RU2785927C1 - Method for cultivation of nematode larvae of suborder ascaridata - Google Patents
Method for cultivation of nematode larvae of suborder ascaridata Download PDFInfo
- Publication number
- RU2785927C1 RU2785927C1 RU2022107521A RU2022107521A RU2785927C1 RU 2785927 C1 RU2785927 C1 RU 2785927C1 RU 2022107521 A RU2022107521 A RU 2022107521A RU 2022107521 A RU2022107521 A RU 2022107521A RU 2785927 C1 RU2785927 C1 RU 2785927C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- eggs
- larvae
- ascaridata
- suborder
- gastric juice
- Prior art date
Links
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 title claims abstract description 9
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 210000004051 Gastric Juice Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 241000244188 Ascaris suum Species 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 229940049954 Penicillin Drugs 0.000 abstract description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 abstract description 2
- 229960000626 benzylpenicillin Drugs 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 230000012447 hatching Effects 0.000 abstract description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 abstract description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 abstract description 2
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 4
- 229940088598 Enzyme Drugs 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 210000003608 Feces Anatomy 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N HCl Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010021857 Infection parasitic Diseases 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 244000045947 parasites Species 0.000 description 2
- 230000003071 parasitic Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 210000000170 Cell Membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002421 Cell Wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000004544 DC2 Anatomy 0.000 description 1
- 108090000988 Lysostaphin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 1
- 230000001058 adult Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial Effects 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 201000009361 ascariasis Diseases 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007374 clinical diagnostic method Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 hydrogen cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002530 ischemic preconditioning Effects 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000001418 larval Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229960001322 trypsin Drugs 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
Abstract
Description
Изобретение относится к паразитологии и может быть использовано в области профилактики гельминтозов человека и животных, а также в клинической лабораторной диагностике для создания иммуноферментных тест-систем на основе антигена нематод подотряда Ascaridata, получаемого из личинок.The invention relates to parasitology and can be used in the field of prevention of helminthiases in humans and animals, as well as in clinical laboratory diagnostics for the creation of enzyme immunoassay test systems based on the antigen of Ascaridata suborder nematodes obtained from larvae.
Кишечные гельминтозы являются одними из самых экономически значимыми паразитозами человека (аскаридозы человека), животных и птиц. Диагностика паразитозов осуществляется различными методами. Классические копроскопические методы диагностики кишечных гельминтозов являются сравнительно простыми и доступными, но обладают рядом недостатков: зависимость от профессиональных качеств исследователя, низкая диагностическая эффективность при слабой степени инвазированности. Детектирование паразитозов с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) требует значительных трудозатрат, сложного оборудования. К тому же не для всех видов паразитов разработаны соответствующие видоспецифические праймеры. Поэтому совершенствование диагностики гельминтозов остается актуальной проблемой.Intestinal helminthiases are one of the most economically significant parasitosis of humans (human ascariasis), animals and birds. Diagnosis of parasitosis is carried out by various methods. Classical coproscopic methods for diagnosing intestinal helminthiases are relatively simple and affordable, but have a number of disadvantages: dependence on the professional qualities of the researcher, low diagnostic efficiency with a low degree of invasion. Detection of parasitoses using the polymerase chain reaction (PCR) method requires significant labor costs and sophisticated equipment. In addition, appropriate species-specific primers have not been developed for all types of parasites. Therefore, improving the diagnosis of helminthiases remains an urgent problem.
Одним из перспективных является серологический метод диагностики на основе иммуноферментного анализа, позволяющий выявлять специфические антитела к паразиту. Для разработки иммуноферментной системы требуется получение специфических паразитарных антигенов высокого качества. Наиболее подходящим источником таких паразитарных антигенов служат личинки нематод, вышедшие из своих яиц. Единственным способом получения личинок в лабораторных условиях является инкубирование яиц гельминтов. В свою очередь источником яиц могут служить - каловые массы или самки гельминтов.One of the promising methods is a serological diagnostic method based on enzyme immunoassay, which makes it possible to detect specific antibodies to the parasite. The development of an enzyme-linked immunosorbent system requires the production of high-quality specific parasitic antigens. The most suitable source of such parasitic antigens are nematode larvae hatched from their eggs. The only way to obtain larvae in the laboratory is the incubation of helminth eggs. In turn, the source of eggs can be feces or female helminths.
Получение яиц гельминтов из каловых масс сопровождается трудностями по необходимости выделения яиц в чистом виде, высоким потерям, а также низкому выходу количества яиц. Гораздо более удобным является метод получения яиц непосредственно из самих гельминтов.Obtaining helminth eggs from feces is accompanied by difficulties due to the need to isolate eggs in a pure form, high losses, and also a low yield of eggs. Much more convenient is the method of obtaining eggs directly from the helminths themselves.
Главной трудностью в получении личинок нематод подотряда Ascaridata является необходимость простимулировать их выход из яйцевых оболочек с помощью специальных смесей имитирующих желудочный сок. Обычно для этого используют смесь раствора соляной кислоты с трипсином (искусственный желудочный сок), в отечественной паразитологии называемый методом культивирования личинок по Твердохлебову П.Т. Этот метод достаточно эффективно позволяет инкубировать личинки из яиц гельминтов, выделенных непосредственно из каловых масс, однако, он демонстрирует очень нестабильные результаты при инкубации яиц, выделенных непосредственно из взрослых самок гельминтов. Одним из способов увеличения доли выхода личинок из яиц можно считать подход, связанный с преинкубацией в течение 24 часов с хлорсодержащим препаратом ДП-2Т (Патент RU №2580655, МПК A01K 67/033 - 10.04.2016, Бюл. №10). Однако и в описываемом способе достигается не более 20-25% эффективности выхода личинок из яиц.The main difficulty in obtaining nematode larvae of the Ascaridata suborder is the need to stimulate their release from the egg membranes using special mixtures that mimic gastric juice. Usually, a mixture of a solution of hydrochloric acid with trypsin (artificial gastric juice) is used for this, in domestic parasitology called the method of cultivating larvae according to Tverdokhlebov P.T. This method is quite effective in incubating larvae from helminth eggs isolated directly from feces, however, it shows very unstable results when incubating eggs isolated directly from adult female helminths. One of the ways to increase the percentage of larvae hatching from eggs can be considered an approach associated with preincubation for 24 hours with a chlorine-containing preparation DP-2T (Patent RU No. 2580655, IPC A01K 67/033 - 10.04.2016, Bull. No. 10). However, in the described method, no more than 20-25% of the efficiency of the exit of larvae from eggs is achieved.
Вместе с тем известно, что некоторые вещества, например, хитозан, могут проникать через клеточные стенки организмов, а также стимулировать лизис клеточных оболочек. При этом хитозан является поликатионом, и его биологическая активность усиливается при понижении рН среды, поскольку именно в кислых условиях достигается максимальное связывание катионов водорода с аминогруппами хитозанового полимера. Поэтому добавление таких веществ может являться способом достижения более высокой доли выхода личинок из яиц.At the same time, it is known that some substances, for example, chitosan, can penetrate the cell walls of organisms and also stimulate the lysis of cell membranes. At the same time, chitosan is a polycation, and its biological activity increases with a decrease in the pH of the medium, since it is under acidic conditions that the maximum binding of hydrogen cations to the amino groups of the chitosan polymer is achieved. Therefore, the addition of such substances may be a way to achieve a higher larval hatch rate from eggs.
В связи с этим задачей заявленного изобретения является разработка более эффективного способа, позволяющего получать личинки нематод подотряда Ascaridata с более высокой долей выхода из яиц.In this regard, the objective of the claimed invention is to develop a more efficient method that allows to obtain nematode larvae of the Ascaridata suborder with a higher percentage of egg output.
Поставленная задача достигается путем разработки способа культивирования личинок нематод подотряда Ascaridata, который предусматривает их инкубирование в искусственном желудочном соке с добавлением низкомолекулярного хитозана с молекулярной массой 10000 Да.This task is achieved by developing a method for cultivating nematode larvae of the suborder Ascaridata, which involves their incubation in artificial gastric juice with the addition of low molecular weight chitosan with a molecular weight of 10,000 Da.
Способ осуществляется следующим образом: оплодотворенные яйца Ascaris suum инкубировали 24 часа при 27°С в искусственном желудочном соке с добавлением раствора хитозана в конечной концентрации 0,001%. Затем яйца промывали от искусственного желудочного сока и хитозана, центрифугированием в течение 10 минут при 1000 об/мин. и инкубировали в пенициллиновых флаконах с физиологическим раствором в объеме 2 мл в течение 30 суток. Процесс инкубирования контролировали микроскопированием.The method is carried out as follows: fertilized eggs of Ascaris suum were incubated for 24 hours at 27°C in artificial gastric juice with the addition of a solution of chitosan at a final concentration of 0.001%. Then the eggs were washed from artificial gastric juice and chitosan by centrifugation for 10 minutes at 1000 rpm. and incubated in penicillin vials with saline in a volume of 2 ml for 30 days. The incubation process was controlled by microscopy.
Через 30 дней инкубирования производили подсчет количества вышедших из яиц личинок. Результаты представлены в таблице 1 - для Ascaris suum и таблице 2 - для Arcadia galli.After 30 days of incubation, the number of larvae hatched from the eggs was counted. The results are presented in Table 1 for Ascaris suum and Table 2 for Arcadia galli.
Техническим результатом заявленного изобретения является разработка простого и более эффективного способа получения личинок нематод подотряда Ascaridata, характеризующегося хорошей воспроизводимостью результатов и высоким процентом выхода личинок из яиц.The technical result of the claimed invention is the development of a simple and more efficient method for obtaining nematode larvae of the suborder Ascaridata, characterized by good reproducibility of results and a high percentage of larvae from eggs.
ЛИТЕРАТУРАLITERATURE
1. Сергиев В.П., Лобзин Ю.В. и др. Паразитарные болезни человека (протозоозы и гельминтозы). - СПб, «Фолиант», 2006. - С. 2-444.1. Sergiev V.P., Lobzin Yu.V. Parasitic human diseases (protozooses and helminthiases). - St. Petersburg, "Foliant", 2006. - S. 2-444.
2. Сафиуллин Р.Т. Сравнительная эффективность копроскопических методов диагностики гельминтозов свиней и их усовершенствование на основе стандартизации. / Р.Т. Сафиуллин // Тр. ВИГИСа. - 2001. - Т. 37. - С. 149-159.2. Safiullin R.T. Comparative effectiveness of coproscopic methods for diagnosing helminthiases in pigs and their improvement based on standardization. / R.T. Safiullin // Tr. VIGIS. - 2001. - T. 37. - S. 149-159.
3. Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г. Сравнительная эффективность различных гельминтоовоскопических методов для диагностики неоаскаридоза телят. // Тр. ВИГИС. - Т. 41. - М. - 2005. - С. 2005. - С. 154-160.3. Dolbin D.A., Lutfullin M.Kh., Latypov D.G. Comparative efficiency of various helminthoovoscopic methods for diagnosing neoascariasis in calves. // Tr. VIGIS. - T. 41. - M. - 2005. - S. 2005. - S. 154-160.
4. Долбин Д.А., Агафонова Е.В., Смирнова Л.Р., Хазиева С.М. Пути улучшения качества лабораторной диагностики гельминтозов. // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т. LXXXVIII. - №4. - С. 398-402.4. Dolbin D.A., Agafonova E.V., Smirnova L.R., Khazieva S.M. Ways to improve the quality of laboratory diagnosis of helminthiases. // Kazan Medical Journal. - 2007. - T. LXXXVIII. - No. 4. - S. 398-402.
5. Куликов С.Н., Хайруллин Р.З., Варламов В.П. / Влияние поликатионов на антибактериальную активность лизостафина // Прикладная биохимия и микробиология 2015. Т. 51. №6. с. 610-615. DOT. 10.7868/S0555109915060082.5. Kulikov S.N., Khairullin R.Z., Varlamov V.P. / Influence of polycations on the antibacterial activity of lysostaphin // Applied Biochemistry and Microbiology 2015. V. 51. No. 6. with. 610-615. DOT. 10.7868/S0555109915060082.
6. Патент RU 2689161 «Способ получения бактериальных антигенов».6. Patent RU 2689161 "Method for obtaining bacterial antigens".
Claims (1)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2785927C1 true RU2785927C1 (en) | 2022-12-15 |
Family
ID=
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2580655C2 (en) * | 2013-11-15 | 2016-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Казанский НИИ Эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора | Method for larval nematode ascaridata culture |
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2580655C2 (en) * | 2013-11-15 | 2016-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Казанский НИИ Эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора | Method for larval nematode ascaridata culture |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ДОЛБИН Д.А., и др., Пути улучшения качества лабораторной диагностики гельминтозов., Казанский медицинский журнал, 2007, т. LXXXVIII. - N4., c. 398-402. HILKE HONNENS, et al, Cultivation of a free-living nematode Panagrolaimus sp. in batch and fed-batch liquid culture of Saccharomyces cerevisiae for larval food in marine aquaculture, Russian Journal of Nematology, 2013, 21 (1), 13 - 21, p. 13-21. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Nurani et al. | Maternal immunity of tilapia broodstock vaccinated with polyvalent vaccine and resistance of their offspring against Streptococcus agalactiae | |
| RU2785927C1 (en) | Method for cultivation of nematode larvae of suborder ascaridata | |
| CN110221060B (en) | Antigen for early diagnosis of haemonchus contortus infection and application thereof | |
| CN1634989A (en) | Bacillus coli resisting chicken yolk antibody, its preparation and use | |
| Kawabe et al. | Production of scFv-Fc fusion protein using genetically manipulated quails | |
| Shamim et al. | Peptides isolation from crude somatic antigens of Haemonchus contortus through SDS-PAGE | |
| RU2580655C2 (en) | Method for larval nematode ascaridata culture | |
| RU2609771C1 (en) | Method for obtaining erythrocyte antigen for diagnostics of nectobacteriosis in animals | |
| Desquesnes et al. | Veterinary aspects and experimental studies | |
| RU2657430C2 (en) | Method of life-time diagnostics of mycobacteriosis of large cattle | |
| RU2783666C1 (en) | Method for extraction of toxocara canis larvae from eggs for diagnostic antigen production | |
| Sommerfelt et al. | Toxocara canis infections in a pig model: immunological, haematological and blood biochemistry responses | |
| RU2810589C1 (en) | Method of performing an immunofluorescence reaction for diagnosing bovine leukemia | |
| RU2567845C1 (en) | METHOD OF SEPARATION OF LARVAE T.canis BY METHOD OF DIGESTING LUNG AND LIVER PARENCHYMA OF CARNIVORES | |
| RU2752978C1 (en) | Test strain leptospira interrogans of serogroup grippotyphosa of serovar grippotyphosa for detection of antibodies to l. grippotyphosa | |
| RU2287342C1 (en) | METHOD FOR OBTAINING IMMUNOGENIC Trichinella spiralis ANTIGEN | |
| Needle et al. | Necrotizing and eosinophilic masticatory myositis in farmed mink: a preliminary description | |
| Uspensky et al. | Trichinelloscopy of domestic and wild animal carcasses. | |
| RU2416428C2 (en) | Method for producing antigen for bovine tuberculosis diagnosing | |
| RU2485972C1 (en) | Method for producing antigen for retrospective diagnosis of animal chlamydial infection | |
| Thuma | Antigen specificity of the adaptive immune response against helminths | |
| RU2332235C2 (en) | Method of quality control of chicken vaccination against marek's disease | |
| RU2799846C1 (en) | Leptospira interrogans test strain of icterohaemorrhagiae serogroup for detection of antibodies to l. icterohaemorrhagiae | |
| Bandi et al. | The Wolbachia endosymbionts of filarial nematodes. | |
| RU2045959C1 (en) | Allergen for diagnosing tuberculosis and method for manufacturing same |