79 (2Н, m), 2,86-2,90 (1Н, m), 3,47 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,50 (2Н, s), 4,55-4,61 (2Н, m), 5,65 (1Н, dd, J=10,8, 5,6 Гц), 7,26-7,34 (5Н, m), 7,76 (1Н, s), 8,46 (1H, s).

[0498] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 26.

[0499] Стадия 8. Синтез 3-(4-(6-гидроксигексилокси)-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[0500] Смесь 3-(4-(6-(бензилокси)гексилокси)-5-хлор-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-днона (180 мг, 0,4 ммоль) и 10% палладия на активированном угле (100 мг) в МеОН (20 мл) перемешивали в атмосфере водорода при давлении 1 атм., при комнатной температуре в течение 2 ч. Полученное фильтровали с удалением твердого вещества, фильтрат концентрировали с получением 3-(4-(6-гидроксигексилокси)-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (118 мг, выход 90%) в виде светло-желтого твердого вещества.

[0501] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,34-1,45 (6Н, m), 1,71-1,77 (2Н, m), 2,04-2,08 (1Н, m), 2,46-2,60 (2Н, m), 2,84-2,90 (1Н, m), 3,39 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,02 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,72 (1Н, brs), 5,69 (1Н, dd, J=12,4, 5,2 Гц), 6,77 (1Н, d, J=5,2 Гц), 7,82 (1H, d, J=4,8 Гц), 11,03 (1H, s).

[0502] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 21.

[0503] Стадия 9. Синтез 6-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-илокси)гексаналя

[0504] К раствору 3-(4-(6-гидроксигексилокси)-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (64 мг, 0,2 ммоль) в CH₂Cl₂ (30 мл) добавляли реагент Десса-Мартина (127 мг, 0,6 ммоль) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После удаления нерастворившегося твердого вещества путем отсасывания фильтрат концентрировали при комнатной температуре с получением неочищенного 6-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-илокси)гексаналя (64 мг, выход 99%) в виде белого полутвердого вещества, которое непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6110, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,5 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] до 0% [вода + 0,05% TFA] и 100% [CH₃CN+0,05% TFA] за 1,5 мин., затем при данных условиях - в течение 0,5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,1 мин.). Rt=0,721 мин.; MS рассч.: 321,1; MS найденное: 322,3 [М+Н]⁺.

Химическая формула: C₁₅H₁₉N₃O₅, молекулярная масса: 321,33.

Стадия 10. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(6-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-илокси)гексил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0508] К раствору N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорида (100 мг, 0,2 ммоль) в МеОН (5 мл) добавляли раствор 6-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-илокси)гексаналя (64 мг, 0,2 ммоль) в CH₂Cl₂ (5 мл), затем добавляли NaBH₃CN (40 мг, 0,6 ммоль), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (20 мл × 2). Органический экстракт промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью препаративной TLC, а затем препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(6-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-илокси)гексил)пиперазин-1-ил)никотинамида (20 мг, выход 13%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 94,07%, Rt=2,741 мин.; MS рассч.: 772,4; MS найденное: 773,3 [М+Н]⁺.

HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 93,35%, Rt=9,681 мин.

Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,21 (6Н, s), 1,25 (6Н, s), 1,39-1,44 (2Н, m), 1,49-1,62 (4Н, m), 1,87-1,93 (2Н, m), 2,24-2,28 (1H, m), 2,36-2,43 (2Н, m), 2,56 (4Н, s), 2,70-2,81 (2Н, m), 2,87-2,92 (1H, m), 3,66-3,69 (4Н, m), 4,00-4,04 (3Н, m), 4,14 (1H, d,

Химическая формула: C₄₀H₄₉ClN₈O₆, молекулярная масса: 773,32.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 49.

[0514] Синтез иллюстративного PROTAC 30

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-8-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез 3-(8-гидрокси-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[0516] К перемешиваемой смеси 2-амино-3-гидроксибензойной кислоты (2,0 г, 13,1 ммоль) и имидазола (2,0 г, 29,4 ммоль) в ацетонитриле (30 мл) добавляли ацетилхлорид (2,0 мл, 28,7 ммоль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. К смеси добавляли 3-аминопиперидин-2,6-диона гидрохлорид (2,2 г, 13,1 ммоль), имидазол (2,0 г, 29,4 ммоль) и трифенилфосфит (4,11 мл, 15,7 ммоль) и нагревали до температуры возврата флегмы в течение 3 дней. К смеси добавляли воду (60 мл) и конц. HCl до рН=1. Растворитель удаляли in vacuo. К остатку добавляли воду (50 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (2×50 мл). В водный слой добавляли гидрокарбонат натрия (1,8 г) до рН=7-8 и смесь перемешивали при комнатной температуре с получением суспензии. Суспензию фильтровали и высушивали с получением 3-(8-гидрокси-2-метил-4-оксо-4Н-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (230 мг, выход 6%) в виде серого твердого вещества.

[0517] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 2,14-2,19 (1Н, m), 2,57-2,69 (5Н, m), 2,80-2,87 (1Н, m), 5,26 (1Н, dd, J=11,6, 5,6 Гц), 7,19 (1Н, dd, J=8,0, 1,6 Гц), 7,30 (1Н, t, J=8,0 Гц), 7,45 (1Н, dd, J=8,0, 1,6 Гц), 9,66 (1H, s), 11,03 (1Н, s).

[0518] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 13.

[0519] Стадия 2, Синтез 3-(8-(5-хлорпентилокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пилеридин-2,6-диона

[0520] К раствору 3-(8-гидрокси-2-метил-4-оксо-4Н-хиназолин-3-ил)-пиперидин-2,6-диона (91 мг, 0,32 ммоль) и 5-хлорпентил-4-метилбензолсульфоната (88 мг, 0,32 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли K₂CO₃ (88 мг, 0,64 ммоль) при комнатной температуре, затем полученное нагревали до 40°C и перемешивали в течение 2 дней. Смесь очищали с помощью HPLC с обращенной фазой с получением 3-(8-(5-хлорпентилокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (19 мг, выход 15%) в виде белого твердого вещества.

Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,65-1,73 (2Н, m), 1,87-2,02 (4Н, m), 2,13-2,17 (1H, m), 2,66-2,74 (4Н, m), 2,89-3,02 (2Н, m), 3,60 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,19 (2Н, t, J=6,4 Гц),

[0522] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 21.

Стадия 3. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-8-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0524] Смесь 3-(8-(5-хлорпентилокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (15 мг, 0,038 ммоль), DIEA (25 мг, 0,19 ммоль), KI (6 мг, 0,038 ммоль) и N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида (20 мг, 0,038 ммоль) в CH₃CN (10 мл) перемешивали при 100°C в течение ночи. Затем полученное выпаривали, к остатку добавляли DIEA (25 мг, 0,19 ммоль) и EtCN (10 мл) и раствор перемешивали при 100°C в течение ночи. На данной стадии смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Органический экстракт промывали солевым раствором (10 мл), высушивали (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали in vacuo. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-8-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (5,5 мг, выход 17%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 93,89%, Rt=1,987 мин.; MS рассч.: 822,4; MS найденное: 823,4 [М+Н]⁺.

HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 93,92%, Rt=9,851 мин.

Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,21 (6Н, s), 1,25 (6Н, s), 1,59-1,62 (4Н, m), 1,90-2,00 (2Н, m), 2,14-2,17 (1H, m), 2,70-2,79 (5Н, m), 2,86-2,96 (6Н, m), 3,15 (1H, dd, J=14,8, 7,2 Гц), 3,88 (4Н, s), 4,05 (1H, s), 4,13-4,20 (3Н, m), 4,82 (1H, dd, J=11,2, 5,6 Гц), 6,14 (1H, Гц), 7,20 (1H, d, J=8,0 Гц), 7,38 (1H, t, J=8,0 Гц), 7,57 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,74 (1H, d, J=8,0 Гц), 7,94 (1H, dd, J=8,8, 2,0 Гц), 8,30 (1H, brs), 8,57 (1H, d, J=2,0 Гц).

Химическая формула: C₄₄H₅₁ClN₈O₆, молекулярная масса: 823,38.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 51.

[0530] Синтез иллюстративного PROTAC 33

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез 6-((5-гидроксипентил)окси)бензо[d]изотиазол-3(2Н)-он-1,1-диоксида

К раствору пентан-1,5-диола (1,73 г, 16,7 ммоль) в N,N-диметилформамиде (15,0 мл) добавляли гидрид натрия (266 мг, 6,66 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляли 6-нитробензо[d]изотиазол-3(2Н)-он-1,1-диоксид (760 мг, 3,33 ммоль) и перемешивали при 70°C в течение 12 часов. После охлаждения до комнатной температуры растворитель удаляли in vacuo. Остаток экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3) и водой (30 мл). Органический слой промывали солевым раствором (5 мл). Объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток промывали метанолом (3 мл) с получением 6-((5-гидроксипентил)окси)бензо[d]изотиазол-3(2Н)-он-1,1-диоксида (560 мг, 59%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0534] Agilent LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 78,69%, Rt=1,159 мин.; MS рассч.: 285,1; MS найденное: 284,2 [М-Н]⁺.

[0535] Стадия 2. Синтез 5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентилметансульфоната

[0536] К раствору 6-((5-гидроксипентил)окси)бензо[d]изотиазол-3(2Н)-она (120 мг, 0,421 ммоль) в тетрагидрофуране (10,0 мл) добавляли триэтиламин (85,1 мг, 0,841 ммоль) и метансульфонилхлорид (38,5 мг, 0,336 ммоль) в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 0,5 часа. Растворитель концентрировали in vacuo. Остаток экстрагировали дихлорметаном (10 мл × 3) и водой (20 мл). Органическую фазу высушивали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного 5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентилметансульфоната в виде желтого масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0537] Agilent LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (30 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 77,93%, Rt=0,613 мин.; MS рассч.: 363,0; MS найденное: 362,0 [М-Н]⁺.

[0538] Стадия 3. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0539] К раствору 5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентилметансульфоната (0,421 ммоль) в ацетонитриле (5 мл) добавляли карбонат калия (291 мг, 2,11 ммоль) и N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорид (212 мг, 0,421 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 90°С в течение 16 часов. Растворитель концентрировали in vacuo. Остаток экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3) и водой (20 мл). Органическую фазу высушивали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (34 мг, 11% за две стадии) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0540] Agilent LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (30 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 97,67%, Rt=1,037 мин.; MS рассч.: 734,3; MS найденное: 735,0 [М+Н]⁺.

[0541] Стадия 4. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0542] К раствору N-(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (30 мг, 0,0408 ммоль) в 1,4-диоксане/N,N-диметилформамиде (5 мл/0,5 мл) добавляли 3-бромпиперидин-2,6-дион (11,8 мг, 0,0612 ммоль) и трет-бутоксид калия (9,16 мг, 0,0816 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры добавляли ледяную воду (2,0 мл) и регулировали до рН=2~3 с помощью хлористоводородной кислоты (1 н.), затем экстрагировали этилацетатом (20,0 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (5,0 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC и препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 10:1) с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1-диоксидо-3-оксо-2,3-дигидробензо[d]изотиазол-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (6,8 мг, 20%) в виде белого твердого вещества.

[0543] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 99,03%, Rt=3,087 мин.; MS рассч.: 845,3; MS найденное: 846,3 [М+Н]⁺.

[0544] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 96,34%, Rt=10,536 мин.

Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,19 (6Н, s), 1,22 (6Н, s), 1,46-1,55 (4Н, m), 1,79-1,80 (2Н, m), 2,34-2,40 (3Н, m), 2,45 (4Н, s), 2,54-2,92 (3Н, m), 3,59 (4Н, s), 4,06 (1H, d, J=9,2 Гц), 4,20-4,25 (2Н, m), 4,30 (1H, s), 5,23-5,28 (0,5Н, m), 5,98 (0,5Н, t, J=9,2 Гц),

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 48.

[0548] Синтез иллюстративного PROTAC 39

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)этил)пиперазин-1-ил)никотинамид

[0549] Схема синтеза:

[0550] Стадия 1. Синтез N-(2,4-дифторфенил)-3-метокси-2-метилбензамида

[0551] Смесь 3-метокси-2-метилбензойной кислоты (5 г, 30 ммоль), оксалилхлорида (5,6 г, 150 ммоль) и N,N-диметилформамида (0,1 мл) в дихлорметане (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. С помощью TLC показывали завершение реакции. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением 3-метокси-2-метилбензоилхлорида (неочищенный) в виде желтого масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Смесь 3-метокси-2-метилбензоилхлорида (неочищенный), 2,4-дифторанилина (3,8 г, 30 ммоль) и триэтиламина (12 г, 120 ммоль) в дихлорметане (20 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (20 мл) и промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с получением N-(2,4-дифторфенил)-3-метокси-2-метилбензамида (5,8 г, выход 69%) в виде желтого масла.

[0552] Стадия 2. Синтез 2-(бромметил)-N-(2,4-дифторфенил)-3-метоксибензамида

[0553] Смесь N-(2,4-дифторфенил)-3-метокси-2-метилбензамида (5,8 г, 20,9 ммоль), N-бромсукцинимида (3,9 г, 31,4 ммоль) и AIBN (2,2'-азобис(2-метилпропионитрил)) (342 мг, 2,09 ммоль) в тетрахлорметане (30 мл) перемешивали при 70°C в течение ночи. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении, оставшееся очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 10-20% этилацетата в гексане) с получением 2-(бромметил)-N-(2,4-дифторфенил)-3-метоксибензамида (5,9 г, выход 80%) в виде белого твердого вещества.

[0554] LC-MS: (ES⁺): масса/заряд 356,0, 357,9 [М+Н]⁺. t_R=2,907 мин.

[0555] Стадия 3. Синтез 2-(2,4-дифторфенил)-4-метоксиизоиндолин-1-она

[0556] К раствору 2-(бромметил)-N-(2,4-дифторфенил)-3-метоксибензамида (2,0 г, 5,6 ммоль) в безводном тетрагидрофуране (20 мл) добавляли трет-бутанолат калия (1 М в тетрагидрофуране, 8,4 мл, 8,4 ммоль) при 0°C и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 часов. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разделяли между водой (50 мл) и этилацетатом (50 мл). Органический слой собирали, промывали солевым раствором (20 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 20% этилацетата в гексане) с получением 2-(2,4-дифторфенил)-4-метоксиизоиндолин-1-она (500 мг, выход 33%) в виде желтого твердого вещества.

[0557] Стадия 4. Синтез 2-(2,4-дифторфенил)-4-гидроксиизоиндолин-1-она

[0558] Смесь 2-(2,4-дифторфенил)-4-метоксиизоиндолин-1-она (200 мг, 0,727 ммоль) в растворе бромоводорода в уксусной кислоте (33%, 3 мл) перемешивали при 100°C в течение 2 дней. С помощью TLC показывали завершение реакции. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 30-50% этилацетата в гексане) с получением 2-(2,4-дифторфенил)-4-гидроксиизоиндолин-1-она (180 мг, выход 95%) в виде желтого масла.

[0559] LC-MS: (ES+): масса/заряд 262,1 [М+Н]⁺. t_R=2,64 мин.

[0560] Стадия 5. Синтез 4-(аллилокси)-2-(2,4-дифторфенил)изоиндолин-1-она

[0561] К перемешиваемому раствору 2-(2,4-дифторфенил)-4-гидроксиизоиндолин-1-она (180 мг, 0,68 ммоль), трифенилфосфина (539 мг, 2,06 ммоль) и проп-2-ен-1-ола (119 мг, 2,06 ммоль) в тетрагидрофуране (5 мл) добавляли диизопропилазодикарбоксилат (416 мг, 2,06 ммоль) в тетрагидрофуране (2 мл) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 минут. С помощью TLC показывали завершение реакции. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 10-20% этилацетата в гексане) с получением 4-(аллилокси)-2-(2,4-дифторфенил)изоиндолин-1-она (180 мг, выход 87%) в виде бесцветного масла.

[0562] LC-MS: (ES+): масса/заряд 302,2 [М+Н]⁺. t_R=2,86 мин.

[0563] Стадия 6. Синтез 2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)ацетальдегида

[0564] Обогащенный озоном поток кислорода барботировали через раствор 4-(аллилокси)-2-(2,4-дифторфенил)изоиндолин-1-она (180 мг, 0,59 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при -78°C до тех пор, пока реакционная смесь не становилась темно-синей. Раствор продували кислородом при -78°C в течение 20 мин. для удаления избытка озона. Затем к реакционной смеси добавляли диметилсульфид (1,5 мл, 20,4 ммоль) при -78°C, обеспечивали нагревание смеси до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением 2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)ацетальдегида (180 мг, 100%), который применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0565] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 4,68-4,69 (m, 2Н), 4,77-4,79 (m, 2Н), 6,86-6,93 (m, 4Н), 7,33-7,55 (m, 2Н), 9,80 (s, 1Н).

[0566] Химическая формула: C₁₆H₁₁F₂NO₃; молекулярная масса: 303,26.

[0567] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 11.

[0568] Стадия 7. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)этил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0569] К перемешиваемому раствору 2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)ацетальдегида (160 мг, 0,53 ммоль), N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида (300 мг, 0,6 ммоль, промежуточное соединение в синтезе иллюстративного PROTAC 29) и уксусной кислоты (2 капли) в метаноле (3 мл) добавляли цианоборгидрид натрия (150 мг, 2,4 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разделяли между этилацетатом (40 мл) и водой (20 мл). Органический слой собирали, промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью препаративной TLC (элюировали с помощью 10% метанола в дихлорметане) с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(2-((2-(2,4-дифторфенил)-1-оксоизоиндолин-4-ил)окси)этил)пиперазин-1-ил)никотинамида (50 мг, выход 12%, 3 стадии) в виде светло-желтого твердого вещества.

[0570] ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD): δ 1,23 (s, 6Н), 1,29 (s, 6Н), 2,67-2,82 (m, 4Н), 2,92-3,01 (m, 2Н), 3,72 (s, 4Н), 4,15 (s, 1H), 4,29-4,39 (m, 3Н), 4,88 (s, 2Н), 6,85-6,87 (m, 2Н), 7,10-7,34 (m, 4Н), 7,47-7,75 (m, 4Н), 7,96-7,98 (m, 1H), 8,61 (s, 1Н).

[0571] Химическая формула: C₄₁H₄₁ClF₂N₆O₄; молекулярная масса: 755,25.

[0572] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 40.

[0573] LC-MS: (ES+): масса/заряд 755,6 [М+Н]⁺. t_R=2,534 мин.

[0574] Синтез иллюстративного PROTAC 41

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

[0575] Схема синтеза:

[0576] Стадия 1. Синтез 2-(2,4-дифторфенил)-5-гидроксиизоиндолин-1,3-диона

[0577] К раствору 4-гидроксифталевой кислоты (2 г, 10,98 ммоль) в ацетонитриле (50 мл) порциями добавляли 1,1'-карбонилдиимидазол (3,9 г, 24,16 ммоль) при комнатной температуре. После перемешивания в течение 30 мин. добавляли 2,4-дифторанилин (1,6 г, 12,08 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 70°C в течение 3 часов. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разделяли между этилацетатом (50 мл) и водой (50 мл), органический слой промывали солевым раствором (50 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 25-35% этилацетата в гексане) с получением 2-(2,4-дифторфенил)-5-гидроксиизоиндолин-1,3-диона (2,1 г, выход 70%) в виде желтого твердого вещества.

LC-MS: (ES⁺): масса/заряд 276,1 [М+Н]⁺. t_R=2,462 мин.

[0579] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 7,21-7,31 (m, 3Н), 7,51-7,56 (m, 1H), 7,60-7,66 (m, 1H), 7,83 (d, J=8,4 Гц, 1H), 11,17 (br, 1Н).

[0580] Химическая формула: C₁₄H₇F₂NO₃; молекулярная масса: 275,21.

[0581] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 7.

[0582] Стадия 2. Синтез 2-(2,4-дифторфенил)-5-((5-гидроксипентил)окси)изоиндолин-1,3-диона

[0583] Смесь 2-(2,4-дифторфенил)-5-гидроксиизоиндолин-1,3-диона (300 мг, 1,09 ммоль), 5-гидроксипентил-4-метилбензолсульфоната (282 мг, 1,09 ммоль) и карбоната калия (301 мг, 2,18 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл) перемешивали при 50°C в течение ночи. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разделяли между этилацетатом (30 мл) и водой (30 мл), органический слой промывали солевым раствором (30 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 40-50% этилацетата в гексане) с получением 2-(2,4-дифторфенил)-5-((5-гидроксипентил)окси)изоиндолин-1,3-диона (217 мг, выход 55%) в виде белого твердого вещества.

[0584] LC-MS: (ES+): масса/заряд 362,1 [М+Н]⁺. t_R=2,658 мин.

[0585] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 1,57-1,69 (m, 4Н), 1,88-1,91 (m, 2Н), 3,70 (t, J=6,2 Гц, 2Н), 4,12 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 6,99-7,05 (m, 2Н), 7,22-7,24 (m, 1H), 7,31-7,36 (m, 1H), 7,40-7,41 (m, 1H), 7,85 (d, J=8,4 Гц, 1Н).

[0586] Химическая формула: C₁₉H₁₇F₂NO₄; молекулярная масса: 361,34.

[0587] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 16.

[0588] Стадия 3. Синтез 5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил-4-метилбензолсульфоната

[0589] К раствору 2-(2,4-дифторфенил)-5-((5-гидроксипентил)окси)изоиндолин-1,3-диона (217 мг, 0,60 ммоль), триэтиламина (122 мг, 1,20 ммоль) и N,N-диметилпиридин-4-амина (7,3 мг, 0,06 ммоль) в дихлорметане (20 мл) добавляли 4-толуолсульфонилхлорид (171 мг, 0,90 ммоль) при 0°C, обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном (30 мл), промывали водой (50 мл), затем солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 30-50% этилацетата в гексане) с получением 5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил-4-метилбензолсульфоната (208 мг, выход 67%) в виде белого твердого вещества.

[0590] LC-MS: (ES⁺): масса/заряд 516,2 [М+Н]⁺. t_R=3,183 мин.

[0591] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆): δ 1,53-1,58 (m, 2Н), 1,74-1,85 (m, 4Н), 2,45 (s, 3Н), 4,05-4,09 (m, 4Н), 7,00-7,04 (m, 2Н), 7,20-7,22 (m, 1H), 7,31-7,38 (m, 4Н), 7,79-7,86 (m, 3Н).

[0592] Химическая формула: C₂₆H₂₃F₂NO₆S; молекулярная масса: 515,53.

[0593] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 23.

[0594] Стадия 4. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0595] К перемешиваемому раствору 5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил-4-метилбензолсульфоната (110 мг, 0,21 ммоль), N-этил-N-изопропилпропан-2-амина (55 мг, 0,43 ммоль) и йодида калия (3 мг, 0,02 ммоль) в N,N-диметилформамиде (2 мл) добавляли N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамид (100 мг, 0,21 ммоль, промежуточное соединение в синтезе иллюстративного PROTAC 29) и смесь перемешивали при 50°C в течение ночи в атмосфере азота. С помощью TLC показывали завершение реакции. Реакционную смесь разделяли между этилацетатом (50 мл) и водой (30 мл), органический слой собирали и промывали солевым раствором (20 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка, который очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюировали с помощью 2-5% метанола в дихлорметане) с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(2,4-дифторфенил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (98,4 мг, выход 57%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS: (ES⁺): масса/заряд 811,3 [М+Н]⁺. t_R=2,630 мин.

[0597] ¹Н ЯМР (400 МГц, CD₃OD): δ 1,12 (s, 6H), 1,22 (s, 6H), 1,48-1,61 (m, 4H), 1,80-1,83 (m, 2H), 2,35-2,44 (m, 6H), 3,59 (br, 4H), 4,06 (d, J=9,2 Гц, 1H), 4,22 (t, J=6,4 Гц, 2H), 4,31 (s, 1H), 6,88-6,90 (m, 1H), 6,99-7,02 (m, 1H), 7,20-7,21 (m, 1H), 7,28-7,32 (m, 1H), 7,40-7,42 (m, 1H), 7,52-7,55 (m, 2H), 7,63-7,65 (m, 2H), 7,89-7,93 (m, 2H), 7,97-7,99 (m, 1H), 8,64 (br, 1H).

[0598] Химическая формула: C₄₄H₄₅ClF₂N₆O₅; молекулярная масса: 811,32.

[0599] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 45.

[0600] Синтез иллюстративного PROTAC 42

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((2-(6-циано-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез 5-(5-гидрокси-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила

[0603] Смесь 5-амино-6-метоксипиколинонитрила (600 мг, 4,02 ммоль) и 5-гидроксиизобензофуран-1,3-диона (660 мг, 4,02 ммоль) в ледяной уксусной кислоте (4 мл) перемешивали при 100°C в течение ночи и затем охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду (40 мл). Смесь нейтрализовали насыщенным раствором бикарбоната натрия до рН>7. Смесь экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (10 мл × 3), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток промывали простым эфиром с получением 5-(5-гидрокси-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила (650 мг, 55%) в виде желтого твердого вещества.

[0604] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (30 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄CO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 69,2%, Rt=0,852 мин.; MS рассч.: 295,1; MS найденное: 296,0 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез 5-(5-(5-хлорпентилокси)-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила

[0606] Смесь 5-(5-гидрокси-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила (200 мг, 0,68 ммоль), карбоната калия (188 мг, 1,36 ммоль) и 5-хлорпентил-4-метилбензолсульфоната (187 мг, 0,68 ммоль) в диметилсульфоксиде (5 мл) перемешивали при 40°C в течение 2 часов. Обеспечивали охлаждение полученной смеси до комнатной температуры. Добавляли воду (20 мл) и этилацетат (20 мл). Органический слой отделяли, промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью препаративной TLC (этилацетат/петролейный эфир = 1:1) с получением 5-(5-(5-хлорпентилокси)-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила (100 мг, 37%) в виде желтого твердого вещества

Стадия 3. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(2-(6-циано-2-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0608] Смесь метил-5-(5-(5-хлорпентилокси)-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-метоксипиколинонитрила (100 мг, 025 ммоль), этилдиизопропиламина (96,8 мг, 0,75 ммоль), йодида калия (41,5 мг, 0,25 ммоль) и N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида (117 мг, 0,25 ммоль) в диметилсульфоксиде (3 мл) перемешивали при 70°C в течение ночи. Обеспечивали охлаждение полученной смеси до комнатной температуры. Добавляли воду (20 мл) и этилацетат (20 мл). Органический слой отделяли, промывали солевым раствором (50 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью препаративной TLC (этилацетат) с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(2-(6-циано-2-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (53 мг, 34%) в виде желтого твердого вещества.

Стадия 4. Синтез 5-(5-(5-(4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пентилокси)-

[0610] Смесь N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(2-(6-циано-2-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (70 мг, 0,084 ммоль) в бромоводороде/ледяной уксусной кислоте (48% вес/вес, 0,5 мл) перемешивали при 45°C в течение 5 часов. Обеспечивали охлаждение полученной смеси до комнатной температуры. Добавляли воду (20 мл). Смесь нейтрализовали насыщенным раствором бикарбоната натрия до рН>7 и экстрагировали этилацетатом (10 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 5-(5-(5-(4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пентилокси)-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-гидроксипиколинамида (50 мг, 71%) в виде белого твердого вещества.

Стадия 5. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(2-(6-циано-2-гидроксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

К раствору 5-(5-(5-(4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пентилокси)-1,3-диоксоизоиндолин-2-ил)-6-гидроксипиколинамида (45 мг, 0,053 ммоль) и триэтиламина (21,2 мг, 0,21 ммоль) в дихлорметане (4 мл) добавляли ангидрид трифторуксусной кислоты (44,1 мг, 0,21 ммоль). Смесь перемешивали в течение 2 часов. Смесь выливали в ледяную воду (40 мл). Добавляли дихлорметан (40 мл). Органический слой отделяли, промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток растворяли в тетрагидрофуране (5 мл) и воде (5 мл) и перемешивали в течение ночи. Добавляли этилацетат (10 мл). Органический слой отделяли, промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного продукта, который очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(2-(6-циано-2-гидроксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (6,8 мг, 16%) в виде белого твердого вещества

[0613] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6110, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] до 0% [вода + 0,05% TFA] и 100% [CH₃CN+0,05% TFA] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 0,05% TFA] и 5% [CH₃CN+0,05% TFA] за 0,05 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 99,5%, Rt=1,842 мин.; MS рассч.: 816,3; MS найденное: нет полученного значения массы.

[0614] HPLC (Agilent HPLC 1200; колонка: L-column2 ODS (150 мм*4,6 мм*5,0 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 0,1% TFA] и 5% [CH₃CN+0,1% TFA] до 0% [вода + 0,1% TFA] и 100% [CH₃CN+0,1% TFA] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 0,1% TFA] и 5% [CH₃CN+0,1% TFA] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 91,3%, Rt=8,215 мин.

Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) δ 1,12 (6Н, s), 1,22 (6Н, s), 1,42-1,60 (4Н, m), 1,77-1,82 (2Н, m), 2,36-2,44 (2Н, m), 3,30-3,35 (4Н, m), 3,58-3,66 (4Н, m), 4,06 (1H, d, J=9,2 Гц), 4,21 (1H, t, J=6,2 Гц), 4,30 (1H, s), 6,88 (1H, d, J=8,8 Гц), 6,99-7,02 (1H, m), 7,21

Химическая формула: C₄₄H₄₅ClN₈O₆; молекулярная масса: 817,33.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 45

[0618] Синтез иллюстративного PROTAC 43

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(1,3-диоксо-2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)изоиндолин-5-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамид

[0619] Схема синтеза

[0620] Стадия 1. Синтез 4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензойной кислоты

[0621] К раствору этил-4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензоата (52 г, 197,47 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (250 мл), метаноле (250 мл) и воде (250 мл) добавляли гидроксид натрия (31,6 г, 0,79 ммоль, 4 экв.). Смесь перемешивали при 30°C в течение 12 часов. С помощью тонкослойной хроматографии (петролейный эфир : этилацетат = 1:1) показывали завершение реакции. Смесь регулировали до рН 3~4 с помощью хлористоводородной кислоты (2 М) и фильтровали. Осадок на фильтре высушивали в вакууме. Остаток растирали с этилацетатом (500 мл) с получением 4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензойной кислоты (35 г, 148,76 ммоль, выход 75%) в виде белого твердого вещества.

[0622] ¹H ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 12,19 (s, 1H), 7,74 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,93 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,48 (br t, J=5,2 Гц, 1H), 3,90 (d, J=12,8 Гц, 2Н), 3,27 (br t, J=5,2 Гц, 2Н), 2,86-2,72 (m, 2H), 1,72 (d, J=12,8 Гц, 2H), 1,66-1,51 (m, 1H), 1,17 (dq, J=4,0, 12,0 Гц, 2H).

[0623] Химическая формула: C₁₃H₁₇NO₃, молекулярная масса: 235,28.

[0624] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 17.

[0625] Стадия 2. Синтез N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензамида

[0626] К раствору 4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензойной кислоты (38 г, 161,51 ммоль, 1 экв.) и 4-(3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрила (50,9 г, 161,51 ммоль, 1 экв., гидрохлорид) в диметилформамиде (800 мл) добавляли диизопропилэтиламин (83,5 г, 646,04 ммоль, 112 мл, 4 экв.). Смесь перемешивали при 30°C в течение 10 мин. и затем добавляли о-(7-азабензотриазол-1-ил)-n,n,n',n'-тетраметилурония гексафторфосфат (64,48 г, 169,59 ммоль, 1,05 экв.). Смесь перемешивали при 30°C в течение 1 часа. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Смесь выливали в воду (4 л) и фильтровали. Осадок на фильтре концентрировали и растирали с метанолом (500 мл × 2) с получением N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензамида (72 г, 137,89 ммоль, выход 85%, чистота 95%) в виде белого твердого вещества.

[0627] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 496,1 [М+1]⁺.

[0628] ¹H ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 7,90 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,73 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,48 (d, J=9,2 Гц, 1H), 7,20 (d, J=2,4 Гц, 1H), 7,00 (dd, J=2,4, 8,8 Гц, 1H), 6,95 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,48 (t, J=5,2 Гц, 1H), 4,31 (s, 1H), 4,05 (d, J=9,2 Гц, 1H), 3,86 (d, J=12,8 Гц, 2Н), 3,27 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,80-2,70 (m, 2Н), 1,73 (d, J=11,2 Гц, 2Н), 1,63-1,52 (m, 1H), 1,27-1,15 (m, 8Н), 1,12 (s, 6Н).

[0629] Химическая формула: C₂₈H₃₄ClN₃O₃, молекулярная масса: 496,04.

[0630] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 34.

[0631] Стадия 3. Синтез N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-(4-формил-1-пиперидил)бензамида

[0632] К раствору N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-[4-(гидроксиметил)-1-пиперидил]бензамида (65 г, 131,04 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (700 мл) добавляли реагент Десса-Мартина (76,70 г, 180,83 ммоль, 1,38 экв.). Смесь перемешивали при 30°C в течение 2 часов. Тонкослойная хроматография (дихлорметан : метанол = 1:1) демонстрировала, что реакция была завершена. Реакционную смесь регулировали до рН 8~9 с помощью насыщенного раствора бикарбоната натрия. Смесь разбавляли водой (3 л) и экстрагировали дихлорметаном (1,5 л × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (1,5 л × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан : метанол = от 100:0 до 50:1) с получением N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-(4-формил-1-пиперидил)бензамида (34,6 г, 67,94 ммоль, выход 51%, чистота 97%) в виде белого твердого вещества.

[0633] ¹H ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 9,63 (s, 1H), 7,90 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,74 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,49 (d, J=9,2 Гц, 1H), 7,20 (d, J=2,4 Гц, 1H), 7,03-6,94 (m, 3Н), 4,32 (s, 1H), 4,05 (d, J=9,2 Гц, 1H), 3,76 (td, J=3,6, 12,8 Гц, 2Н), 3,01-2,92 (m, 2Н), 2,62-2,55 (m, 1H), 2,62-2,55 (m, 1H), 1,92 (dd, J=3,6, 12,8 Гц, 2Н), 1,62-1,48 (m, 2Н), 1,21 (s, 6Н), 1,12 (s, 6Н)

[0634] Химическая формула: C₂₈H₃₂ClN₃O₃, молекулярная масса: 494,02.

[0635] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 32.

[0636] Стадия 4. Синтез 5-фтор-2-(6-метоксипиридин-3-ил)изоиндолин-1,3-диона

Смесь 5-фтор-1,3-дигидро-2-бензофуран-1,3-диона (100,0 мг, 602 мкмоль), 6-метоксипиридин-3-амина (82,1 мг, 662 мкмоль), ацетата натрия (59,2 мг, 722 мкмоль) и уксусной кислоты (499 мкл, 8,74 ммоль) нагревали при 118°C с перемешиванием в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью LCMS (CF-820-1), которая демонстрировала основной пик со значением массы, соответствующим необходимому продукту. Реакционную смесь охлаждали до 90°C и гасили водой (2 мл). Обеспечивали охлаждение смеси до комнатной температуры. Полученный осадок фильтровали и промывали водой. Материал высушивали с получением необходимого продукта в виде светло-пурпурного твердого вещества, 5-фтор-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-1,3-диона (149,1 мг, 547 мкмоль, выход 91,4%).

[0638] ¹Н ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ 8,26 (dd, J=0,49,2,64 Гц, 1H), 7,98 (dd, J=4,50, 8,22 Гц, 1H), 7,65 (d, J=2,54 Гц, 1H), 7,62-7,64 (m, 1H), 7,48 (dt, J=2,35, 8,51 Гц, 1H), 6,89 (dd, J=0,78, 8,80 Гц, 1H), 4,00 (s, 3Н).

[0639] LCMS m/е+=273,16 [М+Н]⁺.

[0640] Стадия 5. Синтез трет-бутил-4-(2-(6-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксоизоиндолин-5-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0641] В раствор трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (34,0 мг, 183 мкмоль) и 5-фтор-2-(6-метоксипиридин-3-ил)-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-1,3-диона (50,0 мг, 183 мкмоль) в метилпирролидоне (1,0 мл) загружали N,N-диизопропилэтиламин (95,5 мкл, 549 мкмоль). Реакционную смесь нагревали при 120°C в течение 2 часов. Реакцию контролировали с помощью LCMS, которая демонстрировала основной пик со значением массы, соответствующим необходимому продукту, и небольшой пик со значением массы, соответствующим исходному веществу. Обеспечивали перемешивание реакционной смеси при 120°C в течение дополнительных 16 часов. LCMS демонстрировала основной пик со значением массы, соответствующим необходимому продукту. Реакционную смесь гасили водой (2 мл) и экстрагировали с помощью EtOAc (2 мл). Органический слой промывали солевым раствором (1 мл), высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле с помощью системы Teledyne Combiflash ISCO с элюированием с помощью DCM/MeOH (градиент от 100:0 до 95:5). Фракцию, содержащую продукт, концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого продукта в виде белого твердого вещества, трет-бутил-4-[2-(6-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1H-изоиндол-5-ил]пиперазин-1-карбоксилата (39,6 мг, 90,3 мкмоль, выход 49,3%).

[0642] LCMS m/е+=439,33 [М+Н]⁺.

[0643] ¹Н ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ 8,25 (d, J=2,15 Гц, 1H), 7,79 (d, J=8,61 Гц, 1H), 7,64 (dd, J=2,74, 8,80 Гц, 1H), 7,35 (d, J=2,35 Гц, 1H), 7,11 (dd, J=2,45, 8,51 Гц, 1H), 6,87 (dd, J=0,59, 8,80 Гц, 1H), 3,98 (s, 3Н), 3,60-3,66 (m, 4Н), 3,42-3,48 (m, 4Н), 1,50 (s, 9Н).

[0644] Стадия 6. Синтез 2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)изоиндолин-1,3-диона

[0645] Раствор трет-бутил-4-[2-(6-метоксипиридин-3-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил]пиперазин-1-карбоксилата (39,6 мг, 90,3 мкмоль) в 4,0 М хлористоводородной кислоте в 1,4-диоксане (1,0 мл, 4,00 ммоль) перемешивали при 100°C в течение 16 часов. Реакционную смесь

[0646] концентрировали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, 2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-2,3-дигидро-1H-изоиндол-1,3-диона гидрохлорида (32,5 мг, 90,0 мкмоль, выход 100%). Материал применяли в следующей реакции без какой-либо дополнительной очистки.

[0647] LCMS m/e+=425,22 [М+Н]⁺.

[0648] Стадия 7. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(1,3-диоксо-2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)изоиндолин-5-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамида

[0649] В раствор 4-(4-формилпиперидин-1-ил)-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида (44,4 мг, 90,0 мкмоль) и 2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)-5-(пиперазин-1-ил)-2,3-дигидро-1H-изоиндол-1,3-диона гидрохлорида (32,5 мг, 90,0 мкмоль) в этилендихлориде (1,0 мл) загружали триэтиламин (37,4 мкл, 269 мкмоль) и триацетоксиборгидрид натрия (57,0 мг, 269 мкмоль). Обеспечивали перемешивание реакционной смеси при комнатной температуре в течение 5 часов. Реакционную смесь контролировали с помощью LCMS, которая демонстрировала пик со значением массы, соответствующим необходимому продукту, и пики со значениями массы, соответствующими исходным веществам. Обеспечивали перемешивание реакционной смеси при комнатной температуре в течение дополнительных 16 часов. LMCS демонстрировала основной пик со значением массы, соответствующим необходимому продукту. Реакционную смесь гасили с помощью водн. NaHCO3 (1 мл) и экстрагировали с помощью DCM (1 мл). Органический слой высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали с помощью хроматографии на силикагеле с помощью системы Teledyne Combiflash ISCO с элюированием с помощью DCM/MeOH (градиент от 100:0 до 90:10). Фракции, содержащие продукт, объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением необходимого продукта, N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(1,3-диоксо-2-(6-оксо-1,6-дигидропиридин-3-ил)изоиндолин-5-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамида, в виде желтого твердого вещества.-мг, (30 мг, 37,3 мкмоль, выход 41,5%).

[0650] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6): δ 7,91 (d, J=8,80 Гц, 1H), 7,72 (t, J=8,41 Гц, 3Н), 7,56 (d, J=2,54 Гц, 1H), 7,44-7,53 (m, 2Н), 7,38 (d, J=1,96 Гц, 1H), 7,28 (dd, J=2,05, 8,71 Гц, 1H), 7,21 (d, J=2,35 Гц, 1H), 7,00 (dd, J=2,35, 8,80 Гц, 1H), 6,96 (d, J=9,00 Гц, 2Н), 6,41 (d, J=9,78 Гц, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,05 (d, J=9,00 Гц, 1H), 3,86 (d, J=12,52 Гц, 2Н), 3,45 (br. s., 4Н), 2,79 (t, J=11,74 Гц, 2H), 2,21 (d, J=6,46 Гц, 2H), 1,81 (d, J=11,15 Гц, 3Н), 1,21 (s, 6Н), 1,12 (s, 6Н).

[0651] LCMS m/e+=802,57 [M+H]+.

[0652] Синтез иллюстративного PROTAC 46

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(2-(2-((2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил)метокси)этокси)этил)пиперазин-1-ил)никотинамид

[0653] Схема синтеза:

Стадия 1. Синтез N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-йодбензамида

[0655] В круглодонную колбу объемом 100 мл помещали 2-йодбензойную кислоту (5,0 г, 20,16 ммоль, 1,00 экв.), N,N-диметилформамид (40 мл), HATU (7,66 г, 20,15 ммоль, 1,00 экв.), DIEA (7,80 г, 60,35 ммоль, 3,00 экв.), затем перемешивали в течение 10 минут, добавляли 3-аминопиперидин-2,6-дион (3,30 г, 25,76 ммоль, 1,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили путем добавления 500 мл воды/льда. Твердые вещества собирали посредством фильтрации. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Это обеспечивало получение 6,48 г (90%) N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-йодбензамида в виде грязно-белого твердого вещества.

[0656] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 358,85 [МН⁺], t_R=0,56 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 2. Синтез ([2-[2-(проп-2-ин-1-илокси)этокси]этокси]метил)бензола

[0658] В 3-горлую круглодонную колбу объемом 250 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали 2-[2-(бензилокси)этокси]этан-1-ол (10,0 г, 50,96 ммоль, 1,00 экв.), N,N-диметилформамид (100 мл). За этим следовало добавление гидрида натрия (2,4 г, 100,00 ммоль, 1,20 экв.) несколькими порциями при 0°C, затем перемешивание в течение 30 минут. К полученному добавляли по каплям раствор 3-бромпроп-1-ина (7,285 г, 61,24 ммоль, 1,20 экв.) в N,N-диметилформамиде (30 мл) с перемешиванием при 0°C. Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили путем добавления 300 мл воды/льда. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (300 мл) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали солевым раствором (300 мл). Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (1/4). Это обеспечивало получение 9,5 г (80%) ([2-[2-(проп-2-ин-1-илокси)этокси]этокси]метил)бензола в виде светло-желтого масла.

[0659] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 234,95 [МН⁺], t_R=1,15 мин. (прогон 2,00 минуты).

Стадия 3. Синтез 2-(3-(2-(2-(бензилокси)этокси)этокси)проп-1-инил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)бензамида

[0661] В круглодонную колбу объемом 25 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-йодбензамид (1,5 г, 4,1 ммоль, 1,00 экв.), N,N-диметилформамид (20 мл), (PPh₃)₂PdCl₂ (293 мг, 0,41 ммоль, 0,1 экв.), CuI (79 мг, 0,41 ммоль, 0,1 экв.), триэтиламин (1,69 г, 16 ммоль, 4,00 экв.), (2-[2-(проп-2-ин-1-илокси)этокси]этоксиметил)бензол (1,17 г, 5,0 ммоль, 1,20 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (300 мл) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали солевым раствором (300 мл). Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (7/3). Это обеспечивало получение 1,74 г 2-(3-(2-(2-(бензилокси)этокси)этокси)проп-1-инил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)бензамида в виде светло-желтого масла.

[0662] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 465,10 [МН⁺], t_R=0,79 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 4. Синтез 3-[3-([2-[2-(бензилокси)этокси]этокси]метил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-диона

[0664] В круглодонную колбу объемом 25 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали раствор 2-(3-[2-[2-(бензилокси)этокси]этокси]проп-1-ин-1-ил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)бензамида (1,0 г, 2,15 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (10 мл), Pd(OAc)₂ (24,0 мг, 0,11 ммоль, 0,05 экв.), LiCl (90,0 мг, 2,14 ммоль, 1,00 экв.), карбонат калия (594,0 мг, 4,30 ммоль, 2,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 100°С на масляной бане. Твердые вещества отфильтровывали. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (7/3). Это обеспечивало получение 465,0 мг (47%) 3-[3-([2-[2-(бензилокси)этокси]этокси]метил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-диона в виде светло-желтого масла.

[0665] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 465,10 [МН⁺], t_R=0,74 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 5. Синтез 3-(3-[[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]метил]-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона

[0667] В 3-горлую круглодонную колбу объемом 100 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали 3-[3-([2-[2-(бензилокси)этокси]этокси]метил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-дион (420,0 мг, 0,90 ммоль, 1,00 экв.), дихлорметан (10 мл). За этим следовало добавление по каплям BBr₃ (1Mb DCM) (3,61 мл, 4,00 экв.) с перемешиванием при -78°С. Полученный раствор перемешивали в течение 1 ч. при -78°С на бане с жидким азотом. Затем реакционную смесь гасили путем добавления 20 мл бикарбоната натрия при -78°С. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном (100 мл) и органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси дихлорметан/метанол (10/1). Это обеспечивало получение 212,0 мг (63%) 3-(3-[[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]метил]-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона в виде светло-желтого масла.

[0668] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 374,95 [МН⁺], t_R=0,41 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 6. Синтез 2-(2-[[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил]метокси]этокси)этил-4-метилбензол-1-сульфоната

[0670] В круглодонную колбу объемом 50 мл помещали 3-(3-[[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]метил]-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-2-ил)пиперидин-2,6-дион (212,0 мг, 0,57 ммоль, 1,00 экв.), дихлорметан (10,0 мл), TsCl (215,4 мг, 1,13 ммоль, 2,00 экв.), триэтиламин (171,0 мг, 1,69 ммоль, 3,00 экв.), 4-диметиламинопиридин (6,98 мг, 0,06 ммоль, 0,10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном (100 мл) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали солевым раствором (100 мл). Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (4/1). Это обеспечивало получение 238,0 мг (80%) 2-(2-[[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил]метокси]этокси)этил-4-метилбензол-1-сульфоната в виде светло-желтого масла.

[0671] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 529,10 [МН⁺], t_R=0,76 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 7. Синтез 6-[4-[2-(2-[[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил]метокси]этокси)этил]пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида

[0673] В пробирку для микроволновой обработки объемом 20 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали 6-(пиперазин-1-ил)-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамид (65,0 мг, 0,14 ммоль, 1,00 экв.), ацетонитрил (5,0 мл), карбонат калия (71,3 мг, 0,52 ммоль, 4,00 экв.), 2-(2-[[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил]метокси]этокси)этил-4-метилбензол-1-сульфонат (68,0 мг, 0,13 ммоль, 1,00 экв.), NaI (19,38 мг, 0,13 ммоль, 1,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 24 часов при 75°С на масляной бане. Твердые вещества отфильтровывали. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Затем очищали с помощью колонки для препаративной HPLC: колонка XBridge Shield RP18 OBD, 5 мкм, 19*150 мм; подвижная фаза А: вода (10 ммоль/л NH₄HCO₃), подвижная фаза В: ацетонитрил; расход: 20 мл/мин.; градиент: от 61% В до 70% В за 8 мин; 254 нм; Rt: 6,7 мин. Это обеспечивало получение 50,0 мг (47%) 6-[4-[2-(2-[[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-3-ил]метокси]этокси)этил]пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида в виде белого твердого вещества.

[0674] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃): δ 8,81 (s, 1H), 8,58-8,57 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,23-8,21 (d, J=7,6 Гц, 1H), 7,92-7,89 (m, 1H), 7,57-7,48 (m, 2Н), 7,38-7,34 (m, 1H), 7,26-7,21 (m, 1H), 6,97-6,96 (d, J=2,0 Гц, 1H), 6,81-6,78 (m, 1H), 6,61-6,59 (d, J=9,2 Гц, 1H), 6,25 (s, 1H), 6,11-6,09 (d, J=8,0 Гц, 1H), 4,82-4,79 (m, 1H), 4,32-4,29 (m, 2Н), 4,26-4,23 (m, 1H), 4,15-4,13 (m, 1H), 4,04 (s, 1H), 3,76-3,67 (m, 10Н), 2,95-2,90 (m, 1H), 2,70-2,62 (m, 7Н), 2,23-2,19 (m, 2Н), 1,25 (s, 6Н), 1,21 (s, 6Н).

[0675] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 824,75/826,75 [МН⁺], t_R=2,43 мин. (прогон 4,80 минуты).

[0676] Химическая формула: C₄₄H₅₀ClN₇O7 [823,35/825,35].

[0677] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 50.

[0678] Синтез иллюстративного PROTAC 47

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез метил-5-(3-бромхинолин-6-илокси)пентан-1-ола

[0681] Смесь 3-бромхинолин-6-ола (700 мг, 3,1 ммоль), 5-бромпентан-1-ола (518 мг, 3,1 ммоль) и карбоната калия (856 мг, 6,2 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл) нагревали при 80°С в течение 6 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали водой (20 мл × 2) и солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 1/1) с получением 5-(3-бромхинолин-6-илокси)пентан-1-ола (750 мг, выход 78%) в виде желтого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 91,43%, Rt=1,767 мин.; MS рассч.: 309,04; MS найденное: 310,0 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона

[0684] Раствор 5-(3-бромхинолин-6-илокси)пентан-1-ола (496 мг, 1,6 ммоль), пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (538 мг, 4,8 ммоль), фосфата калия (1,0 г, 4,8 ммоль), йодида меди (304 мг, 1,6 ммоль), N-(2-цианофенил)пиколинамида (357 мг, 1,6 ммоль) в диметилсульфоксиде (10 мл) нагревали при 120°С в течение 5 часов в атмосфере аргона. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду (10 мл), экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляли и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (метанол/дихлорметан = 1/20) с получением 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (200 мг, выход 37%) в виде грязно-белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,325 мин.; MS рассч.: 341,14; MS найденное: 342,2 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез 5-(3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентаналя

[0687] Смесь 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (150 мг, 0,4 ммоль) и перйодинана Десса-Мартина (559 мг, 1,3 ммоль) в дихлорметане (15 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали дихлорметаном (10 мл × 2). Фильтрат концентрировали и остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 5/1) с получением 5-(3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентаналя (100 мг, выход 67%) в виде желтого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,396 мин.; MS рассч.: 339,12; MS найденное: 340,2 [М+Н]⁺.

Стадия 4. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0690] Смесь 5-(3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентаналя (100 мг, 0,29 ммоль), N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорида (149 мг, 0,29 ммоль), цианоборгидрида натрия (36 мг, 0,58 ммоль) в метаноле (5 мл) и ледяной уксусной кислоте (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (23 мг, выход 10%) в виде белого твердого вещества.

[0691] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] к 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 94,84%, Rt=2,864 мин.; MS рассч.: 790,34; MS найденное: 791,30 [M+H]⁺.

[0692] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge C18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин, и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 95,31%, Rt=9,913 мин.

[0693] ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,21 (6Н, s), 1,25 (6Н, s), 1,58-1,66 (4Н, m), 1,90-1,94 (2Н, m), 2,43-2,47 (2Н, m), 2,56-2,58 (4Н, m), 3,67-3,70 (4Н, m), 4,04 (1H, s), 4,09-4,15 (3Н, m), 5,93 (1Н, d, J=8,0 Гц), 6,07 (1Н, d, J=8.0 Гц), 6,66 (1Н, d, J=9,2 Гц), 6,80 (1H, dd, J=8,8, 2,4 Гц), 6,96 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,09 (1Н, d, J=2,8 Гц), 7,41-7,46 (2Н, m), 7,57 (1Н, d, J=8,8 Гц), 7,93 (1H, dd, J=9,2, 2,4 Гц), 8,05-8,07 (2Н, m), 8,58 (1H, d, J=2,4 Гц), 8,73 (1Н, d, J=2,4 Гц).

[0694] Химическая формула: C₄₃H₄₇ClN₈O₅, молекулярная масса: 791,34.

[0695] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 46.

[0696] Синтез иллюстративного PROTAC 48

rac-N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(4-((2,6-диоксопиперидин-3-ил)(этил)карбамоил)фенокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез метил-4-(5-гидроксипентилокси)бензоата

[0699] Смесь метил-4-гидроксибензоата (3,0 г, 20 ммоль), 5-бромпентан-1-ола (3,3 г, 20 ммоль), карбоната калия (5,5 г, 40 ммоль) и йодида калия (0,3 г, 2 ммоль) в N,N-диметилформамиде (20 мл) нагревали при 110°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Добавляли воду (50 мл). Экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3) и объединенные органические слои промывали водой (30 мл × 2) и солевым раствором (30 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 10/1) с получением метил-4-(5-гидроксипентилокси)бензоата (2,2 г, выход 46%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 98,48%, Rt=1,637 мин.; MS рассч.: 238,1; MS найденное: 239,2 [М+Н]⁺.

Стадия 2. Синтез 4-(5-гидроксипентилокси)бензойной кислоты

[0702] Смесь метил-4-(5-гидроксипентилокси)бензоата (2,2 г, 9,2 ммоль), гидроксида лития (1,6 г, 36,9 ммоль) в метаноле (10 мл) и воде (1 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме и добавляли воду (5 мл). Полученное экстрагировали этилацетатом и водную фазу регулировали до рН=5-6 с помощью 1 н. водного раствора гидрохлорида. Осуществляли фильтрование и собирали твердое вещество, которое высушивали в вакууме с получением 4-(5-гидроксипентилокси)бензойной кислоты (1,9 г, выход 90%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,073 мин.; MS рассч.: 224,1; MS найденное: 225,3 [М+Н]⁺.

Стадия 3. Синтез 3-(этиламино)пиперидин-2,6-диона

[0705] Смесь 3-аминопиперидин-2,6-диона гидрохлорида (3,8 г, 23 ммоль), ацетальдегида (1,0 г, 23 ммоль), цианоборгидрида натрия (4,3 г, 69 ммоль) в метаноле (30 мл) и ледяной уксусной кислоте (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (50 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 10/1) с получением 3-(этиламино)пиперидин-2,6-диона (3,0 г, выход 33%) в виде желтого масла.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=0,737 мин.; MS рассч.: 156,1; MS найденное: 157,2 [М+Н]⁺.

[0707] Стадия 4. Синтез N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-гидроксипентилокси)бензамида

[0708] Смесь 3-(этиламино)пиперидин-2,6-диона (500 мг, 3,2 ммоль), 4-(5-гидроксипентилокси)бензойной кислоты (3,3 г, 20 ммоль), этилдиизопропиламина (826 мг, 6,4 ммоль) и 2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфата (1,8 г, 4,8 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (10 мл). Экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3) и объединенные органические слои промывали водой (20 мл × 2) и солевым раствором (20 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 10/1) с получением N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-гидроксипентилокси)бензамида (108 мг, выход 9%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,377 мин.; MS рассч.: 362,2; MS найденное: 363,2 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Синтез N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-оксопентилокси)бензамида

[0711] Смесь

диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-гидроксипентилокси)бензамида

оль) и перйодинана Десса-Мартина (254 мг, 0,6 ммоль) в дихлорметане (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали дихлорметаном (10 мл × 2). Фильтрат концентрировали и остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 5/1) с получением N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-оксопентилокси)бензамида (97 мг, выход 90%) в виде желтого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,465 мин.; MS рассч.: 360,2; MS найденное: 361,2 [М+Н]⁺.

Стадия 6. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(4-((2,6-диоксопиперидин-3-ил)(этил)карбамоил)фенокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0714] Смесь N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-N-этил-4-(5-оксопентилокси)бензамида (97 мг, 0,27 ммоль), N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида гидрохлорида (136 мг, 0,27 ммоль), цианоборгидрида натрия (34 мг, 0,54 ммоль) в метаноле (5 мл) и ледяной уксусной кислоте (0,5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли воду (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (10 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали с получением остатка, который очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(4-((2,6-диоксопиперидин-3-ил)(этил)карбамоил)фенокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (55 мг, выход 25%) в виде грязно-белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 98,20%, Rt=2,918 мин.; MS рассч.: 811,38; MS найденное: 812,30 [М+Н]⁺.

HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 99,92%, Rt=10,259 мин.

Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,10-1,13 (9Н, m), 1,21 (6Н, s), 1,44-1,53 (4Н, m), 1,74-1,77 (2Н, m), 1,99-2,08 (1H, m), 2,31-2,34 (3Н, m), 2,42-2,45 (5Н, m), 2,67-2,68 (1H, m), 3,29-3,34 (3Н, m), 3,58-3,59 (4Н, m), 4,00-4,07 (3Н, m), 4,30 (1H, s),

Химическая формула: C₄₄H₅₄ClN₇O₆, молекулярная масса: 812,40.

[0719] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 54.

[0720] Синтез иллюстративного PROTAC 50

5-(3-(4-(5-(((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)карбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пропокси)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамид

Схема синтеза

[0722] Стадия 1. Синтез метил-5-(3-гидроксипропокси)пиколината

[0723] К раствору метил-5-гидроксипиколината (5,0 г, 32,6 ммоль) в N,N-диметилформамиде (60,0 мл) добавляли 3-бромпропан-1-ол (5,45 г, 39,2 ммоль), карбонат калия(9,03 г, 65,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение ночи. Растворитель удаляли in vacuo. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 20:1) с получением метил-5-(3-гидроксипропокси)пиколината (2,5 г, 36%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0724] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,90 (2Н, t, J=6,0 Гц), 3,57 (2Н, q, J=5,9 Гц), 3,84 (3Н, s), 4,20 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,62 (1H, t, J=5,2 Гц), 7,52 (1Н, dd, J=8,8 Гц, 2,8 Гц), 8,04 (1H, d, J=8,8 Гц), 8,37 (1H, d, J=2,8 Гц).

[0725] Химическая формула: C₁₀H₁₃NO₄, молекулярная масса: 211,21.

[0726] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 13.

[0727] Стадия 2. Синтез 5-(3-гидроксипропокси)пиколиновой кислоты

[0728] К раствору метил-5-(3-гидроксипропокси)пиколината (2,5 г, 11,8 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли гидроксид лития (1,49 г, 35,5 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Растворитель удаляли и добавляли водн. хлористоводородную кислоту (0,5 М) с регулированием до рН=2~3. Удаляли воду in vacuo и остаток промывали с помощью смеси дихлорметан/метанол (10:1), фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенной 5-(3-гидроксипропокси)пиколиновой кислоты в виде бледно-желтого твердого вещества, которое применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 3. Синтез N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-5-(3-гидроксипропокси)пиколинамида

[0730] 5-(3-Гидроксипропокси)пиколиновую кислоту (неочищенная, 11,8 ммоль), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (EDCI) (3,39 г, 17,7 ммоль), гидрат 1-гидроксибензотриазола (HOBt) (2,40 г, 17,7 ммоль) и этилдиизопропиламин (4,58 г, 35,4 ммоль) в N,N-диметилформамиде (DMF) (30 мл) перемешивали в течение 30 минут и затем добавляли 3-аминопиперидин-2,6-дион (2,14 г, 13,0 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и добавляли воду (100 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (20 мл × 4), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in получением N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-5-(3-гидроксипропокси)пиколинамида (2,1 г, 58% за две стадии) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Стадия 4. Синтез 3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропилметансульфоната

[0732] К раствору N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-5-(3-гидроксипропокси)пиколинамида (500 мг, 1,63 ммоль) в дихлорметане (50,0 мл) добавляли триэтиламин (329 мг, 3,25 ммоль) и метансульфонилхлорид (224 мг, 1,95 ммоль) в атмосфере азота. Полученную реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 часа. Затем добавляли воду (20,0 мл) и экстрагировали дихлорметаном (20 мл × 3), промывали солевым раствором, высушивали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного 3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропилметансульфоната в виде бледно-желтого масла, которое применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 5. Синтез трет-бутил-6-хлорникотината

[0734] Раствор 6-хлорникотиновой кислоты (31,6 г, 200 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (2,4 г, 20 ммоль) в THF (250 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов. Затем добавляли по каплям ди-трет-бутилдикарбонат (65,0 г, 300 ммоль). По окончании добавления реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры. Растворитель удаляли и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/петролейный эфир = 0~1/10) с получением трет-бутил-6-хлорникотината (40 г, выход 94%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 100%, Rt=1,984 мин.; MS рассч.: 213,06; MS найденное: 214,2 [М+Н]⁺.

[0736] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,56 (9Н, s), 7,67 (1Н, d, J=8,4 Гц), 8,26 (1H, dd, J=8,0,2,4 Гц), 8,86 (1Н, d, J=2,4 Гц).

[0737] Химическая формула: C₁₀H₁₂ClNO₂, молекулярная масса: 213,66.

[0738] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 12.

[0739] Стадия 6. Синтез трет-бутил-6-(пиперазин-1-ил)никотината

[0740] Смесь трет-бутил-6-хлорникотината (20,0 г, 94 ммоль) и пиперазииа (8,9 г, 103 ммоль) в N,N-диметилацетамиде (100 мл) перемешивали при 140°С в течение ночи. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли порциями насыщенный водный раствор карбоната калия (200 мл). Смесь фильтровали и фильтрат экстрагировали этилацетатом (600 мл × 2). Объединенные органические слои промывали водой (600 мл × 4) и солевым раствором (600 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорид/метанол = 10/1) с получением трет-бутил-6-(пиперазии-1-ил)никотината (6,5 г, выход 26%) в виде желтого твердого вещества.

[0741] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 100%, Rt=2,068 мин.; MS рассч.: 263,16; MS найденное: 264,3 [М+Н]⁺.

[0742] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 97,11%, Rt=7,311 мин.

[0743] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,51 (9Н, s), 2,75 (4Н, t, J=4,8 Гц), 3,30 (1Н, brs), 3,54 (4Н, t, J=4,8 Гц), 6,80 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,86 (1Н, dd, J=8,8, 2,4 Гц), 8,57 (1H, d, J=2,4 Гц).

[0744] Химическая формула: C₁₄H₂₁N₃O₂, молекулярная масса: 263,34.

[0745] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 21.

[0746] Стадия 7. Синтез трет-бутил-6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотината

[0747] К раствору 3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропилметансульфоната (неочищенный, 1,63 ммоль) в диметилсульфоксиде (5,0 мл) добавляли трет-бутил-6-(пиперазин-1-ил)никотинат (472 мг, 1,79 ммоль), этилдиизопропиламин (632 мг, 4,89 ммоль) и йодид калия (27,1 мг, 0,163 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°С в течение ночи. Затем добавляли воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3), промывали солевым раствором (5 мл × 4). Объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 10:1) с получением трет-бутил-6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамонл)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотината (250 мг, 28% за две стадии) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0748] ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,57 (9Н, s), 1,70-1,72 (2Н, m), 1,99-2,08 (2H, m), 2,54-2,64 (6Н, m), 2,79-2,85 (2H, m), 3,69 (4Н, t, J=4,8 Гц), 4,17 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,76-4,82 (1Н, m), 6,58 (1Н, d, J=92 Гц), 731 (1Н, dd, J=8,8 Гц, 3,2 Гц), 7,98 (1Н, dd, J=8,8 Гц, 2,4 Гц), 8,13 (1H, d, J=8,8 Гц), 8,16 (1Н, brs), 8,25 (1H, d, J=2,8 Гц), 8,51 (1H, d, J=6,8 Гц), 8,76 (1H, d, J=2,0 Гц).

[0749] Химическая формула: C₂₈H₃₆N₆O₆, молекулярная масса: 552,62.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 36.

Стадия 8. Синтез 6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты

К раствору трет-бутил-6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотината (250 мг, 0,452 ммоль) в дихлорметане (3,0 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем растворитель удаляли in vacuo с получением 6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты (неочищенная) в виде бледно-желтого масла, которое применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 9. Синтез 5-(3-(4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пропокси)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамида

[0754] К раствору 6-(4-(3-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-илокси)пропил)пиперазин-1-ил)никотиновой кислоты (неочищенная, 0,452 ммоль), 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорида (EDCI) (130 мг, этилдиизопропиламина (175 мг, 1,36 ммоль) в N,N-диметилформамиде (DMF) (15 мл) перемешивали в течение 30 минут и затем добавляли 4-((1r,3r)-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрил (139 мг, 0,497 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи и добавляли воду (20 мл). Водный слой экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (5 мл × 4), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 10:1) и препаративной HPLC с получением 5-(3-(4-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперазин-1-ил)пропокси)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамида (57,7 мг, 17% за две стадии) в виде белого твердого вещества.

[0755] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 94,69%, Rt=2,803 мин.; MS рассч.: 756,3; MS найденное: 757,3 [М+Н]⁺.

[0756] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 85,08%, Rt=9,741 мин.

Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,12 (6Н, s), 1,22 (6Н, s), 1,94-2,01 (3Н, m), 2,18-2,22 (1H, m), 2,49-2,50 (6Н, m), 2,75-2,83 (1H, m), 2,99 (1H, d, J=4,8 Гц), 3,61 (4Н, s), 4,06 9,2 Гц), 7,01 (1H, dd, J=8,8 Гц, 2,4 Гц), 7,21 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,58 (1H, dd, J=8,8 Гц, 2,4 Гц), 7,63 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,90 (1H, d, J=8,4 Гц), 7,96 (1H, dd, J=8,8 Гц, 2,4 Гц), 8,4 Гц), 10,87 (1H, s).

Химическая формула: C₃₉H₄₅ClN₈O₆, молекулярная масса: 757,28.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 45.

[0760] Синтез иллюстративного PROTAC 53

5-(4-((1-(5-(((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)карбамоил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамид

[0761] Схема синтеза:

Стадия 1. Синтез трет-бутил-4-(6-(метоксикарбонил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата

К раствору метил-5-бромпиколината (14,8 г, 68,5 ммоль) и трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (15,3 г, 82,2 ммоль) в толуоле (150 мл) добавляли карбонат цезия (55,8 г, 171,3 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладий(0) (3,15 г, 3,44 ммоль) и (+/-)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил (4,62 г, 7,42 ммоль), затем полученное перемешивали при 100°С в атмосфере азота в течение ночи. После охлаждения гасили водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (200 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in (петролейный эфир/этилацетат = 5/1) с получением трет-бутил-4-(6-(метоксикарбонил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (12,0 г, выход 55%) в виде коричневого твердого вещества.

LC-MS: (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (30 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 1,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин.). Чистота составляла 82,48%, Rt=0,991 мин.; MS рассч.: 321,17; MS найденное: 322,2 [М+Н]⁺.

Химическая формула: C₁₆H₂₃N₃O₄, молекулярная масса: 321,37.

Стадия 2. Синтез метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколината

Смесь трет-бутил-4-(6-(метоксикарбонил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-карбоксилата (12,0 г, 37,4 ммоль) в растворе газообразного HCl в 1,4-диоксане (100 мл, 4,0 М) перемешивали при 30°С в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали in коричневого твердого вещества.

Химическая формула: C₁₁H₁₅N₃O₂, молекулярная масса: 221,26.

Стадия 3. Синтез трет-бутил-6-(4-формилпиперидин-1-ил)никотината

[0770] Смесь трет-бутил-6-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил)никотината (5,0 г, 17,1 ммоль) и перйодинана Десса-Мартина (21,8 г, 51,4 ммоль) в DCM (200 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Смесь фильтровали и фильтрат концентрировали in vacuo с получением трет-бутил-6-(4-формилпиперидин-1-ил)никотината (3,5 г, выход 70%) в виде желтого геля.

Химическая формула: C₁₆H₂₂N₂O₃, молекулярная масса: 290,36.

Стадия 4. Синтез метил-5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколината

К раствору трет-бутил-6-(4-формилпиперидин-1-ил)никотината (3,5 г, 12,1 ммоль) и метил-5-(пиперазин-1-ил)пиколината (2,67 г, 12,1 ммоль) в МеОН (50 мл) добавляли NaBH₃CN (1,52 г, 18,0 ммоль) и АсОН (2 мл), затем полученное перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляли водой (50 мл), экстрагировали с помощью DCM (50 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (DCM/MeOH = 20/1) с получением метил-5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколината (1,6 г, выход 27%) в виде коричневого твердого вещества.

[0774] LC-MS: (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,987 мин.; MS рассч.: 495,28; MS найденное: 496,3 [М+Н]⁺.

[0775] Химическая формула: C₂₇H₃₇N₅O₄, молекулярная масса: 495,61.

[0776] Стадия 5. Синтез 5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколиновой кислоты

[0777] К раствору метил-5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколината (1,6 г, 2,35 ммоль) в THF (60 мл) добавляли 1 моль/л водного NaOH (30 мл), затем полученное перемешивали при 30°С в течение 2 часов. Смесь гасили водой (100 мл) и экстрагировали с помощью DCM (50 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением 5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколиновой кислоты (1,5 г, выход 96%) в виде коричневого твердого вещества.

[0778] LC-MS: (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,557 мин.; MS рассч.: 481,27; MS найденное: 482,3 [М+Н]⁺.

[0779] Химическая формула: C₂₆H₃₅N₅O₄, молекулярная масса: 481,59.

[0780] Стадия 6. Синтез трет-бутил-6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамонл)пиридин-3-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотината

[0781] Смесь 5-(4-((1-(5-(трет-бутоксикарбонил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)пиколиновой кислоты (1,5 г, 3,1 ммоль), 3-аминопиперидин-2,6-диона (0,56 г, 3,4 ммоль), HATU (1,77 г, 4,65 ммоль) и DIEA (0,8 г, 6,2 ммоль) в DMF (50 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Смесь выливали в воду (30 мл) и экстрагировали с помощью DCM (30 мл × 3). Объединенную органическую фазу концентрировали и остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением трет-бутил-6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотината (1,0 г, выход 54%) в виде белого твердого вещества.

[0782] LC-MS: (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,879 мин.; MS рассч.: 591,32; MS найденное: 592,3 [М+Н]⁺.

[0783] Химическая формула: C₃₁H₄₁N₇O₅, молекулярная масса: 591,70.

[0784] Стадия 7. Синтез 6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазии-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотиновой кислоты

[0785] К раствору трет-бутил-6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотината (500 мг, 0,85 ммоль) в DCM (10 мл) добавляли TFA (5 мл), затем полученное перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Реакционную смесь концентрировали in vacuo с получением 6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотиновой кислоты (400 мг, выход 88%) в виде белого твердого вещества.

LC-MS: (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,215 мин.; MS рассч.: 535,25; MS найденное: 536,3 [М+Н]⁺.

Химическая формула: C₂₇H₃₃N₇O₅, молекулярная масса: 535,59.

Стадия 8. Синтез 5-(4-((1-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамида

Смесь 6-(4-((4-(6-(2,6-диоксопиперидин-3-илкарбамоил)пиридин-3-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)никотиновой кислоты (400 мг, 0,75 ммоль), 4-((1r,3r)-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрила (207,7 мг, 0,75 ммоль), EDCI (158,4 мг, 0,825 ммоль), HOBt (153 мг, 1,125 ммоль) и DIEA (290,25 мг, 2,25 ммоль) в DMF (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь гасили водой (20 мл) и экстрагировали с помощью DCM (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением 5-(4-((1-(5-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутилкарбамоил)пиридин-2-ил)пиперидин-4-ил)метил)пиперазин-1-ил)-N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)пиколинамида (215 мг, выход 36%) в виде белого твердого вещества.

[0790] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 90,80%, Rt=3,023 мин.; MS рассч.: 795,36; MS найденное: 796,3 [М+Н]⁺.

[0791] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge C18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 90,34%, Rt=10,276 мин.

Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 0,76-0,81 (1H, m), 1,15-1,21 (16Н, m), 1,80-2,23 (5Н, m), 2,53-2,59 (4Н, m), 2,71-2,78 (2Н, m), 2,85-2,91 (2Н, m), 3,29 (3Н, brs), 3,97 (1H, s),=8,8 Гц), 8,15 (1H, d, J=2,4 Гц), 8,38 (1H, d, J=6,8 Гц), 8,50 (1H, d, J=2,4 Гц).

Химическая формула: C₄₂H₅₀ClN₉O₅, молекулярная масса: 796,36.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 50.

[0795] Синтез иллюстративного PROTAC 61

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил)бутил)никотинамид

[0796] Часть 1 схемы синтеза

[0797] Часть 2 схемы синтеза

[0798] Стадия 1. Синтез трет-бутил-6-(4-гидроксибут-1-инил)никотината

[0799] Трет-бутил-6-хлорникотинат (2,0 г, 9,39 ммоль) растворяли в диметоксиэтане (50 мл) и добавляли последовательно воду (30 мл), карбонат калия (5,18 г, 37,6 ммоль), йодид меди(I) (0,1 г, 0,5 ммоль), трифенилфосфин (0,26 г, 1 ммоль) и 10-процентный (вес/вес) палладий на угле (0,3 г). Реакционную смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре, затем добавляли 2-метил-3-бутин-2-ол (5 мл, 50 ммоль), нагревали при 80°С в течение 5 часов, затем охлаждали, фильтровали через целит, разбавляли водой (150 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл × 2). Органическую фазу промывали водой, высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали, выпаривали in vacuo. Полученную неочищенную реакционную смесь очищали с помощью колонки и флэш-хроматографии на силикагеле с получением трет-бутил-6-(4-гидроксибут-1-инил)никотината (1,7 г, 73%) в виде бесцветного масла.

[0800] Стадия 2. Синтез трет-бутил-6-(4-гидроксибутил)никотината

Раствор трет-бутил-6-(4-гидроксибут-1-инил)никотината (500 мг, 2,0 ммоль), Pd/C(50 мг) в трет-бутаноле (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере водорода (газ). Смесь фильтровали через слой целита с удалением палладия. Растворитель выпаривали in vacuo с получением трет-бутил-6-(4-гидроксибутил)никотината (450 мг, выход 88%) в виде желтого масла. Остаток применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0802] Стадия 3. Синтез 6-(4-гидроксибутил)никотиновой кислоты

[0803] К раствору 6-(4-гидроксибутил)никотината (200 мг, 0,79 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли TFA (5 мл), затем полученное перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь концентрировали in vacuo с получением неочищенной 6-(4-гидроксибутил)никотиновой кислоты (130 мг, выход 84%) в виде желтого масла, которое непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0804] Стадия 4. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-гидроксибутил)никотинамида

[0805] К раствору 6-(4-гидроксибутил)никотиновой кислоты (570 мг, неочищенная, 2,9 ммоль), 4-((1r,3r)-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрила (400 мг, 1,4 ммоль), EDCI (472 мг, 2,4 ммоль) и HOBt (332 мг, 2,4 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли DIEA (800 мг, 6,2 ммоль), затем полученное перемешивали при комнатной температуре в течение двух дней. Смесь разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали с помощью этилацетата (20 мл × 2). Органический экстракт промывали водой (40 мл × 3) и солевым раствором (40 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью препаративной TLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-гидроксибутил)никотинамида (262 мг, выход 20%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0806] LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм × 6 мм × 5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] до 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 2,4 мин., в конце изменяли до 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Rt=1,832 мин.; MS рассч.: 455,98 MS найденное: 456,2 [М+Н]⁺.

[0807] Химическая формула: C₂₅H₃₀ClN₃O₃, молекулярная масса: 455,98.

Стадия 5. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-оксобутил)никотинамида

[0809] Смесь N-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-5-(5-гидроксипентилокси)пиколинамида (240 мг, 0,53 ммоль) и перйодинана Десса-Мартина (269 мг, 0,64 ммоль) в дихлорметане (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часа. Реакционную смесь фильтровали и осадок на фильтре промывали дихлорметаном (10 мл × 3). Фильтрат концентрировали и очищали с помощью препаративной TLC (DCM/MeOH = 100/5) с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-оксобутил)никотинамида (100 мг, выход 42%) в виде желтого твердого вещества.

[0810] LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] до 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода /CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 2,4 мин., в конце изменяли до 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 52,80, Rt=1,977 мин.; MS рассч.: 453,96; MS найденное: 454,2 [М+Н]⁺.

[0811] Стадия 6. Синтез трет-бутил-4-(5-хлор-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0812] К раствору 4,5-дихлорпиридазин-3-(2Н)-она (10 г, 60,6 ммоль) в N,N-диметилформамиде (40 мл) добавляли трет-бутил-пиперазин-1-карбоксилат (22,5 г, 121,2 ммоль) и DIEA (25 г, 182 ммоль). Смесь перемешивали при 80°С в течение ночи. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали и остаток промывали этилацетатом (100 мл × 3) и DCM (100 мл × 3) с получением соединения трет-бутил-4-(5-хлор-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (8 г, выход 42%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0813] LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (30 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 87,88%. Rt=0,903 мин.; MS рассч.: 314,77; MS найденное: 315,2 [М+Н]⁺.

[0814] Химическая формула: C₁₃H₁₉ClN₄O₃, молекулярная масса: 314,77.

[0815] Стадия 7. Синтез трет-бутил-4-(5-хлор-1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0816] К раствору 1-бром-4-(5-бромпентилокси)бензола (4 г, 12,7 ммоль) в DMSO (20 мл) добавляли 3-бромпиперидин-2,6-дион (4,8 мг, 25,4 ммоль) и карбонат калия (5,3 г, 38,1 ммоль). Смесь перемешивали при 40°С в течение двух дней. После охлаждения до комнатной температуры смесь фильтровали и остаток промывали этилацетатом (20 мл × 3) и DCM (20 мл × 3). Объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали in vacuo и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = 1:4) с получением трет-бутил-4-(5-хлор-1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (3,7 г, выход 67%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0817] Стадия 8. Синтез трет-бутил-4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0818] Смесь трет-бутил-4-(5-хлор-1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (300 мг, 0,7 ммоль) и 10% палладия на активированном угле (90 мг) в МеОН (30 мл) перемешивали в атмосфере водорода при 1 атм., при 37°С в течение ночи. Полученное фильтровали для удаления твердого вещества, фильтрат концентрировали in vacuo с получением 3-(4-(3-гидроксипропокси)-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (190 мг, выход 93%) в виде желтого твердого вещества.

[0819] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (30 мм × 6 мм × 5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 77,70%. Rt=0,873 мин.; MS рассч.: 391,42. MS найденное: 392,2 [М+Н]⁺.

[0820] Химическая формула: C₁₈H₂₅N₅O₅, молекулярная масса: 391,42.

[0821] Стадия 9. Синтез 3-(6-оксо-4-(пиперазин-1-ил)пиридазин-1(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[0822] Раствор 3-(4-(3-гидроксипропокси)-6-оксопиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (50 мг, 0,10 ммоль) в DCM (3 мл) и трифторуксусной кислоте (3 мл) перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Затем растворитель непосредственно удаляли с получением 3-(6-оксо-4-(пиперазин-1-ил)пиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (124 мг, неочищенный, выход 88%), который непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0823] Стадия 10. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил)бутил)никотинамида

[0824] К раствору 3-(6-оксо-4-(пиперазин-1-ил)пиридазин-1-(6Н)-ил)пиперидин-2,6-диона (100 мг, 0,34 ммоль), N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-оксобутил)никотинамида (130 мг, 0,29 ммоль) в МеОН (6 мл) добавляли уксусную кислоту (3 капли), затем добавляли 7 порциями NaBH₃CN (23 мг, 0,35 ммоль) в течение 6 часов при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение еще 1 часа. Реакционную смесь концентрировали, разбавляли солевым раствором (15 мл) и экстрагировали с помощью CH₂Cl₂/MeOH(10/1, 20 мл × 2). Органическое вещество высушивали над Na₂SO₄, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил)пиперазин-1-ил)бутил)никотинамида (56 мг, выход 27%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

[0825] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 99,06%, Rt=2,650 мин.; MS рассч.: 728,3; MS найденное: 729,4 [М+Н]⁺.

[0826] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 96,51%, Rt=9,185 мин.

[0827] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,16 (7Н, s), 1,21 (7Н, s), 1,71-1,75 (2Н, m), 2,13-2,16 (1H, m), 2,34-2,37 (2Н, m), 2,45-2,47 (4Н, m), 2,55-2,71 (2Н, m), 2,77-2,84 (3Н, m), 3,25-3,28 (4Н, m), 3,99 (1H, s), 4,09 (1H, d, J=8,4 Гц), 5,63-5,68 (1H, m), 5,82 (1H, d, J=2,8 Гц), 6,11 (1H, d, J=8,0 Гц), 6,74 (1H, dd, J=8,8, 2,4 Гц), 6,90 (1H, d, J=2,0 Гц), 7,21 (1H, s), 7,50 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,64 (1H, d, J=3,2 Гц), 7,91 (1H, brs), 7,96 (1H, dd, J=8,0, 2,0 Гц), 8,83 (1H, d, J=1,6 Гц).

[0828] Химическая формула: C₃₈H₄₅ClN₈O₅, молекулярная масса: 729,27.

[0829] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 45.

[0830] Синтез иллюстративного PROTAC 70

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамид

Схема синтеза

[0832] Стадия 1. Синтез трет-бутил-4-(4-(метоксикарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата

[0833] Смесь метил-4-фторбензоата (3,1 г, 20,0 ммоль), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (3,7 г, 20,0 ммоль) и карбоната калия (2,7 г, 40,0 ммоль) в диметилсульфоксиде (30 мл) нагревали при 120°С в течение 24 часов. Смесь выливали в воду (100 мл) и экстрагировали этил ацетатом (50 мл × 3). Объединенную органическую фазу концентрировали in vacuo с получением трет-бутил-4-(4-(метоксикарбонил)фенил)пииеразин-1-карбоксилата (5,1 г, выход 80%) в виде белого твердого вещества.

[0834] Химическая формула: C₁₇H₂₄NO₂, молекулярная масса: 320,38.

[0835] Стадия 2. Синтез трет-бутнл-4-(4-(гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата

[0836] Смесь трет-бутил-4-(4-(метоксикарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (3,2 г, 10,0 ммоль) и гидразингидрата (1,0 г, 20,0 ммоль) в этаноле (30 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Смесь концентрировали с получением трет-бутил-4-(4-(гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (2,6 г, выход 80%) в виде белого твердого вещества, применяемого непосредственно.

[0837] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18

(50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин.

и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 78,9%, Rt=1,609 мин. MS рассч.: 320,1; MS найденное: 321,3 [М+Н]⁺.

Химическая формула: C₁₆H₂₄N₄O₃, молекулярная масса: 320,39.

Стадия 3. Синтез трет-бутил-4-(4-(2-(метилкарбамоил)гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата

[0840] Смесь трет-бутил-4-(4-(гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (2,0 г, 6,3 ммоль) и 2,5-диоксопирролидин-1-илметилкарбамата (1,1 г, 6,3 ммоль) в ацетонитриле (30 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду (30 мл) и фильтровали с получением трет-бутил-4-(4-(2-(метилкарбамоил)гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (1,7 г, 70%) в виде белого твердого вещества.

Химическая формула: C₁₈H₂₇N₅O₄, молекулярная масса: 377,44.

Стадия 4. Синтез трет-бутил-4-(4-(4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата

[0843] Смесь трет-бутил-4-(4-(2-(метилкарбамоил)гидразинкарбонил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (1,7 г, 4,5 ммоль) и гидроксида натрия (360 мг, 9,0 ммоль) в воде (15 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 3 часов. Смесь охлаждали до комнатной температуры и значение рН смеси регулировали до 5-6 с помощью хлористоводородной кислоты (1,0 н.). Смесь экстрагировали дихлорметаном (30 мл × 3) и объединенную органическую фазу концентрировали in vacuo с получением трет-бутил-4-(4-(4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (1,2 г, выход 75%) в виде белого твердого вещества.

Химическая формула: C₁₈H₂₅N₅O₃, молекулярная масса: 359,42.

Стадия 5. Синтез трет-бутил-4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата

Смесь трет-бутил-4-(4-(4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (1,2 г, 3,3 ммоль), 3-бромпиперидин-2,6-диона (1,3 г, 6,6 ммоль) и трет-бутоксида калия (1,1 г, 9,9 ммоль) в ацетонитриле (20 мл) нагревали с обратным холодильником в течение ночи. Смесь выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (30 мл) и экстрагировали дихлорметаном (30 мл × 3). Объединенную органическую фазу концентрировали in vacuo и остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением трет-бутил-4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (465 мг, выход 30%) в виде белого твердого вещества.

Химическая формула: C₂₃H₃₀N₆O₅, молекулярная масса: 470,52.

Стадия 6. Синтез 3-(4-метил-5-оксо-3-(4-(пиперазин-1-ил)фенил)-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пиперидин-2,6-диона

[0849] Раствор трет-бутил-4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-карбоксилата (465 мг, 0,99 ммоль) в сухом гидрохлориде/1,4-диоксане (20 мл, 4,0 н.) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь концентрировали in vacuo с получением 3-(4-метил-5-оксо-3-(4-(пиперазин-1-ил)фенил)-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-1-ил)пиперидин-2,6-диона (293 мг, выход 80%) в виде белого твердого вещества.

[0851] Стадия 7. Синтез трет-бутил-4-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил)бензоата

[0852] К раствору трет-бутил-4-фторбензоата (23 г, 0,12 ммоль) в DMSO (100 мл) добавляли пиперидин-4-илметанол (40,5 г, 0,35 ммоль). Смесь нагревали до 120°С в течение ночи в атмосфере азота. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры к ней добавляли воду (50 мл) и экстрагировали с помощью этилацетата (20 мл × 3). Органический слой промывали солевым раствором (15 мл × 3). Объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали in vacuo и очищали с помощью СС (РЕ/ЕА = 10:1) с получением соединения трет-бутил-4-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил)бензоата (31 г, 91,2%) в виде белого твердого вещества.

[0853] LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] до 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода /CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 2,4 мин., в конце изменяли до 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 99,57%, Rt=2,035 мин.; MS рассч.: 291,2; MS найденное: 292,2 [М+Н]⁺.

[0854] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 93,27%, Rt=9,542 мин.

[0855] ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 1,29-1,40 (2Н, m), 1,49 (1H, d, J=5,4 Гц), 1,57 (9Н, s), 1,70-1,75 (1H, m), 1,82 (2Н, d, J=12,8 Гц), 2,80-2,87 (2Н, m), 3,53 (2Н, t, J=5,8 Гц), 3,87-3,90 (2Н, m), 6,85 (2Н, d, J=9,2 Гц), 7,84 (2Н, d, J=9,2 Гц).

[0856] Химическая формула: C₁₇H₂₅NO₃, молекулярная масса: 291,39.

[0857] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 25.

[0858] Стадия 8. Синтез трет-бутил-4-(4-формилпиперидин-1-ил)бензоата

[0859] К раствору трет-бутил-4-(4-(гидроксиметил)пиперидин-1-ил)бензоата (300 мг, 1,03 ммоль) в дихлорметане (20 мл) медленно добавляли перйодинан Десса-Мартина (1,31 г, 3,09 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем фильтровали и концентрировали in vacuo с получением соединения трет-бутил-4-(4-формилпиперидин-1-ил)бензоата (240 мг, 81%) в виде бледно-желтого твердого вещества.

Стадия 9. Синтез трет-бутил-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензоата

Смесь 3-(4-метил-5-оксо-3-(4-(пиперазин-1-ил)фенил)-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-1-ил)пиперидин-2,6-диона (200 мг, 0,54 ммоль), трет-бутил-4-(4-формилпиперидин-1-ил)бензоата (156 мг, 0,54 ммоль), цианоборгидрида натрия (100 мг, 1,6 ммоль) и уксусной кислоты (0,5 мл) в метаноле (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали дихлорметаном (20 мл × 3). Объединенную органическую фазу очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 20/1) с получением трет-бутил-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензоата (173 мг, выход 50%) в виде коричневого твердого вещества.

Химическая формула: C₃₅H₄₅N₇O₅, молекулярная масса: 643,78.

Стадия 10. Синтез 4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензойной кислоты

Смесь трет-бутил-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензоата (150 мг, 0,23 ммоль) и трифторуксусной кислоты (265 мг, 2,3 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (10 мл) перемешивали в течение 2 ч. Смесь концентрировали in vacuo с получением 4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензойной кислоты (95 мг, выход 70%) в виде коричневого твердого вещества, которое непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Химическая формула: C₃₁H₃₇N₇O₅, молекулярная масса: 587,67.

Стадия 11. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамида

[0867] Смесь 4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензойной кислоты (95 мг, 0,16 ммоль), 4-((1r,3r)-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)-2-хлорбензонитрила (45 мг, 0,16 ммоль), 2-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфата (91 мг, 0,24 ммоль) и этилдиизопропиламина (62 мг, 0,48 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (10 мл × 3). Объединенную органическую фазу концентрировали in vacuo и остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(4-(1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метил-5-оксо-4,5-дигидро-1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)пиперазин-1-ил)метил) пиперидин-1-ил)бензамида (54 мг, выход 40%) в виде белого твердого вещества.

[0868] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 99,4%, Rt=3,160 мин.; MS рассч.: 847,3; MS найденное: 848,4 [М+Н]⁺.

[0869] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 94,0%, Rt=10,750 мин.

[0870] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,12 (7Н, brs), 1,21 (8Н, brs), 1,79-1,82 (3Н, m), 2,08-2,12 (1Н, m), 2,20-2,22 (2Н, m), 2,41-2,45 (3Н, m), 2,59-2,63 (1Н, m), 2,76-2,87 (3Н, m), 3,26-3,27 (5Н, m), 3,30 (3Н, s), 3,84-3,87 (2Н, m), 4,04-4,06 (1H, m), 4,32 (1Н, s), 5,18 (1Н, dd, J=5,6, 12,8 Гц), 6,94-7,05 (5Н, m), 7,20 (1Н, d, J=2,4 Гц), 7,47-7,53 (3Н, m), 7,73 (1Н, d, J=8,8 Гц), 7,90 (1Н, d, J=8,8 Гц), 11,0 (1Н, s).

[0871] Химическая формула: C₄₆H₅₄ClN₉O₅, молекулярная масса: 848,43.

[0872] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 54.

[0873] Синтез иллюстративного PROTAC 79

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

[0874] Схема синтеза

[0875] Стадия 1. Синтез 7-бромизохинолина

[0876] К раствору 3-бромбензальдегида (50,0 г, 0,27 моль) в толуоле (250 мл) добавляли диметилацеталь аминоацетальдегида (31,1 г, 0,30 моль), перемешивали при комнатной температуре в течение нескольких минут, затем нагревали при 100°С в течение ночи. Реакционный растворитель выпаривали с получением 3-бромбензаламиноацеталя (70 г, 95%) в виде желтого масла, которое непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0877] Раствор пентаоксида фосфора (140 г, 2 об.) в концентрированной серной кислоте (70 мл, 1 об.) перемешивали при комнатной температуре в течение нескольких минут, затем перемешивали при 0°С; к полученной ранее смеси медленно добавляли 3-бромбензаламиноацеталь (70 г, 0,26 моль). Затем смесь нагревали до 160°С в течение 30 минут. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь осторожно выливали в ледяную воду (100 мл) при энергичном перемешивании, затем фильтровали, рН дополнительно повышали до 9 с применением насыщенного раствора гидроксида натрия и экстрагировали дихлорметаном (100 мл × 3), объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью силикагеля (петролейный эфир/этилацетат = 6:1) с получением смеси 7-бромизохинолина и 5-бромизохинолина (15,0 г, 28%) в виде желтого твердого вещества.

[0878] Стадия 2. Синтез 4,7-дибромизохинолина

[0879] К раствору смеси 7-бромизохинолина и 5-бромизохинолина (15,0 г, 0,072 моль) в уксусной кислоте (30 мл) добавляли N-бромсукцинимид (19,3 г, 0,11 моль). Смесь нагревали до 100°С в течение ночи в атмосфере азота. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры к ней добавляли воду (10 мл) и нейтрализовали с помощью насыщенного раствора гидроксида натрия, затем экстрагировали этилацетатом (10 мл × 3). Объединенные органические фазы высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали in vacuo и очищали с помощью силикагеля (петролейный эфир/этилацетат = 15:1) с получением соединения 4,7-дибромизохинолина (6,0 г, 29%) в виде желтого твердого вещества.

[0880] ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,87-7,90 (1H, m), 8,05 (1H, d, J=8,8 Гц), 8,15 (1H, m), 8,75 (1H, s), 9,01 (1H, s).

[0881] Химическая формула: C₉H₅Br₂N, молекулярная масса: 286,95.

[0882] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 5.

[0883] Стадия 3. Синтез 4-бром-7-метоксиизохинолина

[0884] К раствору 4,7-дибромизохинолина (1,0 г, 3,5 ммоль) в смеси диметилсульфоксид/метанол (4:3) (10 мл) добавляли метанолят натрия (0,3 г, 5,6 ммоль). Смесь нагревали в микроволновом реакторе при 140°С в течение 1 часа. К смеси добавляли воду (5 мл) и экстрагировали этилацетатом (5 мл × 3). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (5 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью силикагеля (петролейный эфир/этилацетат = 10:1) с получением 4-бром-7-метоксиизохинолина (180 мг, 22%) в виде желтого твердого вещества.

[0885] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) δ 3,95 (3Н, s), 7,57-7,60 (1H, m), 7,63 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,99 (1H, d, J=8,8 Гц), 8,59 (1H, s), 9,21 (1H, s).

[0886] Химическая формула: C₁₀H₈BrNO, молекулярная масса: 238,08.

[0887] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 8.

[0888] Стадия 4. Синтез 4-бромизохинолин-7-ола

[0889] К раствору 4-бром-7-метоксиизохинолина (110 мг, 0,46 ммоль) в дихлорметане (2 мл) добавляли BBr₃ (1,0 М) в дихлорметане (4,6 мл, 4,6 ммоль) при -20°С, затем перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Реакционную смесь выливали в холодную воду и нейтрализовали насыщенным раствором бикарбоната натрия, затем экстрагировали дихлорметаном (5 мл × 3). Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной TLC (петролейный эфир/этилацетат = 3:1) с получением 4-бромизохинолин-7-ола (60 мг, 58%) в виде светлого масла.

[0890] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge C18 (30 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°C; расход: 1,5 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] до 5% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 95% [CH₃CN] за 0,5 мин., затем при данных условиях - в течение 1,5 мин., в конце изменяли до 90% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 10% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,5 мин.). Чистота составляла 90,50%, Rt=1,078 мин.; MS рассч.: 223,7; MS найденное: 224,7 [М+Н]⁺.

[0891] Стадия 5. Синтез5-(4-бромизохинолин-7-илокси)пентан-1-ола

[0892] К раствору соединения 4-бромизохинолин-7-ола (0,90 г, 4,02 ммоль) в DMF (10 мл) добавляли 5-бромпентан-1-ол (0,66 г, 4,02 ммоль) и карбонат калия (0,74 г, 8,04 ммоль), затем перемешивали при 70°С в течение 8 часов. Реакционную смесь выливали в холодную воду и экстрагировали с помощью дихлорметана/метанола (10 мл × 3). Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 15:1) с получением 5-(4-бромизохинолин-7-илокси)пентан-1-ола (1,0 г, 81%) в виде желтого твердого вещества.

[0893] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) δ 1,49-1,51 (4Н, m), 1,82 (2Н, t, J=6,8 Гц), 3,43-3,44 (2Н, m), 4,16 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,41 (1H, t, J=5,2 Гц), 7,58-7,64 (2Н, m), 8,00 (1H, d, J=9,2 Гц), 8,59 (1H, s), 9,19(1Н, s).

[0894] Химическая формула: C₁₄H₁₆BrNO₂, молекулярная масса: 310,19.

[0895] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 16.

[0896] Стадия 6. Синтез 1-(7-(5-гидроксипентилокси)изохинолин-4-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона

[0897] Раствор 5-(4-бромизохинолин-7-илокси)пентан-1-ола (100 мг, 0,32 ммоль), пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (48 мг, 0,38 ммоль), K₃PO₄ (200 мг, 0,96 ммоль), CuI (30 мг, 0,16 ммоль), N-(2-цианофенил)пиколинамида (22 мг, 0,16 ммоль) в DMSO (6 мл) нагревали при 120°С в течение 2 часов в атмосфере аргона. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в холодную воду и экстрагировали с помощью дихлорметана/метанола (10 мл × 3). Объединенный органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 12:1) с получением 1-(7-(5-гидроксипентилокси)изохинолин-4-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (21 мг, 19%) в виде желтого твердого вещества.

[0898] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d⁶) δ 1,49-1,51 (4Н, m), 1,80-1,83 (2Н, m), 3,42-3,44 (2Н, m), 4,16 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,41 (1H, t, J=5,2 Гц), 5,75-5,78 (1H, m), 7,50 (1H, dd, J=9,2, 2,8 Гц), 7,69-7,77 (3Н, m), 8,44 (1H, s), 9,31 (1H, s), 11,61 (1H, s).

[0899] Химическая формула: C₁₈H₁₉N₃O₄, молекулярная масса: 341,36.

[0900] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 19.

[0901] Стадия 7. Синтез 5-(4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-илокси)пентаналя

[0902] К раствору 1-(7-(5-гидроксипентилокси)изохинолин-4-ил)пиримидин-2,4-(1Н,3Н)-диона (30 мг, 0,088 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли перйодинан Десса-Мартина (112 мг, 0,26 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Смесь добавляли в воду (10,0 мл) и экстрагировали дихлорметаном (10,0 мл × 2). Объединенный органический слой промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали, концентрировали in vacuo и очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 12:1) с получением 5-(4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-илокси)пентаналя (20 мг, 67%) в виде желтого твердого вещества.

[0903] Стадия 8. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0904] К раствору 5-(4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-илокси)пентаналя (20 мг, 0,058 ммоль) в сухой смеси метанол/1,2-дихлорэтан/НОАс (5 мл/3 мл/0,1 мл) добавляли N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамид (27 мг, 0,058 ммоль). Обеспечивали перемешивание смеси в течение 30 минут в атмосфере газообразного N₂. Затем добавляли цианоборгидрид натрия (7 мг, 0,116 ммоль) и обеспечивали перемешивание реакционной смеси в течение ночи. Растворитель удаляли и остаток разделяли между дихлорметаном и водой, промывали солевым раствором, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного продукта. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением соединения N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)изохинолин-7-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (6,0 мг, 13%) в виде желтого твердого вещества.

[0905] LC-MS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 93,61%, Rt=2,885 мин.; MS рассч.: 790,3; MS найденное: 791,3 [М+Н]⁺.

[0906] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 92,34%, Rt=9,952 мин.

[0907] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,12 (6Н, s), 1,21 (6Н, s), 1,49-1,57 (4Н, m), 1,83-1,86 (2Н, m), 2,31-2,40 (5Н, m), 2,67-2,68 (1H, m), 3,58-3,60 (4Н, m), 4,05 (1H, d, J=9,2 Гц), 4,17-4,20 (2Н, m), 4,30 (1H, s), 5,76 (1H, d, J=8,4 Гц), 6,86 (1H, d, J=8,8 Гц), 6,99-7,02 (1H, m), 7,21 (1H, d, J=2,0 Гц), 7,50-7,52 (1H, m), 7,63 (1H, d, J=9,6 Гц), 7,70-7,76 (3Н, m), 7,90-7,97 (2Н, m), 8,44 (1H, s), 8,62 (1H, d, J=1,6 Гц), 9,31 (1H, s).

[0908] Химическая формула: C₄₃H₄₇ClN₈O₅, молекулярная масса: 791,34.

[0909] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 47.

[0910] Синтез иллюстративного PROTAC 80

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-пианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-((3-(5-циано-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-ил)окси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамид

Схема синтеза

Стадия 1. Синтез 5-(3-аминохинолин-6-илокси)пентан-1-ола

[0913] К раствору 5-(3-бромхинолин-6-илокси)пентан-1-ола (1,1 г, 3,6 ммоль), бензофенонимина (684 мг, 3,8 ммоль) и трет-бутоксида натрия (691 мг, 7,2 ммоль) в толуоле (20 мл) добавляли (+/-)-2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил (448 мг, 0,7 ммоль) и трис(дибензилиденацетон)дипалладий (207 мг, 0,36 ммоль) в атмосфере азота и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 2 часов. Когда полученное охлаждалось до комнатной температуры, добавляли воду (20 мл). Полученную смесь экстрагировали этилацетатом (10 мл × 3), промывали солевым раствором (20 мл × 3), высушивали над безводным сульфатом натрия и фильтровали. Затем к фильтрату добавляли 4 н. HCl (5 мл), смесь перемешивали в течение часа. Слои разделяли и органический слой экстрагировали водой (10 мл × 3). Затем объединенную водную фазу регулировали до рН=9 с помощью насыщ. NaHCO₃, экстрагировали этилацетатом (10 мл × 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан/метанол = 8/1) с получением 5-(3-аминохинолин-6-илокси)пентан-1-ола (600 мг, выход 69%) в виде белого твердого вещества.

LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 1,4 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 97,35%, Rt=1,361 мин. MS рассч.: 246,14; MS найденное: 247,3 [М+Н]⁺.

[09151 ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,45-1,49 (4Н, m), 1,76 (2Н, t, J=6,8 Гц), 3,42 (2Н, dd, J=11,2, 6,0 Гц), 4,03 (2Н, t, J=6.4 Гц), 4,40 (1H, t, J=5,2 Гц), 5,60 (2Н, s), 6,93 (1Н, dd, J=8,8. 2,4 Гц), 6,97 (1Н, d, J=2,4 Гц), 7,02 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,62 (1Н, d, J=8,8 Гц), 8,23 (1H, d, J=2,8 Гц).

[0916] Химическая формула: C₁₄H₁₈N₂O₂, молекулярная масса: 246,30.

[0917] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 18.

[0918] Стадия 2. Синтез 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбонитрила

[0919] Раствор 5-(3-аминохинолин-6-илокси)пентан-1-ола (600 мг, 2,44 ммоль), N-карбамоил-2-цианоацетамида (1,2 г, 9,76 ммоль) и триметоксиметана (1,0 г, 9,76 ммоль) в диметилсульфоксиде (10 мл) перемешивали при 80°С в течение ночи и продолжали перемешивание реакционной смеси при 120°С в течение 2 часов. Когда полученное охлаждалось до комнатной температуры, к смеси добавляли воду (30 мл) и получали белое твердое вещество. Полученную смесь фильтровали и твердое вещество очищали с помощью препаративной HPLC с получением 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбонитрила (110 мг, выход 12%) в виде белого твердого вещества.

[0920] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,49-1,51 (4Н, m), 1,81 (2H, t, J=6,4 Гц), 3,43 (2H, d, J=5,2 Гц), 4,13 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,41 (1H, t, J=5,2 Гц), 7,44 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,49 (1H, dd, J=9,2, 2,8 Гц), 7,99 (1H, d, J=9,2 Гц), 8,36 (1H, d, J=2,4 Гц), 8,77 (1H, d. J=2,4 Гц), 8,95 (1H, s), 12,31 (1H, brs).

[0921] Химическая формула: C₁₉H₁₈N₄O₄, молекулярная масса: 366,37.

[0922] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 18.

Стадия 3. Синтез 5-(3-(5-циано-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентилметансульфоната

[0924] К раствору 1-(6-(5-гидроксипентилокси)хинолин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбонитрила (110 мг, 0,30 ммоль) и триэтиламина (98 мг, 0,90 ммоль) в дихлорметане (4 мл) добавляли метансульфонилхлорид (51 мг, 0,45 ммоль) при 0°С и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем к смеси добавляли воду (5 мл) и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (5 мл × 3), промывали солевым раствором (5 мл × 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт (150 мг) непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 4. Синтез 1-(6-(5-йодпентилокси)хинолин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбонитрила

[0926] К раствору 5-(3-(5-циано-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентилметансульфоната (150 мг) в ацетонитриле (3 мл) добавляли йодид калия (50 мг, 0,3 ммоль) и смесь перемешивали при 90°С в течение 4 часов. Когда смесь охлаждалась до комнатной температуры, к ней добавляли воду (5 мл), и полученную смесь экстрагировали дихлорметаном (5 мл × 3), промывали солевым раствором (5 мл × 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан/метанол = 10/1) с получением необходимого продукта (40 мг, выход 28% за две стадии).

LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм × 4,6 мм × 3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] до 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода /CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 1,6 мин., затем при данных условиях - в течение 2,4 мин., в конце изменяли до 90% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=900/100 (об./об.)] и 10% [(всего 10 мМ AcONH₄) вода/CH₃CN=100/900 (об./об.)] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 66,97%, Rt=2,066 мин. MS рассч.: 476,03; MS найденное: 477,0 [М+Н]⁺.

Стадия 5. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(5-циано-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида

[0929] Раствор 1-(6-(5-йодпентилокси)хинолин-3-ил)-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-карбонитрила (40 мг, 0,08 ммоль), N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(пиперазин-1-ил)никотинамида (39 мг, 0,08 ммоль) и этилдиизопропиламина (30 мг, 0,25 ммоль) в ацетонитриле (2 мл) перемешивали при 90°С в течение ночи. Когда он охлаждался до комнатной температуры, добавляли воду (5 мл) и смесь экстрагировали этилацетатом (2 мл × 3), промывали солевым раствором (5 мл × 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC с получением N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-6-(4-(5-(3-(5-циано-2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1-(2Н)-ил)хинолин-6-илокси)пентил)пиперазин-1-ил)никотинамида (12 мг, выход 18%) в виде белого твердого вещества.

[0930] LCMS (Agilent LCMS 1200-6120, колонка: Waters X-Bridge С18 (50 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 2,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 3,0 мин., затем при данных условиях - в течение 1,0 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 0,7 мин.). Чистота составляла 94,03%, Rt=2,703 мин.; MS рассч.: 815,33; MS найденное: 816,3 [М+Н]⁺.

[0931] HPLC (Agilent HPLC 1200, колонка: Waters X-Bridge С18 (150 мм*4,6 мм*3,5 мкм); температура колонки: 40°С; расход: 1,0 мл/мин.; подвижная фаза: от 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] до 0% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 100% [CH₃CN] за 10 мин., затем при данных условиях - в течение 5 мин., в конце изменяли до 95% [вода + 10 мМ NH₄HCO₃] и 5% [CH₃CN] за 0,1 мин. и при данных условиях - в течение 5 мин.). Чистота составляла 96,02%, Rt=9,232 мин.

[0932] ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 1,11 (6Н, s), 1,21 (6Н, s), 1,50-1,57 (4Н, m), 1,81-1,86 (2Н, m), 2,33-2,37 (2Н, m), 2,45-2,50 (4Н, m), 3,59 (4Н, s), 4,05 (1H, d, J=9,2 Гц), 4,15 (2Н, t, J=6,4 Гц), 4,30 (1H, s), 6,86 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,00 (1H, dd, J=8,8, 2,0 Гц), 7,21 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,45 (1H, d, J=2,4 Гц), 7,50 (1H, dd, J=5,2, 2,4 Гц), 7,63 (1H, d, J=9,2 Гц), 7,91 (1H, d, J=8,8 Гц), 7,95 (1H, dd, J=8,8, 2,0 Гц), 8,00 (1H, d, J=9,2 Гц), 8,37 (1H, d, J=2,0 Гц), 8,62 (1H, d, J=2,0 Гц), 8,78 (1H, d, J=2,4 Гц), 8,96 (1H, s), 12,28 (1H, brs).

[0933] Химическая формула: C₄₄H₄₆ClN₉O₅, молекулярная масса: 816,35.

[0934] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 46.

[0935] Синтез иллюстративного PROTAC 81

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилен-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамид

Схема реакции:

Стадия 1. Синтез метил-4-бром-2-йодбензоата

[0938] В 3-горлую круглодонную колбу объемом 1000 мл помещали метил-2-амино-4-бромбензоат (5,0 г, 21,73 ммоль, 1,00 экв.), раствор серной кислоты (20%) (20 мл) в воде (100 мл). За этим следовало добавление по каплям раствора NaNO₂ (1,8 г, 26,09 ммоль, 1,20 экв.) в воде (20 мл) с перемешиванием при 0°С, затем перемешивание в течение 1 часа при 0°С. К полученному добавляли по каплям раствор йодкалия (7,21 г, 43,43 ммоль, 2,00 экв.) в воде (30 мл) с перемешиванием при 0°С. Полученный раствор перемешивали в течение 1 часа при 0°С на бане с водой/льдом. Затем реакционную смесь гасили путем добавления 200 мл воды/льда. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали солевым раствором (100 мл × 1). Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (1/5). Это обеспечивало получение 5,97 г (81%) метил-4-бром-2-йодбензоата в виде светло-желтого масла.

[0939] Стадия 2. Синтез метил-4-бром-2-цианобензоата

[0940] В круглодонную колбу объемом 250 мл помещали метил-4-бром-2-йодбензоат (5,8 г, 17,01 ммоль, 1,00 экв.), NMP (60 мл), CuCN (1,82 г, 20,45 ммоль, 1,20 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 2 часов при 60°С на масляной бане. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали с помощью FeSO4 (водн.) (50 мл × 2). Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (1/3). Это обеспечивало получение 3,68 г (90%) метил-4-бром-2-цианобензоата в виде белого твердого вещества.

Стадия 3. Синтез 6'-бромспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-3'-она

[0942] В 3-горлую круглодонную колбу объемом 100 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали метил-4-бром-2-цианобензоат (2,0 г, 8,33 ммоль, 1,00 экв.), простой эфир (40 мл), 2-(пропан-2-илокси)пропан-пропан-2-ол-пропан-2-илтитана дигидрат (2,75 мл, 1,10 экв.). За этим следовало добавление по каплям EtMgBr (3 М) (5,5 мл, 2,00 экв.) с перемешиванием при 0°С. Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили путем добавления 20 мл хлороводорода (1 М). Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2) и органические слои объединяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (7/3). Это обеспечивало получение 409 мг (21%) 6'-бромспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-3'-она в виде желтого твердого вещества.

[0943] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 238,00, 240,00 [МН⁺], t_R=0,79 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 4. Синтез диметил-2-(6'-бром-3'-оксоспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-2'-ил)пентандиоата

[0945] В круглодонную колбу объемом 100 мл помещали 6'-бромспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-3'-он (895,0 мг, 3,76 ммоль, 1,00 экв.), N,N-диметилформамид (15,0 мл), CS₂CO₃ (2,44 г, 7,49 ммоль, 2,00 экв.), 1,5-диметил-2-бромпентандиоат (2,69 г, 11,25 ммоль, 3,00 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение ночи при 100°С на масляной бане. Полученный раствор экстрагировали этилацетатом (50 мл × 2) и органические слои объединяли. Полученную смесь промывали солевым раствором (50 мл × 2). Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (3/7). Это обеспечивало получение 740,0 мг (50%) диметил-2-(6'-бром-3'-оксоспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-2'-ил)пентандиоата в виде светло-желтого масла.

[0946] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 395,85, 397,85 [МН⁺], t_R=1,01 мин. (прогон 1,90 минуты).

Стадия 5. Синтез диметил-2-(6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)-4-метилен-1-оксо-3,4-дигидроизохинолин-2-(1Н)-ил)пентандиоата

[0948] В круглодонную колбу объемом 20 мл, которую продували азотом и в которой поддерживали инертную атмосферу азота, помещали диметил-2-(6'-бром-3'-оксоспиро[циклопропан-1,1'-изоиндолин]-2'-ил)пентандиоат (740,0 мг, 1,87 ммоль, 1,00 экв.), толуол (10 мл), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилат (418,0 мг, 2,24 ммоль, 1,20 экв.), Cs₂CO₃ (1,217 г, 3,74 ммоль, 2,00 экв.), RuphosPd (140,5 мг, 0,17 ммоль, 0,10 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 8 часов при 100°С на масляной бане. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси этилацетат/петролейный эфир (1/1). Это обеспечивало получение 303,0 мг (32%) диметил-2-(6-(4-(трет-бутоксикарбонил)пиперазин-1-ил)-4-метилен-1-оксо-3,4-дигидроизохинолин-2-(1Н)-ил)пентандиоата в виде светло-желтого масла.

[0949] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 502,20 [МН⁺], t_R=0,96 мин. (прогон 1,90 минуты).

[0950] Стадия 6. Синтез трет-бутил-4-[2-(1-карбамоил-4-метокси-4-оксобутил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата

[0951] В круглодонную колбу объемом 100 мл помещали 1,5-диметил-2-(6-[4-[(трет-бутокси)карбонил]пиперазин-1-ил]-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил)пентандиоат (400 мг, 0,80 ммоль, 1 экв.), МеОН (50 мл), NH₃. Полученный раствор перемешивали в течение 5 часов при комнатной температуре. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси дихлорметан/метанол (20:1). Это обеспечивало получение 100 мг (25,77%) трет-бутил-4-[2-(1-карбамоил-4-метокси-4-оксобутил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата (и/или его региоизомера, как показано на схеме выше) в виде желтого твердого вещества.

Стадия 7. Синтез трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата

[0953] В круглодонную колбу объемом 50 мл помещали трет-бутил-4-[2-(1-карбамоил-4-метокси-4-оксобутил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилат (188 мг, 0,39 ммоль, 1 экв.), ацетонитрил (20 мл), Cs₂CO₃ (629,5 мг, 1,93 ммоль, 5 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов при 80°С на масляной бане. Твердые вещества отфильтровывали. Остаток обрабатывали с помощью колонки с силикагелем с применением смеси дихлорметан/метанол (20:1). Собранные фракции объединяли и концентрировали под вакуумом. Это обеспечивало получение 100 мг (56,94%) трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилата в виде желтого твердого вещества.

[0954] Стадия 8. Синтез 3-[4-метилиден-1-оксо-6-(пиперазин-1-ил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-диона (трифторацетатной соли)

[0955] В круглодонную колбу объемом 50 мл помещали трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилиден-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил]пиперазин-1-карбоксилат (120 мг, 0,26 ммоль, 1 экв.), дихлорметан (20 мл), TFA (1,5 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 2 часов при комнатной температуре. Полученную смесь концентрировали под вакуумом. Это обеспечивало получение 93 мг (77,86%) 3-[4-метилиден-1-оксо-6-(пиперазин-1-ил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-диона (соли TFA) в виде желтого твердого вещества.

Стадия 9. Синтез N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4 тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилен-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамида

[0957] В круглодонную колбу объемом 50 мл, помещали 4-(4-формилпиперидин-1-ил)-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамид (83 мг, 0,17 ммоль, 1 экв.), дихлорметан (20 мл), 3-[4-метилиден-1-оксо-6-(пиперазин-1-ил)-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-2-ил]пиперидин-2,6-дион (соль TFA) (91,2 мг, 0,20 ммоль, 1,2 экв.), NaBH(OAc)₃ (106,8 мг, 0,50 ммоль, 3 экв.). Полученный раствор перемешивали в течение 1 ночи при комнатной температуре. Затем реакционную смесь гасили путем добавления воды. Полученный раствор экстрагировали дихлорметаном. Полученную смесь промывали солевым раствором. Смесь высушивали над безводным сульфатом натрия. Неочищенный продукт очищали с помощью препаративной HPLC при следующих условиях: колонка: колонка XBridge Prep С18 OBD, 19×150 мм, 5 мкм; подвижная фаза: вода (10 ммоль/л NH₄HCO₃) и ацетонитрил (от 58,0% ацетонитрила до 78,0% за 8 мин.); детектор: УФ 254 нм. Продукт получали и концентрировали под вакуумом, проводили лиофилизацию. Это обеспечивало получение 80,3 мг (57,42%) N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-4-метилен-1-оксо-1,2,3,4-тетрагидроизохинолин-6-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамида в виде белого твердого вещества.

[0958] ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 10,88 (s, 1H), 7,91-7,89 (m, 1H), 7,78-7,72 (m, 3Н), 7,50-7,47 (d, J=9,2 Гц, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,09-6,94 (m, 5Н), 5,75 (s, 1H), 5,29 (s, 1H), 5,15-4,95 (m, 1H), 4,32 (s, 1H), 4,21-4,04 (m, 3H), 3,87-3,84 (m, 2Н), 3,32-3,30 (m, 7Н), 2,84-2,76 (m, 3H), 2,65-2,56 (m, 1H), 2,48-2,37 (m, 1H), 2,22-2,18 (m, 2Н), 1,90-1,79 (m, 4Н), 1,40-1,16 (m, 9Н), 1,16-1,09 (m, 6Н).

[0959] LC-MS (ES⁺): масса/заряд 832,35 [МН⁺], t_R=1,53 мин. (прогон 3,00 минуты).

[0960] Химическая формула: C₄₇H₅₄ClN₇O₅ [831,39].

[0961] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 54.

[0962] Синтез иллюстративного PROTAC 82

N-((1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил)-4-(4-((4-(2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1-оксо-1,2-дигидроизохинолин-6-ил)пиперазин-1-ил)метил)пиперидин-1-ил)бензамид

[0963] Схема синтеза

[0964] Стадия 1. Синтез трет-бутил-4-(1-оксо-2Н-изохинолин-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[0965] Смесь 6-бром-2Н-изохинолин-1-она (2 г, 8,93 ммоль, 1 экв.), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (2,49 г, 13,39 ммоль, 1,5 экв.), трет-бутоксида натрия (2 М, 13,4 мл, 3 экв.) и [2-(2-аминофенил)фенил]-хлор-палладий-дициклогексил-[2-(2,6-диизопропоксифенил)фенил]фосфана (693 мг, 0,89 ммоль, 0,1 экв.) в трет-амиловом спирте (30 мл) дегазировали и продували азотом 3 раза, а затем смесь перемешивали при 100°С в течение 12 часов в атмосфере азота. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (50 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир:этилацетат = от 20:1 до 3:1) с получением трет-бутил-4-(1-оксо-2Н-изохинолин-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата (2,3 г, 6,98 ммоль, выход 78%) в виде белого твердого вещества.

[0966] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 330,1 [М+1]⁺.

[0967] ¹H ЯМР: (400 МГц, CDCl₃)δ: 10,73 (s, 1H), 8,27 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,13-7,05 (m, 2Н), 6,81 (d, J=2,4 Гц, 1H), 6,42 (d, J=7,2 Гц, 1H), 3,65-3,59 (m, 4Н), 3,39-3,34 (m, 4Н), 1,50 (s, 9Н).

[0968] Химическая формула: C₁₈H₂₃N₃O₃, молекулярная масса: 329,39.

[0969] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 23.

[0970] Стадия 2. Синтез диметил-2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиоата

[0971] К раствору трет-бутил-4-(1-оксо-2Н-изохинолин-6-ил)пиперазин-1-карбоксилата (800 мг, 2,43 ммоль, 1 экв.) в диметилформамиде (16 мл) добавляли карбонат цезия (2,37 г, 7,29 ммоль, 3 экв.) и диметил-2-бромпентандиоат (696 мг, 2,91 ммоль, 1,2 экв.). Смесь перемешивали при 100°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь регулировали до рН 4~5 с помощью хлористоводородной кислоты (1 М). Реакционную смесь разбавляли водой (60 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (30 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта, диметил-2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиоата (700 мг, неочищенный), в виде светло-желтого масла, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0972] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 474,1 [М+1]⁺.

[0973] Химическая формула: C₂₅H₃₃N₃O₇, молекулярная масса: 487,55.

[0974] Стадия 3. Синтез 2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиовой кислоты

[0975] К раствору диметил-2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиоата (800 мг, 1,64 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (5 мл), метаноле (5 мл) и воде (5 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (413 мг, 9,85 ммоль, 6 экв). Смесь перемешивали при 30°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь регулировали до рН 4~5 с помощью хлористоводородной кислоты (1 М) и разбавляли водой (25 мл). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом (15 мл × 3). Объединенную органическую фазу высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта, 2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиовой кислоты (800 мг, неочищенная), в виде желтого твердого вещества, которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[0976] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 460,1 [М+1]⁺.

[0977] Химическая формула: C₂₃H₂₉N₃O₇, молекулярная масса: 459,49.

[0978] Стадия 4. Синтез трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1-оксо-6-изохинолил]пиперазин-1-карбоксилата

[0979] К раствору 2-[6-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-1-оксо-2-изохинолил]пентандиовой кислоты (800 мг, 1,74 ммоль, 1 экв.) в N-метил-2-пирролидоне (10 мл) добавляли мочевину (522 мг, 8,71 ммоль, 5 экв.). Смесь перемешивали при 160°С в течение 2 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (25 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (30 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250*50 мм* 10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225%FA)-ACN]; В%: от 30ACN% до 60ACN%, 30 мин.; 50% мин.). Получали трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1-оксо-6-изохинолил]пиперазин-1-карбоксилат (100 мг, 0,22 ммоль, выход 13%) в виде белого твердого вещества.

[0980] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 441,1 [М+1]⁺.

[0981] Химическая формула: C₂₃H₂₈N₄O₅, молекулярная масса: 440,49.

[0982] Стадия 5. Синтез 3-(1-оксо-6-пиперазин-1-ил-2-изохинолил)пиперидин-2,6-диона

[0983] К раствору трет-бутил-4-[2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1-оксо-6-изохинолил]пиперазин-1-карбоксилата (100 мг, 0,22 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (3 мл) добавляли 4 М хлористоводородную кислоту в диоксане (3 мл, 52,86 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 4 часов. С помощью LCMS показывали, что осталось 14% исходного вещества, и реакционную смесь перемешивали в течение еще 1 часа. С помощью тонкослойной хроматографии (дихлорметан : метанол = 10:1) показывали, что реакция была завершена. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением дихлорметана, диоксана и хлористоводородной кислоты с получением неочищенного продукта, 3-(1-оксо-6-пиперазин-1-ил-2-изохинолил)пиперидин-2,6-диона (85 мг, неочищенный, гидрохлорид), в виде светло-желтого твердого вещества.

[0984] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 341,0 [М+1]⁺.

[0985] Химическая формула: C₁₈H₂₀N₄O₃, молекулярная масса: 340,38.

[0986] Стадия 6. Синтез N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметил-циклобутил]-4-[4-[[4-[2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1-оксо-6-изохинолил]пиперазин-1-ил]метил]-1-пиперидил]бензамида

[0987] К раствору 3-(1-оксо-6-пиперазин-1-ил-2-изохинолил)пиперидин-2,6-диона (85 мг, 0,22 ммоль, 1 экв., гидрохлорид) в 1,2-дихлорэтане (4 мл) добавляли триэтиламин (0,9 ммоль, 0,12 мл, 4 экв.) и N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-(4-формил-1-пиперидил)бензамид (111 мг, 0,22 ммоль, 1 экв). Смесь перемешивали при 20°С в течение 0,5 часа. Добавляли триацетоксиборгидрид натрия (95 мг, 0,45 ммоль, 2 экв.) и смесь перемешивали при 20°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением 1,2-дихлорэтана. Остаток растворяли в диметилформамиде (3 мл) и фильтровали. Фильтр очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Synergi С18 150*25*10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,05%HCl)-ACN]; В%: от 23% до 53%, 10 мин.) с получением N-[3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]-4-[4-[[4-[2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1-оксо-6-изохинолил]пиперазин-1-ил]метил]-1-пиперидил]бензамида (50,9 мг, 0,05 ммоль, выход 25%, чистота 95,8%, гидрохлорид) в виде белого твердого вещества.

[0988] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 818,4 [M+1]⁺.

[0989] ¹H ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 11,07-10,90 (m, 1H), 10,57 (s, 1H), 8,10-8,01 (m, 1H), 7,91 (d, J=8,8 Гц, 1H), 7,80 (d, J=8,8 Гц, 2H), 7,58 (br d, J=9,2 Гц, 1H), 7,33 (d, J=7,6 Гц, 1H), 7,29-7,23 (m, 1H), 7,21 (d, J=2,4 Гц, 1H), 7,16-7,05 (m, 3H), 7,01 (dd, J=2,4, 8,8 Гц, 1H), 6,56-6,37 (m, 1H), 6,56-6,37 (m, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,06 (d, J=9,2 Гц, 3H), 3,87 (br d, J=12,8 Гц, 2H), 3,68-3,60 (m, 1H), 3,22-3,08 (m, 4H), 3,00-2,76 (m, 3H), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,54-2,52 (m, 2H), 2,47-2,43 (m, 1H), 2,23-2,11 (m, 1H), 2,05-1,90 (m, 3H), 1,55-1,30 (m, 2H), 1,23 (s, 6H), 1,14 (s, 6H).

[0990] Химическая формула: C₄₆H₅₂ClN₇O₅, молекулярная масса: 818,40.

[0991] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 53.

[0992] Синтез иллюстративного PROTAC 89.

3-[3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]фенил]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион

[0993] Стадия 1. Получение 6-трет-бутокситетралин-1-она

[0994] К перемешиваемому раствору 6-гидрокситетралин-1-она (50 г, 308,29 ммоль, 1 экв.) в безводном дихлорметане (2000 мл) при 0°С добавляли трет-бутил-2,2,2-трихлорэтанимидат (67,36 г, 308,29 ммоль, 55 мл, 1 экв.) и пара-толуолсульфонат пиридиния (7,75 г, 30,83 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 3 часов. Добавляли дополнительную порцию трет-бутил-2,2,2-трихлорэтанимидата (67,36 г, 308,29 ммоль, 55 мл, 1 экв.) и пара-толуолсульфоната пиридиния (7,75 г, 30,83 ммоль, 0,1 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 15 часов. Данный процесс повторяли три раза. С помощью тонкослойной хроматографии (петролейный эфир : этилацетат = 3:1, R_f=0,8) показывали, что большая часть реагирующего вещества все еще оставалась, реакционную смесь перемешивали при 10°С в течение 72 часов. Реакционную смесь гасили путем добавления раствора гидрокарбоната натрия (1500 мл) при 15°С и затем экстрагировали дихлорметаном (300 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (300 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 100:1 до 50:1) с получением 6-трет-бутокситетралин-1-она (21 г, 96,20 ммоль, выход 31%) в виде желтого масла. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,97 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,91 (dd, J=2,4, 8,8 Гц, 1H), 6,82 (d, J=2,0 Гц, 1H), 2,93-3,90 (t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,63-2,60 (m, t, J=6,0 Гц, 2Н), 2,13 (m, 2Н), 1,43 (s, 9Н)

[0995] Стадия 2. Получение (6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)трифторметансульфоната

[0996] К раствору 6-трет-бутокситетралин-1-она (40 г, 183,24 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (500 мл) добавляли диизопропиламид лития (2 М, 137 мл, 1,5 экв.) при -70°С. Смесь перемешивали при -70°С в течение 1 часа, затем к смеси добавляли по каплям 1,1,1-трифтор-N-фенил-N-(трифторметилсульфонил)-метансульфонамид (72,01 г, 201,56 ммоль, 1,1 экв.) в тетрагидрофуране (200 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 2 часов. С помощью тонкослойной хроматографии (петролейный эфир : этилацетат = 5:1) показывали завершение реакции. К смеси добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (300 мл), органическую фазу отделяли. К смеси добавляли этилацетат (500 мл × 3), полученную смесь промывали солевым раствором (1000 мл × 2). Объединенную органическую фазу высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 1:0 до 50:1) с получением (6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)трифторметансульфоната (52 г, 144,64 ммоль, выход 78%, чистота 97%) в виде желтого масла. LC-MS (ESI) масса/заряд: 294,9 [М+1-56]⁺. ¹H-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ: 7,30 (d, J=6,4 Гц, 1H), 6,91 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,84 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 2,93-2,78 (m, 2Н), 2,59-2,46 (m, 2Н), 1,42 (s, 9Н).

[0997] Стадия 3. Получение 4-(6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола

[0998] К раствору (6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)трифторметансульфоната (52 г, 148,42 ммоль, 1 экв.), (4-гидроксифенил)бороновой кислоты (24,57 г, 178,11 ммоль, 1,2 экв.) в диоксане (800 мл) и воде (150 мл) добавляли карбонат калия (41,03 г, 296,84 ммоль, 2 экв.) и (1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен)палладия(II) дихлорид (10,86 г, 14,84 ммоль, 0,1 экв.) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 10 часов. С помощью тонкослойной хроматографии (петролейный эфир : этилацетат = 5:1) показывали завершение реакции. Остаток разбавляли водой (500 мл) и экстрагировали этилацетатом (500 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (1000 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : тетрагидрофуран = от 50:1 до 20:1) с получением 4-(6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (43 г, 131,46 ммоль, выход 88%, чистота 90%) в виде желтого масла. LCMS (ESI) масса/заряд: 239,1 [М+1-56]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,23 (d, J=7,6 Гц, 2Н), 6,91 (d, J=8,0 Гц, 1H), 6,87-6,79 (m, 3H), 6,73 (d, J=8,4 Гц, 1H), 5,95 (s, 1H), 4,83-4,75 (m, 1H), 2,87-2,73 (m, 2Н), 2,44-2,31 (m, 2Н), 1,37 (s, 9Н)

[0999] Стадия 4. Получение 4-(2-бром-6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола

[01000] К раствору 4-(6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (1 г, 3,06 ммоль, 1 экв.) в ацетонитриле (20 мл) тремя порциями добавляли N-бромсукцинимид (489 мг, 2,75 ммоль, 0,9 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°С в течение 1,5 часа. С помощью LC-MS показывали завершение реакции. Остаток разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 1:0 до 20:1) с получением 4-(2-бром-6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (1 г, 2,46 ммоль, выход 80%, чистота 91%) в виде желтого масла. LC-MS (ESI) масса/заряд: 316,9 [М+1-56]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,12 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,90 (d, J=8,0 Гц, 2Н), 6,77 (s, 1H), 6,69-6,62 (m, 1H), 6,60-6,53 (m, 1H), 4,86 (s, 1H), 2,96 (s, 4Н), 1,35 (s, 9Н).

[01001] Стадия 5. Получение 4-(6-трет-бутокси-2-фенил-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола

[01002] К раствору 4-(2-бром-6-трет-бутокси-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (1 г, 2,46 ммоль, 1 экв.), фенилбороновой кислоты (314 мг, 2,58 ммоль, 1,05 экв.) в диоксане (10 мл) и воде (2 мл) добавляли карбонат калия (678 мг, 4,91 ммоль, 2 экв.) и (1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен)палладия(II) дихлорид (179 мг, 0,24 ммоль, 0,1 экв.) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 100°С в течение 12 часов. С помощью LC-MS показывали завершение реакции. Остаток разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл × 3), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 1:0 до 10:1) с получением 4-(6-трет-бутокси-2-фенил-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (930 мг, 2,35 ммоль, выход 95%, чистота 93%) в виде оранжевого масла. LCMS(ESI) масса/заряд: 314,1 [М+1-56]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,16-7,09 (m, 2Н), 7,08-6,99 (m, 3H), 6,97-6,89 (m, 2Н), 6,86-6,82 (m, 1H), 6,74-6,66 (m, 4Н), 4,70 (s, 1H), 2,99-2,89 (m, 2Н), 2,84-2,75 (m, 2Н), 1,37 (s, 9Н)

[01003] Стадия 6. Получение 4-(6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил)фенола

[01004] К раствору 4-(6-трет-бутокси-2-фенил-3,4-дигидронафтален-1-ил)фенола (930 мг, 2,35 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (20 мл) и метаноле (4 мл) добавляли катализатор, представляющий собой палладий на активированном угле (100 мг, чистота 10%), в атмосфере азота. Суспензию дегазировали под вакуумом и продували водородом три раза. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (50 фунтов/кв. дюйм) при 30°С в течение 36 часов. С помощью LC-MS показывали завершение реакции. Реакционную смесь фильтровали и раствор концентрировали. Полученный материал непосредственно применяли на следующей стадии без дополнительной очистки с получением цис-4-(6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил)фенола (870 мг, 2,14 ммоль, выход 91%, чистота 91%) в виде белого твердого вещества. LC-MS (ESI) масса/заряд: 317,0 [М+1-56]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,22-7,12 (m, 3H), 6,89-6,78 (m, 4Н), 6,74 (dd, J=2,0, 8,4 Гц, 1H), 6,45 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,27 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 4,51 (s, 1H), 4,25 (d, J=4,8 Гц, 1H), 3,38 (dd, J=3,2, 12,8 Гц, 1H), 3,08-2,99 (m, 2Н), 2,27-2,08 (m, 1H), 1,87-1,76 (m, 1H), 1,37 (s, 9Н)

[01005] Стадия 7. Получение WX-ARV-HD-012-E1, 4-[(1S,2R)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралии-1-ил]фенола

[01006] 4-(6-трет-Бутокси-2-фенилтетралин-1-ил)фенол (870 мг, 2,13 ммоль, 1 экв.) подвергали сверхкритической флюидной хроматографии для хирального разделения (колонка: AD, 250 мм × 30 мм, 5 мкм; подвижная фаза: 0,1% гидроксид аммония в метаноле, 20%-20%, 4,2 мин. для каждого прогона) с получением 4-[(1S,2R)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенола (420 мг, 1,04 ммоль, выход 97%, чистота 92%) в виде первой фракции и 4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенола (420 мг, 1,04 ммоль, выход 97%, чистота 92%) в виде второй фракции. Фракция 1: [α]_D=+336,9 (С=0,50 г/100 мл в этилацетате), LC-MS (ESI) масса/заряд: 395,1 [М+23]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 9,02 (s, 1H), 7,20-7,07 (m, 3H), 6,87-6,79 (m, 3H), 6,79-6,72 (m, 1H), 6,71-6,64 (m, 1H), 6,36 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,15 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 4,19 (d, J=4,8 Гц, 1H), 3,31-3,26 (m, 1H), 3,09-2,89 (m, 2Н), 2,17-2,04 (m, 1H), 1,79-1,65 (m, 1H), 1,29 (s, 9Н).

[01007] Фракция 2: [α]_D=-334,1 (С=0,50 г/100 мл в этилацетате), LC-MS(ESI) масса/заряд: 395,2 [М+23]⁺; ¹Н-ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 9,02 (s, 1H), 7,21-7,06 (m, 3H), 6,88-6,78 (m, 3H), 6,78-6,72 (m, 1H), 6,71-6,64 (m, 1H), 6,36 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,15 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 4,19 (d, J=4,8 Гц, 1H), 3,30-3,27 (m, 1H), 3,08-2,90 (m, 2Н), 2,16-2,04 (m, 1H), 1,79-1,65 (m, 1H), 1,29 (s, 9Н).

[01008] Стадия 8. Получение 4-(6-бензилокси-2-фенил-3,4-дигидронафталин-1-ил)фенил]1,1,2,2,3,3,4,4,4-нонафторбутан-1-сульфоната

[01009] К раствору 4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенола (1 г, 2,68 ммоль, 1 экв.) и 1,1,2,2,3,3,4,4,4-нонафторбутан-1-сульфонилфторида (811 мг, 2,68 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (5 мл) и ацетонитриле (5 мл) добавляли карбонат калия (557 мг, 4,03 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 16 часов. TLC (петролейный эфир : этилацетат = 10:1) указывала на то, что исходное вещество было полностью израсходовано, и образовалось одно новое пятно. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 1:0 до 50:1). Получали необходимое соединение, [4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]1,1,2,2,3,3,4,4,4-нонафторбутан-1-сульфонат (1,6 г, 2,44 ммоль, выход 91%), в виде бесцветного масла. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,21-7,11 (m, 3H), 6,94-6,86 (m, 3H), 6,84-6,73 (m, 4Н), 6,46 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,33 (d, J=5,2 Гц, 1H), 3,50-3,40 (m, 1H), 3,16-2,95 (m, 2Н), 2,20-2,02 (m, 1H), 1,91-1,79 (m, 1H), 1,38 (s, 9Н).

[01010] Стадия 9. Получение 1-[4-(6-бензилокси-2-фенил-3,4-дигидронафталин-1-ил)фенил]-4-(диметоксиметил)пиперидина

[01011] Смесь [4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]1,1,2,2,3,3,4,4,4-нонафторбутан-1-сульфоната (1,6 г, 2,44 ммоль, 1 экв.), 4-(диметоксиметил)пиперидина (584 мг, 3,67 ммоль, 1,5 экв.), трет-бутоксида натрия (705 мг, 7,33 ммоль, 3 экв.), ацетата палладия (82 мг, 0,37 ммоль, 0,15 экв.) и дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропилбифенила (233 мг, 0,49 ммоль, 0,2 экв.) в толуоле (30 мл) дегазировали и продували азотом 3 раза и затем смесь перемешивали при 90°С в течение 16 часов в атмосфере азота. С помощью LC-MS показывали один основной пик с определенным необходимым значением MS. TLC (петролейный эфир : этилацетат = 10:1) указала на то, что исходное вещество было полностью израсходовано, и образовалось одно новое пятно. Смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом (50 мл), фильтровали через подушку из целита, осадок на фильтре промывали этилацетатом (30 мл). Фильтрат концентрировали. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 100:1 до 10:1). Получали необходимое соединение, 1-[4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-(диметоксиметил)пиперидин (1,1 г, 2,14 ммоль, выход 87%), в виде белого твердого вещества. LCMS (ESI) масса/заряд: 514,3 [М+1]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,21-7,11 (m, 3H), 6,88-6,78 (m, 4Н), 6,73 (dd, J=2,4, 8,0 Гц, 1H), 6,57 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 6,27 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,23 (d, J=4,8 Гц, 1H), 4,06 (d, J=7,2 Гц, 1H), 3,63-3,52 (m, 2H), 3,41-3,30 (m, 7H), 3,13-2,96 (m, 2H), 2,54 (d, J=2,0, 12,0 Гц, 2H), 2,28-2,10 (m, 1H), 1,85-1,63 (m, 4H), 1,49-1,31 (m, ПН).

[01012] Стадия 10. Получение 1-[4-[4-(диметоксиметил)-1-пиперидил]фенил]-2-фенилтетралин-6-ола

[01013] К раствору 1-[4-[(1R,2S)-6-трет-бутокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-(диметоксиметил)пиперидина (1,1 г, 2,14 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (45 мл) добавляли серную кислоту (2 М, 43 мл, 40 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 70°С в течение 1 часа. Тонкослойная хроматография (петролейный эфир : этилацетат = 3:1) указывала на то, что исходное вещество было полностью израсходовано, и образовалось одно новое пятно. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного раствора бикарбоната натрия до рН=7~8 и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (20 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Получали необходимое соединение, 1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]пиперидин-4-карбальдегид (900 мг, 2,14 ммоль, выход 99%, чистота 97%), в виде светло-желтого твердого вещества. LCMS MS (ESI) масса/заряд: 412,1 [M+1]⁺

[01014] Стадия 11. Получение этил-(Z)-3-(4-бромфенил)бут-2-еноата

[01015] К суспензии гидрида натрия (2,41 г, 60,29 ммоль, чистота 60%, 1,2 экв.) в тетрагидрофуране (100 мл), охлажденном до 0°С, медленно добавляли этил-2-диэтоксифосфорилацетат (13,52 г, 60,29 ммоль, 12 мл, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение 1 часа. Добавляли по каплям раствор 1-(4-бромфенил)этанона (10 г, 50,24 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (100 мл) и смесь перемешивали при 25°С в течение 12 часов. В данную смесь добавляли насыщенный водный хлорид аммония (50 мл). Смесь экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (ацетонитрил : вода = от 50:1 до 5:1). Получали этил-(Z)-3-(4-бромфенил)бут-2-еноат (6,6 г, 24,52 ммоль, выход 48,9%) в виде желтого масла, а также получали этил-(Е)-3-(4-бромфенил)бут-2-еноат (2,6 г, 9,66 ммоль, выход 19,3%) в виде желтого масла. LC/MS (ESI) масса/заряд: 270,0 [М+1]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,48 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,09 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 5,93 (s, 1H), 4,02 (q, J=7,2 Гц, 2Н), 2,16 (s, 3H), 1,13 (t, J=7,2 Гц, 3H); ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,58 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,48 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,05 (s, 1H), 4,02 (q, J=14,4 Гц, 2Н), 2,52 (s, 3H), 1,13 (q, J=14,4 Гц, 3H).

[01016] Стадия 12. Получение трет-бутил-4-[4-[(Z)-3-этокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилата

[01017] Смесь этил-(Z)-3-(4-бромфенил)бут-2-еноата (2,0 г, 7,43 ммоль, 1 экв.), трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата (2,08 г, 11,15 ммоль, 1,5 экв.), карбоната цезия (4,84 г, 14,86 ммоль, 2 экв.), ацетата палладия (334 мг, 1,49 ммоль, 0,2 экв.) и XPhos (708 мг, 1,49 ммоль, 0,2 экв.) в толуоле (30 мл) дегазировали и продували азотом три раза. Смесь перемешивали при 100°С в течение 12 часов в атмосфере азота. Полученную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток промывали насыщенным солевым раствором (30 мл × 2) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 2). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250 × 50 мм, 10 мкм; подвижная фаза : [вода (0,225% муравьиной кислоты)-ацетонитрил]; В%: от 50% ацетонитрила до 80% ацетонитрила, 30 мин.). Получали трет-бутил-4-[4-[(Z)-3-этокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилат (2,24 г, 5,83 ммоль, выход 78%, чистота 97%) в виде белого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 375,1 [М]⁺.

[01018] Стадия 13. Получение трет-бутил-4-[4-[(Е)-1-(бромметил)-3-этокси-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилата

[01019] К раствору трет-бутил-4-[4-[(Z)-3-этокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилата (1,0 г, 2,60 ммоль, 1 экв.) и 1-бромпирролидин-2,5-диона (462,93 мг, 2,60 ммоль, 1 экв.) в дихлорэтане (10 мл) добавляли бензоилпероксид (189 мг, 0,78 ммоль, 0,3 экв.). Смесь дегазировали и продували азотом 3 раза. Смесь перемешивали при 70°С в течение 12 часов в атмосфере азота. С помощью LC-MS показали, что обнаружено ~24% необходимого соединения. Реакционную смесь промывали насыщенным водным солевым раствором (25 мл × 2) и экстрагировали дихлорметаном (40 мл × 2). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = от 50/1 до 25:1). Получали трет-бутил-4-[4-[(Е)-1-(бромметил)-3-этокси-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилат (0,3 г, 0,43 ммоль, выход 16%, чистота 65%) в виде желтого масла. LC/MS (ESI) масса/заряд: 453,0 [М+1]⁺.

[01020] Стадия 14. Получение трет-бутил-4-[4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]фенил]пиперазин-1-карбоксилата

[01021] К смеси 3-аминопиперидин-2,6-диона (84,95 мг, 0,52 ммоль, 1,2 экв., соль HCl) в диметилформамиде (3 мл) добавляли N,N-диизопропилэтиламин (556 мг, 4,30 ммоль, 0,7 мл, 10 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 часа. Затем к реакционной смеси добавляли трет-бутил-4-[4-[(Е)-1-(бромметил)-3-этокси-3-оксо-проп-1-енил]фенил]пиперазин-1-карбоксилат (0,3 г, 0,43 ммоль, 1 экв.) и смесь перемешивали при 50°С в течение 0,5 часа. Полученную смесь дополнительно нагревали до 120°С и перемешивали в течение 12 часов. С помощью LC-MS показали, что обнаружено необходимое соединение. Реакционную смесь охлаждали, разбавляли этилацетатом, промывали насыщенным водным солевым раствором (25 мл × 2) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 2). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем растирания с метил-трет-бутиловым эфиром (15 мл). Получали продукт, трет-бутил-4-[4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]фенил]пиперазин-1-карбоксилат (175 мг, 0,23 ммоль, выход 52%, чистота 58%), в виде коричневого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 455,1 [М+1]⁺.

[01022] Стадия 15. Получение 3-[5-оксо-3-(4-пиперазин-1-илфенил)-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона

[01023] К раствору трет-бутил-4-[4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]фенил]пиперазин-1-карбоксилата (175 мг, 0,22 ммоль, 1 экв.) добавляли HCl в диоксане (4 М, 5 мл). Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 часа. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом с получением остатка. 3-[5-Оксо-3-(4-пиперазин-1-илфенил)-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион (260 мг, неочищенный, соль HCl) получали в виде коричневого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 355,1 [М+1]⁺.

[01024] Стадия 16. Получение 3-[3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]фенил]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона (иллюстративный PROTAC 89)

[01025] К раствору 3-[5-оксо-3-(4-пиперазин-1-илфенил)-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона (260 мг, 0,66 ммоль, 1 экв., соль HCl) в дихлорэтане (3 мл) добавляли триэтиламин (202 мг, 2,00 ммоль, 0,3 мл, 3 экв.) и 1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]пиперидин-4-карбальдегид (109 мг, 0,26 ммоль, 0,4 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 15 минут и затем добавляли ацетат борогидрида натрия (282 мг, 1,33 ммоль, 2 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение еще 11,5 часа. С помощью LC-MS показали, что обнаружено ~74% необходимого соединения. Реакционную смесь разбавляли дихлорметаном, промывали насыщенным солевым раствором (20 мл × 2) и экстрагировали дихлорметаном (30 мл × 2). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Phenomenex Synergi С18 150 × 25 мм, 10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225% муравьиной кислоты)-ацетонитрил]; В%: от 22% до 43% за 10 мин.). Получали продукт, 3-[3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]фенил]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион (38,7 мг, 0,04 ммоль, выход 7%, чистота 95%, формиатная соль), в виде коричневого твердого вещества.

[01026] LC/MS (ESI) масса/заряд: 750,3 [М+1]⁺;

[01027] ¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 10,95 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,50 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 7,21-7,06 (m, 3H), 6,96 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,83 (d, J=6,4 Гц, 2Н), 6,64 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,59 (d, J=2,4 Гц, 1H), 6,53 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,47 (dd, J=2,4, 8,4 Гц, 1H), 6,40 (s, 1H), 6,19 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,91 (dd, J=5,2, 13,2 Гц, 1H), 4,45-4,33 (m, 1H), 4,29-4,19 (m, 1H), 4,12 (d, J=4,8 Гц, 1H), 3,52 (s, 1H), 3,49-3,48 (m, 1H), 3,30 (s, 2Н), 3,24 (s, 3H), 3,04-2,79 (m, 3H), 2,60 (s, 1H), 2,52 (d, J=2,0 Гц, 2Н), 2,47 (b s, 4Н), 2,32-2,23 (m, 1H), 2,18 (d, J=6,8 Гц, 2Н), 2,13-2,03 (m, 1H), 1,99-1,88 (m, 1H), 1,80-1,59 (m, 4Н), 1,22-1,06 (m, 2Н).

[01028] Синтез иллюстративного PROTAC 102

3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]-6-оксо-пиридазин-1-ил]пиперидин-2,6-дион

[01029] Стадия 1. Получение трет-бутил-4-(5-хлор-6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[01030] К раствору 4,5-дихлор-1Н-пиридазин-6-она (5 г, 30,31 ммоль, 1 экв.) в диметилсульфоксиде (100 мл) добавляли диизопропилэтиламин (11,75 г, 90,92 ммоль, 3 экв.) и трет-бутилпиперазин-1-карбоксилата гидрохлорид (6,75 г, 30,31 ммоль, 1 экв.). Смесь перемешивали при 120°С в течение 3 часов. Полученную смесь охлаждали до комнатной температуры, фильтровали и гасили путем добавления воды (500 мл), затем экстрагировали этилацетатом (100 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (дихлорметан : метиловый спирт = от 200:1 до 100:1). Получали трет-бутил-4-(5-хлор-6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилат (8,18 г, 24,95 ммоль, выход 82%, чистота 96%) в виде желтого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 315,1 [М+1]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 11,95 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 3,64-3,57 (m, 4Н), 3,44-3,36 (m, 4Н), 1,49 (s, 9Н).

[01031] Стадия 2. Получение трет-бутил-4-(6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата

[01032] К раствору трет-бутил-4-(5-хлор-6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (1 г, 3,18 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (1 мл) и метаноле (9 мл) добавляли катализатор, представляющий собой палладий на активированном угле (200 мг, чистота 10%), в атмосфере азота. Суспензию дегазировали под вакуумом и несколько раз продували водородом. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (45 фунтов/кв. дюйм) при 25°С в течение 0,5 часа. Повышали основность реакционной смеси с помощью триэтиламина, а затем ее фильтровали и фильтрат концентрировали. Остаток применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Получали трет-бутил-4-(6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилат (1 г, неочищенный) в виде белого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 281,1 [М+1]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 12,22 (br s, 1H), 10,38-10,03 (m, 1H), 7,91 (d, J=2,8 Гц, 1H), 3,46-3,37 (m, 4Н), 3,04 (br d, J=7,2 Гц, 4Н), 1,41 (s, 9Н).

[01033] Стадия 3. Получение трет-бутил-4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-6-оксо-пиридазин-4-ил]пиперазин-1-карбоксилата

[01034] К раствору трет-бутил-4-(6-оксо-1Н-пиридазин-4-ил)пиперазин-1-карбоксилата (950 мг, 3,39 ммоль, 1 экв.) в диметилсульфоксиде (15 мл) добавляли гидрид натрия (271 мг, 6,78 ммоль, чистота 60%, 2 экв.) при 25°С с последующим добавлением 3-бромпиперидин-2,6-диона (650 мг, 3,39 ммоль, 1 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 12 часов. Полученную смесь фильтровали и гасили путем добавления воды (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (50 мл × 3), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Luna С18 250 × 50 мм, 10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225% муравьиной кислоты)-ACN]; В%: от 16% до 46% за 30 мин.). Получали трет-бутил-4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-6-оксо-пиридазин-4-ил]пиперазин-1-карбоксилат (190 мг, 0,48 ммоль, выход 14%) в виде белого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 392,1 [М+1]⁺; ¹Н ЯМР (400 МГц, DMSO) δ 8,02 (s, 1H), 7,72 (d, J=2,8 Гц, 1H), 5,74 (dd, J=5,3, 11,6 Гц, 1H), 3,62-3,53 (m, 4Н), 3,34 (s, 4Н), 2,95-2,83 (m, 1H), 2,82-2,58 (m, 2Н), 2,27-2,17 (m, 1H), 1,49 (s, 9Н).

[01035] Стадия 4. Получение 3-(6-оксо-4-пиперазин-1-ил-пиридазин-1-ил)пиперидин-2,6-диона

[01036] К раствору трет-бутил-4-[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-6-оксо-пиридазин-4-ил]пиперазин-1-карбоксилата (190 мг, 0,48 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (2 мл) добавляли гидрохлорид в диоксане (4 М, 10 мл, 78 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 0,5 часа. Полученную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением диоксана. Неочищенный продукт применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Получали соединение 3-(6-оксо-4-пиперазин-1-ил-пиридазин-1-ил)пиперидин-2,6-дион (120 мг, 0,36 ммоль, выход 75%, гидрохлорид) в виде светло-желтого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 292,0 [М+1]⁺.

[01037] Стадия 5. Получение 3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]-6-оксо-пиридазин-1-ил]пиперидин-2,6-диона (иллюстративный PROTAC 102)

[01038] К раствору 3-(6-оксо-4-пиперазин-1-ил-пиридазин-1-ил)пиперидин-2,6-диона (57 мг, 0,17 ммоль, 1,2 экв., гидрохлоридная соль) и 1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]пиперидин-4-карбальдегида (60 мг, 0,14 ммоль, 1 экв., см. стадию 10, синтез иллюстративного PROTAC 89) в 1,2-дихлорэтане (3 мл) добавляли триэтиламин (30 мг, 0,29 ммоль, 2 экв.) и смесь перемешивали при 25°С в течение 0,5 часа. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (93 мг, 0,43 ммоль, 3 экв.). Смесь дополнительно перемешивали при 25°С в течение 0,5 часа. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением 1,2-дихлорэтана. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Luna С18 150 × 25 мм, 5 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225% муравьиной кислоты)-ACN]; В%: от 18% до 38% за 7,8 мин.). Получали соединение 3-[4-[4-[[1-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенил]-4-пиперидил]метил]пиперазин-1-ил]-6-оксо-пиридазин-1-ил]пиперидин-2,6-дион (33 мг, 0,04 ммоль, выход 30%, чистота 99%, формиатная соль) в виде белого твердого вещества. LC/MS (ESI) масса/заряд: 687,3 [М+1]⁺; ¹H-ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ 10,96 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,04 (d, J=2,4 Гц, 1H), 7,18-7,10 (m, 3H), 6,83 (d, J=6,4 Гц, 2Н), 6,64 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,59 (d, J=2,4 Гц, 1H), 6,52 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 6,47 (dd, J=2,4, 8,4 Гц, 1H), 6,19 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 5,84 (d, J=2,8 Гц, 1H), 5,58 (dd, J=5,2, 12,4 Гц, 1H), 4,12 (d, J=4,4 Гц, 1H), 3,27 (s, 4Н), 3,02-2,79 (m, 3H), 2,57 (d, J=4,0 Гц, 1H), 2,52 (d, J=2,0 Гц, 4Н), 2,46 (s, 1H), 2,42 (d, J=4,8 Гц, 5Н), 2,20-2,06 (m, 3H), 2,02-1,93 (m, 1H), 1,73 (d, J=14,0 Гц, 3H), 1,61 (s, 1H), 1,19-1,07 (m, 2Н).

[01039] Синтез иллюстративного PROTAC 106

3-(4-(3-(1-(3-(4-((1R,2S)-6-гидрокси-2-фенил-1,2,3,4-тетрагидронафтален-1-ил)фенокси)пропил)пиперидин-4-ил)фенокси)-2-оксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)пиперидин-2,6-дион

[01040] Часть 1 схемы синтеза

[01041] Стадия 1. Получение трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоксилата

[01042] К смеси трет-бутил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоксилата (7,00 г, 22,64 ммоль, 1,00 экв.) и 3-йодфенола (4,98 г, 22,64 ммоль, 1,00 экв.) в диоксане (100 мл) и воде (10 мл) добавляли карбонат калия (6,26 г, 45,28 ммоль, 2,00 экв.) и циклопентил(дифенил)фосфан-дихлорпалладий-железо (1,66 г, 2,26 ммоль, 0,10 экв.) в атмосфере азота. Смесь перемешивали при 90°С в течение 4 часов в атмосфере азота. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь выливали в воду (500 мл) и фильтровали, фильтрат разбавляли этилацетатом (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (300 мл * 3), объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (150 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 8/1). Получали трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоксилат (4,00 г, 14,53 ммоль, выход 64%) в виде белого твердого вещества.

[01043] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 298,1 [М+23]⁺

[01044] Химическая формула: C₁₆H₂₁NO₃, молекулярная масса: 275,34.

[01045] Стадия 2. Получение трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата

[01046] К раствору трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)-3,6-дигидро-2Н-пиридин-1-карбоксилата (4,00 г, 14,53 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (4 мл) добавляли катализатор, представляющий собой палладий на активированном угле (1,00 г, чистота 10%), в атмосфере азота. Суспензию дегазировали под вакуумом и несколько раз продували водородом. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (40 фунтов/кв. дюйм) при 30°С в течение 4 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Получали неочищенный трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилат (4,00 г, неочищенный) в виде грязно-белого твердого вещества.

[01047] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 300 [М+23]⁺.

[01048] Химическая формула: C₁₆H₂₃NO₃, молекулярная масса: 211,36.

[01049] Стадия 3. Получение трет-бутил-4-[3-[(Е)-3-метокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енокси]фенил]пиперидин-1-карбоксилата

[01050] К раствору трет-бутил-4-(3-гидроксифенил)пиперидин-1-карбоксилата (2,00 г, 7,21 ммоль, 1,00 экв.) и метил-бут-2-иноата (1,06 г, 10,82 ммоль, 1,50 экв.) в изопропаноле (20 мл) добавляли 1,4-диазабицикло[2.2.2]октан (808 мг, 7,21 ммоль, 1,00 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 12 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь гасили водой (20 мл) при 15°С и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 3). Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором (20 мл × 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = от 20:1 до 10:1). Получали трет-бутил-4-[3-[(Е)-3-метокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енокси]фенил]пиперидин-1-карбоксилат (1,72 г, 4,58 ммоль, выход 63%) в виде белого твердого вещества.

[01051] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 398,1 [М+23]⁺.

[01052] Химическая формула: C₂₁H₂₉NO₅, молекулярная масса: 375,46.

[01053] Стадия 4. Получение трет-бутил-(Е)-4-(3-((1-бром-4-метокси-4-оксобут-2-ен-2-ил)окси)фенил)пиперидин-1-карбоксилата

[01054] К смеси трет-бутил-4-[3-[(Е)-3-метокси-1-метил-3-оксо-проп-1-енокси]фенил]пиперидин

[01055] -1-карбоксилата (1,2 г, 3,20 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорэтане (50 мл) добавляли раствор N-бромсукцинимида (853 мг, 4,79 ммоль, 1,5 экв.) и бензоилпероксида(232 мг, 0,96 ммоль, 0,3 экв.). Смесь перемешивали при 70°С в течение 12 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Смесь гасили путем добавления воды (200 мл), разбавляли этилацетатом (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3), объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (30 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : этилацетат = 100:1~40:1). Получали трет-бутил-4-[3-[(Е)-1-(бромметил)-3-метокси-3-оксо-проп-1-енокси]фенил]пиперидин-1-карбоксилат (960 мг, неочищенный) в виде желтого масла.

[01056] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 477,9 [М+23]⁺.

[01057] Химическая формула: C₂₁H₂₈BrNO₅, молекулярная масса: 454,35.

[01058] Стадия 5. Получение трет-бутил-4-[3-[[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]окси]фенил]пиперидин-1-карбоксилата

[01059] К смеси 3-аминопиперидин-2,6-диона (1,56 г, 9,46 ммоль, 5 экв., гидрохлорид) в диметилформамиде (20 мл) добавляли диизопропилэтиламин (2,45 г, 18,93 ммоль, 10 экв.). Смесь перемешивали при 14°С в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли трет-бутил-4-[3-[(E)-1-(бромметил)-3-метокси-3-оксо-проп-1-енокси]фенил]пиперидин-1-карбоксилат (860 мг, 1,89 ммоль, 1 экв.). И затем смесь перемешивали при 50°С в течение 0,5 часа. Затем смесь нагревали до 100°С в течение 12 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество, содержащее бромид, было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Смесь гасили путем добавления воды (200 мл), разбавляли этилацетатом (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3), объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (50 мл × 3), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали путем растирания с метил-трет-бутиловым эфиром (30 мл). Получали трет-бутил-4-[3-[[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]окси]фенил]пиперидин-1-карбоксилат (376 мг, 0,80 ммоль, выход 42%) в виде коричневого твердого вещества.

[01060] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 492,2 [М+23]⁺.

[01061] Химическая формула: C₂₅H₃₁N₃O₆, молекулярная масса: 469,53.

[01062] Стадия 6. Получение 3-[5-оксо-3-[3-(4-пиперидил)фенокси]-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона

[01063] К смеси трет-бутил-4-[3-[[1-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-5-оксо-2Н-пиррол-3-ил]окси]фенил]пиперидин-1-карбоксилата (420 мг, 0,89 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (10 мл) добавляли хлороводород/диоксан (4 М, 4 мл, 20 экв.). Смесь перемешивали при 14°С в течение 0,5 часа. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток применяли на следующей стадии без дополнительной очистки. Получали неочищенный 3-[5-оксо-3-[3-(4-пиперидил)фенокси]-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион (400 мг, неочищенный, гидрохлорид) в виде коричневого твердого вещества.

[01064] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 370 [М+1]⁺.

[01065] Химическая формула: C₂₀H₂₃N₃O₄, молекулярная масса: 369,41.

[01066] Часть 2 схемы синтеза

[01067] Стадия 7. Получение (цис)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралина

[01068] К раствору 4-[(1R,2S)-6-бензилокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенола (1,00 г, 2,46 ммоль, 1,00 экв.) в ацетоне (20 мл) добавляли карбонат калия (1,02 г, 7,38 ммоль, 3,00 экв.) и 1,3-дибромпропан (2,48 г, 12,30 ммоль, 1,3 мл, 5,00 экв.). Смесь перемешивали при 70°С в течение 12 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь гасили путем добавления воды (40 мл) при 15°С и экстрагировали этилацетатом (20 мл X 3). Объединенные органические слои промывали этилацетатом (20 мл X 2), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Phenomenex Synergi Мах-RP 250*50 мм* 10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225% FA)-ACN]; В%: от 70% до 100%, 30; 52% мин.). Получали (цис)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралин (850 мг, 1,61 ммоль, выход 65%, чистота 99%) в виде белого твердого вещества.

[01069] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 527,2 [M+1]⁺.

[01070] Химическая формула: С₃₂Н₃₁BrO₂, молекулярная масса: 527,49.

[01071] Стадия 8. Получение (1S,2R)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралина и (1R,2S)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралина.

[01072] Энантиомеры (цис)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралина (850 мг, 1,61 ммоль, 1,00 экв.) разделяли с применением сверхкритической флюидной хроматографии. Остаток разделяли с помощью сверхкритической флюидной хроматографии (колонка: OJ (250 мм*30 мм, 10 мкм); подвижная фаза: [0,1% NH3H2O МЕОН]; В%: от 60% до 60%, 20,9 мин.; 300 мин.); расход: 2 мл/мин.; длина волны: 220 нм.

[01073] Получали (1S,2R)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралин (350 мг, 0,65 ммоль, выход 81%, чистота 97%) в виде белого твердого вещества.

[01074] Получали (1R,2S)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралин (350 мг, 0,66 ммоль, выход 82%, чистота 99%) в виде белого твердого вещества.

[01075] Химическая формула: C₃₂H₃₁BrO₂, молекулярная масса: 527,49.

[01076] Стадия 9. Получение 3-[3-[3-[1-[3-[4-[(1R,2S)-6-бензилокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенокси]пропил]-4-пиперидил]фенокси]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона

[01077] К смеси (1R,2S)-6-бензилокси-1-[4-(3-бромпропокси)фенил]-2-фенилтетралина (164 мг, 0,31 ммоль, 1,1 экв.) и 3-[5-оксо-3-[3-(4-пиперидил)фенокси]-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона (115 мг, 0,28 ммоль, 1 экв., гидрохлорид) в ацетонитриле (5 мл) добавляли диизопропилэтиламин (110 мг, 0,85 ммоль, 3 экв.) и йодид калия (47 мг, 0,28 ммоль, 1 экв.). Смесь перемешивали при 100°С в течение 1,5 часов. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество, содержащее амин, было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Смесь гасили путем добавления воды (100 мл), разбавляли этилацетатом (15 мл), экстрагировали этилацетатом (20 мл X 4), объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (20 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан: метанол = 10:1). Получали 3-[3-[3-[1-[3-[4-[(1R,2S)-6-бензилокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенокси]пропил]-4-пиперидил]фенокси]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион (100 мг, 0,12 ммоль, выход 43%) в виде коричневого твердого вещества.

[01078] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 816,4 [М+1]⁺.

[01079] Химическая формула: C₅₂H₅₃N₃O₆, молекулярная масса: 815,99.

[01080] Стадия 10. Получение 3-[3-[3-[1-[3-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенокси]пропил]-4-пиперидил]фенокси]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона

[01081] К смеси 3-[3-[3-[1-[3-[4-[(1R,2S)-6-бензилокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенокси]пропил]-4-пиперидил]фенокси]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-диона (100 мг, 0,12 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (5 мл) добавляли трибромид бора (92 мг, 0,37 ммоль, 3 экв.) при -68°С. Смесь перемешивали при -68°С в течение 30 минут. С помощью LC-MS показывали, что исходное вещество было полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Остаток разбавляли водой (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл X 2). Объединенные органические слои промывали насыщенными солевыми растворами (20 мл X 3), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Boston Green ODS 150*30 5 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225%FA)-ACN]; В%: от 34% до 55%,10 мин.). Получали 3-[3-[3-[1-[3-[4-[(1R,2S)-6-гидрокси-2-фенилтетралин-1-ил]фенокси]пропил]-4-пиперидил]фенокси]-5-оксо-2Н-пиррол-1-ил]пиперидин-2,6-дион (16 мг, 0,02 ммоль, выход 16%, чистота 97%, формиат) в виде белого твердого вещества.

[01082] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 726,3 [М+1]⁺.

[01083] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01084] δ=10,92 (s, 1H), 9,48-8,87 (m, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,41-7,34 (m, 1H), 7,23-7,06 (m, 6Н), 6,82 (d, J=6,8 Гц, 2Н), 6,66-6,57 (m, 2Н), 6,55-6,44 (m, 3Н), 6,25 (d, J=8,8 Гц, 2Н), 4,91-4,82 (m, 2Н), 4,18-3,97 (m, 3Н), 3,84 (t, J=6,4 Гц, 2Н), 3,30-3,27 (m, 2Н), 3,02-2,82 (m, 5Н), 2,55-2,52 (m, 3Н), 2,39 (t, J=6,9 Гц, 2Н), 2,26 (dd, J=4,8, 13,6 Гц, 1H), 2,11-1,58 (m, 11Н).

[01085] Химическая формула: C₄₅H₄₇N₃O₆, молекулярная масса: 725,87.

[01086] Синтез иллюстративного PROTAC 107

3-(8-((2-(4-(2-(4-((2-(4-Бромфенил)-6-гидроксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этил)амино)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-дион

[01087] Часть 1 схемы синтеза:

[01088] Часть 2 схемы синтеза:

[01089] Стадия 1. Синтез трет-бутил-4-[2-(4-бензилоксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилата

[01090] К раствору трет-бутил-4-(2-хлорэтил)пиперазин-1-карбоксилата (1,00 г, 4,02 ммоль, 1,00 экв.), 4-бензилоксифенола (965 мг, 4,82 ммоль, 1,20 экв.) в N,N-диметилформамиде (20 мл) добавляли карбонат цезия (1,57 г, 4,82 ммоль, 1,20 экв.) и йодид калия (66 мг, 0,4 ммоль, 0,10 экв.) в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 10 часов. С помощью TLC (петролейный эфир/этилацетат = 3/1) и LCMS показывали, что большая часть исходного вещества была израсходована. К смеси добавляли воду (100 мл), полученную смесь экстрагировали этилацетатом (50 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (80 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = от 50/1 до 3/1). Получали трет-бутил-4-[2-(4-бензилоксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилат (1,4 г, 3,39 ммоль, выход 84%) в виде бесцветного масла.

[01091] Химическая формула: C24H32N2O4, молекулярная масса: 412,5.

[01092] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 32.

[01093] ¹Н ЯМР: (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d)

[01094] δ: 7,46-7,29 (m, 5Н), 6,95-6,88 (m, 2Н), 6,88-6,81 (m, 2Н), 5,02 (s, 2Н), 4,07 (t, J=5,8 Гц, 2Н), 3,51-3,42 (m, 4Н), 2,80 (t, J=5,8 Гц, 2Н), 2,56-2,48 (m, 4Н), 1,47 (s, 9Н).

[01095] Стадия 2. Синтез трет-бутил-4-[2-(4-гидроксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилата

[01096] К раствору трет-бутил-4-[2-(4-бензилоксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилата (1,40 г, 3,39 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (20 мл) добавляли палладий на угле (200 мг, чистота 10%) в атмосфере азота. Суспензию дегазировали под вакуумом и несколько раз продували водородом. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (50 фунтов/кв. дюйм) при 20°С в течение 4 часов. С помощью TLC (петролейный эфир/этилацетат = 1/1) показывали, что большая часть исходного вещества была израсходована. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали в вакууме. Получали трет-бутил-4-[2-(4-гидроксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилат (1 г, 3,07 ммоль, выход 90%, чистота 99%) в виде светло-желтого твердого вещества.

[01097] Химическая формула: C17H26N2O4, молекулярная масса: 322,4.

[01098] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 26.

[01099] ¹Н ЯМР: (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d)

[01100] δ: 6,74 (s, 4Н), 4,04 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 3,54-3,38 (m, 5Н), 2,79 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,53 (s, 4Н), 1,46 (s, 9Н).

[01101] Стадия 3. Синтез трет-бутил-4-(2-(4-((2-(4-бромфенил)-6-метокси-1-оксидобензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-карбоксилата

[01102] К раствору трет-бутил-4-[2-(4-гидроксифенокси)этил]пиперазин-1-карбоксилата (234 мг, 0,72 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (5 мл) добавляли NaH (29 мг, 0,72 ммоль, 60% минеральное масло, 1,00 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 0,5 часа. Добавляли 3-бром-2-(4-бромфенил)-6-метокси-1-оксидобензотиофен-1-ий (300 мг, 0,72 ммоль, 1,00 экв.) и затем смесь перемешивали при 20°С в течение 1 часа. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь гасили водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (10 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением трет-бутил-4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-метокси-1-оксидобензотиофен-1-ий-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-карбоксилата (430 мг, 0,66 ммоль, выход 90%) в виде желтого твердого вещества, которое непосредственно применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

[01103] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 657,0 [М+1]⁺.

[01104] ¹Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃)

[01105] δ: 7,65 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 7,52-7,46 (m, 3Н), 7,05-6,89 (m, 4Н), 6,81 (d, J=8,4 Гц, 2Н), 4,05 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 3,89 (s, 3Н), 3,50-3,42 (m, 4Н), 2,81 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,52 (s, 4Н), 1,47 (s, 9Н).

[01106] Химическая формула: C₃₂H₃₅BrN₂O₆S, молекулярная масса: 655,60.

[01107] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 35.

[01108] Стадия 4. Синтез трет-бутил-4-(2-(4-((2-(4-бромфенил)-6-метоксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-карбоксилата

[01109] К раствору трет-бутил-4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-метокси-1-оксидобензотиофен-1-ий-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-карбоксилата (370 мг, 0,56 ммоль, 1,00 экв.) в ацетонитриле (6 мл) добавляли йодид натрия (254 мг, 1,69 ммоль, 3,00 экв.) и триметилхлорсилан (123 мг, 1,13 ммоль, 2,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 часа. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором сульфита натрия (2 мл), разбавляли водой (15 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл × 2). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (10 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта, трет-бутил-4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-метокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-карбоксилата (350 мг, неочищенный), в виде желтого масла, которое непосредственно применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

[01110] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 639,0 [М+1]⁺.

[01111] Химическая формула: C₃₂H₃₅BrN₂O₅S, молекулярная масса: 639,60.

[01112] Стадия 5. Синтез 2-(4-бромфенил)-3-(4-(2-(пиперазин-1-ил)этокси)фенокси)бензо[b]тиофен-6-ола

[01113] К раствору трет-бутил-4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-метокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-карбоксилата (350 мг, 0,55 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (6 мл) добавляли трибромид бора (410 мг, 1,64 ммоль, 0,16 мл, 3,00 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 1 часа. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь гасили насыщенным раствором бикарбоната натрия (5 мл) при 0°С, разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали дихлорметаном (10 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (5 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-(4-бромфенил)-3-[4-(2-пиперазин-1-илэтокси)фенокси]бензотиофен-6-ола (250 мг, неочищенный) в виде желтого твердого вещества, которое непосредственно применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

[01114] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 521,0 [М+1]⁺.

[01115] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01116] δ:1,65-7,56 (m,4H), 7,31 (d,J=2,0 Гц, 1H), 7,14 (d, J=8,4 Гц, 1H), 6,86 (s, 4Н), 6,83 (dd, J=2,0, 8,4 Гц, 1H), 5,75 (s, 1H), 3,97 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,78-2,66 (m, 4Н), 2,61 (t, J=5,6 Гц, 2Н), 2,40 (s, 4Н), 2,45-2,34 (m, 1H).

[01117] Химическая формула: C₂₆H₂₅BrN₂O₃S, молекулярная масса: 525,46.

[01118] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 25.

[01119] Стадия 6. Синтез 2-метил-8-нитро-4Н-бензо[d][1,3]оксазин-4-она

[01120]

[01121] Смесь 2-амино-3-нитробензойной кислоты (2 г, 10,98 ммоль, 1,00 экв.) в ангидриде уксусной кислоты (10 мл) перемешивали при 120°С в течение дополнительных 16 часов. TLC (петролейный эфир:этилацетат) указывала на то, что образовалось новое пятно. Реакционную смесь концентрировали с удалением растворителя. Остаток растирали со смесью петролейный эфир:этилацетат = 2:1 (30 мл), затем фильтровали. Осадок на фильтре получали в виде необходимого продукта, 2-метил-8-нитро-3,1-бензоксазин-4-она (600 мг, 2,91 ммоль, выход 26%).

[01122] ¹H ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01123] δ: 8,42-8,31 (m, 2Н), 7,72 (t, J=8,0 Гц, 1H), 3,42 (s, 3Н).

[01124] Химическая формула: C₉H₆N₂O₄, молекулярная масса: 206,15.

[01125] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 6.

[01126] Стадия 7. Синтез 3-(2-метил-8-нитро-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[01127] К раствору 2-метил-8-нитро-3,1-бензоксазин-4-она (1 г, 4,85 ммоль, 1,00 экв.) и 3-аминопиперидин-2,6-диона (956 мг, 5,82 ммоль, 1,20 экв., гидрохлорид) в N,N-диметилформамиде (15 мл) добавляли трифенилфосфит (2,26 г, 7,27 ммоль, 1,9 мл, 1,50 же). Смесь перемешивали при 100°С в течение 14 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь разбавляли водой (40 мл), экстрагировали этилацетатом (30 мл × 2). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл × 3), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта, 3-(2-метил-8-нитро-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-диона (450 мг, неочищенный), который применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[01128] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 316,9 [М+1]⁺.

[01129] Химическая формула: C₁₄H₁₂N₄O₅, молекулярная масса: 316,27.

[01130] Стадия 8. Синтез 3-(8-амино-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[01131] К раствору 3-(2-метил-8-нитро-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-диона (450 мг, 1,42 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (50 мл) добавляли катализатор, представляющий собой палладий на угле (100 мг, 0,14 ммоль, чистота 10%), в атмосфере азота. Суспензию дегазировали и продували водородом 3 раза. Смесь перемешивали в атмосфере водорода (15 фунтов/кв. дюйм) при 20°С в течение 16 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали с получением неочищенного продукта, 3-(8-амино-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-диона (380 мг, 1,33 ммоль, выход 94%), который применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[01132] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 287,1 [М+1]⁺.

[01133] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01134] δ: 11,01 (s, 1H), 7,20-7,10 (m, 2Н), 6,97 (dd, J=2,0, 7,2 Гц, 1H), 5,67 (s, 2Н), 5,27-5,18 (m, 1H), 2,91-2,79 (m, 1H), 2,70-2,58 (m, 5Н), 2,21-2,10 (m, 1H).

[01135] Химическая формула: C₁₄H₁₄N₄O₃, молекулярная масса: 286,29.

Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 14.

[01137] Стадия 9. Синтез 2-(4-бромфенил)-3-(4-(2-(4-(2,2-диметоксиэтил)пиперазин-1-ил)этокси)фенокси)бензо[b]тиофен-6-ола

[01138] 2-(4-Бромфенил)-3-[4-(2-пиперазин-1-илэтокси)фенокси]бензотиофен-6-ол (250 мг, 0,33 ммоль, 1,00 экв., гидробромид), диизопропилэтиламин (213 мг, 1,65 ммоль, 0,3 мл, 5,00 экв.) и 2-бром-1,1-диметокси-этан (112 мг, 0,66 ммоль, 0,1 мл, 2,00 экв.) помещали в пробирку для микроволновой обработки в N-метил-2-пирролидон (3,00 мл). Герметично закрытую пробирку нагревали при 150°С в течение 1 часа с помощью микроволнового излучения. Согласно TLC (дихлорметан:метанол = 10:1, _Rf=0,52) реакция была завершена, и образовалось новое пятно. Реакционную смесь разбавляли водой (10 мл) и экстрагировали этилацетатом (5 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (5 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью препаративной TLC (дихлорметан:метанол = 10:1) с получением 2-(4-бромфенил)-3-[4-[2-[4-(2,2-диметоксиэтил)пиперазин-1-ил]этокси]фенокси]бензотиофен-6-ола (120 мг, 0,2 ммоль, выход 59%) в виде желтого твердого вещества.

[01139] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 615,0 [М+1]⁺.

[01140] Химическая формула: C₃₀H₃₃BrN₂O₅S, молекулярная масса: 613,56.

[01141] Стадия 10. Синтез 2-(4-(2-(4-((2-(4-бромфенил)-6-гидроксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)ацетальдегида

[01142] К раствору 2-(4-бромфенил)-3-[4-[2-[4-(2,2-диметоксиэтил)пиперазин-1-ил]этокси]фенокси]бензотиофен-6-ола (120 мг, 0,20 ммоль, 1,00 экв.) в диоксане (2 мл) добавляли хлористоводородную кислоту (2 М, 2 мл, 20,45 экв.). Смесь перемешивали при 50°С в течение 2 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением диоксана и воды с получением неочищенного продукта, 2-[4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-гидрокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-ил]ацетальдегида (100 мг, неочищенный), который применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[01143] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 585,0 [М+18]⁺.

[01144] Химическая формула: C₂₈H₂₇BrN₂O₄S, молекулярная масса: 567,49.

[01145] Стадия 11. Синтез 3-(8-((2-(4-(2-(4-((2-(4-бромфенил)-6-гидроксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этил)амино)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[01146] К раствору 2-[4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-гидрокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-ил]ацетальдегида (1000 мг, 0,18 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (2 мл) добавляли уксусную кислоту (0,2 мл) и 3-(8-амино-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-дион (50 мг, 0,18 ммоль, 1,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 0,5 часа. Добавляли боран-2-метилпиридин (38 мг, 0,35 ммоль, 2,00 экв.), затем смесь перемешивали при 20°С в течение 2 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Boston Green ODS 150*30 5 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225%FA)-ACN]; В%: от 25% до 55%, 10 мин.). Затем собранную фракцию концентрировали с удалением большей части ацетонитрила и добавляли хлористоводородную кислоту (1 М, 2 мл). Раствор лиофилизировали с получением 3-[8-[2-[4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-гидрокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-ил]этиламино]-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил]пиперидин-2,6-диона (10 мг, 0,01 ммоль, выход 7%, гидрохлорид) в виде желтого твердого вещества.

[01147] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 839,0 [М+1]⁺.

[01148] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01149] δ: 11,01 (s, 1H), 10,04 (s, 1H), 7,62 (s, 4Н), 7,33 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,31-7,23 (m, 1H), 7,21-7,11 (m, 2Н), 7,01 (br d, J=8,0 Гц, 1H), 6,92 (q, J=8,8 Гц, 4Н), 6,85 (dd, J=2,0, 8,8 Гц, 1H), 5,25 (dd, J=5,2, 13,2 Гц, 1H), 4,29 (s, 2Н), 3,68-3,45 (m, 14Н), 2,87-2,79 (m, 1H), 2,69-2,61 (m, 5Н), 2,19-2,10 (m, 1H).

[01150] Химическая формула: C₄₂H₄₁BrN₆O₆S, молекулярная масса: 837,78.

[01151] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 40.

[01152] Синтез иллюстративного PROTAC 108

3-(8-(2-(4-(2-(4-((2-(4-Бромфенил)-6-гидроксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4H)-ил)пиперидин-2,6-дион

[01153] Схема синтеза:

[01154] Стадия 1. Синтез аллил-3-(аллилокси)-2-нитробензоата

[01155] К раствору 3-гидрокси-2-нитробензойной кислоты (1 г, 5,46 ммоль, 1,00 экв.) в N,N-диметилформамиде (15 мл) добавляли карбонат калия (3 г, 21,84 ммоль, 4,00 экв.) и 3-бромпроп-1-ен (2,64 г, 21,84 ммоль, 4,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 15 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Остаток разбавляли водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением аллил-3-аллилокси-2-нитробензоата (1,30 г, неочищенный) в виде желтого масла.

[01156] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 286,0 [М+23]⁺.

[01157] Химическая формула: C₁₃H₁₃NO₅, молекулярная масса: 263,25.

[01158] Стадия 2. Синтез 3-(аллилокси)-2-нитробензойной кислоты

[01159] К раствору аллил-3-аллилокси-2-нитробензоата (1,44 г, 5,47 ммоль, 1,00 экв.) в тетрагидрофуране (40 мл) добавляли моногидрат гидроксида лития (2 М, 11 мл, 4,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь регулировали до рН=(4~5) с помощью хлористоводородной кислоты (2 М, 10 мл), разбавляли водой (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (40 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 3-аллилокси-2-нитробензойной кислоты (1,20 г, неочищенный), которую применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.

[01160] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 246,0 [М+23]⁺.

[01161] ¹Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃)

[01162] δ: 7,70 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,52 (t, J=8,0 Гц, 1H), 7,32 (d, J=8,0 Гц, 1H), 6,07-5,93 (m, 1H), 5,47-5,29 (m, 2Н), 4,70 (d, J=5,2 Гц, 2Н).

[01163] Химическая формула: C₁₀H₉NO₅, молекулярная масса: 223,18.

[01164] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 8.

[01165] Стадия 3. Синтез 3-(аллилокси)-2-аминобензойной кислоты

[01166] К раствору 3-аллилокси-2-нитробензойной кислоты (1,2 г, 5,38 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (20 мл) и воде (5 мл) медленно добавляли железо (1,2 г, 21,52 ммоль, 4,00 экв.), хлорид аммония (1,44 г, 26,90 ммоль, 5,00 экв.) при 20°С. Смесь перемешивали при 80°С в течение 2 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь фильтровали и фильтрат концентрировали с получением 3-аллилокси-2-аминобензойной кислоты (850 мг, неочищенная), применяемой на следующей стадии без дополнительной очистки.

[01167] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 194,1 [М+1]⁺.

[01168] ¹Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃)

[01169] δ: 7,54 (s, 1H), 6,99-6,44 (m, 2Н), 6,07 (s, 2Н), 5,39 (s, 2Н), 4,59 (s, 3Н), 4,76-4,40 (m, 1Н).

[01170] Химическая формула: C₁₀H₁₁NO₃, молекулярная масса: 193,20.

[01171] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 11.

[01172] Стадия 4. Синтез 2-ацетамидо-3-(аллилокси)бензойной кислоты

[01173] К раствору 3-аллилокси-2-аминобензойной кислоты (800 мг, 4,14 ммоль, 1,00 экв.) в ацетонитриле (10 мл) добавляли имидазол (282 мг, 4,14 ммоль, 1,00 экв.) и ацетилхлорид (650 мг, 8,28 ммоль, 2,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь разбавляли водой (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (15 мл × 3). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (20 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме с получением 2-ацетамидо-3-аллилоксибензойной кислоты (900 мг, неочищенная) в виде желтого твердого вещества, которое непосредственно применяли для следующей стадии без дополнительной очистки.

[01174] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 236,1 [М+1]⁺.

[01175] Химическая формула: C₁₂H₁₃NO₄, молекулярная масса: 235,24.

[01176] Стадия 5. Синтез 3-(8-(аллилокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[01177] К раствору 2-ацетамидо-3-аллилоксибензойной кислоты (800 мг, 3,40 ммоль, 1,00 экв.) и 3-аминопиперидин-2,6-диона (672 мг, 4,08 ммоль, 1,20 экв., гидрохлорид) в N,N-диметилформамиде (15 мл) добавляли трифенилфосфит (1,58 г, 5,10 ммоль, 1,50 экв.) и имидазол (232 мг, 92,60 ммоль, 27,23 экв.). Смесь перемешивали при 100°С в течение 16 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь разбавляли водой (40 мл) и экстрагировали этилацетатом (20 мл × 2). Объединенную органическую фазу промывали насыщенным солевым раствором (20 мл × 2), высушивали с помощью безводного сульфата натрия, фильтровали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (дихлорметан:метанол = от 100:1 до 20:1) с получением 3-(8-аллилокси-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-диона (420 мг, 1,28 ммоль, выход 38%) в виде светло-желтого твердого вещества.

[01178] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 328,2 [М+1]⁺.

[01179] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01180] δ: 11,03 (s, 1H), 7,58 (dd, J=1,6, 7,6 Гц, 1H), 7,43-7,32 (m, 2Н), 6,17-6,01 (m, 1H), 5,45 (dd, J=1,6, 17,2 Гц, 1H), 5,34-5,25 (m, 2Н), 4,74 (d, J=4,8 Гц, 2Н), 2,88-2,79 (m, 1H), 2,70-2,55 (m, 5Н), 2,20-2,12 (m, 1H).

[01181] Химическая формула: C₁₇H₁₇N₃O₄, молекулярная масса: 327,33.

[01182] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 17.

[01183] Стадия 6. Синтез 2-((3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-8-ил)окси)ацетальдегида

[01184] Озон барботировали через раствор 3-(8-аллилокси-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил)пиперидин-2,6-диона (200 мг, 0,61 ммоль, 1,00 экв.) в дихлорметане (8 мл) и метаноле (2 мл) при -70°С в течение 30 минут. После этого избыток озона продували азотом и добавляли диметилсульфид (380 мг, 6,11 ммоль, 10,00 экв.) при -70°С. Смесь перемешивали при 20°С в течение 16 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением метанола, дихлорметана и диметилсульфида с получением 2-[3-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-2-метил-4-оксохиназолин-8-ил]оксиацетальдегида (220 мг, неочищенный) в виде коричневого твердого вещества.

[01185] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 362,0 [М+23]⁺.

[01186] Химическая формула: C₁₆H₁₅N₃O₅, молекулярная масса: 329,31.

[01187] Стадия 7. Синтез 3-(8-(2-(4-(2-(4-((2-(4-бромфенил)-6-гидроксибензо[b]тиофен-3-ил)окси)фенокси)этил)пиперазин-1-ил)этокси)-2-метил-4-оксохиназолин-3-(4Н)-ил)пиперидин-2,6-диона

[01188] К раствору 2-[3-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-2-метил-4-оксохиназолин-8-ил]оксиацетальдегида (120 мг, 0,36 ммоль, 1,00 экв.) в метаноле (4 мл) добавляли 2-(4-бромфенил)-3-[4-(2-пиперазин-1-илэтокси)фенокси]бензотиофен-6-ол (110 мг, 0,18 ммоль, 0,50 экв., гидробромид, промежуточное соединение из синтеза иллюстративного PROTAC 107, см. выше) и уксусную кислоту (44 мг, 0,72 ммоль, 2,00 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 0,5 часа. Добавляли цианоборгидрид натрия (44 мг, 0,73 ммоль, 2,00 экв.) при 20°С и затем смесь перемешивали при 20°С в течение 2 часов. С помощью LCMS показывали завершение реакции, и можно было определять необходимое значение MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением метанола. Остаток очищали с помощью препаративной HPLC (колонка: Phenomenex Synergi С18 150 * 30 мм * 4 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225%FA)-ACN]; В%: от 25% до 55%, 12 мин.). Затем собранную фракцию концентрировали с удалением большей части ацетонитрила и добавляли хлористоводородную кислоту (1 М, 2 мл). Раствор лиофилизировали с получением 3-[8-[2-[4-[2-[4-[2-(4-бромфенил)-6-гидрокси-бензотиофен-3-ил]оксифенокси]этил]пиперазин-1-ил]этокси]-2-метил-4-оксохиназолин-3-ил]пиперидин-2,6-диона (18 мг, 0,02 ммоль, выход 5%, чистота 91%, гидрохлорид) в виде белого твердого вещества.

[01189] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 840,2 [М+1]⁺.

[01190] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆)

[01191] δ: 11,06 (s, 1H), 9,99 (s, 1H), 7,66 (d, J=7,2 Гц, 1H), 7,63 (s, 4Н), 7,54-7,42 (m, 1H), 7,52-7,42 (m, 1H), 7,33 (d, J=2,0 Гц, 1H), 7,15 (d, J=8,8 Гц, 1H), 6,97-6,91 (m, 4Н), 6,84 (dd, J=2,0, 8,8 Гц, 1H), 5,28 (dd, J=5,2, 13,2 Гц, 1H), 4,54 (s, 2Н), 4,27 (s, 4Н), 3,56-3,49 (m, 10Н), 2,82-2,80 (m, 1H), 2,65-2,59 (m, 5Н), 2,21-2,14 (m, 1H).

[01192] Химическая формула: C₄₂H₄₀BrN₅O₇S, молекулярная масса: 838,77.

[01193] Общее число пиков, соответствующих атому Н, из данных Н ЯМР: 40.

[01194] Синтез иллюстративного PROTAC 112

2-(2,6-Диоксопиперидин-3-ил)-8-(14-((5-(5-метил-5Н-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-2-ил)окси)-3,6,9,12-тетраоксатетрадепил)-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-дион

[01195] Схема реакции:

[01196] Стадия 1. Получение 1-трет-бутил-4-метил-4-(2-этокси-2-оксоэтил)-пиперидин-1,4-дикарбоксилата

[01197] К раствору этил-2-бромацетата (8,65 г, 51,80 ммоль, 5,7 мл, 1 экв.) в тетрагидрофуране (1000 мл) добавляли диизопропиламид лития (2 М, 39 мл, 1,5 экв.) при -78°С. Смесь перемешивали при -78°С в течение 1 часа. Затем добавляли O1-трет-бутил-O4-метилпиперидин-1,4-дикарбоксилат (20 г, 82,2 ммоль, 1,59 экв.) и смесь перемешивали при данной температуре в течение 1 ч. После этого смесь перемешивали при 15°C в течение еще 24 часов. Тонкослойная хроматография (петролейный эфир:этилацетат = 5:1) указывала на то, что оставалось 50% реагирующего вещества 1, и было обнаружено одно основное новое пятно (R_f=0,46) с более низкой полярностью. Реакционную смесь гасили путем добавления водного раствора хлорида аммония 500 мл и затем экстрагировали этилацетатом 1500 мл (500 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором 1500 мл (500 мл × 3), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле. Получали О1-трет-бутил-О4-метил-4-(2-этокси-2-оксо-этил)пиперидин-1,4-дикарбоксилат (3,8 г, 11,5 ммоль, выход 22%) в виде коричневого масла.

[01198] ¹Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃) δ 4,07-3,95 (m, 2Н), 3,73-3,50 (m, 5Н), 3,06 (br s, 2Н), 2,50 (br s, 2H), 1,99 (d, J=13,6 Гц, 2H), 1,47-1,38 (m, 2H), 1,38-1,33 (m, 9H), 1,21-1,10 (m, 3Н).

[01199] Химическая формула: C₁₆H₂₇NO₆, молекулярная масса: 329,39.

[01200] Стадия 2. Получение 1-(трет-бутоксикарбонил)-4-(карбоксиметил)пиперидин-4-карбоновой кислоты

[01201] К раствору O1-трет-бутил-O4-метил-4-(2-этокси-2-оксо-этил)пиперидин-1,4-дикарбоксилата (3,8 г, 11,50 ммоль, 1 экв.) в тетрагидрофуране (20 мл), воде (15 мл) добавляли гидроксид натрия (2,3 г, 57,7 ммоль, 5 экв.) и метанол (10 мл). Смесь перемешивали при 25°С в течение 36 ч. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией показывали, что реагирующее вещество 1 израсходовано полностью. Реакционную смесь разбавляли водой (20 мл) и концентрировали при пониженном давлении с удалением тетрагидрофурана и метанола. Водный слой промывали петролейным эфиром (30 мл × 2), затем повышали кислотность с помощью раствора хлористоводородной кислоты до рН~5, экстрагировали этилацетатом (30 мл × 3). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (60 мл), высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Получали 1-трет-бутоксикарбонил-4-(карбоксиметил)пиперидин-4-карбоновую кислоту (2,9 г, 10 ммоль, выход 87%) в виде коричневого твердого вещества.

[01202] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 286.

[01203] ¹H ЯМР: (400 МГц, CDCl₃) δ 3,69 (br s, 2H), 3,36-3,23 (m, 2H), 2,72 (s, 2H), 2,19-2,12 (m, 2H), 1,56 (br t, J=9,7 Гц, 1H), 1,48 (s, 10H).

[01204] Химическая формула: C₁₃H₂₁NO₆, молекулярная масса: 287,31.

[01205] Стадия 3. Получение трет-бутил-2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,3-диоксо-2,8-диазаспиро[4,5]декан-8-карбоксилата

[01206] Смесь 1-трет-бутоксикарбонил-4-(карбоксиметил)пиперидин-4-карбоновой кислоты (1,9 г, 6,61 ммоль, 1 экв.) и ангидрида уксусной кислоты (21,80 г, 213,54 ммоль, 20 мл, 32,29 экв.) дегазировали и продували азотом 3 раза, а затем смесь перемешивали при 120°С в течение 0,5 часа в атмосфере азота. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с удалением ангидрида уксусной кислоты. Остаток разбавляли пиридином (20 мл) и добавляли 3-аминопиперидин-2,6-дион (1,31 г, 7,94 ммоль, 1,2 экв., гидрохлорид). Смесь перемешивали при 140°С в атмосфере азота в течение 12 ч. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией показали, что реагирующее вещество 1 израсходовано полностью, и обнаружили один основной пик с необходимым значением массы. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток промывали водой (10 мл × 3) с получением продукта. Получали трет-бутил-2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1,3-диоксо-2,8-диазаспиро[4,5]декан-8-карбоксилат (1,2 г, 3,2 ммоль, выход 47%) в виде серого твердого вещества.

[01207] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 402 [М+23]⁺

[01208] ¹Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃) δ 7,91 (s, 1H), 4,74 (dd, J=5,3, 12,3 Гц, 1H), 3,94 s, 2Н), 2,97 (t, J=11,7 Гц, 2Н), 2,80 (d, J=15,4 Гц, 1H), 2,75-2,55 (m, 4Н), 2,00-1,88 (m, 3Н), 1,50 (s, 2Н), 1,40 (s, 9Н).

[01209] Химическая формула: C₁₈H₂₅N₃O₆, молекулярная масса: 379,41.

[01210] Стадия 4. Получение 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-диона

[01211] К раствору трет-бутил-2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-1,3-диоксо-2,8-диазаспиро[4,5]декан-8-карбоксилата (1,2 г, 3,16 ммоль, 1 экв.) в диоксане (15 мл) добавляли раствор хлористоводородной кислоты (4 M в диоксане, 20 мл, 25,3 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Получали 2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-дион (1,2 г, гидрохлорид) в виде серого твердого вещества.

[01212] ¹Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,08 (s, 1H), 8,93 (s, 1H), 8,64 (s, 1H), 4,95 (dd, J=5,4, 12,8 Гц, 1H), 3,29 (s, 2Н), 3,07-2,93 (m, 2Н), 2,92-2,87 (m, 2Н), 2,86-2,78 (m, 1H), 2,58 (s, 1H), 2,47-2,36 (m, 1H), 2,09-1,87 (m, 3Н), 1,80 (d, J=14,1 Гц, 2Н).

[01213] Химическая формула: C₁₃H₁₇N₃O₄, молекулярная масса: 279,29.

[01214] Стадия 5. Получение 2-[2-[2-[2-[2-[трет-бутил(дифенил)силил]оксиэтокси]этокси]этокси]этокси]этанола

[01215] К раствору 2-[2-[2-[2-(2-гидроксиэтокси)этокси]этокси]этокси]этанола (2 г, 8,40 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (20 мл) добавляли имидазол (1,92 г, 12,6 ммоль, 1,9 мл, 1,5 экв.) и трет-бутилхлордифенилсилан (2,42 г, 8,8 ммоль, 2,3 мл, 1,05 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 часов. Тонкослойная хроматография (этилацетат) указывала на то, что оставалось 10% реагирующего вещества 1, и было обнаружено одно основное новое пятно (R_f=0,32) с более низкой полярностью. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией показывали, что определено необходимое значение MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/этилацетат = от 1/1 до 0:1). Получали 2-[2-[2-[2-[2-[трет-бутил(дифенил)силил]оксиэтокси]этокси]этокси]этокси]этанол (1,77 г, 3,7 ммоль, выход 44%) в виде бесцветного масла.

[01216] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 494 [М+18]⁺

[01217] Н ЯМР: (400 МГц, CDCl₃) δ 7,75-7,66 (m, 4Н), 7,48-7,36 (m, 6Н), 3,83 (t, J=5,4 Гц, 2Н), 3,77-3,58 (m, 18Н), 2,51 (s, 1H), 1,07 (s, 9Н).

[01218] Химическая формула: C₂₆H₄₀O₆Si, молекулярная масса: 476,68.

[01219] Стадия 6. Получение 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этанола

[01220] К раствору 2-[2-[2-[2-[2-[трет-бутил(дифенил)силил]оксиэтокси]этокси]этокси]этокси]этанола (258 мг, 0,54 ммоль, 1,5 экв.) в N,N-диметилформамиде (5 мл) добавляли гидрид натрия (29 мг, 0,72 ммоль, чистота 60% в минеральном масле, 2 экв.) при 0°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение 1 часа. Затем добавляли 7-(6-фтор-3-пиридил)-5-метил-пиридо[4,3-b]индол (0,1 г, 361 мкмоль, 1 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 12 часов. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией показали, что реагирующее вещество 1 израсходовано полностью, и обнаружили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь гасили путем добавления воды (15 мл) при 0°С и затем экстрагировали этилацетатом 45 мл (15 мл * 3). Объединенные органические слои высушивали над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали с помощью колоночной хроматографии (дихл орметан: метанол = 20:1, R_f=0,21). Получали 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-иридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этанол (0,09 г, 0,14 ммоль, выход 39%, чистота 78%) в виде коричневого масла.

[01221] LCMS: MS (ESI)масса/заряд: 496,0 [М+1]⁺

[01222] H ЯМР: (400 МГц, CDCl₃) δ 9,27 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 8,41 (d, J=2,2 Гц, 1H), 8,15 (d, J=8,2 Гц, 1H), 7,88-7,82 (m, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,48 (dd, J=1,3, 8,1 Гц, 1H), 7,38-7,33 (m, 1H), 6,87 (d, J=8,7 Гц, 1H), 4,51-4,47 (m, 2Н), 3,89 (s, 3Н), 3,85-3,82 (m, 2Н), 3,70-3,63 (m, 12Н).

[01223] Химическая формула: C₂₇H₃₃N₃O₆, молекулярная масса: 495,57.

[01224] Стадия 7. Получение 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этил-4-метилбензолсульфоната

[01225] К раствору 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этанола (90 мг, 0,18 ммоль, 1 экв.) в дихлорметане (5 мл) добавляли триэтиламин (37 мг, 0,36 ммоль, 2 экв.), затем добавляли п-толуолсульфонилхлорид (139 мг, 0,73 ммоль, 4 экв.). Смесь перемешивали при 15°С в течение 12 часов. С помощью LCMS показывали, что реагирующее вещество 1 полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением массы. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (дихлорметан:метанол = 10:1, R_f продукта = 0,27). Получали 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этил-4-метилбензолсульфонат (0,05 г, 0,07 ммоль, выход 36%, чистота 86%) в виде желтого масла.

[01226] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 650 [М+1]⁺.

[01227] Химическая формула: C₃₄H₃₉N₃O₈S, молекулярная масса: 649,75.

[01228] Стадия 8. Получение 2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-8-(14-((5-(5-метил-5Н-пиридо[4,3-b]индол-7-ил)пиридин-2-ил)окси)-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-диона

[01229] Смесь 2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этил-4-метилбензолсульфоната (50 мг, 0,07 ммоль, 1 экв.), 2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-диона (32 мг, 0,10 ммоль, 1,33 экв., гидрохлорид), йодида калия (19 мг, 0,12 ммоль, 1,5 экв.), N,N-диизопропилэтиламина (30 мг, 0,23 ммоль, 3 экв.) в ацетонитриле (5 мл) дегазировали и продували азотом 3 раза, а затем смесь перемешивали при 100°С в течение 12 часов в атмосфере азота. С помощью LCMS показывали, что реагирующее вещество 1 полностью израсходовано, и определили один основной пик с необходимым значением MS. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Synergi С18 150*25*10 мкм; подвижная фаза: [вода (0,05%HCl)-ACN]; В%: от 0% до 30%, 10 мин.). Чистота остатка составляла 90%. Остаток очищали с помощью полупрепаративной HPLC с обращенной фазой (колонка: Phenomenex Synergi С18 150 * 30 мм * 4 мкм; подвижная фаза: [вода (0,225%FA)-ACN]; В%: от 0% до 26%, 10,5 мин.; расход (мл/мин.): 25). Получали 2-(2,6-диоксо-3-пиперидил)-8-[2-[2-[2-[2-[2-[[5-(5-метилпиридо[4,3-b]индол-7-ил)-2-пиридил]окси]этокси]этокси]этокси]этокси]этил]-2,8-диазаспиро[4,5]декан-1,3-дион (12,9 мг, 0,01 ммоль, выход 20%, чистота 99%, бис-формиатная соль) в виде желтого твердого вещества.

[01230] LCMS: MS (ESI) масса/заряд: 757,3 [M+1]⁺.

[01231] Н ЯМР: (400 МГц, DMSO-d₆) δ: 11,03 (s, 1H), 9,36 (s, 1H), 8,65 (d, J=2,4 Гц, 1H), 8,50 (d, J=6,4 Гц, 1H), 8,33 (d, J=8,0 Гц, 1H), 8,23-8,19 (m, 3Н), 7,99 (s, 1H), 7,63-7,62 (m, 2Н), 6,98 (d, J=8,8 Гц, 1H), 4,90 (dd, J=5,2, 13,2 Гц, 1H), 4,45 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 3,96 (s, 3Н), 3,79 (t, J=4,8 Гц, 2Н), 3,61-3,54 (m, 6Н), 3,51-3,47 (m, 7Н), 2,84-2,76 (m, 3Н), 2,67-2,66 (m, 2Н), 2,54-2,53 (m, 1H), 2,47-2,33 (m, 4Н), 2,03 (t, J=10,4 Гц, 2Н), 1,87-1,75 (m, 3Н), 1,52-1,49 (m, 2Н).

[01232] Химическая формула: C₄₀H₄₈N₆O₉, молекулярная масса: 756,84.

[01233] Контроль уровня белка

[01234] В данном описании также представлены способы контроля уровней белка в клетке. Они основаны на применении соединений, описанных в данном документе, которые, как известно, взаимодействуют с конкретным целевым белком так, что разрушение целевого белка in vivo приведет к контролю количества белка в биологической системе, предпочтительно с конкретной терапевтической пользой.

[01235] Следующие примеры применяют для способствования описанию настоящего изобретения, но они не должны рассматриваться как ограничивающие настоящее изобретение каким-либо образом.

[01236] Иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения

[01237] Настоящее изобретение охватывает следующие конкретные варианты осуществления. Данные следующие варианты осуществления могут включать все признаки, перечисленные в предыдущем варианте осуществления, как указано. Если применимо, следующие варианты осуществления также могут включать признаки, перечисленные в любом действующем варианте осуществления включительно или в альтернативе.

[01238] В одном аспекте раскрыто бифункциональное соединение, имеющее химическую структуру: CLM-L-РТМ, или его фармацевтически приемлемая соль, энантиомер, стереоизомер, сольват, полиморф или пролекарство, где РТМ представляет собой малую молекулу, предусматривающую фрагмент, нацеливающийся на белок; L представляет собой связь или химический линкерный фрагмент, ковалентно связывающий CLM и РТМ; и CLM представляет собой низкомолекулярный фрагмент, связывающийся с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса, который связывается с цереблоном Е3-убиквитинлигазного комплекса или нацеливается на него и имеет химическую структуру, выбранную из группы, состоящей из:

где

R³ отсутствует или выбран из Н, алкила (например, С1-С6- или С1-С3алкила), замещенного алкила (например, замещенного С1-С6- или С1-С3 алкила), алкокси (например, С1-С6- или С1-С3алкоксила), замещенного алкокси (например, замещенного С1-С6- или С1-С3алкоксила);

R⁴ выбран из Н, алкила, замещенного алкила;

X представляет собой С, СН, С=O или N;

X₁ представляет собой С=O, N, СН или CH₂;

R' выбран из Н, галогена, амина, алкила (например, С1-С3 алкила), замещенного алкила (например, замещенного С1-С3 алкила), алкокси (например, С1-С3алкоксила), замещенного алкокси (например, замещенного С1-С3алкоксила), NR²R³, C(=O)OR², необязательно замещенного фенила;

n составляет 0-4;

и

[01239] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM соединен с РТМ, химической линкерной группой (L) или их комбинацией посредством W, X, R¹, R², R³, R⁴, R', Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ и Q₅.

[01240] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представляет собой фрагмент, который связывается с Brd4, тау-белком, эстрогеновым рецептором (ER) или андрогеновым рецептором (AR).

[01241] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, соединение дополнительно содержит второй фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу, связанный посредством линкерной группы.

[01242] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, второй фрагмент, связывающий Е3-убиквитинлигазу, связывается с Е3-убиквитинлигазой или нацеливается на нее, которая при этом выбрана из группы, состоящей из белка Гиппеля-Линдау (VLM), цереблона (CLM), гомолога 2 double minute мыши (MLM) и ингибиторов белков апоптоза (ILM).

[01243] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM представлен химической структурой, выбранной из группы, состоящей из:

где

R² представляет собой Н или С1-С3алкил;

R⁴ представляет собой метил или этил;

R⁵ представляет собой Н или галоген;

R⁶ представляет собой Н или галоген;

R представляет собой H или галоген;

[01244] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM представлен химической структурой, выбранной из:

где R' представляет собой галоген.

[01245] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, CLM представлен химической структурой, выбранной из:

[01246] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) предусматривает химическое структурное звено, представленное формулой:

где

(A^L)_q представляет собой группу, которая соединена с фрагментом CLM или РТМ; и

q представляет собой целое число, которое больше или равняется 1;

каждый A^L независимо выбран из группы, состоящей из связи, CR^L1R^L2, О, S, SO, SO₂, NR^L3, SO₂NR^L3, SONR^L3, CONR^L3, NR^L3CONR^L4, NR^L3SO₂NR^L4, CO, CR^L1=CR^L2, C≡C, SiR^L1R^L2, P(O)R^L1, P(O)OR^L1, NR^L3C(=NCN)NR^L4, NR^L3C(=NCN), NR^L3C(=CNO₂)NR^L4, С_3-11циклоалкила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, С_3-11гетеропиклила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, арила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, гетероарила, необязательно замещенного 0-6 группами R^L1 и/или R^L2, где каждая из R^L1 или R^L2 независимо необязательно соединена с другими группами с образованием циклоалкильного и/или гетероциклильного фрагмента, необязательно замещенного 0-4 группами R^L5; и

каждая из R^L1, R^L2, R^L3, L^L4 и R^L5 независимо представляет собой Н, галоген, С_1-8алкил, ОС_1-8алкил, SC_1-8алкил, NHC_1-8алкил, N(С_1-8алкил)₂, С_3-11циклоалкил, арил, гетероарил, С_3-11гетероциклил, ОС_1-8циклоалкил, SC_1-8циклоалкил, NHC_1-8циклоалкил, N(С_1-8циклоалкил)₂, N(С₁-₈циклоалкил)(С_1-8алкил), ОН, NH₂, SH, SO₂C_1-8алкил, Р(O)(ОС_1-8алкил)(С_1-8алкил), Р(O)(ОС_1-8алкил)₂, СС-С_1-8алкил, ССН, CH=CH(C_1-8алкил), С(С_1-8алкил)=СН(С_1-8алкил), С(С_1-8алкил)=С(С_1-8алкил)₂, Si(OH)₃, Si(C_1-8алкил)₃, Si(OH)(C_1-8алкил)₂, СОС_1-8алкил, СО₂Н, галоген, CN, CF₃, CHF₂, CH₂F, NO₂, SF₅, SO₂NHC_1-8алкил, SO₂N(C_1-8алкил)₂, SONHC_1-8алкил, SON(C_1-8алкил)₂, CONHC_1-8алкил, CON(С_1-8алкил)₂, N(С_1-8алкил)CONH(С_1-8алкил), N(С_1-8алкил)CON(С_1-8алкил)₂, NHCONH(C 1-8алкил), NHCON(C_1-8алкил)₂, NHCONH₂, N(C_1-8алкил)SO₂NH(C_1-8алкил), N(C_1-8алкил)SO₂N(C_1-8алкил)₂, NHSO₂NH(C_1-8алкил), NHSO₂N(C_1-8алкил)₂, NHSO₂NH₂.

[01247] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, L выбран из группы, состоящей из:

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-;

где

m, n, о, p, q и r в линкере независимо равняются 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20;

X в линкере представляет собой Н и F;

где m в линкере может равняться 2, 3, 4, 5;

где n и m в линкере могут равняться 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.

[01248] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, L выбран из группы, состоящей из:

где каждый m и n независимо выбран из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.

[01249] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

где каждый из m, n, о, р, q и r независимо равняется 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20.

[01250] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

[01251] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) выбран из:

где

[01252] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) предусматривает структуру, выбранную из:

где

n составляет 0-10; и

пунктирная линия указывает на точку присоединения к фрагментам РТМ или CLM.

[01253] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) предусматривает структуру, выбранную из:

где

каждое из W^L1 и W^L2 независимо представляет собой арил, гетероарил, циклическую группу, гетероциклическую группу, C₁-₆алкил, бициклическую группу, биарил, бигетероарил или бигетероциклическую группу, при этом каждая необязательно замещена R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, галоген, ОН, CN, CF₃, гидроксил, нитро, С≡СН, С_2-6алкенил, С_2-6алкинил, C₁-С₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), C₁-С₆алкокси (линейный, разветвленный, необязательно замещенный), OC₁-залкил (необязательно замещенный 1 или более -F), ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2, CN, или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 4-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-4 гетероатома;

Q^L представляет собой 3-6-членное алициклическое или ароматическое кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно содержащее мостиковую связь, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C₁-₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-₆алкоксилом), или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый из R^YL1, R^YL2 независимо представляет собой Н, ОН, C₁-₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-₆алкоксилом), или R¹, R² вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

n составляет 0-10; и

[01254] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, линкер (L) представляет собой полиэтиленоксигруппу, необязательно замещенную арилом или фенилом, содержащую от 1 до 10 этиленгликолевых звеньев.

[01255] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, соединение содержит несколько ULM, несколько CLM, несколько РТМ, несколько линкеров или любые их комбинации.

[01256] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ имеет химическую структуру, включающую по меньшей мере один из (А), (В), (С), (D), (Е) или их комбинацию:

(А) фрагмент, связывающий эстрогеновый рецептор (ЕВМ), содержащий PTM-I или РТМ-II:

где

X_PTM представляет собой О или С=O;

R_PTM1 независимо выбран из ОН, O(CO)R_PTM, низшего О-алкила, где R_PTM представляет собой алкильную или арильную группу в сложном эфире;

R_PTM2 и R_PTM4 независимо выбраны из Н, ОН, галогена, CN, CF₃, SO₂-алкила, низшего О-алкила;

R_PTM3 и R_PTM5 независимо выбраны из Н, галогена;

_PTM2 и по меньшей мере один R_PTM3 в каждом из соответствующих колец; и

указывает на участок присоединения по меньшей мере одного из линкера, CLM, CLM' или их комбинации;

(В) фрагмент, нацеливающийся на белок, представляющий собой эстрогеновый рецептор, представленный с помощью химической структуры:

где

каждый R_PTM1 независимо представляет собой ОН, галоген, алкокси, метокси, этокси, O(CO)R_PTM, при этом замещение может предусматривать моно-, ди- или тризамещение, и R_PTM представляет собой алкильную или циклоалкильную группу с 1-6 атомами углерода или арильные группы;

каждый R_PTM2 независимо представляет собой Н, галоген, CN, CF₃, линейный или разветвленный алкил, алкокси, метокси, этокси, при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение;

каждый R_PTM3 независимо представляет собой Н, галоген, при этом замещение может предусматривать моно- или дизамещение; и

R_PTM4 представляет собой Н, алкил, метил, этил.

(С) фрагмент, связывающийся с андрогеновым рецептором (AR) (АВМ), который предусматривает структуру, выбранную из группы, состоящей из:

где

W¹ представляет собой арил, гетероарил, бициклическую или бигетероциклическую группу, при этом каждое независимо замещено 1 или более из Н, галогена, гидроксила, нитро, CN, С≡СН, C₁-₆алкила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного; например, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена, C₁-₆алкоксилом), C₁-₆алкоксила (линейного, разветвленного, необязательно замещенного; например, необязательно замещенного 1 или более атомами галогена), С_2-6алкенила, С_2-6алкинила или CF₃;

каждый из Y¹, Y² независимо представляет собой NR^Y1, О, S, SO2, гетероарил или арил;

Q представляет собой 3-6-членное кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, C₁-₆алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный, например, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-₆алкоксилом), галоген, C₁-₆алкокси, или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

каждый из R¹, R², R^a, R^b, R^Y1, R^Y2 независимо представляет собой Н, С_1-6алкил (линейный, разветвленный, необязательно замещенный, например, необязательно замещенный 1 или более атомами галогена, C₁-₆алкоксилом), галоген, C₁-₆алкокси, циклическую группу, гетероциклическую группу, или R¹, R² вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома);

W² представляет собой связь, C₁-₆алкил, C₁-₆гетероалкил, О, арил, гетероарил, алициклическую группу, гетероциклическую группу, бигетероциклическую группу, биарил или бигетероарил, при этом каждое из них необязательно замещено 1-10 R^W2;

каждый R^W2 независимо представляет собой Н, галоген, C₁-₆алкил (линейный или разветвленный, необязательно замещенный; например, необязательно замещенный 1 или более F), -OR^W2A, С_3-6циклоалкил, С_4-6циклогетероалкил, C₁-₆алкил (необязательно замещенный), гетероциклическую группу (необязательно замещенную), арил (необязательно замещенный) или гетероарил (необязательно замещенный), бициклический гетероарил или арил, OC_1-3алкил (необязательно замещенный; например, необязательно замещенный 1 или более -F), ОН, NH₂, NR^Y1R^Y2, CN;

R^W2A представляет собой Н, C₁-₆алкил (линейный, разветвленный) или С_1-6гетероалкил (линейный, разветвленный), каждый из которых необязательно замещен циклоалкилом, циклогетероалкилом, арилом, гетероциклической группой, гетероарилом, галогеном или OC_1-3алкилом; и

пунктирная линия указывает на участок присоединения по меньшей мере одного из линкера, CLM, CLM' или их комбинации;

(D) фрагмент, нацеливающийся на тау-белок, который представлен по меньшей мере одной из формул I-XI:

где

А, В, С, D, Е и F независимо выбраны из необязательно замещенного 5- или 6-членного арильного или гетероарильного кольца, необязательно замещенного 4-7-членного циклоалкила или гетероциклоалкила, где контакт между кругами указывает на конденсацию колец;

L_PTM выбран из связи, алкила, алкенила или алкинила, необязательно прерванных одним или более кольцами (т.е. циклоалкилом, гетероциклоалкилом, арилом или гетероарилом) или одной или более функциональными группами, выбранными из групп -О-, -S-, -NR¹ _PTM-, -N=N-, -S(O)-, -SO₂-, -С(О)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -NHSO₂-, -NHC(O)NH-, -NHC(O)O- или -OC(O)NH-, где указанная функциональная группа необязательно расположена на любом конце линкера; и

R¹ _PTM выбран из Н или алкила;

(Е) лиганд, связывающий трициклический диазепин или азепин BET/BRD4, содержащий группу в соответствии с химической структурой РТМ-а:

где

Y₁, Y₂ и Y₃ независимо выбраны из группы, состоящей из углерода, азота или кислорода, и вместе с атомами образуют ароматическое конденсированное кольцо;

А и В независимо выбраны из группы, состоящей из 5-членного ароматического кольца, 6-членного ароматического кольца, гетероароматического кольца, карбоциклического, тиофенового пиррольного кольца, пиридинового, пиримидинового, пиразинового, пиразольного кольца, при этом каждое из них необязательно замещено алкилом, алкокси, галогеном, ароматическим и гетероароматическим кольцом; где кольцо А конденсировано с центральным азепиновым (Y1=C) или диазепиновым (Y1=N) фрагментом; и

Z1 выбран из группы, состоящей из метила или аналкильной группы, и

где пунктирная линия указывает на участок присоединения по меньшей мере одного из линкера, CLM, CLM' или их комбинации.

[01257] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, во фрагменте, нацеливающемся на тау-белок, предусмотрено по меньшей мере одно из:

по меньшей мере одно из А, В, С, F или их комбинации выбраны из необязательно замещенных 5- или 6-членных арильных или гетероарильных колец;

арильные и гетероарильные кольца А, В, С, D и Е в РТМ необязательно замещены 1-8 заместителями, при этом каждый независимо выбран из алкила, алкенила, галогеналкила, галогена, гидроксила, алкокси, фторалкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, ациламино, трифторметила и циано, где указанные алкильные и алкенильные группы дополнительно необязательно замещены; или

их комбинация.

[01258] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен формулой I, и

L_PTM выбран из связи или алкила; и

где А, В, С и D необязательно замещены алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, трифторметилом или циано.

[01259] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен формулой I, и

L_PTM представляет собой связь; и

D представляет собой 6-членное гетероарильное или 6-членное гетероциклоалкильное кольцо,

где каждое из А, В, С и D необязательно независимо замещено алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, диалкиламино, трифторметилом или циано, и где атом азота в любом из колец А, В, С и D непосредственно не соединен с гетероатомом или с атомом углерода, к которому непосредственно присоединен другой гетероатом.

[01260] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ представлен формулой III или IV, и

А, В и С представляют собой 5- или 6-членные конденсированные арильные или гетероарильные кольца;

L_PTM выбран из связи или алкила; и

D и Е представляют собой 5- или 6-членные конденсированные арильные или гетероарильные кольца;

где А, В, С, D и Е необязательно замещены алкилом, галогеналкилом, галогеном, гидроксилом, алкокси, амино, алкиламино, диалкиламино, трифторметилом или циано.

[01261] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, РТМ имеет структуру, выбранную из группы, состоящей из:

где R или линкер представляют собой связь или химический линкерный фрагмент, связывающий CLM с РТМ, в том числе его фармацевтически приемлемые солевые формы.

[01262] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, соединение выбрано из группы, состоящей из PROTAC-1 - PROTAC-112.

[01263] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, соединение выбрано из группы, состоящей из:

4-{3-[4-({1-[5-хлор-1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]-1,4,7,10-тетраоксадодекан-12-ил}окси)фенил]-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил}-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-{3-[4-(2-{2-[4-(2-{[1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]окси}этил)пиперазин-1-ил]этокси}этокси)фенил]-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил}-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[3-(4-{2-[4-(2-{[5-хлор-1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]окси}этил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

6-{4-[5-({6-[(2,6-диоксопиперидин-3-ил)карбамоил]пиридин-3-ил}окси)пентил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(5-{[3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-1,2,3,4-тетрагидрохиназолин-8-ил]окси}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(6-{[1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]окси}гексил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(5-{[3-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-2-метил-4-оксо-3,4-дигидрохиназолин-8-ил]окси}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

5-(5-{4-[2-(4-{3-[4-циано-3-(трифторметил)фенил]-5,5-диметил-4-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил}фенокси)этил]пиперазин-1-ил}-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-2-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридин-2-карбонитрила;

4-[3-(4-{2-[4-({1-[5-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)пиридин-3-ил]пиперидин-4-ил}метил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[3-(4-{[3-(3-{[3-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)хинолин-5-ил]окси}пропокси)пропил]амино}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[4-(2-{2-[(2-{[2-(2,4-диоксо-1,3-диазинан-1-ил)этил]карбамоил}фенил)амино]этокси}этил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

5-(4-{2-[(1,3-диоксо-2-{6-оксо-2-окса-5-азаспиро[3.5]нонан-9-ил}-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-4-ил)амино]этил}пиперазин-1-ил)-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-2-карбоксамида;

4-(4,4-диметил-3-{4-[4-(3-{[2-(1-метил-2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-5-ил)-1,3-диоксо-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил]окси}пропил)пиперазин-1-ил]фенил}-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил)-2-(трифторметил)бензонитрила;

5-[4-(2-{[2-(5,5-диметил-2,4-диоксоимидазолидин-1-ил)-3-оксо-октагидроиндолизин-

6-ил]амино}этил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-2-карбоксамида;

4-[3-(4-{[3-(3-{[4-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)изохинолин-7-ил]окси}пропокси)пропил]амино}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[3-(4-{1-[3-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)-4-метилхинолин-7-ил]-1,4,7-триокса-10-азадекан-10-ил}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[2-(2-{[3-(2,4-диоксо-1,3-диазинан-1-ил)-4-метилхинолин-7-ил]окси}этокси)этокси]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил] бензамида;

5-{3-[4-(1,3-диоксо-2-{6-оксо-2-окса-5-азаспиро[3.5]нонан-9-ил}-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил)пиперазин-1-ил]пропил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-2-карбоксамида;

4-{4-[2-(2-{[1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]амино}этокси)этил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-[4-({1-[5-(2,4-диоксо-1,2,3,4-тетрагидропиримидин-1-ил)пиридин-3-ил]пиперидин-4-ил}метил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-(4-{2-[4-(2-{[1-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-ил]окси}этил)пиперазин-1-ил]этокси}бутокси)-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

2-[(2-{2-[4-(4-{3-[4-ниано-3-(трифторметил)фенил]-5,5-диметил-4-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил}фенил)пиперазин-1-ил]этокси}этил)амино]-N-[2-(2,4-диоксо-1,3-диазинан-1-ил)этил]бензамида;

2-{[2-(2-{[4-(4-{3-[4-циано-3-(трифторметил)фенил]-5,5-диметил-4-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил}фенил)фенил]амино}этокси)этил]амино}-N-[2-(2,4-диоксо-1,3-диазинан-1-ил)этил]бензамида;

4-{4-[2-({1,3-диоксо-2-[2-оксо-6-(трифторметил)пиперидин-3-ил]-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-4-ил}амино)этил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-{4-[2-({1,3-диоксо-2-[2-оксо-6-(трифторметил)пиперидин-3-ил]-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил}окси)этил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-{4-[2-({1,3-диоксо-2-[2-оксо-6-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-4-ил}амино)этил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-{4-[2-({1,3-диоксо-2-[2-оксо-6-(трифторметил)-1,2-дигидропиридин-3-ил]-2,3-дигидро-1Н-изоиндол-5-ил}окси)этил]пиперазин-1-ил}-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]бензамида;

4-[3-(4-{2-[4-(2-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]амино}этил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

4-[3-(4-{2-[4-(2-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]окси}этил)пиперазин-1-ил]этокси}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила;

6-[4-(5-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]окси}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(5-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]амино}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(5-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-7-ил]амино}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

6-[4-(5-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-7-ил]окси}пентил)пиперазин-1-ил]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида;

4-[3-(4-{2-[2-(2-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]окси}этокси)этокси]этокси}фенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрила и

6-[3-(3-{[2-(2,6-диоксопиперидин-3-ил)-1,1,3-триоксо-2,3-дигидро-1λ⁶,2-бензотиазол-6-ил]окси}пропокси)пропокси]-N-[(1r,3r)-3-(3-хлор-4-цианофенокси)-2,2,4,4-тетраметилциклобутил]пиридин-3-карбоксамида, в том числе его фармацевтически приемлемые солевые формы.

[01264] В другом аспекте раскрыта композиция, содержащая эффективное количество бифункционального соединения по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель.

[01265] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, композиция дополнительно содержит по меньшей мере одно из дополнительного биологически активного средства или другого бифункционального соединения по настоящему изобретению.

[01266] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, дополнительное биологически активное средство представляет собой противораковое средство, противонейродегенеративное средство, противомикробное средство, противовирусное средство, средство против HIV или противогрибковое средство.

[01267] В дополнительном аспекте раскрыта композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного соединения по настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, добавку и/или вспомогательное вещество для лечения заболевания или нарушения у субъекта, при этом способ предусматривает введение композиции субъекту, нуждающемуся в этом, где соединение является эффективным в лечении или облегчении по меньшей мере одного симптома заболевания или нарушения.

[01268] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, заболевание или нарушение ассоциировано с накоплением и/или агрегацией целевого белка.

[01269] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из астмы, аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз, различных видов рака, цилиопатий, расщепленного неба, диабета, заболевания сердечно-сосудистой системы, гипертонии, воспалительного заболевания кишечника, задержки в умственном развитии, расстройства настроения, ожирения, рефракционной аномалии, бесплодия, синдрома Ангельмана, болезни Канавана, целиакии, болезни Шарко-Мари-Тута, муковисцидоза, мышечной дистрофии Дюшенна, гемохроматоза, гемофилии, синдрома Клайнфелтера, нейрофиброматоза, фенилкетонурии, поликистозной болезни почек, (PKD1) или 4 (PKD2), синдрома Прадера-Вилли, серповидно-клеточной анемии, болезни Тея-Сакса, синдрома Тернера.

[01270] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, бокового амиотрофического склероза (болезни Лу Герига), нервной анорексии, тревожного невроза, атеросклероза, синдрома дефицита внимания и гиперактивности, аутизма, биполярного расстройства, синдрома хронической усталости, хронического обструктивного заболевания легких, болезни Крона, ишемической болезни сердца, деменции, депрессии, сахарного диабета 1 типа, сахарного диабета 2 типа, эпилепсии, синдрома Гийена-Барре, синдрома раздраженного кишечника, обыкновенной волчанки, метаболического синдрома, рассеянного склероза, инфаркта миокарда, ожирения, обсессивно-компульсивного расстройства, панического расстройства, болезни Паркинсона, псориаза, ревматоидного артрита, саркоидоза, шизофрении, инсульта, облитерирующего тромбангиита, синдрома Туретта, васкулита.

[01271] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, заболевание или нарушение выбрано из группы, состоящей из ацерулоплазминемии, ахондрогенеза II типа, хондродистрофии, акроцефалии, болезни Гоше 2 типа, острой интермиттирующей порфирии, болезни Канавана, аденоматозного полипоза толстой кишки, дефицита ALA-дегидратазы, дефицита аденилосукцинатлиазы, адреногенитального синдрома, адренолейкодистрофии, порфирии ALA-D, дефицита ALA-дегидратазы, алкаптонурии, болезни Александера, алкаптонурического охроноза, дефицита альфа-1-антитрипсина, ингибитора альфа-1-протеиназы, эмфиземы, бокового амиотрофического склероза, синдрома Альстрема, болезни Александера, несовершенного амелогенеза, дефицита ALA-дегидратазы, болезни Андерсона-Фабри, синдрома нечувствительности к андрогенам, анемии, диффузной ангиокератомы туловища, ангиоматоза сетчатки (болезни Гиппеля-Линдау) синдрома Аперта, арахнодактилии (синдрома Марфана), синдрома Стиклера, врожденной множественной артрохалазии (синдрома Элерса-Данлоса, артрохалазийного типа), атаксии-телеангиэктазии, синдрома Ретта, первичной легочной гипертензии, болезни Сандгоффа, нейрофиброматоза II типа, синдрома сморщенных кожных покровов Бира-Стивенсона, средиземноморской лихорадки, наследственного синдрома Бенджамина, бета-талассемии, двустороннего нейрофиброматоза слухового нерва (нейрофиброматоза II типа), тромбофилии, обусловленной фактором V Лейдена, синдрома Блоха-Сульцбергера (недержания пигмента), синдрома Блума, сидеробластной анемии, связанной с Х-хромосомой, синдрома Бонневи-Ульриха (синдрома Тернера), болезни Бурневилля (туберозного склероза), прионной болезни, синдрома Бирта-Хогга-Дюба, болезни «хрустального человека» (несовершенного остеогенеза), синдрома широкого I пальца кистей и стоп (синдрома Рубинштейна-Тейби), бронзового диабета/пигментного цирроза (гемохроматоза), бульбоспинальной мышечной атрофии (болезни Кеннеди), синдрома Бюргера-Грютца (дефицита липопротеинлипазы), хронической гранулематозной болезни (CGD), кампомелической дисплазии, биотинидазной недостаточности, кардиомиопатии (синдрома Нунан), синдрома кошачьего крика, CAVD (врожденного отсутствия семявыносящего протока), вело-кардио-фациального синдрома (CBAVD), СЕР (врожденной эритропоэтической порфирии), муковисцидоза, врожденного гипотиреоза, хондродистрофического синдрома (хондродистрофии), отоспондиломегаэпифизарной дисплазии, синдрома Леша-Найхана, галактоземии, синдрома Элерса-Данлоса, танатофорной дисплазии, синдрома Коффина-Лоури, синдрома Коккейна, (семейного аденоматозного полипоза), врожденной эритропоэтической порфирии, врожденного порока сердца, метгемоглобинемии/врожденной метгемоглобинемии, хондродистрофии, сидеробластной анемии, связанной с Х-хромосомой, диффузной болезни соединительной ткани, кардиофациального синдрома, анемии Кули (бета-талассемии), заболевания, связанного с нарушением метаболизма меди (болезни Вильсона), заболевания, связанного с нарушением клеточного транспорта меди (болезни Менкеса), наследственной копропорфирии, синдрома Каудена, черепно-лицевого дизостоза (синдрома Крузона), болезни Крейтцфельда-Якоба (прионной болезни), синдрома Коккейна, синдрома Каудена, синдрома Куршманна-Баттена-Штейнерта (миотонической дистрофии), синдрома сморщенных кожных покровов Бира-Стивенсона, первичной гипероксалурии, спондилоэпиметафизарной дисплазии (типа Струдвика), мышечной дистрофии типов Дюшенна и Беккера (DBMD), синдрома Ушера, дегенеративных заболеваний нервной системы, в том числе синдрома де Груши и синдрома Дежерина-Сотта, разновидностей инвалидности вследствие порока развития, дистальной спинальной мышечной атрофии V типа, синдрома нечувствительности к андрогенам, диффузного склероза, характеризующегося наличием глобоидных клеток (болезни Краббе), синдрома Ди Джорджи, дефицита рецептора дигидротестостерона, синдрома нечувствительности к андрогенам, синдрома Дауна, карликовости, эритропоэтической протопорфирии, обусловленной дефицитом 5-аминолевулинатсинтетазы в эритроидных клетках, эритропоэтической порфирии, эритропоэтической протопорфирии, эритропоэтической уропорфирии, атаксии Фридрейха, семейного рецидивирующего полисерозита, поздней кожной порфирии, наследственной компрессионной нейропатии, первичной легочной гипертензии (РРН), кистозного фиброза поджелудочной железы, синдрома ломкой X-хромосомы, галактоземии, наследственных заболеваний головного мозга, врожденного гигантоклеточного гепатита (неонатального гемохроматоза), синдрома Гренблада-Страндберга (эластической псевдоксантомы), болезни Гюнтера (врожденной эритропоэтической порфирии), гемохроматоза, синдрома Халлгрена, серповидно-клеточной анемии, гемофилии, гепатоэритропоэтической порфирии (HEP), цереброретинального ангиоматоза (болезни Гиппеля-Линдау), болезни Гентингтона, синдрома прогерии Хатчинсона-Гилфорда (прогерии), гиперандрогенизма, гипохондроплазии, гипохромной анемии, нарушений со стороны иммунной системы, в том числе тяжелого комбинированного иммунодефицита, связанного с X-хромосомой, синдрома Инсли-Эстли, синдрома Кеннеди, синдрома Джексона-Вейса, синдрома Жубера, синдрома Леша-Найхана, синдрома Джексона-Вейса, заболеваний почек, в том числе гипероксалурии, синдрома Клайнфелтера, дисплазии Книста, лакунарной деменции, ахондрогенеза Лангера-Салдино, атаксии-телеангиэктазии, синдрома Линча, дефицита лизилгидроксилазы, болезни Мачадо-Джозефа, нарушений обмена веществ, в том числе дисплазии Книста, синдрома Марфана, двигательных расстройств, синдрома Моуат-Вильсона, муковисцидоза, синдрома Мюнке, множественного нейрофиброматоза, синдрома Нэнси-Инсли, хондродисплазии Нэнси-Суини, болезни Ниманна-Пика, синдрома Ноака (синдрома Пфайффера), болезни Ослера-Вебера-Рандю, синдрома Пейтца-Егерса, поликистоза почек, полиоссальной фиброзной остеодисплазии (синдрома МакКьюна-Олбрайта), синдрома Пейтца-Егерса, синдрома Прадера-Лабхарта-Вилли, гемохроматоза, первичной гиперурикемии (синдрома Леша-Найхана), первичной легочной гипертензии, первичной сенильной дегенеративной деменции, прионной болезни, прогерии (синдрома прогерии Хатчинсона-Гилфорда), прогрессирующей хронической наследственной хореи (синдрома Гентингтона) (болезни Гентингтона), прогрессирующей мышечной атрофии, спинальной мышечной атрофии, пропионовой ацидемии, протопорфирии, проксимальной миотонической дистрофии, легочной артериальной гипертензии, РХЕ (эластической псевдоксантомы), Rb (ретинобластомы), болезни Реклингхаузена (нейрофиброматоза I типа), рецидивирующего полисерозита, нарушений сетчатки, ретинобластомы, синдрома Ретта, RFALS 3 типа, синдрома Рикера, синдрома Райли-Дея, синдрома Русси-Леви, тяжелой хондродистрофии с задержкой развития и черным акантозом (SADDAN), синдрома Ли-Фраумени, синдрома, включающего саркому, рак молочной железы, лейкоз и карциному надпочечника (SBLA), эпилойи (туберозного склероза), SDAT, врожденной SED (врожденной спондилоэпифизарной дисплазии), SED Струдвика (спондилоэпиметафизарной дисплазии типа Струдвика), SEDc (врожденной спондилоэпифизарной дисплазии), SEMD типа Струдвика (спондилоэпиметафизарной дисплазии типа Струдвика), синдрома Шпринтцена, нарушений пигментации кожи, синдрома Смита-Лемли-Опитца, наследственной порфирии южно-африканского типа (пестрой порфирии южно-африканского типа), возникающего в младенческом возрасте наследственного спастического паралича, расстройств речи и коммуникативных навыков, сфинголипидоза, болезни Тея-Сакса, спинально-церебеллярной атаксии, синдрома Стиклера, инсульта, синдрома нечувствительности к андрогенам, дефицита тетрагидробиоптерина, бета-талассемии, заболевания щитовидной железы, томакулезной невропатии (наследственной компрессионной невропатии), синдрома Тричера Коллинза, синдрома Х-трисомии (синдрома трисомии по Х-хромосоме), трисомии по хромосоме 21 (синдрома Дауна), трисомии по Х-хромосоме, синдрома VHL (болезни Гиппеля-Линдау), нарушения зрения и слепоты (синдрома Альстрема), болезни Вролика, синдрома Ваарденбурга, синдрома Варбурга-Сьо-Фледелиуса, синдрома Вейссенбахера-Цвеймюллера, синдрома Вольфа-Хиршхорна, периодической болезни Вольфа, синдрома Вейссенбахера-Цвеймюллера и пигментной ксеродермы.

[01272] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, композиция дополнительно содержит дополнительное биологически активное средство.

[01273] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, дополнительное биологически активное средство представляет собой по меньшей мере одно из противоракового средства, противонейродегенеративного средства, противомикробного средства, противовирусного средства, средства против HIV, противогрибкового средства или их комбинации.

[01274] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, противораковое средство выбрано из группы, состоящей из эверолимуса, трабектедина, абраксана, TLK 286, AV-299, DN-101, пазопаниба, GSK690693, RTA 744, ON 0910.Na, AZD 6244 (ARRY-142886), AMN-107, TKI-258, GSK461364, AZD 1152, энзастаурина, вандетаниба, ARQ-197, MK-0457, MLN8054, PHA-739358, R-763, AT-9263, ингибитора FLT-3, ингибитора VEGFR, ингибитора TK EGFR, ингибитора киназы Aurora, модулятора PIK-1, ингибитора Bcl-2, ингибитора HDAC, ингибитора c-MET, ингибитора PARP, ингибитора Cdk, ингибитора TK EGFR, ингибитора IGFR-TK, антитела к HGF, ингибиторов киназы PI3, ингибитора AKT, ингибитора mTORC1/2, ингибитора JAK/STAT, ингибитора контрольной точки 1 или 2, ингибитора киназы фокальной адгезии, ингибитора киназы Мар-киназы (тек), антитела к ловушке VEGF, пеметрекседа, эрлотиниба, дазатаниба, нилотиниба, декатаниба, панитумумаба, амрубицина, ореговомаба, Lep-etu, нолатрекседа, azd2171, батабулина, офатумумаба, занолимумаба, эдотекарина, тетрандрина, рубитекана, тесмилифена, облимерсена, тицилимумаба, ипилимумаба, госсипола, Bio 111, 131-I-TM-601, ALT-110, BIO 140, CC 8490, циленгитида, гиматекана, IL13-PE38QQR, INO 1001, IPdR₁ KRX-0402, лукантона, LY 317615, нейрадиаба, витеспана, Rta 744, Sdx 102, талампанеля, атрасентана, Xr 311, ромидепсина, ADS-100380, сунитиниба, 5-фторурапила, вориностата, этопозида, гемцитабина, доксорубицина, липосомального доксорубицина, 5'-дезокси-5-фторуридина, винкристина, темозоломида, ZK-304709, селициклиба; PD0325901, AZD-6244, капецитабина, L-глутаминовой кислоты, N-[4-[2-(2-амино-4,7-дигидро-4-оксо-1Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-ил)этил]бензоил]-, динатриевой соли, гептагидрата, камптотецина, PEG-меченного иринотекана, тамоксифена, торемифена цитрата, анастразола, эксеместана, летрозола, DES (диэтилстилбестрола), эстрадиола, эстрогена, конъюгированного эстрогена, бевацизумаба, IMC-1C11, CHIR-258); 3-[5-(метилсульфонилпиперадинметил)-индолил-хинолона, ваталаниба, AG-013736, AVE-0005, ацетатной соли, представляющей собой [D-Ser(But)6,Azgly10] (pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(But)-Leu-Arg-Pro- Azgly-NH₂ацетат [C₅₉H₈₄N₁₈O₁₄-(C₂H₄O₂)_X, где x=1-2,4], гозерелина ацетата, лейпролида ацетата, трипторелина памоата, медроксипрогестерона ацетата, гидроксипрогестерона капроата, мегестрола ацетата, ралоксифена, бикалутамида, флутамида, нилутамида, мегестрола ацетата, СР-724714; TAK-165, HKI-272, эрлотиниба, лапатаниба, канертиниба, антитела к ABX-EGF, эрбитукса, EKB-569, PKI-166, GW-572016, лонафарниба, BMS-214662, типифарниба; амифостина, NVP-LAQ824, субероиланилидгидроксамовой кислоты, вальпроевой кислоты, трихостатина A, FK-228, SU11248, сорафениба, KRN951, аминоглютетимида, арнсакрина, анагрелида, L-аспарагиназы, вакцины на основе бацилл Кальметта-Герена (BCG), адриамицина, блеоминина, бусерелина, бусульфана, карбоплатина, кармустина, хлорамбуцила, цисплатина, кладрибина, клодроната, ципротерона, цитарабина, дакарбазина, дактиномицина, даунорубицина, диэтилстилбестрола, эпирубицина, флударабина, флудрокортизона, флуоксиместерона, флутамида, гливека, гемцитабина, гидроксимочевины, идарубицина, ифосфамида, иматиниба, лейпролида, левамизола, ломустина, мехлоретамина, мелфалана, 6-меркаптопурина, месны, метотрексата, митомицина, митотана, митоксантрона, нилутамида, октреотида, оксалиплатина, памидроната, пентостатина, пликамицина, порфимера, прокарбазина, ралтитрекседа, ритуксимаба, стрептозоцина, тенипозида, тестостерона, талидомида, тиогуанина, тиотепы, третиноина, виндезина, 13-цис-ретиноевой кислоты, фенилаланина мустард, урацила мустард, эстрамустина, алтретамина, флоксуридина, 5-дезоксиуридина, цитозинарабинозида, 6-мекаптопурина, дезоксикоформицина, кальцитриола, валрубицина, митрамицина, винбластина, винорелбина, топотекана, разоксина, маримастата, COL-3, неовастата, BMS-275291, скваламина, эндостатина, SU5416, SU6668, EMD121974, интерлейкина-12, IM862, ангиостатина, витаксина, дролоксифена, идоксифена, спиронолактона, финастерида, цимитидина, трастузумаба, денилейкина дифтитокса, гефитиниба, бортезимиба, паклитаксела, не содержащего кремофор паклитаксела, доцетаксела, эпитилона В, BMS-247550, BMS-310705, дролоксифена, 4-гидрокситамоксифена, пипендоксифена, ERA-923, арзоксифена, фулвестранта, аколбифена, лазофоксифена, идоксифена, TSE-424, HMR-3339, ZK186619, топотекана, PTK787/ZK 222584, VX-745, PD 184352, рапамицина, 40-О-(2-гидроксиэтил)рапамицина, темсиролимуса, АР-23573, RAD001, АВТ-578, ВС-210, LY294002, LY292223, LY292696, LY293684, LY293646, вортманнина, ZM336372, L-779,450, PEG-филграстима, дарбэпоэтина, эритропоэтина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, золендроната, преднизона, цетуксимаба, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора, гистрелина, пегилированного интерферона альфа-2а, интерферона альфа-2а, пегилированного интерферона альфа-2b, интерферона альфа-2b, азацитидина, PEG-L-аспарагиназы, леналидомида, гемтузумаба, гидрокортизона, интерлейкина-11, дексразоксана, алемтузумаба, полностью транс-ретиноевой кислоты, кетоконазола, интерлейкина-2, мегестрола, иммуноглобулина, азотистого иприта, метилпреднизолона, ибритгумомаба тиуксетана, андрогенов, децитабина, гексаметилмеламина, бексаротена, тозитумомаба, триоксида мышьяка, кортизона, эдитроната, митотана, циклоспорина, липосомального даунорубицина, аспарагиназы Edwina, стронция 89, касопитанта, нетупитанта, антагонистов рецептора NK-1, палоносетрона, апрепитанта, дифенгидрамина, гидроксизина, метоклопрамида, лоразепама, альпразолама, галоперидола, дроперидола, дронабинола, дексаметазона, метилпреднизолона, прохлорперазина, гранисетрона, ондансетрона, доласетрона, трописетрона, PEG-филграстима, эритропоэтина, эпоэтина альфа, дарбэпоэтина альфа и их смесей.

[01275] В другом аспекте раскрыт способ индуцирования разрушения целевого белка в клетке, предусматривающий введение эффективного количества соединения по настоящему изобретению в клетку, где соединение обеспечивает разрушение целевого белка.

[01276] В дополнительном аспекте раскрыта композиция, содержащая эффективное количество соединения по настоящему изобретению, для применения в способе лечения рака, причем указанный способ предусматривает введение композиции пациенту, нуждающемуся в этом, где композиция является эффективной для лечения или облегчения по меньшей мере одного симптома рака у пациента.

[01277] В любом аспекте или варианте осуществления, описанных в данном документе, рак представляет собой плоскоклеточную карциному, базальноклеточную карциному, аденокарциному, виды гепатоцеллюлярной карциномы и виды почечноклеточной карциномы, рак мочевого пузыря, колоректальный рак, рак молочной железы, шейки матки, толстой кишки, пищевода, головы, почки, печени, легкого, шеи, яичника, поджелудочной железы, предстательной железы и желудка; виды лейкоза; виды доброкачественной и злокачественной лимфомы, в частности лимфому Беркитта и неходжкинскую лимфому; виды доброкачественной и злокачественной меланомы; миелопролиферативные заболевания; множественную миелому, виды саркомы, в том числе саркому Юинга, гемангиосаркому, саркому Капоши, липосаркому, виды миосаркомы, периферическую нейроэпителиому, синовиальную саркому, виды глиомы, виды астроцитомы, виды олигодендроглиомы, виды эпендимомы, виды глиобастомы, виды нейробластомы, виды ганглионевромы, виды ганглиоглиомы, виды медуллобластомы, опухоли из клеток шишковидного тела, виды менингиомы, виды менингеальной саркомы, виды нейрофибромы и виды шванномы; колоректальный рак, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак шейки матки, рак матки, рак легкого, рак яичника, рак яичка, рак щитовидной железы, астроцитому, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак желудка, рак печени, рак толстой кишки, меланому; карциносаркому, болезнь Ходжкина, опухоль Вильмса или виды тератокарциномы, Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз (Т-ALL), Т-клеточную лимфобластную лимфому (T-LL), периферическую Т-клеточную лимфому, Т-клеточный лейкоз взрослых, ALL из пре-В-клеткок, виды лимфомы из пре-В-клеток, В-крупноклеточную лимфому, лимфому Беркитта, В-клеточный ALL, ALL, положительный по филадельфийской хромосоме, и CML, положительный по филадельфийской хромосоме.

[01278] В любом из аспектов или вариантов осуществления, описанных в данном документе, L содержит нелинейные цепи, алифатические, или ароматические, или гетероароматические циклические фрагменты.

[01279] В любом из аспектов или вариантов осуществления, описанных в данном документе, L выбран из группы, состоящей из:

где

«X» представляет собой линейную цепь с количеством атомов в диапазоне от 2 до 14, необязательно замещенную с содержанием при этом гетероатомов; и

«Y» независимо выбран из группы, состоящей из О, N, S(O)_n (n=0, 1, 2).

[01280] ПРИМЕРЫ

[01281] Сокращения

ACN: ацетонитрил

ADDP: 1,1'-(азодикарбонил)дипиперидин

BAST: трифторид N,N-бис(2-метоксиэтил)аминосеры

ВРО: бензоилпероксид

Cbz: карбонилбензилокси

DAST: трифторид диэтиламиносеры

DBE: 1,2-дибромэтан

DCM: дихлорметан

DEAD: диэтилазодикарбоксилат

DIAD: диизопропилазодикарбоксилат

DIBAL: гидрид диизобутилалюминия

DIEA или DIPEA: диизопропилэтиламин

DMA: N,N-диметилацетамид

DMF: N,N-диметилформамид

DMP: перйодинан Десса-Мартина

ЕА: этилацетат

EDCI: 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид

HBTU: N,N,N'N'-тетраметил-O-(1H-бензотриазол-1-ил)урония гексафторфосфат

HMDS: бис9 триметилсилил)амин

НМРА: гексаметилфосфорамид

LDA: диизопропиламид лития

МСРВА: мета-хлорпероксибензойная кислота

MsCl: метансульфонилхлорид

M.W: обработка с помощью микроволнового излучения

NBS: N-бромсукцинимид

NMP: N-метилпирролидон

РСС: хлорхромат пиридиния

Pd-118 или Pd(dtpf)Cl₂: 1,1'-бис(ди-трет-бутилфосфино)ферроцендихлорпалладий

Pd(dppf)Cl₂: 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцендихлорпалладий

Pd(dba)₂: бис(дибензилиденацетон)палладий

Pd₂(dba)₃: трис(дибензилиденацетон)дипалладий

PPTS: п-толуолсульфонат пиридиния

PTSA: п-толуолсульфоновая кислота

RuPhos-Pd-G3: XPhos-Pd-G3: метансульфонат [(2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)-2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладия(II)

RuPhos-Pd-G2: хлор[(2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропокси-1,1'-бифенил)-2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладий(II)

SFC: сверхкритическая флюидная хроматография

t-BuXPhos-Pd-G3: метансульфонат [(2-ди-трет-бутилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1'-бифенил)-2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладия(II)

TEA: триметиламин

TFA: трифторуксусная кислота

TLC: тонкослойная хроматография

ТМР: 2,2,6,6-тетраметилпиперидин

TEMPO: 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-N-оксид

TosCl или TsCl: п-толуолсульфонилхлорид

TsOH: п-толуолсульфоновая кислота

XantPhos: 4,5-бис(дифенилфосфино)-9,9-диметилксантен

XPhos: 2-дициклогексилфосфино-2'4'6'-триизопропилбифенил

XPhos-Pd-G3: метансульфонат [(2-дициклогексилфосфино-2',4',6'-триизопропил-1,1'-бифенил)-2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]палладия(II)

12354-85-7: бис(пентаметилциклопентадиенилродия дихлорид)

[01282] А. Клонирование, экспрессия и очистка CRBN и DDB1 человека.

Процедура является стандартной для специалиста в данной области техники, как продемонстрировано в описании у Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, А K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, В Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H Schafer, H Handa, T О Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012).

[01283] cDNA для генов CRBN и DDB1 может быть амплифицирована с помощью ПЦР с применением Pfusion (NEB) в качестве полимеразы и следующих последовательностей праймера.

[01284] CRBN может быть клонирован в pBV-ZZ-HT-LIC, pBV-GST-LIC, рМА-НТ-LIC, a DDB1 - в pBV-notag-LIC с применением независимого от лигирования клонирования 26. В случае клонирования в вектор pMA-HT-LIC для экспрессии у млекопитающих олигонуклеотид CRBN-Flag-Reverse обеспечивает добавление С-концевой FLAG-метки для выявления с помощью иммуноанализа. DDB1 обеспечивает добавление StrepTag 27. ZZ-метка 28 необходима для обеспечения высокой экспрессии растворимого CRBN; без нее His-CRBN экспрессируется на низком уровне, тогда как GST-CRBN обеспечивает получение агрегированного белка. Рекомбинантный бакуловирус ZZ-His-CRBN и DDB1-StrepTag (ST) получают и амплифицируют с применением бакуловирусной системы экспрессии Bac-to-Bac от Invitrogen в клетках Sf9 насекомых. ZZ-His-CRBN и DDB1-ST экспрессируются совместно в клетках насекомых High Five (Tni) в 10-л одноразовых биореакторах Wave при 27°С с применением недополненной среды ESF921 от Expression Systems. Клетки собирали через 48 часов после инфицирования путем центрифугирования и пасту повторно суспендировали в смеси ингибиторов протеаз PBS plus5X (Roche, Индианаполис, Индиана).

[01285] Все последующие стадии очистки белка проводили при 4°С. Замороженные клетки оттаивали, повторно суспендировали в 5 объемах буфера для лизиса (50 мМ Tris HCl, рН 8,0, 0,5 М NaCl, 10% глицерин, 2 мМ DTT) плюс 20 мМ имидазол и ингибиторы протеазы, подвергали лизису и центрифугировали с получением чистого супернатанта. CRBN-DDB1 очищали на системе

(GE Healthcare) с применением хроматографии на никель-сефарозе и сефакриле S200. Комплекс затем дополнительно очищали с применением анионообменной хроматографии на 8-мл колонке MonoQ и дополнительного пропускания с фильтрацией на геле S-200. CRBN-DDB1 идентифицировали с помощью SDS-PAGE и фракции, содержащие CRBN-DDB1, объединяли и хранили при -70°С.

[01286] 2. Флуоресцентный анализ тепловой денатурации для измерения уровня связывания соединений с рекомбинантным CRBN

[01287] Анализ является стандартным для специалиста в данной области техники, как продемонстрировано в описании у Lopez-Girona et al. (Cereblon is a direct protein target for immunomodulatory and antiproliferative activities of lenalidomide and pomalidomide, A Lopez-Girona, D Mendy, T Ito, K Miller, А K Gandhi, J Kang, S Karasawa, G Carmel, P Jackson, M Abbasian, A Mahmoudi, В Cathers, E Rychak, S Gaidarova, R Chen, P H S chafer, H Handa, T О Daniel, J F Evans and R Chopra, Leukemia 26: 2326-2335, 2012).

[01288] Термическая устойчивость CRBN-DDB1 в присутствии или в отсутствие тестируемых соединений обеспечивалась в присутствии Sypro Orange в микропланшетном формате в соответствии с Pantoliano et al. (Pantoliano MW, Petrella EC, Kwasnoski JD, Lobanov VS, Myslik J, Graf E et al. High-density miniaturized thermal shift assays as a general strategy for drag discovery. J Biomol Screen 2001; 6: 429-440). Два мг белка в 20 мл буфера для анализа (25 мМ Tris HCl, рН 8,0, 150 мМ NaCl, 2 мкМ Sypro Orange) подвергали ступенчатому повышению температуры от 20 до 70°С и флуоресценцию считывали при каждом повышении на 1°С на ABIPrism 7900НТ (Applied Biosystems, Карлсбад, Калифорния, США). Соединения растворяли в DMSO (1% конечная концентрация в анализе) и проводили испытание в четырех повторностях при концентрации в диапазоне от 30 нМ до 1000 мкМ; контроли содержали исключительно l%DMSO.

[01289] 3. Способ LCMS

[01290] Анализ проводили на колонке Poroshell 120 ЕС С18 (50 мм × 3,0 мм (внутренний диаметр), диаметр наполнителя 2,7 мкм) при 45°С.

[01291] Используемыми растворителями являются:

А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде.

В = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле.

[01292] Используемый градиент является следующим.

[01293] УФ-детектирование представляет собой усредненный сигнал от длины волны 210 нм до 350 нм, и масс-спектры записывали на масс-спектрометре с применением ионизации электрораспылением в режиме положительной ионизации.

[01294] Далее проиллюстрированы подвижные фазы и градиенты, применяемые при подвергании соединений очистке посредством препаративной HPLC.

[01295] 4. Препаративная HPLC (муравьиная кислота в качестве модификатора)

[01296] Анализ HPLC проводили на колонке X Bridge RP18 OBD (150 мм × 19 мм внутренний диаметр, диаметр наполнителя 5 мкм) при температуре окружающей среды.

[01297] Используемыми растворителями являются: А = 0,1% об./об. раствор муравьиной кислоты в воде. В = ацетонитрил.

[01298] 5. Препаративная HPLC (бикарбонат аммония в качестве модификатора)

[01299] Анализ HPLC проводили на колонке X Bridge RP18 OBD (150 мм × 19 мм внутренний диаметр, диаметр наполнителя 5 мкм) при температуре окружающей среды.

[01300] Используемыми растворителями являются:

А = 10 мМ бикарбонат аммония в воде.

В = ацетонитрил.

[01301] Для каждого вида препаративной очистки независимо от применяемого модификатора используемый градиент зависит от времени удерживания конкретного соединения, подвергаемого очистке, как записано в аналитической LCMS. Расход составлял 20 мл/мин.

[01302] УФ-детектирование представляет собой сигнал с длиной волны 254 нм или 220 нм.

[01303] Хотя предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения были показаны и описаны в данном документе, будет понятно, что такие варианты осуществления представлены только в качестве примера. Многочисленные вариации, изменения и замены будут понятны специалистам в данной области техники без отступления от сущности настоящего изобретения. Соответственно, предполагается, что прилагаемая формула изобретения охватывает все такие варианты, которые находятся в пределах сущности и объема настоящего изобретения.

[01304] В. Синтез

[01305] Подробности синтеза для примеров, прилагаемых ниже, являются иллюстративными для общих процедур, которые дают представление о синтезе с более широким набором примеров.

[01306] 1. N-(3-(5-бром-2-хлорпиримидин-4-иламино)пропил)-N-метилциклобутанкарбоксамид

[01307]

[01308] Стадия 1. Трет-бутил-N-{3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}-N-метилкарбамат

[01309]

[01310] Смесь трет-бутил-N-(3-аминопропил)-N-метилкарбамата (826 мг, 4,40 ммоль) и 5-бром-2,4-дихлорпиримидина (400 мг, 1,76 ммоль) в МеОН (10 мл) перемешивали при к. т.в течение 1 ч. Затем реакционную смесь концентрировали in vacuo и остаток очищали с применением хроматографии на системе Teledyne ISCO [0 → 35% EtOAc/гептаны] с получением трет-бутил-N-{3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}-N-метилкарбамата (615 мг, выход 92%). LC-MS (ES⁺): масса/заряд = 381,05/383,05 [МН⁺], t_R = 2,55 мин.

[01311] Стадия 2. {3-[(5-Бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}(метил)амин [01312]

[01313] К раствору трет-бутил-N-{3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}-N-метилкарбамата (615 мг, 1,62 ммоль) в DCM (5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (0,54 мл, 6,5 ммоль) при к. т.Затем смесь перемешивали в течение 1 ч., полученное концентрировали in vacuo. Остаток очищали с применением хроматографии на системе Teledyne ISCO [0 → 15% метанола в DCM] с получением {3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}(метил)амина (371 мг, выход 82%). LC-MS (ES⁺): масса/заряд = 280,99/282,99 [МН⁺], t_R = 1,13 мин.

[01314] Стадия 3. N-{3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}-N-метилциклобутанкарбоксамид

[01315]

[01316] К раствору {3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}(метил)амина (371 мг, 1,33 ммоль) и пиклобутанкарбонилхлорида (188 мг, 1,60 ммоль) в DCM (10 мл) при к. т. добавляли триэтиламин (0,41 мл, 2,92 ммоль). Обеспечивали перемешивание реакционной смеси при к. т.в течение 16 ч., затем ее концентрировали in vacuo. Остаток очищали с применением хроматографии на системе Teledyne ISCO [0 → 100% EtOAc/гептаны] с получением N-{3-[(5-бром-2-хлорпиримидин-4-ил)амино]пропил}-N-метилциклобутанкарбоксамида (268 мг, 56%). LC-MS (ES⁺): масса/заряд = 363,04/365,04 [МН⁺], t_R = 2,18 мин.

[01317] 2. (S)-2-(4-(4-хлорфенил)-2,3,9-триметил-6Н-тиено[3,2-f][1,2,4]триазоло[4,3-а][1,4]диазепин-6-ил)уксусная кислота

[01318]

[01319] Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с процедурами, описанными в WO 2011/143660.

[01320] 3. (Z)-4-(4-((2,4-диоксотиазолидин-5-илиден)метил)-2-метоксифенокси)-3-(трифторметил)бензонитрил

[01321]

[01322] Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с процедурами, описанными в Patch, R. J. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 788-808.

[01323] 4. 4-[3-(4-Гидроксифенил)-4,4-диметил-5-оксо-2-сульфанилиденимидазолидин-1-ил]-2-(трифторметил)бензонитрил

[01324]

[01325] Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с процедурами, описанными в Jung, М. Е. et al J. Med. Chem. 2010, 53, 2779-2796.

[01326] 5. Гидрохлоридная соль 2-хлор-4-(транс-3-амино-2,2,4,4-тетраметилциклобутокси)бензонитрила

[01327]

[01328] Указанное в заголовке соединение получали в соответствии с процедурами, описанными в Guo, С. et al J. Med. Chem. 2011, 54, 7693-7704.

[01329] С. Биологические анализы разрушения белка

[01330] Посредством следующих биологических анализов оценивали уровень разрушения белка, наблюдаемого в различных типах клеток при использовании иллюстративных соединений, раскрытых в данном документе.

[01331] В каждом биологическом анализе клетки обрабатывали с помощью различных количеств соединений, охваченных настоящим изобретением. Можно оценить разрушение следующих белков: TANK-связывающей киназы 1 (TBK1), эстрогенового рецептора α (ERα), бромодомен-содержащего белка 4 (BRD4), андрогенового рецептора (AR), с-Мус и тау-белка.

[01332] 1. Анализ соединений из таблицы 2 с применением ERE-люциферазы

[01333] Клетки T47D-KBluc (АТСС® № CRL_2865, T47D раковые клетки молочной железы человека, стабильно трансфицированные конструкцией эстрогенчувствительный элемент/промотор/ген-репортер люциферазы) высевали в 96-луночные белые непрозрачные планшеты в среде для роста RPMI, дополненной 10% фетальной бычьей сывороткой (FBS), и обеспечивали их адгезию в течение ночи в инкубаторе при 37°С с повышенной влажностью. На следующий день клетки обрабатывали PROTAC с применением 12-точечной кривой концентрации (максимальная конечная концентрация составляла 300 нМ с последующими концентрациями в 3 раза меньше, при этом самая низкая концентрация в анализе составляла 2 пМ). Каждый PROTAC тестировали независимо в двух экспериментах в 96-луночных планшетах. Через 24 часа среду удаляли и в лунки добавляли буфер для лизиса. После лизиса добавляли Bright-Glo™ субстрат для анализа с применением люциферазы (Promega, Мадисон, Висконсин) и измеряли активность люциферазы с применением планшет-ридера Cytation 3 (BioTek™, Винооски, Вермонт). Каждое соединение анализировали в двух повторностях и активность рассчитывали в виде IC50 с применением программного обеспечения GraphPad Prism (Сан Диего, Калифорния).

[01334] 2. Анализ разрушения эстрогенового рецептора-альфа (ERα) в клетках MCF-7 с применением способа вестерн-блоттинга для таблицы 5

[01335] Иллюстративные новые разрушители ERα оценивали в отношении их активности касательно разрушения ERα в клетках MCF-7 посредством вестерн-блоттинга. Анализ проводили в присутствии 10% FBS или высокого процента человеческой или мышиной сыворотки. Ниже описаны протоколы вестерн-блоттинга.

[01336] Клетки MCF7 выращивали в DMEM/F12 с 10% FBS и высевали при плотности 24000 клеток на лунку в 100 мкл в 96-луночные прозрачные планшеты для культивирования тканей. На следующий день клетки обрабатывали PROTAC с применением 7-точечной кривой концентрации, при этом 100 нМ являлась максимальной концентрацией, и осуществляли последовательные разведения для получения других концентраций (30 нМ, 10 нМ, 3 нМ, 1 нМ и 0,3 нМ). При всех концентрациях 0,01% DMSO является конечной концентрацией в лунке. На следующий день содержимое планшетов аспирировали, промывали с помощью 50 мкл холодного PBS. Клетки подвергали лизису с помощью 50 мкл/лунка буфера для лизиса клеток при 4°С (№ по каталогу 9803; Cell Signaling Technology, Данверс, Массачусетс) (20 мМ Tris-HCL (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ Na₂EDTA, 1 мМ EGTA, 1% Triton, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ В-глицерофосфат, 1 мМ ванадат натрия, 1 мкг/мл лейпептин). Лизаты осветляли при 16000 х g в течение 10 минут и 2 мкг белка подвергали анализу SDS-PAGE и следующему иммуноблоттингу в соответствии со стандартными протоколами. Применяемые антитела представляли собой антитела к ERα (Cell Signaling Technologies, № по каталогу 8644) и тубулину (Sigma, № по каталогу Т9026; Сент-Луис, Миссури). Реагенты для детектирования представляли собой субстраты ECL Clarity для вестерн-блоттинга (Bio-Rad № по каталогу 170-5060; Геркулес, Калифорния).

[01337] Альтернативно клетки MCF7 выращивали в DMEM/F12 с 10% FBS и высевали при плотности 24000 клеток на лунку в 500 мкл в 24-луночных прозрачных планшетах для культивирования тканей. На следующий день клетки обрабатывали с помощью PROTAC с применением 5-точечной кривой концентрации (100 нМ, 33 нМ, 11 нМ, 3,7 нМ и 1,2 нМ) в присутствии 0,01% DMSO. Через 72 часа содержимое лунок подвергали аспирации и промывали с помощью 500 мкл PBS. Клетки подвергали лизису с помощью 100 мкл/лунка буфера для лизиса клеток при 4°С (№ по каталогу 9803; Cell Signaling Technology, Данверс, Массачусетс) (20 мМ Tris-HCL (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 мМ Na₂EDTA, 1 мМ EGTA, 1% Triton, 2,5 мМ пирофосфат натрия, 1 мМ В-глицерофосфат, 1 мМ ванадат натрия, 1 мкг/мл лейпептин). Лизаты осветляли при 16000 х g в течение 10 минут и 2 мкг белка подвергали анализу SDS-PAGE и следующему иммуноблоттингу в соответствии со стандартными протоколами. Применяемые антитела представляли собой антитела к ERα (Cell Signaling Technologies, № по каталогу 8644) и тубулину (Sigma, №по каталогу Т9026; Сент-Луис, Миссури). Реагенты для детектирования представляли собой субстраты ECL Clarity для вестерн-блоттинга (Bio-Rad № по каталогу 170-5060; Геркулес, Калифорния).

[01338] 3. Анализ разрушения эстрогенового рецептора-альфа (ERα) с применением анализа In-Cell Western™ для таблицы 5.

[01339] Разрушение ERα с помощью заявленных соединений определяли в клетках MCF7 с применением анализа In-Cell Western™. Вкратце, клетки MCF7 высевали в 96-луночных планшетах (2000 клеток на лунку в 100 мкл среды) и инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО₂ в инкубаторе с повышенной влажностью в течение ночи. Сто (100) мкл среды, содержащей тестируемое соединение (при 2х концентрации), добавляли в соответствующие лунки с обеспечением 11 серийно уменьшающихся концентраций (максимальная конечная концентрация 1 мкМ, затем в 3 раза меньше для следующих 10 концентраций); также к каждому соединению добавляли среду-носитель, которая представляла собой контроль (DMSO). Для каждого эксперимента все соединения анализировали на планшетах в двух повторностях. Затем клетки инкубировали в течение 3 или 5 дней в вышеуказанной среде. Анализ завершали путем удаления среды, одного промывания с помощью ледяного PBS и добавления 50 мкл параформальдегида (PFA: 4% в PBS). Через 15 минут в PFA при комнатной температуре клетки подвергали пермеабилизации в Tris-фосфатно-солевом буферном растворе с Tween (0,1%) (TBST), дополненном Triton Х-100 (0,5%), в течение 15 минут. Затем клетки блокировали в BSA (TBST с BSA, 3%) в течение одного часа. Добавляли первичные антитела для обнаружения ERα (моноклональное антитело кролика, 1:1000, Cell Signaling Technology, № по каталогу 8644) и тубулина (моноклональное антитело мыши, 1:5000, Sigma, №по каталогу Т6074) в TBST с BSA (3%). Клетки инкубировали в течение ночи при 4°С. Затем клетки дважды промывали с помощью TBST при комнатной температуре и затем инкубировали с флуоресцентно-мечеными вторичными антителами к Ig кролика и Ig мыши (IRDye®; LI-COR; Линкольн, Небраска) в блокирующем буфере LI-COR (№ по каталогу 927-50000) в течение одного часа при комнатной температуре. После 3 промываний с помощью TBST буфер удаляли и планшеты считывали на инфракрасной системе визуализации Odyssey® (LI-COR®; Линкольн, Небраска) при 700 нм и 800 нм. С применением коммерческого программного обеспечения (ImageStudio™; LI-COR, Линкольн, Небраска) количественно определяли интенсивность окрашивания для ERα и тубулина в каждой лунке и экспортировали для анализа. Для каждой точки данных интенсивность для ERα нормализовали относительно интенсивности для тубулина, и для каждого соединения все нормализированные значения интенсивности нормализовали относительно среды-носителя, представляющей собой контроль. Значения DC₅₀ и D_max определяли после 4-параметрической аппроксимации кривой IC₅₀ с применением модуля ACAS для кривой доза-ответ (McNeil & Со Inc.).

[01340] 4. Протокол вестерн-блоттинга BRD4

[01341] Клетки VCaP приобретали у АТСС и культивировали в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (АТСС), дополненной 10% FBS (АТСС) и пенициллином/стрептомицином (Life Technologies). Обработки контролем в виде DMSO и соединениями (0,003 мкМ, 0,01 мкМ, 0,03 мкМ и 0,1 мкМ) проводили в 12-луночных планшетах в течение 16 ч. Клетки собирали и подвергали лизису в буфере RIP А (50 мМ Tris с рН 8, 150 мМ NaCl, 1% Тх-100, 0,1% SDS, 0,5% дезоксихолата натрия), дополненном ингибиторами протеаз и фосфатаз. Лизаты осветляли при 16000 x g в течение 10 минут и определяли концентрацию белка. Равное количество белка (20 мкг) подвергали анализу SDS-PAGE и последующему иммуноблоттингу в соответствии со стандартными протоколами. Применяемые антитела представляли собой антитела к BRD4 (Cell Signaling, №13440) и актину (Sigma, №5441). Реагенты для детектирования представляли собой субстрат ECL Clarity для вестерн-блоттинга (Bio-rad, № по каталогу 170-5060).

[01342] 5. Протокол анализа ELISA AR

[01343] В данном анализе на примере клеток LNCaP и/или VCaP оценивали соединения с использованием аналогичных протоколов. Протоколы, применяемые в отношении клеток VCaP, описаны ниже. Анализ ELISA в отношении андрогеновых рецепторов проводили с применением PathScan AR Sandwich ELISA (Cell Signaling, №по каталогу 12850) в соответствии со следующими стадиями анализа.

[01344] Клетки VCaP высевали при плотности 40000 клеток/лунка при объеме 100 мкл/лунка в среде для количественного определения VCaP [RPMI без фенолового красного (Gibco, № по каталогу 11835-030); 5% очищенной на активированном угле (обработанной декстраном) FBS (Omega Scientific, № по каталогу FB-04); 1% пенстрепа (Life Technologies,Gibco, № по каталогу 10378-016)] в планшетах Corning 3904. Клетки инкубировали в течение как минимум 3 дней. К клеткам добавляли дозы PROTAC, разбавленные в 0,01% DMSO, и обеспечивали обработку лекарственным средством в течение 5 часов.

[01345] AR ELISA (Cell Signaling) проводили следующим образом. Подготавливали 1х буфер для лизиса клеток Cell Signaling (№ по каталогу 9803; поступил с набором). Среды из лунок, где проводили обработку, подвергали аспирации и добавляли по 100 мкл 1х буфера для лизиса клеток/лунка. Клетки помещали на 10 минут на шейкер при 4°С. Двадцать микролитров лизата переносили в 100 мкл разбавителя в планшете для проведения ELISA (0,15 мкг/мл - 0,075 мкг/мл). Смесь лизат-разбавитель встряхивали в течение 30 минут при 37°С. Обеспечивали достижение антителом к AR мыши, антителом к IgG мыши, ТМВ и стоп-раствором комнатной температуры. Подготавливали 1х буфер для ELISA, включенный в набор, и помещали в резервуар. Среды выливали из планшетов, с усилием постукивали планшетом для ELISA по бумажному полотенцу и промывали 4 раза с помощью 200 мкл промывочного буфера для ELISA с применением устройства для промывки планшетов.

[01346] Добавляли сто (100) мкл/лунка антитела для обнаружения AR мыши; планшеты закрывали и встряхивали при 37°С в течение 1 часа; среды выливали из планшетов, постукивали планшетом по бумажному полотенцу, промывали 4 раза с помощью 200 мкл промывочного буфера для ELISA с помощью устройства для промывки планшетов.

[01347] Добавляли сто (100) мкл/лунка HRP-конъюгированных антител к IgG мыши (поступили с набором); планшеты закрывали и встряхивали при 37°С в течение 30 минут; обеспечивали достижение ТМВ-реагентом комнатной температуры; среды выливали из планшетов, постукивали планшетами по бумажному полотенцу, промывали 4 раза с помощью 200 мкл промывочного буфера для ELISA; постукивали планшетами по бумажному полотенцу. Добавляли сто (100) мкл ТМВ и планшеты встряхивали в течение 2 минут, наблюдая за изменением цвета. После появления светло-голубого цвета добавляли сто (100) мкл стоп-раствора. Планшеты встряхивали и считывали при 450 нМ.

[01348] В прогрессирование рака предстательной железы у пациентов, получающих лечение в виде антиандрогенной терапии, обычно вовлекается один из нескольких механизмов усиленной передачи сигнала к андрогеновым рецепторам (AR), в том числе усиленный внутриопухолевый синтез андрогенов, усиленная экспрессия AR и мутации AR. PROTAC (PROteolysis TArgeting Chimera), в которых используются бифункциональные молекулы, одновременно связывающие «выбранную» цель и Е3-лигазу, обуславливают убиквитинирование посредством индуцированной близости и разрушение целевого патологического белка. В отличие от традиционного ингибирования мишени, которое является конкурентным процессом, прогрессивным способом является разрушение. По сути, он менее чувствителен к увеличению количества эндогенного лиганда, экспрессии целевого белка или мутациям в мишени. Таким образом, данная технология считается оптимальной в отношении направленности на механизмы устойчивости AR у пациентов, больных раком предстательной железы. Анализировали полученные данные и наносили на график с применением программного обеспечения GraphPad Prism.

[01349] 6. Протокол анализа ELISA в отношении с-Мус человека, регулируемого BRD4

[01350] Клетки 22RV-1 высевали при плотности 30000 клеток/лунка при объеме 75 мкл/лунка в среде RPMI с 10% FBS в 96-луночных планшетах и выращивали в течение ночи при 37°С. К клеткам добавляли дозы разбавленных в 0,4% DMSO соединений в 4-кратной концентрации; соединения последовательно разводили 1:3 для получения 8-точечной кривой зависимости от дозы. К клеткам добавляли двадцать пять (25) мкл соединений до конечной концентрации, начиная от значения 300 нМ - 0,3 нМ или 1 мкМ - 1 нМ в 0,1% DMSO, и инкубировали в течение 18 часов. Среды подвергали аспирации, клетки промывали 1 раз с помощью PBS и подвергали аспирации. Клетки подвергали лизису в 50 мкл буфера RIPA (50 мМ Tris с рН 8, 150 мМ NaCl, 1% Тх-100, 0,1% SDS, 0,5% дезоксихолата натрия), дополненного ингибиторами протеазы и фосфатазы. Планшеты инкубировали с помощью льда в течение 15 минут, затем центрифугировали при 4°С в течение 10 минут при 4000 об./мин. Пятьдесят (50) мкл очищенного лизата из 96-луночного аналитического планшета добавляли в 96-луночный планшет для ELISA c-myc (Novex, Life Technologies, № по каталогу KH02041). Стандарт c-myc растворяли с помощью стандартного буфера для разбавления; посредством разбавления 1:2 получали стандартную кривую в диапазоне значений 333 пг/мл - 0 пг/мл для обеспечения 8-точечной кривой зависимости от дозы. Остальную часть анализа проводили согласно протоколу из набора для ELISA c-myc. Анализировали полученные данные и наносили на график с применением программного обеспечения GraphPad Prism. Соединения, описанные в данном документе, анализировали, а показатели эффективности подавления c-myc перечислены в таблице 4.

[01351] 7. Иммуноблоттинг BRD4

[01352] Клеточные линии 22Rv1 и VCaP приобретали у АТСС. Антитела к BRD2 (№5848), BRD4 (№13440), PARP (№9532), с-Мус (№5605) приобретали у Cell Signaling. Антитело к BRD3 (sc-81202) приобретали у Santa Cruz Biotech. Применяемые антитела для иммуногистохимического исследования представляли собой антитела к c-MYC (Abcam, № ab32072) и BRD4 (Bethyl Laboratories, № а301-985а50). Антитела к актину и тубулину приобретали у Sigma.

[01353] Клетки подвергали лизису в буфере RIPA (Thermo Fisher, № по каталогу 89900), дополненном ингибиторами протеазы (ингибитор протеазы в виде таблеток Pierce™, без EDTA, № по каталогу 88266). Лизаты центрифугировали при 16000 × g и супернатанты применяли для SDS-PAGE. Вестерн-блоттинг проводили согласно стандартным протоколам.

[01354] 8. Анализ пролиферации клеток в отношении BRD4

[01355] Клетки 22RV-1 высевали при плотности 5000 клеток/лунка при объеме 75 мкл/лунка в среде RPMI + 10% FBS в 96-луночных планшетах и выращивали в течение ночи при 37°С. К клеткам добавляли дозы разбавленных в 0,4% DMSO соединений в четырех концентрациях; соединения последовательно разводили 1:3 для получения 10-точечной кривой зависимости от дозы. К клеткам добавляли двадцать пять (25) мкл соединений до конечной концентрации, начиная от значения 300 нМ - 0,3 нМ в 0,1% DMSO, и инкубировали в течение 72 часов. В отдельном планшете 100 мкл препарата высевали в 8 лунок при плотности 5000 клеток/лунка, добавляли 100 мкл CellTiter-Glo (CellTiter-Glo^® для люминесцентного анализа жизнеспособности клеток, Promega, № G7573) и инкубировали в течение 30 минут, затем считывали на люминометре, чтобы оценить начальный сигнал в отношении роста клеток. Через 72 часа добавляли 100 мкл CellTiter-Glo® и инкубировали в течение 30 минут, затем считывали на люминометре. Анализировали полученные данные и наносили на график с применением программного обеспечения GraphPad Prism.

[01356] 9. Анализ апоптоза в отношении BRD4

[01357] Клетки 22RV-1 высевали при плотности 5000 клеток/лунка при объеме 75 мкл/лунка в среде RPMI + 10% FBS в 96-луночных планшетах и выращивали в течение ночи при 37°С. К клеткам добавляли дозы разбавленных в 0,4% DMSO соединений в 4-кратных концентрациях; соединения последовательно разводили 1:3 для получения 8-точечной кривой зависимости от дозы. К клеткам добавляли двадцать пять (25) мкл соединений до конечной концентрации, начиная от значения 300 нМ - 0,3 нМ в 0,1% DMSO, и инкубировали в течение 48 часов. Через 48 часов добавляли 100 мкл Caspase-Glo® 3/7 (Promega Caspase-Glo® 3/7 Assay, № G8093 и инкубировали в течение 30 минут, затем считывали на люминометре. Анализировали полученные данные и наносили на график с применением программного обеспечения GraphPad Prism.

[01358] 10. Анализ разрушения тау-белка in vitro

[01359] Для определения эффекта PROTAC в отношении разрушения тау-белка клетки SK-N-SH высевали в 24-луночный планшет, обработанный культурой тканей, за по меньшей мере 18 часов перед добавлением соединений. PROTAC, целенаправленно воздействующие на тау-белок, оценивали в отношении разрушения тау-белка посредством лизирования клеток в буфере для RIPA с ингибиторами протеазы с последующей 72-часовой инкубацией с PROTAC, целенаправленно воздействующими на тау-белок. Клеточные лизаты анализировали на стандартных гелях для SDS-PAGE, и уровни тау-белка определяли с помощью вестерн-блоттинга с применением антитела к тау-белку 13 от Abcam (Кембридж, Великобритания), которое связывается со всеми формами тау-белка человека. Данные представлены в таблице 6.

[01360] Низкомолекулярные ингибиторы были основой в разработке противоопухолевых лекарственных средств и функционировали, как правило, путем ингибирования ферментативной активности (к примеру, ингибиторы киназ) или за счет препятствования взаимодействиям белок-белок (к примеру, ингибиторы BRD4). Учитывая обратимое связывание большинства низкомолекулярных ингибиторов, для обеспечения достаточного функционального ингибирования зачастую необходимы высокие концентрации системного лекарственного средства. Кроме того, достижение и поддержание высокого уровня системного лекарственного средства, необходимого для эффективности in vivo, оказалось проблематичным для многих мишеней.

[01361] BRD4, представитель семейства, предусматривающего бромодомен и экстратерминальный домен (BET), представляет собой белок, характеризующийся двумя бромодоменами (BD-домен) на N-конце и эстратерминальным доменом (ЕТ-домен) на С-конце. Два BD-домена распознаются и взаимодействуют с остатками ацетилированного лизина на N-концевом хвосте гистонового белка. Считается, что ЕТ-домен выполняет поддерживающую функцию в привлечении различных регуляторов транскрипции, но до сих пор не полностью охарактеризован. Было показано, что BRD4 расположен в областях суперэнхансеров, которые часто предшествуют важным онкогенам, таким как c-MYC, Bcl-xL и BCL-6, и играют ключевую роль в регулировании их экспрессии. Исходя из роли BRD4 в регулировании экспрессии генов за счет привлечения соответствующих модуляторов транскрипции в конкретные геномные локусы, BRD4 является мишенью перспективного лекарственного средства для осуществления лечения и/или предупреждения ряда видов рака человека, таких как промежуточная карцинома, острый миелоидный лейкоз (AML), множественная миелома (ММ), лимфома Беркитта (BL) и рак предстательной железы.

[01362] Было разработано несколько низкомолекулярных ингибиторов бромодомена BET, таких как JQ1, iBET и ОТХ15, которые проявляли терапевтический потенциал в определенных доклинических моделях различных видов рака, в том числе BL. Почти все случаи BL предусматривают транслокацию гена с-myc, которая ставит его под контроль суперэнхансера, предшествующего IgH, обеспечивая, таким образом, аномально высокий уровень экспрессии c-MYC, развитие и поддержание опухоли. Доклинические исследования с ингибиторами BRD4 демонстрируют их способность подавлять c-MYC и пролиферацию в клеточных линиях BL; тем не менее, значения IC₅₀ таких ингибиторов зачастую находятся в диапазоне от 100 нМ до 1 мкМ.

[01363] Материалы и способы

[01364] Ниже по тексту представлены подробности плана эксперимента и процедур.

[01365] Ингибиторы JQ1, ОТХ-15 и помалидомид синтезировали в соответствии с опубликованными способами.

[01366] 1. Определение K_D

[01367] Эксперименты с применением поверхностного плазмонного резонанса (SPR) проводили на Biacore3000 (GE Healthcare). Мус-меченный цереблон иммобилизировали на поверхности карбоксиметилированного декстрана (СМ5), связанного с использованием амина с антителом к Мус для распознавания метки Мус. His-меченный белок цереблон иммобилизировали на поверхности карбоксиметилированного декстрана с помощью нитрилоуксусной кислоты (NTA), пользуясь преимуществом хелатирования NTA/Ni²⁺. Подготовленную поверхность оставляли достигать состояния равновесия в течение трех часов в подвижном буфере (10 мМ буфер HEPES при рН 7,4, 150 мМ NaCl, 0,005% Р20, 2% DMSO).

[01368] Все соединения подготавливали в исходных планшетах со 100% DMSO с максимальной концентрацией, составляющей 5 мМ, в 3-кратных последовательных разведениях. Соединения переносили из исходного планшета в аналитический планшет и разбавляли подвижным буфером, не содержащим DMSO. Все соединения обрабатывали как серию образцов с шестью концентрациями, при этом конечная максимальная концентрация в анализе составляла 100 мкМ.

[01369] Данные анализа заносили в Scrubber 2 (программное обеспечение BioLogic, Кэмпбелл, Австралия). Результаты холостых опытов вычитали и в данные вносили поправку по DMSO относительно стандартной кривой для DMSO. Все зарегистрированные значения KD представляют собой среднее значение для по меньшей мере N=2 и были получены путем аппроксимации не менее пяти показателей концентрации с применением алгоритма аппроксимации 1:1. Данные представлены в таблице 1 ниже, где «а» представляет собой K_D<1 мкМ, «b» представляет собой K_D от 1 мкМ до 10 мкМ, «с» представляет собой K_D от >10 мкМ до 100 мкМ, и «d» представляет собой K_D>100 мкМ или означает отсутствие ответа.

[01370] 2. Клетки и реагенты

[01371] Клетки NAMALWA, Ramos, СА-46 и DAUDI приобретали у АТСС и поддерживали согласно инструкции. Антитела к BRD4 (№ Е2А7Х), c-MYC (№ D84C12), PARP (№46D11) приобретали у Cell Signaling Technology. Антитело к актину (№ А5441) приобретали у SigmaAldrich. Вторичные антитела (№7074, №7076) приобретали у Cell Signaling Technology. MG132 (№ М7449) приобретали у SigmaAldrich. Карфизомиб (№ S2853) приобретали у Selleck.

[01372] 2. Анализ посредством вестерн-блоттинга

[01373] Культивируемые клетки собирали в буфере для лизиса, содержащем 40 мМ HEPES (рН 7,4), 140 мМ NaCl, 2,5 мМ EDTA, 1% NP-40, 0,1% SDS и смесь ингибиторов протеаз. Через 10 минут центрифугирования (14000 об./мин.) собирали супернатант для определения концентрации белка посредством способа ВСА и подвергали иммуноблоттингу согласно стандартному протоколу. Результаты вестерн-блоттинга визуализировали с применением субстрата для вестерн-блоттинга Clarity ECL Bio-Rad на системе визуализации ChemiDocTM MP Bio-Rad.

[01374] 3. RT-PCR

[01375] Выделение РНК проводили с помощью набора Total RNA Mini Kit Aurum™ (№732-6820) от Bio-Rad. cDNA первой цепи из общей РНК синтезированнли с помощью набора для высокопроизводительной обратной транскрипции cDNA (№4368813) от Life Technologies в соответствии с инструкцией изготовителя. Количественную ПЦР проводили с применением Bio-rad SsoAdvanced™ Universal SYBR® Green Supermix (№172-5271). Применяли следующие праймеры.

[01376] 4. Анализ пролиферации

[01377] Чтобы оценить влияние ингибиторов на пролиферацию, клетки (50000/100 мкл) высевали в 96-луночные планшеты для культивирования тканей с последующим добавлением соединения в указанной концентрации. Через 72 часа добавляли 100 мкл на лунку растворенного реагента CellTiter-Glo (CTG) (№ G7572, от Promega) и считывали на ридере с опцией визуализации Cytation 3 от BioTek. Относительный рост клеток определяли посредством сравнения результатов считывания обработанных исследуемыми соединениями клеток с клетками, обработанными контролем в виде DMSO.

[01378]

[01379] 5. Промышленная применимость

[01380] Описана новая бифункциональная молекула, которая содержит фрагмент, который рекрутирует BRD4 или андрогеновый рецептор, и фрагмент, который рекрутирует цереблон Е3-лигазного комплекса, полученная по технологии PROTAC. Бифункциональные молекулы по настоящему изобретению активно разрушают BRD4, что приводит к значительному и стойкому угнетению экспрессии последующего MYC, а также к сильному подавлению клеточной пролиферации и индукции апоптоза. PROTAC-опосредованное разрушение белка обеспечивает перспективную стратегию направленного воздействия на патологические белки, «не поддающиеся воздействию лекарственных средств» из традиционных подходов.

[01381] Содержание всех ссылок, патентов, находящихся на рассмотрении заявок на патент и опубликованных патентов, цитируемых на протяжении данной заявки, таким образом, в выраженной форме включено в данный документ посредством ссылки.

[01382] Специалистам в данной области техники будет очевидным множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, описанного в данном документе, или они смогут определить его с применением только стандартных экспериментов. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются следующей формулой изобретения. Известно, что подробные примеры и варианты осуществления, описанные в данном документе, приведены в качестве примера исключительно для иллюстративных целей и никоим образом не рассматриваются как ограничивающие настоящее изобретение. С учетом этого специалистам в данной области техники будут понятны различные модификации или изменения, и они включены в сущность и содержание данной заявки и рассматриваются в пределах объема прилагаемой формулы изобретения. Например, можно варьировать относительные количества ингредиентов для оптимизации необходимых эффектов, можно добавлять дополнительные ингредиенты и/или можно заменять аналогичные ингредиенты одним или более из описанных ингредиентов. Дополнительные преимущественные признаки и функции, связанные с системами, методами и способами по настоящему изобретению, будут очевидны из прилагаемой формулы изобретения. Более того, специалистам в данной области техники будет очевидным множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления настоящего изобретения, описанного в данном документе, или они смогут определить его с применением только стандартных экспериментов. Предполагается, что такие эквиваленты охватываются следующей формулой изобретения.

Claims

1. Бифункциональное соединение, имеющее химическую структуру:

или его фармацевтически приемлемая соль, энантиомер или стереоизомер,

где

(a) РТМ представляет собой фрагмент, связывающийся с андрогеновым рецептором (АВМ), включающий структуру

причем:

W¹ представляет собой арил, выбранный из фенила, нафтила, антраценила и фенантренила, независимо замещенный 1 или более галогеном, CN или метокси (-ОМе);

каждый из Y³, Y⁴, Y⁵ независимо представляет собой связь, О, NR^Y2, С=O;

Q представляет собой 3-6-членное кольцо с 0-4 гетероатомами, необязательно замещенное 0-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, линейный С_1-6алкил, галоген или 2 группы R^Q, взятые вместе с атомом, к которому они присоединены, образуют 3-8-членную кольцевую систему, содержащую 0-2 гетероатома;

R^Y2 представляет собой Н;

W² представляет собой связь, арил, выбранный из фенила, нафтила, антраценила и фенантренила, или гетероарил, выбранный из пиридинила, пиридазинила, пиримидинила и пиразинила;

(b) L представляет собой химический линкерный фрагмент, ковалентно связывающий CLM и РТМ и

содержит химическое структурное звено, представленное формулой -(A^L)_q-,

где:

каждый A^L независимо выбран из группы, состоящей из CR^L1R^L2, О, NR^L3,

СО, CR^L1=CR^L2, С_3-11циклоалкила, С_3-11гетероциклила, содержащего по меньшей мере один гетероатом, выбранный из N, О или S, арила, выбранного из фенила, нафтила, антраценила и фенантренила; и

каждая из R^L1, R^L2 и R^L3 независимо представляет собой Н, С_1-8алкил, или ОН; и

(с) CLM имеет химическую структуру, выбранную из группы, состоящей из:

где

каждый из Q₁, Q₂, Q₃, Q₄, Q₅ независимо представляет собой N, NR' или CR';

R¹ представляет собой Н или CN;

R² представляет собой Н;

R³ представляет собой Н;

R⁴ выбран из Н или алкила;

R⁵ представляет собой Н;

X представляет собой СН или N;

R' выбран из Н, галогена, метила, алкокси, или C(=O)OR²;

и

2. Бифункциональное соединение по п. 1, где CLM соединен с химической линкерной группой (L) посредством X, R³, R⁴, R', Q₁, Q₂, Q₃, Q₄ или Q₅.

3. Бифункциональное соединение по любому из пп. 1-2, причем:

Q представляет собой 4-членное алициклическое кольцо с 0-2 гетероатомами, необязательно замещенное 1-6 R^Q, при этом каждая R^Q независимо представляет собой Н, линейный С_1-6алкил; и

W² представляет собой арил, выбранный из фенила, нафтила, антраценила и фенантренила, или гетероарил, выбранный из пиридинила, пиридазинила, пиримидинила и пиразинила.

4. Бифункциональное соединение по п. 1, где CLM представлен химической структурой

причем Q₁, Q₂, Q₃, Q₄, Q₅ каждый независимо представлен атомом С, замещенным R';

R⁴ представляет собой Н; и

R' выбран из Н, галогена, алкокси и C(=O)OR².

5. Бифункциональное соединение по любому из пп. 1-3, где CLM представлен химической структурой

6. Бифункциональное соединение по любому из пп. 1-3, где CLM представлен химической структурой, выбранной из:

7. Бифункциональное соединение по п. 1, где L выбран из группы, состоящей из:

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-,

-O-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-N(R)-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-O-;

-(CH2)_m-O(CH2)_n-O(CH2)_o-O(CH2)_p-O(CH2)_q-O(CH2)_r-OCH2-;

X в линкере представляет собой Н;

где m в линкере может равняться 2, 3, 4, 5;

где каждый n и m в линкере независимо может равняться 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6,7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20.

8. Бифункциональное соединение по п. 1, где L выбран из группы, состоящей из:

и

; где каждый m и n независимо выбран из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19,20.

9. Бифункциональное соединение по п. 1, где линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

10. Бифункциональное соединение по п. 1, где линкер (L) выбран из группы, состоящей из:

11. Бифункциональное соединение по п. 1, где линкер (L) выбран из:

где

«X» в вышеуказанных структурах может представлять собой линейную цепь с количеством атомов, находящимся в диапазоне от 2 до 14, и при этом указанная цепь может содержать гетероатомы, и

«Y» в вышеуказанных структурах может представлять собой О, N.

12. Бифункциональное соединение по п. 1, где линкер (L) выбран из:

13. Бифункциональное соединение по п. 12, где линкер (L) представляет собой:

14. Бифункциональное соединение по п. 13, где линкер (L) представляет собой:

, причем n равно 1.

15. Бифункциональное соединение по п. 1, где соединение выбрано из группы, состоящей из PROTAC-27, PROTAC-29, PROTAC-47 PROTAC-63, PROTAC-70, PROTAC-79 и PROTAC-80:

16. Бифункциональное соединение, которое представляет собой

17. Применение бифункционального соединения по любому из пп. 1-16 для индуцирования разрушения целевого белка в клетке у нуждающегося в этом субъекта, заключающееся во введении данному субъекту эффективного количества соединения по любому из пп. 1-16.

18. Применение по п. 17, причем соединение вводится в комбинации с дополнительным биоактивным агентом, представляющим собой противоопухолевый агент.

19. Применение по п. 17, причем субъект страдает от рака.

20. Применение по п. 19, причем рак представляет собой рак простаты.

21. Фармацевтическая композиция для индуцирования разрушения целевого белка в клетке, содержащая эффективное количество бифункционального соединения по любому из пп. 1-16 и фармацевтически приемлемый носитель.

22. Фармацевтическая композиция по п. 21, где композиция дополнительно содержит по меньшей мере один биоактивный агент, представляющий собой противоопухолевый агент, или другое бифункциональное соединение по любому из пп. 1-16.

23. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество по меньшей мере одного соединения по любому из пп. 1-16 и фармацевтически приемлемый носитель, добавку и/или вспомогательное вещество, предназначенная для применения в лечении заболевания или нарушения, ассоциированного с накоплением и/или агрегацией целевого белка.

24. Фармацевтическая композиция для применения по пп. 23, где заболевание или нарушение является раком.

25. Фармацевтическая композиция для применения по п. 24, где рак представляет собой рак простаты.

26. Фармацевтическая композиция по п. 23, содержащая дополнительный биоактивный агент, представляющий собой противоопухолевый агент.

27. Фармацевтическая композиция по п. 26, где указанное противораковое средство представляет собой ингибитор FLT-3, ингибитор VEGFR, ингибитор TK EGFR, ингибитор киназы Aurora, модулятор PIK-1, ингибитор Bcl-2, ингибитор HDAC, ингибитор с-МЕТ, ингибитор PARP, ингибитор Cdk, ингибитор IGFR-TK, ингибиторы киназы PI3, ингибитор AKT, ингибитор mTORC1/2, ингибитор JAK/STAT, ингибитор контрольной точки 1 или 2, ингибитор киназы фокальной адгезии, ингибитор киназы Map-киназы (mek), антител к ловушке VEGF, пеметрексед, ипилимумаб, вориностат, этопозид, гемцитабин, доксорубицин, винкристин, темозоломид, капецитабин, PEG-меченный иринотекан, тамоксифен, анастразол, эксеместан, летрозол, DES (диэтилстилбестрол), эстрадиол, эстроген, бевацизумаб, гозерелина ацетат, лейпролида ацетат, трипторелина памоат, медроксипрогестерона ацетат, гидроксипрогестерона капроат, мегестрола ацетат, ралоксифен, бикалутамид, флутамид, нилутамид, бусерелин, карбоплатин, цисплатин, ципротерон, дакарбазин, метотрексат, митоксантрон, памидронат, эстрамустин, винбластин, винорелбин, топотекан, финастерид, доцетаксел, арзоксифен, фулвестрант, золендронат, преднизон, гистрелин, кетоконазол.

28. Применение соединения по любому из пп. 1-16 для приготовления лекарственного средства для индуцирования разрушения целевого белка в клетке путем введения эффективного количества в клетку, где соединение обеспечивает разрушение целевого белка.

29. Фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-16, для лечения рака, ассоциированного с накоплением и/или агрегацией целевого белка.

30. Фармацевтическая композиция по п. 29, где рак представляет собой рак простаты.