RU2786222C1 - Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами - Google Patents
Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами Download PDFInfo
- Publication number
- RU2786222C1 RU2786222C1 RU2022106171A RU2022106171A RU2786222C1 RU 2786222 C1 RU2786222 C1 RU 2786222C1 RU 2022106171 A RU2022106171 A RU 2022106171A RU 2022106171 A RU2022106171 A RU 2022106171A RU 2786222 C1 RU2786222 C1 RU 2786222C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- tlr
- antigen
- multicomponent vaccine
- increase
- vaccine
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 title description 5
- 244000039328 opportunistic pathogens Species 0.000 title description 3
- 102000002689 toll-like receptors Human genes 0.000 claims abstract description 29
- 108020000411 toll-like receptors Proteins 0.000 claims abstract description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 12
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 9
- 229940023064 Escherichia coli Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 8
- 102100016020 IFNG Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 101700086956 IFNG Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims abstract description 6
- 229940045505 Klebsiella pneumoniae Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 claims abstract description 6
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims abstract description 5
- 229940076185 Staphylococcus aureus Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229940007042 Proteus vulgaris Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drugs Drugs 0.000 abstract description 11
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 abstract description 10
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000001225 therapeutic Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 206010047461 Viral infection Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000001756 Virus Disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000001684 chronic Effects 0.000 abstract description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 4
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 abstract description 4
- 200000000018 inflammatory disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003612 virological Effects 0.000 abstract description 3
- 206010060945 Bacterial infection Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000004936 stimulating Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 210000001035 Gastrointestinal Tract Anatomy 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 210000000952 Spleen Anatomy 0.000 description 6
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 6
- 210000003563 Lymphoid Tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 4
- 210000003705 Ribosomes Anatomy 0.000 description 4
- 241001591005 Siga Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 230000000813 microbial Effects 0.000 description 4
- 230000035812 respiration Effects 0.000 description 4
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 4
- 206010006451 Bronchitis Diseases 0.000 description 3
- 206010006458 Bronchitis chronic Diseases 0.000 description 3
- 208000007451 Chronic Bronchitis Diseases 0.000 description 3
- 210000004443 Dendritic Cells Anatomy 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 101710019325 GDI2185 Proteins 0.000 description 3
- 210000000987 Immune System Anatomy 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 210000002433 Leukocytes, Mononuclear Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 Lymphocytes Anatomy 0.000 description 3
- 101700036978 OMP Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108010001801 Tumor Necrosis Factor-alpha Proteins 0.000 description 3
- 230000001413 cellular Effects 0.000 description 3
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 3
- 101700064522 eaeA Proteins 0.000 description 3
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 3
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 3
- 229940121354 immunomodulators Drugs 0.000 description 3
- 230000001681 protective Effects 0.000 description 3
- 208000006673 Asthma Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 210000000621 Bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 210000002421 Cell Wall Anatomy 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 210000000214 Mouth Anatomy 0.000 description 2
- 210000003928 Nasal Cavity Anatomy 0.000 description 2
- 229940031000 Streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100012096 TLR2 Human genes 0.000 description 2
- 101700064022 TLR2 Proteins 0.000 description 2
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 2
- 101710025802 YME1L1 Proteins 0.000 description 2
- 102100008225 YME1L1 Human genes 0.000 description 2
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000240 adjuvant Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 230000000699 topical Effects 0.000 description 2
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 1
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 1
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 1
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 Bone Marrow Anatomy 0.000 description 1
- 102100019446 CD72 Human genes 0.000 description 1
- 101700002874 CD72 Proteins 0.000 description 1
- 241000700112 Chinchilla Species 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 229940087586 ESCHERICHIA COLI ANTIGEN Drugs 0.000 description 1
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 229940047650 Haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 229940045808 Haemophilus influenzae type b Drugs 0.000 description 1
- 208000006213 Herpesviridae Infection Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000004090 Immunoglobulin Isotypes Human genes 0.000 description 1
- 108090000539 Immunoglobulin Isotypes Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 210000004731 Jugular Veins Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 Killer Cells, Natural Anatomy 0.000 description 1
- 206010024971 Lower respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 210000001165 Lymph Nodes Anatomy 0.000 description 1
- 210000002540 Macrophages Anatomy 0.000 description 1
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 229940055023 Pseudomonas aeruginosa Drugs 0.000 description 1
- 208000006311 Pyoderma Diseases 0.000 description 1
- 239000007759 RPMI Media 1640 Substances 0.000 description 1
- 206010038683 Respiratory disease Diseases 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 1
- 210000003296 Saliva Anatomy 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039447 Salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- 229940076156 Streptococcus pyogenes Drugs 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241001312524 Streptococcus viridans Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-Lymphocytes Anatomy 0.000 description 1
- 102100012087 TLR4 Human genes 0.000 description 1
- 101700022711 TLR4 Proteins 0.000 description 1
- 102100016391 TLR9 Human genes 0.000 description 1
- 108010060818 Toll-Like Receptor 9 Proteins 0.000 description 1
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 201000005794 allergic hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 description 1
- 229960000070 antineoplastic Monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogens Species 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000036978 cell physiology Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000002596 correlated Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing Effects 0.000 description 1
- 229920003013 deoxyribonucleic acid Polymers 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 201000003453 lung abscess Diseases 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 239000002609 media Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 229960000060 monoclonal antibodies Drugs 0.000 description 1
- 102000005614 monoclonal antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108010045030 monoclonal antibodies Proteins 0.000 description 1
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organs Anatomy 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological Effects 0.000 description 1
- 238000003909 pattern recognition Methods 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003449 preventive Effects 0.000 description 1
- 230000000770 pro-inflamatory Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory Effects 0.000 description 1
- 201000003176 severe acute respiratory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 201000010874 syndrome Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissues Anatomy 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogens Species 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области медицинской иммунологии, к исследованию молекулярно-клеточного механизма действия иммунобиологического лекарственного средства для профилактики и терапии хронических воспалительных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии. Предложено применение поликомпонентной вакцины, состоящей из водорастворимых антигенов, выделенных из штаммов Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli и Staphylococcus aureus. Вакцина содержит паттерн-ассоциированные молекулярные структуры микроорганизмов, являющиеся лигандами Толл-подобных рецепторов для вызывания у экспериментальных животных при энтеральном введении увеличения содержания клеток, экспрессирующих TLR 4 от 1,5 до 14,0%; TLR 9 от 2,2 до 15,5% с последующей продукцией IL-1β от 15,0 до 18,0 пг/мл, IL-6 от 120 до 140 пг/мл, IL-12 от 10,0 до 12,0 пг/мл; при подкожном введении - увеличения содержания TLR 2 от 3,0 до 11,0%; TLR 4 от 1,2 до 11,6%; TLR 9 от 4,0 до 13,2% с последующей продукцией IL-1β от 65 до 68 пг/мл, IL-6 от 190 до 220 пг/мл, IL-12 от 35,0 до 40,0 пг/мл; IFNγ от 34,0 до 38,0 пг/мл, и стимулирования образования специфических антител ОП450 при разведении сыворотки 1:3200 к антигену кишечной палочки 2,2-2,4 у.е.; к антигену клебсиеллы 1,5-1,9 у.е.; к антигену протея 1,8-2,1 у.е.; к антигену стафилококка 1,5-1,8 у.е. В результате активации эффекторов врожденного и адаптивного иммунитета поликомпонентная вакцина защищает экспериментальных животных от бактериальной и вирусной инфекции и объясняет терапевтический и профилактический эффект ее применения. 9 табл., 2 пр.
Description
Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами.
Изобретение относится к области медицинской иммунологии, к исследованию молекулярно-клеточного механизма действия иммунобиологического лекарственного средства для профилактики и терапии хронических воспалительных заболеваний бактериальной и вирусной этиологии.
Поликомпонентная вакцина из антигенов условно-патогенных микроорганизмов относится к классу терапевтических вакцин. Термин «терапевтическая вакцина» используют для обозначения вакцин, которые в отличие от иммуномодуляторов микробного происхождения, обладают способностью активировать не только врожденный, но и адаптивный иммунитет [Семенов Б.Ф., Егорова Н.Б., Семенова И.Б., Курбатова Е.А. Терапевтические вакцины. Российские медицинские вести. 2000, №3:26-32]. Активация эффекторов врожденного иммунитета, приводящая к последующему развитию адаптивного иммунитета, определяется наличием в составе терапевтических вакцин паттерн-ассоциированный молекулярных структур микроорганизмов.
В настоящее время известно, что консервативные антигенные структуры бактерий (Pathogen-Associated Molecular Patterns - PAMPs): липополисахарид, тейхоевая кислота, пептидогликан, белки наружной мембраны и др., являющиеся общими для многих видов бактерий, активируют паттерн-распознающие рецепторы (Pattern-Recognition Re-ceptors - PRRs), такие как сигнальные Толл-подобные рецепторы (Toll-like Receptors - TLRs), экспрессируемые на мембране иммуно-компетентных клеток, и могут быть одним из инструментов управления системой врожденного иммунитета [Пащенко М.В., Пинегин Б.В., Физиология клеток врожденной иммунной системы: дендритные клетки. Иммунология. 2006, №6: 368-378. Medzhitov R., Janeway Jr. С.А. Innate immunity: impact in the adaptive immune response. Curr. Opin. Immunol.1997, 9: 4-9. Medzhitov R., Janeway Jr. C.A.Decoding the patterns of self and nonself by the innate immune system. Science. 2002, 296:298-300]. Лигандами для TLR2 являются пептидогликан и тейхое-вая кислота, для TLR4 - липополисахарид, для TLR9 - ДНК. Взаимодействие PAMPs с TLRs приводит к активации ядерного фактора транскрипции NF-κВ и экспрессии генов провоспалительных и противовоспалительных цитокинов, определяя направленность развития иммунного ответа по Th1 или Th2 пути [Mosman T.R., Fong Т.А., Specific assay for cytokine production. J. Immunol. Meth.1989, 116(2): 151-158. Romagnani S., Parronchi O., Delios M.M. et al. An update on human Th1 and Th2 cells. Int. Arch. Allergy Immunol. 1997, 11:153-156].
Аналогами поликомпонентной вакцины являются иммуномоду-ляторы микробного происхождения, которые в отличие от поликомпонентной вакцины не вызывают активации адаптивного иммунитета с образованием специфических IgG-антител к антигенам, входящим в их состав. Клинический эффект от их применения непродолжительный - от 3 до 6 месяцев, схема применения длительная (4-5 месяцев).
Бронховаксом® и его аналог - бронхомунал® " бактериальные лизаты 8 видов микроорганизмов: Streptococcus pneumoniae, Heamophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozenae, Staphylococcus aureus, Moraxella catarrhalis, Streptococcus pyogenes, Strepto-coccus viridans, полученные воздействием щелочи. Каждый из микроорганизмов находится в препарате в равной пропорции. Бактериальный экстракт содержит менее 1 нг ЛПС/мг.Препараты предназначены для перорального применения в капсулах. Длительность иммунотерапии хронических воспалительных заболеваний органов дыхания на фоне базисной терапии составляет 4 месяца [Dererme J.Ph., Delclaux В. Clinical experience with OM-85 BV in upper and lower respiratory tract infections. Respiration. 1992, 59. - Suppl. 3. - 28-31. Paupe J. Immunotherapy with an oral bacterial extract (OM-85 BV) for upper respiratory infections. Respiration. 1991,58:150-154. Emmerich В., Pachmann K., Mila-tovic D., Emslander H. Influence of OM-85 BV on different humoral and cellular immune defence mechanisms of the respiratory tract. Respiration. 1992, 59 Suppl 3:19-23.]. У пациентов, получавших бронховаксом®, отмечали повышение уровня sIgA в секретах верхних дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта [Emmerich В., Pachmann К., Milatovic D., Emslander Н. Influence of OM-85 BV on different humoral and cellular immune defence mechanisms of the respiratory tract. Respiration. 1992], IFNγ и активности макрофагов. Лишь в единичных исследованиях авторы отмечали увеличение CD3 лимфоцитов и NK-клеток. При этом нарастания тиров специфических антител к антигенам микроорганизмов, входящих в состав препарата, не выявлено.
Топические бактериальные лизаты (ИРС®19, Имудон®) предназначены для профилактики и лечения респираторных заболеваний ЛОР-органов и заболеваний полости рта. Применение этих препаратов способствовало сокращению числа респираторных инфекций, потребности в антибактериальных препаратах, обеспечивало профилактический эффект, предотвращая возможные осложнения. Иммунологические показатели при приеме ИРС®19 и имудона® характеризовались увеличением содержания sIgA в слюне и носовом секрете, усилении выработки лизоцима. Не выявлено стимулирующего влияния ИРС®19 на системные показатели клеточного и гуморального иммунитета [Маркова Т.П., Чувиров Д.Г. Применение топических иммуномо-дуляторов в группе часто и длительно болеющих детей. Иммуно-коррекция в педиатрии. - М. - Медицина для всех. - 2001. - с. 91-99].
Наиболее близким аналогом поликомпонентной вакцины является Рибомунил®, состоящий из рибосомальных фракций Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae и про-теогликана К. pneumoniae в качестве адъюванта. В состав рибомунила входит РНК, рибосомы, белки и протеогликан. Препарат выпускают в таблетках или в инъекционной форме. Рибомунил предназначен для лечения заболеваний респираторного тракта и для профилактики ОРВИ [Хаитов P.M., Борисова A.M., Хорошилова Н.В. и др. Применение рибосомального препарата рибомунила для коррекции иммунной системы у больных хроническим бронхитом. Сб. научных трудов под ред. проф. Н.А.Коровиной. Опыт применения рибомунила в России. 1996. с. 16-23]. Длительность курса лечения составляет 6 месяцев. При исследовании иммунологических показателей у пациентов с хроническим бронхитом показана коррекция содержания субпопуляций лимфоцитов CD4 и CD8, sIgA в секретах до нормальных значений, существенное влияние на показатели фагоцитарного звена иммунитета, что коррелировало с положительной динамикой сопутствующих воспалительных процессов. Получен положительный эффект применения рибомунила® при реабилитации часто болеющих детей, а также при включении рибомунила® в комплексную терапию детей с бронхиальной астмой. При использовании рибомунила® у детей с дерматореспираторным синдромом в ходе проведения основного и поддерживающего курсов терапии уровень IL-2 имел тенденцию к повышению. Выраженный клинический эффект от проводимой терапии наблюдали у детей, когда на фоне лечения рибомунилом® повышался уровень IL-2 в периферической крови. В ходе проведения основного и поддерживающего курсов терапии уровень IL-4 снижался. Отмечен рост содержания IL-2 и IFNγ в периферической крови и снижение уровня TNFα. Повышение уровня IFNγ после лечения рибомунилом® отмечали у детей с хронической легочной патологией [Коровина Н.А., Захарова И.Н., Заплатников А.Л. и др. Опыт применения и перспективы использования рибомунила в педиатрической практике. Сб. научных трудов под ред. проф. Н.А.Коровиной. Опыт применения рибомунила в России. 1996. с. 30-33.]. В экспериментальных исследованиях продемонстрировано, что введение рибомунила® мышам приводило к повышению уровня специфических антител к антигенам четырех видов микроорганизмов, входящих в его состав и снижало летальность при экспериментальной инфекции [Michel F.B., Dussourd d'Hinterland L., Bousquet J.et al. Immuno-stimulation by a ribosomal vaccine associated with a bacterial cell wall adjuvant in humans. Infect Immun. 1978, 20(3):760-769].
Известна поликомпонентная вакцина для иммунотерапии и иммунопрофилактики заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами, содержащая смесь антигенов, выделенных из штаммов Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli и Staphylococcus aureus. В качестве антигена из Klebsiella pneumoniae она содержит липополисахарид, ассоциированный с белком наружной мембраны, протеогликан с химическим составом 10,0-20,0% белка, 30,0-40,0% углеводов, с мол.м. более 20 000 Да. В качестве антигена из Proteus vulgaris она содержит липополисахарид, ассоциированный с белком наружной мембраны, с химическим составом: 40,0-60,0% белка, 25,0-35,0% углеводов, с мол.м. более 20 000 Да. В качестве антигена Escherichia coli она содержит липополисахарид, ассоциированный с белком наружной мембраны, с химическим составом 16,0-20,0% белка, 15,0-30,0% углеводов, с мол.м. более 20 000 Да. В качестве антигена из Staphylococcus aureus - антиген клеточной стенки, содержащий тейхоевую кислоту, пептидогилкан и лабильные белки с химическим составом: 13,0-21,0% белка, 8,0-16,0% углеводов, с мол.м. более 20 000 Да. Антигены указанных штаммов берут в соотношении 1:1:1: 1,2 г по сухому весу на 1 л вакцины. Концентрирование и очистку антигенов проводят ультрафильтрацией и диафильтрацией (Патент RU 2209081 A61K 39/116, 2003).
Поликомпонентная вакцина отличатся короткой схемой введения (не более 1 месяца), обеспечивает длительный (1 год и более) клинический эффект при патологических процессах бактериальной и вирусной этиологии: хроническом бронхите, абсцессе легкого, бронхиальной астме, атопическом дерматите, пиодермии, герпесвирусной инфекции. [Егорова Н.Б., Курбатова Е.А. Иммунотерапевтическая концепция использования микробных антигенов при атопии и патологии, ассоциированной с условно-патогенной микрофлорой (на примере поликомпонентной вакцины Иммуновак-ВП-4). Медицинская иммунология. 2008,10, №1:13-20]. Анализ результатов исследований, проведенных в клинических условиях, как на ограниченных группах больных, так и в строго контролируемых условиях при различной патологии, позволил выявить ряд общих особенностей, присущих действию микробных антигенов, входящих в состав поликомпонентной вакцины: сокращение числа и тяжести рецидивов (обострений) заболевания; увеличение сроков ремиссии; уменьшение объема применяемых лекарственных средств, в том числе антибиотиков и глюкокор-тикостероидов; снижение количества сопутствующих острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ); коррекция количества и функциональной активности субпопуляций лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD 16, CD72); программирование пролиферации и активации CD4 Т -клеток по Th1 пути; коррекция синтеза изотипов иммуноглобулинов в сторону снижения IgE и повышения IgG, IgA, sIgA. Однако механизм активации эффекторов врожденного и адаптивного иммунитета под действием поликомпонентной вакцины недостаточно раскрыт.
Технический результат предлагаемого изобретения заключается в раскрытии механизма защитного действия поликомпонентной вакцины от бактериальных и вирусных патогенов при пероральном и подкожном методах иммунизации путем активации Толл-подобных рецепторов TLRs 2, 4 и 9, что подтверждает присутствие в поликомпонентной вакцине паттерн-ассоциированных молекулярных структур микроорганизмов (пептидогликан, тейхоевая кислота, липополисахарид, бактериальная ДНК), приводящих к экспрессии цитокинов (IL-1β, IL-6, IL-12, IFNγ, TNFα) и формированию адаптивного иммунитета, проявляющимся в продукции специфических IgG-антител к антигенам, входящим в состав вакцины. В результате активации эффекторов врожденного и адаптивного иммунитета поликомпонентная вакцина защищает экспериментальных животных от бактериальной и вирусной инфекции и объясняет терапевтический и профилактический эффект ее применения в клинической практике.
Объектом настоящего исследования являются мембраноассоци-ированные и секретируемые молекулы иммунокомпетентных клеток экспериментальных животных при энтеральном (внутрь через рот) и подкожном методах введения поликомпонентной вакцины.
При 3-кратной пероральной иммунизации экспериментальных животных в селезенке увеличивалась экспрессия TLR 9 по сравнению с контролем (*P <0,05). В лимфоидной ткани, ассоциированной с носовой полостью/бронхами (NALT/BALT) и желудочно-кишечным трактом (GALT) TLR 4 и 9 по сравнению с контролем (*Р <0,05) (табл. 1).
Активация TLRs приводила к экспрессии генов цитокинов. В сыворотке крови перорально иммунизированных животных повышался уровень цитокинов IL-1β, IL-6, IL-12 (*Р <0,05) (табл. 2).
При 2-кратной подкожной иммунизации экспериментальных животных в селезенке и лимфоидной ткани, ассоциированной с носовой полостью/бронхами (NALT/BALT) увеличивалась экспрессия TLR 2,4 и 9 по сравнению с контролем (*Р <0,05) (табл. 1). В лимфоидной ткани, ассоциированной с желудочно-кишечным трактом (GALT) изменений не выявлено. Активация TLRs приводила к экспрессии генов цитокинов. В сыворотке крови перорально иммунизированных животных повышался уровень цитокинов IL-1β, IL-6, IL-12, IFNγ по сравнению с контролем (*P <0,05) (табл. 2).
Эти данные подтвердились в опытах in vitro. Под действием поликомпонентной вакцины на мембране дендритных клеток, генерированных из костного мозга неиммунизированных экспериментальных животных, увеличивалась экспрессия TLRs 2, 4, 9 по сравнению с контролем (*Р <0,05) (табл. 3). Дендритные клетки под действием поликомпонентной вакцины продуцировали в культуральную среду высокий уровень IL-6, IL-12, TNFα (*Р <0,05) (табл. 4).
Активация TLRs с последующей продукцией цитокинов приводила к формированию адаптивного иммунного ответа с продукцией IgG-антител к антигенам, входящим в состав поликомпонентной вакцины через 7 суток после подкожной иммунизации разовой дозой 4 мг по сравнению с показателями до иммунизации (*Р <0,05) (табл. 5).
Следствием активации врожденного и адаптивного иммунитета при подкожном и пероральном введении поликомпонентной вакцины явилась защита экспериментальных животных от заражения штаммами бактерий: клебсиеллы, стафилококка, протея, кишечной палочки, синегнойной палочки, гемофильной палочки типа Ь, пневмококка, сальмонеллы (табл. 6, 7). Протективную активность при заражении экспериментальных животных через 24 часа после иммунизации рассматривали как следствие активации врожденного иммунитета, через 5-8 суток после иммунизации - как активацию адаптивного иммунитета. При активации адаптивного иммунитета протективная активность была выше, чем при активации врожденного иммунитета. Неспецифическая защита (врожденный иммунитет) от вирусной инфекции через 24 часа после подкожной или пероральной иммунизации поликомпонентной вакциной продемонстрирована при заражении вирусом гриппа (табл. 8) и вирусом герпеса при подкожном методе иммунизации (табл. 9).
Осуществление настоящего изобретения.
Пример 1. Исследование экспрессии Толл-подобных рецепторов на мононуклеарных лейкоцитах селезенки мышей и определение цитокинов в сыворотке крови при пероральном и подкожном методах иммунизации.
Мышей линии BALB/c иммунизировали поликомпонентной вакциной трехкратно перорально разовой дозой 2000 мкг/мышь с помощью канюли или двукратно подкожно разовой дозой 200 мкг/мышь с помощью шприца. В каждой группе иммунизировали по 6 мышей. Через 24 часа мышей выводили из опыта под эфирным наркозом. Брали кровь из яремной вены для исследования уровня цитокинов, а затем извлекали лимфоидные органы и ткани, гомогенизировали, отмывали средой RPMI-1640 и выделяли мононукларные лейкоциты с помощью одноступенчатого градиента плотности фиколл-урографина для оценки экспрессии Толл-подобных рецепторов. Определение экспрессии Толл-подобных рецепторов TLR 2, 4 и 9 на мононуклеарных лейкоцитах селезенки, лимфатических узлов, назо-/бронхоассоциированой лимфоидной ткани (NALT/BALT), лимфоидной ткани, ассоциированной с желудочно-кишечным трактом (GALT) проводили с помощью моноклональных антител (Caltag Laboratories, США) против соответствующих антигенов. Результаты оценивали с помощью проточного цитофлуориметра (Beckman Coulter FC-500, США). В результате после 3-кратного перорального введения в селезенке увеличивалось количество клеток, экспрессирующих TLR 9 до 3,1%; в NALT/BALT TLR 4 и 9 до 1,8 и 2,5% соответственно; в GALT TLR 4 и 9 до 11,3 и 12,5% соответственно. При 2-кратном подкожном введении в селезенке увеличивалось количество клеток, экспрессирующих TLR2, 4 и 9 до 9,9; 10,2 и 10,5% соответственно; в NALT/BALT 3,2; 1,4 и 4,3 соответственно.
Исследование уровня цитокинов у этих же мышей, иммунизированных перорально или подкожно поликомпонентной вакциной, проводили с помощью ИФА тест-системы фирмы Bender MedSystems (США). Детекцию результатов осуществляли с помощью проточной цитофлуориметрии. В сыворотке крови иммунизированных мышей определяли уровни цитокинов. После 3-кратного перорального введения концентрация IL-1β составила 16,3 пг/мл, IL-6 - 128 пг/мл, IL-12 - 10,4 пг/мл; после 2-кратного подкожного введения концентрация IL-1β составила 66 пг/мл, IL-6 - 205 пг/мл, IL-12 - 37 пг/мл; IFNγ - 35 пг/мл.
Пример 2. Определение тиров IgG-антител в сыворотке крови иммунизированных кроликов.
Кролика породы «Шиншилла» иммунизировали подкожно 2-кратно 4 мг поликомпонентной вакцины с интервалом 7 дней. Через 7 дней определяли титр IgG-антител к каждом компоненту, водящему в состав вакцины, методом твердофазного ИФА. На планшетах иммобилизовали антигены клебсиеллы, протея, кишечной палочки и стафилококка (5 мкг/лунка). Сыворотку разводили 1:3200 и вносили в лунки планшетов в объеме 100 мкл. Инкубировали в течение 1 часа при 37°С, промывали фосфатно-солевым буфером с 0,05% Tween 20 в объеме 200 мкл. Прибавляли вторичные антитела к IgG кролика в объеме 100 мкл, инкубировали в течение 1 часа при 37°С, промывали как указано ранее. Прибавляли ТМБ для окрашивания продуктов реакции в объеме 100 мкл, инкубировали 15 мин в темноте. Реакцию останавливали 1 М раствором серной кислоты. Детекцию результатов проводили на микропланшетном ИФА-ридере при оптической плотности 450 нм. В результате титр антител к кишечной палочке, клебсиелле, протею и стафилококку составил 2,0; 1,7; 1,9; 1,6 у.е. соответственно.
Claims (1)
- Применение поликомпонентной вакцины, состоящей из водорастворимых антигенов, выделенных из штаммов Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Escherichia coli и Staphylococcus aureus, содержащей паттерн-ассоциированные молекулярные структуры микроорганизмов, являющиеся лигандами Толл-подобных рецепторов, для вызывания у экспериментальных животных при энтеральном введении увеличения содержания клеток, экспрессирующих TLR 4 от 1,5 до 14,0%; TLR 9 от 2,2 до 15,5% с последующей продукцией IL-1β от 15,0 до 18,0 пг/мл, IL-6 от 120 до 140 пг/мл, IL-12 от 10,0 до 12,0 пг/мл; при подкожном введении - увеличения содержания TLR 2 от 3,0 до 11,0%; TLR 4 от 1,2 до 11,6%; TLR 9 от 4,0 до 13,2% с последующей продукцией IL-1β от 65 до 68 пг/мл, IL-6 от 190 до 220 пг/мл, IL-12 от 35,0 до 40,0 пг/мл; IFNγ от 34,0 до 38,0 пг/мл и стимулирования образования специфических антител ОП450 при разведении сыворотки 1:3200 к антигену кишечной палочки 2,2-2,4 у.е.; к антигену клебсиеллы 1,5-1,9 у.е.; к антигену протея 1,8-2,1 у.е.; к антигену стафилококка 1,5-1,8 у.е.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2786222C1 true RU2786222C1 (ru) | 2022-12-19 |
Family
ID=
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ХАИТОВ P.M., и др. Применение рибосомального препарата рибомунила для коррекции иммунной системы у больных хроническим бронхитом. Сб. научных трудов под ред. проф. Н.А.Коровиной. Опыт применения рибомунила в России. 1996. с. 16-23. MEDZHITOV R., et al, Innate immunity: impact in the adaptive immune response. Curr. Opin. Immunol.1997, 9: 4-9. MICHEL F.B., Dussourd d'Hinterland L., Bousquet J.et al. Immuno-stimulation by a ribosomal vaccine associated with a bacterial cell wall adjuvant in humans. Infect Immun. 1978, 20(3):760-769. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9962434B2 (en) | Compositions and methods for treatment of microbial infections | |
KR20000023273A (ko) | 면역치료에 유용한 항원 조성물 | |
CN112739376A (zh) | 用于治疗炎性肠疾病的组合物和方法 | |
Clot | Pharmacology of ribosomal immunotherapy | |
RU2786222C1 (ru) | Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами | |
KR102040665B1 (ko) | 약독화된 폐렴구균 균주를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 용도 | |
US10232026B2 (en) | Vaccine for mycoplasma infection | |
CA2588573C (en) | Immunotherapeutic formulations to generate autoantibodies capable to avoid the binding of interleukin-2 to its receptor their use in the treatment of cancer | |
Johnston et al. | Immunodetection and pathogenesis mediated by bacterial membrane vesicles | |
JP7050360B2 (ja) | 弱毒化した肺炎球菌菌株を含む薬剤学的組成物 | |
RU2311197C1 (ru) | Способ получения протективной белоксодержащей фракции бактерий | |
CN114163525B (zh) | 抗旋毛虫排泄分泌抗原的卵黄抗体及制备方法和用途 | |
Karakawa et al. | Isolation of an acidic surface antigen from a conventional strain of Staphylococcus aureus | |
RU2542377C1 (ru) | Способ лечения коклюша у детей в возрасте до трех лет | |
CA3062714A1 (en) | Use of phosphorylated heptose compounds | |
Pregliasco et al. | Rationale for the clinical use of a ribosome-component immune modulator | |
US12036229B2 (en) | Use of phosphorylated heptose compounds | |
US11357845B2 (en) | Protein antigens for vaccinating against nontypeable Haemophilus influenzae | |
RU2599029C1 (ru) | Химерный иммуноглобулиновый препарат, обладающий специфическим противовирусным или антибактериальным действием | |
JP2003507433A (ja) | 敗血症治療において治療に用いる対象としての外膜タンパク質a、ペプチドグリカン関連リポタンパク質およびムレインリポタンパク質 | |
RU2101030C1 (ru) | Способ получения антибруцеллезной сыворотки | |
Uta et al. | Increased levels of IL-4 in the Spleen of BALB/c Mice after 65.5 kDa Pili Protein Klebsiella pneumoniae Immunization | |
Wolf et al. | Can Orally Applied Immunomodulators Improve the Local Defense? | |
Koyama et al. | Strain-specific pulmonary defense achieved after repeated airway immunizations with non-typeable Haemophilus influenzae in a mouse model | |
CN112603996A (zh) | 一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用 |